Helmintolojik yöntemler. Protozoa için temel araştırma yöntemleri

En basit 4 sınıfa ayrılır:

Kistlendiğinde, mikroorganizma yuvarlak bir şekil alır ve koruyucu bir kabukla kaplanır. Bir kist şeklinde, protozoa olumsuz çevresel faktörlere karşı daha az duyarlı hale gelir.

Araştırma şunları içerebilir:

Not:Pek çok teşhis çeşidi vardır, klinik laboratuvar pratiğinde en yaygın olanları ele alacağız.

Özel teşhis türleri

Her özel durumda, laboratuvar asistanı belirli bir patojen bulmakla görevlendirilir, bazen diğerleri ana ile birlikte bulunur.

Bu mikroorganizmanın insan bağırsağında yaşayabilen 6 türü vardır. Sadece vejetatif ve kist şeklinde ortaya çıkan dizanteri amipi klinik öneme sahiptir.

Ek olarak, immünolojik yöntemler kullanılır:

• dolaylı immünofloresan;
• dolaylı aglutinasyon (PHA);
• radyal immünodifüzyon.

Not: serolojik yöntemler bilgi vermez ve yalnızca şüpheli durumlarda ana yöntemlere ek olarak kullanılır.

Siliyer teşhisi (siliatlar)

Bu cinsin mikroorganizmalarının patojenik formu balantidiadır. Bu, balantidiyaza neden olan bir mikroptur - kalın bağırsağın ülseratif bir sürecinin eşlik ettiği bir hastalık. Etken ajan, bitkisel bir form ve bir kist şeklinde doğal bir yaymada bulunur. Smear materyali (dışkı ve mukus) sigmoidoskopi muayenesi sırasında alınır ve özel besiyerlerine ekilir.

Flagellatların teşhisi (leishmania, giardia, tripanozomlar, trikomonadlar)

Leishmania, tripanosoma, giardia, trichomonads insanlar için tehlikelidir.

Leishmania- Kan yaymalarında, kemik iliği materyallerinde, deri sızıntılarından sıyrıklarda leishmaniasis'e neden olan mikroplar incelenir. Bazı durumlarda Leishmania tanısında besleyici besiyerlerine ekim yapılır.

tripanozomlar- Uyku hastalığına neden olan ajanlar (Amerikan / Afrika tripanosomiasisi veya Chagas hastalığı).

Afrika varyantı, periferik kan çalışmasında ilk dönemde belirlenir. Hastalığın ilerlemesi sırasında patolojik mikroplar, lenf düğümlerinin delinme materyalinde, ileri aşamalarda - beyin omurilik sıvısında bulunur.

Chagas hastalığından şüphelenilmesi durumunda tripanozomları teşhis etmek için test materyali düşük büyütmede mikroskop altında incelenir. Bu durumda, lekeler ve kalın bir damla önceden lekelenir.

Trikomonas(bağırsak, ağız), etkilenen mukoza zarlarından alınan malzemelerin mikroskopisi ile tespit edilir.

Sporozoanların tanımlanması (malaryal plasmodium, koksidoza neden olan ajan, vb.)

İnsanlar için en yaygın ve tehlikeli tür, patojenin 4 ana çeşidine sahip olan malaryal plazmodyumdur: üç günlük sıtmaya, dört günlük sıtmaya, tropikal sıtmaya ve oval sıtmaya neden olan ajan.

Plasmodium'un (sporogony) cinsel gelişimi Anopheles sivrisineklerinde gerçekleşir. Aseksüel (doku ve eritrosit şizogonisi) - karaciğer dokusunda ve insan eritrositlerinde. Sıtma plazmodyumu teşhisi konulurken yaşam döngüsünün bu özellikleri dikkate alınmalıdır.

Böylece, yeni hasta bir hastanın kanında sporogonyum döngüsünün germ hücreleri bulunabilir. Ancak sıtma ataklarının zirvesinde, kanda çok sayıda şizont görülür.

Ayrıca, sıtma ateşinin farklı aşamalarında, çeşitli plazmodyum biçimleri ortaya çıkar:

• üşüme döneminde kan, bir tür şizont olan merozoitlerle doldurulur;
• sıcaklığın yüksekliğinde halka şeklindeki trofozoitler eritrositlerde birikir;
• sıcaklıktaki düşüş, amoeboid trofozoitlerin baskınlığı ile karakterize edilir;
• normal durum dönemlerinde, kan yetişkin şizont formları içerir.

Sıtmaya neden olan ajanın (sıtma plazmodyum) incelenmesi, bir yaymada ve kalın bir damlada gerçekleştirilir.

Not:smear ve kalın kan damlaları çalışmasında sıtma teşhisi bazen hatalıdır. Bazı durumlarda kan trombositleri yanlışlıkla sıtma patojeni olarak sınıflandırılabilir. Ayrıca, lökosit parçaları ve diğer hücreler bazen plazmodyumu simüle eder.

Protozoa için temel araştırma yöntemleri

Protozoanın varlığı için en yaygın araştırma yöntemlerine kısaca bir göz atalım.

Doğal yayma ve Lugol solüsyonu ile boyanmış yayma (dışkıda) kullanılarak protozoa teşhisi

İlaç, izotonik bir çözelti içinde bir dışkı emülsiyonundan hazırlanır. Bir cam slayta iki damla sodyum klorür ve Lugol çözeltisi uygulanır. Test malzemesi her iki bileşime tahta bir çubukla eklenir ve camla kaplandıktan sonra mikroskobun farklı çözünürlüklerinde izlenir.

Belirli işaretlere göre, bulunan protozoalar kayıtlıdır. Doğruluk için bir malzemeden 2-3 preparat hazırlanır. Şüpheli durumlarda, analiz 2-3 hafta boyunca birkaç kez tekrarlanır.

Yöntem vejetatif ve kistik formları tespit edebilir:

• lamblia;
• balantidia;
• dizanteri amip.

Patojenik formlarla birlikte patojen olmayan protozoalar da belirlenir. Sağlıklı taşıyıcılar ayrıca luminal ve kistik formlara sahiptir.

Önemli:Yanlışlık ve hatalardan kaçınmak için araştırmalar tekrar tekrar yapılmalıdır.

Doğal ve lekeli bir smear yöntemiyle protozoa teşhisinin sonucu, patojen formunun (yarı saydam, kist, doku) bir tanımını içermelidir.

Araştırma gereksinimleri:

• analiz için alınan materyal (sıvı dışkı), dışkılamadan en geç 30 dakika sonra incelenir;
• oluşan dışkı, dışkılamadan sonraki 2 saat içinde teşhis edilmelidir;
• malzeme yabancı maddeler (dezenfektanlar, su, idrar) içermemelidir;
• malzeme ile çalışmak için sadece tahta çubuklar kullanılır, mukusun kayması nedeniyle cam olanlar uygun değildir;
• Çubuklar kullanımdan hemen sonra yakılmalıdır.

Protozoa tanısında konservasyon yöntemi (dışkı muayenesi)

Çalışma, protozoanın bir koruyucu ile sabitlenmesiyle gerçekleştirilir. Bu yöntemin öncekinden farkı, koruyucuların ilacı uzun süre saklamanıza izin vermesidir.

Kullanılan koruyucular:

• Höyük. Koruyucu maddeler içerir: 0,7 ml sodyum klorür, 5 ml formalin, 12,5 ml %96 alkol, 2 gr fenol ve 100 ml damıtılmış su. Renklendirme bileşimi: %0.01 tionin çözeltisi (masmavi).
• Safarliev'in çözümü. Bileşim: 1.65 gr çinko sülfat, 10 ml formalin, 2.5 gr kristal fenol, 5 ml asetik asit, 0.2 gr metilen mavisi, 100 ml su. Bu koruyucu, malzemenin bir aydan fazla saklanması gereken durumlarda kullanılır.

Boş şişeler bir koruyucu ile doldurulur, malzeme 3: 1 oranlarında içlerine aktarılır, daha sonra gerekirse bir boya eklenir. Sonuçların değerlendirilmesi 2-3 ilaç çalışmasında gerçekleştirilir.

Formalin-eter zenginleştirme yöntemi (dışkıda protozoa varlığı için analiz)

Bu tanı yöntemi, protozoon kistlerini ayırmanıza ve konsantre etmenize olanak tanır. Analiz için aşağıdaki bileşenler gereklidir: formalin (10 mi), 0.85 g izotonik çözelti, damıtılmış su, sülfürik eter, Lugol çözeltisi.

Listelenen sıvılarla bir biyomateryal karışımı karıştırılır ve santrifüjlenir. Tüpün dibinde elde edilen çökelti Lugol solüsyonu ile boyanır ve kist ve vejetatif formların varlığı açısından incelenir.

Leishmania tespit yöntemi (kemik iliği yayması)

Leishmaniasis teşhisi için reaktifler kullanılır: Romanovsky'ye göre Nikiforov (sülfürik eter ve etil alkol), fosfat tamponu, Azur-eozin karışımı.

Kemik iliği maddesi özel bir hazırlıktan sonra çok dikkatli bir şekilde bir cam lam üzerine yerleştirilir. Daldırma sistemli bir mikroskop kullanılır.

Hastalığın akut döneminde, punktatta çok sayıda Leishmania bulunur.

Not:bazen kan hücreleri tedavi edilen leishmania'ya benzeyebilir, bu nedenle laboratuvar teknisyeninin dikkatli olması ve bağımsız olarak çalışmak için yeterli deneyime sahip olması çok önemlidir.

Deri sızıntısından bir yaymada leishmania'yı tespit etme yöntemi

Gerekli reaktifler önceki teste benzer.

Test materyali mevcut tüberkül veya ülseratif içeriklerden elde edilir. Leishmaniasis şüphesi ile kazıma, kansız neşter ile çok dikkatli bir şekilde yapılır. Daha sonra cam üzerine hazırlık yapılır. Elde edilen sonuçların doğruluğu için birkaç hazırlık aynı anda incelenir.

Test materyalinde bulunan makrofajlar, fibroblastlar ve lenfoid hücreler arasında bir hastalık varlığında da Leishmania belirlenir.

Patolojik dokuları kazıyarak elde edilen saf bir Leishmania kültürünü izole etme yöntemi

Bu teşhis yöntemi ile en basit doku kazımaları, Leishmania'nın aktif olarak çoğaldığı özel bir besin ortamına yerleştirilir.

Bir kazıma almadan önce, cilt dikkatlice alkolle muamele edilir, daha sonra tüberkülde bir kesi yapılır, alttan içeriği çıkarılır ve ortamla birlikte bir test tüpüne yerleştirilir. Malzeme birkaç kez alınır, ardından farklı test tüplerine yerleştirilir. Ardından 22-24 derece sıcaklıktaki bir termostatta ekim yapılır. Sonuçlar mikroskop altında değerlendirilir. Bu yöntem, diğer, daha ucuz ve daha hızlı protozoa teşhis yöntemleri etkisiz olduğunda kullanılır.

Bir video incelemesini izleyerek, protozoon varlığına yönelik testlerin pratikte bir damla kanla nasıl çözüldüğünü görebilirsiniz:

Lotin Alexander, tıbbi köşe yazarı

Dışkı iki şekilde incelenir:

1. Makroskopik - helmintleri, kafalarını, parçalarını, strobili artıklarını bulun. Küçük dışkı parçaları düz bir banyoda veya Petri kabında suyla karıştırılır ve gerekirse bir büyüteç kullanılarak karanlık bir arka plana karşı iyi ışıkta görüntülenir. Tüm şüpheli oluşumlar cımbızla başka bir bardak suya veya bir damla seyreltilmiş gliserin içinde bir cam slayta aktarılır.

Yöntem ile sahiplenmek dışkının incelenen kısmı bir cam silindir içinde su ile karıştırılır, çökeltildikten sonra üst su tabakası boşaltılır. Bu birkaç kez tekrarlanır. Sıvı şeffaf hale geldiğinde boşaltılır ve tortu bir Petri kabında görülür.

2. Mikroskobik - helmintlerin yumurtalarını ve larvalarını tespit etmek için. Birçok araştırma yöntemi vardır.

bir). yerli leke - en yaygın ve teknik olarak mevcut araştırma yöntemi. Tüm helmintlerin yumurtalarını ve larvalarını bulabilirsiniz. Bununla birlikte, az sayıda yumurta ile her zaman bulunmazlar. Bu nedenle zenginleştirme yöntemi kullanılmaktadır.

bir). Fülleborg yöntemi - bu, doymuş bir NaCl çözeltisinde (1.2 - yoğunluk; 1 litre su başına 400 g NaCl; %40 NaCl çözeltisi) helmintiyazis yumurtalarının ortaya çıkmasına dayanan bir zenginleştirme yöntemidir. Yöntem, doğal yaymaya göre daha etkilidir. 2-5 g dışkı cam kavanozlara konur ve NaCl çözeltisi ile doldurulur, karıştırılır ve 45 dakika sonra oluşan film metal bir halka ile çıkarılır, bir cam slayt üzerine bir damla gliserin yerleştirilir. Mikroskop altında inceleyin. Yöntemin dezavantajı, çeşitli helmintlerin yumurtalarının gecikmeli ortaya çıkmasıdır, cüce tenya - 15-20 dakika sonra, yuvarlak kurt - 1.5 saat, kırbaç kurdu - 2-3 saat.

2) Kalantaryan yöntemi - ayrıca bir zenginleştirme yöntemidir, ancak doymuş bir NaNO3 (1.38 yoğunluk) çözeltisi kullanılır. Yumurtaların çoğu yüzer, tortunun incelenmesi gerekmez. Dezavantajı, yumurtaların uzun süre çözelti içinde tutulmasıdır, bu da bazı yumurtaların şişmeye başlamasına ve dibe çökmesine, yüzey filminden kaybolmasına neden olur.

3. Goryachev'in yöntemi - yumurta biriktirme ilkesine dayalı, küçük trematod yumurtalarının tespiti. Çözelti olarak doymuş bir NaCl çözeltisi kullanılır ve üstüne 3-4 ml dışkı çözeltisi dikkatlice katmanlanır. 15-20 saat sonra trematod yumurtaları dibe çöker. Sıvı boşaltılır, bir cam slayt üzerinde ve bir mikroskop altında tortu.

4. Shulman büküm yöntemi – dışkıdaki helmint larvalarını tespit etmek için. Sadece taze izole edilmiş dışkıyı inceleyin. Bir cam kavanoza 2-3 g konur ve 5 katı kadar su dökülür, bir çubukla hızlıca karıştırılır, kavanozun duvarlarına dokunmadan - 20-30 dakika, daha sonra çubuk hızla çıkarılır ve bir damla damla sonunda sıvı bir cam slayta aktarılır ve mikroskopta tutulur.

5. Berman yöntemi - helmint larvalarının sıcaklığa doğru göç etme yeteneğine dayanır ve onları dışkıda tanımlamaya hizmet eder.

6. Harada ve Mori Yöntemi (larva yetiştirme yöntemi) ve ankilostomiyazis testi için önerilir. Yöntem, sıcakta ve nemli filtrelenmiş kağıtta, kancalı kurt yumurtalarının kolayca tespit edilebilen filariform larvalara dönüşmesi gerçeğine dayanmaktadır. 15 g dışkı, süzülmüş kağıt şeridinin ortasına uygulanır, dışkılı kağıt bir kavanoza yerleştirilir, böylece alt ucu suya batırılır ve üst ucu bir mantar ile sabitlenir. Kavanoz 5-6 gün 28 0C'de termostatta tutulur. Filariform larvalar bu süre içinde gelişir ve suya iner. Sıvı bir büyüteç altında incelenir. Tespit edilmesi zorsa, larvalar 60 0'a ısıtılarak öldürüldükten sonra sıvı santrifüj edilir. Laboratuvar teknisyeni eldiven giymelidir.

7. Enterobiasis için yöntemler - kıl kurdu yumurtalarının ve sığır tenyasının tanımlanması.

a) perianal kıvrımlardan kazıma - tahta bir çubuğa sıkıca sarılmış ve %50 gliserin solüsyonu ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubukla. Laboratuarda, çubuk 1-2 damla% 50 sulu gliserol çözeltisi ile yıkanır.

b) yapışkan akar yöntemi (Graham yöntemi)

Yapışkan bant perianal kıvrımlara uygulanır, ardından cam slayta yapışkan bir tabaka ile uygulanır ve mikroskopta tutulur.

C) Göz çubukları yardımıyla kazıma (Rabinovich'in yöntemi). Perianal sıyrıklar için en geniş kısmı kıl kurdu yumurtalarının tutulmasını sağlayan özel bir yapıştırıcı ile kaplanmış cam göz çubukları kullanılır.

Kan, safra, balgam ve kasların incelenmesi

Kan mikroskobu - filariae larvaları tespit edilir.

Balgam muayenesi - paraganim yumurtaları, yuvarlak kurt larvaları, necator, Strongyloid, ekinokokal mesanenin elementleri.

Kasların muayenesi - trikinozdan şüpheleniliyorsa, hastanın veya cesedin kasları ile kişinin enfeksiyonuna neden olduğu iddia edilen et incelenir. Trikinoskopi amacıyla kas küçük parçalar halinde kesilir ve kompresörlere yerleştirilir, bunlar kasları ezen iki geniş, kalın camdır ve Trichinella larvaları kapsüller şeklinde bulunur - sıkıştırma yöntemi.

Sindirim yöntemi - kaslar yapay mide suyu (hidroklorik asit çözeltisi ve pepsin) ile dökülür. Kaslar sindirilir ve larvalar kolayca tespit edilir. İstila yoğunluğunun belirlenmesi: 1 g kas dokusu başına 200'e kadar larva sayısı - orta derecede istila yoğunluğu; 500'e kadar - yoğun; 500'den fazla - süper yoğun istila.

serolojik yöntemler

Helmintolojik araştırma yöntemleri. Helmintiyazları teşhis etme yöntemleri, helmintlerin kendilerinin veya parçalarının yanı sıra helmintlerin larva ve yumurtalarının (dışkı, idrar, safra ve duodenum içeriği, balgam, kan ve dokuları inceleme yöntemleri) doğrudan tespitine dayanan doğrudan olanlara ayrılır. perianal alandan ve subungual boşluklardan kazıma yoluyla elde edilen materyal) ve helmintlerin aktivitesi sonucu insan vücudunda meydana gelen ikincil değişiklikleri ortaya çıkaran dolaylı (kanın morfolojik bileşiminin çalışmaları, helmintiyazis teşhisi için immünolojik yöntemler, röntgen çalışmaları vb.). Doğrudan yöntemlerden en yaygın olanı, makro ve mikrohelmintoskopiye ayrılan koprolojiktir. Bazı durumlarda özel yöntemler kullanılır.

Makrogelmitoskopi araştırma yöntemleri helmintleri veya parçalarını (scolex, segmentler, cestod strobilasının parçaları) aramayı amaçlamaktadır. Yumurtaların hastanın dışkısı ile atılmadığı veya az miktarda ve her zaman değil (örneğin, enterobiasis ile, kıl kurtları dışkıda, teniidozlar, segmentler) bulunan helmintiyazları teşhis etmek için kullanılırlar.

Dışkıdaki kıl kurdu veya sestod parçalarını tespit etmek için dışkı çıplak gözle görülür. Teniidozların ayırıcı tanısı için, siyah fotografik küvetlerde veya Petri kaplarında ayrı küçük porsiyonlarda suyla seyreltilmiş dışkıların koyu bir arka plana karşı izlenmesi önerilir. Helmint parçalarından şüphelenilen büyük oluşumlar, iki cam slayt arasında bir büyüteç altında incelenir. Klinik endikasyonlara göre, tedaviden sonra küçük helmintlerin veya sestod başlarının tespiti öneriliyorsa, şüpheli parçacıklar bir damla gliserol içinde bir büyüteç altında ve gerekirse bir mikroskop altında incelenir.

Mikrohelmintoskopi araştırma yöntemleri(niteliksel) helmintlerin yumurtalarını ve larvalarını tanımlamayı amaçlar. Kato'ya göre kalın smear yöntemini selefon kaplama plakası ile uygulayın. Kato karışımı 6 bileşenden oluşur. ml%3 sulu malakit yeşili çözeltisi, 500 ml gliserin ve 500 ml%6 fenol çözeltisi. Kato plakaları (parçalara ayrılmış hidrofilik selofan 20´ 40 mm) 24'te daldırılır h birbirine bitişik olacak şekilde Kato karışımına (3-5 ml 100 tabak için Kato'nun çözümü). 100 mg dışkı bir cam sürgüye uygulanır, Kato'ya göre bir selofan kapak plakası ile kaplanır ve dışkının selofan plaka içindeki cam sürgü üzerine bulaşması için bastırılır. Smear, 40-50 oranında netleştirme için oda sıcaklığında bırakılır. dakika, ve daha sonra mikroskop altında görüntülendi. Sıcak mevsimde müstahzarın kurumaması için hazırlanan müstahzarın tabağına nemli bir sünger konur.

Tüm helmint türlerinin tam tespiti için, zenginleştirme yöntemlerinden biri ile birlikte Kato selofan kaplama levha kalın yayma yöntemi kullanılmalıdır. Bunlardan en yaygın olanları Kalantaryan yöntemi ve Fülleborn yöntemidir.

Kalantaryan yöntemi: 100'lük geniş boyunlu şişelerde ml bir cam çubukla iyice karıştırın 5 G dışkı, yavaş yavaş doymuş bir sodyum nitrat çözeltisi (1 kilogram 1 başına sodyum nitrat ben kaynarken su) bardağın kenarına. Yüzeye çıkan büyük parçacıklar bir kağıt kepçe ile çıkarılır. Salin solüsyonunun yüzeyine bir cam slayt uygulanır (salin solüsyonu, karışım cam slayt ile tamamen temas edene kadar eklenir). 20-30'dan sonra dk Cam slayt çıkarılır ve film mikroskop altında incelenir. Bu tuzun yokluğunda, Fholleborn'a (400) göre doymuş bir sofra tuzu çözeltisi kullanabilirsiniz. G 1'de tuz ben kaynayan su).

Özgül ağırlığı büyük olan yumurtaların (döllenmemiş ascarid yumurtaları, trematod yumurtaları ve büyük sestod yumurtaları) yüzmemeleri nedeniyle, Fülleborn yöntemini kullanırken sıvının yüzey tabakasını incelemenin yanı sıra, görüntülemek gerekir. Mikroskop altında tortudan 2-4 preparat.

Çeşitli helmintiyazlar için özel laboratuvar araştırma yöntemleri.

Helmint parçalarını tespit etmek için dışkılar çıplak olarak görülür, ardından suyla karıştırılır ve küçük parçalar halinde bir Petri kabında koyu bir arka plana karşı incelenir. Tüm şüpheli parçacıklar bir damla su içinde bir cam slayt üzerine yerleştirilir ve bir büyüteç altında incelenir. Günlük porsiyonu, su miktarının 5-10 katı ilave edilerek bir silindire yerleştirebilirsiniz. Karıştırıldıktan sonra kap, süspansiyon halindeki parçacıkların tamamen çökelmesine kadar bırakılır. Sıvının yüzey tabakası boşaltılır ve temiz su dökülür. Yıkanan çökelti, çıplak gözle veya bir büyüteç altında küçük porsiyonlarda görülür. Yumurtaları tespit etmek için mikroskobik inceleme yöntemleri kullanılır.

Yerli smear yöntemi. Test kısmının farklı yerlerinden az miktarda dışkı bir cam slayt üzerinde %50 gliserol solüsyonu, izotonik sodyum klorür solüsyonu veya su içinde ezilir. Karışım bir lamel ile kapatılır ve mikroskop altında incelenir.

Fülleborn'un yüzen yöntemi. Dışkıların bir kısmı, küçük porsiyonlarda ilave edilen 20 kısım doymuş sodyum klorür çözeltisi (özgül ağırlık 1.18) ile karıştırılır. Yüzeye çıkan büyük partiküller hemen uzaklaştırılır ve karışım 45 dakika bekletilir. Bu süre zarfında, sodyum klorür çözeltisinden daha düşük özgül ağırlığa sahip olan helmint yumurtaları yüzeye çıkar. Yüzey filmi yaklaşık 1 cm çapında bir tel halka ile çıkarılır ve mikroskop altında incelenmek üzere bir cam slayta aktarılır.

Kalantaryan yöntemi. Yüzer yöntemin etkinliği, sodyum klorürün doymuş bir sodyum nitrat çözeltisi ile değiştirilmesiyle arttırılır. Bu durumda, karışım 10-15 dakika tutulur.

Bir dışkı karışımının bir sodyum klorür veya sodyum nitrat çözeltisi ile çökeltilmesinden sonra oluşan yüzey filmi de bir cam slayt ile çıkarılabilir. Bu amaçla, tuz çözeltisi ile dışkı karışımı ile ağzına kadar doldurulmuş bir kavanoz, alt yüzeyi sıvı ile temas edecek şekilde bir cam sürgü ile kaplanır. Yerleştikten sonra cam çıkarılır ve filmin bulunduğu yüzey hızla döndürülerek mikroskop altında incelenir.

Sperianal kıvrımların kazınması (sığır tenyalarının kıl kurdu ve onkosferlerinin yumurtalarını belirlemek için) tuvaleti yapmadan önce sabah yapılır. Anüs çevresini kazımak için suya batırılmış tahta bir spatula veya %50 gliserin solüsyonu kullanılır. Elde edilen materyal, bir damla su veya %50 gliserol solüsyonu içinde bir cam slayta aktarılır ve mikroskop altında incelenir. Spatula, perianal bölgeyi silmek için kullanılan nemli bir pamuklu çubukla değiştirilebilir ve ardından suyla iyice durulanabilir. Su santrifüjlenir ve çökelti mikroskop altında incelenir.

Bermann yöntemi (larva tespiti için). 5-6 g dışkı ile kaplanmış metal bir ağ, bir standa yerleştirilmiş bir cam huni üzerine sabitlenir. Huninin alt ucuna kelepçeli bir lastik boru konur. Huni, t ° 50 ° 'ye kadar ısıtılan suyla doldurulur, böylece ağın dışkı ile alt kısmı su ile temas eder. Larvalar aktif olarak suya hareket eder ve kauçuk tüpün alt kısmında birikir. 4 saat sonra sıvı santrifüj tüplerine indirilir, santrifüjlenir ve çökelti mikroskop altında incelenir.

Akciğer paraziti paragonimus, ascaris ve kancalı kurt larvaları, kıl kurdu yumurtaları, ekinokokal mesane parçalarının yumurtalarını tespit etmek için balgam, nazal mukus ve vajinal akıntı analizi. Mukusun incelenen kısmı (salgılar) cam üzerine sürülür ve siyah beyaz bir arka plan üzerinde makroskopik olarak ve daha sonra mikroskop altında incelenir. Test malzemesine %25'lik bir antiformin çözeltisi ekleyebilir, iyice çalkalayabilir ve mukusu çözmek için 1-1.5 saat bekletebilirsiniz. Karışım santrifüjlenir ve çökelti mikroskop altında incelenir.

Karaciğer fluke yumurtalarını, kancalı kurtları, Strongyloides larvalarını tespit etmek için duodenal ve mide suyunun analizi. Elde edilen oniki parmak bağırsağı içeriğinin her üç kısmı da santrifüjlenir ve çökelti mikroskop altında incelenir. Ayrıca keşfedin ve.

Dokuların incelenmesi. Trichinella larvalarını tanımlamak için biyopsi alınan kas parçaları dikkatlice liflere ayrılır, kompresör camları (vidalı kalın camlar) arasına sıkıştırılır ve gölgeli ışıkla mikroskop altında incelenir. Sistiserciyi tanımlamak için, kaslar diseksiyon iğneleri ile katmanlara ayrılır, izole kesecik çevreleyen dokudan temizlenir, iki cam slayt arasına sıkıştırılır ve bir büyüteç altında incelenir.

Kan testi (filarya larvalarını tespit etmek için). Vazelinli bir lamel üzerinde asılı bir damla incelenir. 0,3 ml kan ile %3'lük solüsyon miktarının 10 katı karıştırabilirsiniz. Karışım santrifüjlenir ve çökelti mikroskop altında incelenir. Preparatları zenginleştirmek için 3 ml %2 formalin solüsyonu veya 95 ml %5 formalin solüsyonu, 5 ml asetik asit ve 2 ml konsantre hematoksilen alkol solüsyonundan oluşan 5 kat sıvı eklenir. 1 ml venöz kan. Karışım santrifüjlenir, çökelti damıtılmış su ile yıkanır ve mikroskop altında incelenir. Farklı filaria türlerini ayırt etmek için Giemsa-Romanovsky yöntemine göre boyanmış yaymalar incelenir.

İmmünolojik teşhis yöntemleri. İlgili helmint türünden (aglütinasyon, kompleman fiksasyonu) ve alerjik teşhis testleri (bakınız) uygulayın.

Helmintolojik araştırma yöntemleri. Pirinç. Helmint yumurtaları. 1-10 - yuvarlak kurt yumurtaları (nematodlar): 1 - 3 - yuvarlak kurtlar (1 - döllenmiş yumurta, 2 - protein kabuğu olmayan döllenmiş yumurta, 3 - döllenmemiş yumurta); 4 - kedi yuvarlak solucanı; 5 - yuvarlak kurt etoburları; 5 - kıl kurdu; 7 - kamçı; 8 - tominks; 9 - kancalı kurt; 10 - tricho-strongylid. 11-15 - tenya yumurtaları (cestodlar): 11 - sığır tenyası; 12 - tenya cücesi; 13 - sıçan tenyası; 14 - kabak tenyası; 15 - geniş şerit. 16 - 24 - kelebek yumurtaları (trematodlar): 16 - trematodlar (şistozomlar) Japonca; 17 - trematodlar (şistozomlar) idrar - cinsel; 18 - trematodlar (şistozomlar) Munson; 19 - trematodlar (parogonymus) pulmoner; 20 - trematodlar (opisthorchis) Sibirya (kedi); 21 - trematodlar (clonorchis) Çince; 22 - bağırsak trematodları (metagonimus); 23 - karaciğerin trematodları (fasciolas); 24 - trematodlar (dikroselyum) mızrak şeklinde.

Etkili ve uygun bir helmintolojik araştırma yöntemi, Kato'ya göre kalın bir yayma çalışmasıözü, kalın bir dışkı lekesinde helmint yumurtalarının tespiti olan, gliserin ile berraklaştırılmış ve malakit yeşili ile renklendirilmiştir. Kato karışımının bileşimi 6 ml %3 sulu malakit yeşili çözeltisi, 500 ml gliserin, 500 ml %6 fenol çözeltisidir. Çözelti stabildir ve oda sıcaklığında saklanabilir. Müstahzarları hazırlamak için, bezelye büyüklüğünde dışkı parçaları bir cam slayta uygulanır, bir Kato karışımı içinde 24 saat boyunca yaşlandırılan bir hidrofilik selofan filmi ile kaplanır ve malzemeyi eşit olarak dağıtmak için cama bastırılır. 40-60 dakika temizlenen smearler mikroskobik olarak incelenir. Tespit edilen helmint yumurtaları sayılır ve morfolojik özelliklere göre türe yakınlığı belirlenir. Yöntem, ascaris, kırbaç kurdu, sestodlar, trematodların yumurtalarını daha az ölçüde ortaya çıkarmaya izin verir - kancalı kurt ve cüce tenya.

Ayrıca yaygın olarak kullanılan zenginleştirme yöntemleri. Yüzdürme yöntemlerinin prensibi, dışkıyı helmint yumurtalarına kıyasla daha yüksek bir nispi yoğunluğa sahip bir tuzlu su çözeltisinde askıya almak ve bunun sonucunda yüzeye çıkmaktır. Yüzey filminin içeriği mikroskop altında incelenir. Zenginleştirici karışımlar olarak çözeltiler kullanılır: sofra tuzu - 1 litre suda 400 g (Fülleborn -1.18'e göre nispi yoğunluk); sodyum nitrat - 1 litre suda 1 kg (Kalantaryan-1.38'e göre nispi yoğunluk); sodyum nitrat - 900 g ve potasyum nitrat - 1 litre suda 400 g (Brudastov ve Krasnonos-1.48'e göre nispi yoğunluk). kaynatılıp soğutulur.
Araştırma için bir bardağa veya fayans bardağına 5-10 g dışkı eklenir, üzerine 100-200 ml salin solüsyonu eklenir ve iyice karıştırılır. Daha sonra yüzeydeki büyük parçacıklar tahta bir spatula veya kağıt veya kartondan yapılmış bir kepçe ile çıkarılır ve salin solüsyonu ve cam slayt tam temas halinde olacak şekilde hemen yüzey filmine geniş bir cam slayt uygulanır. Karışımın 30-40 dakika dinlendirilmesinden sonra, cam slayt çıkarılır, film yukarı bakacak şekilde mikroskop altına yerleştirilir ve tüm yüzey dikkatlice incelenir. Kurumayı önlemek için 2-3 damla %50 gliserin solüsyonu ekleyebilirsiniz. Yüzey filmi ayrıca bir tel halka ile çıkarılabilir. Yüzdürme yöntemlerinin etkinliği, tuz çözeltilerinin bağıl yoğunluğu arttıkça artar. Bu yöntemleri kullanarak nematod, sestod ve trematod yumurtalarını tespit etmek mümkündür.

Dışkıdaki yumurtaları tespit etmek için Krasilnikov sedimantasyon yöntemi kullanılır.. Dışkı, %1'lik bir deterjan solüsyonu (Lotos çamaşır tozu vb.) ile 1:10 oranında bir süspansiyon oluşana kadar karıştırılır. Deterjanın etkisi altında, çeşitli dışkı bileşenleri (proteinler, yağlar, doku elementleri) çözülür. 30 dakika sonra tüp içeriği 1-2 dakika çalkalanır, ardından 5 dakika santrifüj edilir. Preparatlar tortudan hazırlanır ve mikroskop altında incelenir.
Tarla koşullarında ve ayrıca helmint istilası için popülasyonun toplu araştırmaları sırasında, Kato kalın yayma yöntemini kullanmak uygundur. Durağan koşullarda, hastaları muayene ederken en etkili yüzdürme yöntemlerinin kullanılması tercih edilir. Mikroskopi sırasında bu yöntemleri kullanırken, müstahzarda bulunan yumurtaların sayılması tavsiye edilir. Dışkı çalışması için alınan standart ağırlık veya hacme (örneğin, 1 çay kaşığı veya yemek kaşığı) ve sabit bir tek hacim salin solüsyonuna bağlı olarak, istilaların yoğunluğu kabaca yargılanabilir. Bu niceliksel kayıt, öngörülen tedaviyi doğrulamada ve solucandan kurtulmanın etkinliğini değerlendirmede faydalı olabilir. Ek olarak, enfeksiyonun yoğunluğunu belirlemek için diğer daha doğru nicel yöntemler, özellikle Stoll yöntemi kullanılabilir.

Teniarhynchosis ve enterobiasis teşhisi için perianal-rektal kazıma araştırma yöntemini uygular. %50 gliserol solüsyonuna batırılmış tahta bir spatula, sabahları anüs ve alt rektumun etrafındaki dışkılamadan önce perianal kıvrımları kazımak için kullanılır. Lamel kenarından bir spatula ile temizlenen elde edilen materyal, %50 gliserol solüsyonu içinde bir cam lam üzerine yerleştirilir, bir lamel ile kapatılır ve mikroskop altında incelenir. Ayrıca, önce kalıcı kıvrımlara yapışkan bir tarafla bastırılan, daha sonra bir cam slayt üzerine yerleştirilen ve mikroskopta tutulan bir selüloz bant şeridini de inceleyebilirsiniz.

Berman yöntemi ile dışkıda nematod larvalarının tespiti. Yöntem, larvaların termotropik özelliğine dayanmaktadır. Araştırma için, bir tel çerçeve üzerinde metal bir ağa veya birkaç kat gazlı bezden oluşan bir ağa yerleştirilen 1 yemek kaşığı dışkı alınır. Izgara, bir tripoda sabitlenmiş bir huni içine yerleştirilmiştir. Kelepçeli kauçuk bir boru huniye birleşir. Ağ kaldırılarak huni su ile doldurulur (sıcaklık +40°...+50°C), böylece ağın alt kısmı suya daldırılır. Dışkıdan gelen larvalar aktif olarak ılık suya göç eder ve yerleşerek huninin alt kısmında birikir. 2-4 saat sonra klemp açılır, su bir santrifüj tüpüne indirilir ve 2-3 dakika santrifüj edilir. Daha sonra süpernatant süzülür, tortu bir cam slayta aktarılır ve güçlüyloidiazis patojeninin hareketli larvalarının bulunduğu bir mikroskop altında incelenir.

Harad yöntemi ve Mori, kancalı kurt ve necator larvalarının ayırt edilmesini sağlar. Kancalı kurt larvaları filtre kağıdı üzerinde kültüre edilir. Bu amaçla, dışkılamadan en geç 1 saat sonra hastadan alınan 0,5 gr taze dışkı, şeridin her iki ucu temiz kalacak şekilde 12X1.5 cm ebadında filtre kağıdı şeritlerine uygulanır. Şeridin bir ucu, dördüncü kısmı suyla doldurulmuş bir test tüpüne daldırılır ve diğeri bir mantarla sıkıştırılır. Tüpler, +26 ... + 28°C sıcaklıktaki bir termostata yerleştirilir. Yumurtalardan gelişen larvalar filtre kağıdı boyunca iner ve test tüpünün dibine yerleşir. 5-6 gün sonra kağıt şerit çıkarılır ve test tüpünde kalan sıvı bir büyüteç altında incelenir veya santrifüj edilir. Santrifüj sırasında oluşan çökelti ışık mikroskobunda incelenir. Test tüpleri yerine, duvarlarına 4 kağıt şerit yapıştırılmış tetrahedral cam kavanozlar (15XYX7 cm boyutunda) kullanıldığında, analizlerin verimliliği artar (GM Maruashvili ve diğerleri, 1966).

Şistozomiyaz için araştırma yöntemleri . Dışkı muayenesi - dışkının bir kısmı 250 ml su ile karıştırılır, 3 kat gazlı bezden süzülür ve üstüne su ile doldurulan konik bir kaba süzülür. 30 dakika sonra sıvı tabaka boşaltılır, çökeltiye taze bir miktar su ilave edilir. Çökelti, berrak bir süpernatan elde edilene kadar yıkanır ve mikroskobik olarak incelenir.

Larvoskopi yöntemi - 20-25 gr dışkı, yan tarafı lehimlenmiş cam tüplü bir Erlenmeyer şişesine konulur ve musluk suyu ile yıkanır. Daha sonra balon koyu renkli kağıtla kaplanır ve lehimli cam tüp +25...+30°C sıcaklıkta ışıkta bırakılır. Taranmış miracidiumlar, büyüteçle veya çıplak gözle görülebilecekleri lateral tüpteki menisküste yoğunlaşmıştır. İdrar muayenesi - 100 ml idrar sabah 10.00 ile 14.00 arasında toplanır veya günlük kısım çökeltilir ve ardından 1500 rpm'de santrifüj edilir. Elde edilen çökelti bir cam lam üzerine uygulanır* ve mikroskopta tutulur. WHO, idrarın tamamını filtrelemek için bir yöntem önermektedir. Filtrelemeden sonra, filtreler formalin ile muamele edilir veya ısıtılır (yumurtaları öldürmek için) ve daha sonra sulu bir ninhidrin çözeltisi ile nemlendirilir. Kurutulmuş müstahzarlarda yumurta embriyoları mor bir renk alır.

immünolojik kullanımı Yetişkin şistozomları ve yumurtaları, türe özgü olmayan bağışıklık tepkilerine neden olan çok sayıda antijen içerdiğinden, şistozomiyaz teşhisi için araştırma yöntemleri zordur (D. Bradley, 1979).

Ülkemizde helmintiyaziste immünolojik reaksiyonların formülasyonu için bir takım standart teşhisler üretilmektedir. Ekinokokkoz ve alveokokkozis için alerjik deri testi, ekinokokkoz antijenli RLA, soğukta RSK, soğukta çökelme reaksiyonu çeşitli modifikasyonlarda (halka çökeltme, trichinosis, sistiserkoz ve migroaskariazis antijenleri ile yerleştirilen test tüplerinde veya kılcal damarlarda çökelme) pratiktir. uygulamalar. Yukarıdaki serolojik reaksiyonları ayarlamak için standart teşhisler, bakteri preparatları üreten işletmeler tarafından yapılır. Üretici, üretilen diagnostiklere, ilacın saklama kuralları, son kullanma tarihleri ​​ve reaksiyon tekniği ile uygun antijenlerin kullanımına ilişkin talimatlar hakkında ayrıntılı talimatlar ekler.

Son yıllarda, helmintiyazisi teşhis etmek için kullanılan serolojik testlerin listesi önemli ölçüde genişlemiştir. Bu amaçla aşağıdaki reaksiyonlar kullanılır: RIGA, dolaylı immünofloresan (RIF), jel immünodifüzyon (RID), karşı immünoelektroforez (VIEF), REAMA. Bu reaksiyonlar askariazis, toksokariazis, trichinosis, kancalı kurt enfeksiyonları, filaryaz, ekinokokkoz ve alveokokkoz, opisthorchiasis, schistosomiasis, paragonimiasis için kullanılabilir. Bununla birlikte, ülkemizde bu reaksiyonlar için standart teşhisler yayınlanmamaktadır ve bunların ayarlanması için teknik düzenlenmemiştir. Çoğunlukla bilimsel olan ayrı laboratuvarlar, kendi spesifik antijenlerini hazırlar ve bunları çeşitli modifikasyonlarda kullanır. Bu yöntemlerin açıklaması literatürde geniş bir şekilde sunulmaktadır ve kesin olarak birleştirilmemiştir. İmmünolojik verilerin yorumlanması, uygulanan her serolojik testin özgüllük ve duyarlılık düzeyi dikkate alınarak, bağışıklık tepkisinin dinamiklerinin incelenmesine dayanmalıdır. Bu nedenle, tanı koyarken ve popülasyonun seroepidemiyolojik araştırmaları sırasında, en hassas reaksiyonların birkaçının kullanılması tavsiye edilir. Bu pozisyonlardan, yüksek hassasiyet ve oldukça yüksek özgüllük ile ayırt edilen VIEF ve REMA reaksiyonları kendilerini iyi kanıtlamıştır (P. Ambroise-Thomas, 1978; I.E. Ballad, 1979; G.M. Negryanu, 1980; A.M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978, vb.). REAMA'nın etkinliği amebiyaz, leishmaniasis, tripanozomiyaz ve toksoplazmozda test edilmiştir (GA Ermolin, 1980).