Taxonomie, pneumococ, metode de laborator pentru gripă

MINISTERUL SĂNĂTĂȚII AL FEDERATIEI RUSE UNIVERSITATEA MEDICALĂ DE STAT KAZAN DEPARTAMENTUL DE MICROBIOLOGIE

PNEUMOCOC

KAZAN 1999

UDC 576.851.21(07)

Publicat prin decizie a Consiliului Central de Coordonare și Metodologie al Universității de Stat de Medicină din Kazan.

Compilat de:

(Șeful Departamentului de Microbiologie, Doctor în Științe Medicale, Profesor O.K. Pozdeev, Asistent al Departamentului de Microbiologie, Candidat la Științe Medicale, E.R. Fedorova.

Recenzători:

Șef al Departamentului de Epidemiologie, Universitatea de Medicină de Stat din Kazan, doctor în științe medicale, profesor asociat M.Sh. Shafeev, șeful Departamentului de Epidemiologie, Academia Medicală de Stat Kazan, doctor în științe medicale, profesorul V.E. Grigoriev.

Pneumococi /O.K. Pozdeev, E.R. Fedorov - Kazan: KSMU, 1999. - 14 s.

Prin copierea, distribuirea, publicarea textului sau a unei părți din acesta pe resursele dumneavoastră, vă asumați responsabilitatea în conformitate cu legislația în vigoare.

Exclusiv pentru utilizarea operei în scopuri personale (articolul 18, articolul 26 din Legea Federației Ruse „Cu privire la drepturile de autor și drepturile conexe”). Reproducerea comercială este interzisă.

Universitatea Medicală de Stat din Kazan, 1999

Pneumococul (Streptococcus pneumoniae) a fost izolat pentru prima dată de Pasteur (1881) în timp ce lucra la un vaccin antirabic și a fost considerat inițial agentul cauzal al rabiei. Rolul etiologic al microorganismului în dezvoltarea pneumoniei la om a fost dovedit de Frenkel și Weichselbaum (1884). Bacteriile colonizează organismele umane și animale și aparțin grupului de așa-numitele streptococi „orale”. Sunt principalii agenți cauzali ai pneumoniei și pot provoca, de asemenea, pleurezie, meningită, ulcere corneene târâtoare, inflamație purulentă a urechii medii, afecțiuni septice și alte boli. În ediția a IX-a a Ghidului lui Bergey pentru bacterii (1994), pneumococii sunt incluși în grupul 17, „Coci gram-pozitivi”.

Epidemiologia leziunilor. Pneumococul este unul dintre principalii agenți cauzali ai pneumoniei bacteriene înregistrate în afara spitalelor (2-4 cazuri la 1000 de persoane); În fiecare an, în lume se observă cel puțin 500.000 de cazuri de pneumonie pneumococică (valoarea reală este mult mai mare). Copiii și bătrânii sunt cei mai susceptibili la infecție. Rezervorul infecției sunt pacienții și purtătorii (20-50% dintre copiii preșcolari și 20-25% dintre adulți); principala cale de transmisie este contactul; în timpul focarelor este și în aer. Incidenta maxima apare in sezonul rece. În marea majoritate a cazurilor, formele clinice de infecție se dezvoltă atunci când rezistența organismului este afectată (inclusiv din cauza stresului la frig), precum și pe fondul altor patologii (anemie falciformă, boala Hodgkin, infecția cu HIV, mielom, diabet zaharat). , afecțiuni după splenectomie etc.) sau cu alcoolism. Opțiunile 1, 2 și 3 joacă cea mai mare semnificație epidemiologică în patologia la adulți; pentru copii - 1, 2, 3 și 14 opțiuni. Virulența serovarilor în ordine descrescătoare este variantele 3, 1, 2, 5, 7 și 8. Șoarecii albi (dacă sunt infectați, mor din cauza septicemiei în 24 de ore), vițeii, mieii, purceii, câinii și maimuțele sunt sensibili la pneumococi.

Morfologie. Pneumococii sunt imobili, nu formează spori și au o formă ușor alungită, care amintește de contururile flăcării unei lumânări. În frotiuri de material clinic, acestea sunt aranjate în perechi, fiecare dintre acestea fiind înconjurat de o capsulă groasă. În frotiurile din mediile de cultură, acestea pot fi localizate în lanțuri scurte și pot fi mai rotunjite. Pe medii simple formează o capsulă subțire; dezvoltarea sa este stimulată prin introducerea de sânge, ser sau lichid ascitic. Formarea capsulelor este cea mai pronunțată la bacteriile de tip III. Când este aranjată în lanțuri, capsula poate fi comună.

Proprietăți culturale. Pneumococii sunt aerobi sau anaerobi facultativi; La cultivare se preferă condițiile capnofile (5-10% CO2). Sunt chemoorganogrofi și cresc bine pe medii de sânge sau ser suplimentate cu glucoză 0,1%. Pot crește în intervalul de temperatură de 28-42 °C, optim - 37 °C. pH optim -7,6-7,8. Pe medii dense formează colonii delicate, translucide, clar definite, cu un diametru de aproximativ 1 mm. Uneori pot fi plate cu o depresiune centrală; ca și alți streptococi, coloniile nu fuzionează niciodată

între ei. Pe agar-sânge formează mici colonii translucide de culoare gri-verzuie. Centrul coloniilor este mai întunecat, periferia este mai deschisă. Sub colonie și de-a lungul periferiei acesteia, o zonă de a-hemoliză este vizibilă sub forma unei zone decolorate verzui (care se datorează tranziției hemoglobinei la methemoglobină). Coloniile de pneumococ de tip III au adesea o consistență mucoasă și au o dimensiune de până la 2 mm. Sunt puțin tulburi și se pot contopi unul cu celălalt. Ele formează forme S și R de colonii. La trecerea de la forma S la forma R, ei își pierd capacitatea de a sintetiza capsula. Pe medii lichide cu ser si 0,2% glucoza dau turbiditate uniforma si un mic sediment floculant. Cu cultivarea prelungită, sedimentul crește.

Durabilitate. Pneumococii aparțin grupului de microorganisme instabile. Ele persistă în spută uscată până la două luni. Poate fi depozitat o lungă perioadă de timp la temperaturi scăzute; la o temperatură de 60 °C mor în 3-5 minute. O soluție de 3% de acid carbolic îi ucide în 1-2 minute. Optochina (la concentrație de 1:100.000) și bila au un efect dăunător asupra pneumococilor, care este folosit pentru identificarea bacteriilor.

Pneumococii diferă de alte microorganisme printr-o serie de proprietăți (Tabelul 1).

Tabelul 1 Proprietățile biochimice ale pneumococilor

Substratul de testare	Rezultat	Substratul de testare	Rezultat
Creștere la 100°C

		Rafinoza
Miercuri cu 6,5% Nad

a-hemoliza
B-hemoliza		Trehaloză
		Fosfatază
Hipurat		β-galactozidaza


Glicerol

Denumiri: „+” - 90% sau mai multe tulpini sunt pozitive; (+) - 80-89% dintre tulpini sunt pozitive; d - 21-79% dintre tulpini sunt pozitive; (-) - 11-20% dintre tulpini sunt pozitive; „- - 90% sau mai multe dintre tulpini sunt negative.

Structura antigenică. La pneumococi s-au găsit mai multe tipuri de antigene: polizaharidă, antigen 0-somatic, situat în peretele celular; antigenele K capsulare polizaharide și proteina M. Antigenul somatic polizaharidic este similar cu substanța C a altor streptococi. Relația determină asemănarea în structura chimică a acizilor ribitteicoici asociați cu fosfatul de colină. Antigenii capsulei au si natura polizaharidica, formata din monozaharide repetate in diverse combinatii: D-glucoza, D-galactoza si L-ramnoza. Pe baza structurii antigenelor capsulare, pneumococii sunt împărțiți în 84 de serovari. Trebuie amintit că antigenele capsulare reacționează încrucișat cu antiserurile la antigenele streptococilor de grup A și B, precum și cu serurile la antigenele Klebsiella și Escherichia. În timpul tranziției de la forma S la R, antigenele capsulare se pierd. Pentru serotipizarea pneumococilor se produc seruri de grup, desemnate cu litere latine (A, B, C, D etc.) si seruri serovariante, desemnate cu cifre romane. Serul aglutinant III nu este inclus în amestecurile de ser. Este eliberat separat și nu poate fi crescut. La om, pneumococii serovarianților I, II și III sunt cel mai adesea izolați. Sunt cele mai virulente pentru om, astfel încât testul de aglutinare se efectuează inițial folosind antiseruri la aceste variante. Dacă rezultatul este negativ, reacția de aglutinare se realizează cu un amestec de seruri A, B, C etc. (până se obține un rezultat pozitiv), apoi cu antiseruri separate. Pentru o identificare mai rapidă a serovariilor, se utilizează reacția Neufeld (umflarea capsulei imune). Metoda se bazează pe capacitatea capsulelor pneumococice de a crește în volum în prezența antiserului omolog, care este înregistrat prin microscopie optică ușoară. Polizaharidele capsulare au proprietăți sensibilizante, manifestate prin dezvoltarea unei reacții de hipersensibilitate de tip întârziat, detectată cu ajutorul testelor cutanate.

Factori de patogenitate. Principalul factor este capsula, care protejează bacteriile de potențialul microbicid al fagocitelor și le abate de la acțiunea opsoninelor. Tulpinile neîncapsulate sunt practic avirulente și sunt rare. Majoritatea grupului de AT antipneumococice constă din AT la capsule Ag. O funcție importantă a capsulei și a proteinei M este, de asemenea, de a asigura aderența la mucoasă. Substanța C este esențială, deoarece interacționează în mod specific cu proteina C reactivă. Consecința unei astfel de reacții este activarea cascadei complementare și eliberarea de mediatori ai fazei acute a inflamației; acumularea lor în ţesutul pulmonar stimulează migrarea fagocitelor polimorfonucleare. Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o întrerupere a homeostaziei țesutului pulmonar și de hepatizarea acestuia. Pneumococii produc endotoxină, a- și beta-hemolisine (pneumolizine) și leucocidină. α-pneumolysin este o proteină termolabilă capabilă să neutralizeze O-streptolizina,

substanță eritrogenă, neuraminidaza. De asemenea, pneumococii sintetizează o serie de enzime care contribuie la patogeneza leziunilor - muramidaza, hialuronidaza (promovează răspândirea microorganismelor în țesuturi), peptidaza (descompune IgA).

Patogenia leziunilor. Biotopul pneumococilor este tractul respirator superior. Patogenia majorității pneumoniilor implică aspirarea salivei care conține S. pneumoniae și pătrunderea bacteriilor în căile respiratorii inferioare. Încălcarea mecanismelor de drenaj protector - impulsul tusei și clearance-ul mucociliar - este esențială. La adulți se observă mai des leziunile pulmonare lobare; la copii și vârstnici predomină leziunile peribronșice sau focale. Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o întrerupere a homeostaziei țesutului pulmonar și de hepatizarea acestuia. Infecțiile cu serovarul 3 cel mai virulent pot fi însoțite de formarea de cavități în parenchimul pulmonar. Din focarul primar, agentul patogen poate pătrunde în cavitatea pleurală și pericard sau poate disemina pe cale hematogenă și poate provoca meningită, endocardită și leziuni articulare.

Manifestari clinice. Pneumonia pneumococică clasică începe brusc; Ei observă o creștere a temperaturii corpului, o tuse productivă și dureri în piept. La persoanele slăbite și la vârstnici, boala se dezvoltă lent, cu febră ușoară, tulburări de conștiență și semne de insuficiență cardiacă pulmonară. Meningita streptococică este înregistrată la toate grupele de vârstă; se caracterizează printr-un debut violent cu creșterea temperaturii corpului, rigiditate a mușchilor gâtului, dureri de cap, greață și vărsături. Leziunile vaselor de meninge sunt adesea însoțite de pierderea conștienței; în rândul copiilor și vârstnicilor, mortalitatea poate ajunge la 80%. Destul de des, leziunile pneumococice hematogene, precum și sinuzita, mastoidita, otita medie, endocardita și peritonita, sunt observate la persoanele cu imunodeficiențe (de exemplu, infectate cu HIV) sau la pacienții cu splenectomie. După o boală, se dezvoltă o imunitate instabilă, care este specifică tipului și este cauzată de apariția anticorpilor împotriva polizaharidei capsulare tipice.

Tratament. Baza tratamentului pentru infecția pneumococică este antibioticele - penicilină, tetraciclină, cloramfenicol, vancomicina, rifampicină, ceftriaxonă.

Prevenirea. Prevenirea nespecifică a infecțiilor pneumococice are ca scop identificarea pacienților și purtătorilor cu tratamentul ulterior. Pentru prevenirea specifică a infecției, copiii cu vârsta peste doi ani, adulții cu risc, precum și persoanele sănătoase în timpul unui focar de boală sunt vaccinați cu vaccinul polizaharidic polivalent „Pneumovex 23”. Medicamentul conține 23 de antigene polizaharide capsulare ale pneumococilor (1, 2, 3, 4, 5, 6B 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 209). , 22F, 23F, 33F). Antigene

pneumococii au fost obținuți din 90% dintre tulpinile izolate din sângele pacienților cu infecție pneumococică invazivă din SUA și corespunzătoare tulpinilor găsite în Rusia. Imunizarea se efectuează de două ori cu un interval de 5-8 ani.

După vaccinare, se creează imunitatea artificială, activă, specifică tipului.

Diagnosticul de laborator. „Standardul de aur” este izolarea agenților patogeni. Trebuie amintit că materialul trebuie examinat rapid, deoarece bacteriile sunt predispuse la autoliză rapidă datorită activității enzimelor intracelulare. Materialul pentru studiu este spută, revărsare pleurală și alte exsudate, lichid cefalorahidian, sânge, mucus din nas și faringe, secreții din ulcerații oculare, scurgeri din ureche, urină, bucăți de organe (în caz de deces al pacientului) . Un răspuns semnal la infecția pneumococică poate fi emis atunci când neutrofile și diplococi lanceolați gram-pozitivi (cel puțin 10 pe câmp vizual) sunt detectați în frotiurile de spută. În caz contrar, recurg la izolarea agentului patogen.

Prima etapă a studiului. Materialul patologic este supus unei bacterioscopii preliminare (cu excepția sângelui). Sputa se pune într-o cutie Petri sterilă, se spală, se captează cu o buclă un nod mucos purulent, se măcina pe o lamă de sticlă, se usucă și se colorează cu o colorație Gram. Frotiul evidențiază coci gram-pozitivi în formă de lancetă sau ovale, înconjurați de o capsulă (formarea capsulei se observă numai la pneumococii izolați de la animalele bolnave și infectate). Detectarea capsulelor pneumococice poate fi efectuată folosind metoda Burri-Gins. Inocularea materialului patologic se efectuează pe 5-10% agar sânge sau ser și pe mediu de îmbogățire (8-10% bulion de zer). Dacă se suspectează sepsis de natură pneumococică, se inoculează 5-10 ml din sângele pacientului în 45-90 ml bulion de zer. Lichidul cefalorahidian, dacă este limpede, este centrifugat și câteva picături din sediment sunt inoculate pe medii nutritive. Ca mediu de îmbogățire se utilizează agar semisolid din zer. Culturile sunt incubate la 37 °C timp de 24 de ore. Cea mai bună metodă pentru izolarea unei culturi pure de pneumococi este de a infecta șoarecii albi cu material patologic. Sputa, spălată într-o cutie Petri cu soluție salină sterilă, este măcinată într-un mojar steril cu un pistil steril sau sticlă spartă în timp ce se adaugă soluție salină într-un raport de 1:2-1:5. Suspensia este decantată, lichidul supernatant în cantitate de 0,5-1 ml este administrat intraperitoneal la șoareci albi. Dacă pneumococii sunt prezenți în material, șoarecii mor în 72 de ore. Pneumococii tipici se găsesc în frotiurile din organe și sânge. Organele și sângele sunt cultivate și pe bulion de zer și pe vase Petri cu agar sânge sau ser.

A doua etapă a studiului. Se studiază modelul de creștere pe mediile nutritive. Pe agar-sânge, coloniile de pneumococi sunt mici, rotunde, cu netede

margini, fragede, înconjurate de o zonă de înverzire a mediului (care amintește foarte mult de creșterea streptococilor viridans). Pe agar seric, coloniile sunt delicate, translucide și transparente. În timpul bacterioscopiei frotiurilor colorate cu Gram. Se detectează diplococi gram-pozitivi fără capsule. După bacterioscopie, coloniile suspectate de pneumococi sunt subcultivate pe ser oblic sau agar sânge sau în bulion de zer. La microscopizarea frotiurilor din mediul de îmbogățire, împreună cu diverse microflore, pot fi detectați coci gram-pozitivi, aranjați în perechi sau în lanțuri scurte. Materialul din mediul de îmbogățire este transferat în medii nutritive solide. Culturile sunt incubate la 37°C timp de 24 de ore.

A treia etapă a studiului. Pe înclinații de agar cu sânge, pneumococii formează un strat delicat, subțire, translucid. În bulionul de zer, pneumococii provoacă turbiditate și un ușor sediment. În frotiurile din medii de cultură solide, pneumococii pot avea diferite aspecte. Alături de diplococii de formă alungită cu capete exterioare ascuțite, care amintesc de flacăra unei lumânări, există celule de formă ovală și rotundă obișnuită. În cultura bulionului, pneumococii sunt adesea aranjați în lanțuri. Pe baza proprietăților morfologice și culturale ale pneumococilor, este dificil de diferențiat de streptococii viridans, prin urmare a fost propus un set de teste speciale pentru diferențierea lor:

Solubilitate în bilă (testul dezoxicolat);

Capacitatea de a descompune inulina;

Sensibilitate la optochin;

Reacție de aglutinare cu seruri antipneumococice specifice;

Capacitatea de a descompune glucoza, maltoza, zaharoza, lactoza, manitolul, sorbitolul si salicina.

Cele mai accesibile metode de diferențiere a pneumococilor de alți streptococi sunt un test cu optochin (inhibă creșterea acestora); Se deosebesc de streptococii viridans prin capacitatea lor de a fermenta inulina, precum și prin sensibilitatea la bilă.

Testul dezoxicolat. După bacterioscopie preliminară, într-o eprubetă se adaugă 10 picături de cultură pură izolată (de preferință bulion) cu 5 picături de bilă bovină sterilă. Martorul este o cultură adăugată într-o eprubetă cu 5 picături de soluție salină. După 30-60 de minute de incubare la 37 °C, se observă liza completă a culturii sub formă de limpezire în eprubetă cu bilă; în tubul de control amestecul rămâne tulbure. Trebuie amintit că culturile pneumococice avirulente sunt rezistente la bilă.

Rezistența biliară poate fi testată și prin cultură în bulion de bilă 10%. Materialul de testat este adăugat în mediu, iar bulionul devine tulbure. După 24 de ore de incubare la 37 °C, prezența pneumococilor va fi indicată prin curățarea bulionului ca urmare a lizei bacteriilor.

Puteți folosi și discuri înmuiate într-o soluție de bilă 20%. Discurile sunt plasate pe cultura crescută într-un vas și incubate timp de 1-2 ore la 37 °C. În prezența pneumococilor, coloniile sunt lizate în jurul discului la o distanță de 1-2 mm.

Test pentru inulină. Cultura pneumococică se inoculează pe mediu cu inulină. Pentru a face acest lucru, adăugați 200 ml de apă distilată sterilă, 18 ml de tinctură de turnesol și 3 g de inulină la 100 ml de ser bovin încălzit la 56 °C timp de 30 de minute și sterilizați cu abur curent timp de 30 de minute. Culturile sunt incubate la 37 °C timp de 24 de ore. Pneumococul descompune inulina, determinând mediul să devină roșu. Streptococul Viridans nu provoacă roșeață a mediului.

Testați cu optochin. Cultura de test pneumococic se inoculează pe bulion de zer cu optochin la o diluție de 1:100.000 sau 1:200.000. Pneumococul nu crește pe un astfel de mediu. De asemenea, puteți determina sensibilitatea la optochin prin placare pe agar sânge 10% care conține optochin la o diluție de 1:50.000. Controlul este inocularea culturii pe agar cu sânge. Pneumococii nu cresc pe mediul cu optochină; creșterea pneumococilor se observă pe mediul de control. Puteți folosi discuri înmuiate în 6 μg de optochin, care se aplică pe suprafața mediului după inoculare. La pneumococi, în jurul discului se formează o zonă de inhibare a creșterii de cel puțin 18 mm în diametru.

Test de virulență. O cultură zilnică de pneumococ crescută în bulion de zer este diluată cu 1% apă peptonă sterilă (pH - 7,6) sau bulion ușor alcalin până la 1:10. Cultura diluată se administrează intraperitoneal la șoareci albi cu o greutate de 16-20 g într-un volum de 0,5 ml și se observă timp de 72 de ore. Organele unui șoarece mort sunt inoculate pe medii nutritive și frotiurile de amprentă sunt examinate la microscop. Culturile foarte virulente includ pneumococii, care provoacă moartea șoarecilor după introducerea unei culturi la o diluție de 1:10. Culturile avirulente nu provoacă moartea la șoareci.

Serotiparea pneumococilor. Cultura de 18 ore este testată în reacția de microaglutinare Sabin. Pe o lamă de sticlă se aplică 4 picături de cultură pneumococică. La 1 picătură se adaugă o picătură de ser antipneumococic tip 1, la al 2-lea - ser de tip II, la a 3-a - ser - 111, la a 4-a - o picătură de ser normal. Amestecuri pe sticlă sunt amestecate cu o buclă și examinate la lupă sau la microscop la mărire mică. Într-un caz pozitiv, se observă aglutinarea într-una dintre primele trei picături. Tipul de pneumococ este determinat de o reacție de aglutinare cu seruri de aglutinare specifice din primele trei tipuri fixe. Culturile care nu sunt aglutinate de aceste tipuri de seruri sunt clasificate ca grup X. Reacția este configurată după cum urmează. Se toarnă 0,5 ml de cultură în bulion de 18 ore în eprubete. Apoi se adaugă un volum egal de ser, diluat cu ser fiziologic într-un raport de 1:5. Martorii sunt 2 eprubete, dintre care una conține cultura de testare amestecată cu

ser normal de iepure, iar celălalt - doar cultura de testare. Conținutul tuburilor este agitat bine și plasat într-un termostat la 37 °C timp de 2 ore, după care se efectuează un calcul preliminar al reacției. Rezultatele finale se notează după păstrare suplimentară la temperatura camerei timp de 20 de ore. Aglutinarea este evaluată ca patru plusuri dacă conținutul tuburilor este complet curățat și cultura de aglutinare este o peliculă densă care nu se rupe la agitare; trei plusuri dacă, când conținutul tubului este complet curățat, cultura aglutinantă se sparge ușor în părți; două plusuri - dacă nu are loc curățarea, particulele culturii aglutinate sunt clar vizibile cu ochiul liber în conținutul tulbure al eprubetei; cu aglutinare pentru un plus, în eprubetă se găsește un amestec cu granulație fină de pneumococi lipiți. În cazul unei reacții negative vizibile pentru ochi nu se observă aglutinare;

Conținutul eprubetelor după agitare este uniform tulbure.

Tiparea pneumococilor din grupul X se realizează folosind grupul

seruri care conțin un amestec de seruri aglutinante tipice luate

în volume egale. Pregătiți următoarele seruri de grup prin

amestecând volume egale de diagnostic standard nediluat

seruri (Lund, 1960):

serovarii A -1, II, IV, V, XVIII;

serovariile B - VI, VIII, XIX;

C - VII, XX. serovare XXIV, XXXI, XL;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII serovare;

E - X, XXI. XXXIII, XXXIX serovare;

F - XII. XVII. serovarii XXII, XXXVII, XXXII, XLI;

G - XIII, XXV. serovare XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII;

J - XLIII. Serovarii XLIV, XLV, XLVI.

Serul aglutinant de tip III se foloseste per se (fara amestecare cu alte seruri standard) datorita dificultatii de a-l obtine intr-un titru suficient de mare. Tiparea se realizează în două etape: mai întâi cu ajutorul serurilor de grup și apoi cu serurile individuale ale grupului cu care s-a obținut o reacție pozitivă. Serotiparea pneumococilor este utilizată în primul rând pentru studii epidemiologice ale rezultatelor seroterapiei specifice și seroprofilaxiei.

Microaglutinarea pneumococilor folosind metoda Sabin poate fi obținută prin amestecarea serurilor antipneumococice cu exudatul din cavitatea abdominală a unui șoarece contaminat cu sputa unui pacient. Deja la patru ore după infecție, o cultură pură de pneumococi este detectată în exudat, dând o aglutinare Sabin pozitivă.

Metode accelerate de detectare și tipizare a pneumococilor. 1. Metoda Neufeld sau fenomenul de umflare a capsulei pneumococice. Un bulgăre de sputa proaspăt secretată a pacientului este aplicat la trei

lamele, la fiecare dintre ele se adaugă o picătură de ser antipneumococic specific nediluat (tipurile 1, II, III) și o picătură de albastru Loeffler. Picăturile se amestecă bine și se acoperă cu o lamă de sticlă cu un puț uns pe margini cu vaselină. După două minute, picăturile suspendate sunt examinate la microscop cu sistem de imersie. Într-un caz pozitiv, este vizibilă o creștere accentuată a capsulelor pneumococice. Dacă rezultatul este negativ, capsulele sunt cu greu prețuite. Reacția de umflare este specifică și nu dă un rezultat pozitiv cu alte bacterii capsulare. Nu o folosesc pentru examinarea sputei de la pacienții tratați cu sulfonamide și antibiotice, deoarece în acest caz se pot izola pneumococii non-capsulari.

2. Metoda precipitațiilor. 5-10 ml de spută se fierb într-o baie de apă până se obține un cheag dens. Cheagul este măcinat și se adaugă o cantitate mică de ser fiziologic și se fierbe din nou câteva minute pentru a extrage polizaharida specifică din pneumococi. Suspensia este centrifugată și se efectuează o reacție de precipitare inelară cu lichidul limpede rezultat și serul standard specific în tuburi de precipitare. Apariția unui inel la interfața dintre lichide indică un rezultat pozitiv.

3. Determinarea capsulelor pneumococice după Burri. O picătură din materialul de testat și o picătură de cerneală sunt aplicate la capătul lamei. Amestecul se amestecă și se face un frotiu, se usucă la aer și, fără fixare, se examinează la microscop. Fundalul preparatului este fumuriu închis; corpurile microbiene și capsulele lor nu sunt pătate. Preparatul preparat conform Burri poate fi fixat cu amestecul lui Nikiforov, clătit cu apă și colorat cu Ziel fuchsin diluat 1:3 timp de 3-5 minute. Pe fundalul întunecat al frotiului ies în evidență capsule nevopsite, în interiorul cărora se află bacterii de culoare purpurie strălucitoare (metoda Hins).

scarlatină provoacă diferite serotipuri de streptococi beta-hemolitici care au antigen M și produc eritrogenină (streptococi toxigeni ai serogrupului A) - (Streptococcus pyogenes). În absența imunității antitoxice, apare scarlatina și în prezența durerii în gât.

Tabloul clinic

 Intoxicatii – febra, stare generala de rau, dureri de cap.

 Erupția cu scarlatina este acută, la presiune moderată cu o spatulă de sticlă petele sunt mai clar vizibile. Când este apăsată mai tare, erupția lasă loc unei nuanțe gălbui-aurii pe piele. Apare în zilele 1-3 de boală și este localizat în principal pe obraji, inghinal și părțile laterale ale corpului. Pielea triunghiului nazolabial rămâne palidă și lipsită de erupții cutanate. Erupția durează de obicei 3-7 zile, apoi dispare, fără a lăsa pigmentare. Erupția se îngroașă pe coturile membrelor - zone axilare, cotului, poplitee.

 Limbă stacojie - în a 2-4-a zi de boală, limba pacientului devine distinct granulată, de culoare roșu aprins, așa-numita limbă „zmeură”.

 Durerea în gât este un simptom constant al scarlatinei. Poate fi mai severă decât durerea obișnuită în gât.

 Peeling-ul pielii - apare după dispariția erupției cutanate (14 zile de la debutul bolii): în zona palmelor și picioarelor este în placă mare, începând de la vârful degetelor; Există peeling asemănător pitiriazisului pe corp, gât și urechi.

Pneumococi, taxonomie. Proprietăți. Grupuri serologice. Caracteristici distinctive față de alți streptococi. Boli provocate. Principii și metode de diagnostic de laborator.

Morfologie și proprietăți biologice. Pneumococii (Streptococcus pneumoniae) sunt coci ovali, ușor alungiți, în formă de lanceolate, dispuși în perechi, asemănător cu o flacără de lumânare. De asemenea, pot fi localizați în lanțuri scurte, asemănătoare cu streptococii. Motile, nu formează spori, gram-pozitive.
Sunt cultivate pe medii cu proteine adăugate: sânge, ser și lichid ascitic. Pe agar-sânge, coloniile de pneumococi sunt mici, asemănătoare cu picăturile de rouă, transparente în lumina transmisă, cu un centru deprimat, înconjurate de o zonă de hemoliză incompletă, de culoare verzuie, asemănătoare coloniilor de viridans streptococcus. În mediile lichide produc o ușoară tulburare, uneori formând un precipitat. Biochimic sunt destul de active: descompun glucoza, lactoza, maltoza, inulina și alți carbohidrați pentru a forma acid, nu lichefiază gelatina și nu formează indol. Defalcarea inulinei este o caracteristică de diagnostic diferențial care ajută la distingerea pneumococilor de streptococi, care nu degradează inulina. O caracteristică distinctivă importantă este capacitatea pneumococilor de a se dizolva în bilă, în timp ce streptococii sunt bine conservați în ea.

Patogenie și clinică. Pneumococii sunt agenții cauzali ai pneumoniei lobare la om. Ele pot provoca, de asemenea, ulcere corneene târâtoare, catar al tractului respirator superior, meningită, endocardită, leziuni articulare și alte boli.

După o boală, imunitatea este slab încordată, pe termen scurt și specifică tipului.
Diagnosticul microbiologic. Materialele pentru studiu sunt spută, sânge, tampon de gât și lichid cefalorahidian. Datorită faptului că pneumococul moare rapid, materialul patologic trebuie livrat la laborator pentru examinare cât mai curând posibil.

meningococi. Taxonomie, proprietăți. Structura antigenică a meningococilor, clasificare. Patogenia infecției meningococice, manifestări clinice. Principii și metode de diagnostic microbiologic. Diferențierea agentului cauzal al infecției meningococice și a altor meningococi. Prevenirea specifică.

N.meningitidis (meningococi).

Meningococul este agentul cauzal al infecției meningococice - antroponoză strictă cu transmitere prin aer a agentului patogen. Sursa principală este media. Rezervorul natural este nazofaringele uman. Proprietățile morfologice, culturale și biochimice sunt similare cu gonococul. Diferențe - fermentează nu numai glucoza, ci și maltoza și produc hemolizină. Au o capsulă care este mai mare ca dimensiune și are o structură diferită de cea a gonococului.

Compoziția antigenică. Au patru sisteme antigenice principale.

1. Antigene polizaharide specifice grupului capsular. Tulpinile de serogrup A cauzează cel mai adesea focare epidemice.

2. Antigenele proteice ale membranei exterioare. Pe baza acestor antigene, meningococii din serogrupurile B și C sunt împărțiți în clase și serotipuri.

3. Antigene specifice genului și speciei.

4. Antigene lipopolizaharide (8 tipuri). Au toxicitate mare și provoacă efecte pirogene.

Factori de patogenitate. Factori de adeziune și colonizare - pili și proteine ale membranei externe. Factorii de invazive sunt hialuronidaza si alte enzime produse (neuraminidaza, proteazele, fibrinolizina). Antigenele polizaharide capsulare care protejează microorganismele de fagocitoză sunt de mare importanță.

Imunitate durabil, antimicrobian.

Diagnosticul de laborator bazat pe bacterioscopie, izolarea culturii și identificarea biochimică a acesteia, metode de diagnostic serologic. Materialul este inoculat pe medii nutritive solide și semi-lichide care conțin sânge, lichid ascitic și ser sanguin.

Culturile oxidază-pozitive sunt considerate ca aparținând genului Neisseria. Meningococul se caracterizează prin fermentarea glucozei și a maltozei. Apartenența la un serogrup este determinată de un test de aglutinare (RA).

Gonococi. Taxonomie, proprietăți. Patogenia infecției gonococice, caracteristicile imunității. Principii și metode de diagnostic de laborator al gonoreei acute și cronice, blenoreei. RSK Bordet-Gengou, scop, mecanism, contabilitate de reacție. Prevenirea blenoreei la nou-născuți. Prevenirea și tratamentul gonoreei. Terapie specifică.

N.gonoree (gonococ).

Gonococul este agentul cauzal al gonoreei, o boală cu transmitere sexuală cu manifestări inflamatorii la nivelul tractului genito-urinar. Substratul pentru colonizare este epiteliul uretrei, rectului, conjunctivei ochiului, faringelui, colului uterin, trompelor uterine și ovarului.

Diplococii, ușor colorați cu albastru de metilen și alți coloranți anilină, sunt pleomorfi (polimorfism). Sunt foarte pretențioși în ceea ce privește condițiile de cultivare și mediile nutritive. Dintre carbohidrați, doar glucoza este fermentată.

Structura antigenică foarte variabil – caracterizat prin variații de fază (dispariția determinanților antigenici) și variații antigenice (modificări ale determinanților antigenici).

Factori de patogenitate. Principalii factori sunt băut, cu ajutorul cărora gonococii efectuează aderența și colonizarea celulelor epiteliale ale membranei mucoase a tractului genito-urinar și lipopolizaharidă(endotoxina eliberată atunci când gonococii sunt distruși). Gonococii sintetizează proteaza IgAI, care descompune IgA.

Diagnosticul de laborator. Diagnosticul bacterioscopic include colorarea Gram și albastru de metilen. Semnele tipice ale gonococului sunt colorarea gram-negativă, diplococii în formă de fasole, localizarea intracelulară.

Inocularea se efectuează pe medii speciale (KDS-MPA din carne de iepure sau inimă de bovină cu ser, agar-ascita, agar sânge).

Agenți cauzatori ai infecției anaerobe cu gaze. Taxonomie. Proprietăți. Caracteristicile toxinelor. Patogenie, forme clinice. Principii și metode de diagnostic de laborator, medicamente pentru prevenirea și tratamentul specific.

Gangrena gazoasă este o infecție anaerobă policlostridiană (adică cauzată de diferite tipuri de clostridii) (traumatică) a plăgii. Importanța principală este C.perfringens, mai rar - C.novyi, precum și alte tipuri de clostridii în asocieri persistente între ele, coci piogeni aerobi și bacterii anaerobe putrefactive.

C.perfringens este un locuitor normal al intestinelor oamenilor și animalelor; intră în sol cu fecale. Este un agent cauzator al infecției rănilor - provoacă boală atunci când agentul patogen intră în răni în condiții anaerobe. Este foarte invaziv și toxicogen. Invazivitatea este asociată cu producția de hialuronidază și alte enzime care au un efect distructiv asupra mușchilor și țesutului conjunctiv. Principal factor de patogenitate - exotoxina, care are efecte hemo-, necro-, neuro-, leucotoxice și letale. În conformitate cu specificitatea antigenică a exotoxinelor, acestea sunt izolate serotipuri patogen. Alături de gangrena gazoasă, C. perfringens provoacă infecții toxice de origine alimentară (se bazează pe acțiunea enterotoxinelor și necrotoxinelor).

Caracteristicile patogenezei. Spre deosebire de bolile purulente cauzate de aerobi, la infecția anaerobă nu predomină inflamația, ci necroză, edem, formare de gaze în țesuturi, otrăvire cu toxine și produse de degradare a țesuturilor.

Imunitate- predominant antitoxic.

Diagnosticul de laborator include bacterioscopia secreției plăgii, izolarea și identificarea agentului patogen, detectarea și identificarea toxinei în probele biologice folosind o reacție de neutralizare cu anticorpi antitoxici specifici.

Prevenire și tratament. Baza pentru prevenirea gangrenei gazoase este tratamentul chirurgical oportun și corect al rănilor. În cazul rănilor severe, se administrează seruri antitoxice împotriva principalelor tipuri de clostridii, câte 10 mii UI fiecare, în scop medicinal - 50 mii UI.

Clostridia tetanos. Taxonomie. Proprietăți, caracteristici ale toxinelor. Patogenia bolii. tetanos descendent. Clinica. Principii și metode de diagnostic de laborator. Scopul cercetării bacteriologice, medicamente pentru prevenirea și tratamentul specific.

Tetanusul este o infecție acută a plăgii caracterizată prin leziuni neurotoxina celulele motorii ale măduvei spinării și ale creierului, care se manifestă sub formă de convulsii ale mușchilor striați. Oamenii și animalele de fermă se îmbolnăvesc. Solul, mai ales contaminat cu excremente umane și animale, este o sursă constantă de infecție cu tetanos.

Agentul cauzal este C.tetani - o baghetă gram-pozitivă mare care formează spori. Sporii sunt localizați terminal (tip de tobă), și sunt mobili datorită flagelilor - peritrici. Anaerob obligatoriu. Sporii sunt foarte rezistenți.

Proprietăți antigenice. Agentul patogen are antigene O și H.

Factori de patogenitate. Factorul principal este cea mai puternică exotoxină. Există două fracții principale ale acesteia: tetanospasmina (neurotoxină) și tetanolizina (hemolizină). Neurotoxina intră în sistemul nervos central în zonele sinapselor mioneurale, se transmite de la neuron la neuron în zona sinapselor, se acumulează în zonele motorii ale măduvei spinării și creierului și blochează transmiterea sinaptică. Moartea apare din paralizia centrului respirator, asfixie (lezarea mușchilor laringelui, diafragmei, mușchilor intercostali) sau paralizia inimii.

Diagnosticul de laborator. Diagnosticul microbiologic include bacterioscopia materiilor prime, cultura pentru izolarea agentului patogen și identificarea acestuia și detectarea toxinei tetanice.

Izolarea agentului patogen se realizează conform schemei standard pentru anaerobi, folosind diverse medii solide și lichide (mediu Kitt-Tarozzi), identificarea pe baza proprietăților morfologice, culturale, biochimice și toxice.

Cea mai simplă și eficientă metodă de diagnosticare microbiologică este un biotest pe șoareci albi. Un grup este infectat cu materialul de testat, al doilea (martor) - după amestecarea probelor cu ser antitoxic tetanos. În prezența toxinei tetanice, grupul experimental de șoareci moare, în timp ce grupul de control rămâne în viață.

Tratament și prevenire a urgențelor. Se folosesc imunoglobulina tetanica donatoare (antitoxina), ser antitoxic (350 UI/kg), antibiotice (peniciline, cefalosporine). Pentru a crea imunitate la vaccin, toxoidul tetanic este utilizat, cel mai adesea ca parte a vaccinurilor DTP (anatoxinele tetanice, difteria și bacilii pertussis uciși).

Botulismul Clostridium. Taxonomie. Proprietăți. Caracteristicile toxinelor, diferență față de exotoxine ale agenților patogeni ai altor infecții alimentare. Principii și metode de diagnostic de laborator. Medicamente pentru prevenire și tratament specific.

Botulismul este o intoxicație alimentară severă asociată cu consumul de produse contaminate cu C.botulinum și caracterizată prin afectarea specifică a sistemului nervos central. Și-a luat numele de la Lat. botulus - cârnați.

Proprietățile agentului patogen. Tije gram-pozitive polimorfe mari, mobile, au flageli peritric. Sporii sunt ovali si situati subterminal (racheta de tenis). Ele produc opt tipuri de toxine, care diferă în specificitatea antigenică și, în consecință, se disting 8 tipuri de agenți patogeni. Printre cele mai importante caracteristici se numără prezența sau absența proprietăților proteolitice (hidroliza cazeinei, producerea de hidrogen sulfurat).

Toxina are un efect neurotoxic. Toxina intră în organism cu alimente, deși probabil se poate acumula atunci când agentul patogen se înmulțește în țesuturile corpului. Toxina este labilă la căldură, deși fierberea timp de până la 20 de minute este necesară pentru inactivarea completă. Toxina este absorbită rapid în tractul gastrointestinal, pătrunde în sânge, acționează selectiv asupra nucleilor medulei oblongate și a celulelor ganglionare ale măduvei spinării. Se dezvoltă fenomene neuro-paralitice - tulburări de deglutiție, afonie, disfagie, sindrom oftalmo-plegic (strabism, vedere dublă, pleoape căzute), paralizie și pareză a mușchilor faringieni și laringieni, încetarea respirației și a activității cardiace.

Diagnosticul de laborator. Principiile sunt comune clostridiilor.

Tratament și prevenire. Se bazează pe utilizarea timpurie a serurilor antitoxice (polivalente sau, când este stabilit tipul, omoloage). Prevenirea se bazează pe un regim sanitar și igienic la prelucrarea produselor alimentare. Conservele de ciuperci de casă și alte produse depozitate în condiții anaerobe sunt deosebit de periculoase.

11. Pseudomonas aeruginosa. Taxonomie. Proprietăți. Boli provocate.
Rolul in infectiile nosocomiale. Principii și metode de diagnostic de laborator.

Genul pseudomonas, P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) este unul dintre principalii agenți cauzali ai proceselor purulent-inflamatorii locale și sistemice din spitalele medicale.

Agentul patogen este distribuit peste tot (apă, sol, plante, animale) și se găsește în mod normal la oameni (cel mai adesea în intestine, pe piele și mucoase). Morfologie- tija gram-negativă dreaptă sau ușor curbată, mobilă, situată individual, în perechi sau în lanțuri scurte în frotiuri. Sintetizează mucusul (substanța capsulară), în special tulpinile mucoide mai virulente.

Proprietăți culturale. Este aerob și are un set de enzime corespunzătoare tipului de respirație (citocromi, citocrom oxidază, dehidraze. Pe medii lichide formează o peliculă gri-argintie. Pe medii solide se observă adesea fenomenul de liză curcubeu. Până la sfârșit a zilei datorită sintezei pigmentului piocianinaÎn cultură apare o culoare albastru-verde.

Proprietăți biochimice. Pseudomonas aeruginosa se caracterizează prin activitate zaharolitică scăzută (oxidează doar glucoza), activitate proteolitică ridicată și formarea unei zone de beta-hemoliză pe agar sânge. Sintetizează trimetilamina, care conferă culturilor un miros plăcut de iasomie. Produce producerea de bacteriocine - piocine.

Proprietăți antigenice și patogene. Principalii antigeni ai Pseudomonas aeruginosa sunt antigenul O somatic specific de grup și antigenul H flagelar specific de tip. Complexul O-antigenic - un agregat de LPS cu proteine și lipide ale peretelui celular, are proprietăți de endotoxină și este unul dintre principalii factori de patogenitate. Pseudomonas aeruginosa are un set mare de factori de patogenitate - endotoxina (LPS, similar cu alte bacterii gram-negative), o serie de exotoxine - citotoxina, exoenzima S, hemolizine, exotoxina A (cel mai important, care amintește de exotoxina difterice), enzime ( colagenază, neuraminidază, proteaze).

Diagnosticul de laborator. P.aeruginisa și-a primit numele pentru colorarea verde-albăstruie a scurgerii plăgii și a materialului de pansament. Principala metodă de diagnostic este bacteriologică. Detectarea pigmentului de piocianina este importanta. Tratament și prevenire specifică. Nu există o prevenire specifică. Pentru infecțiile toxice alimentare și disbioza intestinală cauzată de Pseudomonas aeruginosa, este eficient un intestin-bacteriofag complex, care include un fag pseudomonas. Dintre medicamentele antibacteriene, cel mai des sunt utilizate aminoglicozide, cefalosporine și chinolone.

Bacteriile gram-negative oportuniste - agenți cauzali ai proceselor purulent-inflamatorii (Proteus, Klebsiella, bacil miraculos etc.), taxonomie. Caracteristicile generale ale enterobacteriilor. Principii și metode de diagnostic de laborator.

Genul Klebsiella.

Genul Klebsiella aparține familiei Enterobacteriaceae. O caracteristică a reprezentanților genului este capacitatea de a forma o capsulă. Principala specie este K. pneumoniae. Ele provoacă leziuni oportuniste - pneumonie dobândită în spital, infecții ale tractului urinar, diaree la nou-născuți. Klebsiella provoacă mastită, septicemie și pneumonie la animale și se găsește în mod constant pe pielea și mucoasele oamenilor și animalelor. Klebsiella sunt tije drepte, nemișcate, de diferite dimensiuni. Anaerobi facultativi. Oxidaza - negativ, catalaza - pozitiv.

Factori de patogenitate. Acestea includ o capsulă polizaharidă (antigen K), endotoxină, fimbrie, sistem siderofor (leagă ionii feroși și reduce conținutul acestora în țesuturi), exotoxine labile și stabile la căldură.

Manifestari clinice. K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) se caracterizează prin bronșită și bronhopneumonie spitalicească, pneumonie lobară, infecții ale tractului urinar, leziuni ale meningelor, articulațiilor, coloanei vertebrale, ochilor, precum și bacteriemie și septicopiemie. Subspecia ozaenae provoacă o formă specială de rinită atrofică cronică - ozen.

Diagnosticul de laborator. Metoda principală este bacteriologică. Tratament. Una dintre caracteristicile Klebsiella este rezistența lor la mai multe medicamente și dezvoltarea leziunilor pe fondul scăderii rezistenței organismului. Antibioticele sunt folosite pentru formele cronice generalizate și lene de klebsiella, de obicei în combinație cu medicamente care stimulează sistemul imunitar.

Genul Proteus.

Genul Proteus aparține familiei Enterobacteriaceae. Genul a fost numit după fiul lui Poseidon Proteus, care și-a putut schimba aspectul. Reprezentanții genului sunt capabili să modifice manifestările externe ale creșterii pe medii nutritive solide și, de asemenea, se disting prin cel mai mare pleomorfism (variabilitatea morfologiei) în comparație cu alte enterobacterii.

Proteele descompun tirozina, reduc nitrații, oxidaza este negativă, catalaza este pozitivă. Ei trăiesc în intestinele multor specii de animale vertebrate și nevertebrate, în sol, în apele uzate și în materie organică în descompunere. Poate provoca infecții ale tractului urinar la oameni, precum și leziuni septice la pacienții cu arsuri și după intervenții chirurgicale. Destul de des provoacă și toxiinfecții alimentare. P.vulgaris și P.mirabilis joacă cel mai adesea un rol în patologie.

Proprietăți culturale. Proteele cresc pe medii simple pe un interval larg de temperatură. pH-ul optim este de 7,2-7,4, temperatura este de la +35 la 37 de grade Celsius. Coloniile de protea în forma O sunt rotunde, semidigitale și convexe, în timp ce formele H oferă o creștere continuă. Creșterea proteelor este însoțită de un miros putred. Fenomenul de roi este caracteristic; formele H dau o creștere târâtoare caracteristică pe MPA sub forma unui văl delicat albăstrui-fumuriu. La însămânțarea conform metodei Shushkevich în umiditatea de condensare a MPA proaspăt tăiat, cultura crește treptat sub forma unui văl pe suprafața agarului. Pe MPB se remarcă turbiditatea difuză a mediului cu un sediment alb gros în partea de jos.

Factori de patogenitate. Acestea includ LPS peretelui celular, capacitatea de a „roi”, fimbrie, proteaze și urază, hemolizine și hemaglutinine.

Diagnosticul de laborator. Metoda principală este bacteriologică. Sunt utilizate medii de diagnostic diferențial (Ploskirev), medii de îmbogățire și MPA conform metodei Shushkevich. Tratament. Pentru disbacterioza intestinală asociată cu Proteas (colită), puteți utiliza fagul Proteus și medicamentele care îl conțin (intestine, bacteriofag coliproteus).

„Top minunat” (Serratia marcescens), un tip de bacterii dintre microorganismele pigmentare. Baghete gram-negative mobile (peritricos) care nu poartă spori. După tipul de metabolism – anaerob facultativ. Pe suprafața agarului formează colonii netede sau granulare de culoare roșu închis și strălucitor, cu un luciu metalic. Trăiește în sol, apă și alimente. Dezvoltându-se pe pâine (la umiditate ridicată), în lapte, le colorează roșu; astfel de produse nu sunt permise spre vânzare. Condițional patogen pentru animale și oameni; poate provoca supurație.

13. Escherichia. Taxonomie. Boli cauzate de Escherichia coli. Variante patogene ale Escherichiei diareice. Structura antigenică, clasificare. Caracteristicile diagnosticului microbiologic. Diferențierea Escherichiei diareice de cele oportuniste.

Escherichia este cea mai frecventă bacterie intestinală aerobă care, în anumite condiții, poate provoca un grup larg de boli umane, atât cu localizare intestinală (diaree), cât și extraintestinală (bacteremie, infecții ale tractului urinar etc.). Principala specie este E. coli (Escherichia coli) - cel mai frecvent agent cauzator al bolilor infectioase cauzate de enterobacterii. Acest agent patogen este un indicator al contaminării fecale, în special în apă.

Proprietăți culturale. Pe medii lichide, E. coli produce turbiditate difuză, pe medii solide, formează colonii de formă S și R. Pe Endo, mediu principal pentru Escherichia, E. coli fermentatoare de lactoză formează colonii de culoare roșie intens, cu strălucire metalică, cele nefermentante formează colonii roz pal sau incolore cu centrul mai închis, pe mediul lui Ploskirev sunt roșii cu o tentă gălbuie; pe mediul lui Levin sunt albastru închis cu o strălucire metalică.

Proprietăți biochimice.În cele mai multe cazuri, E. coli fermentează carbohidrații (glucoză, lactoză, manitol, arabinoză, galactoză etc.) cu formarea de acid și gaz, produce indol, dar nu formează hidrogen sulfurat și nu lichefiază gelatina.

Principalii factori de patogenitate ai E.coli diaree.

1. Factori de aderență, colonizare și invazie asociați cu pili, structurile fimbriale și proteinele membranei exterioare. Ele sunt codificate de gene plasmide și promovează colonizarea intestinului subțire inferior.

2. Exotoxine: citotonine (stimulează hipersecreția de lichid de către celulele intestinale, perturbă metabolismul apă-sare și favorizează dezvoltarea diareei) și enterocitotoxine (acționează asupra celulelor peretelui intestinal și a endoteliului capilar).

3. Endotoxina (lipopolizaharidă).

În funcție de prezența diferiților factori de patogenitate, E. coli diareeic este împărțit în cinci tipuri principale: enterotoxigen, enteroinvaziv, enteropatogen, enterohemoragic, enteroadeziv.

4. E. coli patogenă se caracterizează prin producerea de bacteriocine (colicine).

E.coli enterotoxigenă au o toxină termo-labilă cu un nivel molecular mare, asemănătoare cu acțiunea holerei, provocând diaree asemănătoare holerei (gastroenterita la copii mici, diareea călătorilor etc.).

Escherichia coli enteroinvazivă capabil să pătrundă și să se înmulțească în celulele epiteliale intestinale. Ele provoacă diaree abundentă amestecată cu sânge și un număr mare de leucocite (un indicator al unui proces invaziv) în fecale. Clinic seamănă cu dizenteria. Tulpinile au unele asemănări cu Shigella (staționare, nu fermentează lactoza și au proprietăți enteroinvazive ridicate).

E.coli enteropatogen- principalii agenți cauzali ai diareei la copii. Leziunile se bazează pe aderența bacteriilor la epiteliul intestinal cu afectarea microvilozităților. Caracterizat prin diaree apoasă și deshidratare severă.

Escherichia coli enterohemoragică provoacă diaree în amestec cu sânge (colită hemoragică), sindrom hemolitic-uremic (anemie hemolitică în combinație cu insuficiență renală). Cel mai frecvent serotip de Escherichia coli enterohemoragic este O157:H7.

E. coli enteroadezivă nu formează citotoxine, slab studiate.

Diagnosticul de laborator. Abordarea principală este izolarea unei culturi pure pe medii de diagnostic diferențial și identificarea acesteia prin proprietăți antigenice. RA este diagnosticată cu un set de seruri polivalente OK (la antigenele O și K).

Printre streptococii patogeni, S.pneumoniae (pneumococul) ocupă un loc aparte. Joacă un rol foarte important în patologia infecțioasă umană. Această specie este unul dintre principalii agenți cauzali ai pneumoniei lobare. Conform datelor departe de a fi complete, în fiecare an în lume există peste 500 de mii de pneumonii cauzate de pneumococi, în special la copii și vârstnici. Pe lângă pneumonie, acest microb provoacă meningită, endocardită, peritonită, otită medie, rinită, sinuzită, sepsis, ulcere corneene târâtoare și o serie de alte boli. Pentru efectuarea diagnosticelor de laborator se folosesc metode bacterioscopice, bacteriologice și biologice. Materialul pentru examinare este spută, puroi, sânge, lichid cefalorahidian, mucus din gură și nazofaringe, secreții din sinusul maxilar, ochi și urechi. Este important să trimiteți imediat materialul la laborator și să îl examinați foarte repede, deoarece pneumococii sunt susceptibili la autoliză.

Examen bacterioscopic

Examinarea bacterioscopică a materialului (cu excepția sângelui) se reduce la realizarea a două frotiuri. Unul dintre ele este colorat cu Gram, al doilea cu Burri-Gins, ceea ce face posibilă identificarea capsulei. Pneumococii sunt localizați sub formă de diplococi lanceolați, înconjurați de o capsulă comună. Dacă 10 sau mai mulți diplococi tipici sunt detectați în câmpul vizual, este foarte probabil să se concluzioneze că S. pneumoniae este prezent. Cu toate acestea, microscopia primară nu dă dreptul de a face un diagnostic final, deoarece frotiurile pot conține diplococi capsulari nepatogeni - reprezentanți ai microflorei normale. Prin urmare, este necesară inocularea materialului clinic și izolarea unei culturi pure.

Cercetări bacteriologice

Pentru sepsis la patul pacientului, se inoculează 10 ml de sânge într-un flacon care conține 100 ml de zer sau bulion de zahăr, se incubează timp de 18-20 de ore la 37 ° C, apoi se inoculează pe agar sânge, se izolează și se identifică o cultură pură. Pentru meningită, lichidul cefalorahidian este centrifugat și sedimentul este inoculat pe agar cu sânge. Pe ea, pneumococii cresc sub formă de mici colonii rotunde, înconjurate de o zonă verde; o depresiune caracteristică este vizibilă în centrul coloniei. Nu este recomandabil să se cultive spută sau puroi pe medii nutritive, deoarece prezența microflorei saprofite suprimă creșterea S. pneumoniae. Este mai bine să introduceți materialul de testat în cavitatea abdominală a șoarecilor albi. Un biotest este o metodă rapidă, fiabilă și precisă pentru izolarea unei culturi pure de pneumococi. Șoarecii albi sunt foarte sensibili la aceste bacterii și în decurs de 10-12 ore de la infectare, pneumococii pătrund în sânge și în organele parenchimatoase, provocând sepsis. Cultivarea sângelui din inimă sau a unor bucăți de organe interne în timpul autopsiei animalelor permite izolarea unei culturi pure a agentului patogen. Pentru identificarea pneumococilor se folosesc proprietățile lor. Spre deosebire de alte tipuri de streptococi, S.pneumoniae nu crește pe un mediu cu optochină, inulina este fermentată și este foarte sensibilă la acțiunea bilei (testul dezoxicolat). Liza rapidă a pneumococilor de către bilă poate fi detectată dacă se adaugă 0,5 ml de bilă la 1 ml de cultură în bulion. După 15-20 de minute în termostat, are loc liza completă a celulelor bacteriene. Pentru determinarea serovariilor pneumococice (în prezent sunt 85), se utilizează reacția de aglutinare a sticlei cu seruri standard sau fenomenul de „umflare a capsulei”. În prezența serului omolog, capsula pneumococică se umflă foarte mult. Este chiar mai bine să se efectueze serotiparea folosind reactivi comerciali în reacțiile de aglutinare sau coaglutinare latex, prin care se dezvăluie antigenele capsulare. Dintre streptococi, este important și genul Enterococcus, dintre care cele mai semnificative specii sunt E.faecalis, E.faecium și E.durans. Sunt destul de răspândite în natură. Principala lor nișă ecologică este intestinele oamenilor și animalelor, dar se găsesc și ca parte a microflorei normale a pielii perineului, organelor genito-urinale, oro- și nazofaringe. Ele pot provoca supurația rănilor, bacteriemie, afectarea sistemului urogenital, în special la pacienții cu catetere cu funcționare îndelungată, infecții toxice alimentare, disbacterioză a tractului intestinal și, mai puțin frecvent, endocardită. În frotiurile din materialul de testat, enterococii sunt localizați în perechi, în lanțuri scurte sau sub formă de ciorchini, gram-pozitivi. Diagnosticul bacteriologic al infecțiilor enterococice se realizează fără dificultăți, deoarece aceste bacterii cresc bine pe medii simple. Agar dif-3 este selectiv pentru ei (până la 600 ml de 3% MPA, adăugați 400 ml de bilă 40%). După 24 de ore de incubație, coloniile care au crescut au o dimensiune de 0,4-1,0 mm și sunt de culoare cenușie. Pe agar-sânge, în jurul coloniilor are loc hemoliza incompletă sau completă. Spre deosebire de streptococii viridans, enterococii pot crește pe MPA cu 6,5% NaCl, reducând laptele cu albastru de metilen la 37°C după 4-6 ore. Identificarea culturilor izolate se realizează în funcție de caracteristicile morfologice, culturale și biochimice.

Pagina 40 din 91

Agentul cauzal al pneumoniei lobare (pneumonia) este pneumococul - Diplococcus pneumoniae, descoperit pentru prima dată de Pasteur în saliva unei persoane care a murit de rabie (1881).
Morfologie și proprietăți tinctoriale. Pneumococii (Fig. 67 și 68 în insert) sunt coci perechi cu o formă alungită de lancet. Prin urmare, ei sunt numiți altfel diplococi lanceolați. Formând lanțuri scurte, pneumococii devin similari cu streptococii și, prin urmare, II. F. Gamaleya le-a numit Streptococcus lanceolatus. Dimensiunea celulei variază de la 0,5X0,75 la 1X1,5 μm. Nu au spori sau flageli. O trăsătură distinctivă a pneumococului este formarea unei capsule, care poate fi exprimată clar în materiale patologice (sputa, sânge etc.). Când este cultivată pe medii nutritive, capsula se pierde. Pneumococii acceptă cu ușurință coloranții cu anilină și se colorează pozitiv pe Gram.
Proprietăți culturale și biochimice.

Orez. 68. Pneumococi în frotiu de spută.

Pneumococii sunt aerobi și anaerobi facultativi. Temperatura optimă este de aproximativ 37°. Ele cresc pe medii care conțin proteine animale (agar din sânge sau ser, ascitagar).
După 24 de ore, pe suprafața agarului se formează mici colonii, care amintesc de coloniile de streptococ, dar mai mici și mai transparente.
Pe agar înclinat, cu inoculare abundentă, se obține o acoperire transparentă foarte delicată, constând din colonii minuscule, care nu se contopesc; pe bulion, există o ușoară turbiditate și un mic sediment fulminant.
Tulpinile proaspăt izolate nu cresc pe gelatină. Tulpinile vechi de pneumococi de laborator pot produce mici colonii albicioase deja la 18-22°. Gelatina nu este lichefiată.
Ele cresc bine în lapte, coagulându-l pentru a forma acid.
Pe agar-sânge, în jurul coloniilor se formează o zonă de hemoliză incompletă cu o colorație maro-verzuie a mediului.

Orez. 67. Pneumococi în cultură pură din bulion.

Pneumococii degradează zaharoza, rafinoza și lactoza. Cea mai importantă caracteristică este descompunerea inulinei. Majoritatea streptococilor nu au această proprietate. Pneumococii virulenți sunt solubili în bilă.
Structura antigenică și tipurile serologice de pneumococi. Citoplasma pneumococilor conține un antigen proteic comun tuturor pneumococilor. Acest antigen determină specificitatea lor de specie. Capsula conține antigene polizaharide specifice (haptenă), care diferă în compoziția lor chimică între diferiți pneumococi (antigene de tip). Pe baza acestor antigene tipice, folosind reacția de aglutinare și precipitare, toți pneumococii sunt împărțiți în trei grupe principale (I, II, III) și un al patrulea grup (grup X). Grupul X include mai mult de 70 de tipuri.
Rezistenţă. Pe medii nutritive artificiale, pneumococii mor rapid (4-7 zile). Sub un strat de vaselină în mediu lichid și semi-lichid care conțin proteine, acestea rămân viabile timp de 3-12 luni.
Pneumococii tolerează bine uscarea: persistă în spută uscată în lumină difuză până la 2 luni. Cand sunt incalzite la 52-55° mor in 10 minute, la 60° mor si mai repede. Într-o soluție de acid carbolic (3%), pneumococii mor în 1-2 minute.
Pneumococii sunt deosebit de sensibili la optochin. Sub influența acestora din urmă, ei mor la o concentrație de 1: 1.000.000.
Formarea toxinelor și patogenitatea pentru animale. Veninul pneumococic este o endotoxină. Dintre animalele de laborator, șoarecii albi și iepurii sunt mai sensibili la pneumococ. Administrarea parenterală a pneumococilor virulenți după 24-48 de ore determină moartea animalelor cu simptome de sepsis. La autopsie, la locul injectării se găsește exudat fibrinos; splina este mărită și hiperemică.
Patogenie și boli la om. Punctul de intrare pentru infecție este de obicei membrana mucoasă a faringelui. Introducerea pneumococilor în organism și pătrunderea lor în țesutul pulmonar poate avea loc aparent atât prin sistemul limfatic și circulator, cât și direct prin ramurile bronhiilor. Cea mai frecventă boală este pneumonia lobară, care se caracterizează printr-un debut brusc, febră mare, uneori cu frisoane, dureri laterale la respirație, cefalee, uneori pierderea conștienței, delir și agitație severă. Ulterior, apare o tuse cu spută caracteristică roșu-ruginiu. În plămâni se observă un proces care implică adesea unul, mai rar doi sau trei lobi.
Sursele de infecție sunt bolnavul și purtătorul de bacterii. Infecția din exterior are loc atât pe cale aerogenă - prin picături de la purtător, cât și prin infecția cu praf. Pneumococii pot persista în spută uscată timp îndelungat (aproximativ 2 luni) și pot intra în aer cu praf.
La examinarea persoanelor sănătoase, pneumococii patogeni se găsesc adesea în nazofaringe, astfel încât nu poate fi exclusă posibilitatea de autoinfecție, iar factorii care slăbesc rezistența organismului, cum ar fi hipotermia, joacă un rol semnificativ.
Pe lângă pneumonia lobară, pneumococii provoacă inflamația urechii medii, meninge (meningită), precum și a membranei mucoase a nasului și a sinusurilor de aer, amigdalita, ulcere corneene târâtoare și inflamarea sacului lacrimal.
Imunitate. A avea pneumonie nu oferă imunitate. Boala poate recidiva de mai multe ori. Acest lucru se explică prin prezența multor tipuri de pneumococi și prin faptul că pneumonia trecută crește sensibilitatea organismului la pneumococi.
Serul celor care și-au revenit conține anticorpi (aglutinine etc.).
Până în momentul crizei cu pneumonie, concentrația de anticorpi în sânge atinge un titru semnificativ, iar fagocitoza crește brusc (I. Ya. Chistovici). Pe baza acestor date, imunitatea în pneumonie ar trebui considerată în primul rând ca fiind fagocitară, în care anticorpii (bacteriotropinele) joacă un rol major.
Diagnosticul microbiologic. Materialele pentru cercetarea bolilor pneumococice sunt spută, sânge și puroi prelevate din diverse leziuni și mai rar lichidul cefalorahidian.
Materialul patologic (excluzând sângele) este examinat bacterioscopic, bacteriologic și prin infectarea șoarecilor albi. Trebuie să se recurgă la această ultimă metodă deoarece materialul sursă, în special sputa, conține de obicei microfloră străină abundentă, care, la inocularea directă a materialului pe medii nutritive, face dificilă izolarea pneumococului.
Frotiurile din spută, puroi etc. sunt colorate cu Gram. La microscop se găsesc diplococi lanceolați înconjurați de o capsulă, colorați Gram pozitiv.
Pentru a izola culturile, inoculați-le pe agar cu sânge sau pe agar agar. După 24-48 de ore de creștere la 37°C, în prezența pneumococului, apar colonii caracteristice. Coloniile sunt semănate pe agar de zer sau ascită, iar cultura izolată este testată pentru solubilitatea în bilă și capacitatea de a descompune inulina.
Infectarea unui șoarece alb este cea mai fiabilă modalitate de a izola o cultură de pneumococ. Materialul de la un pacient sau cadavru (sputa, puroi, o bucata de organ etc.) se pune intr-o cana sterila, apoi se macina intr-un mortar steril, cu 1-2 ml bulion steril si se injecteaza intraperitoneal 0,5 ml din aceasta suspensie. într-un șoarece alb. După moartea șoarecelui, care are loc în decurs de 12-48 de ore, din inimă se prelevează hemoculturi și în aproape toate cazurile se obține o cultură pură de pneumococ.
Dacă se suspectează sepsis, se inoculează 10-20 ml de sânge în bulion de ascitic sau ser. După îmbogățire, bulionul este inoculat pe agar sânge și cultura pură izolată este identificată prin caracteristicile morfologice și biochimice.
Terapie specifică și chimioterapie. În prezent, medicamentele sulfonamide și antibioticele (penicilină, biomicină, tetraciclină etc.) sunt folosite cu mare succes pentru tratarea pneumoniei lobare.

Genul Streptococcus include: Streptococcus pyogenes (hemolitic) și Streptococcus pneumoniae (pneumococ). Streptococii au fost descoperiți pentru prima dată de Billroth (1874) și L. Pasteur (1879). Ele au fost studiate de E. Rosenbach (1884).

Streptococcus pyogenes (hemolitic)

Morfologie. Streptococii sunt coci care au o formă sferică. Diametrul fiecărui coc este în medie de 0,6-1 microni, dar se caracterizează prin polimorfism: există coci mici și mari, strict sferici și ovali. Streptococii sunt aranjați într-un lanț, care este rezultatul divizării lor în același plan. Lungimea lanțurilor este diferită. Pe un mediu nutritiv solid lanțurile sunt de obicei scurte, pe un mediu lichid sunt lungi. Streptococii sunt imobili și nu au spori (vezi Fig. 4) Culturile proaspăt izolate formează uneori o capsulă. În secțiuni ultrasubțiri, este vizibilă o microcapsulă, sub care există un perete celular cu trei straturi și o membrană citoplasmatică cu trei straturi. Gram pozitiv.

Cultivare. Streptococii sunt anaerobi facultativi. Ele cresc la o temperatură de 37° C și un pH de 7,6-7,8. Mediile optime pentru creșterea lor sunt mediile care conțin sânge sau ser sanguin. Pe medii nutritive solide, coloniile de streptococi sunt mici, plate, tulburi și de culoare cenușie. Unele specii de streptococi formează hemoliză pe agar-sânge. Streptococii β-hemolitici formează o zonă clară de hemoliză, streptococii α-hemolitici formează o zonă mică verzuie (rezultatul tranziției hemoglobinei la methemoglobină). Există streptococi care nu produc hemoliză.

În bulionul de zahăr, streptococii cresc odată cu formarea de sediment cu granulație fină de lângă pereți și fund, în timp ce bulionul rămâne transparent.

Proprietăți enzimatice. Streptococii au proprietăți zaharolitice. Ele descompun glucoza, lactoza, zaharoza, manitolul (nu întotdeauna) și maltoza pentru a forma acid. Proprietățile lor proteolitice sunt slab exprimate. Ele coagulează laptele, dar nu lichefiază gelatina.

Formarea toxinelor. Streptococii formează o serie de exotoxine: 1) streptolizinele - distrug globulele roșii (O-streptolizina are efect cardiotoxic); 2) leucocidina - distruge leucocitele (formate din tulpini foarte virulente); 3) toxina eritrogenă (scarlatină) - determină tabloul clinic al scarlatinei - intoxicație, reacții vasculare, erupții cutanate, etc. Sinteza toxinei eritrogene este determinată de profag; 4) citotoxine – au capacitatea de a provoca glomerulonefrită.

În streptococi s-au găsit diverși antigeni. Citoplasma celulei conține un antigen specific de natură nucleoproteică - același pentru toți streptococii. Antigenele de tip proteine sunt localizate pe suprafața peretelui celular. Un antigen de grup polizaharidic a fost găsit în peretele celular al streptococilor.

Pe baza compoziției fracției de antigen specific grupului de polizaharide, toți streptococii sunt împărțiți în grupuri, desemnate cu majuscule A, B, C, D etc. la S. În plus față de grupuri, streptococii sunt împărțiți în tipuri serologice, care sunt desemnate cu cifre arabe.

Grupa A include 70 de tipuri. Acest grup include majoritatea streptococilor care provoacă diferite boli la oameni. Grupa B include în principal streptococi care sunt oportuniști pentru oameni. Grupa C include streptococii patogeni pentru oameni și animale. Grupa D este formată din streptococi care nu sunt patogeni pentru oameni, dar acest grup include și enterococii, care sunt locuitori ai tractului intestinal al oamenilor și animalelor. Intrând în alte organe, provoacă procese inflamatorii: colecistită, pielită etc. Astfel, pot fi clasificați drept microbi oportuniști.

Apartenența culturilor izolate la una dintre grupele serologice se determină folosind o reacție de precipitare cu seruri de grup. Pentru determinarea tipurilor serologice se folosește o reacție de aglutinare cu seruri specifice tipului.

Streptococii sunt destul de stabili în mediu. La o temperatură de 60°C ei mor după 30 de minute.

Ei rămân în puroi uscat și spută luni de zile. Concentrațiile normale de dezinfectanți le distrug în 15-20 de minute. Enterococii sunt mult mai rezistenți; soluțiile dezinfectante îi omoară numai după 50-60 de minute.

Susceptibilitatea animalelor. Vitele, caii, câinii și păsările sunt sensibile la streptococii patogeni. Printre animalele de laborator, iepurii și șoarecii albi sunt sensibili. Cu toate acestea, streptococii care sunt patogeni pentru oameni nu sunt întotdeauna patogeni pentru animalele de experiment.

Surse de infecție. Oameni (pacienți și purtători), mai rar animale sau produse infectate.

Căile de transmisie. Praf din aer și din aer, uneori din alimente, posibil contact cu gospodăria.

Bolile pot apărea ca urmare a infecției exogene, precum și endogen - cu activarea streptococilor oportuniști care trăiesc pe membranele mucoase ale faringelui, nazofaringelui și vaginului. O scădere a rezistenței organismului (răcire, post, surmenaj etc.) poate duce la autoinfecții.

Presensibilizarea este de mare importanță în patogenia infecțiilor streptococice – ca urmare a unei boli suferite anterior de etiologie streptococică.

Când streptococii pătrund în sânge, provoacă un proces septic sever.

Boli la oameni cel mai adesea cauzate de streptococii β-hemolitici din grupa serologică A. Ei produc enzime de patogenitate: hialuronidază, fibrinolizină (streptokinaza), dezoxiribonuclează etc. În plus, streptococii au o capsulă și proteină M, care au proprietăți antifagocitare.

Streptococii provoacă la om diverse infecții acute și cronice, atât cu formarea de puroi, cât și nesupurative, care diferă ca tablou clinic și patogeneză. Supurativ - flegmon, abcese, infecții ale plăgilor, non-supurative - infecții acute ale tractului respirator superior, erizipel, scarlatina, reumatism etc.

Streptococii provoacă adesea infecții secundare în gripă, rujeolă, tuse convulsivă și alte boli și complică adesea infecțiile rănilor.

Imunitate. Natura imunității este antitoxică și antibacteriană. Imunitatea antimicrobiană post-infecțioasă este de putere scăzută. Acest lucru se explică prin imunogenitatea slabă a streptococilor și un număr mare de serovari care nu oferă imunitate încrucișată. În plus, la bolile streptococice se observă alergizarea organismului, ceea ce explică tendința de recidivă.

Prevenirea. Se reduce la măsuri sanitare și igienice, întărind rezistența generală a organismului. Prevenția specifică nu a fost dezvoltată.

Tratament. Se folosesc antibiotice. Penicilina, la care streptococii nu au devenit rezistenți, este adesea folosită, precum și eritromicina și tetraciclina.

Importanța streptococului în etiologia carditei reumatice. Patogenia carditei reumatice nu a fost suficient studiată. Dar o serie de fapte vorbesc în favoarea rolului streptococului în dezvoltarea acestei boli:

1. La bolnavii cu cardită reumatică se cultivă streptococul B-hemolitic din gât.

2. Reumatismul apare adesea după ce se suferă de amigdalite, amigdalite, faringite, care sensibilizează organismul.

3. În serul sanguin al pacienților sunt detectate antistreptolizină și antistreptohialuronidază - anticorpi la enzimele și toxine streptococice.

4. Confirmarea indirectă a rolului streptococului este tratamentul de succes cu penicilină.

Recent, formelor L de streptococ li sa acordat importanță în apariția formelor cronice de cardită reumatică.

Prevenirea exacerbărilor carditei reumatice se reduce la prevenirea bolilor streptococice (de exemplu, primăvara și toamna, se administrează un curs preventiv de penicilină). Tratamentul se reduce la utilizarea medicamentelor antibacteriene - penicilina.

Importanța streptococului în etiologia scarlatinei. G.N. Gabrichevsky (1902) a sugerat pentru prima dată că streptococul hemolitic este agentul cauzator al scarlatinei. Dar, deoarece streptococii izolați în alte boli nu diferă de agenții cauzali ai scarlatinei, această opinie nu a fost împărtășită de toată lumea. S-a stabilit acum că scarlatina este cauzată de streptococii de grup A, care produc o toxină eritrogenă.

Cei care s-au vindecat de boală dezvoltă imunitate - stabilă, antitoxică. Tensiunea sa este determinată prin stadializarea reacției Dick - injectarea intradermică a unei toxine eritrogene. La cei care nu sunt bolnavi, în jurul locului de injectare apar hiperemie și umflare, care se caracterizează ca o reacție pozitivă (absența antitoxinei în serul sanguin). La cei care s-au vindecat din boală, o astfel de reacție este absentă, deoarece antitoxina pe care au format-o neutralizează toxina eritrogenă.

Prevenirea. Izolare, spitalizare. Gamma globulină se administrează copiilor slăbiți în contact. Prevenția specifică nu a fost dezvoltată.

Tratament. Se folosesc penicilina si tetraciclina. În cazurile severe se administrează ser antitoxic.

Scopul studiului: identificarea streptococului și determinarea serovarului acestuia.

Material pentru cercetare

1. Mucus din gat (dureri in gat, scarlatina).

2. Răzuire din zona afectată a pielii (erisipel, streptodermie).

3. Pus (abces).

4. Urina (nefrita).

5. Sânge (suspiciune de sepsis; endocardită).

Metode de cercetare de bază

1. Bacteriologic.

2. Microscopic.

Progresul studiului

A doua zi de studiu

Scoateți paharele din termostat și verificați. Dacă există colonii suspecte, din unele dintre ele se fac frotiuri, se colorează cu Gram și se examinează microscopic. Dacă în frotiu sunt detectați streptococi, o parte din colonia rămasă este subcultivată în eprubete pe agar cu ser pentru a izola o cultură pură și pe bulion cu sânge în eprubete. Până la sfârșitul zilei, o cultură de 5-6 ore din bulion sau agar este subcultivată în bulion Martin cu 0,25% glucoză pentru a determina grupa serologică în reacția de precipitare Lensfield. Eprubetele și sticlele se pun într-un termostat și se lasă până a doua zi.

A treia zi de studiu

Culturile se scot din termostat, se verifică puritatea culturii pe un agar înclinat, se fac frotiuri, se colorează cu Gram și se examinează microscopic. Dacă există o cultură pură de streptococ, se inoculează pe medii Hiss (lactoză, glucoză, maltoză, zaharoză și manitol), lapte, gelatină, bilă 40% și se pune într-un termostat.

Privind prin bulionul lui Martin. În prezența creșterii specifice, se efectuează o reacție de precipitare Lensfield pentru a determina grupa serologică.

Stabilirea reacției de precipitare conform Lensfield. O cultură zilnică crescută în bulion Martin este turnată în mai multe tuburi de centrifugă și centrifugă timp de 10-15 minute (3000 rpm).

Lichidul supernatant este turnat într-un borcan cu o soluție dezinfectantă, iar sedimentul este umplut cu o soluție sterilă izotonică de clorură de sodiu și centrifugat din nou. Se adaugă 0,4 ml de acid clorhidric 0,2% la sedimentul colectat din toate tuburile de centrifugă. Apoi eprubeta se pune într-o baie de apă și se fierbe timp de 15 minute, agitând ocazional. După fierbere, suspensia rezultată este din nou centrifugată. Antigenul este extras în supernatant, care este turnat într-o eprubetă curată și neutralizat cu o soluție de hidroxid de sodiu 0,2% la un pH de 7,0-7,2. Se adaugă ca indicator albastru de bromotimol (0,01 ml soluție 0,04%). Cu această reacție, culoarea se schimbă de la galben pai la albastru.

Apoi se toarnă 0,5 ml de ser de grup antistreptococic în 5 tuburi de precipitare, care se prepară prin imunizarea iepurilor (vezi capitolul 19). Serul A se adaugă la primul tub, serul B la al 2-lea, serul C la al 3-lea, serul D la al 4-lea, soluția izotonică de clorură de sodiu (martor) la al 5-lea. După aceasta, folosind o pipetă Pasteur, stratificați cu atenție extractul rezultat (antigenul) în toate eprubetele de-a lungul peretelui.

Dacă reacția este pozitivă într-o eprubetă cu ser omolog, la limita extractului cu serul se formează un inel subțire alb-láptos (Fig. 38).

A patra zi de cercetare

Rezultatele sunt înregistrate (Tabelul 25).

În prezent se determină dezoxiribonucleaza, precum și antistreptohialuronidază și antistreptolizin-O.

Întrebări de control

1. Ce metode de bază de testare de laborator pentru identificarea streptococilor cunoașteți?

2. De ce să folosiți reacția de precipitare Lensfield?

3. De ce ar trebui ca antigenul să fie transparent atunci când se efectuează această reacție? Descrieți tehnica de stadializare a acestei reacții.

Obțineți de la profesor seruri antistreptococice A, B, C, D și soluție izotonică de clorură de sodiu. Configurați reacția de precipitare, arată rezultatele profesorului și schițați-le.

Medii de cultură

Agar cu sânge(vezi capitolul 7).

Agar seric(vezi capitolul 7).

Şuierat media(uscat).

Gelatina cu peptonă din carne (MPG). La 100 ml de MPB se adauga 10-15 g de gelatina tocata marunt. Gelatina trebuie să se umfle atunci când este încălzită lent într-o baie de apă (la o temperatură de 40-50 ° C). O soluție de carbonat de sodiu 10% (bicarbonat de sodiu) este adăugată la gelatina topită și pH-ul este setat la 7,0. Apoi se filtrează imediat printr-un filtru plisat. Filtrarea este lentă. Pentru a accelera procesul, filtrarea se poate face într-o autoclavă fierbinte. Mediul filtrat se toarnă în tuburi de 6-8 ml și se sterilizează. Sterilizarea se efectuează fie fracționat la o temperatură de 100 ° C timp de 3 zile la rând, fie simultan la 110 ° C timp de 20 de minute într-o autoclavă. Răcirea mediului se realizează în eprubete amplasate vertical.

Pregătirea laptelui. Laptele proaspăt se aduce la fierbere, se pune într-un loc răcoros timp de o zi, se scoate din smântână și se fierbe din nou. Lăsați o zi și îndepărtați stratul superior. Laptele degresat se filtrează printr-un strat de vată, apoi se alcalinizează cu soluție de carbonat de sodiu 10% la pH 7,2 și se toarnă în eprubete de 5-6 ml.

bulion Martin. În apa din carne se adaugă o cantitate egală de peptonă Martin (stomac de porc tocat expus la acid clorhidric). Amestecul rezultat este fiert timp de 10 minute, alcalinizat cu o soluție de hidroxid de sodiu 10% la pH 8,0, se adaugă 0,5 acetat de sodiu, se fierbe din nou și se toarnă în recipiente sterile. Se adaugă 0,25% glucoză în bulionul Martin.

Miercuri Kitta - Tarozzi(vezi capitolul 34).

Streptococcus pneumoniae (pneumococ)

Pneumococii au fost descriși pentru prima dată de R. Koch (1871).

Morfologie. Pneumococii sunt diplococi în care laturile celulelor aflate în față sunt turtite, iar părțile opuse sunt alungite, deci au o formă lanceolă, care amintește de flacăra unei lumânări (vezi Fig. 4). Dimensiunea pneumococilor este de 0,75-0,5 × 0,5-1 microni, sunt situate în perechi. În mediile nutritive lichide formează adesea lanțuri scurte, devenind asemănătoare cu streptococii. Preumococii sunt imobili, nu au spori, iar în corp formează o capsulă înconjurând ambii coci. Capsula contine o substanta rezistenta la caldura antifagin (protejeaza pneumococul de fagocitoza si actiunea anticorpilor). Când cresc pe medii nutritive artificiale, pneumococii își pierd capsula. Pneumococii sunt gram-pozitivi. Bacteriile Gram-negative se găsesc în culturi mai vechi.

Cultivare. Pneumococii sunt anaerobi facultativi. Ele cresc la o temperatură de 36-37° C și un pH de 7,2-7,4. Sunt pretențioși pe medii, deoarece nu pot sintetiza mulți aminoacizi, așa că cresc numai pe medii cu adaos de proteine native (sânge sau ser). Pe agar seric formează colonii mici, delicate, destul de transparente. Pe agar-sânge, cresc colonii umede de culoare gri-verzuie, înconjurate de o zonă verde, care este rezultatul conversiei hemoglobinei în methemoglobină. Pneumococii cresc bine în bulion cu adaos de glucoză 0,2% și în bulion cu zer. Creșterea în medii lichide se caracterizează prin turbiditate difuză și sedimente prăfuite la fund.

Proprietăți enzimatice. Pneumococii au activitate zaharolitică destul de pronunțată. Ele descompun: lactoza, glucoza, zaharoza, maltoza, inulina pentru a forma acid. Manitolul nu este fermentat. Proprietățile lor proteolitice sunt slab exprimate: coagulează laptele, nu lichefiază gelatina și nu formează indol. Pneumococii se dizolvă în bilă. Descompunerea inulinei și dizolvarea în bilă este o caracteristică importantă de diagnostic care distinge Streptococcus pneumoniae de Streptococcus pyogenes.

Factori de patogenitate. Pneumococii produc hialuronidază, fibrinolizină etc.

Formarea toxinelor. Pneumococii produc endotoxină, hemolizină și leucocidină. Virulența pneumococilor este, de asemenea, asociată cu prezența antifaginei în capsulă.

Structura și clasificarea antigenică. În citoplasma pneumococilor există un antigen proteic comun întregului grup, iar în capsulă există un antigen polizaharidic. Pe baza antigenului polizaharidic, toți pneumococii sunt împărțiți în 84 de serovari. Dintre cele patogene pentru om, serovarele I, II și III sunt cele mai frecvente.

Rezistență la factorii de mediu. Pneumococii aparțin grupului de microorganisme instabile. O temperatură de 60° C îi ucide în 3-5 minute. Sunt destul de rezistente la temperaturi scăzute și uscare. În sputa uscată rămân viabile până la 2 luni. Ele pot fi păstrate pe un mediu nutritiv nu mai mult de 5-6 zile. Prin urmare, la cultivare, este necesar să se reînsămânțeze la fiecare 2-3 zile. Solutii conventionale de dezinfectanti: 3% fenol, sublimati in dilutie de 1:1000 le distrug in cateva minute.

Pneumococii sunt deosebit de sensibili la optochin, care îi omoară la o diluție de 1:100.000.

Susceptibilitatea animalelor. Gazda naturală a pneumococilor este oamenii. Cu toate acestea, pneumococii pot provoca boli la viței, miei, purcei, câini și maimuțe. Dintre animalele experimentale, șoarecii albi sunt foarte sensibili la pneumococ.

Surse de infecție. O persoană bolnavă și un purtător de bacterii.

Căile de transmisie. Picături din aer, poate praf din aer.

Poartă de intrare. Membrană mucoasă a tractului respirator superior, ochi și urechi.

Boli la oameni. Pneumococii pot provoca boli purulent-inflamatorii de diferite localizări. Specific pneumococilor sunt:

1) pneumonie lobară;

2) ulcer corneean târâtor;

Cea mai frecventă boală este pneumonia lobară, care afectează unul, mai rar doi sau trei lobi ai plămânului. Boala este acută, însoțită de febră mare și tuse. De obicei se termină critic.

Imunitate. După boală, rămâne imunitatea instabilă, deoarece pneumonia se caracterizează prin recidive.

Prevenirea. Se reduce la măsuri sanitare și preventive. Prevenția specifică nu a fost dezvoltată.

Tratament. Se folosesc antibiotice - penicilina, tetraciclina etc.

Întrebări de control

1. Morfologia pneumococilor. Cultivare și proprietăți enzimatice.

2. Ce factori determină patogenitatea pneumococilor și ce protejează pneumococii de fagocitoză?

3. Care sunt principalele porți ale infecției pneumococice. Ce boli provoacă pneumococii?

Examen microbiologic

Scopul studiului: identificarea pneumococului.

Material pentru cercetare

1. Sputa (pneumonie).

2. Mucus din gat (durere in gat).

3. Secreție dintr-un ulcer (ulcer corneean târâtor).

4. Secreții din ureche (otita medie).

5. Pus (abces).

6. punctat pleural (pleurezie).

7. Sânge (suspiciune de sepsis).

1 (Este mai bine să luați sputa de dimineață (cu pneumonie specifică, sputa are o culoare ruginită).)

Metode de cercetare de bază

1. Microscopic.

2. Microbiologic.

3. Biologic.

Progresul studiului

Probă biologică. Se emulsionează puțin (3-5 ml spută) într-un bulion steril, 0,5 ml din acest amestec se injectează intraperitoneal într-un șoarece alb. După 6-8 ore, șoarecele prezintă semne de boală. În acest moment, pneumococul poate fi deja detectat în exudatul cavității abdominale. Exudatul se ia cu o seringă sterilă. Din el se fac frotiuri, se colorează cu Gram și se examinează la microscop. Pentru a izola o cultură pură, exudatul este inoculat pe agar seric. Dacă șoarecele moare sau se îmbolnăvește, sângele din inimă este cultivat pe agar seric pentru a izola o cultură pură. Culturile sunt plasate într-un termostat.

Metodă accelerată pentru determinarea tipului de pneumococ(reacție de microaglutinare). 4 picături de exsudat din cavitatea abdominală a unui șoarece infectat sunt aplicate pe o lamă de sticlă. La prima picătură se adaugă ser aglutinant de tip I, la a doua se adaugă ser de tip II, la a treia se adaugă ser de tip III, iar la a patra soluție izotonică de clorură de sodiu (martor).

Serurile de tip I și II sunt prediluate într-un raport de 1:10, iar serurile de tip III - 1:5. Toate picăturile sunt agitate, uscate, fixate și colorate cu fucsin diluat. Dacă rezultatul este pozitiv, în una dintre picături se notează aglomerarea microbiană (aglutinare).

A doua zi de studiu

Culturile sunt îndepărtate din termostat, examinate, iar frotiurile sunt făcute din colonii suspecte. Dacă în frotiuri sunt prezenți diplococi lanceolați gram-pozitivi, se izolează 2-3 colonii pe o înclinație de agar seric pentru a obține o cultură pură. Culturile sunt plasate într-un termostat. Frotiurile se fac din bulion, se colorează cu Gram și se examinează la microscop.

A treia zi de studiu

Culturile sunt îndepărtate de pe termostat. Ei verifică puritatea culturii - fac frotiuri, colorație Gram și microscop. Dacă în cultura izolată există diplococi lanceolați gram-pozitivi, cultura izolată este identificată prin cultivare:

1) pe medii Hiss (lactoză, glucoză, zaharoză, maltoză) însămânțarea se efectuează în mod obișnuit - prin injectare în mediu;

2) pe mediu cu inulină;

3) pe un mediu cu optochin;

4) efectuați un test biliar.

Testul la inulină. Cultura studiată se seamănă pe un mediu nutritiv care conține inulină și tinctură de turnesol și se pune într-un termostat. După 18-24 de ore, recoltele sunt îndepărtate din termostat. În prezența pneumococilor, mediul devine roșu (streptococii nu schimbă consistența și culoarea mediului).

Determinarea sensibilității la optochin. Cultura izolată se inoculează pe agar sânge 10% care conține optochină 1:50000. Pneumococii, spre deosebire de streptococi, nu cresc pe medii care conțin optochină.

Test biliar. 1 ml din cultura bulionului de testat se toarnă în tuburi de aglutinare. La unul dintre ele se adaugă o picătură de bilă de iepure, al doilea tub servește drept control. Ambele eprubete sunt plasate într-un termostat. După 18-24 de ore, apare liza pneumococilor, care se exprimă în curățarea unui bulion tulbure. În control, suspensia rămâne tulbure.

O probă de bilă poate fi efectuată pe un mediu nutritiv solid. Pentru a face acest lucru, se aplică un grăunte de bilă uscată pe o colonie de pneumococi cultivate în vase cu agar și ser - colonia se dizolvă și dispare.

A patra zi de cercetare

Rezultatele sunt înregistrate (Tabelul 26).

Notă. j - descompunerea carbohidraților cu formarea acidului.

În prezent, metodele de cercetare serologică (RSK și RIGA) sunt utilizate pe scară largă pentru determinarea anticorpilor streptococici. Determinarea grupului și a serovarului culturii izolate se realizează folosind anticorpi fluorescenți.

Determinarea virulenței pneumococice. O cultură zilnică în bulion de pneumococ este diluată cu 1% apă peptonă de la 10 -2 la 10 -8, se administrează 0,5 ml din fiecare diluție la doi șoareci albi. Cultura care a provocat moartea șoarecilor la o diluție de 10 -7 este evaluată ca virulentă; la o diluție de 10 -4 -10 -6 este considerată moderat virulentă. O cultură care nu provoacă moartea șoarecilor este avirulentă.

Întrebări de control

1. Ce metode de izolare a unei culturi pure de pneumococi cunoașteți?

2. Care animal este cel mai sensibil la pneumococ?

3. Ce reacții se efectuează cu exudatul unui șoarece infectat și în ce scop?

4. Din ce reprezentanți ai cocilor piogeni ar trebui diferențiat pneumococul și folosind ce test?

5. Cum se determină virulența pneumococilor?

Exercițiu

Realizați o diagramă a examinării sputei, indicându-i etapele pe zi.

Medii de cultură

Agar seric(vezi capitolul 7).

bulion de zer(vezi capitolul 7).

Agar cu sânge(vezi capitolul 7).

Şuierat media(uscat).

Mediu de probă cu inulină. La 200 ml apă distilată se adaugă 10 ml ser bovin inactivat, 18 ml tinctură de turnesol și 3 g inulină. Sterilizați cu abur curgător la 100° C timp de 3 zile la rând. Bulion de bilă (vezi capitolul 7).

CATEGORII

Screening

Ecografia extremităților

Tipuri de ultrasunete

Ecografia abdominală

Ecografia toracelui

ARTICOLE POPULARE

	„Cocnirea civilizațiilor” Samuel Huntington Ciocnirea civilizațiilor descărca fb2
	Cum să organizezi învățarea limbii engleze pentru copii vara?
	Cuvinte marker Prezent continuu
	Se poate face dulceata de paducel?
	Retete de dulceata de paducel delicioasa si sanatoasa

2023 „kingad.ru” - examinarea cu ultrasunete a organelor umane