Helmintologické metódy. Základné metódy výskumu prvokov

Najjednoduchšie sú rozdelené do 4 tried:

Pri encystácii získa mikroorganizmus zaoblený tvar a pokryje sa ochranným plášťom. Vo forme cysty sa prvoky stávajú menej náchylnými na nepriaznivé faktory prostredia.

Výskum môže zahŕňať:

Poznámka:Existuje veľa druhov diagnostiky, zvážime tie typy, ktoré sú najbežnejšie v klinickej laboratórnej praxi.

Súkromné ​​typy diagnostiky

V každom konkrétnom prípade má laborant za úlohu nájsť konkrétny patogén, niekedy sa spolu s hlavným nájdu aj iné.

V ľudskom čreve je schopných žiť 6 druhov tohto mikroorganizmu. Klinický význam má len améba dyzentérie, ktorá sa vyskytuje vo vegetatívnej forme a vo forme cýst.

Okrem toho sa používajú imunologické metódy:

• nepriama imunofluorescencia;
• nepriama aglutinácia (PHA);
• radiálna imunodifúzia.

Poznámka: sérologické metódy sú neinformatívne a používajú sa len ako doplnok k hlavným v pochybných prípadoch.

Diagnóza mihalníc (ciliates)

Patogénnou formou mikroorganizmov tohto rodu je balantidia. Ide o mikrób, ktorý spôsobuje balantidiázu - ochorenie sprevádzané ulceróznym procesom hrubého čreva. Príčinný činiteľ sa nachádza v natívnom nátere vo forme vegetatívnej formy a cysty. Materiál na náter (výkaly a hlien) sa odoberie počas sigmoidoskopického vyšetrenia a vysieva sa na špeciálne médiá.

Diagnostika bičíkovcov (leishmánia, giardia, trypanozómy, trichomonády)

Leishmania, trypanosoma, giardia, trichomonády sú pre človeka nebezpečné.

Leishmania- mikróby, ktoré spôsobujú leishmaniózu, sa vyšetrujú v krvných náteroch, materiáloch kostnej drene, zoškraboch z kožných infiltrátov. V niektorých prípadoch sa pri diagnostike Leishmania používa výsev na živných pôdach.

trypanozómy- Pôvodcovia spavej choroby (americká/africká trypanozomiáza alebo Chagasova choroba).

Africký variant je určený v počiatočnom období pri štúdiu periférnej krvi. Patologické mikróby počas progresie ochorenia sa nachádzajú v materiáli punkcií lymfatických uzlín, v pokročilých štádiách - v cerebrospinálnej tekutine.

Na diagnostiku trypanozómov v prípade podozrenia na Chagasovu chorobu sa testovaný materiál skúma pod mikroskopom pri malom zväčšení. V tomto prípade sú šmuhy a hustá kvapka vopred zafarbené.

Trichomonas(črevné, orálne,) sa zisťujú mikroskopiou materiálov odobratých z postihnutých slizníc.

Identifikácia sporozoanov (malarické plazmodium, pôvodca kokcidózy atď.)

Najbežnejším a najnebezpečnejším druhom pre ľudí je malarické plazmodium, ktoré má 4 hlavné odrody patogénu: pôvodcu trojdňovej malárie, štvordňovej malárie, tropickej malárie a oválnej malárie.

Sexuálny vývoj Plasmodium (sporogónia) prebieha u komárov rodu Anopheles. Asexuálna (schizogónia tkanív a erytrocytov) - v tkanive pečene a ľudských erytrocytoch. Tieto vlastnosti životného cyklu sa musia brať do úvahy pri diagnostike malarického plazmódia.

Takže v krvi čerstvo chorého pacienta možno nájsť zárodočné bunky sporogónneho cyklu. Ale na vrchole malarických záchvatov sa schizonty objavujú vo veľkom počte v krvi.

Okrem toho sa v rôznych fázach malarickej horúčky objavujú rôzne formy plazmódia:

• v období chladu je krv naplnená merozoitmi, akýmsi schizontom;
• vo výške teploty sa v erytrocytoch hromadia prstencové trofozoity;
• pokles teploty je charakterizovaný prevahou améboidných trofozoitov;
• počas obdobia normálneho stavu krv obsahuje dospelé formy schizontov.

Štúdium pôvodcu malárie (malarické plazmodium) sa uskutočňuje v nátere a v hustej kvapke.

Poznámka:diagnóza malárie pri štúdiu náterov a hustých krvných kvapiek je niekedy chybná. Krvné doštičky môžu byť v niektorých prípadoch chybne klasifikované ako malarický patogén. Tiež fragmenty leukocytov a iných buniek niekedy simulujú plazmodium.

Základné metódy výskumu prvokov

Poďme sa v krátkosti pozrieť na najčastejšie metódy výskumu prítomnosti prvokov.

Diagnostika prvokov pomocou natívneho náteru a náteru zafarbeného Lugolovým roztokom (vo výkaloch)

Liečivo sa pripravuje z emulzie výkalov v izotonickom roztoku. Na podložné sklíčko sa nanesú dve kvapky chloridu sodného a Lugolovho roztoku. Testovaný materiál sa pridá k obom kompozíciám drevenou tyčinkou a po prekrytí sklom sa pozoruje pri rôznych rozlíšeniach mikroskopu.

Podľa určitých znakov sú nájdené prvoky registrované. Pre presnosť sú pripravené 2-3 prípravky z jedného materiálu. V pochybných prípadoch sa analýza opakuje niekoľkokrát počas 2-3 týždňov.

Metóda môže odhaliť vegetatívne a cystické formy:

• lamblia;
• balantidia;
• dyzentéria améba.

Spolu s patogénnymi formami sa určujú aj nepatogénne prvoky. Zdraví nosiči majú tiež luminálnu a cystickú formu.

Dôležité:výskum, aby sa predišlo nepresnostiam a chybám, by sa mal vykonávať opakovane.

Výsledok diagnostiky prvokov metódou natívneho a farbeného náteru by mal obsahovať popis formy patogénu (priesvitný, cysta, tkanivo).

Požiadavky na výskum:

• materiál odobratý na analýzu (tekuté výkaly) sa vyšetrí najneskôr 30 minút po defekácii;
• vytvorené výkaly musia byť diagnostikované do 2 hodín po defekácii;
• materiál by nemal obsahovať nečistoty (dezinfekčné prostriedky, voda, moč);
• na prácu s materiálom sa používajú iba drevené palice, sklenené nie sú vhodné kvôli skĺznutiu hlienu;
• Tyčinky je potrebné ihneď po použití spáliť.

Konzervačná metóda (vyšetrenie trusu) pri diagnostike prvokov

Štúdia sa uskutočňuje fixáciou prvokov pomocou konzervačnej látky. Rozdiel medzi touto metódou a predchádzajúcou je v tom, že konzervačné látky vám umožňujú dlhodobo uchovávať liek.

Použité konzervačné látky:

• Barrow. Obsahuje konzervačné zložky: 0,7 ml chloridu sodného, ​​5 ml formalínu, 12,5 ml 96% alkoholu, 2 g fenolu a 100 ml destilovanej vody. Farbiace zloženie: 0,01% roztok tionínu (azúrový).
• Safarlievovo riešenie. Zloženie: 1,65 g síranu zinočnatého, 10 ml formalínu, 2,5 g kryštalického fenolu, 5 ml kyseliny octovej, 0,2 g metylénovej modrej, 100 ml vody. Tento konzervačný prostriedok sa používa v prípadoch, keď sa materiál musí skladovať dlhšie ako mesiac.

Prázdne fľaše sa naplnia konzervačným prostriedkom, materiál sa do nich prenesie v pomere 3: 1, potom sa v prípade potreby pridá farbivo. Vyhodnotenie výsledkov sa uskutočňuje v štúdii 2-3 liekov.

Metóda obohatenia formalínom a éterom (analýza prítomnosti prvokov vo výkaloch)

Táto diagnostická metóda umožňuje oddeliť a koncentrovať cysty prvokov. Na analýzu sú potrebné tieto zložky: formalín (10 ml), 0,85 g izotonického roztoku, destilovaná voda, éter sírový, Lugolov roztok.

Zmes biomateriálu s uvedenými kvapalinami sa zmieša a odstredí. Zrazenina získaná na dne skúmavky sa zafarbí Lugolovým roztokom a skúma sa na prítomnosť cýst a vegetatívnych foriem.

Metóda detekcie Leishmania (náter z kostnej drene)

Na diagnostiku leishmaniózy sa používajú činidlá: zmes Nikiforov (éter síry a etylalkohol), fosfátový pufor, Azur-eozín podľa Romanovského.

Látka kostnej drene sa po špeciálnej príprave veľmi opatrne umiestni na podložné sklo. Používa sa mikroskop s imerzným systémom.

V akútnom období ochorenia sa v punktáte nachádza veľké množstvo Leishmania.

Poznámka:niekedy krvinky môžu pripomínať liečenú leishmániu, preto je veľmi dôležité, aby bol laboratórny technik pozorný a mal dostatok skúseností na samostatné štúdium.

Metóda detekcie leishmánie v nátere z kožného infiltrátu

Požadované činidlá sú podobné predchádzajúcemu testu.

Testovaný materiál sa získa z existujúceho tuberkulózneho alebo ulcerózneho obsahu. Škrabanie s podozrením na leishmaniózu sa robí veľmi opatrne skalpelom, bez krvi. Potom sa prípravok pripraví na sklo. Pre presnosť získaných výsledkov sa súčasne skúma niekoľko prípravkov.

V prítomnosti choroby, medzi makrofágmi, fibroblastmi a lymfoidnými bunkami prítomnými v testovanom materiáli, sa tiež stanoví Leishmania.

Spôsob izolácie čistej kultúry Leishmania získanej zoškrabaním patologických tkanív

Pomocou tejto metódy diagnostiky sa najjednoduchšie tkanivové škrabance umiestnia do špeciálneho živného média, v ktorom sa Leishmania aktívne rozmnožuje.

Pred zoškrabaním sa pokožka opatrne ošetrí alkoholom, potom sa na tuberkulóze urobí rez, z ktorého sa odstráni obsah a umiestni sa do skúmavky s médiom. Materiál sa odoberie niekoľkokrát, potom sa umiestni do rôznych skúmaviek. Potom v termostate pri teplote 22-24 stupňov prebieha kultivácia. Výsledky sa vyhodnocujú pod mikroskopom. Táto metóda sa používa vtedy, keď sú iné, lacnejšie a rýchlejšie metódy diagnostiky prvokov neúčinné.

Ako sa v praxi dešifrujú testy na prítomnosť prvokov kvapkou krvi, si môžete pozrieť vo videorecenzii:

Lotin Alexander, lekársky publicista

Stoličky sa vyšetrujú dvoma spôsobmi:

1. Makroskopický - nájsť helminty, ich hlavy, segmenty, zvyšky strobili. Malé časti výkalov sa zmiešajú s vodou v plochom kúpeli alebo Petriho miske a prezerajú sa v dobrom svetle na tmavom pozadí, ak je to potrebné, pomocou lupy. Všetky podozrivé útvary sa prenesú pinzetou do inej šálky vody alebo na podložné sklíčko v kvapke zriedeného glycerínu.

S metódou udržiavanie skúmaná časť výkalov sa mieša s vodou v sklenenom valci, po usadení sa vrchná vrstva vody scedí. Toto sa opakuje niekoľkokrát. Keď sa kvapalina stane priehľadnou, vypustí sa a sediment sa prezrie v Petriho miske.

2. Mikroskopické - na zistenie vajíčok a lariev helmintov. Existuje mnoho výskumných metód.

jeden). natívny náter - najbežnejšia a technicky dostupná metóda výskumu. Môžete nájsť vajíčka a larvy všetkých helmintov. Pri malom počte vajíčok sa však nie vždy nájdu. Preto sa používa metóda obohacovania.

jeden). Fülleborgova metóda - ide o spôsob obohacovania, založený na vzniku vajíčok helmintióz v nasýtenom roztoku NaCl (1,2 - hustota; 400 g NaCl na 1 liter vody; 40% roztok NaCl). Metóda je účinnejšia ako natívny náter. 2-5 g výkalov sa umiestni do sklenených nádob a naplní sa roztokom NaCl, premieša sa a po 45 minútach sa vytvorený film odstráni kovovou slučkou, kvapka glycerínu sa umiestni na podložné sklíčko. Preskúmajte pod mikroskopom. Nevýhodou metódy je oneskorený výskyt vajíčok rôznych helmintov, pásomnice trpasličej - po 15-20 minútach, škrkavky - 1,5 hodiny, vretenice - 2-3 hodiny.

2) Kalantariánska metóda - tiež metóda obohacovania, ale používa sa nasýtený roztok NaNO 3 (hustota 1,38). Väčšina vajíčok pláva, vyšetrenie sedimentu nie je potrebné. Nevýhodou je, že vajíčka sú dlho držané v roztoku, čo vedie k tomu, že niektoré vajíčka začnú napučiavať a usadzovať sa na dne, pričom miznú z povrchového filmu.

3. Gorjačovova metóda - na princípe ukladania vajíčok, detekcia vajíčok motolice. Ako roztok sa použije nasýtený roztok NaCl a na vrch sa opatrne navrství 3-4 ml roztoku stolice. Po 15-20 hodinách sa vajíčka motolice usadia na dne. Kvapalina sa vypustí, sedimentuje na podložnom sklíčku a pod mikroskopom.

4. Shulmanova metóda krútenia – na detekciu lariev helmintov vo výkaloch. Preskúmajte iba čerstvo izolované výkaly. 2-3 g sa umiestnia do sklenenej nádoby a nalejú sa 5-násobné množstvo vody, rýchlo sa premieša tyčinkou, bez toho, aby sa dotkla stien nádoby - 20-30 minút, potom sa tyčinka rýchlo odstráni a kvapka kvapalina na konci sa prenesie na podložné sklíčko a podrobí sa mikroskopii.

5. Bermanova metóda - založený na schopnosti lariev helmintov migrovať smerom k teplu a slúži na ich identifikáciu vo výkaloch.

6. Metóda Harada a Mori (spôsob pestovania lariev) a odporúča sa na testovanie ankylostomiázy. Metóda je založená na tom, že v teple a na vlhkom prefiltrovanom papieri sa z vajíčok háďatiek vyvinú filariformné larvy, ktoré sa dajú ľahko odhaliť. Na stred pásu filtrovaného papiera sa nanesie 15 g výkalov, papier s výkalmi sa vloží do nádoby tak, aby spodný koniec bol ponorený do vody a horný koniec sa zafixoval korkom. Nádoba sa uchováva v termostate pri 28 0 C počas 5-6 dní. Počas tejto doby sa vyvíjajú filariformné larvy a zostupujú do vody. Kvapalina sa skúma pod lupou. Ak je ťažké ju zistiť, kvapalina sa po usmrtení lariev zahriatím na 60 0 odstredí. Laboratórny technik musí nosiť rukavice.

7. Metódy pre enterobiázu – identifikácia vajíčok červotoča a pásomnice hovädzieho dobytka.

a) škrabanie z perianálnych záhybov - vatovým tampónom pevne navinutým na drevenej tyčinke a navlhčeným 50% roztokom glycerínu. V laboratóriu sa tampón zmyje 1-2 kvapkami 50% vodného roztoku glycerínu.

b) metóda lepkavých roztočov (Grahamova metóda)

Lepiaca páska sa nanesie na perianálne záhyby, potom sa lepivou vrstvou na podložné sklíčko a podrobí mikroskopii.

C) škrabanie pomocou očných tyčiniek (Rabinovichova metóda). Na perianálne škrabky sa používajú sklenené očné tyčinky, ktorých najširšia časť je pokrytá špeciálnym lepidlom, ktoré umožňuje prichytenie vajíčok červov.

Vyšetrenie krvi, žlče, spúta a svalov

Krvná mikroskopia – zisťujú sa larvy filárií.

Vyšetrenie spúta - vajíčka paragánia, larvy škrkavky, nekátor, strongyloid, prvky echinokokového mechúra.

Vyšetrenie svalov – pri podozrení na trichinelózu sa vyšetrujú svaly pacienta alebo mŕtvoly a tiež mäso, ktoré údajne spôsobilo infekciu človeka. Na účely trichinoskopie sa sval nareže na malé kúsky a vloží do kompresorov, sú to dve široké hrubé sklá, ktoré rozdrvia svaly a larvy Trichinella sa nachádzajú vo forme kapsúl - kompresná metóda.

Spôsob trávenia - svaly sa nalejú umelou žalúdočnou šťavou (roztok kyseliny chlorovodíkovej a pepsínu). Svaly sú strávené a larvy sú ľahko identifikovateľné. Stanovenie intenzity invázie: počet lariev do 200 na 1 g svalového tkaniva - mierna intenzita invázie; do 500 - intenzívne; nad 500 - superintenzívna invázia.

Sérologické metódy

Helmintologické metódy výskumu. Metódy diagnostiky helmintiáz sú rozdelené na priame, založené na priamej detekcii samotných helmintov alebo ich fragmentov, ako aj lariev a vajíčok helmintov (metódy na vyšetrenie výkalov, moču, obsahu žlče a dvanástnika, spúta, krvi a tkanív, materiál získaný zoškrabaním z perianálnej oblasti a subungválnych priestorov) a nepriame, ktoré odhaľujú sekundárne zmeny, ktoré sa vyskytujú v ľudskom tele v dôsledku činnosti helmintov (štúdie morfologického zloženia krvi, imunologické metódy diagnostiky helmintiáz, röntgenové štúdie atď.). Z priamych metód sú najčastejšie koprologické, ktoré sa delia na makro- a mikrohelmintoskopiu. V niektorých prípadoch sa používajú špeciálne metódy.

Metódy výskumu makrogelmitoskopie zamerané na vyhľadávanie helmintov alebo ich fragmentov (skolex, segmenty, časti strobila cestodónov). Používajú sa na diagnostiku tých helmintiáz, pri ktorých sa vajíčka nevylučujú s exkrementmi pacienta alebo sa vylučujú v malom množstve a nie vždy (napríklad pri enterobiáze sa červy nachádzajú vo výkaloch, s teniidózami, segmentmi).

Na detekciu červov alebo segmentov pásomníc vo výkaloch sa výkaly pozerajú voľným okom. Na diferenciálnu diagnostiku tenidóz sa odporúča prezerať výkaly zriedené vodou v oddelených malých častiach v čiernych fotografických kyvetách alebo v Petriho miskách na tmavom pozadí. Veľké útvary podozrivé z úlomkov helmintov skúmame pod lupou medzi dvoma podložnými sklíčkami. Ak sa podľa klinických indikácií po ošetrení navrhuje detekcia malých helmintov alebo hlavičiek pásomníc, potom sa podozrivé častice vyšetrujú pod lupou v kvapke glycerolu, v prípade potreby aj pod mikroskopom.

Metódy výskumu mikrohelmintoskopie(kvalitatívne) sú zamerané na identifikáciu vajíčok a lariev helmintov. Naneste metódu hustého rozmazania s celofánovou krycou doskou podľa Kato. Zmes Kato pozostáva zo 6 ml 3% vodný roztok malachitovej zelene, 500 ml glycerín a 500 ml 6% roztok fenolu. Kato taniere (hydrofilný celofán nakrájaný na kúsky 20´ 40 mm) sú ponorené na 24 h do Kato zmesi tak, aby boli vedľa seba (3-5 ml Katov roztok pre 100 tanierov). 100 mg výkaly sa nanesú na podložné sklíčko, prikryjú sa celofánovou krycou doskou podľa Kata a pritlačia sa tak, aby sa výkaly rozmazali na podložnom sklíčku v rámci celofánovej platne. Náter sa nechá pri izbovej teplote na vyčírenie o 40-50 °C min, a potom pozorované pod mikroskopom. V horúcom období, aby sa zabránilo vysychaniu prípravku, sa na tanier pripraveného prípravku položí vlhká špongia.

Na úplnú detekciu všetkých typov helmintov sa musí použiť metóda hrubého rozmazania celofánovej krycej dosky Kato v spojení s jednou z metód obohatenia. Najbežnejšie z nich sú Kalantaryanova metóda a Füllebornova metóda.

Kalantariánska metóda: v bankách so širokým hrdlom 100 ml dôkladne premiešajte sklenenou tyčinkou 5 G výkalmi, postupným pridávaním nasýteného roztoku dusičnanu sodného (1 kg dusičnan sodný na 1 l voda pri vare) po okraj pohára. Veľké častice, ktoré vyplávali na povrch, sa odstránia papierovou naberačkou. Na povrch soľného roztoku sa priloží podložné sklíčko (fyziologický roztok sa pridáva dovtedy, kým zmes nie je v úplnom kontakte so sklíčkom). Po 20-30 min Podložné sklíčko sa vyberie a film sa prezrie pod mikroskopom. Pri absencii tejto soli môžete použiť nasýtený roztok kuchynskej soli podľa Fholleborna (400 G soľ v 1 l vriaca voda).

Vzhľadom na to, že vajíčka s veľkou špecifickou hmotnosťou (neoplodnené vajíčka ascaridov, vajíčka motolic a veľkých pásomníc) neplávajú, je okrem skúmania povrchovej vrstvy tekutiny pri použití Füllebornovej metódy potrebné prezrieť si 2-4 preparáty zo sedimentu pod mikroskopom.

Špeciálne laboratórne metódy výskumu rôznych helmintiáz.

Na detekciu fragmentov helmintov sa výkaly pozerajú nahé, potom sa zmiešajú s vodou a skúmajú sa v malých častiach v Petriho miske na tmavom pozadí. Všetky podozrivé častice sa umiestnia na podložné sklíčko do kvapky vody a skúmajú sa pod lupou. Dennú porciu môžete umiestniť do valca s pridaním 5-10-násobného množstva vody. Po premiešaní sa nádoba nechá až do úplnej sedimentácie suspendovaných častíc. Povrchová vrstva kvapaliny sa vypustí a naleje sa čistá voda. Premytá zrazenina sa po malých častiach prezerá voľným okom alebo pod lupou. Na detekciu vajíčok sa používajú mikroskopické vyšetrovacie metódy.

Metóda natívneho rozmazania. Malé množstvo výkalov z rôznych miest testovanej časti sa rozotrie na podložnom sklíčku v kvapke 50 % roztoku glycerolu, izotonického roztoku chloridu sodného alebo vody. Zmes sa prekryje krycím sklíčkom a pozoruje sa pod mikroskopom.

Füllebornova plávajúca metóda. Jedna časť výkalov sa zmieša s 20 dielmi nasýteného roztoku chloridu sodného (špecifická hmotnosť 1,18), ktorý sa pridáva po malých častiach. Veľké častice, ktoré vyplávali na povrch, sa okamžite odstránia a zmes sa nechá 45 minút. Počas tejto doby vyplávajú na povrch vajíčka helmintov, ktoré majú nižšiu špecifickú hmotnosť ako roztok chloridu sodného. Povrchový film sa odstráni drôtenou slučkou s priemerom asi 1 cm a prenesie sa na podložné sklíčko na vyšetrenie pod mikroskopom.

Kalantariánska metóda. Účinnosť flotačnej metódy sa zvyšuje nahradením chloridu sodného nasýteným roztokom dusičnanu sodného. V tomto prípade sa zmes uchováva 10-15 minút.

Povrchový film vytvorený po usadení zmesi fekálií roztokom chloridu sodného alebo dusičnanu sodného možno odstrániť aj podložným sklíčkom. Na tento účel sa nádoba naplnená až po okraj zmesou výkalov so soľným roztokom prikryje podložným sklom tak, aby jej spodný povrch bol v kontakte s kvapalinou. Po usadení sa sklo vyberie a po rýchlom otočení povrchu, na ktorom sa film nachádza, sa pozrie pod mikroskopom.

Škrabanie špirálovitých záhybov (na identifikáciu vajíčok červov a onkosfér pásomnice hovädzieho dobytka) sa robí ráno pred vykonaním toalety. Na zoškrabanie okolo konečníka sa používa drevená špachtľa ponorená do vody alebo 50% roztoku glycerínu. Výsledný materiál sa prenesie na podložné sklíčko v kvapke vody alebo 50% roztoku glycerolu a prezerá sa pod mikroskopom. Špachtľu je možné nahradiť navlhčeným vatovým tampónom, ktorým sa perianálna oblasť utrie a potom dobre opláchnite vo vode. Voda sa odstredí a zrazenina sa skúma pod mikroskopom.

Bermannova metóda (na detekciu lariev). Kovová sieťka potiahnutá 5-6 g výkalov je upevnená na sklenenom lieviku vloženom do stojana. Na spodný koniec lievika sa nasadí gumená hadička so svorkou. Lievik sa naplní vodou zohriatou na t ° 50 °, takže spodná časť sieťky s výkalmi príde do kontaktu s vodou. Larvy sa aktívne pohybujú do vody a hromadia sa v spodnej časti gumenej trubice. Po 4 hodinách sa kvapalina spustí do centrifugačných skúmaviek, odstredí sa a zrazenina sa skúma pod mikroskopom.

Analýza spúta, nosového hlienu a vaginálneho výtoku na detekciu vajíčok pľúcnej motolice paragonimus, ascaris a lariev machovky, vajíčok červov, echinokokových fragmentov močového mechúra. Skúmaná časť hlienu (sekrécie) sa rozotrie na sklo a pozoruje sa makroskopicky na čiernobielom pozadí a potom pod mikroskopom. Do testovaného materiálu môžete pridať 25% roztok antiformínu, dôkladne pretrepať a držať 1-1,5 hodiny, aby sa hlien rozpustil. Zmes sa odstredí a zrazenina sa skúma pod mikroskopom.

Analýza duodenálnej a žalúdočnej šťavy na zistenie vajíčok motolice pečene, háčkovitých červov, lariev Strongyloides. Všetky tri časti získaného obsahu dvanástnika sa odstredia a sediment sa skúma pod mikroskopom. Tiež preskúmať a.

Štúdium tkanív. Na identifikáciu lariev Trichinella sa kúsky bioptického svalu opatrne rozdelia na vlákna, stlačia sa medzi sklá kompresora (hrubé sklá so skrutkami) a skúmajú sa pod mikroskopom s tieňovaným svetlom. Na identifikáciu cysticerkov sa svaly rozvrstvia pitevnými ihlami, izolovaná vezikula sa očistí od okolitého tkaniva, vtlačí sa medzi dve podložné sklíčka a vyšetrí sa pod lupou.

Krvný test (na zistenie lariev filárií). Visiaca kvapka sa skúma na krycom sklíčku lemovanom vazelínou. Môžete zmiešať 0,3 ml krvi s 10-násobným množstvom 3% roztoku. Zmes sa odstredí a zrazenina sa skúma pod mikroskopom. Na obohatenie prípravkov sa pridajú 3 ml 2 % roztoku formalínu alebo 5-násobné množstvo tekutiny pozostávajúcej z 95 ml 5 % roztoku formalínu, 5 ml kyseliny octovej a 2 ml koncentrovaného alkoholového roztoku hematoxylínu. do 1 ml venóznej krvi. Zmes sa odstredí, zrazenina sa premyje destilovanou vodou a skúma sa pod mikroskopom. Na rozlíšenie rôznych typov filárií sa skúmajú nátery zafarbené podľa Giemsa-Romanovského metódy.

Metódy imunologickej diagnostiky. Aplikujte (aglutinácia, fixácia komplementu) a alergické diagnostické testy (pozri) s príslušným typom helmintov.

Helmintologické metódy výskumu. Ryža. Vajcia helmintov. 1-10 - vajíčka škrkaviek (hlíst): 1 - 3 - škrkavky (1 - oplodnené vajíčko, 2 - oplodnené vajíčko bez bielkovinovej škrupiny, 3 - neoplodnené vajíčko); 4 - mačací škrkavka; 5 - škrkavky mäsožravce; 5 - pinworms; 7 - bič; 8 - tominx; 9 - háďatka; 10 - tricho-strongylid. 11-15 - vajíčka pásomníc (cestódy): 11 - pásomnica hovädzia; 12 - pásomnica trpaslík; 13 - pásomnica potkana; 14 - tekvicová pásomnica; 15 - široká stuha. 16 - 24 - vajíčok motolíc (trematód): 16 - motoliek (schistozómov) japonských; 17 - trematódy (schistozómy) moč - sexuálne; 18 - trematódy (schistozómy) Munson; 19 - trematódy (parogonymus) pľúcne; 20 - trematódy (opisthorchis) sibírske (mačky); 21 - trematódy (klonorchis) čínske; 22 - črevné trematódy (metagonimus); 23 - trematódy (fascioly) pečene; 24 - trematódy (dikrocélium) kopijovité.

Efektívna a pohodlná metóda helmintologického výskumu je štúdium hustého náteru podľa Kato, ktorej podstatou je detekcia vajíčok helmintov v hustom nátere výkalov, vyčírených glycerínom a zafarbených malachitovou zelenou. Zloženie Kato zmesi je 6 ml 3% vodného roztoku malachitovej zelene, 500 ml glycerínu, 500 ml 6% roztoku fenolu. Roztok je stabilný a môže sa skladovať pri izbovej teplote. Na prípravu prípravkov sa kúsky výkalov veľkosti hrášku nanesú na podložné sklíčko, prikryjú sa filmom hydrofilného celofánu zrejúceho v Kato zmesi počas 24 hodín a pritlačia sa na sklo, aby sa materiál rovnomerne rozložil. Nátery vyčírené počas 40-60 minút sa mikroskopicky skúmajú. Zistené vajíčka helmintov sa spočítajú a ich druhová príslušnosť je určená morfologickými znakmi. Metóda umožňuje odhaliť vajíčka ascaris, bičíkovcov, pásomníc, trematód, v menšej miere - ankylostomie a pygmy pásomnice.

Tiež široko používaný metódy obohacovania. Princípom flotačných metód je suspendovanie trusu v soľnom roztoku, ktorý má v porovnaní s vajíčkami hlíst vyššiu relatívnu hustotu, v dôsledku čoho vyplávajú na povrch. Obsah povrchového filmu sa skúma pod mikroskopom. Ako obohacujúce zmesi sa používajú roztoky: kuchynská soľ - 400 g v 1 litri vody (relatívna hustota podľa Fülleborna -1,18); dusičnan sodný - 1 kg v 1 litri vody (relatívna hustota podľa Kalantaryana-1,38); dusičnan sodný - 900 g a dusičnan draselný - 400 g v 1 litri vody (relatívna hustota podľa Brudastova a Krasnonosa - 1,48). uvarené a vychladené.
Na výskum sa do pohára alebo fajansového pohára pridá 5 až 10 g výkalov, pridá sa 100 až 200 ml fyziologického roztoku a dôkladne sa premieša. Potom sa veľké častice, ktoré vyplávali na povrch, odstránia drevenou špachtľou alebo naberačkou vyrobenou z papiera alebo lepenky a na povrchový film sa ihneď priloží široké podložné sklíčko tak, aby soľný roztok a podložné sklíčko boli v úplnom kontakte. Po 30 až 40 minútach usadzovania zmesi sa podložné sklíčko vyberie, vloží sa pod mikroskop filmom nahor a celý povrch sa dôkladne preskúma. Aby ste predišli vysychaniu, môžete pridať 2-3 kvapky 50% roztoku glycerínu. Povrchovú fóliu je možné odstrániť aj drôtenou slučkou. Účinnosť flotačných metód sa zvyšuje so zvyšovaním relatívnej hustoty soľných roztokov. Pomocou týchto metód je možné zistiť vajíčka háďatiek, pásomníc a motolíc.

Na detekciu vajíčok vo výkaloch sa používa metóda sedimentácie Krasilnikov.. Výkaly sa miešajú s 1% roztokom saponátu (prací prášok Lotos a pod.) v pomere 1:10, kým nevznikne suspenzia. Pod vplyvom pracieho prostriedku sa rozpúšťajú rôzne zložky výkalov (bielkoviny, tuky, tkanivové prvky). Po 30 minútach sa obsah skúmavky pretrepáva 1-2 minúty a potom sa 5 minút odstreďuje. Prípravky sa pripravujú zo sedimentu a sledujú sa pod mikroskopom.
V poľných podmienkach, ako aj pri hromadných prieskumoch populácie na napadnutie hlístami je vhodné použiť metódu hustého náteru Kato. V stacionárnych podmienkach je pri vyšetrovaní pacientov vhodnejšie použiť najúčinnejšie flotačné metódy. Pri použití týchto metód pri mikroskopovaní je vhodné spočítať vajíčka nájdené v preparáte. Na základe štandardnej hmotnosti alebo objemu odobratého na štúdium výkalov (napríklad 1 čajová lyžička alebo polievková lyžica) a konštantného jednotlivého objemu soľných roztokov možno približne posúdiť intenzitu invázií. Tento kvantitatívny záznam môže byť užitočný pri zdôvodňovaní predpísanej liečby a hodnotení účinnosti odčervenia. Okrem toho sa na stanovenie intenzity infekcie môžu použiť iné presnejšie kvantitatívne metódy, najmä metóda Stoll.

Na diagnostiku teniarhynchózy a enterobiázy aplikovať metódu výskumu perianálno-rektálnych zoškrabov. Na zoškrabanie perianálnych záhybov ráno pred defekáciou okolo konečníka a dolnej časti konečníka sa používa drevená špachtľa namočená v 50% roztoku glycerolu. Výsledný materiál očistený špachtľou od okraja krycieho sklíčka sa vloží na podložné sklíčko do kvapky 50% roztoku glycerolu, prikryje sa krycím sklíčkom a skúma sa pod mikroskopom. Môžete tiež preskúmať prúžok celulózovej pásky, ktorý sa najskôr pritlačí lepiacou stranou k pernatálnym záhybom, potom sa umiestni na podložné sklíčko a podrobí sa mikroskopii.

Detekcia lariev háďatka vo výkaloch Bermanovou metódou. Metóda je založená na termotropných vlastnostiach lariev. Na výskum sa odoberie 1 polievková lyžica výkalov, vložená do kovovej siete alebo sieťky niekoľkých vrstiev gázy na drôtenom ráme. Mriežka je inštalovaná v lieviku pripevnenom na statíve. K lieviku sa pripája gumená trubica so svorkou. Zdvihnutím pletiva sa lievik naplní vodou (teplota +40°...+50°C) tak, aby spodná časť pletiva bola ponorená do vody. Larvy z výkalov aktívne migrujú do teplej vody a usadzujú sa v spodnej časti lievika. Po 2-4 hodinách sa svorka otvorí, voda sa spustí do centrifugačnej skúmavky a odstreďuje sa 2-3 minúty. Potom sa supernatant vypustí, sediment sa prenesie na podložné sklíčko a pozrie sa pod mikroskop, kde sa nachádzajú mobilné larvy patogénu strongyloidózy.

Haradova metóda a Mori umožňuje rozlíšiť larvy hákovcov a nekátorov. Larvy háčikovca sa kultivujú na filtračnom papieri. Na tento účel sa na pásiky filtračného papiera s veľkosťou 12 x 1,5 cm nanesie 0,5 g čerstvého trusu odobraného pacientovi najneskôr 1 hodinu po defekácii, pričom oba konce pásika zostanú čisté. Jeden koniec prúžku je ponorený do skúmavky, ktorej štvrtá časť je naplnená vodou a druhá je upnutá korkom. Rúry sú umiestnené v termostate pri teplote +26 ... + 28°C. Larvy, ktoré sa vyvinuli z vajíčok, zostupujú po filtračnom papieri a usadia sa na dne skúmavky. Po 5-6 dňoch sa prúžok papiera odstráni a kvapalina zostávajúca v skúmavke sa skúma pod lupou alebo sa odstredí. Zrazenina vytvorená počas odstreďovania sa skúma pod svetelným mikroskopom. Pri použití namiesto skúmaviek štvorstenných sklenených nádob (veľkosť 15XYX7 cm), na stenách ktorých sú pripevnené 4 papierové prúžky, sa zvyšuje účinnosť analýz (GM Maruashvili et al., 1966).

Metódy výskumu schistosomiázy . Vyšetrenie výkalov - časť výkalov sa zmieša s 250 ml vody, prefiltruje sa cez 3 vrstvy gázy do kónickej nádoby, ktorá sa po vrch naplní vodou. Po 30 minútach sa tekutá vrstva scedí, k zrazenine sa pridá čerstvá časť vody. Zrazenina sa premýva, kým sa nezíska číry supernatant, a skúma sa mikroskopicky.

Metóda larvoskopie - 20-25 g výkalov sa umiestni do Erlenmeyerovej banky so sklenenou trubicou priletovanou na boku a premyje sa vodou z vodovodu. Potom sa banka prikryje tmavým papierom, spájkovaná sklenená trubica sa nechá na svetle pri teplote +25...+30°C. Vyliahnuté miracidie sú sústredené v menisku v laterálnej trubici, kde ich možno vidieť lupou alebo voľným okom. Vyšetrenie moču - 100 ml moču sa odoberie medzi 10. a 14. hodinou, alebo sa denná časť usadí a následne sa odstredí pri 1500 ot./min. Výsledná zrazenina sa nanesie* na podložné sklíčko a podrobí sa mikroskopii. WHO odporúča metódu filtrovania celej časti moču. Po filtrácii sa filtre ošetria formalínom alebo sa zahrejú (na usmrtenie vajíčok) a potom sa navlhčia vodným roztokom ninhydrínu. V sušených prípravkoch získavajú vaječné embryá fialovú farbu.

Použitie imunologického výskumné metódy na diagnostikovanie schistosomiázy sú zložité, pretože dospelé schistozómy a ich vajíčka obsahujú veľké množstvo antigénov, ktoré spôsobujú imunitné reakcie, ktoré nie sú druhovo špecifické (D. Bradley, 1979).

V našej krajine sa na formuláciu imunologických reakcií pri helmintiáze vyrába množstvo štandardných diagnostických prostriedkov. Alergický kožný test na echinokokózu a alveokokózu, RLA s antigénom echinokokózy, RSK v chlade, precipitačná reakcia v chlade v rôznych modifikáciách (prstencová precipitácia, precipitácia v skúmavkách alebo kapilárach, ktoré sú umiestnené s antigénmi trichinelózy, cysticerkózy a migroascariózy) aplikácie. Štandardné diagnostické prostriedky na nastavenie uvedených sérologických reakcií vyrábajú podniky vyrábajúce bakteriálne prípravky. Výrobca k vyrobeným diagnostikám prikladá podrobné pokyny o pravidlách skladovania, dátumoch exspirácie lieku a návode na použitie vhodných antigénov s reakčnou technikou.

V posledných rokoch sa výrazne rozšíril zoznam sérologických testov používaných na diagnostiku helmintiázy. Na tento účel sa používajú nasledujúce reakcie: RIGA, nepriama imunofluorescencia (RIF), gélová imunodifúzia (RID), protiimunoelektroforéza (VIEF), REAMA. Tieto reakcie sa môžu použiť na askariózu, toxokarózu, trichinelózu, ankylostomickú infekciu, filariózu, echinokokózu a alveokokózu, opisthorchiázu, schistosomiázu, paragonimiázu. Na tieto reakcie sa však u nás štandardné diagnostika nevydávajú a nie je regulovaná technika ich nastavenia. Samostatné laboratóriá, väčšinou vedecké, pripravujú vlastné špecifické antigény a používajú ich v rôznych modifikáciách. Opis týchto metód je široko prezentovaný v literatúre a nie je striktne jednotný. Interpretácia imunologických údajov by mala byť založená na štúdiu dynamiky imunitnej odpovede, berúc do úvahy úroveň špecifickosti a citlivosti každého aplikovaného sérologického testu. Preto pri stanovení diagnózy, ako aj pri séroepidemiologických prieskumoch populácie je vhodné využiť viaceré najcitlivejšie reakcie. Z týchto pozícií sa dobre osvedčili reakcie VIEF a REMA, ktoré sa vyznačujú vysokou citlivosťou a pomerne vysokou špecifickosťou (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negryanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya. Lysenko, 1978 atď.). Účinnosť REAMA bola testovaná pri amébiáze, leishmanióze, trypanozomiáze a toxoplazmóze (GA Ermolin, 1980).