Bakteriyolojik laboratuvar çalışmaları. Bakteriyolojik laboratuvar - laboratuvarlar, paraklinikler

giriiş

Diğer herhangi bir bilimin genel kısmı gibi, genel bakteriyoloji de belirli sorularla (örneğin, tek tek bakteri türlerinin tanımlanması) değil, genel olarak problemlerle ilgilenir; metodolojisi, çok çeşitli laboratuvar çalışmalarında yaygın olarak kullanılan temel prosedürleri kapsar. Bu çalışma kılavuzu, herhangi bir mikroorganizma grubunu tanımlamayı amaçlamaz. Bu, özel ve sıhhi mikrobiyoloji üzerine aşağıdaki yayınların görevidir. Bununla birlikte, burada sunulan yöntemler, bakterilerle uğraşılması gereken herhangi bir alanda faydalı olabilir ve bakterilerin izolasyonu ve tiplendirilmesi dahil olmak üzere pratik problemlere uygulanabilir.

Bakteriyoloji ancak viroloji, immünoloji ve moleküler biyoloji gibi daha sonra ortaya çıkan bilim alanlarını etkilemeye ve sızmaya devam eden benzersiz teknikler geliştirildikten sonra bir bilim haline geldi. R. Koch tarafından geliştirilen saf kültür kullanma tekniği ve L. Pasteur'ün öncülüğünü yaptığı immünolojik reaksiyonlar ve kimyasal analizler günümüzde bile önemini kaybetmemiştir.

Genel bakteriyoloji metodolojisi, bu disiplindeki standart ders kitapları için tipik olan böyle bir yapının yardımıyla bu baskıya yansıtılmıştır. Ancak, üniversiteler için mikrobiyoloji dersine yönelik laboratuvar çalıştaylarından farklı olarak, bazı bölümlerde daha ayrıntılı olarak sunulmaktadır ve yalnızca referans amaçlıdır. Bu yapı, bakteriyologların ve veteriner sıhhi tesisat uzmanlarının eğitim ve uzmanlaşma özelliklerini dikkate alır. Genellikle materyal keyfi olarak sunulur, bu nedenle ilişkilerini gösterme arzusu nedeniyle bazı yöntemlerden birkaç kez bahsedilir.

bakteriyolojik laboratuvar

Yapısal birimler olarak bakteriyoloji laboratuvarları, bölgesel, ilçe, ilçeler arası veterinerlik laboratuvarlarının bir parçası olarak ve ayrıca bölgesel veterinerlik laboratuvarlarının yapısında düzenlenmiştir. Ayrıca sıhhi ve epidemiyolojik gözetim merkezlerinde, bulaşıcı hastalık hastanelerinde, genel hastanelerde, bazı özel hastanelerde (örneğin, tüberküloz, romatoloji, dermatoveneroloji) ve polikliniklerde organize edilirler. Bakteriyolojik laboratuvarlar, uzmanlaşmış araştırma kurumlarının bir parçasıdır. ESS'ye göre etin gıda uygunluk derecesini doğrulamak veya oluşturmak için bakteriyolojik laboratuvarlar sürekli olarak kullanılmaktadır.

Bakteriyolojik laboratuvarlarda çalışmanın nesneleri şunlardır:

1. Vücuttan deşarj: idrar, dışkı, balgam, irin ve ayrıca kan, patolojik ve kadavra materyali.

2. Dış ortamın nesneleri: su, hava, toprak, envanter kalemlerinden arınma, yem, çiftlik hayvanlarının kesiminden elde edilen teknolojik hammaddeler.

3. Gıda amaçlı uygunluk açısından değerlendirilmesi gereken gıda ürünleri, et ve et ürünleri numuneleri, süt ve süt ürünleri.

Bakteriyolojik laboratuvar odası ve işyeri ekipmanları

Mikrobiyolojik çalışmanın özgüllüğü, laboratuvar için ayrılan odanın oturma odalarından, gıda bloklarından ve diğer temel olmayan endüstriyel tesislerden izole edilmesini gerektirir.

Bakteriyolojik laboratuvar şunları içerir: bakteriyolojik araştırmalar için laboratuvar odaları ve yardımcı odalar; atık malzemenin ve kontamine kapların dekontaminasyonu için otoklav veya sterilizasyon; bulaşık yıkamak için donatılmış yıkama; bakteriyolojik mutfak - besin ortamının hazırlanması, şişelenmesi, sterilizasyonu ve depolanması için; deney hayvanlarını tutmak için vivaryum; yedek reaktiflerin, aletlerin, ekipmanların ve ev eşyalarının saklanması için malzeme.

Listelenen hizmet odaları, bağımsız yapısal birimler olarak, büyük bakteriyolojik laboratuvarların bir parçasıdır. Küçük laboratuvarlarda bakteriyolojik mutfak ve sterilizasyon mutfağı bir odada birleştirilir; deney hayvanlarını tutmak için özel bir oda yoktur.

Personele yönelik tehlike derecesine göre, mikrobiyoloji laboratuvarlarının binaları 2 bölgeye ayrılmıştır:

I. "Bulaşıcı" alan - bir laboratuvarda patojenik biyolojik ajanların işlendiği ve depolandığı, personelin uygun tipte koruyucu giysi giydiği bir oda veya bir grup oda.

II. "Temiz" bölge - biyolojik materyalle çalışmanın yapılmadığı, personelin kişisel kıyafet giydiği tesisler.

Tüm bakteriyolojik çalışmaların yapıldığı laboratuvar odalarının altında en aydınlık, ferah odalar tahsis edilmiştir. Yerden 170 cm yükseklikteki bu odaların duvarları açık renklerde yağlı boya ile boyanmış veya fayanslarla kaplanmıştır. Zemin relin veya muşamba ile kaplıdır. Bu tür bir kaplama, odayı temizlerken dezenfektan solüsyonları kullanmanıza izin verir.

Her odada sıhhi tesisatlı bir lavabo ve bir şişe dezenfektan solüsyonu için bir raf bulunmalıdır.

Odalardan birinde camlı bir kutu bulunur - aseptik koşullarda çalışmak için bir giriş holü (ön kutu) bulunan izole bir oda. Kutuya ekinler için bir masa koydular, bir tabure, işyerinin üzerine bakteri öldürücü lambalar monte edildi. Antrede steril materyalin saklanması için bir dolap yerleştirilmiştir. "Bulaşıcı" bölgenin binalarının pencereleri ve kapıları hava geçirmez olmalıdır. "Bulaşıcı" alandan mevcut egzoz havalandırması, diğer havalandırma sistemlerinden izole edilmeli ve ince hava filtreleri ile donatılmalıdır.

Laboratuvar odası, çalışma için gerekli ekipman, araç-gereç, boya ve reaktiflerin saklanması için laboratuvar tipi masalar, dolaplar ve raflar ile donatılmıştır.

Bir bakteriyolog ve laboratuvar asistanının işyerinin doğru organizasyonu iş için çok önemlidir. Laboratuvar masaları pencerelerin yanına kurulur. Bunları yerleştirirken, ışığın çalışanın önüne veya yanına, tercihen sol tarafına, ancak hiçbir durumda arkadan düşmemesini sağlamaya çalışmanız gerekir. Çalışma için dağınık ışığa bile ihtiyaç duyulduğundan, analiz odalarının, özellikle mikroskopi için, kuzeye veya kuzeybatıya yönelik pencereleri olması arzu edilir. Çalışma masalarının yüzey aydınlatması 500 lux olmalıdır. Dezenfeksiyon kolaylığı için laboratuvar masalarının yüzeyi plastikle kaplanır veya demirle kaplanır. Her laboratuvar çalışanına 150x60 cm ölçülerinde ayrı bir çalışma yeri atanır.

Tüm işyerleri, listesi Tablo 1'de verilen günlük bakteriyolojik çalışma için gerekli öğelerle donatılmıştır.

Tablo 1.

Bakteriyolojik çalışma için gerekli malzemeler

Öğe adı	yaklaşık miktar
1. Renklendirme için bir dizi boya ve reaktif
2. Slaytlar	25-50
3. Kapak camları	25-50
4. Delikli bardaklar	5-10
5. Test tüpü rafı
6. Bakteri döngüsü
7. Cam spatulalar
8. Metal spatulalar
9. Bir kavanoz pamuk
10. 1, 2, 5, 10 ml dereceli pipetler	Her cildin 25'i
11. Pastör pipetleri	25-50
12. Cımbız, makas, neşter	1'e göre
13. Dezenfektan solüsyonlu kaplar
14. Aydınlatıcılı mikroskop
15. Büyüteç 5 ´
16. Daldırma sıvıyağlı tereyağı kabı
17. Filtre kağıdı	3-5 yaprak
18. Pipetler için bir kavanoz dezenfektan solüsyonu
19. Alkol veya gaz ocağı
20. Renklendirme müstahzarları için kurulum
21. 1 veya 2 Dakikalık Kum Saati	1'e göre
22. Lastik borulu armut
23. Cam üzerine kalem
24. Bir kavanoz alkollü bez
25. Gerekli steril kaplar	-

dezenfeksiyon

Dezenfeksiyon, çevresel nesnelerdeki mikroorganizmaların yok edilmesidir.

Mikrobiyoloji laboratuvarlarında dezenfeksiyon önlemleri çok yaygın olarak kullanılmaktadır. Enfeksiyöz materyalle çalışmayı bitirirken, bakteriyolojik laboratuvar çalışanları ellerin ve işyerinin önleyici dezenfeksiyonunu gerçekleştirir.

Harcanan patolojik materyal (dışkı, idrar, balgam, çeşitli sıvı türleri, kan) kanalizasyona atılmadan önce dezenfekte edilir.

Patolojik materyal veya mikrop kültürü ile kontamine olmuş dereceli ve pastör pipetler, cam spatulalar ve metal aletler kullanımlarından hemen sonra her işyerinde masa üzerinde bulunan dezenfektan solüsyonlu cam kavanozlara indirilir.

Çalışmada kullanılan lamlar ve lameller de zorunlu dezenfeksiyona tabi tutulur, çünkü sabit ve lekeli bir yaymada bile bazen canlı mikroorganizmalar kalır ve bu da laboratuvar içi kontaminasyon kaynağı olabilir. Sadece içinde mikroorganizmaların büyüdüğü bulaşıklara dezenfektan uygulanmaz. Metal tanklara veya bixlere katlanır, kapatılır ve otoklava teslim edilir.

Bir dezenfektanın seçimi, solüsyonunun konsantrasyonu, dezenfektan miktarı ile dezenfekte edilecek malzeme arasındaki oran ve ayrıca dezenfeksiyon süresinin süresi, öncelikle dikkate alınarak spesifik koşullara bağlı olarak ayarlanır. hepsinden önemlisi, dezenfekte edilecek mikropların stabilitesi, beklenen bulaşma derecesi, bulundukları malzemenin bileşimi ve kıvamı. .

Enfeksiyöz materyalle çalıştıktan sonra ve cilt ile temas ettiğinde ellerin dezenfeksiyonu. Enfeksiyöz materyal ile çalışmanın sonunda eller profilaktik olarak dezenfekte edilir. Bir pamuk top veya gazlı bez %1 kloramin çözeltisi ile nemlendirilir, önce sol sonra sağ el şu sırayla silinir: elin üstü, avuç içi yüzeyi, parmaklar arası boşluklar, tırnak yatakları. Böylece, önce en az kontamine olan bölgeler tedavi edilir, ardından cildin en yoğun şekilde kontamine olan bölgelerine geçilir. Arka arkaya iki pamuklu çubukla ellerinizi 2 dakika silin. Eller, patojenik bir mikrop kültürü veya patolojik materyal ile kontamine olduğunda, önce derinin kontamine olmuş bölgeleri dezenfekte edilir. Bu amaçla, 3-5 dakika boyunca% 1 kloramin çözeltisi ile nemlendirilmiş pamuk yünü ile örtülür, ardından pamuk, atık madde içeren bir tank veya kovaya atılır ve eller aynı şekilde ikinci bir pamuklu çubukla muamele edilir. Önleyici dezenfeksiyon sırasında olduğu gibi. Kloramin tedavisinden sonra eller ılık su ve sabunla yıkanır. Spor oluşturan bakterilerle çalışırken eller %1 aktif kloramin ile tedavi edilir. Enfeksiyöz materyal ellere bulaşırsa, dezenfektanın maruz kalma süresi 5 dakikaya çıkarılır.

Sterilizasyon

Sterilizasyon, dezenfeksiyondan farklı olarak, sterilize edilen nesnedeki tüm bitkisel ve sporlu, patojenik ve patojenik olmayan mikroorganizmaların yok edilmesini içerir. Sterilizasyon çeşitli şekillerde gerçekleştirilir: buhar, kuru sıcak hava, kaynatma, filtrasyon vb. Bir veya başka bir sterilizasyon yönteminin seçimi, sterilize edilen nesnenin mikroflorasının kalitesi ve özelliklerine göre belirlenir.

Laboratuvar ekipmanlarının hazırlanması ve sterilizasyonu

Sterilizasyondan önce laboratuvar cam malzemeleri yıkanır ve kurutulur. Test tüpleri, şişeler, şişeler, şilteler ve mataralar pamuk-tül tıpalarla kapatılır. Her kaptaki (test tüpleri hariç) tıpaların üzerine kağıt kapaklar takın.

Lastik, mantar ve cam tıpalar ayrı bir poşette sterilize edilerek tabağın boynuna bağlanır. Petri kutuları, her biri 1-10 parça olacak şekilde kağıda sarılarak sterilize edilir. Pastör pipetleri, 3-15 adet. ambalaj kağıdına sarılmış. Her pipetin üst kısmına malzemenin ortama girmesini önlemek için bir parça pamuk konur. Pipetleri sararken kılcal damarların kapalı uçlarının kırılmamasına büyük özen gösterilmelidir. Çalışma sırasında pipetler üst uçlarından paketten çıkarılır.

Dereceli pipetlerin üst kısmına Pasteur pipetlerinde olduğu gibi güvenlik pamuğu yerleştirilir ve kalın kağıda sarılır, önceden 2-2,5 cm genişliğinde ve 50-70 cm uzunluğunda şeritler halinde kesilir ve şerit masanın üzerine yerleştirilir. , sol ucu katlanır ve pipetin ucuna sarılır, ardından pipeti çevirerek etrafına bir kağıt bant sarın. Kağıdın açılmasını önlemek için karşı ucu bükülür veya yapıştırılır. Sarılan pipetin hacmi kağıda yazılır. Durumlarda dereceli pipetler içlerinde sterilize edilir.

Laboratuar kaplarını sterilize edin

a) sırasıyla 1 saat ve 150 dakika boyunca 180°C ve 160°C'de kuru ısı.

b) 1,5 atm basınçta bir otoklavda. spor mikroflorasının yok edilmesi için 60 dakika içinde - 2 atm'de 90 dakika.

Şırıngaların sterilizasyonu. Şırıngalar demonte olarak sterilize edilir: silindir ve piston ayrı ayrı %2 sodyum bikarbonat solüsyonunda 30 dakika süreyle. Sporlu mikroflora ile çalışırken sterilizasyon otoklavda 132±2°C'de (2 atm.) 20 dakika, 126±2°C'de (1.5 atm.) - 30 dakika gerçekleştirilir. Sterilize edilmiş şırınga soğuduktan sonra toplanır, silindire bir piston sokulur, mandrel çıkarıldıktan sonra bir iğne takılır. İğne, silindir ve piston bir şırınga ile birlikte sterilize edilen cımbızla alınır.

Metal aletlerin sterilizasyonu. Metal aletler (makas, neşter, cımbız vb.) paslanmayı ve keskinlik kaybını önleyen %2'lik sodyum bikarbonat solüsyonunda sterilize edilir. Solüsyona daldırılmadan önce neşter ve makas bıçaklarının pamuk yünü ile sarılması tavsiye edilir.

Bakteri döngülerinin sterilizasyonu. Platin veya nikrom telden yapılmış bakteri özeleri, bir alkol veya gaz brülörünün alevinde sterilize edilir. Bu sterilizasyon yöntemine kalsinasyon veya alevlendirme denir.

Yatay bir konumdaki döngü, yanmış patojenik malzemenin sıçramaması için brülör alevinin en alt, en soğuk kısmına getirilir. Yandıktan sonra ilmek dikey konuma aktarılır, telin önce alt, sonra üst kısmı kızdırılır ve ilmek tutucu yakılır. Ateşleme bir bütün olarak 5-7 saniye sürer.

Kağıt, gazlı bez ve pamuğun sterilizasyonu ve sterilizasyonu için hazırlık. Pamuk yünü, gazlı bez, filtre kağıdı, sıcaklığın bir termometre ile gösterildiği andan itibaren bir saat boyunca 160 ° C sıcaklıkta kuru ısı fırınında veya 1 atm basınçta otoklavda sterilize edilir. 30 dakika içinde.

Sterilizasyondan önce kağıt ve gazlı bez parçalara ayrılır ve pamuk yünü istenilen büyüklükte top veya çubuk şeklinde sarılır. Bundan sonra, her tür malzeme ayrı ayrı, bir veya daha fazla parça kalın kağıda sarılır. Paket kırılırsa sterilitesi bozulduğu için sterilize edilen malzemenin tekrar sterilize edilmesi gerekir.

Eldivenlerin ve diğer kauçuk ürünlerin sterilizasyonu. Mikropların vejetatif formu ile kontamine olmuş kauçuk ürünler (eldiven, tüp vb.) %2'lik sodyum bikarbonat solüsyonunda kaynatılarak veya 30 dakika buhar akıtılarak sterilize edilir; spor taşıyan mikroflora ile kontamine olduğunda, otoklavda 1.5-2 atm basınçta. 30 veya 20 dakika içinde. Sterilizasyondan önce, lastik eldivenlerin yapışmasını önlemek için içine ve dışına talk serpilir. Eldivenlerin arasına gazlı bez serilir. Her bir eldiven çifti ayrı ayrı gazlı bezle sarılır ve bu formda bisikletlere yerleştirilir.

Mikropların patojenik kültürlerinin sterilizasyonu. Daha fazla çalışma için gerekli olmayan mikrobiyal kültürleri içeren test tüpleri ve kaplar metal bir tanka yerleştirilir, kapağı kapatılır ve sterilizasyon için teslim edilir. Patojenik mikrop kültürleri, bitkisel formlar, 1 atm basınçta 30 dakika boyunca bir otoklavda öldürülür. Sterilizasyon için tankların otoklava teslimi, teslim alınması karşılığında özel olarak belirlenmiş bir kişi tarafından gerçekleştirilir. Sterilizasyon modu özel bir dergiye kaydedilir. Patojenite grup I ve II'deki mikropların kültürlerinin yanı sıra bu gruplara atanan patojenler tarafından enfekte olan veya enfekte olduğundan şüphelenilen materyalleri yok ederken, atık materyalli tanklar, eşlik eden bir kişinin varlığında yüksek kenarlı metal tepsilere aktarılır. bulaşıcı malzeme ile çalışmasına izin verilir.

sterilizasyon türleri

Kaynatılarak sterilizasyon. Kaynatma yoluyla sterilizasyon bir sterilizatörde gerçekleştirilir. Musluk suyu kireç oluşturduğundan sterilizatöre damıtılmış su dökülür. (Cam nesneler soğuğa, metal nesneler sodyum bikarbonat ilavesiyle sıcak suya daldırılır). Sterilize ürünler 30-60 dakika kısık ateşte kaynatılır. Sterilizasyonun başlangıcı, sterilizatörde suyun kaynama anı olarak kabul edilir. Kaynatma sonunda steril cımbızla aletler alınır ve kalan maddelerle birlikte kaynatılır.

Kuru ısı sterilizasyonu. Kuru ısı ile sterilizasyon, bir Pasteur fırınında gerçekleştirilir. Sterilizasyon için hazırlanan malzeme duvarlarla temas etmeyecek şekilde raflara yerleştirilir. Dolap kapatılır ve bundan sonra ısıtma açılır. Sterilizasyon süresi 150°C sıcaklıkta 2 saat, 165°C - 1 saat, 180°C - 40 dakika, 200°C - 10-15 dakika (170°C kağıt ve pamuk dönüşte) sarı ve daha yüksek bir sıcaklıkta kömürleşmiş). Sterilizasyonun başlangıcı, fırın içindeki sıcaklığın istenilen yüksekliğe ulaştığı andır. Sterilizasyon süresinin sonunda fırın kapatılır ancak kabine giren soğuk hava sıcak tabaklarda çatlamalara neden olabileceğinden tamamen soğumadan kabin kapakları açılmaz.

Basınç altında buhar sterilizasyonu. Basınç altında buhar sterilizasyonu bir otoklavda gerçekleştirilir. Otoklav, iç içe geçmiş iki kazan, bir mahfaza ve bir kapaktan oluşur. Dış kazana su-buhar odası, iç kısma sterilizasyon odası denir. Buhar, bir buhar kazanında üretilir. Sterilize edilecek malzeme iç kazan içerisine yerleştirilir. Sterilizasyon kazanının üst kısmında buhar odasından çıkan buharın geçtiği küçük delikler bulunmaktadır. Otoklavın kapağı mahfazaya hermetik olarak vidalanmıştır. Listelenen ana parçalara ek olarak, otoklav çalışmasını düzenleyen bir dizi parçaya sahiptir: bir basınç göstergesi, bir su göstergesi camı, bir emniyet valfi, egzoz, hava ve yoğuşma suyu muslukları. Basınç ölçer, sterilizasyon haznesinde oluşan basıncı belirlemek için kullanılır. Normal atmosferik basınç (760 mm Hg. Art.) sıfır olarak alınır, bu nedenle boşta bir otoklavda, manometre iğnesi sıfırdadır. Manometre okumaları ile sıcaklık arasında belirli bir ilişki vardır (Tablo 2).

Tablo 2.

Manometre okumalarının oranı ve suyun kaynama noktası

Gösterge ölçeğindeki kırmızı çizgi, otoklavda izin verilen maksimum çalışma basıncını gösterir. Emniyet valfi, aşırı basınç oluşumuna karşı koruma sağlar. Önceden belirlenmiş bir basınca, yani sterilizasyonun gerçekleştirileceği basınca ayarlanmıştır, basınç göstergesi oku çizginin ötesine geçtiğinde, otoklav valfi otomatik olarak açılır ve fazla buharı serbest bırakır, böylece basıncın daha fazla yükselmesini yavaşlatır. .

Otoklavın yan duvarında buhar kazanındaki su seviyesini gösteren bir gösterge camı bulunmaktadır. Su göstergesi camının tüpünde, su buharı odasında izin verilen alt ve üst su seviyelerini sırasıyla gösteren alt ve üst olmak üzere iki yatay çizgi uygulanır. Hava musluğu, zayıf bir ısı iletkeni olan hava sterilizasyon rejimini ihlal ettiğinden, sterilizasyonun başlangıcında sterilizasyon ve su-buhar odalarındaki havayı çıkarmak için tasarlanmıştır. Otoklavın alt kısmında, sterilize edilmiş malzemenin ısıtılması sırasında oluşan yoğuşmadan sterilizasyon odasını serbest bırakmak için bir yoğuşma musluğu bulunmaktadır.

Otoklav kuralları. Çalışmaya başlamadan önce otoklavı ve aletleri inceleyin. Otomatik buhar kontrollü otoklavlarda, su buharı odasının elektrovakum manometresindeki oklar sterilizasyon moduna göre ayarlanmıştır: alttaki ok 0,1 atm'ye ayarlanmıştır. alt, üst - 0,1 atm. çalışma basıncının üzerinde, su-buhar odası ölçüm camının üst işaretine kadar suyla doldurulur. Su ile doldurma süresi boyunca, kazandan serbest havanın çıkması için buharın odaya girdiği boru üzerindeki vana açık tutulur. Otoklavın sterilizasyon haznesi sterilize edilecek malzeme ile doldurulur. Bundan sonra, otoklavın kapağı (veya kapısı) kapatılır, merkezi bir kilit veya cıvatalarla sıkıca sabitlenir; bozulmayı önlemek için cıvatalar çapraz (çap olarak) vidalanır. Ardından, buhar kaynağını sterilizasyon odasına bağlayan boru üzerindeki valfi kapatarak ısıtma kaynağını (elektrik akımı, buhar) açın. Buharlaşmanın başlaması ve su-buhar odasında basınç oluşmasıyla birlikte, bir tasfiye gerçekleştirilir (sterilizasyon kazanından hava çıkarılır). Havanın uzaklaştırılma yöntemi, otoklavın tasarımı ile belirlenir. İlk başta, hava ayrı kısımlar halinde dışarı çıkar, ardından havanın sterilizasyon odasından tamamen atıldığını gösteren, eşit ve sürekli bir buhar akışı belirir. Hava tahliye edildikten sonra valf kapatılır ve sterilizasyon haznesinde kademeli bir basınç artışı başlar.

Sterilizasyonun başlangıcı, manometrenin ayarlanan basıncı gösterdiği andır. Bundan sonra, otoklav içindeki basınç gerekli süre boyunca aynı seviyede kalacak şekilde ısıtma yoğunluğu azaltılır. Sterilizasyon süresinin sonunda ısıtma durdurulur. Sterilizasyon odasına buhar sağlayan boru hattındaki valfi kapatın ve odadaki buhar basıncını azaltmak için kondens (aşağı doğru) borusundaki valfi açın. Manometre iğnesi sıfıra düştükten sonra sıkıştırma cihazlarını yavaşça gevşetin ve otoklavın kapağını açın.

Sterilizasyonun sıcaklığı ve süresi, sterilize edilecek malzemenin kalitesi ve bulaştığı mikroorganizmaların özelliklerine göre belirlenir.

Sterilizasyon odasındaki sıcaklık kontrolü, bakteriyolojik testler kullanılarak periyodik olarak gerçekleştirilir. Biyotestler, Merkezi Epidemiyoloji Servisi'nin bakteriyolojik laboratuvarları tarafından üretilir. Bu testler başarısız olursa otoklavın teknik durumu kontrol edilir.

Buhar sterilizasyonu. Sıvı buharla sterilizasyon, bir Koch sıvı buhar aparatında veya vidasız kapak ve açık çıkış musluğu olan bir otoklavda gerçekleştirilir. Koch aparatı, çift dipli metal içi boş bir silindirdir. Üst ve alt plakalar arasındaki boşluk 2/3 su ile doldurulur (sterilizasyondan sonra kalan suyu boşaltmak için bir musluk vardır). Cihazın kapağının ortasında termometre için bir delik ve buharın çıkması için birkaç küçük delik vardır. Sterilize edilecek malzeme, buharla en fazla temasını sağlayacak şekilde aparatın haznesine gevşek bir şekilde yüklenir. Sterilizasyonun başlangıcı, suyun kaynadığı ve buharın sterilizasyon odasına girdiği andan itibaren geçen zamandır. Bir sıvı buhar aparatında, esas olarak, özellikleri 100°C'nin üzerindeki sıcaklıklarda değişen besleyici ortamlar sterilize edilir. 100 °C sıcaklıkta tek bir ısıtma tam dezenfeksiyon sağlamadığı için akan buharla sterilizasyon tekrarlanmalıdır. Bu yönteme fraksiyonel sterilizasyon denir: Sterilize edilen malzemenin akan buharla işlenmesi 3 gün boyunca günde 30 dakika gerçekleştirilir. Sterilizasyonlar arasındaki aralıklarda, sporların sonraki ısıtma sırasında ölen vejetatif formlara dönüşmesi için malzeme oda sıcaklığında tutulur.

Tyndalizasyon. Tyndalization, Tyndall tarafından önerilen, 100°C'nin altındaki sıcaklıkların kullanıldığı fraksiyonel sterilizasyondur. Sterilize edilecek malzemenin 5 gün 60-65°C veya 3 gün 70-80°C sıcaklıkta 1 saat termostatlı su banyosunda ısıtılması gerçekleştirilir. Isıtmalar arasında, işlenen malzeme, sonraki ısıtmalar sırasında ölen sporların bitkisel formlara dönüşmesi için 25°C'lik bir sıcaklıkta tutulur. Tyndallization, protein içeren besin ortamını kurutmak için kullanılır.

Bakteriyel ultra filtrelerle mekanik sterilizasyon. Bakteri filtreleri, sıvıyı içindeki bakterilerden arındırmak için kullanıldığı gibi bakterileri virüslerden, fajlardan ve ekzotoksinlerden ayırmak için de kullanılır. Virüsler bakteriyel filtreler tarafından tutulmaz ve bu nedenle ultrafiltrasyon, kelimenin kabul edilen anlamıyla sterilizasyon olarak kabul edilemez. Ultrafiltrelerin üretimi için bakterileri yakalayabilen ince gözenekli malzemeler (kaolin, asbest, nitroselüloz vb.) kullanılır.

Asbest filtreleri (Seitz filtreleri), küçük ve büyük hacimli sıvıları filtrelemek için 3-5 mm kalınlığında ve 35 ve 140 mm çapında asbest plakalarıdır. Ülkemizde asbest filtreleri askıda kalan partikülleri tutan fakat geçen bakterileri tutan “F” (filtreleyen) ve daha yoğun, bakterileri tutan “SF” (sterilize eden) olmak üzere iki sınıf olarak üretilmektedir. Asbest filtreleri kullanılmadan önce filtre aparatlarına takılır ve bunlarla birlikte otoklavda sterilize edilir. Asbest filtreleri bir kez kullanılır. Membran ultrafiltreler nitroselülozdan yapılmıştır ve 35 mm çapında ve 0,1 mm kalınlığında beyaz disklerdir.

Bakteriyel filtreler gözenek boyutuna göre farklılık gösterir ve seri numaralarıyla belirtilir (Tablo 3).

Tablo 3

Bakteriyel filtreler

Membran filtreler kullanımdan hemen önce kaynatılarak sterilize edilir. Filtreler, bükülmelerini önlemek için 50-60°C'ye ısıtılmış distile suya yerleştirilir, 30 dakika kısık ateşte kaynatılır, 2-3 kez su değiştirilir. Sterilize edilmiş filtreler, zarar görmemesi için alevli ve soğutulmuş cımbızlarla sterilizatörden çıkarılır.

Sıvıları filtrelemek için bakteri filtreleri, özel filtre cihazlarına, özellikle Seitz filtresine monte edilir.

2 parçadan oluşur: silindir veya huni şeklindeki üst kısım ve metal bir ağdan veya üzerinde bir membran veya asbest filtresi bulunan temiz bir seramik plakadan yapılmış filtre tablası ile aparatın alt destek kısmı yerleştirilmiş. Aparatın destekleyici kısmı huni şeklinde olup, sivrilen kısmı Bunsen şişesinin boynundaki lastik tıpaya yerleştirilmiştir. Çalışır vaziyette cihazın üst kısmı alt kısma vidalarla sabitlenmiştir. Filtrasyona başlamadan önce tesisatın muhtelif yerlerinin birleşim yerleri parafinle doldurularak sızdırmazlık sağlanır. Şişenin çıkış borusu, kalın duvarlı bir lastik boru ile bir su jeti, yağ veya bisiklet pompasına bağlanır. Bundan sonra, filtre edilen sıvı aparatın silindirine veya hunisine dökülür ve pompa çalıştırılarak alıcı kapta bir vakum oluşturulur. Ortaya çıkan basınç farkı sonucunda filtre edilen sıvı, filtrenin gözeneklerinden geçerek alıcıya geçer. Mikroorganizmalar filtre yüzeyinde kalır.

Smearların hazırlanması

Mikroorganizmaları renkli bir formda incelemek için cam bir lam üzerine bir leke yapılır, kurutulur, sabitlenir ve sonra boyanır.

Test materyali, yağı iyice alınmış bir cam slaydın yüzeyi üzerine ince bir tabaka halinde yayılır.

Smearlar mikrop kültürlerinden, patolojik maddelerden (balgam, irin, idrar, kan vb.) ve cesetlerin organlarından hazırlanır.

Smear hazırlama tekniği, çalışılan materyalin doğasına göre belirlenir.

Sıvı besin ortamı ile mikrobiyal kültürlerden ve sıvı patolojik materyalden (idrar, beyin omurilik sıvısı, vb.) smear hazırlanması. Test sıvısından küçük bir damla, bir cam lam üzerine bir bakteri özesiyle birlikte uygulanır ve özeler, madeni para çapında bir daire şeklinde düzgün bir tabaka halinde dairesel bir hareketle dağıtılır.

Kan yaymalarının hazırlanması. Cam lamın uçlarından birine yakın bir yere bir damla kan damlatılır. Obje camından daha dar olması gereken ikinci - cilalı - cam birincisinin üzerine 45° açıyla yerleştirilerek kan damlasına temas edinceye kadar getirilir. Kan cilalı kenar boyunca yayıldıktan sonra, cam sağdan sola kaydırılır ve kan ince bir tabaka halinde camın tüm yüzeyine eşit olarak dağıtılır. Darbenin kalınlığı camlar arasındaki açıya bağlıdır: açı ne kadar keskinse darbe o kadar incedir. Düzgün hazırlanmış bir yayma, açık pembe bir renge ve baştan sona aynı kalınlığa sahiptir.

Kalın bir damla hazırlanması. Pasteur pipeti ile cam lamın ortasına bir damla kan damlatılır veya cam doğrudan çıkıntılı kan damlasına uygulanır. Bardağa uygulanan kan, bir bakteri döngüsü ile bulaşır, böylece ortaya çıkan lekenin çapı bir kuruş madeni paranın boyutuna karşılık gelir. Bardak kan kuruyana kadar yatay konumda bırakılır. "Kalın damla" içindeki kan düzensiz bir şekilde dağılarak düzensiz bir kenar oluşturur.

Viskoz bir malzemeden (balgam, irin) smear hazırlanması. Dar kenara daha yakın bir cam lam üzerinde biriken balgam veya irin başka bir lam ile kapatılır. Camlar hafifçe birbirine bastırılır.

Bundan sonra, camların serbest uçları her iki elin 1 ve 2 parmakları tarafından yakalanır ve zıt yönlerde açılır, böylece hareket ederken her iki cam da birbirine sıkıca oturur. Geniş bir alanı kaplayan, homojen dağılmış malzeme ile smear elde edilir.

Yoğun besleyici ortam içeren kültürlerden smear hazırlanması. Temiz, iyi yağdan arındırılmış bir cam lamın ortasına bir damla su uygulanır, içine incelenen az miktarda mikrobiyal kültürle birlikte bir bakteri döngüsü sokulur, böylece sıvı damlası biraz bulanık hale gelir. Daha sonra öze üzerindeki fazla mikrobiyal materyal alevde yakılır ve yukarıdaki yönteme göre smear hazırlanır.

Organ ve dokulardan smear hazırlanması. Dezenfeksiyon amacıyla cımbızın ısıtılmış dalları ile organın yüzeyi dağlanır, buradan bir kesi yapılır ve iki cam lam arasına yerleştirilen sivri uçlu makasla derinliğinden küçük bir doku parçası kesilir. . Ardından, irin ve balgamdan bir smear hazırlarken olduğu gibi devam edin. Organın dokusu yoğun ise kesi derinliğinden neşter ile kazıma yapılır. Kazıma ile elde edilen malzeme, camın yüzeyine ince bir tabaka halinde neşter veya bakteri halkası ile yayılır.

Doku elemanlarının ve içindeki mikroorganizmaların göreceli konumunu incelemek için smear yapılır. Bunu yapmak için, organın ortasından kesilen küçük bir doku parçası cımbızla yakalanır ve kesilen yüzeyle arka arkaya birkaç kez cam slayta uygulanır, böylece bir dizi smear-baskı elde edilir.

Smearların kurutulması ve fiksasyonu. Cam lam üzerinde hazırlanan smear havada kurutulur ve tamamen kuruduktan sonra fikse edilir. Sabitleme sırasında, leke cam slayt yüzeyine sabitlenir ve bu nedenle müstahzarın müteakip boyaması sırasında mikrobiyal hücreler yıkanmaz. Ek olarak, ölü mikrobiyal hücreler canlı olanlardan daha iyi boyanır.

Yüksek sıcaklığın bir mikrobiyal hücre üzerindeki etkisine dayanan fiziksel bir tespit yöntemi ile protein pıhtılaşmasına neden olan maddelerin kullanımını içeren kimyasal yöntemler arasında bir ayrım yapılır. I-II patojenite gruplarının patojenlerini içeren yaymaları alev üzerinde sabitlemek imkansızdır.

Sabitlemenin fiziksel yolu. Hazırlanan cam slayt cımbızla veya sağ elin I ve II parmakları ile kaburgaların arkasından yukarı doğru ve bek alevinin üst kısmı üzerinde 2-3 kez yumuşak bir hareketle alınır. Tüm sabitleme işlemi 2 saniyeden fazla sürmemelidir. Fiksasyonun güvenilirliği aşağıdaki basit teknikle kontrol edilir: cam lamın lekesiz yüzeyi sol elin arka yüzeyine uygulanır. Smearın uygun şekilde sabitlenmesiyle cam sıcak olmalı ancak yanma hissine neden olmamalıdır.

Kimyasal fiksasyon. Tablo 4'te gösterilen kimyasallar ve bileşikler ayrıca lekeleri sabitlemek için kullanılır.

Tablo 4

Kimyasal fiksasyon için maddeler

Kurutulmuş smear içeren bir slayt, bir sabitleme maddesi içeren bir şişeye daldırılır ve ardından havada kurutulur.

Boyama vuruşları

Smear boyama tekniği. Lekeleri renklendirmek için, A.I. tarafından önerilen boya solüsyonları veya boyama kağıdı kullanılır. Mavi. Hazırlama kolaylığı, kullanım kolaylığı ve ayrıca boyama kağıdını süresiz olarak uzun süre saklama olasılığı, çeşitli renklendirme yöntemlerinde geniş kullanımlarının temelini oluşturdu.

Boyama kağıdı ile boyama vuruşları. Kuruyan ve sabitlenen müstahzara bir kaç damla su damlatılır, 2x2 cm ebadında renkli kağıtlar yerleştirilir Tüm boyama süresi boyunca kağıt nemli kalmalı ve cam yüzeye tam oturmalıdır. Kuruturken, kağıt ayrıca su ile nemlendirilir. Smear boyama süresi boyama yöntemi ile belirlenir. Boyama sonunda kağıt cımbızla dikkatlice çıkarılır ve yayma musluk suyu ile yıkanarak hava veya filtre kağıdında kurutulur.

Smearların boya solüsyonları ile boyanması. Kurutulmuş ve fikse preparasyona tüm yaymayı kaplayacak miktarda bir pipet ile boya uygulanır. Smearları konsantre boya çözeltileriyle (Ziehl karbolik fuksin, karbolik gentian veya kristal viyole) boyarken, boyama, boya parçacıklarını tutan filtre kağıdı aracılığıyla gerçekleştirilir: sabit bir smear üzerine bir filtre kağıdı şeridi yerleştirilir ve üzerine bir boya solüsyonu dökülür BT.

Mikroskobik inceleme için hazırlanan smearler kurutulur ve sabitlenir, boyanır. Boyama basit ve karmaşıktır. Basit renklendirme, herhangi bir boyanın belirli bir süre boyunca bir lekeye uygulanmasından oluşur. Çoğu zaman, basit renklendirme için alkol-su (1:10) Pfeiffer fuksin, Leffler'in metilen mavisi ve safranin kullanılır. Asidik bir boya olan eozin, yalnızca hücrelerin sitoplazmasını boyamak ve arka planı renklendirmek için kullanılır. Asit fuksin, bakterileri boyamak için tamamen uygun değildir.

lentachel.ru'dan fotoğraf

Sadece yüz yıl önce, bilimsel araştırmalar sırasında enfeksiyon neredeyse kaçınılmaz kabul ediliyordu. Pek çok bilim insanı, doğası pek bilinmeyen mikropları ve bakterileri inceleyerek vücutlarını ölüm riskine soktu. Bugün, bizi çevreleyen tehlikeli mikroorganizmaların çoğu tanımlanmış ve incelenmiştir, ayrıca bakteriyolojik laboratuvarlar için kullanımı% 99 olasılıkla araştırmacıları herhangi bir profesyonel riskten koruyan özel tıbbi cihazlar bulunmaktadır.

Bakteriyolojik laboratuvar çalışanlarının çalıştığı tüm nesneler patojenik mikroflora ile doyurulur. Odada sağlıklı bir ortam sağlamak, kontamine malzeme ile doğrudan teması önlemek için bariyer ve antimikrobiyal özellikleri geliştirilmiş mobilya, giysi ve gereçler kullanılır.

Hermetik olarak kapatılmış camlı ve metal dolap ve kutular, dezenfeksiyon, sterilizasyon ve otoklav ekipmanları için uygun laboratuvar masaları ve kilitlenebilir buzdolabı, enfekte numuneler üzerinde araştırma yapan kişilerin güvenliğini sağlayan öğelerdir.

Numuneleri saklamak için kullanılan tüm gereçler: şişeler, dereceli beherler, mikropların laboratuvar havasına yayılmasını önlemek için hermetik olarak kapatılmıştır.

Kapların imalatı için özel kırılmaz cam veya yüksek mukavemetli plastik kullanılmaktadır. Çift duvarlar, özel sabit alt şekil, kapaklar, tepsiler ve küvetler üzerindeki kauçuk elemanlar meningokok, streptokok, stafilokok, basil ve klostridia gibi tehlikeli komşuları izole etmek için en iyi koşulları oluşturur.

Araştırmaya başlamadan önce personel özel giysiler giyer: koruyucu önlük, maske, gözlük. Çok tehlikeli maddelerle çalışmak için lastikli önlükler veya su itici emprenyeli özel önlükler kullanılır.

Ultraviyole ışınlayıcılar ve bakterisidal lambalar ile uygun zamanında hava arıtma, kanıtlanmış yıkama modifikasyonlarının kullanımı, tüm çalışanlara eksiksiz bir koruyucu giysi seti temini, genel kabul görmüş bir standarttır ve sapma idari olarak ve ciddi sonuçlar durumunda cezai olarak cezalandırılabilir.

Entegre ekipman ve tüm önleyici tedbirlerin uygulanması, çalışanların sağlığının korunmasına, mesleki morbiditenin azaltılmasına ve yüksek araştırma verimliliği sağlanmasına yardımcı olur: Güvenilir, kanıtlanmış koruyucu ekipman kullanımının kaygıyı azalttığı, daha hızlı ve daha etkili eylemleri teşvik ettiği fark edilmiştir.

bakteriyolojik laboratuvar

Bakteriyolojik laboratuvar 1996 yılında bağımsız bir alt bölüm olarak ayrılmıştır.

Baş - tıp bilimleri adayı, en yüksek kategorideki bakteriyolog Polikarpova Svetlana Veniaminovna

ÖNCELİKLİ FAALİYET ALANLARIMIZ

Bakteriyolojik laboratuvarda aşağıdaki analiz türleri gerçekleştirilir:

Kan (hemokültür) ve beyin omurilik sıvısının bakteriyolojik muayenesi;
- balgam, trakeal aspirat, bronşiyal yıkamaların bakteriyolojik incelemesi;
- çeşitli odaklardan çıkan iltihabın bakteriyolojik muayenesi: tonsillo-farenjit, orta kulak iltihabı, sinüzit, vb.;
- punktatların, efüzyonların, eksüdaların bakteriyolojik incelemesi;
- farenks ve burnun mukoza zarının koşullu patojenik mikroflora için bakteriyolojik muayenesi;
- bakteriüri derecesinin belirlenmesi ile idrarın bakteriyolojik muayenesi;
- şartlı olarak patojenik mikroflora için genital organların akıntısının bakteriyolojik muayenesi;
- ayrılabilir konjonktivanın bakteriyolojik muayenesi;
- patojenik bağırsak florası için dışkı incelemesi;
- dysbacteriosis için dışkıların bakteriyolojik muayenesi;
- anne sütünün bakteriyolojik incelemesi;
- B grubu streptokok antijeninin kalitatif tayini;
- antijenin kalitatif tayini Helikobakter pilori insan dışkısında;
- A ve B toksinlerinin antijeninin kalitatif tayini klostridyum zorlu insan dışkısında;
- izole edilmiş mikroorganizmaların antibiyotiklere duyarlılığının/direncinin değerlendirilmesi.

BAŞARILAR

Bakteriyolojik laboratuvarda, çeşitli biyomateryallerden izole edilen patojenik ve koşullu patojenik mikroorganizmaların izolasyonu, tanımlanması ve antibiyotiklere duyarlılığının belirlenmesine yönelik çalışmalar yapılmaktadır.

Klasik klinik mikrobiyoloji ilkelerine dayanan laboratuvar, moleküler genetik teknolojilerindeki en son gelişmelere dayalı yeni araştırma yöntemleri getirmiştir.

Bakteriyoloji laboratuvarı, modern Rus ve uluslararası standartları karşılayan mikrobiyolojik çalışmalar yapmaktadır.

Laboratuvar personeli her yıl hastane bölümlerinde yatan 10.000'den fazla hastanın, doğumevlerinde 6.000 hasta ve yenidoğanın, CDC ve EAO polikliniklerinde 5.000'den fazla hastanın bakteriyolojik muayenesini yapmakta, yılda 45.000'den fazla mikrobiyolojik analiz yapmaktadır.

Laboratuvar temelinde, "Bir mikrobiyolog, epidemiyolog ve kemoterapistin otomatik çalışma alanı" geliştirildi ve iki program dahil olmak üzere sürekli modernize ediliyor: MİKROBİYOLOJİK İZLEME SİSTEMİ "MİKROB" (CMM). Programlar, hastanenin mikrobiyolojik hizmetinin ana görevlerinin çözülmesine izin verir: yeterli antibiyotik tedavisi reçete etmek için mikrobiyal ortamın ve antibiyotik direnç seviyesinin sürekli izlenmesi ve sağlık hizmetiyle ilişkili enfeksiyon (HAI) vakalarının zamanında tespiti.

Mikrobiyolojik çalışmaların uygun kalitede olmasını sağlamak için laboratuvar çalışmalarına aşağıdakiler dahil edilmiştir:

• Standarda göre kalite yönetim sistemi GOST R ISO 15189-15

Tıbbi laboratuvarlar. Kalite ve yeterlilik için özel gereksinimler”;

• Temel bilgiler Yağsız - Yağsız teknolojiler (Yalın üretim) - kayıpları azaltarak iş kalitesini iyileştirmeyi amaçlayan laboratuvar yönetimine yaklaşımlar: maddi, finansal, geçici;
• Sistem 5S- bir yalın üretim aracı - operasyonları gerçekleştirmek, düzeni, temizliği, doğruluğu korumak, zamandan ve enerjiden tasarruf etmek için en uygun koşulları yaratmak üzere çalışma alanının organizasyonu.

Laboratuvar, 2014 yılından bu yana Orta Asya ve Doğu Avrupa ülkelerinde antibiyotik direncinin kontrolü için uluslararası programa katılıyor. DSÖ(UK NEQAS).Laboratuvar, "Klinik Mikrobiyoloji" (FSVOK) bölümünde uzman laboratuvar olarak laboratuvar araştırmalarının dış kalite değerlendirmesine katılmaktadır.

Uzun yıllardır bakteriyologlar, Moskova sağlık tesisinde orta tıp eğitimi almış çalışanlar için hastane bazında "Klinik Mikrobiyolojide Modern Araştırma Yöntemleri" iyileştirme sertifika döngüleri yürütüyorlar.

YÜKSEK TEKNOLOJİ

• Bulaşıcı hastalıkların tanısında moleküler genetik yöntemlerin tanıtılması - "gerçek zamanlı" polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemi;

• fenotipik ve genotipik yöntemlerle antibakteriyel ilaçlara bakteri direncinin gelişmesi ve yayılmasının ana mekanizmalarının belirlenmesi;

• bulaşıcı ve enflamatuar hastalıkların patojenlerinin etiyolojik teşhisi için immünokromatografik ekspres yöntemlerin (IMCT) kullanılması;

• bakteriyologlar, ilgili doktorlar, klinik farmakologlar için mikroorganizmaların antimikrobiyal ilaçlara duyarlılığını belirleme sonuçlarını yorumlamak ve direnç mekanizmalarını belirlemek için bir elektronik uzman görüşü modülü oluşturulması ve uygulanması.

BİLİMSEL FAALİYET

Birim bünyesinde 2 adet doktora tezi laboratuvarda tamamlanmıştır. Bölüm çalışanları düzenli olarak uluslararası, tüm Rusya, şehir kongrelerinde, konferanslarda, sempozyumlarda ve seminerlerde sunumlar yapmakta, bilimsel ve pratik yayınlarda düzenli olarak yayınlanmaktadır.

Bakteriyoloji laboratuvarı aşağıdakilerle işbirliği yapar:

• FSBI Federal Epidemiyoloji ve Mikrobiyoloji Araştırma Merkezi

onlara. MZRF Fahri Akademisyeni N.F. Gamaleya”;

• Rusya Federasyonu Sağlık Bakanlığı FGAU "Çocuk Sağlığı Bilim Merkezi";
• Rusya Tıp Bilimleri Akademisi Federal Devlet Bütçesi Bilimsel Kurumu "Tıbbi Genetik Araştırma Merkezi";
• FBUN Rospotrebnadzor Epidemiyolojisi Merkez Araştırma Enstitüsü;
• FBUN Moskova Epidemiyoloji ve Mikrobiyoloji Araştırma Enstitüsü. GN Gabrichevsky Rospotrebnadzor;
• A.I. Evdokimov (MGMSU) adını taşıyan Moskova Devlet Tıp ve Diş Hekimliği Üniversitesi Üreme Tıbbı ve Cerrahisi Anabilim Dalı;

Bilimsel çalışmalar aşağıdaki alanlarda gerçekleştirilir:

• mikrobiyolojik teşhis ve sağlık bakımıyla ilişkili enfeksiyonların (HAI'ler) önlenmesi. Sağlık tesislerinde mikrobiyal ekoloji.
• kistik fibrozlu hastalarda alt solunum yolu enfeksiyonlarının mikrobiyolojik teşhisinin özellikleri;
• enterobakterilerin antimikrobiyal ilaçlara direnç mekanizmalarının incelenmesi;
• hamile kadınlarda ve yenidoğanlarda grup B streptokokların taşınmasının hızlı teşhisi için algoritmaların geliştirilmesi.

MAKALELER, KONFERANSLAR

2016

LABORATUVAR EKİPMANLARI

Şu anda, bakteriyolojik laboratuvar modern ekipmanlarla donatılmıştır:

• Otomatik kan kültürü analiz cihazı VersaTREK(TREK Teşhis Sistemleri) - Sepsis'i en kısa sürede teşhis edebilme - Pozitif sonuçların %90'ı ilk gün içinde tespit edilir. Maksimum araştırma protokolü süresi 5'tir.
• Mikroorganizmaların tanımlanması ve duyarlılık testi için bakteriyolojik analiz cihazı Anka kuşu 100(BD) - bir tanımlama sonucu elde etmek için ortalama süre 6-8 saattir, bir antimikrobiyal duyarlılık sonucu elde etmek için ortalama süre 12-16 saattir.
• Yarı otomatik analizör iEMSokuyucu(ThermoLabsystems), yalnızca mikroorganizmaların hassasiyetini belirlemeyi ve belirlemeyi değil, aynı zamanda birçok pratik ve bilimsel sorunu çözmeyi de mümkün kılar: idrar ve diğer biyomateryallerin mikrobiyal kontaminasyonunun belirlenmesi, antibiyotik tedavisinin etkinliğinin laboratuvar kontrolü, değerlendirme kan serumunun bakterisidal aktivitesinin araştırılması ve ayrıca mikroorganizma büyümesinin kinetik modellerinin araştırılması.

Bilgi laboratuvarı sistemi "ALISA" laboratuvarın çalışmalarına dahil edilmiştir, bir bakteriyologun her çalışma alanı bilgisayarlıdır.

TAKIM

Pivkina Nadezhda Vasilyevna

En yüksek kategorideki doktor-bakteriyolog, "Bakteriyoloji" uzmanlığında profesyonel yeniden eğitime sahiptir. Uluslararası Klinik Mikrobiyologlar ve Antimikrobiyal Kemoterapistler Birliği (IACMAC) üyesi, Laboratuar Tıbbı Federasyonu (FLM) üyesi. Klinik mikrobiyoloji sorunları üzerine birçok bilimsel makalenin ortak yazarıdır. 1992'den beri uzmanlık alanında iş deneyimi.

Timofeeva Olga Gennadievna

En yüksek kategorideki doktor-bakteriyolog, "Bakteriyoloji" uzmanlığında stajını tamamladı, "Klinik tanı laboratuvarlarında PCR analizi" konulu bir yeterlilik geliştirme kursundan geçti. Laboratuvar Tıbbı Federasyonu (FLM) Üyesi. Halen doktora tezi üzerinde çalışmaktadır. Klinik mikrobiyoloji sorunları üzerine yayınları bulunmaktadır. 1996'dan beri uzmanlık alanında iş deneyimi.

Bondarenko Natalya Aleksandrovna

Birinci kategorideki doktor-bakteriyolog, Laboratuvar Tıbbı Federasyonu (FLM) üyesi. Klinik mikrobiyoloji sorunları üzerine birçok bilimsel makalenin ortak yazarıdır. 1988'den beri uzmanlık alanında iş deneyimi.

Balina Valeria Vladimirovna

Doktor-bakteriyolog, klinik laboratuvar teşhis doktoru. "Klinik Laboratuvar Teşhisi" uzmanlığında staj yaptı, "Bakteriyoloji" uzmanlığında profesyonel yeniden eğitim aldı. "Bulaşıcı hastalıkların teşhisinde moleküler genetik yöntemler" konusunda yeterlilik iyileştirmesi geçti. Laboratuvar Tıbbı Federasyonu (FLM) Üyesi. 2013'ten beri uzmanlık alanında iş deneyimi.

hemşirelik personeli

Laboratuvarda çalışmak:

• 1 tıbbi teknoloji uzmanı
• 1 tıbbi laboratuvar teknisyeni
• 5 laboratuvar sağlık görevlisi
• 1 laboratuvar asistanı
• Tüm çalışanlar en yüksek nitelik kategorisine sahiptir.

Sayfa 5 / 91

Mikrobiyolojik araştırmalar için hastanelerde ve polikliniklerde veya bunlardan bağımsız olarak bakteriyolojik laboratuvarlar bulunmaktadır. Araştırma için hasta insanlardan elde edilen çeşitli materyalleri (balgam, idrar, irin, dışkı, kan, beyin omurilik sıvısı vb.) alırlar. Ayrıca su, hava ve gıda ürünlerinin bakteriyolojik kontrolüne tabi tutulduğu sıhhi ve bakteriyolojik laboratuvarlar da bulunmaktadır.
Enfeksiyon hastalıklarının önlenmesinde bakteriyolojik laboratuvarların rolü de büyüktür. Bazı insanlar bulaşıcı bir hastalığa (tifo, dizanteri, difteri vb.) maruz kaldıktan sonra çevreye patojenik (patojenik) mikroplar salmaya devam eder. Bunlar sözde bakteri taşıyıcılarıdır. Sağlıklı insanlar arasında da bakteri taşıyıcıları vardır. Bakteriyolojik laboratuvarlar, bu tür bakteri taşıyıcılarını belirleyerek, sağlık yetkililerine bir dizi önleyici tedbirin uygulanmasında yardımcı olur.
Patojenik mikroorganizmalarla kontamine olmuş su ve gıda ürünleri, tifo, kolera vb.
Bir bakteriyolojik laboratuvarın emrinde en az üç oda bulunmalıdır: 1) küçük bir oda - testleri almak ve vermek için bir resepsiyon masası; 2) ortam ve yıkama - besleyici ortamların hazırlanması ve bulaşıkların yıkanması için; 3) bakteriyolojik araştırma üretimi için bir laboratuvar. Deney hayvanlarını (vivaryum) tutmak için bir odanın olması arzu edilir. Her odada uygun mobilyalar (mutfak ve laboratuvar masaları, çeşitli dolaplar, tabureler vb.) Bulunmalıdır.
Günlük laboratuvar çalışması için gerekli olan en önemli öğelerin listesi aşağıdadır. Kullanım amacı, nasıl ele alınacağı ve cihazın çalışma prensibi kursun ilgili bölümlerinde anlatılmaktadır.
Optik cihazlar. Daldırma sistemli biyolojik mikroskop, büyüteçler, aglütinoskop.
Sterilizasyon ve ısıtma cihazları. Aletler için otoklav, sıvı buhar aparatı, fırın, Seitz filtreleri, termostatlar, sterilizatörler.
Pişirme ortamları için ekipmanlar. Sıcak süzme hunisi, medya dökme hunisi, su banyosu, farklı boylarda tencereler, ağırlıklarla kalibre edilmiş teraziler, kıyma makinesi, süzme için metal ve ahşap sehpalar.
Aletler. Çeşitli şekil ve boyutlarda neşterler: maskeler, düz, kavisli, künt, bağırsak, anatomik, cerrahi cımbızlar, şırıngalar.
cam eşyalar. Cam slaytlar, delikli cam slaytlar, lameller, bakteriyolojik test tüpleri, serolojik reaksiyonlar (aglütinasyon) için kısa test tüpleri, santrifüjler, Heidepreich kapları *, cam tüpler ve çubuklar, 1, 2, 5, 10 ml için dereceli pipetler, Pasteur pipetleri , pipetli boyalar için cam şişeler, farklı boyutlarda cam beherler ve şişeler, farklı boyutlarda silindirler, filtreleme için huniler vb.

* Bugüne kadar, çoğu mikrobiyolog arasında ve ders kitaplarında, izole edilmiş mikrop kolonileri elde etmek için kullanılan kaplara, gerçek duruma karşılık gelmeyen Heidenreich kapları değil, Petri kapları adı verilmektedir. Kupalar ilk olarak Rus mikrobiyolog Heidenreich tarafından laboratuvar pratiğine tanıtıldı.

Karışık objeler. Bakteriyel döngü, platin tel, kauçuk tüpler, ağırlıkları olan el terazileri, test tüpleri için standlar (ahşap, metal), termometreler, hayvanlar için kafesler, hayvanları sabitlemek için aparatlar, santrifüj.
Kimyasallar, boyalar, ortam malzemeleri vb. Agar-agar, jelatin, beyaz tabakalar, immersiyon yağı, filtre kağıdı, emici ve düz pamuk, gazlı bez, etil alkol, anilin boyaları (macenta, yılan otu ve kristal menekşe, vezüvin, metilen) mavi, nötrrot, safranin vb.), Giemsa boyası, asitler (nitrik, hidroklorik, sülfürik, karbolik, fosforik, pikrik, oksalik vb.), alkaliler (potasyum hidroksit, sodyum hidroksit, amonyak, soda), tuzlar (potasyum nitrat) , potasyum permanganat potasyum, sodyum sülfit, sodyum klorür vb.).

laboratuvar masası

Bir mikrobiyolojik çalışma yürütmek için, bir laboratuvar asistanının uygun şekilde donatılmış bir işyerine sahip olması gerekir. Laboratuvar masası, otururken mikroskobun kolaylıkla çalışılabilmesi için belirli bir yüksekliğe sahip olmalıdır (Şekil 9). Mümkünse masa muşamba ile kaplanmalı ve her iş yeri galvanizli tepsi veya ayna cam ile kaplanmalıdır. İşyerinde bir mikroskop, test tüpleri ve boyalar için raflar, bir platin döngü ve kültürler için bir iğne, hazırlıklar için köprülü bir kap, bir yıkayıcı, bir kum saati, slaytlar ve lameller, pipetler, bir boya seti, filtre kağıdı, alkol veya gaz brülörü ve kullanılan lamların ve lamellerin, pipetlerin, cam çubukların vb. yetiştirilenler kimyasallarla dezenfekte edilemez. Bu tür bulaşıkların üzerindeki dezenfektan izleri, onları mikroorganizmaların büyümesi ve çoğalması için uygun hale getirmez. Kullanıldıktan sonra bulaşıklar metal tanklara veya kapaklı kovalara konur, kapatılır ve otoklavda sterilize edilir. Küçük aletler (cımbız, neşter, makas) kullanımdan sonra bir sterilizatöre yerleştirilir ve 30-60 dakika kaynatılır veya 30-60 dakika boyunca% 3-5 sabun-karbolik kloramin çözeltisine daldırılır.

Pirinç. 9. Bakteriyolojik nesnelerin mikroskopi tekniği.

İşyeri kesinlikle temiz tutulmalıdır. Masanın incelenen enfeksiyöz materyal (idrar, dışkı, irin vb.) ile kontamine olması kabul edilemez. İkinci durumda, masadaki enfeksiyöz materyal çevredeki diğer nesnelere bulaşabilir ve ardından laboratuvar içi enfeksiyon mümkündür. Çalışmayı bitirdikten sonra, laboratuvar asistanı sorumlu olduğu işyerini sıraya koymalı ve önleme amacıyla işyerindeki camı% 5'lik bir karbolik asit veya kloramin solüsyonu ile nemlendirilmiş bir pamuk yünü ile silmelidir.

Laboratuvarda çalışma ve davranış kuralları

Laboratuar çalışanları, bulaşıcı maddelerle çalışırken, kendilerinin enfekte olma ve bulaşıcı bir hastalığı bir aileye, daireye vb.
Laboratuvarlarda çalışırken aşağıdaki kurallara uyulmalıdır:

1. Laboratuvarda olmak ve hatta içinde çalışmak için sabahlık ve atkı veya şapka giymek gerekir.
2. Gerekmedikçe, bir laboratuvar odasından diğerine geçmeyin ve yalnızca belirlenen iş yeri ve ekipmanı kullanın.
3. Laboratuvarda yemek yemeyin veya sigara içmeyin.
4. Enfeksiyöz materyal ve canlı kültürlerle çalışırken, uygun araçları kullanın: cımbız, kanca, spatula ve kullanımdan sonra (brülör alevinde yanma, kaynama vb.) tahrip veya nötralizasyona maruz kalan diğer öğeler. Sıvı enfeksiyöz materyali ağızla değil, silindirler, armutlar yardımıyla pipetlere emdirin, bulaşıcı materyal içeren sıvıyı bir kaptan diğerine sadece dezenfektan sıvının döküldüğü herhangi bir alıcı (tepsi, leğen) üzerinden dökün (karbolik solüsyon asit, lizol) . Aşılamalar ve alt kültürler, test tüpleri, spatulalar, platin özeler, pipetler vb. bir bek alevinde yakılarak gerçekleştirilmelidir.
5. Bulaşıklar kırılırsa veya enfeksiyöz materyal içeren sıvı veya canlı kültürler dökülürse, kirlenmiş iş yerini, elbiseyi ve elleri derhal en kapsamlı şekilde dezenfekte edin. Bütün bunlar, kazadan derhal haberdar edilmesi gereken laboratuvar başkanının huzurunda veya gözetiminde yapılmalıdır.
6. Tüm kullanılmış ve gereksiz öğeler ve malzemeler mümkünse imha edilmelidir (en iyisi yakarak veya sterilizatörlerde veya dezenfektan sıvılarda dikkatli bir şekilde imha ederek).

Laboratuvar içinde dezenfekte edilecek tüm malzemeleri özel kaplara, tanklara, kapaklı kovalara vb. toplayın, kapalı olarak aynı gün dezenfekte edilebilecekleri otoklava aktarın. Enfeksiyöz materyalin otoklava teslimi ve sterilizasyonu, özel olarak belirlenmiş sorumlu laboratuvar çalışanları tarafından izlenmelidir.

1. Temizliğe ve düzene sıkı sıkıya uyun. Çalışma günü boyunca ve işten sonra ellerinizi mümkün olduğunca sık dezenfekte edin ve yıkayın.
2. Laboratuvar çalışanları, başlıca bulaşıcı hastalıklara (öncelikle bağırsak hastalıklarına karşı) karşı zorunlu aşılamaya tabidir.
3. Tüm canlı kültürlerin ve enfekte hayvanların günlük kantitatif muhasebesinin özel dergilere ve muhasebe defterlerine girişi ile yapılması zorunludur.
4. İşten sonra, daha fazla çalışma için gerekli olan tüm malzeme ve kültürler, kilitlenebilir bir buzdolabında veya kasada bırakılmalı ve işyeri tam bir düzene konmalıdır.
5. Laboratuvar tesislerinin günlük kapsamlı temizliği, dezenfektan sıvı kullanılarak ıslak bir yöntemle yapılmalıdır.

Bağırsaklarda çeşitli bakterilerin varlığı normal kabul edilir. Bu bakteriler, gıdaların asimilasyonunun yanı sıra işleme süreçlerinde yer alır. Bağırsakların düzgün sindirimi ve işleyişi, detritus adı verilen küçük, yapısız parçacıklardan oluşan dışkı ile kanıtlanır.

Dışkıların mikrobiyal bileşimini incelemek için bir tank analizi yapılır. Bakteri sayısı artarsa, bir kişinin bağırsak patolojileri, farklı nitelikteki karın ağrısı, dışkıda sindirilmemiş yiyecek parçaları görülür. Bu çalışma, birçok rahatsızlığın nedensel ajanlarını belirlemenizi sağlar.

Bağırsak bakterilerinin sınıflandırılması

Bununla birlikte, ayrıntılı bir çalışma sonrasında, aşağıdaki gruplara ayrılırlar:

1. Sağlıklı bakteriler: lakto ve bifidobakteriler, eschecheria. Bu mikroorganizmalar bağırsakların çalışmasını aktive eder.
2. Koşullu olarak patojenik: enterokoklar, kandidalar, klostridialar, stafilokoklar. Bu mikroorganizmalar, belirli koşulların bir sonucu olarak patojen hale gelir ve çeşitli patolojilerin gelişmesine neden olabilir.
3. Patojenik: coli, klebsiella, proteus, salmonella, shingella, sarsinler. Bu bakteri grubu ciddi hastalıkların gelişmesine neden olur.

Dışkıyı incelemek için çeşitli yöntemler vardır. En yaygın yöntemlerden biri bakanalizdir.

Dışkı analiz tankı nedir?

Dışkıların bakteriyolojik muayenesi, mikrobiyal bileşimini incelemenize ve ayrıca sonraki rahatsızlıkların patojenlerinin varlığını belirlemenize olanak tanır:

• şigelloz;
• dizanteri;
• salmonelloz;
• Tifo;
• kolera ve diğer hastalıklar.

Bir tank dışkı analizi oldukça uzun zaman alır. Çalışma, antibiyotik tedavisinin atanmasından önce gerçekleştirilir.

Araştırma endikasyonları

Bir dışkı analizi vermenin ana nedenleri vurgulanmalıdır:

Koprolojik çalışmalar, bağırsak boşluğunda meydana gelen patolojileri belirlemeye izin verir:

Sindirim organlarının patolojilerini teşhis etmek için tankın bir analizi de reçete edilir.

Dışkı analizi nasıl yapılır?

Çalışmaya girmeden önce, hasta birkaç gün özel eğitim almalıdır.

• yeşillik;
• pancar;
• kırmızı balık;
• domates.

Ayrıca çalışmanın sonuçları et ürünlerinden etkilenebilir.

Teste hazırlanırken antibiyotik, antienflamatuar ilaçlar ve enzim ve demir içeren ilaçları almayı bırakmak gerekir.

Araştırma için materyal toplama işlemi sabah yapılmalıdır. Dışkı toplamak için eczaneden satın alınabilen steril bir kap kullanın. Biyomateryallerin buzdolabında saklama süresi 10 saatten fazla değildir.

Araştırma nasıl yapılır?

Dışkıların bakteriyolojik muayenesi, malzemenin fiziksel ve kimyasal bileşimini, özelliklerini, patolojilerin varlığını belirlemenizi sağlar. Bu çalışma vücuttaki bakterileri, biyolojik dengedeki değişiklikleri tespit etmeye yardımcı olur.

Ek bakanaliza, dışkıların skatolojik analizidir. Bu çalışma, belirli bir dışkı kokusunun varlığını, tutarlılığını ve yoğunluğunu, genel görünümünü, mikroorganizmaların varlığını veya yokluğunu değerlendirmenizi sağlar.

Çalışma 2 aşamadan oluşmaktadır:

1. makroskopik analiz.
2. Mikroskobik.

Mikroskobik incelemede dışkıda mukus, protein, yüksek bilirubin seviyeleri, kan pıhtıları, iyodofilik flora görülür. İkincisi, nişastayı glikoza dönüştüren aktif maddeler nedeniyle oluşur. İyodofilik floranın saptanması her durumda enfeksiyonu göstermez. Fermantasyonun neden olduğu iyot bakterilerinin birikmesi, hastalığın gelişimine tanıklık eder.

Çocukların vücudu patojenlerle iyi savaşmadığı için, çocukların dışkısında sıklıkla bu tür bakteriler teşhis edilir.

Günümüzde incelenen biyomateryalin özel bir ortamda belirli koşullar altında ekilmesi yöntemi kullanılmaktadır. Uzmanlar, bakterilerin çoğalma ve koloni oluşturma yeteneklerini belirler. Doğru sonuçlar elde etmek için, kullanılan tüm aletlerin yanı sıra toplanan biyomateryal içeren tabaklar steril olmalıdır.

Patojenik mikroorganizmalar, çeşitli antibakteriyel ilaçlara duyarlılık açısından incelenmektedir. Çalışma, doktorun ilaç yazabileceği sonuçların yüksek doğruluğu ile karakterize edilir.

Test materyalinin toplam miktarının sadece %10'u patojenik mikroflora olabilir.

Sonuçların deşifre edilmesi

Dışkı muayenesi, herhangi bir bakteri sayısını belirlemenin yanı sıra belirlemenizi sağlar. Elde edilen sonuçlara dayanarak, doktor bir teşhis koyar ve tedaviyi reçete eder.

Dışkıda bulunabilen patojenik mikroflora çeşitleri:

1. Escherichia coli. Vücudun kalsiyum ve demir emilimine müdahale ederler ve genellikle solucanların varlığını gösterirler.
2. enterobakteriler. Çoğu zaman, bu bakteriler dizanteri ve bağırsak enfeksiyonlarının gelişmesine neden olur.
3. Azaltılmış enzimatik aktiviteye sahip Escherichia coli, dysbacteriosis oluşumunu gösterir.
4. laktoz negatif bakteriler. Sindirim sürecinde rahatsızlıklara neden olurlar ve gaz, mide ekşimesi, hızlı geğirme ve ağırlık hissine neden olurlar.
5. hemolitik bakteri. Bağırsakların yanı sıra sinir sistemini de olumsuz etkileyen toksinler oluştururlar. Alerjiye neden olurlar.
6. Maya benzeri mantarlar pamukçuk gelişimini kışkırtır.
7. Klebsiella, gastroenterolojik patolojilerin oluşumunu kışkırtır.
8. enterokoklar, genital organların, boşaltım yollarının ve genitoüriner sistemin bulaşıcı patolojilerinin ortaya çıkmasına neden olur.

Analiz tankının kodunun çözülmesi, bakterilerin normal göstergelerini de gösteren formlarda belirtilmiştir.

Bağırsak disbakteriyozu, sağlıklı mikroflorayı yok eden çok tehlikeli bir patolojidir. Bu durum dizanteri ve stafilokok aureus gelişimine yol açar. Bunu önlemek için yılda en az bir kez bağırsak biyobalansını kontrol etmek için dışkı analizi yapılması önerilir.

Buck analizi, önemli iç organlarının işleyişi hakkında bilgi sağlayan güvenilir bir çalışma olarak kabul edilir: bağırsaklar ve mide. Çalışma, normal mikroflorayı etkileyen patojenik mikroorganizmaları zamanında belirlemenizi sağlar. Hem yetişkinler hem de çocuklar için reçete edilir.