Analýza na syfilis ELISA - dekódovanie analýzy. Norma a odchýlky

V súvislosti s rozvojom bunkových technológií, molekulárnej biológie, genetiky, fyziky, chémie a množstva ďalších high-tech disciplín sa do každodennej praxe zavádzajú nové vysoko presné a high-tech metódy. Tieto interdisciplinárne trendy ovplyvňujú tak oblasť medicínskeho poznania, ako aj súvisiace oblasti biologických a biochemických problémov. Za posledných desať rokov sa rozšírila a zaviedla do masovej praxe metóda klinickej laboratórnej diagnostiky nazývaná enzýmová imunoanalýza.

Vo všeobecnosti sa technológie imunologických enzymatických a rádiologických reakcií široko používajú pri typizácii buniek, bunkových kultúr a rôznych tkanív od začiatku 80. rokov 20. storočia. Tieto metódy však boli veľmi prácne, nejednotné, neštandardizované, čo vylučovalo ich použitie na medicínske a diagnostické účely v masovom meradle. Takéto metódy používali len úzke, znalostne náročné a vysoko špecializované laboratóriá.

S rozvojom technológie, mikrotechnológie a výroby rôznych biopolymérnych materiálov je však možné vyrábať hotové súpravy na enzýmovú imunoanalýzu, ktoré môžu používať laboratóriá všeobecných zdravotníckych zariadení. ELISA je široko používaná na diagnostiku všetkých druhov infekcií (chlamýdie, syfilis, cytomegalovírus, toxoplazmóza, herpes atď.), akútnych aj chronických, ako aj latentných foriem, ktoré prebiehajú bez klinických príznakov.Táto metóda sa používa aj na kontrolu chronických ochorení . Pokúsme sa zistiť, o aký druh metódy ide a aké princípy sú jej základom?

Zložky enzýmovej imunoanalýzy – imunitná reakcia a enzymatická reakcia

Enzýmová imunoanalýza, ako už názov napovedá, pozostáva z dvoch rôznych zložiek – imunitnej odpovede a enzymatickej reakcie. Imunitná reakcia vytvára väzbu biologických molekúl, elementov bunky alebo mikroorganizmu, ktoré sa vlastne snažia detekovať a enzymatická reakcia umožňuje vidieť a zmerať výsledok imunologickej reakcie. To znamená, že imunitná odpoveď je súčasťou komplexnej techniky, ktorá skutočne deteguje požadovaný mikrób. A enzymatická reakcia je tá časť komplexnej techniky, ktorá umožňuje previesť výsledok imunitnej reakcie do formy, ktorá je viditeľná okom a dostupná na meranie rutinnými chemickými metódami. Na základe tejto štruktúry metódy enzýmovej imunoanalýzy budeme analyzovať obe jej časti oddelene.

Imunitná reakcia, čo to je? Čo je to protilátka alebo antigén?

Čo je imunitná odpoveď? Čo je to antigén?
Najprv sa pozrime, čo sú imunitné reakcie. imunitné reakcie- Ide o špecifické reakcie väzby antigénu na protilátku s tvorbou imunitného komplexu. Čo to znamená? Na povrchu každej bunky akéhokoľvek organizmu sa nachádzajú špeciálne štruktúry tzv antigény. Antigény sú vo všeobecnosti molekuly, ktoré nesú informáciu o bunke (podobne ako informácia na odznaku osoby, ktorá označuje základné údaje tejto osoby).

Individuálne a druhové antigény - čo to je? Prečo sú potrebné tieto antigény?

Dostupné antigény individuálne, teda vlastné iba tomuto konkrétnemu organizmu. Tieto jednotlivé antigény sú u všetkých ľudí rôzne, niektoré sú si navzájom podobné, no predsa odlišné. V prírode neexistujú dve identické kópie jednotlivých antigénov!

Druhým hlavným typom antigénov je druhové antigény, to znamená, že sú vlastné každému konkrétnemu druhu živých bytostí. Napríklad ľudia majú svoj vlastný druhový antigén spoločný pre všetkých ľudí, myši majú svoj vlastný myší druhový antigén atď. Na povrchu každej bunky je nevyhnutne prítomný špecifický a individuálny antigén.

Druhový antigén používajú bunky imunitného systému na identifikáciu „priateľa alebo nepriateľa“.

Ako prebieha rozpoznávanie antigénu?

Imunitná bunka sa naviaže na podozrivú bunku a vykoná identifikáciu presne podľa jednotlivého antigénu. V pamäti imunitnej bunky je „zaznamenané“, ako vyzerá „jej antigén“. Ak teda antigén podozrivej bunky zodpovedá popisu „vlastný antigén“, potom táto bunka vlastného tela nepredstavuje nebezpečenstvo. Potom sa imunitná bunka „rozviaže“ a odíde. A ak antigén nezodpovedá popisu „ja“, potom imunitná bunka identifikuje túto bunku ako „cudziu“, a teda potenciálne nebezpečnú pre celý organizmus. V tomto prípade sa imunitná bunka „nezbaví“, ale začne ničiť nebezpečný predmet. Presnosť takéhoto imunologického rozpoznávania je úžasná – 99,97 %. Neexistujú takmer žiadne chyby!

Čo je to protilátka, imunitný komplex?
Čo je to protilátka?

Protilátka je špeciálna molekula umiestnená na povrchu imunitnej bunky. Je to protilátka, ktorá sa viaže na antigény podozrivej bunky. Protilátka ďalej prenáša informácie vo vnútri bunky, kde prebieha identifikácia, a prijíma spätný signál dvoch typov, „vlastný“ alebo „cudzí“. Na signál „vlastný“ protilátka zničí väzbu s antigénom a uvoľní bunku.

Čo je to imunitný komplex?
So signálom „cudzinec“ sa situácia vyvíja inak. Protilátka nepreruší spojenie s antigénom, ale naopak, vyslaním špecifických signálov spôsobí „zosilnenie“. Biologicky to znamená, že do oblasti, odkiaľ prichádza signál nebezpečenstva, sa začnú presúvať ďalšie protilátky nachádzajúce sa v inej časti bunky a tiež vytvoria väzbu medzi sebou a zachyteným antigénom. Nakoniec sa ukáže, že antigén je zo všetkých strán obklopený a pevne pripevnený.Takýto komplex antigén + protilátka sa nazýva imunitný komplex. Od tohto momentu začína využitie antigénu. Ale teraz nás nezaujímajú detaily procesu neutralizácie antigénu.

Typy protilátok (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Protilátky sú proteínové štruktúry, ktoré majú teda chemický názov, ktorý sa používa ako synonymum pre slovo protilátka. takže, protilátky = imunoglobulíny.

Existuje 5 typov imunoglobulínov (Ig), ktoré sa viažu na rôzne typy antigénov na rôznych miestach ľudského tela (napríklad na koži, na slizniciach, v krvi a pod.). To znamená, že protilátky majú deľbu práce. Tieto imunoglobulíny sa nazývajú písmená latinskej abecedy - A, M, G, D, E a sú označené nasledovne - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

V diagnostike sa používa len jeden typ protilátky, ktorý je najšpecifickejší pre určovaného mikróba. To znamená, že vždy nastane väzba tohto typu protilátky na stanovovaný antigén. Najčastejšie sa používajú IgG a IgM.

Práve tento princíp imunitnej odpovede (jedinečná presnosť a špecifickosť rozpoznávania biologického objektu, ktorý sa určuje), je základom enzýmového imunotestu.Vďaka vysokej presnosti protilátok pri rozpoznávaní antigénov je presnosť celej metódy enzýmového imunotestu najvyšší.

enzymatickej reakcie

Čo je to enzymatická reakcia? Čo je afinita, substrát a reakčný produkt?
Obráťme sa na zváženie enzymatickej reakcie v práci metódy enzýmového imunotestu.

Čo je to enzymatická reakcia?

Enzymatická reakcia je chemická reakcia, pri ktorej sa jedna látka premieňa na inú pôsobením enzýmu. Látka, na ktorú enzým pôsobí, sa nazýva substrát. Látka, ktorá sa získa v dôsledku pôsobenia enzýmu, sa nazýva reakčný produkt. Okrem toho je zvláštnosť enzymatickej reakcie taká, že určitý enzým pôsobí iba na určitý substrát. Táto vlastnosť enzýmu rozpoznať svoj „vlastný“ substrát sa nazýva afinita.

Každý enzým teda vykonáva iba jednu preň špecifickú reakciu. V biologickom svete existuje veľké množstvo enzýmov, ako aj enzymatických reakcií. V enzýmovom imunoteste sa používa len niekoľko enzymatických reakcií - nie viac ako 10. V tomto prípade boli zvolené také enzymatické reakcie, ktorých produktom sú farebné látky. Prečo by mali byť produkty enzymatickej reakcie zafarbené? Pretože existuje jednoduchá chemická metóda na výpočet koncentrácie látky z farebného roztoku - kolorimetria.

Kolorimetrická metóda – podstata a princíp

Kolorimetria využíva meranie hustoty farby roztoku a z hustoty farby sa vypočítava koncentrácia látky.V tomto prípade špeciálny prístroj - kolorimeter meria hustotu farby roztoku. V kolorimetrii sú možné dva varianty závislosti hustoty farby od koncentrácie látky - ide o priamoúmernú závislosť alebo nepriamoúmernú závislosť. Pri priamo úmernom vzťahu platí, že čím vyššia je koncentrácia látky, tým intenzívnejšia je hustota farby roztoku. V nepriamo úmernom vzťahu platí, že čím vyššia je koncentrácia látky, tým nižšia je hustota farby roztoku. Technicky sa to deje takto: odoberie sa niekoľko roztokov so známou koncentráciou látky, zmeria sa hustota týchto roztokov a vykreslí sa graf závislosti koncentrácie od hustoty farby ( kalibračný graf).

Ďalej sa meria hustota farby roztoku, ktorého koncentrácia sa určuje a podľa kalibračného grafu sa automaticky zistí hodnota koncentrácie zodpovedajúca úrovni nameranej hustoty farby roztoku.

V enzýmovom imunoteste sa najčastejšie používajú tieto enzýmy: peroxidáza, alkalická fosfatáza, avidín.

Ako sa kombinujú imunologické a enzymatické reakcie v enzýmovom imunoteste? Teraz prejdeme k úvahe o samotnej enzýmovej imunoanalýze. Aké kroky zahŕňa a čo sa deje počas týchto reakcií? Enzýmová imunoanalýza je priame a nepriame.

Priama enzýmová imunoanalýza - etapy implementácie

Pri priamom enzýmovom imunoteste sa používajú protilátky proti detegovanému antigénu v kombinácii so špecifickou značkou. Táto špecifická značka je substrátom enzymatickej reakcie.

Prichytenie antigénov na povrch jamky a väzba antigénu na protilátku

Ako sa vykonáva priamy enzýmový imunotest? Odoberie sa biologický materiál (krv, škrabky zo slizníc, šmuhy) a umiestni sa do špeciálnych studní. Biologický materiál sa ponechá v jamkách 15-30 minút, aby antigény mohli priľnúť na povrch jamiek. Ďalej sa do týchto jamiek pridajú protilátky proti detegovanému antigénu. To znamená, že pri detekcii antigénov, napríklad syfilisu, sa pridávajú protilátky proti antigénom syfilisu. Tieto protilátky sú vyrábané priemyselne a laboratóriá kupujú hotové súpravy.Táto zmes testovacieho materiálu a protilátok sa nechá nejaký čas (od 30 minút do 4-5 hodín), aby protilátky našli a naviazali sa na „svoj“ antigén. vzorky antigénov, tým viac protilátok sa na ne naviaže.

Odstránenie "extra" protilátok

Ako je uvedené, protilátky sú tiež spojené so špecifickou značkou. Keďže protilátky sú pridané v nadbytku, nie všetky sa naviažu na antigény, a ak vo vzorke nie je žiadny antigén, potom sa nenaviaže ani jedna protilátka. na požadovaný antigén. Aby sa odstránili "extra" protilátky, obsah jamiek sa jednoducho naleje. Výsledkom je, že všetky "extra" protilátky sú odstránené a tie, ktoré sa dostali do kontaktu s antigénmi, zostávajú, pretože antigény sú "prilepené" k povrchu jamiek. Jamky sa niekoľkokrát prepláchnu špeciálnym roztokom, ktorý vám umožní vymyť všetky "extra" protilátky.

Potom začína druhá fáza - enzymatická reakcia. Roztok s enzýmom sa pridá do premytých jamiek a nechá sa 30-60 minút. Tento enzým má afinitu k látke (špecifická značka), na ktorú sú protilátky naviazané. Enzým vykoná reakciu, v dôsledku ktorej sa táto špecifická značka (substrát) premení na farebnú látku (produkt). Potom sa koncentrácia tejto farebnej látky zistí kolorimetriou. Keďže toto špecifické označenie je spojené s protilátkami, znamená to, že koncentrácia farebného reakčného produktu sa rovná koncentrácii protilátok. A koncentrácia protilátok sa rovná koncentrácii antigénov. Ako výsledok analýzy teda dostaneme odpoveď, aká je koncentrácia detekovaného mikróbu alebo hormónu.

Takto funguje priama enzýmová imunoanalýza. Dnes sa však častejšie používa nepriama enzýmová imunoanalýza, pretože citlivosť a presnosť nepriameho je vyššia ako u priameho. Prejdime teda k nepriamej enzýmovej imunoanalýze.

Nepriamy enzýmový imunotest - kroky

Nepriamy enzýmový imunotest má dve fázy. V prvej fáze sa používajú neznačené protilátky proti detekovaným antigénom a v druhej fáze sa používajú značené protilátky proti prvým neznačeným protilátkam. To znamená, že sa nedosiahne priama väzba protilátky na antigén, ale dvojitá kontrola: väzba protilátok na antigén, po ktorej nasleduje väzba druhej protilátky na komplex protilátka + antigén. Protilátky pre prvé štádium sú spravidla myši a pre druhé štádium kozie.

Fixácia antigénov na povrchu jamky a väzba antigénu na neznačenú protilátku
Rovnako ako na priamu enzýmovú imunoanalýzu sa odoberá biologický materiál - krv, stery, stery. Študovaný biologický materiál sa zavedie do jamiek a nechá sa 15-30 minút, aby antigény priľnuli na povrch jamiek. Potom sa do jamiek pridajú neoznačené protilátky proti antigénom a nechajú sa po určitú dobu (1-5 hodín), aby sa protilátky naviazali na „svoje“ antigény a vytvorili imunitný komplex ( Prvý krok). Potom sa „extra“ nenaviazané protilátky odstránia vyliatím obsahu jamiek. Premývanie sa vykonáva špeciálnym roztokom na úplné odstránenie všetkých nenaviazaných protilátok.

Väzba značenej protilátky na komplex antigén + neznačená protilátka
Potom sa odoberú druhé protilátky - označia sa, pridajú do jamiek a opäť sa chvíľu nechajú - 15-30 minút ( druhá fáza). Počas tejto doby sa značené protilátky naviažu na prvú – neznačenú a vytvoria komplex – protilátka + protilátka + antigén. Avšak značené aj neznačené protilátky sa pridávajú do jamiek v nadbytku. Preto je potrebné opäť odstrániť „nadbytočné“, už značené protilátky, ktoré sa nenaviazali na neznačené protilátky. Za týmto účelom zopakujte postup na nalievanie obsahu jamiek a umývanie špeciálnym roztokom.

Enzymatická reakcia – vznik farebnej zlúčeniny
Potom sa zavedie enzým, ktorý vykoná reakciu premeny "štítky" na farebnú látku. Farba sa rozvinie do 5-30 minút. Potom sa uskutoční kolorimetria a vypočíta sa koncentrácia farebnej látky. Pretože koncentrácia farebnej látky sa rovná koncentrácii značených protilátok a koncentrácia značených protilátok sa rovná koncentrácii neznačených protilátok, čo sa zase rovná koncentrácii antigénu. Takto získame koncentráciu detegovaného antigénu.
Takáto dvojitá kontrola v podobe použitia dvoch typov protilátok umožnila zvýšiť senzitivitu a špecifickosť metódy enzýmovej imunoanalýzy. Napriek predĺženiu času analýzy a zahrnutiu ďalších etáp sú tieto straty kompenzované presnosťou výsledku. To je dôvod, prečo v súčasnosti prevažná väčšina metód enzýmovej imunoanalýzy sú nepriame enzýmové imunoanalýzy.

Aké choroby sa zisťujú enzýmovou imunoanalýzou?

Prejdime k úvahám o tom, aké choroby a aké biologicky aktívne látky sa zisťujú enzýmovou imunoanalýzou. Látky detekované enzýmovým imunotestom sú uvedené v tabuľke.

Hormóny a markery ochorenia štítnej žľazy	tyreoperoxidáza (TPO)
	tyreoglobulín (TG)
	Hormón stimulujúci štítnu žľazu (TSH)
	tyroxín (T4)
	trijódtyronín (T3)
	Voľný tyroxín (T4)
	Voľný trijódtyronín (T3)
Diagnostika reprodukčných funkcií	luteinizačný hormón (LH)
	Folikuly stimulujúci hormón (FSH)
	Prolaktín
	Progesterón
	Estradiol
	Testosterón
	kortizolu
	Steroid viažuci globulín (SHB)
	Alfafetoproteín (AFP)
nádorové markery	Chorionický gonadotropín (CG)
	Prostatický špecifický antigén (PSA)
	SA - 125
	SO - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SO - 15.3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1(M–20)
	Alveomucin
	K - reťaz
	L - reťaz
	Tumor nekrotizujúci faktor (TNFα)
	y - interferón
	Rakovinovo-embryonálny antigén (CEA)
Diagnostika infekčných chorôb

ELISA je moderná laboratórna štúdia, počas ktorej sa hľadajú špecifické krvné protilátky (alebo antigény) na špecifické ochorenia s cieľom identifikovať nielen etiológiu, ale aj štádium ochorenia.

1. hľadanie špecifických protilátok proti akejkoľvek infekčnej chorobe;
2. hľadanie antigénov akýchkoľvek infekčných chorôb;
3. štúdium hormonálneho stavu pacienta;
4. vyšetrenie na prítomnosť autoimunitných ochorení.

Ako každá metóda laboratórnej diagnostiky, aj ELISA má svoje výhody a nevýhody. Medzi výhody metódy patrí:

1. vysoká špecifickosť a citlivosť metódy (viac ako 90 %);
2. schopnosť určiť ochorenie a sledovať dynamiku procesu, to znamená porovnávať množstvo protilátok v rôznych časových intervaloch;
3. dostupnosť a rýchlosť tejto štúdie;
4. neinvazívna metóda odberu vzoriek materiálu nie je štúdiou;

Nevýhodou metódy je skutočnosť, že pri analýze je možné identifikovať nie pôvodcu ochorenia, ale iba imunitnú odpoveď naň (protilátky).

Podstata metódy ELISA

Existuje niekoľko typov ELISA: priama, nepriama, metóda blokovania, kompetitívna. V praxi sa však najčastejšie používa heterogénna imunoanalýza na pevnej fáze alebo ELISA.

Základom enzymatickej imunoanalýzy je imunitná reakcia antigénu a protilátky s tvorbou imunitného komplexu, výsledkom čoho je zmena enzymatickej aktivity špecifických značiek na povrchu protilátok.

V skutočnosti možno tento proces rozdeliť do niekoľkých etáp:

1. na povrchu jamiek testovacieho systému je purifikovaný antigén určitého patogénu. Keď sa pridá krvné sérum zvieraťa, dôjde k špecifickej reakcii medzi týmto antigénom a požadovanou protilátkou;
2. ďalej sa do jamky pridá špeciálny chromogén (konjugát značený peroxidázou). Dochádza k enzymatickej reakcii, ktorej výsledkom je vytvorenie farebnej látky v jamke tablety. Intenzita jeho farby závisí od množstva imunoglobulínov (protilátok) obsiahnutých v sére zvieraťa;
3. Nasleduje vyhodnotenie výsledku. Pomocou viackanálového spektrofotometra sa porovnáva optická hustota testovaného materiálu s optickou hustotou kontrolných vzoriek a výsledky sú matematicky spracované. Množstvo protilátok u pacienta priamo závisí od výšky optickej hustoty danej jamky.

Je potrebné mať na pamäti: pre každý testovací systém sa vyvíjajú jednotlivé ukazovatele, aby sa zohľadnili výsledky, ukazovatele normy a patológie („referenčné hodnoty“). Toto by sa malo brať do úvahy pri hodnotení výsledkov každej konkrétnej štúdie.

Nie je správne interpretovať výsledky jedného laboratória z „referenčných hodnôt“ iného laboratória. Rovnako je nesprávne porovnávať výsledky rôznych laboratórií medzi sebou.

Pri hodnotení výsledkov pre špecifické infekcie je dôležitá trieda zistených protilátok a ich počet. Od toho závisí nielen otázka etiológie infekcie, ale aj očakávané štádium ochorenia (akútne, chronické), ako aj prítomnosť aktívnej infekcie (akútna alebo exacerbácia chronickej) v čase vyšetrenia. .

Aké je približné načasovanie výskytu protilátok?

Najskoršie protilátky sú IgM. Môžu byť zistené 1-3 týždne po možnej infekcii, ktorá charakterizuje akútnu fázu infekčného procesu. Druhou situáciou výskytu protilátok IgM je exacerbácia chronického procesu. IgM cirkulujú v priemere asi 3 mesiace, potom ich počet postupne mizne. U niektorých pacientov sa však stopové množstvá IgM môžu zistiť v priebehu 1-2 rokov od infekcie.

Od 4. týždňa po infekcii sa začínajú objavovať protilátky IgG. Pri väčšine infekcií sa ich titer postupne zvyšuje s maximom v rôznych časoch (v priemere po 1,5-2 mesiacoch), potom zostáva titer na nízkej úrovni a indikuje imunitu. Pri niektorých ochoreniach nie je hladina IgG vysoká.

Možnosti detekcie protilátok

• Izolovaná detekcia IgM protilátok naznačuje primárnu infekciu.
• Súčasná detekcia IgM a IgG v krvi je typická pre primárnu infekciu v predchádzajúcich 2-3 mesiacoch, ako aj počas exacerbácie chronického ochorenia.
• Detekcia IgG v izolácii môže naznačovať imunitu voči ochoreniu aj chronickú infekciu. V druhej situácii záleží na množstve protilátok (titra), ako aj na zmene tohto titra v čase. Typicky sa štúdie vykonávajú v intervaloch 2-4-6 týždňov.

Analýza ELISA je moderná technika laboratórnej diagnostiky veľkého počtu rôznych ochorení. Skratka znamená enzýmový imunotest. Podstatou techniky je stanovenie titra (aktivity) protilátok.

Technika ELISA dnes získava značnú popularitu. Používa sa v klinickej medicíne na diagnostiku rôznych patológií, ako aj v experimentálnych štúdiách, ktoré vyžadujú presné stanovenie koncentrácie rôznych zlúčenín v študovaných médiách.

Princíp techniky ELISA

ELISA je imunologická reakcia. Je založená na pridaní špecifických protilátok
alebo antigénov do testovacieho média (najčastejšie testovanej krvi) s následným enzymatickým stanovením koncentrácie výsledných komplexov antigén-protilátka. Podľa koncentrácie komplexu je možné posúdiť hladinu alebo aktivitu analytu v testovacom médiu.

Stanovenie koncentrácie komplexov antigén-protilátka sa zvyčajne uskutočňuje pomocou špeciálneho zariadenia chromatografickou metódou.

Indikácie na vykonávanie

Analýza ELISA sa vykonáva pre rôzne indikácie, z ktorých hlavné v klinickej medicíne sú:

• Diagnóza infekčnej patológie s prevažne sexuálnym prenosom (STI), ktorá zahŕňa chlamýdie, mykoplazmózu, ureaplazmózu, trichomoniázu, pričom sa zisťujú špecifické protilátky proti infekčnému agens.
• Diagnostika infekčných ochorení rôznej lokalizácie na určenie štádia patologického procesu, predovšetkým v procese diagnostiky parenterálnej vírusovej hepatitídy a HIV.
• Stanovenie koncentrácie hormónov na diagnostiku rôznych patológií orgánov endokrinného systému (žliaz s vnútornou sekréciou).
• Stanovenie rôznych zlúčenín na diagnostiku príčiny intoxikácie tela v prípade otravy, uhryznutia hmyzom alebo hadom.

S týmito zdravotnými indikáciami sa vykonáva krvný test ELISA. Táto technika sa tiež aktívne používa v experimentálnej medicíne počas rôznych klinických štúdií počas vývoja nových liekov, vakcín na imunoprofylaxiu.

Ako prebieha štúdia

Krvný test ELISA sa vykonáva v špecializovanom laboratóriu. Predtým sa na jeho realizáciu odoberá venózna krv, zvyčajne z kubitálnej žily v objeme 5-10 ml, ktorá sa následne posiela do laboratória. V priemere je možné výsledok analýzy získať hneď nasledujúci deň, čo je dôležitý bod pre rýchle vymenovanie liečby po stanovení diagnózy ochorenia.

Ako sa pripraviť na ELISA

Ak chcete získať spoľahlivé výsledky štúdie pomocou enzýmového imunotestu, mali by ste dodržiavať niekoľko jednoduchých prípravných odporúčaní, ktoré zahŕňajú:

• Deň pred testom by ste mali prestať jesť tučné jedlá (mäso, údeniny) a alkohol.
• Materiál na výskum sa musí užívať ráno na prázdny žalúdok.
• V deň štúdie je žiaduce vyhnúť sa fyzickému a psycho-emocionálnemu stresu.
• Pred štúdiom sa musíte pokúsiť nefajčiť.

Väčšina získaných falošne pozitívnych výsledkov enzýmového imunotestu je spôsobená nesprávnou implementáciou prípravných odporúčaní. To je vo väčšine prípadov spojené s konzumáciou mastných jedál, ktoré vedú k zvýšeniu koncentrácie triglyceridov (tukov) v krvnej plazme, ktoré znižujú špecificitu testu ELISA.

Dešifrovanie výsledkov

Krvný test na protilátky pomocou ELISA má 2 modifikácie – kvalitatívne a kvantitatívne stanovenie. o
kvalitatívne stanovenie protilátok, výsledok môže byť pozitívny (detegujú sa protilátky, čo naznačuje možnú prítomnosť patologického procesu spôsobeného infekčným agensom) alebo negatívny (neexistujú žiadne protilátky, čo naznačuje absenciu infekčného procesu).

Neprítomnosť protilátok nie je vždy 100% indikátorom neprítomnosti infekčného procesu. Je to spôsobené tým, že po infekcii sa protilátky nevytvoria hneď, ale po určitú dobu (minimálne cca 2 týždne). Preto sa na potvrdenie neprítomnosti infekcie môže test ELISA po chvíli zopakovať.

Pomocou kvantitatívneho testu ELISA sa stanovuje titer (aktivita) protilátok, ako aj ich triedy. Vo väčšine prípadov sa na diagnostiku infekčných chorôb stanovujú protilátky triedy IgG (imunoglobulíny G) a IgM (imunoglobulíny M), ktoré sa tvoria v organizme v rôznych intervaloch po infekcii, takže dešifrovanie výsledku analýzy môže mať niekoľko významov:

• Zvýšenie aktivity IgM a absencia IgG sú dôkazom nedávnej infekcie a akútneho priebehu infekčného procesu.
• Zvýšenie aktivity IgM a IgG je exacerbáciou infekčného procesu v jeho chronickom priebehu a dlhodobej infekcii.
• Vysoká aktivita IgG a absencia IgM je chronický priebeh infekčného procesu na pozadí dlhotrvajúcej infekcie, po ktorej uplynulo viac ako šesť mesiacov (čas potrebný na tvorbu protilátok triedy IgG).

Vo všeobecnosti má interpretácia výsledkov ELISA pre každý infekčný proces určité znaky. Presnejšie určenie prítomnosti infekčnej choroby, ako aj štádia jej priebehu vykonáva lekár.

ELISA je v súčasnosti metódou voľby na diagnostiku väčšiny infekčných ochorení. Na základe výsledkov takejto štúdie má lekár možnosť stanoviť presnú diagnózu a určiť štádium priebehu patologického procesu s cieľom predpísať následnú adekvátnu a účinnú liečbu.

Moderné diagnostické metódy umožňujú v laboratóriu identifikovať konkrétnu chorobu pomocou špeciálnych testov. Jednou z nich by mala byť enzýmová imunoanalýza, pomocou ktorej môžete potvrdiť predbežnú diagnózu.

ELISA je jednou z najefektívnejších a najmodernejších metód na zistenie porúch spojených s imunitným a hormonálnym zlyhaním, ako aj onkologických procesov. Počas analýzy v krvi je možné zistiť protilátky, ktoré sa vytvárajú pri infekcii v tele. Vzhľadom na túto nuanciu je možné zistiť chorobu aj vo veľmi ranom štádiu jej vývoja.

Čo je základom metodiky

Výsledky analýzy ELISA sú založené na prijatí chemických reakcií na enzýmy, ktoré slúžia ako špeciálne identifikačné znaky na rozpoznávanie protilátok. Preto počas imunochemických reakcií protilátky začnú interagovať s niektorými antigénmi. To všetko dáva dôvod tvrdiť, že falošné výsledky pri darovaní krvi na ELISA sú minimálne.

Štúdia umožňuje určiť počet imunitných buniek, ich vlastnosti, ako aj prítomnosť potrebných protilátok

Pozitívny výsledok sa považuje za zistenú farbu roztoku. Farba indikuje, že antigény interagujú s protilátkou. V prípade, že sa nič také nestane, je výsledok negatívny.

Enzýmová imunoanalýza (ELISA) sa vykonáva na komplexné posúdenie ochranných funkcií tela. Počas štúdie sa zisťuje počet a vlastnosti imunitných buniek, prítomnosť potrebných protilátok. Krvný test ELISA sa vykonáva na diagnostiku infekčných, hematologických, autoimunitných ochorení, primárnych a sekundárnych imunodeficiencií. Zvážte, čo je krvný test pomocou ELISA a aké indikácie existujú pre túto štúdiu.

Čo to je

Krvný test ELISA je laboratórna metóda, ktorá zisťuje protilátky alebo antigény vo vzorke krvi. Táto štúdia sa používa na detekciu hladiny imunoglobulínov, imunologických komplexov, hormónov.

Indikácie pre analýzu

Na vymenovanie krvného testu ELISA existujú tieto indikácie:

• diagnostika pohlavne prenosných infekcií - ureaplazma, mykoplazma, chlamýdie, trichomonas, syfilis;
• diagnostika vírusových ochorení - cytomegalovírus, herpes, hepatitída, vírus Epstein-Barrovej;
• stanovenie hladiny hormónov;
• diagnostika onkologických ochorení;
• stanovenie imunodeficiencie;
• diagnostika alergií;
• predoperačné komplexné vyšetrenie pred transplantáciou orgánov;
• hodnotenie účinnosti terapie.

Princíp metódy

Princíp fungovania metódy enzýmovej imunoanalýzy je založený na stanovení špecifických proteínových protilátok v krvi - imunoglobulínov. Imunoglobulíny sú produkované ľudským imunitným systémom, keď antigény (cudzie mikroorganizmy) vstupujú do tela. Tieto imunitné molekuly sa viažu na rôzne infekčné agens v tele a neutralizujú ich.

Imunoglobulíny majú dôležitú charakteristiku – špecifickosť. Vďaka tomu sa môžu viazať na špecifický antigén a vytvárať komplex antigén-protilátka. Počas krvného testu ELISA sa kvalitatívne a kvantitatívne určuje práve tento komplex.

Existuje päť tried imunoglobulínov. Ale zvyčajne sú definované tri triedy - imunoglobulíny A, M, G. Tieto protilátky sa hromadia v tele v rôznych časoch od okamihu infekcie.

• Imunoglobulíny trieda M (IgM) sa objavia v krvi najskôr na piaty deň od okamihu infekcie. V tele sú 5-6 týždňov, potom zmiznú z krvného obehu. Protilátky IgM naznačujú akútne obdobie ochorenia alebo exacerbáciu ochorenia v jeho chronickom priebehu.
• Približne 3-4 týždne po infekcii sa v krvi objavia imunoglobulíny trieda G (IgG). Môžu existovať v ľudskej krvi niekoľko mesiacov alebo dokonca rokov. Podľa dekódovania krvného testu ELISA, ak sa v dvoch odberoch krvi odobratých po sebe o dva týždne neskôr zvýši množstvo imunoglobulínov IgG, hovorí sa o súčasnej infekcii alebo reinfekcii - reinfekcii tou istou infekciou.
• Imunoglobulíny trieda A (IgA) možno zistiť touto výskumnou metódou 2–4 týždne po infekcii alebo exacerbácii infekčnej choroby. Z nich len 20 % cirkuluje v krvi, zvyšok vylučujú sliznice. IgA protilátky zmiznú z krvného obehu 2-8 týždňov po zničení infekčných agens. Vymiznutie týchto imunoglobulínov znamená vyliečenie infekcie. Ak sa po skončení ochorenia zistí prítomnosť IgA protilátok v krvi, tak ochorenie prešlo do chronického štádia.

Príprava na analýzu

Na vykonanie krvného testu ELISA sa najčastejšie používa ľudská krv. Vyšetriť ale môžete aj obsah sklovca, mozgovomiechový mok, plodovú vodu.

Vzorka krvi na výskum sa odoberie pacientovi z kubitálnej žily. Odporúča sa darovať krv nalačno (od posledného jedla by malo uplynúť aspoň 12 hodín). Je potrebné povedať lekárovi, či pacient užíva lieky, pretože niektoré z nich môžu zmeniť výsledok analýzy. Spoľahlivosť výsledkov štúdie je ovplyvnená užívaním alkoholu a drog.

Dešifrovanie

Výsledná forma tejto analýzy indikuje pozitívny (+) alebo negatívny (-) výsledok pre každú triedu imunoglobulínov.

Zvážte interpretáciu možného dekódovania krvného testu ELISA.

• Negatívny výsledok IgM, IgG, IgA - nedostatok imunity voči infekcii.
• Negatívny výsledok IgM, IgA a pozitívny IgG – poinfekčná alebo postvakcinačná imunita.
• Negatívny alebo pozitívny IgG, IgA a pozitívny IgM je akútna infekcia.
• Pozitívny výsledok IgM, IgG, IgA je exacerbáciou chronického infekčného ochorenia.
• Negatívny výsledok IgM a negatívny alebo pozitívny výsledok IgG, IgA je chronická infekcia.
• Negatívny výsledok IgM a žiadne IgG, IgA - zotavenie.

Výhody metódy

Krvný test ELISA má mnoho výhod. Hlavné možno rozlíšiť:

• relatívne vysoká presnosť (citlivosť);
• možnosť včasnej diagnózy;
• schopnosť sledovať dynamiku infekčného procesu;
• vysoká úroveň zjednotenia, ktorá umožňuje hromadné prieskumy;
• krátky čas potrebný na získanie výsledku analýzy;
• pohodlie pri práci;
• automatizácia všetkých fáz analýzy;
• relatívne nízke náklady.

Nedostatky

Nevýhodou metódy ELISA je, že niekedy poskytuje falošne negatívne alebo falošne pozitívne výsledky. Okrem technických chýb počas štúdie môže byť príčinou falošných výsledkov reumatoidný faktor u pacienta, prítomnosť chronických ochorení (pri ktorých sa vytvárajú protilátky), metabolické poruchy a užívanie niektorých liekov.

• askarióza;
• trichinelóza - analýza sa vykonáva niekoľkokrát, maximálna hladina protilátok sa stanoví 4-12 týždňov po infekcii;
• cysticerkóza;
• taeniasis;
• fasciolóza - protilátky sa stanovujú v akútnom štádiu ochorenia;
• opisthorchiáza - vykonávať diferenciálnu diagnostiku medzi chronickými a akútnymi formami ochorenia;
• giardiáza;
• viscerálna a kožná leishmanióza;
• amebiáza;
• toxoplazmóza.

4.2 4,20 z 5 (5 hlasov)