Frengi ELISA analizi - analizin kodunun çözülmesi. Norm ve sapmalar

Hücresel teknolojilerin, moleküler biyolojinin, genetiğin, fiziğin, kimyanın ve bir dizi diğer yüksek teknoloji disiplinlerinin gelişmesiyle bağlantılı olarak, yeni yüksek hassasiyetli ve yüksek teknolojili yöntemler günlük uygulamaya giriyor. Bu disiplinler arası eğilimler hem tıbbi bilgi alanını hem de biyolojik ve biyokimyasal sorunların ilgili alanlarını etkiler. Son on yılda, enzim immunoassay adı verilen bir klinik laboratuvar teşhis yöntemi yaygınlaştı ve kitlesel uygulamaya girdi.

Genel olarak, immünolojik enzimatik ve radyolojik reaksiyon teknolojileri, 1980'lerin başından beri hücrelerin, hücre kültürlerinin ve çeşitli dokuların tiplendirilmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bununla birlikte, bu yöntemler çok zahmetliydi, birleşik değildi, standartlaştırılmadı, bu da tıbbi ve teşhis amaçlı kullanımlarını büyük ölçekte engelledi. Yalnızca dar, bilgi yoğun ve son derece uzmanlaşmış laboratuvarlar bu tür yöntemleri kullandı.

Ancak teknolojinin, mikroteknolojinin gelişmesi ve çeşitli biyopolimer materyallerin üretilmesi ile genel tıp kuruluşlarının laboratuvarlarında kullanılabilecek hazır enzim immunoassay kitlerinin üretilmesi mümkün hale gelmiştir. ELISA, akut ve kronik her türlü enfeksiyonun (klamidya, sifiliz, sitomegalovirüs, toksoplazmoz, herpes vb.) yanı sıra klinik semptom olmadan ortaya çıkan latent formların teşhisinde yaygın olarak kullanılmaktadır.Bu yöntem aynı zamanda kronik hastalıkların kontrolünde de kullanılmaktadır. . Ne tür bir yöntem olduğunu ve altında hangi ilkelerin yattığını anlamaya çalışalım.

Enzim İmmünoassay Bileşenleri - Bağışıklık Reaksiyonu ve Enzimatik Reaksiyon

Adından da anlaşılacağı gibi enzim immün testi, iki farklı bileşenden oluşur - bir bağışıklık tepkisi ve bir enzimatik reaksiyon. Bağışıklık reaksiyonu, aslında tespit etmeye çalışan biyolojik moleküllerin, hücrenin veya mikroorganizmanın elementlerinin bağlanmasını sağlar ve enzimatik reaksiyon, immünolojik reaksiyonun sonucunu görmenizi ve ölçmenizi sağlar. Yani bağışıklık tepkisi, istenen mikrobu fiilen saptayan karmaşık bir tekniğin parçasıdır. Ve enzimatik reaksiyon, karmaşık bir tekniğin, bir bağışıklık reaksiyonunun sonucunu gözle görülebilen ve rutin kimyasal yöntemlerle ölçüm için erişilebilir bir forma dönüştürmenize izin veren kısmıdır. Enzim immunoassay yönteminin bu yapısından yola çıkarak her iki kısmını da ayrı ayrı analiz edeceğiz.

Bağışıklık reaksiyonu, nedir bu? Antikor veya antijen nedir?

Bağışıklık tepkisi nedir? antijen nedir?
Her şeyden önce, bağışıklık reaksiyonlarının ne olduğuna bakalım. bağışıklık reaksiyonları- Bunlar, bir antijenin bir antikora bağlanmasının bir bağışıklık kompleksi oluşumu ile spesifik reaksiyonlarıdır. Bunun anlamı ne? Herhangi bir organizmanın her hücresinin yüzeyinde adı verilen özel yapılar vardır. antijenler. Genel olarak antijenler, bir hücre hakkında bilgi taşıyan moleküllerdir (bir kişinin rozetindeki bilgilere benzer, bu kişinin temel verilerini gösterir).

Bireysel ve tür antijenleri - nedir bu? Bu antijenlere neden ihtiyaç duyulur?

Mevcut antijenler bireysel, yani, yalnızca bu belirli organizmaya özgü. Bu bireysel antijenler tüm insanlar için farklıdır, bazıları birbirine benzer, ancak yine de farklıdır. Doğada bireysel antijenlerin iki özdeş kopyası yoktur!

İkinci ana antijen tipi tür antijenleri, yani, herhangi bir canlı türünün doğasında var. Örneğin, insanlar tüm insanlarda ortak olan kendi tür antijenine sahiptir, farelerin kendi fare türü antijeni vardır, vb. Her hücrenin yüzeyinde mutlaka spesifik ve bireysel bir antijen bulunur.

Tür antijeni, bağışıklık sistemi hücreleri tarafından "dost veya düşman"ı tanımlamak için kullanılır.

Antijen tanıma nasıl gerçekleşir?

Bir bağışıklık hücresi, şüpheli bir hücreye bağlanır ve kesin olarak tek bir antijen tarafından tanımlamayı gerçekleştirir. Bağışıklık hücresinin hafızasında, "antijeninin" neye benzediği "kaydedilir". Böylece, şüpheli bir hücrenin antijeni "kendi antijeni" tanımına uyuyorsa, o zaman kendi vücudunun bu hücresi tehlike oluşturmaz. Sonra bağışıklık hücresi "çözer" ve ayrılır. Ve eğer antijen "kendi" tanımına uymuyorsa, o zaman bağışıklık hücresi bu hücreyi "yabancı" olarak tanımlar ve bu nedenle tüm organizma için potansiyel olarak tehlikelidir. Bu durumda, bağışıklık hücresi tehlikeli nesneyi “kurtulmaz”, aksine yok etmeye başlar. Bu tür bir immünolojik tanımanın doğruluğu şaşırtıcıdır - %99,97. Neredeyse hiç hata yok!

Antikor, bağışıklık kompleksi nedir?
antikor nedir?

Bir antikor, bir bağışıklık hücresinin yüzeyinde bulunan özel bir moleküldür. Şüpheli hücrenin antijenlerine bağlanan antikordur. Ayrıca antikor, tanımlamanın gerçekleştiği hücrenin içine bilgi iletir ve "kendi" veya "yabancı" olmak üzere iki türde bir geri dönüş sinyali alır. "Kendi" sinyalinde, antikor antijenle olan bağı yok eder ve hücreyi serbest bırakır.

Bağışıklık kompleksi nedir?
"Uzaylı" sinyaliyle durum farklı gelişir. Antikor, antijenle olan bağı koparmaz, aksine spesifik sinyaller göndererek "pekiştirme" sağlar. Biyolojik olarak bu, hücrenin başka bir yerinde bulunan diğer antikorların tehlike sinyalinin geldiği bölgeye hareket etmeye başlaması ve ayrıca kendileriyle yakalanan antijen arasında bir bağ oluşturması anlamına gelir. Sonunda, antijenin her taraftan çevrelendiği ve sıkıca bağlandığı ortaya çıkar.Böyle bir antijen + antikor kompleksi denir. bağışıklık kompleksi. Bu andan itibaren antijenin kullanımı başlar. Ama şimdi antijen nötralizasyon sürecinin detaylarıyla ilgilenmiyoruz.

Antikor türleri (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Antikorlar, buna göre, antikor kelimesinin eşanlamlısı olarak kullanılan kimyasal bir isme sahip olan protein yapılarıdır. Yani, antikorlar = immünoglobulinler.

5 tip immünoglobulin (Ig) vardır., insan vücudunun farklı yerlerinde (örneğin deride, mukoza zarlarında, kanda vb.) farklı antijen türlerine bağlanan. Yani, antikorların bir işbölümü vardır. Bu immünoglobulinlere Latin alfabesinin harfleri - A, M, G, D, E denir ve şu şekilde belirtilir - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Teşhiste, belirlenmekte olan mikrop için en spesifik olan yalnızca bir tür antikor kullanılır. Yani, bu tip antikorun belirlenmekte olan antijene bağlanması her zaman gerçekleşir. En sık kullanılanları IgG ve IgM'dir.

Enzim immunoassay'in altında yatan, bağışıklık tepkisinin bu ilkesidir (belirlenen biyolojik nesnenin tanınmasının benzersiz doğruluğu ve özgüllüğü), Antikorların antijenleri tanımadaki yüksek doğruluğu nedeniyle, tüm enzim immunoassay yönteminin doğruluğu da en yüksek.

enzimatik reaksiyon

Enzimatik reaksiyon nedir? Afinite, substrat ve reaksiyon ürünü nedir?
Enzim immunoassay yönteminin çalışmasında enzimatik reaksiyonun değerlendirilmesine dönelim.

Enzimatik reaksiyon nedir?

Bir enzimatik reaksiyon, bir maddenin bir enzimin etkisiyle diğerine dönüştürüldüğü kimyasal bir reaksiyondur. Enzimlerin etki ettiği maddeye denir substrat. Enzimlerin etkisiyle elde edilen maddelere denir. reaksiyon ürünü. Ayrıca, enzimatik reaksiyonun özelliği, belirli bir enzimin yalnızca belirli bir substrat üzerinde etki etmesidir. Bir enzimin kendi substratını tanıma özelliğine denir. yakınlık.

Böylece her enzim kendisine özgü sadece bir reaksiyon gerçekleştirir. Biyolojik dünyada pek çok enzim olduğu gibi enzimatik reaksiyonlar da vardır. Enzim immünolojik tahlilinde, yalnızca birkaç enzimatik reaksiyon kullanılır - en fazla 10. Bu durumda, ürünleri renkli maddeler olan bu tür enzimatik reaksiyonlar seçildi. Bir enzimatik reaksiyonun ürünleri neden renkli olmalıdır? Renkli bir çözeltiden bir maddenin konsantrasyonunu hesaplamak için basit bir kimyasal yöntem olduğu için - kolorimetri.

Kolorimetri yöntemi - öz ve ilke

Kolorimetriçözeltinin renk yoğunluğunun ölçümünü kullanır ve maddenin konsantrasyonu renk yoğunluğundan hesaplanır.Bu durumda özel bir cihaz - kolorimetre çözeltinin renk yoğunluğunu ölçer. Kolorimetride, renk yoğunluğunun bir maddenin konsantrasyonuna bağımlılığının iki çeşidi mümkündür - bu, doğrudan orantılı bir bağımlılık veya ters orantılı bir bağımlılıktır. Doğru orantılı bir ilişki ile, maddenin konsantrasyonu ne kadar yüksek olursa, çözeltinin renk yoğunluğu da o kadar yoğun olur. Ters orantılı bir ilişkide, bir maddenin konsantrasyonu ne kadar yüksekse, çözeltinin renk yoğunluğu o kadar düşük olur. Teknik olarak, bu şu şekilde gerçekleşir: bilinen bir madde konsantrasyonuna sahip birkaç çözelti alınır, bu çözeltilerin yoğunluğu ölçülür ve konsantrasyonun renk yoğunluğuna bağımlılığının bir grafiği çizilir ( kalibrasyon grafiği).

Daha sonra konsantrasyonu tespit edilen solüsyonun renk yoğunluğu ölçülür ve kalibrasyon grafiğine göre solüsyonun ölçülen renk yoğunluğunun seviyesine karşılık gelen konsantrasyon değeri otomatik olarak bulunur.

Enzim immunoassay'de en sık aşağıdaki enzimler kullanılır: peroksidaz, alkalin fosfataz, avidin.

Enzim immunoassay'de immünolojik ve enzimatik reaksiyonlar nasıl birleştirilir? Şimdi enzime bağlı immünosorbent tahlilinin kendisine dönüyoruz. Hangi adımları içerir ve bu reaksiyonlar sırasında neler olur? Enzim immunoassay, doğrudan ve dolaylı.

Direkt enzim immunoassay - uygulama aşamaları

Doğrudan bir enzim immünolojik testte, tespit edilen antijene yönelik antikorlar, belirli bir etiketle birleştirilir ve kullanılır. Bu spesifik etiket, enzimatik reaksiyonun substratıdır.

Antijenlerin kuyu yüzeyine bağlanması ve antijenin antikora bağlanması

Direkt enzim immunoassay nasıl yapılır? Biyolojik materyal alınır (kan, mukoza zarlarından kazıma, smear) ve özel kuyucuklara yerleştirilir. Biyolojik materyal, antijenlerin kuyucukların yüzeyine tutunabilmesi için kuyucuklarda 15-30 dakika bekletilir. Ayrıca, tespit edilen antijene karşı antikorlar bu kuyucuklara eklenir. Bu, örneğin sifiliz gibi antijenleri tespit ederken sifiliz antijenlerine karşı antikorların eklendiği anlamına gelir. Bu antikorlar endüstriyel olarak üretilir ve laboratuvarlar hazır kitler satın alır.Bu test materyali ve antikor karışımı, antikorların “kendi” antijenlerini bulabilmesi ve ona bağlanabilmesi için bir süre (30 dakikadan 4-5 saate kadar) bırakılır. örnek antijenler, onlara daha fazla antikor bağlanır.

"Ekstra" antikorların çıkarılması

Belirtildiği gibi, antikorlar ayrıca belirli bir etiketle ilişkilidir, antikorlar fazla eklendiğinden, hepsi antijenlere bağlanmayacaktır ve numunede hiç antijen yoksa, buna göre tek bir antikor bağlanmayacaktır. istenilen antijene "Ekstra" antikorları çıkarmak için kuyucukların içeriği basitçe dökülür. Sonuç olarak, tüm "ekstra" antikorlar çıkarılır ve antijenlerle temas edenler, antijenler kuyucukların yüzeyine "yapıştırıldığı" için kalır. Kuyular, tüm "ekstra" antikorları yıkamanıza izin veren özel bir solüsyonla birkaç kez durulanır.

Sonra ikinci aşama başlar - enzimatik reaksiyon. Yıkanan kuyucuklara enzimli solüsyon eklenir ve 30-60 dakika bekletilir. Bu enzim, antikorların bağlı olduğu maddeye (spesifik etiket) bir afiniteye sahiptir. Enzim, bu özel etiketin (substrat) renkli bir maddeye (ürüne) dönüştürülmesinin bir sonucu olarak bir reaksiyon gerçekleştirir. Daha sonra bu renkli maddenin konsantrasyonu kolorimetri ile bulunur. Bu spesifik etiket, antikorlarla ilişkilendirildiğinden, renkli reaksiyon ürününün konsantrasyonunun, antikorların konsantrasyonuna eşit olduğu anlamına gelir. Ve antikorların konsantrasyonu, antijenlerin konsantrasyonuna eşittir. Böylece analiz sonucunda tespit edilen mikrop veya hormonun konsantrasyonu nedir cevabını almış oluyoruz.

Direkt enzim immunoassay bu şekilde çalışır. Bununla birlikte indirekt enzim immunoassay, indirekt yöntemin duyarlılığı ve doğruluğu doğrudan yönteme göre daha yüksek olduğu için günümüzde daha yaygın olarak kullanılmaktadır. Öyleyse, dolaylı enzim immünolojik testine geçelim.

Dolaylı enzim immunoassay - adımlar

Dolaylı enzim immunoassay'de iki aşama vardır. Birinci aşamada, tespit edilen antijenlere karşı işaretlenmemiş antikorlar kullanılır ve ikinci aşamada, ilk işaretlenmemiş antikorlara karşı işaretli antikorlar kullanılır. Yani, antikorun antijene doğrudan bağlanması değil, ikili bir kontrol elde edilir: antikorların antijene bağlanması, ardından ikinci antikorun antikor + antijen kompleksine bağlanması. Kural olarak, birinci aşama için antikorlar fare ve ikinci aşama için keçidir.

Kuyu yüzeyinde antijenlerin sabitlenmesi ve antijenin etiketlenmemiş antikora bağlanması
Doğrudan enzim immün testinin yanı sıra biyolojik materyal alınır - kan, kazıma, smear. İncelenen biyolojik materyal kuyucuklara verilir ve antijenlerin kuyucukların yüzeyine yapışması için 15-30 dakika bekletilir. Daha sonra, antijenlere karşı etiketlenmemiş antikorlar kuyucuklara eklenir ve bir süre (1-5 saat) bırakılır, böylece antikorlar "kendi" antijenlerine bağlanır ve bir bağışıklık kompleksi oluşturur ( ilk aşama). Bundan sonra, "ekstra", bağlanmamış antikorlar, kuyucukların içeriği dökülerek çıkarılır. Tüm bağlanmamış antikorları tamamen çıkarmak için özel bir solüsyonla yıkama yapılır.

İşaretli antikorun antijen + işaretlenmemiş antikor kompleksine bağlanması
Bundan sonra ikinci antikorlar alınır - etiketlenir, kuyucuklara eklenir ve tekrar bir süre bırakılır - 15-30 dakika ( İkinci aşama). Bu süre zarfında, etiketli antikorlar, etiketlenmemiş birincisine bağlanır ve bir kompleks - antikor + antikor + antijen oluşturur. Ancak hem etiketli hem de etiketsiz antikorlar kuyucuklara fazladan eklenir. Bu nedenle, etiketlenmemiş antikorlara bağlanmayan, zaten etiketlenmiş olan "ekstra" antikorları tekrar çıkarmak gerekir. Bunu yapmak için, kuyucukların içeriğini dökme ve özel bir solüsyonla yıkama prosedürünü tekrarlayın.

Enzimatik reaksiyon - renkli bir bileşik oluşumu
Bundan sonra, "etiketi" renkli bir maddeye dönüştürme reaksiyonunu gerçekleştiren bir enzim eklenir. Renk 5-30 dakika içinde gelişir. Daha sonra kolorimetri yapılır ve renkli maddenin konsantrasyonu hesaplanır. Renkli maddenin konsantrasyonu, etiketli antikorların konsantrasyonuna eşit olduğundan ve etiketlilerin konsantrasyonu, sırayla antijenin konsantrasyonuna eşit olan etiketlenmemiş antikorların konsantrasyonuna eşittir. Böylece tespit edilen antijenin konsantrasyonunu elde ederiz.
İki tip antikorun kullanılması şeklinde böyle bir çifte kontrol, enzim immünoassay yönteminin duyarlılığını ve özgüllüğünü artırmayı mümkün kılmıştır. Analiz süresinin uzamasına ve ek aşamaların dahil edilmesine rağmen, bu kayıplar sonucun doğruluğu ile telafi edilir. Bu nedenle şu anda enzim immünoassay yöntemlerinin büyük çoğunluğu dolaylı enzim immünoassayleridir.

Enzim immunoassay ile hangi hastalıklar tespit edilir?

Enzim immunoassay ile hangi hastalıkların ve hangi biyolojik olarak aktif maddelerin tespit edildiğini düşünmeye geçelim. Enzim immunoassay ile tespit edilen maddeler tabloda sunulmaktadır.

Tiroid hastalığının hormonları ve belirteçleri	tiroperoksidaz (TPO)
	tiroglobulin (TG)
	Tiroid Uyarıcı Hormon (TSH)
	Tiroksin (T4)
	Triiyodotironin (T3)
	Serbest tiroksin (T4)
	Serbest triiyodotironin (T3)
Üreme fonksiyonunun teşhisi	luteinizan hormon (LH)
	Folikül uyarıcı hormon (FSH)
	prolaktin
	progesteron
	estradiol
	testosteron
	kortizol
	Steroid bağlayıcı globulin (SHB)
	Alfafetoprotein (AFP)
tümör belirteçleri	Koryonik gonadotropin (CG)
	Prostat spesifik antijen (PSA)
	SA-125
	SA - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15.3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1(M–20)
	Alveomüsin
	K - zincir
	L - zincir
	Tümör nekroz faktörü (TNFa)
	γ - interferon
	Kanser-embriyonik antijen (CEA)
Bulaşıcı hastalıkların teşhisi

ELISA, yalnızca etiyolojiyi değil, aynı zamanda hastalığın evresini de belirlemek için belirli hastalıklar için belirli kan antikorlarının (veya antijenlerinin) araştırıldığı modern bir laboratuvar çalışmasıdır.

1. herhangi bir bulaşıcı hastalığa karşı spesifik antikorları aramak;
2. herhangi bir bulaşıcı hastalığın antijenlerini aramak;
3. hastanın hormonal durumunun incelenmesi;
4. otoimmün hastalıkların varlığı için muayene.

Herhangi bir laboratuvar teşhis yönteminde olduğu gibi, ELISA'nın da avantajları ve dezavantajları vardır. Yöntemin avantajları şunları içerir:

1. yöntemin yüksek özgüllüğü ve duyarlılığı (%90'dan fazla);
2. hastalığı belirleme ve sürecin dinamiklerini takip etme, yani farklı zaman aralıklarında antikor miktarını karşılaştırma yeteneği;
3. bu çalışmanın mevcudiyeti ve hızı;
4. non-invaziv malzeme örnekleme yöntemi bir çalışma değildir;

Yöntemin dezavantajı, analiz sırasında hastalığa neden olan ajanı değil, sadece ona karşı bağışıklık tepkisini (antikorlar) tanımlamanın mümkün olmasıdır.

ELISA yönteminin özü

Birkaç ELISA türü vardır: doğrudan, dolaylı, engelleme yöntemi, rekabetçi. Bununla birlikte, pratikte, heterojen katı faz immünoassay veya ELISA en yaygın şekilde kullanılır.

Enzime bağlı immünosorbent testinin temeli, bir antijen ve bir antikorun, bir immün kompleksin oluşumu ile immün reaksiyonudur ve bu, antikorların yüzeyindeki spesifik etiketlerin enzimatik aktivitesinde bir değişikliğe neden olur.

Aslında, bu süreç birkaç aşamaya ayrılabilir:

1. test sistemi kuyularının yüzeyinde belirli bir patojenin saflaştırılmış bir antijeni vardır. Hayvanın kan serumu eklendiğinde, bu antijen ile istenen antikor arasında spesifik bir reaksiyon oluşur;
2. ayrıca kuyuya özel bir kromojen (peroksidaz ile işaretlenmiş konjugat) eklenir. Tabletin kuyusunda renkli bir maddenin oluşmasıyla sonuçlanan enzimatik bir reaksiyon meydana gelir. Renginin yoğunluğu, hayvanın serumunda bulunan immünoglobulinlerin (antikorların) miktarına bağlıdır;
3. Daha sonra sonucun değerlendirilmesi gelir. Çok kanallı bir spektrofotometre yardımıyla test malzemesinin optik yoğunluğu, kontrol numunelerinin optik yoğunluğu ile karşılaştırılır ve sonuçlar matematiksel olarak işlenir. Bir hastadaki antikor miktarı doğrudan belirli bir kuyucuğun optik yoğunluğunun yüksekliğine bağlıdır.

Unutulmamalıdır: her test sistemi için, sonuçları, norm göstergelerini ve patolojiyi (“referans değerler”) dikkate almak için bireysel göstergeler geliştirilir. Her bir özel çalışmanın sonuçları değerlendirilirken bu dikkate alınmalıdır.

Bir laboratuvarın sonuçlarını başka bir laboratuvarın "referans değerleri"nden yorumlamak doğru değildir. Farklı laboratuvarların sonuçlarını birbiriyle karşılaştırmak da yanlıştır.

Spesifik enfeksiyonlar için sonuçları değerlendirirken, tespit edilen antikorların sınıfı ve sayısı önemlidir. Buna sadece enfeksiyonun etiyolojisi sorusu değil, aynı zamanda hastalığın beklenen aşaması (akut, kronik) ve muayene sırasında aktif bir enfeksiyonun (akut veya kronik alevlenmesi) varlığı da buna bağlıdır. .

Antikorların ortaya çıkışının yaklaşık zamanlaması nedir?

İlk antikorlar IgM'dir. Enfeksiyöz sürecin akut fazını karakterize eden olası bir enfeksiyondan 1-3 hafta sonra tespit edilebilirler. IgM antikorlarının ortaya çıkışının ikinci durumu, kronik bir sürecin alevlenmesidir. IgM ortalama olarak yaklaşık 3 ay dolaşımda kalır, ardından sayıları yavaş yavaş kaybolur. Ancak bazı hastalarda enfeksiyondan sonraki 1-2 yıl içinde eser miktarda IgM saptanabilir.

Enfeksiyondan sonraki 4. haftadan itibaren IgG antikorları görülmeye başlar. Çoğu enfeksiyonda, titreleri farklı zamanlarda (ortalama olarak 1.5-2 ay sonra) maksimum ile kademeli olarak artar, ardından titre düşük bir seviyede kalır ve bağışıklığı gösterir. Bazı hastalıklarda IgG düzeyi yüksek değildir.

Antikor algılama seçenekleri

• IgM antikorlarının izole tespiti, birincil bir enfeksiyonu düşündürür.
• Kanda IgM ve IgG'nin eşzamanlı tespiti, önceki 2-3 aydaki birincil enfeksiyon için ve ayrıca kronik bir hastalığın alevlenmesi sırasında tipiktir.
• IgG'nin izolasyonda saptanması, hem hastalığa karşı bağışıklığı hem de kronik enfeksiyonu gösterebilir. İkinci durumda, hem antikor miktarı (titre) hem de bu titrede zaman içindeki değişim önemlidir. Tipik olarak, çalışmalar 2-4-6 haftalık aralıklarla gerçekleştirilir.

ELISA analizi, önemli sayıda çeşitli hastalığın laboratuvar teşhisi için modern bir tekniktir. Kısaltma enzim immunoassay anlamına gelir. Tekniğin özü, antikorların titresini (aktivitesini) belirlemektir.

ELISA tekniği bugün önemli ölçüde popülerlik kazanıyor. Klinik tıpta çeşitli patolojilerin teşhisi için olduğu kadar, incelenen ortamdaki çeşitli bileşiklerin konsantrasyonunun doğru bir şekilde belirlenmesini gerektiren deneysel çalışmalarda da kullanılır.

ELISA tekniğinin prensibi

ELISA, immünolojik bir reaksiyondur. Spesifik antikorların eklenmesine dayanır.
veya antijenleri test ortamına (çoğunlukla test kanı) ve ardından ortaya çıkan antijen-antikor komplekslerinin konsantrasyonunun enzimatik olarak belirlenmesi. Kompleksin konsantrasyonu ile test ortamındaki analitin seviyesi veya aktivitesi yargılanabilir.

Antijen-antikor komplekslerinin konsantrasyonunun belirlenmesi genellikle kromatografik yöntemle özel ekipman kullanılarak gerçekleştirilir.

Yürütme endikasyonları

ELISA analizi çeşitli endikasyonlar için yapılır, klinik tıpta başlıcaları şunlardır:

• Enfeksiyöz ajana spesifik antikorlar tespit edilirken, klamidya, mikoplazmoz, ureaplasmosis, trichomoniasis içeren ağırlıklı olarak cinsel yolla bulaşan (STI) enfeksiyöz patolojinin teşhisi.
• Patolojik sürecin aşamasını belirlemek için çeşitli lokalizasyondaki bulaşıcı hastalıkların teşhisi, öncelikle parenteral viral hepatit ve HIV teşhisi sürecinde.
• Endokrin sistem organlarının (endokrin bezleri) çeşitli patolojilerinin teşhisi için hormon konsantrasyonunun belirlenmesi.
• Zehirlenme, böcek veya yılan sokması durumunda vücudun zehirlenme nedeninin teşhisi için çeşitli bileşiklerin belirlenmesi.

Bu tıbbi endikasyonlarla ELISA kan testi yapılır. Ayrıca, bu teknik, immünoprofilaksi için yeni ilaçların, aşıların geliştirilmesi sırasında çeşitli klinik çalışmalar sırasında deneysel tıpta aktif olarak kullanılmaktadır.

çalışma nasıl yapılır

Özel bir laboratuvarda ELISA kan testi yapılır. Daha önce, uygulanması için, genellikle kübital venden 5-10 ml'lik bir hacimde venöz kan alınır ve daha sonra laboratuvara gönderilir. Ortalama olarak, analizin sonucu hemen ertesi gün alınabilir ve bu, hastalığın teşhisi konulduktan sonra tedavinin hızlı bir şekilde atanması için önemli bir noktadır.

ELISA'ya nasıl hazırlanılır?

Enzim immunoassay ile çalışmanın güvenilir sonuçlarını elde etmek için, aşağıdakileri içeren birkaç basit hazırlık tavsiyesine uymalısınız:

• Testten bir gün önce yağlı yiyecekler (et, tütsülenmiş etler) ve alkol yemeyi bırakmalısınız.
• Araştırma materyali sabahları aç karnına alınmalıdır.
• Çalışma gününde, fiziksel ve psiko-duygusal stresten kaçınmak arzu edilir.
• Çalışmadan önce sigara içmemeye çalışmalısınız.

Enzim immün testinin elde edilen yanlış pozitif sonuçlarının çoğu, hazırlık önerilerinin yanlış uygulanmasından kaynaklanmaktadır. Bu, çoğu durumda, ELISA'nın özgüllüğünü azaltan kan plazmasındaki trigliseritlerin (yağların) konsantrasyonunda bir artışa yol açan yağlı yiyecekler yemekle ilişkilidir.

Sonuçların deşifre edilmesi

ELISA kullanan antikorlar için kan testinin 2 modifikasyonu vardır - kalitatif ve kantitatif belirleme. -de
antikorların kalitatif tayini, sonuç pozitif (enfeksiyöz ajanın neden olduğu patolojik bir sürecin olası varlığını gösteren antikorlar tespit edilir) veya negatif (enfeksiyöz bir sürecin olmadığını gösteren antikor yoktur) olabilir.

Antikorların yokluğu, her zaman bulaşıcı bir sürecin yokluğunun %100 göstergesi değildir. Bunun nedeni, enfeksiyondan sonra antikorların hemen değil, belirli bir süre içinde (en az yaklaşık 2 hafta) oluşmasıdır. Bu nedenle enfeksiyon olmadığını doğrulamak için bir süre sonra ELISA tekrarlanabilir.

Kantitatif ELISA ile antikorların titresi (aktivitesi) ve sınıfları belirlenir. Çoğu durumda, bulaşıcı hastalıkların teşhisi için, enfeksiyondan sonra vücutta çeşitli aralıklarla oluşan IgG sınıfı (immünoglobulinler G) ve IgM (immünoglobulinler M) antikorları belirlenir, bu nedenle analiz sonucunun deşifre edilmesi olabilir. birkaç anlam:

• IgM aktivitesinde bir artış ve IgG'nin yokluğu, yeni bir enfeksiyonun ve bulaşıcı sürecin akut seyrinin kanıtıdır.
• IgM ve IgG'nin aktivitesinde bir artış, bulaşıcı sürecin kronik seyrinde ve uzun süreli enfeksiyonda alevlenmesidir.
• Yüksek IgG aktivitesi ve IgM'nin yokluğu, uzun süredir devam eden bir enfeksiyonun arka planına karşı enfeksiyöz sürecin kronik bir seyridir ve bunun ardından altı aydan fazla bir süre geçmiştir (IgG sınıfı antikorların oluşumu için gereken süre).

Genel olarak, her bulaşıcı süreç için ELISA sonuçlarının yorumlanması belirli özelliklere sahiptir. Bulaşıcı bir hastalığın varlığının yanı sıra seyrinin aşamasının daha doğru bir şekilde belirlenmesi bir doktor tarafından gerçekleştirilir.

ELISA şu anda çoğu bulaşıcı hastalığın teşhisi için tercih edilen bir yöntemdir. Böyle bir çalışmanın sonuçlarına dayanarak, doktor, müteakip yeterli ve etkili tedaviyi reçete etmek için doğru bir teşhis koyma ve patolojik sürecin seyrinin aşamasını belirleme fırsatına sahiptir.

Modern teşhis yöntemleri, laboratuvarda belirli bir hastalığı özel testler yardımıyla tanımlamayı mümkün kılar. Bunlardan biri, bir ön tanıyı doğrulayabileceğiniz enzim immünolojik testini içermelidir.

ELISA, bağışıklık ve hormonal başarısızlıkların yanı sıra onkolojik süreçlerle ilişkili bozuklukları tespit etmek için en etkili ve modern yöntemlerden biridir. Kandaki analiz sırasında vücutta bir enfeksiyon olduğunda üretilen antikorlar tespit edilebilir. Bu nüans göz önüne alındığında, hastalığı gelişiminin çok erken bir aşamasında bile tespit etmek mümkündür.

Metodolojinin temeli nedir?

ELISA analizinin sonuçları, antikorların tanınması için özel tanımlama işaretleri görevi gören enzimlere karşı kimyasal reaksiyonların alınmasına dayanmaktadır. Bu nedenle immünokimyasal reaksiyonlar sırasında antikorlar bazı antijenlerle etkileşime girmeye başlar. Bütün bunlar, ELISA için kan bağışlarken yanlış sonuçların minimum düzeyde olduğunu iddia etmek için zemin sağlar.

Çalışma, bağışıklık hücrelerinin sayısını, özelliklerini ve ayrıca gerekli antikorların varlığını belirlemenizi sağlar.

Solüsyonun rengi tespit edildiğinde pozitif sonuç kabul edilir. Renk, antijenlerin antikorla etkileşime girdiğini gösterir. Böyle bir şeyin olmadığı durumda sonuç olumsuzdur.

Enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA), vücudun koruyucu fonksiyonlarının kapsamlı bir değerlendirmesi için gerçekleştirilir. Çalışma sırasında bağışıklık hücrelerinin sayısı ve özellikleri, gerekli antikorların varlığı belirlenir. ELISA kan testi bulaşıcı, hematolojik, otoimmün hastalıkları, primer ve sekonder immün yetmezlikleri teşhis etmek için yapılır. ELISA ile kan testinin ne olduğunu ve bu çalışma için hangi endikasyonların mevcut olduğunu düşünün.

Ne olduğunu

ELISA kan testi, bir kan numunesindeki antikorları veya antijenleri tespit eden bir laboratuvar yöntemidir. Bu çalışma, immünoglobulinlerin, immünolojik komplekslerin, hormonların seviyesini tespit etmek için kullanılır.

Analiz endikasyonları

Bir ELISA kan testinin atanması için aşağıdaki endikasyonlar vardır:

• cinsel yolla bulaşan enfeksiyonların teşhisi - ureaplasma, mikoplazma, klamidya, trichomonas, sifiliz;
• viral hastalıkların teşhisi - sitomegalovirüs, herpes, hepatit, Epstein-Barr virüsü;
• hormon seviyesinin belirlenmesi;
• onkolojik hastalıkların teşhisi;
• immün yetmezliğin belirlenmesi;
• alerji teşhisi;
• organ nakli öncesi ameliyat öncesi kapsamlı muayene;
• tedavinin etkinliğinin değerlendirilmesi.

Yöntem ilkesi

Enzim immünoassay yönteminin çalışma prensibi, kan - immünoglobulinlerdeki spesifik protein-antikorların belirlenmesine dayanır. İmmünoglobulinler, antijenler (yabancı mikroorganizmalar) vücuda girdiğinde insan bağışıklık sistemi tarafından üretilir. Bu bağışıklık molekülleri vücuttaki çeşitli enfeksiyöz ajanlara bağlanır ve onları nötralize eder.

İmmünoglobulinlerin önemli bir özelliği vardır - özgüllük. Bu nedenle, belirli bir antijene bağlanarak bir antijen-antikor kompleksi oluşturabilirler. Bir ELISA kan testi sırasında niteliksel ve niceliksel olarak belirlenen bu komplekstir.

Beş immünoglobulin sınıfı vardır. Ancak genellikle üç sınıf tanımlanır - immünoglobulinler A, M, G. Bu antikorlar, enfeksiyon anından itibaren vücutta farklı zamanlarda birikir.

• İmmünoglobulinler sınıf M (IgM) enfeksiyon anından itibaren beşinci günde kanda ilk olarak belirirler. 5-6 hafta vücutta kalırlar, sonra kan dolaşımından kaybolurlar. IgM antikorları, hastalığın akut dönemini veya kronik seyrinde hastalığın alevlenmesini gösterir.
• Enfeksiyondan yaklaşık 3-4 hafta sonra, kanda immünoglobulinler belirir. sınıf G (IgG). İnsan kanında birkaç ay hatta yıllarca var olabilirler. ELISA kan testinin deşifresine göre, iki hafta sonra arka arkaya alınan iki kan örneğinde IgG immünoglobulin miktarı artarsa, mevcut bir enfeksiyondan veya yeniden enfeksiyondan - aynı enfeksiyonla yeniden enfeksiyondan söz ederler.
• İmmünoglobulinler A sınıfı (IgA) bu araştırma yöntemiyle enfeksiyondan veya bulaşıcı bir hastalığın alevlenmesinden 2-4 hafta sonra tespit edilebilir. Bunların sadece %20'si kanda dolaşır, geri kalanı mukoz membranlar tarafından salgılanır. IgA antikorları, enfeksiyöz ajanların yok edilmesinden 2-8 hafta sonra kan dolaşımından kaybolur. Bu immünoglobulinlerin kaybolması, enfeksiyon için bir tedavi anlamına gelir. Hastalığın bitiminden sonra kanda IgA antikorlarının varlığı belirlenirse, hastalık kronik aşamaya geçmiştir.

Analiz için hazırlık

İnsan kanı çoğunlukla bir ELISA kan testi yapmak için kullanılır. Ancak vitröz cismin, beyin omurilik sıvısının, amniyotik sıvının içeriğini de inceleyebilirsiniz.

Araştırma için hastadan kübital venden kan örneği alınır. Kan bağışının aç karnına yapılması önerilir (son yemekten itibaren en az 12 saat geçmelidir). Bazıları tahlil sonucunu değiştirebileceğinden, hastanın ilaç alıp almadığını doktora söylemek gerekir. Araştırma sonuçlarının güvenilirliği alkol ve uyuşturucu kullanımından etkilenmektedir.

şifre çözme

Bu analizin sonuç formu, her bir immünoglobulin sınıfı için pozitif (+) veya negatif (-) sonucu gösterir.

ELISA kan testinin olası bir deşifresinin yorumlanmasını düşünün.

• IgM, IgG, IgA'nın negatif sonucu - enfeksiyona karşı bağışıklık eksikliği.
• Negatif IgM, IgA ve pozitif IgG sonucu - enfeksiyon sonrası veya aşılama sonrası bağışıklık.
• Negatif veya pozitif IgG, IgA ve pozitif IgM akut bir enfeksiyondur.
• IgM, IgG, IgA'nın pozitif sonucu, kronik bulaşıcı bir hastalığın alevlenmesidir.
• Negatif bir IgM sonucu ve negatif veya pozitif bir IgG, IgA sonucu kronik bir enfeksiyondur.
• Negatif IgM sonucu ve IgG yok, IgA - iyileşme.

yöntemin avantajları

ELISA kan testinin birçok avantajı vardır. Ana olanlar ayırt edilebilir:

• nispeten yüksek doğruluk (hassasiyet);
• erken teşhis olasılığı;
• bulaşıcı sürecin dinamiklerini takip etme yeteneği;
• toplu araştırmalara izin veren yüksek düzeyde birleştirme;
• analiz sonucunu elde etmek için gereken kısa süre;
• işte kolaylık;
• analizin tüm aşamalarının otomasyonu;
• nispeten düşük maliyet.

Kusurlar

ELISA yönteminin dezavantajı bazen yanlış negatif veya yanlış pozitif sonuçlar vermesidir. Çalışma sırasındaki teknik hataların yanı sıra hastadaki romatoid faktör, kronik hastalıkların varlığı (antikorların üretildiği), metabolik bozukluklar ve bazı ilaçların alınması yanlış sonuçların nedeni olabilir.

• askariyaz;
• trikinoz - analiz birkaç kez gerçekleştirilir, maksimum antikor seviyesi enfeksiyondan 4-12 hafta sonra belirlenir;
• sistiserkoz;
• taeniasis;
• fascioliasis - antikorlar, hastalığın akut aşamasında belirlenir;
• opisthorchiasis - hastalığın kronik ve akut formları arasında ayırıcı tanı yapmak;
• giardiazis;
• visseral ve kutanöz leishmaniasis;
• amebiyaz;
• toksoplazmoz.

4.2 5 üzerinden 4.20 (5 Oy)