Úloha hubovej infekcie v ľudskej patológii. Diagnóza mykóz

Podľa pokynov SP 1.2.036-95 Štátneho výboru pre epidemiologický dohľad Ruskej federácie, Moskva, 1996 "Postup účtovania, skladovania, prenosu a prepravy mikroorganizmov skupín patogenity I-IV" podľa epidemiologického nebezpečenstva , kvasinkové a plesňové huby, ako aj dermatofyty patria do skupiny III-IV patogénov infekčných chorôb, preto je pri práci s nimi potrebné dodržiavať osobitné bezpečnostné pravidlá, priemyselnú sanitáciu, protiepidemický režim a osobnú hygienu, zameranú na pri zabezpečovaní osobnej a verejnej prevencie nákazy, alergizácie a šírenia nákazy.

Laboratórium pre prácu s mikroorganizmami skupín patogenity III-IV je vybavené ľahko dezinfikovateľným nábytkom vrátane skríň na čisté laboratórne sklo, reagenty, živné pôdy, príslušné vybavenie a náradie. Liehové lampy alebo plynové horáky, mikrobiologické slučky, mykologické špachtle, špachtle, epilačné a anatomické pinzety, nožnice na nechty, skalpely, nožnice, Volkmannove lyžice, pipety, Pasteurove pipety, pitevné ihly, sklenené tyčinky, striekačky, nízkorýchlostné odstredivky, trepačky potrebné na prácu , Petriho misky, skúmavky, sklo, Woodova ultrafialová lampa s filtrom, mikroskopy, iluminátory, termostaty, autoklávy, chladničky, suché pece, baktericídne lampy.

Odber materiálu na výskum

Mikroskopická diagnostika mykóz zahŕňa detekciu mycélia a spór v skúmanom biomateriáli. Za skúmaný biomateriál sa považujú epidermálne vločky, vlasy a nechty. Nevyhnutnou požiadavkou pred uskutočnením štúdie je absencia lokálnej liečby najmenej desať dní a systémová liečba mesiac. Treba mať na pamäti, že použitie čistiacich prostriedkov pacientom (najmä tých, ktoré obsahujú antiseptiká) môže ovplyvniť spoľahlivosť výsledkov štúdie, takže umývanie je zakázané 3-4 dni pred ním.

Nástroje na odber biomateriálu a prípravu prípravku sú znázornené na obrázku:

Fotografia. Nástroje na odber biomateriálu a prípravu lieku.

Ak máte podozrenie na mykózu hladkej kože, mykózu rúk a nôh bez poškodenia nechtových platničiek, vyšetrujú sa epidermálne vločky z povrchu lézie. Pri mykóze hladkej kože je vhodnejšie študovať epidermis z okrajovej zóny lézie, pretože v centrálnej zóne je patologický proces často vyriešený. Zároveň by sa nemalo zabúdať na možnosť poškodenia vellusových vlasov, čo určuje výber ďalšej taktiky liečby. Chĺpky sa odstraňujú epilačnou pinzetou. Pri mykóze rúk a nôh bez poškodenia nechtových platničiek sa vyšetruje šupina epidermis z tretieho a štvrtého medziprstového záhybu, ako aj z dlaní a z klenby chodidiel.

Pri podozrení na plesňovú infekciu dlhých vlasov (pokožka hlavy, brada, fúzy a ohanbie), ako aj vellus vlasov, sa vykonáva ich mikroskopické vyšetrenie. Pri trichofytóze pokožky hlavy sa vlasy odlamujú vo vzdialenosti 1-2 mm nad úrovňou ústia vlasového folikulu, pričom pripomínajú pahýle a bodky. Ak sa chĺpky nedajú zachytiť epilačnou pinzetou, v tomto prípade sa ich pokúsia odstrániť ostrým koncom skalpela alebo pitevnej ihly.

Pri mikrosporiách pokožky hlavy sa vlasy odlamujú vo výške 5-6 mm, pripomínajúc "šikmú lúku". S mikroskopom sa skúmajú tieto zlomené chĺpky. Vlasy z lézií sa odstránia pomocou pinzety.

Pri favus sa skúmajú rednúce vlasy nad povrchom scutula.

Pri podozrení na onychomykózu sa skúma ľahko rozdrvený materiál zo zóny subungválnej hyperkeratózy, ako aj samotné zmenené nechtové platničky.

Je potrebné chápať, že akýkoľvek testovaný materiál od pacienta je potenciálne infekčný, preto sa musí odobrať v miestnosti, kde sa denne vykonáva mokré čistenie s použitím dezinfekčných prostriedkov (5 % roztok chlóramínu, 5 % vyčírené bielidlo) a vzduch sa sterilizuje ultrafialové žiariče (zahŕňajú 1-1,5 hodiny a vstupujú do miestnosti 20 minút po vypnutí). Termostaty sa týždenne utierajú 0,5% roztokom chloramínu, steny sa ošetrujú dezinfekčnými prostriedkami raz za mesiac. Pri práci musí byť lekár chránený maskou, okuliarmi, plášťom a rukavicami. Nástroje na odber biomateriálu, rukavice, sklíčka a krycie sklíčka, jednorazové plášte a obrúsky sa po použití dezinfikujú ponorením do 1,5 % roztoku clindesinu-extra (5 % roztok fenolu alebo 5 % roztok lyzolu) na 30 minút. Zvyšný patologický materiál (šupiny vlasov, kože a nechtov) sa autoklávuje pri 2 atm. a 132˚C počas 20 minút (kontrola - močovina) alebo pri 1,5 atm. a 126˚C počas 30 minút (kontrola - kyselina benzoová), alebo varte 1 hodinu vo vode alebo 30 minút v 1% roztoku mydlovej sódy.

Patologický materiál sa prepravuje do laboratória v špeciálnej nádobe alebo kovových bicykloch, ktoré ho chránia pred priamym slnečným žiarením. V sprievodnom dokumente je uvedené priezvisko, meno, priezvisko, pohlavie, vek a adresa pacienta, navrhovaná klinická diagnóza, názov testovacieho materiálu, čas jeho odberu, umiestnenie ohniska, číslo anamnézy , priezvisko lekára a inštitúcie odosielajúcej materiál.

Príprava lieku

Po prijatí šupín epidermis z lézie sa prípravok pripraví na mikroskopické vyšetrenie. Na testovaný materiál umiestnený na podložnom sklíčku sa aplikujú 1 až 2 kvapky 20 % KOH, potom sa podložné sklíčko zahrieva nad plameňom horáka, kým sa na obvode neobjaví belavý okraj vykryštalizovanej alkálie. Potom sa prípravok prekryje krycím sklíčkom (ktoré sa pritlačí pitevnou ihlou) a podrobí sa mikroskopii. Štúdia sa musí vykonať najneskôr 2 hodiny po príprave prípravku kvôli možnosti kryštalizácie alkálií.

Spôsob prípravy vlasového prípravku v prípade podozrenia na plesňovú infekciu zodpovedá vyššie opísanému, len s tým rozdielom, že krycie sklíčko nie je stlačené disekčnou ihlou (aby nedošlo k rozdrveniu vlasov).

Fotografia. Vzhľad okraja kryštalickej alkálie.

Na prípravu prípravku sa kúsky narezaných nechtových platničiek ponoria do skúmavky s 20 % KOH a vystavia sa termostatu na 1 hodinu (t≈37˚C) a potom sa výsledná rôsolovitá hmota prenesie na podložné sklíčko. , prikryté krycím sklíčkom a skúmané pod mikroskopom.

Na rozdiel od nechtových platničiek sa vzorky z ľahko rozdrveného materiálu zóny subungválnej hyperkeratózy umiestnia na podložné sklíčko, nanesú sa na ne 1-2 kvapky 20% KOH a potom sa podložné sklíčko zahrieva nad plameňom horáka do belavej farby. na periférii sa objavuje okraj vykryštalizovanej alkálie (obr. 65). Potom sa prípravok prekryje krycím sklíčkom, ktoré sa jemne pritlačí pitevnou ihlou a skúma sa pod mikroskopom.

Mikroskopia lieku

Na mikroskopické vyšetrenie sa používa laboratórny mikroskop bez použitia ponoru. Mikroskopia šupín epidermis, šupín z oblasti subunguálnej hyperkeratózy, ako aj rozpustených nechtových platničiek sa vykonáva spočiatku pri malom zväčšení (×100), a ak sa zistia vlákna mycélia pripomínajúce „mapu riek“ (železnice), objektív sa prepne na vyššie zväčšenie (×400). Mycélium pri strednom zväčšení pripomína bizarne tvarované sklenené tyčinky, ktoré menia stupeň lomu svetla pri práci s mikroskopovou mikroskopickou skrutkou.

Mikroskopia vlasového preparátu sa vykoná okamžite pri strednom zväčšení (×200 alebo x400). Pri trichofytóze sa vo vlasoch nachádzajú veľké spóry usporiadané v radoch, zatiaľ čo pri mikrosporiách je vo vlasoch veľa malých mozaikovo usporiadaných spór (odtiaľ pojem „mikrosporia“). Niekedy je zaznamenaná prítomnosť čiapky na vonkajšej strane vlasov - to je typické pre trichofytózu (variant ektotrixu, zatiaľ čo spóry sú veľké), ako aj pre mikrosporiu (v tomto prípade čiapka pozostáva z malých spór). Mikroskopia postihnutých vlasov s favusom, vo vnútri vlasov, okrem nahromadenia okrúhlych alebo polygonálnych spór, vzduchových bublín a mycéliových vlákien.

Prípravky je potrebné prezrieť najneskôr do 2 hodín od ich prípravy z dôvodu možnosti kryštalizácie alkálií. Na zvýšenie spoľahlivosti diagnózy je potrebné urobiť niekoľko preparátov (najmenej dva) z jednej lézie. Možné chyby v mikroskopickej diagnostike mykóz môžu súvisieť tak s nekvalitnou prípravou preparátov (prehrievanie nad plameňom horáka, ktoré je sprevádzané predčasnou kryštalizáciou alkálií), ako aj s nedostatočnou skúsenosťou výskumníka (kedy dochádza k častému zámene nití mycélia pre tkanivové vlákna náhodne nájdené v prípravku).

LABORATÓRNA DIAGNOSTIKA MYKÓZ

Odber materiálu na laboratórny výskum huby.

1. OST 42-21-2-854: objednávka č. 222/80 zo dňa 27.06.
2. Vybavenie: pinzeta, sklíčka, nožnice, Volkmannova lyžica.
4. Indikácie: plesňové ochorenia.
5. Komplikácie: nie.

Príprava liečebnej miestnosti:

Zmena riešení.

Cook:
-1% roztok chloramínu na handry
-3% roztok chloramínu - na dezinfekciu obväzov a pinzety
- prací roztok (156 ml peroxidu vodíka + 5 g pracieho prášku + 839 ml destilovanej vody) - na spracovanie pinzety
- 6% roztok peroxidu vodíka - na ošetrenie rukavíc.

Manipulačný algoritmus.

Musíte si vziať pinzetu, sklíčko, lyžicu Volkmann, nožnice;
- pozvať pacienta do šatne;
- pacient sedí na stoličke alebo gauči;
- hodnota m / s.

Technika:

Z lézie pomocou pinzety odoberte kožné vločky a vlasy;
- odobratý materiál položte na podložné sklíčko a uzatvorte ďalším podložným sklom.
- umyte si ruky mydlom;
- odoslal materiál do laboratória.

ZBER MATERIÁLU

Odber nechtov na vyšetrenie.

Vezmite nožnice a sklíčka;
- odrežte kúsok z voľného okraja nechtu nožnicami;
- prikryte odobratý materiál ďalším podložným sklom;

Namočte nožnice a pinzetu do 3% roztoku formalínu.

Správny odber materiálu z postihnutých nechtov je kľúčom k úspešnej mikrobiologickej štúdii. Pri odbere materiálu nie vždy zachytávajú oblasti nechtu obsahujúce životaschopné huby. Neživotaschopné huby v kultúre, samozrejme, nebudú rásť a ich druhy nemožno založiť.

Oblasť nechtu, ktorá sa má odobrať, je určená formou onychomykózy.

Takže pri povrchovej forme onychomykózy by sa z povrchu nechtovej platničky mali robiť škrabance.

Pri najbežnejšej distálnej subunguálnej forme sa najživotaschopnejšie huby nachádzajú pod nechtovou platničkou. Materiál, ktorý sa posiela na výskum, by mal obsahovať nielen odrezanie nechtovej platničky, ale aj zoškrabanie z nechtového lôžka, spod platničky.

Okrem toho by sa mali zachytiť aj oblasti nezmeneného nechtu, pretože najaktívnejšie huby sa nachádzajú na hranici medzi nimi a postihnutými oblasťami nechtu.

Pri proximálnej subunguálnej forme je ťažké odobrať materiál. V týchto prípadoch niekedy, najmä ak sa chystajú vykonať histologické vyšetrenie alebo diferenciálnu diagnostiku, odoberú biopsiu nechtu a príležitostne použijú vŕtačku.

Pri paronychii sa robia škrabance z proximálneho valčeka a pod ním.

Vo všetkých prípadoch, aby sa zabránilo bakteriálnej kontaminácii, by mal byť necht pred odberom vzorky ošetrený etylalkoholom.

MIKROSKOPICKÁ ŠTÚDIA

Mikroskopické vyšetrenie patologického materiálu na huby sa vykonáva v natívnych a farbených prípravkoch.

Na prípravu nefarbených prípravkov sa výsledný materiál rozdrví skalpelom alebo pitevnou ihlou a umiestni sa do stredu podložného skla. Na jasnejšiu identifikáciu prvkov huby sa materiál číri (maceruje). Na tento účel sa uchyľujú k pomoci rôznych látok, najčastejšie žieravých alkálií (KOH, NaOH), ktoré rozpúšťajú epidermálne šupiny, hlien, hnis, prejasňujú vlasový pigment a tým sprístupňujú huby pre výskum.

Na zmäknutú kožu alebo šupinky nechtov, ktoré sú umiestnené v strede podložného sklíčka, naneste 1-3 kvapky 20-30% roztoku KOH (NaOH). Testovaný materiál v kvapkách alkálie sa opatrne zahrieva nad plameňom alkoholovej lampy, kým sa po obvode kvapky neobjaví jemný biely okraj kryštálov alkalických kovov. Nemalo by sa zahriať do varu. Po zahriatí sa kvapka prikryje krycím sklíčkom, aby sa zabránilo vzniku vzduchových bublín.

R. A. Arabian a G. I. Gorshkova (1995) odporúčajú pred mikroskopovaním nechať preparáty kožných šupín a vlasov vyčírené a zakryté krycím sklom 5–10 minút, v prípade nechtových platničiek 30–40 minút.

Čírenie preparátov sa môže uskutočniť bez zahrievania, preto sa nechajú 30-60 minút v 20 % roztoku KOH alebo sa použijú iné spôsoby čírenia patologického materiálu: chlorallaktofenol podľa Amana; laktofenol; roztok obsahujúci 15 % dimetylsulfoxidu a KOH vo vode. Dobré výsledky sa dosiahnu po vyčírení nechtových platničiek umiestnených v 5% roztoku KOH na 24 hodín; v tomto prípade nie je potrebné zahrievanie.

Mikroskopické vyšetrenie sa vykonáva na bežnom laboratórnom mikroskope bez ponorenia.

Kondenzor mikroskopu by sa mal znížiť, clona by sa mala zúžiť. Na začiatku sa liek nachádza na skle pri malom zväčšení (40x), následná štúdia sa vykonáva pri väčšom zväčšení (100x);

prípravok je podrobne študovaný pri 400-násobnom zväčšení. Malo by sa testovať viacero liekov, aby sa zvýšila spoľahlivosť testu a zabránilo sa falošným pozitívam.

Chyby v mikroskopickej diagnostike húb sa môžu vyskytnúť tak v dôsledku chýb pri príprave prípravku, ako aj nedostatočných skúseností laboranta.

Výrobné chyby sú primárne spojené s:
s prehriatím lieku, čo môže viesť k vyzrážaniu alkalických kryštálov, zničeniu vlasov a vzniku jemnozrnného rozpadu v patologickom materiáli.

Lineárne usporiadanie podlhovastých až alkalických kryštálov veľmi pripomína filamenty septátového mycélia aj na čistom skle bez patologického materiálu.

Diferenciálne diagnostické znaky sú výnimočná rovnomernosť kryštálov, ich sklovitá priehľadnosť, všestrannosť hrán a absencia neoddeliteľného spojenia medzi jedným prvkom a druhým. V pochybných prípadoch sa odporúča pridať do prípravku kvapôčky mierne zohriatej destilovanej vody, ktoré rýchlo rozpustia kryštály alkálie.

Pre prvky huby ich možno zameniť za:

- kvapky tuku,
- vzduchové bubliny
- bavlnené nite odevov
- a takzvaná "mozaiková huba".

Kožné lipidy, rozpad tukových buniek a keratohyalínové zrná, najmä tie, ktoré majú pravidelný tvar, môžu pripomínať jednotlivé spóry húb. Ale rozmanitosť tvarov a, čo je najdôležitejšie, veľkosti, absencia vnútornej štruktúry útvarov (vakuoly, škrupiny) hovoria proti hubovej povahe týchto prvkov. Lipidy sa do lieku môžu dostať aj pri odbere patologického materiálu z nedostatočne vyčisteného ložiska.

Vzduchové bubliny môžu pripomínať spóry buniek podobných kvasinkám, ale na rozdiel od nich sú obklopené hustou tmavou škrupinou a aj tie najmenšie vzduchové bubliny sú vždy väčšie ako bunky húb.

Nite z tkaniny ponožiek, odevov a pod. zvyčajne ležia oddelene od patologického materiálu, sú vždy väčšie ako hýfy, hrubšie a nie septované.

"Mozaiková huba" je artefakt, ktorý sa vyskytuje počas procesu kryštalizácie (možno v dôsledku rozkladu cholesterolu). Má formu sieťky alebo slučiek, ktorých obrysy zodpovedajú hraniciam rohovitých šupín, na rozdiel od mycéliových vlákien nikdy nepretína steny epidermálnych buniek.

V niektorých laboratóriách sa prípravky na mikroskopické vyšetrenie číria 15–30 % roztokom KOH, do ktorého sa pridáva 5–10 % komerčný Parker's Superchrome Blue-Black Ink.

Pri tomto sfarbení sú hýfy a spóry sfarbené na modro.

Mikroskopia odhalí filamentózne hýfy húb alebo pučiace bunky (obr. 1).

Mikroskopia teda poskytuje záver iba o hubovej povahe infekcie, ale nie o type pôvodcu huby.

Samozrejme, účinnosť mikroskopického vyšetrenia závisí od kvalifikácie personálu laboratória.

Ryža. 1. Mikroskopia škrabancov z nechtov postihnutých T. rubrum. Hýfy huby sú viditeľné.

KULTÚRNA ŠTÚDIA

Materiál sa naočkuje na štandardné Sabouraudovo médium, často s antibiotickými prísadami. Pri diagnostike infekcií dermatofytmi je zvykom pridávať do Sabouraudovho média cykloheximid, ktorý potláča rast kontaminujúcich húb zo vzduchu. Existujú hotové komerčné médiá doplnené antibiotikami a cykloheximidom. Malo by sa pamätať na to, že mnohé nedermatofytné plesne a niektoré druhy Candida nerastú na médiu s cykloheximidom, preto sa odporúča inokulovať na Sabouraudovo médium s cykloheximidom a na médium bez neho. Identifikácia druhov sa zvyčajne vykonáva mikroskopickým vyšetrením pestovanej kultúry alebo subkultúrou na selektívnych médiách (obr. 2-15).

Ryža. 2. Kultúra huby T. rubrum izolovaná z postihnutých nechtov. Získané na Sabouraudovom médiu (vľavo) a kukuričnom agare (vpravo).

Ryža. 3. Kultúra huby T. mentagrophytes var. interdigitale izolované z postihnutých nechtov. Získané na médiu Saburo.

Ryža. 4. Kultúra huby Candida albicans. Získané na médiu Saburo.

Ryža. 5. Kultúra huby Torulopsis glabrata izolovaná z postihnutých nechtov. Získané na médiu Saburo.

Ryža. 6. Kultúra huby Ulocladium sp., izolovaná z postihnutých nechtov.

Ryža. 7. Mikromorfológia Acremonium sp., izolovaných z postihnutých nechtov.

Ryža. 8. Mikromorfológia Fusarium sp., vyrezaných z postihnutých nechtov.

Ryža. 9. Mikromorfológia Scopulariopsis sp., izolovaných z postihnutých nechtov.

Ryža. 10. Mikromorfológia Candida albicans izolovaná z postihnutých nechtov.

Ryža. 11. Mikromorfológia Altemaria sp., izolovaných z postihnutých nechtov.

Ryža. 12. Mikromorfológia Aspergillus sp., izolovaných z postihnutých nechtov.

Ryža. 13. Mikromorfológia Ulocladium sp izolovaných z postihnutých nechtov.

Ryža. 14. Mikromorfológia Chaetomium sp., izolovaných z postihnutých nechtov.

Obr. 15. Panel výživy na identifikáciu dermatofytov (vľavo - kultúra T rubrum, vpravo - T mentagrophytes var. mterdigitale).

Zľava doprava: Sabouraudovo médium, Baxterovo médium, Christensenovo médium, kukuričný agar

Treba poznamenať, že niektoré plesňové huby, vrátane dermatofytov, rastú v kultúre pomaly, za 2-3 týždne.

Aj keď sú dodržané všetky pravidlá zberu materiálu, s dobrým laboratórnym vybavením a vysokokvalifikovaným personálom je počet pozitívnych výsledkov kultúrnej štúdie veľmi malý.

Podľa zahraničnej literatúry percento pozitívnych štúdií nepresahuje 50.
Percento pozitívnych výsledkov v najlepších domácich laboratóriách sotva dosahuje 30.

V 2 z každých 3 prípadov onychomykózy teda nemožno určiť jej etiológiu.

LUMINESCENTNÁ ŠTÚDIA

V roku 1925 Margaret a Deveze zistili, že vlasy postihnuté určitými dermatofytmi vykazovali charakteristickú svietivosť pod ultrafialovými lúčmi prechádzajúcimi cez filter Byd. Sklo Byda pozostáva zo síranu bárnatého, obsahuje asi 9 % oxidu niklu; prepúšťa lúče s dĺžkou 365 nm. Ako zdroj ultrafialových lúčov možno použiť rôzne zariadenia. Povaha žiary nebola presne stanovená. Vlasy naďalej žiaria po smrti huby a po pokusoch extrahovať fluorescenčný materiál horúcou vodou alebo studeným roztokom bromidu sodného. Intenzita a povaha žiary závisí od pH roztoku. Predpokladá sa, že fluorescenčná látka sa objavuje v procese interakcie medzi hubou a rastúcimi vlasmi.

Žiar ultrafialových lúčov prechádzajúcich dreveným filtrom je charakteristický len pre vlasy napadnuté hubami rodu Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. Distorsium, príležitostne M. gypseum a M. nanum). ako aj Trichophyton schonleinii . Vlasy napadnuté mikrosporami, najmä M. canis a M. audouinii, dávajú najjasnejšiu žiaru; vlasy postihnuté T. schonleinii majú matnú zelenkastú fluorescenciu.

Žiara sa pozoruje iba vo vlasoch úplne postihnutých hubou. Nemusí byť prítomný v čerstvých léziách. V týchto prípadoch by mali byť chĺpky epilované z okrajovej, najaktívnejšej zóny a žiara môže byť detekovaná v korienku chĺpku.

Luminiscenčnú metódu možno použiť ako na diagnostiku a sledovanie účinnosti liečby u jednotlivých pacientov, tak aj v epidemiologických ohniskách. Kompaktné mobilné jednotky sú vhodné na vyšetrenie kontaktných osôb v školách, škôlkach a pod.

Luminiscenčné vyšetrenie sa musí vykonať v zatemnenej miestnosti, ložiská sa musia vopred očistiť od chrastov, zvyškov masti a pod. Luminiscenčnou metódou je možné diagnostikovať pityriasis versicolor, najmä ak sú ložiská lokalizované na pokožke hlavy. Lézie pri tejto chorobe majú červeno-žltú alebo hnedú žiaru. Táto žiara však nie je striktne špecifická, pretože ju možno pozorovať pri výskyte lupín na pokožke hlavy a dokonca aj u zdravých ľudí v oblasti ústia vlasových folikulov na tvári a hornej časti tela. Identifikované luminiscenčnou metódou, postihnuté vlasy musia byť podrobené mikroskopickému vyšetreniu.

IMUNOLOGICKÉ A BIOLOGICKÉ ŠTÚDIE

Imunologické metódy výskumu sa používajú na identifikáciu špecifických zmien v tele a sérologickú diagnostiku plesňových ochorení. Na detekciu špecifických protilátok v sére vzorky sa uskutočňujú nasledujúce sérologické reakcie: aglutinácia, precipitácia, fixácia komplementu, imunofluorescencia s príslušnými antigénmi.

Alergický stav tela pacienta sa zisťuje pomocou alergických kožných testov. Alergény sa aplikujú na skarifikovanú kožu podľa Pirqueho alebo vtieraním do kože podľa Mora, intradermálne podľa Mantouxa a tiež injekciou do kože. Pomocou týchto testov sa zisťujú alergické reakcie okamžitého aj oneskoreného typu, čo umožňuje posúdiť stav humorálnej a bunkovej imunity.

Na detekciu špecifickej senzibilizácie lymfocytov sa využívajú reakcie degranulácie bazofilov, aglomerácia a alterácia, test blastickej transformácie, potlačenie migrácie makrofágov atď.

Porovnanie výsledkov sérologických a alergických reakcií je užitočné ako pre diagnostiku, tak aj pre prognózu priebehu mykóz.

biologická metóda. Používa sa na laboratórnu diagnostiku hlbokých a obzvlášť nebezpečných mykóz. Na základe infekcie zvierat patologickým materiálom od pacienta alebo kultúry študovanej huby. Vykonáva sa v špeciálnych laboratóriách.

HISTOLOGICKÁ ŠTÚDIA

Histológia kožných mykóz spôsobených dermatofytmi

Patologické zmeny v léziách sú spôsobené zavedením húb do stratum corneum epidermis, vlasov a nechtov a zápalovou reakciou kože, ktorá môže byť akútna, subakútna alebo chronická. Diagnózu možno považovať za stanovenú iba vtedy, ak sa v histologických prípravkoch nachádzajú prvky húb. Používajú sa na to rôzne histologické farbenia, najinformatívnejšia je reakcia kyseliny periodickej (PAS), ktorá umožňuje identifikovať polysacharidy prítomné v celulóze a chitíne bunkovej steny väčšiny dermatofytov (farba Shifu a jej modifikácie). Môžete tiež použiť sulfatačné reakcie a impregnáciu histologických rezov striebrom [Khmelnitsky OK, 1973; Lewer W. F. a Schaumburg-Lewerl., 1983].

Huby v stratum corneum epidermis, dokonca aj pri použití špeciálnych škvŕn, sú detegované v malých množstvách vo forme mycéliových vlákien a spór. V zriedkavých prípadoch, keď je v léziách veľa húb, ich možno nájsť v rezoch zafarbených hematoxylínom-eozínom ako jemné bazofilné štruktúry v stratum corneum.

Zápalové zmeny v epiderme sa môžu meniť od mierneho intra- a extracelulárneho edému ostnatých buniek až po závažnú spongiózu. Spongióza sa zvyčajne vyvíja s dyshidrotickými variantmi mykózy nôh a rúk, klinicky sú v týchto prípadoch zaznamenané vezikuly. Príčinou tejto reakcie býva T. mentagrophytes var. interdigitale. Niekedy je v epidermis zaznamenaná výrazná hyperkeratóza, ktorá sa najčastejšie pozoruje pri mykóze spôsobenej T. rubrum.

Histologické zmeny v derme sú nešpecifické a zodpovedajú akútnemu, subakútnemu a chronickému zápalu.

Pri mykóze hladkej kože spôsobenej T. rubrum sa niekedy v vellus vlasoch a vlasových folikuloch zistia plesne. Okolo folikulov vzniká zápalová reakcia, ktorá v dôsledku vstupu húb do dermis môže nadobudnúť granulomatózny charakter. Centrálna časť infiltrátu môže v týchto prípadoch podliehať hnisaniu a nekróze, zatiaľ čo periférna časť môže pozostávať z lymfocytov, histocytov, epiteloidných a mnohojadrových obrovských buniek, vo vnútri ktorých sa niekedy nachádzajú spóry húb. Veľkosť spór tu dosahuje v priemere 6 mikrónov, vo vlasoch zvyčajne nepresahuje 2 mikróny.

Pri infiltratívno-hnisavej forme mykózy pokožky hlavy a oblasti rastu brady a fúzov sa hubové prvky nachádzajú vo vlasovom folikule, vo vnútri a okolo vlasov. Vo vlasoch sa určujú tesne nad zónou začiatku keratinizácie (približne na úrovni 30 mikrónov). V derme je zaznamenaná zápalová reakcia rôznej intenzity, najvýraznejšia pri kerion Celsii. Pri akútnej purulentnej reakcii je v infiltráte zaznamenaný veľký počet neutrofilných leukocytov, hubové prvky môžu v tomto prípade úplne zmiznúť. V chronickom priebehu procesu môže infiltrát získať granulomatózny charakter, objavujú sa v ňom mnohojadrové obrovské bunky. Na potvrdenie diagnózy v neprítomnosti húb v infiltráte možno použiť metódy imunofluorescenčného farbenia. Na tieto účely sa používa fluoresceínom značené antisérum proti T. mentagrophytes, ktoré umožňuje detekovať plesňové antigény vo vlasoch a v perifolikulárnom infiltráte.

Vznik infiltratívno-hnisavej reakcie kože s mykózou pokožky hlavy (kerion Celsii) a oblasti rastu brady a fúzov spôsobenej hubami M. canis, T. tonsurans a T. verrucosum je prejavom imunologickej reakcie. Svedčí o tom:

1. Tendencia lézií k spontánnemu vyriešeniu.

2. Absencia hubových elementov s veľmi výraznou zápalovou reakciou z kože s mykózou spôsobenou T. verrucosum (faviforme) a T. tonsurans.

3. Konštantná pozitívna reakcia v reakcii na intradermálne podanie trichofytínu s infiltratívno-hnisavými formami mykózy spôsobených zoofilnými trichofytínmi (napríklad T. tonsurans) a negatívna - s povrchovými mykózami spôsobenými rovnakými T. tonsurans.

Pri favus sa v stratum corneum epidermis nachádza veľké množstvo mycéliových filamentov a jednotlivých spór huby. Scutula je reprezentovaná exsudátom, parakeratotickými bunkami epidermis, bunkami zápalového infiltrátu, ako aj mycéliovými filamentami a spórami húb, ktoré sa nachádzajú najmä v periférnej zóne scutula. V aktívnom štádiu ochorenia v derme okolo degeneratívnych vlasových folikulov je výrazný zápalový infiltrát obsahujúci mnohojadrové obrovské a plazmatické bunky. V starých léziách chýbajú vlasy a mazové žľazy, existujú javy fibrózy.

Histológia mykóz kože a slizníc spôsobených kvasinkovitými hubami

Pri kandidóze kože a slizníc sa huby rodu Candida nachádzajú v stratum corneum epidermis alebo v povrchových vrstvách epitelu sliznice. Hubových prvkov je zvyčajne málo, sú dobre zafarbené PAS-reakciou alebo Gramovou reakciou; prezentované vo forme vlákien septátového vetviaceho sa mycélia s priemerom 2 až 4 mikróny alebo vajcovitých spór s priemerom 3 až 5 mikrónov. Diagnostický význam má detekcia mycéliovej formy huby.

Pri histologickom vyšetrení chronickej granulomatóznej kandidózy kože a slizníc sa hubové elementy nachádzajú tiež prevažne v stratum corneum epidermis alebo v najvrchnejších častiach epitelu sliznice, ale niekedy aj v tŕňovej vrstve vo vnútri vo vlasoch a v derme. Existuje tiež výrazná hyperkeratóza a papilomatóza; v dermis - hustý zápalový infiltrát pozostávajúci z lymfoidných buniek, neutrofilov, plazmy a mnohojadrových obrovských buniek. Infiltrát môže zasahovať do podkožného tukového tkaniva.

Pri pityriasis versicolor sa v stratum corneum epidermis nachádza veľké množstvo hubových prvkov vo forme jemných bazofilných štruktúr, ktoré sú jasne viditeľné aj pri farbení prípravkov hematoxylínom-eozínom. Huby sú zastúpené vláknami aj spórami.

Pri folikulárnej forme pityriasis versicolor dochádza k akumulácii rohovitých hmôt a buniek zápalového infiltrátu vo zväčšených ústach vlasových folikulov. Okolo folikulov je tiež zaznamenaný zápalový infiltrát. Pri PAS reakcii sa vo vnútri úst vlasových folikulov a niekedy v perifolikulárnom infiltráte nachádzajú guľovité alebo oválne spóry huby s priemerom 2-4 µm. Mycélium nie je nikdy odhalené.

Porušenie pigmentácie kože u pacientov s pityriasis versicolor je spôsobené schopnosťou huby Pityrosporum produkovať látku, ktorá inhibuje proces tvorby pigmentu v epidermis. Elektrónové mikroskopické vyšetrenie biopsií kože z hypopigmentovaných oblastí ukázalo, že v melanocytoch sa tvoria veľmi malé melanozómy, ktoré nie sú schopné preniknúť do keratinocytov. V hyperpigmentovaných oblastiach kože sú naopak melanozómy veľké a obsahujú veľké množstvo melanínu.

Podľa štatistík asi 20% obyvateľov našej krajiny tak či onak trpí mykózou. Nie všetci však vyhľadajú odbornú pomoc. Jedným z dôvodov je, že ľudia jednoducho nepoznajú všetky príznaky a prejavy tohto ochorenia.

Príznaky mykózy

V prvom rade stojí za zmienku, že nejde o špecifickú chorobu, ale o skupinu rôznych plesňových lézií kože a jej príloh. Príznaky preto môžu byť dosť rôznorodé, najčastejšie sa však uvádzajú:

• Vzhľad šupinatých škvŕn na koži. Najčastejšie sa objavujú medzi prstami, na koži nôh. Často spôsobujú svrbenie, podráždenie a iné nepríjemné pocity.
• Zmena farby a štruktúry nechtov. Stávajú sa žltkastými, krehkými, drobia sa a odlupujú, ich povrch môže byť hrboľatý a nerovný.
• Trhliny v koži. Často s plesňovými infekciami kože nôh zhrubne a začne zle praskať.
• Zlý zápach. Mnoho pacientov sa sťažuje na nepríjemný zápach z postihnutej kože, najmä s mykózou nôh.

Keď sa takéto príznaky objavia, je potrebné čo najskôr navštíviť dermatológa a vykonať úplnú diagnostiku, aby sa zistilo, ktorý typ mykózy postihol kožu.

Metódy diagnostiky mykóz

Keď sa pacienti obrátia na dermatológa s charakteristickými znakmi plesňových kožných lézií, potom najčastejšie na stanovenie diagnózy lekárovi stačí primárne externé vyšetrenie. Jedinou otázkou je, aký typ mykózy postihol kožu.

Tieto informácie sú potrebné na určenie ďalšej liečebnej stratégie. Na diagnostiku mykózy možno použiť nasledujúce metódy:

• Woodova lampová štúdia. Špeciálne spektrum ultrafialového svetla vám umožňuje určiť prítomnosť plesňových infekcií. Táto metóda je veľmi jednoduchá a cenovo dostupná, s jej pomocou môžete nielen stanoviť diagnózu, ale aj sledovať priebeh liečby. Ale neumožňuje určiť typ mykózy.
• Mikroskopia. Jednou z najjednoduchších a najbežnejších metód diagnostiky mykózy je mikroskopické vyšetrenie zoškrabov tkanív postihnutých hubou. Za týmto účelom sa umiestni na podložné sklo. Existujú dva typy škrabania: pomocou škvŕn a pomocou rozjasňovačov.
• Bakteriologická kultúra. Jednou z najpresnejších diagnostických metód je siatie v nádrži na živné médiá. Podľa vzhľadu a vlastností pestovaných kolónií huby môže lekár určiť typ patogénu. Nevýhodou tejto metódy je trvanie, pestovanie kolónie môže trvať 2-3 týždne. Okrem toho je možné získať výsledok iba v polovici prípadov.
• PCR diagnostika. Ide o jednu z najpresnejších a najmodernejších diagnostických metód, ale na určenie typu mykózy môže byť potrebných niekoľko testov, čo si vyžaduje určité náklady.

Stojí za zmienku, že diagnostika mykózy je potrebná na určenie najefektívnejšieho spôsobu liečby tejto choroby. A ak nie je možné ihneď navštíviť odborníka, môžete využiť službu poskytovanú našou klinikou a

Prvý príjem

Pri vymenovaní mykológ vykoná vyšetrenie a tiež predpíše komplexnú štúdiu.

Laboratórna diagnostika

Najúčinnejšou metódou diagnostiky kožných mykóz sú rôzne laboratórne testy, ktoré dokážu identifikovať patogén a pomôcť pri výbere terapeutického režimu. Na identifikáciu pôvodcu mykózy sú predpísané nasledujúce laboratórne testy:

• histologická analýza;
• bakteriologická kultúra;
• imunologický výskum;
• PCR diagnostika;
• kultúrne vyšetrenie;
• mikrobiologický výskum.

Mikrobiologická diagnostika pomáha odhaliť hubu, určiť jej rod a druh.

Mikrobiologická diagnostika je najbežnejšou a najjednoduchšou metódou na zistenie mykózy v krvi a na koži. Na identifikáciu presnej diagnózy by ste mali vedieť, ako správne zbierať materiál, ktorý je potrebný v štúdii. Postihnuté vlasy by sa mali zbierať pinzetou. Ak je koža infikovaná, potom pre mikroskopiu by sa mala koža zoškrabať z poškodenej oblasti. Všetok odobratý materiál sa umiestni do 30 % roztoku hydroxidu draselného a potom na podložné sklíčko. Mikrobiologická diagnostika dokáže presne určiť, kde sa huba nachádza (vo vnútri alebo mimo vlasu, pokožky) a jej veľkosť.

Aby sa predišlo chybnej diagnóze mykózy, je potrebné správne a kompetentne odobrať materiál na mikrobiologické vyšetrenie.

V medicíne existujú také metódy mikrobiologickej diagnostiky:

• Mikroskopia s použitím natívnych alebo nefarbených prípravkov. Na tento účel sa materiál vyčíri 10-30% roztokmi hydroxidu draselného alebo sodného. Potom sa spracovaný materiál umiestni na laboratórne sklo, kde sa predtým nakvapkalo trochu glycerínu. Vrch zakryte sklenenou doskou a vykonajte analýzu.
• Mikroskopia zafarbených prípravkov sa uskutočňuje niekoľkými spôsobmi, ktoré identifikujú baktérie, rozlišujú rôzne baktérie a identifikujú rôzne huby.

Bakteriologická kultúra

Bakteriologická kultivácia je jednou z najúčinnejších metód diagnostiky.

Zber bakteriologického výsevu na živnom médiu je presným spôsobom diagnostiky mykózy. Vzhľadom na vzhľad a vlastnosti pestovanej kolónie huby dermatológ určuje typ patogénu, ktorý spôsobil mykózu. Jedinou nevýhodou prieskumu je, že pestovanie kolónie trvá dlho. Zistenie kmeňa patogénu trvá v priemere asi 3 týždne. V niektorých prípadoch metóda neprináša očakávané výsledky.

PCR diagnostika

Diagnostická metóda PCR zahŕňa identifikáciu pôvodcu mykózy pomocou polymerázovej reťazovej reakcie. Počas vyšetrenia sa zvyšuje citlivosť hybridizácie, čím sa zvyšuje obsah vírusovej DNA v testovanom materiáli. Táto vyšetrovacia metóda je nová a vyžaduje si od pacienta niekoľko testov. Predpokladá sa, že tento typ diagnostiky je dosť drahý, ale poskytuje presné výsledky.

Kultúrna skúška

V konečnom štádiu diagnózy sa odporúčajú kultúrne diagnostické opatrenia. Metóda spočíva v získaní kultúry huby, ktorá sa následne odošle na vyšetrenie pomocou mikroskopu. Výsledný materiál sa umiestni na umelo vytvorenú živnú pôdu a identifikuje sa typ patogénu, vzhľad, veľkosť. Potom sa ukáže špeciálna liečba, ktorá je zameraná na boj proti špecifickému typu pôvodcu mykózy.

Na diagnostiku mykóz možno použiť mikroskopické, mykologické (kultúrne), alergické, sérologické, biologické a histologické metódy výskumu. V závislosti od patogenézy môže byť materiálom na výskum hnis, spútum, postihnuté vlasy, nechty, kožné vločky, kostná dreň, lymfatické uzliny, vnútorné orgány, krv, žlč, výkaly, tkanivové biopsie atď.

Mikroskopické vyšetrenie zahŕňa mikroskopiu natívnych (nezafarbených) a zafarbených náterov. Na prípravu natívnych prípravkov sa vlasy, kožné škrabance a nechty číria v 10,30 % roztokoch KOH alebo NaOH. Materiál ošetrený alkáliou sa umiestni na podložné sklíčko v kvapke glycerolu, prekryje sa krycím sklíčkom a podrobí mikroskopii (možno použiť fázovo kontrastnú mikroskopiu), čo umožňuje študovať štruktúru huby, umiestnenie huby. spór, ale konečný záver o druhu huby možno urobiť až po kultúrnych štúdiách.

Na farbiace nátery sa najčastejšie používajú metódy Gram, Ziehl.Nielsen, Romanovsky-Giemsa. Na farbenie dermatofytov sa používajú aj metódy Sabura, Adamsona a iných.

Uskutočňuje sa kultúrna (mykologická) štúdia s cieľom izolovať čistú kultúru huby a identifikovať ju. Používajú sa tuhé a tekuté živné pôdy (Saburo, mladinový agar, Chapek atď.). Inkubácia v termostate (22,28ºС) je dlhá (3,4 týždňa). Čistá kultúra huby je identifikovaná kombináciou znakov: tvar kolónií, ich farba, konzistencia, mikroskopický obraz (povaha mycélia, umiestnenie spór, konídiofory) a ďalšie znaky. Sérologické reakcie na diagnostiku plesňových ochorení sa vykonávajú s hubovými antigénmi podľa všeobecne uznávaných metód, ako aj na diagnostiku iných infekčných ochorení (RA, RP, RSK, RNGA, RIF atď.).

Alergické testy sa môžu uskutočniť podľa všeobecne uznávaných metód intradermálnym podaním vhodných alergénov (polysacharidové a proteínové frakcie z buniek alebo bunkových membrán, suspenzia buniek usmrtených húb, kultivačné filtráty). Na detekciu HNT môžete použiť test degranulácie tkanivových a sérových bazofilov a na detekciu HTH, reakciu inhibície migrácie fagocytov, blastickú transformáciu lymfocytov.

Biologický výskum sa uskutočňuje na laboratórnych modeloch (myši, potkany, morčatá, králiky, psy, mačky). Biologický model mykózy sa používa na identifikáciu patogenity patogénu, izoláciu čistej kultúry a štúdium nových antimykotík. Histologické vyšetrenie umožňuje odhaliť hubu v tkanivách, študovať jej morfológiu a znaky patologického procesu, ktorý spôsobuje v tele.