Rolul infecției fungice în patologia umană. Diagnosticul micozelor

Conform instrucțiunilor SP 1.2.036-95 ale Comitetului de Stat pentru Supravegherea Epidemiologică al Federației Ruse, Moscova, 1996 „Procedura pentru înregistrarea, depozitarea, transferul și transportul microorganismelor din grupele de patogenitate I-IV” în funcție de pericolul epidemiologic, drojdie și ciupercile de mucegai, precum și dermatofiții aparțin grupelor III-IV de agenți patogeni boli infecțioase, prin urmare, atunci când se lucrează cu acestea, este necesar să se respecte reguli speciale de siguranță, salubritate industrială, regim antiepidemic și igiena personală, menite să asigure și prevenirea publică a infecției, alergizării și răspândirii infecției.

Laboratorul de lucru cu microorganisme din grupele de patogenitate III-IV este dotat cu mobilier ușor dezinfectat, inclusiv dulapuri pentru sticlă curată de laborator, reactivi, medii de cultură, echipamente și instrumente adecvate. Pentru lucru aveți nevoie de lămpi cu alcool sau arzătoare cu gaz, bucle microbiologice, spatule micologice, spatule, pensete pentru epilare și anatomice, mașini de tăiat unghii, bisturii, foarfece, linguri Volkmann, pipete, pipete Pasteur, ace de disecție, baghete de sticlă, seringi, centrifugă cu viteză redusă , aparat de agitare , vase Petri, eprubete, sticlărie, Lampă ultravioletă Wood cu filtru, microscoape, iluminatoare, termostate, autoclave, frigidere, cuptoare cu căldură uscată, lămpi bactericide.

Luarea de material pentru cercetare

Diagnosticul microscopic al micozelor presupune detectarea miceliului și a sporilor în biomaterialul studiat. Solzii epidermici, părul și unghiile sunt considerate biomaterialul studiat. O cerință indispensabilă înainte de efectuarea studiului este absența tratamentului local timp de cel puțin zece zile și tratamentul sistemic timp de o lună. Trebuie avut în vedere faptul că utilizarea de către pacient a detergenților (în special a celor care conțin antiseptice) poate afecta fiabilitatea rezultatelor testului, prin urmare spălarea este interzisă cu 3-4 zile înainte de test.

Instrumentele pentru luarea biomaterialului și prepararea medicamentului sunt prezentate în figură:

Fotografie. Instrumente pentru preluarea biomaterialului și prepararea medicamentului.

Dacă se suspectează micoza pielii netede, micoza mâinilor și picioarelor fără deteriorarea plăcilor unghiilor, se examinează scuamele epidermice de la suprafața leziunii. Pentru micoza pielii netede, este de preferat să se studieze epiderma din zona marginală a leziunii, deoarece procesul patologic se rezolvă adesea în zona centrală. În același timp, nu trebuie să uităm de posibilitatea de deteriorare a părului vellus, care determină alegerea tacticilor de tratament ulterioare. Parul se indeparteaza cu penseta de epilare. Pentru micoza mâinilor și picioarelor fără deteriorarea plăcilor unghiilor, se examinează solzi epidermici din a treia și a patra pliu interdigital, precum și din palmele și arcadele picioarelor.

Dacă există suspiciunea de infecție fungică a părului lung (scalp, barbă, mustață și pubis), precum și părul vellus, se efectuează un examen microscopic. Cu tricofitoza scalpului, părul se rupe la o distanță de 1-2 mm deasupra nivelului gurii foliculului de păr, asemănând cu cioturi și puncte. Dacă părul nu poate fi prins cu penseta de epilare, atunci încearcă să-l îndepărteze cu capătul ascuțit al unui bisturiu sau cu un ac de disecție.

Cu microsporia scalpului, părul se rupe la o înălțime de 5-6 mm, asemănând cu o „pajiste cosită”. Acești fire de păr rupte sunt examinate la microscopie. Părul este îndepărtat de pe leziuni cu ajutorul unei pensete.

Cu favus, se examinează părul subțire deasupra suprafeței scutulei.

Dacă se suspectează onicomicoză, se examinează materialul ușor zdrobit din zona hiperkeratozei subunguale, precum și plăcile de unghii modificate.

Este necesar să înțelegeți că orice material de testat de la un pacient este potențial infecțios, astfel încât colectarea acestuia trebuie efectuată într-o cameră în care se efectuează curățarea umedă zilnică folosind dezinfectanți (soluție de cloramină 5%, înălbitor clarificat 5%) și aerul. se sterilizeaza cu iradiatoare cu ultraviolete (acestea includ 1-1,5 ore si intra in camera la 20 de minute dupa oprire). Termostatele se șterg săptămânal cu o soluție de cloramină 0,5%, pereții sunt tratați cu dezinfectanți o dată pe lună. Când lucrează, medicul trebuie protejat de mască, ochelari de protecție, halat și mănuși. Instrumentele pentru prelevarea biomaterialului, mănușile, lamele și lamelele, draperiile de unică folosință și șervețelele sunt dezinfectate după utilizare prin scufundare într-o soluție 1,5% de clindesin-extra (soluție de fenol 5% sau soluție de Lysol 5%) timp de 30 de minute. Materialul patologic rămas (solzi de păr, piele și unghii) este autoclavat la 2 atm. și 132˚ C timp de 20 de minute (control - uree) sau la 1,5 atm. și 126˚ C timp de 30 de minute (martor - acid benzoic), sau fierbeți timp de 1 oră în apă sau 30 de minute într-o soluție de săpun-sodă 1%.

Materialul patologic este transportat la laborator într-un recipient special sau cutii metalice, ferindu-l de lumina directă a soarelui. Documentul de însoțire indică numele de familie, prenumele, patronimul, sexul, vârsta și adresa pacientului, diagnosticul clinic așteptat, denumirea materialului studiat, ora recoltării acestuia, localizarea leziunii, istoricul medical. numărul, numele medicului și instituția care trimite materialul.

Prepararea medicamentului

După obținerea fulgilor epidermici din leziune, se pregătește un preparat pentru examinarea microscopică. Se aplică 1-2 picături de 20% KOH pe materialul de testat plasat pe o lamă de sticlă, după care lama de sticlă este încălzită la flacăra unui arzător până când la periferie apare o margine albicioasă de alcalin cristalizat. Proba este apoi acoperită cu o lamelă (care este presată în jos cu un ac de disecție) și examinată la microscop. Studiul trebuie efectuat nu mai târziu de 2 ore după prepararea medicamentului din cauza posibilității de cristalizare alcaline.

Metoda de preparare a unui preparat de păr pentru infecția fungică suspectată corespunde celei descrise anterior, singura diferență fiind că capacul de sticlă nu este apăsat cu un ac de disecție (pentru a evita zdrobirea părului).

Fotografie. Aspectul unei margini de alcali cristalizat.

Pentru a pregăti medicamentul, bucăți de plăci de unghii tăiate sunt scufundate într-o eprubetă cu 20% KOH și expuse într-un termostat timp de 1 oră (t≈37˚C), apoi masa rezultată asemănătoare jeleului este transferată pe o lamă de sticlă. , acoperit cu o lametă și examinat la microscop.

Spre deosebire de plăcile de unghii, mostrele din material ușor zdrobit din zona hiperkeratozei subunguale sunt așezate pe o lamă de sticlă, se aplică 1-2 picături de 20% KOH, după care lama este încălzită peste flacăra unui arzător până la o margine albicioasă. de alcalin cristalizat apare de-a lungul periferiei (Fig. 65) . Proba este apoi acoperită cu o lamelă, care este apăsată ușor cu un ac de disecție și examinată la microscop.

Microscopia preparatului

Pentru a efectua o examinare microscopică, se folosește un microscop de laborator fără utilizarea imersiei. Microscopia solzilor epidermici, a solzilor din zona hiperkeratozei subunguale, precum și a plăcilor de unghii dizolvate se efectuează mai întâi la o mărire mică (×100), iar când sunt detectate fire miceliale, amintind de o „hartă a râurilor” (căi ferate) , obiectivul este comutat la o mărire mai mare (×400) . La o mărire medie, miceliul seamănă cu tije de sticlă de formă bizare care modifică gradul de refracție a luminii atunci când lucrează cu un microșurub de microscop.

Microscopia specimenului de păr se efectuează imediat la mărire medie (×200 sau ×400). În cazul tricofitozei, în interiorul părului se găsesc spori mari dispuși în rânduri, în timp ce la microsporia există mulți spori mici de mozaic în interiorul părului (de unde și termenul „microsporia”). Uneori se remarcă prezența unei teci pe exteriorul părului - acest lucru este tipic atât pentru trichophytosis (o variantă de ectothrix, sporii sunt mari), cât și pentru microsporie (în acest caz, teaca este formată din spori mici). La microscopia părului afectat cu favus, în interiorul părului, pe lângă ciorchine de spori rotunzi sau poligonali, se găsesc bule de aer și fire de miceliu.

Preparatele trebuie vizualizate nu mai tarziu de 2 ore de la momentul prepararii lor datorita posibilitatii de cristalizare alcalina. Pentru a crește fiabilitatea diagnosticului, trebuie făcute mai multe preparate (cel puțin două) dintr-o leziune. Posibilele erori în diagnosticul microscopic al micozelor pot fi asociate atât cu pregătirea de proastă calitate a preparatelor (supraîncălzirea peste flacăra arzătorului, care este însoțită de cristalizarea prematură a alcalinei), cât și cu experiența insuficientă a cercetătorului (când fibrele de țesuturile găsite accidental în preparat sunt adesea confundate cu fire de miceliu).

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL MICOZELOR

Preluarea materialului pentru testarea de laborator pentru ciuperci.

1.OST 42-21-2-854: ordinul nr.222/80 din 27 iunie 2000
2. Dotare: penseta, lamele de sticla, foarfeca, lingura Volkmann.
4.Indicatii: boli fungice.
5. Complicații: niciuna.

Pregatirea camerei de tratament:

Schimbarea solutiilor.

A pregati:
-1% solutie de cloramina pentru carpe
-3% soluție de cloramină – pentru dezinfecția pansamentelor și pensetelor
- soluție de spălare (156 ml peroxid de hidrogen + 5 g pulbere de spălat + 839 ml apă distilată) - pentru prelucrarea pensetei
- Soluție de peroxid de hidrogen 6% – pentru tratarea mănușilor.

Algoritm pentru efectuarea manipulării.

Trebuie să luați o pensetă, o lamă de sticlă, o lingură Volkmann și foarfece;
- invita pacientul la dressing;
- pacientul stă pe scaun sau canapea;
- m/s este în picioare.

Tehnică:

Luați fulgi de piele și păr de pe leziune cu penseta;
- asezati materialul luat pe o lama de sticla si acoperiti-l cu o alta lama de sticla.
- spălați-vă mâinile cu săpun;
- trimite materialul luat la laborator.

COLECTAREA DE MATERIAL

Luarea unghiilor pentru examinare.

Luați foarfece și lamele de sticlă;
- foloseste foarfeca pentru a taia o bucata din marginea libera a unghiei;
- acoperă materialul luat cu o altă lamă de sticlă;

Înmuiați foarfecele și penseta în soluție de formaldehidă 3%.

Colectarea corectă a materialului din unghiile afectate este cheia cercetării microbiologice de succes. Atunci când iau materialul, acestea nu captează întotdeauna zone ale unghiei care conțin ciuperci viabile. Desigur, ciupercile neviabile nu vor crește în cultură, iar specia lor nu poate fi determinată.

Zona unghiei care trebuie luată este determinată de forma onicomicozei.

Deci, cu o formă superficială de onicomicoză, ar trebui să se facă răzuire de pe suprafața plăcii unghiei.

În cea mai comună formă distală subunguală, cele mai viabile ciuperci sunt situate sub placa unghiei. Materialul trimis spre examinare ar trebui să includă nu numai tăieturi ale plăcii de unghii, ci și răzuire de pe patul unghiei, de sub placă.

În plus, zonele unghiei nealterate ar trebui, de asemenea, capturate, deoarece cele mai active ciuperci sunt situate la granița dintre ele și zonele afectate ale unghiei.

Cu forma subunguală proximală, este dificil să luați materialul. În aceste cazuri, uneori, mai ales dacă urmează să efectueze un examen histologic sau un diagnostic diferenţial, se efectuează o biopsie a unghiilor, iar ocazional se foloseşte un burghiu.

Pentru paronichie se fac răzuire din creasta proximală și de sub ea.

În toate cazurile, pentru a evita contaminarea bacteriană, unghia trebuie tratată cu alcool etilic înainte de a preleva o probă.

INVESTIGARE MICROSCOPICĂ

Examinarea microscopică a materialului patologic pentru ciuperci se efectuează în preparate native și colorate.

Pentru a pregăti preparatele nepătate, materialul rezultat este zdrobit folosind un bisturiu sau un ac de disecție și se pune în mijlocul unei lame de sticlă. Pentru a identifica mai clar elementele ciupercii, materialul este clarificat (macerat). În acest scop, ei apelează la ajutorul diferitelor substanțe, cel mai adesea alcaline caustice (KOH, NaOH), care dizolvă solzii epidermici, mucusul, puroiul, luminează pigmentul părului și pun astfel ciupercile disponibile pentru cercetare.

Aplicați 1-3 picături dintr-o soluție 20-30% KOH (NaOH) pe pielea înmuiată sau pe fulgii de unghii, care sunt plasați în mijlocul unei lame de sticlă. Materialul studiat în picături de alcali este încălzit cu atenție peste flacăra unei lămpi cu alcool până când apare o margine albă delicată de cristale alcaline de-a lungul periferiei picăturii. Nu încălziți până la punctul de fierbere. După încălzire, picătura este acoperită cu o sticlă de acoperire, evitând pătrunderea bulelor de aer.

R. A. Arabian și G. I. Gorshkova (1995) recomandă lăsarea preparatelor din solzi de piele și păr limpezite și acoperite cu o sticlă de acoperire timp de 5 - 10 minute, iar preparatele din plăci de unghii cu 30 - 40 de minute înainte de microscopie.

Curățarea preparatelor poate fi efectuată fără încălzire; pentru aceasta sunt lăsate într-o soluție de KOH 20% timp de 30 - 60 de minute sau se folosesc alte metode de curățare a materialului patologic: cloralactofenol conform Aman; lactofenol; o soluție care conține 15% dimetil sulfoxid și KOH în apă. Rezultate bune se obțin după curățarea plăcilor de unghii, plasate într-o soluție de KOH 5% timp de 24 de ore; în acest caz, nu este necesară încălzirea.

Examinarea microscopică se efectuează pe un microscop convențional de laborator fără imersie.

Condensatorul microscopului trebuie coborât și deschiderea trebuie îngustată. La început, medicamentul se găsește pe sticlă la o mărire scăzută (40x), cercetările ulterioare sunt efectuate la o mărire mai mare (100x);

Medicamentul este studiat în detaliu la o mărire de 400x. Este necesar să se studieze mai multe medicamente pentru a crește fiabilitatea analizei și pentru a evita rezultatele fals-pozitive.

Erorile în diagnosticul microscopic al ciupercilor pot apărea atât din cauza defectelor de preparare a medicamentului, cât și a experienței insuficiente a asistentului de laborator.

Defectele de fabricație sunt asociate în principal cu:
cu supraîncălzirea medicamentului, ceea ce poate duce la pierderea cristalelor alcaline, distrugerea părului și apariția degradarii cu granulație fină a materialului patologic.

Aranjamentul liniar al cristalelor alungite, netede de alcali amintește foarte mult de firele de miceliu septat, chiar și pe sticlă curată fără material patologic.

Caracteristicile de diagnostic diferențial sunt uniformitatea excepțională a cristalelor, transparența lor sticloasă, marginile cu mai multe fațete și absența unei legături inextricabile între un element și altul. În cazuri îndoielnice, se recomandă adăugarea de picături de apă distilată ușor încălzită la preparat, care dizolvă rapid cristalele alcaline.

Următoarele pot fi confundate cu elemente de ciuperci:

- picături de grăsime,
- bule de aer,
- fire de îmbrăcăminte din bumbac
- și așa-numita „ciupercă de mozaic”.

Lipidele pielii, degradarea celulelor grase și boabele de keratohialină, în special cele cu o formă regulată, pot să semene cu sporii fungici individuali. Dar varietatea formelor și, cel mai important, dimensiunile, lipsa structurii interne a formațiunilor (vacuole, cochilii) vorbesc împotriva naturii fungice a acestor elemente. Lipidele pot intra și în preparat atunci când se iau material patologic dintr-o leziune insuficient curățată.

Bulele de aer pot să semene cu sporii celulelor asemănătoare drojdiei, dar spre deosebire de acestea din urmă, ele sunt înconjurate de o membrană densă întunecată și chiar și cele mai mici bule de aer sunt întotdeauna mai mari decât celulele fungice.

Firele din țesătura șosetelor, îmbrăcămintei etc. se află de obicei separat de materialul patologic, sunt întotdeauna mai mari decât hifele, mai grosiere și nu septate.

„Ciuperca mozaic” este un artefact care apare în timpul procesului de cristalizare (posibil din cauza defalcării colesterolului). Are aspectul unei ochiuri sau bucle, ale căror contururi corespund limitelor solzilor cornos; spre deosebire de firele de miceliu, nu traversează niciodată pereții celulelor epidermice.

În unele laboratoare, preparatele pentru examinarea microscopică sunt clarificate cu o soluție 15-30% KOH, la care se adaugă 5-10% cerneală albastru închis comercial de la Parker (Parker's Superchrome Blue-Black Ink).

Cu această colorare, hifele și sporii sunt colorate în albastru.

Microscopia evidențiază hife fungice filamentoase sau celule în devenire (Fig. 1).

Astfel, microscopia dă o concluzie doar despre natura fungică a infecției, dar nu și despre tipul de ciupercă care o provoacă.

Desigur, eficacitatea examinării microscopice depinde de calificările angajatului din laborator.

Orez. 1. Microscopia răzuirilor de la unghiile afectate de T. rubrum. Hifele fungice sunt vizibile.

CERCETARE CULTURALĂ

Materialul este inoculat pe mediu Sabouraud standard, adesea cu antibiotice adăugate. În diagnosticul infecțiilor dermatofite, se obișnuiește să se adauge cicloheximidă în mediul Sabouraud, care suprimă creșterea ciupercilor contaminante care vin din aer. Sunt disponibile medii comerciale gata preparate cu antibiotice adăugate și cicloheximidă. De retinut ca multe mucegaiuri nedermatofite si unele specii de Candida nu cresc pe mediu cu cicloheximida, de aceea se recomanda inocularea pe mediu Sabouraud cu cicloheximida si pe mediu fara aceasta. Identificarea speciilor se realizează de obicei prin examinarea microscopică a culturii crescute sau prin subcultură pe medii selective (Fig. 2-15).

Orez. 2. Cultura ciupercii T. rubrum izolata din unghiile afectate. Obținut pe mediu Sabouraud (stânga) și agar de porumb (dreapta).

Orez. 3. Cultura ciupercii T. mentagrophytes var. interdigitale izolate de unghiile afectate. Obținut pe mediu Sabouraud.

Orez. 4. Cultura ciupercii Candida albicans. Obținut pe mediu Sabouraud.

Orez. 5. Cultura ciupercii Torulopsis glabrata izolata din unghiile afectate. Obținut pe mediu Sabouraud.

Orez. 6. Cultura ciupercii Ulocladium sp., izolata din unghiile afectate.

Orez. 7. Micromorfologia Acremonium sp. izolat din unghiile afectate.

Orez. 8. Micromorfologia Fusarium sp., izolat din unghiile afectate.

Orez. 9. Micromorfologia Scopulariopsis sp. izolat din unghiile afectate.

Orez. 10. Micromorfologia Candida albicans izolata din unghiile afectate.

Orez. 11. Micromorfologia Altemaria sp. izolata din unghiile afectate.

Orez. 12. Micromorfologia Aspergillus sp. izolat din unghiile afectate.

Orez. 13. Micromorfologia Ulocladium sp izolat din unghiile afectate.

Orez. 14. Micromorfologia Chaetomium sp. izolat din unghiile afectate.

Fig. 15. Panou de compuși nutritivi pentru identificarea dermatofitelor (în stânga - cultura T rubrum, în dreapta - T mentagrophytes var. mterdigitale).

De la stânga la dreapta: mediu Sabouraud, mediu Baxter, mediu Christensen, agar de porumb

De remarcat că unele mucegaiuri, inclusiv dermatofite, cresc lent în cultură, în decurs de 2-3 săptămâni.

Chiar dacă sunt respectate toate regulile de colectare a materialului, cu echipament bun al laboratorului și personal înalt calificat, numărul rezultatelor pozitive ale cercetării culturale este foarte mic.

Potrivit literaturii străine, procentul de studii pozitive nu depășește 50.
Procentul de rezultate pozitive în cele mai bune laboratoare autohtone abia ajunge la 30.

Astfel, în 2 din 3 cazuri de onicomicoză, etiologia acesteia nu poate fi stabilită.

STUDIU DE LUMINESCENZA

În 1925, Margaret și Deveze au descoperit că părul infectat cu anumite dermatofite emana o strălucire caracteristică în razele ultraviolete trecute printr-un filtru Deveze. Sticla Wuda constă din sulfat de bariu, conține aproximativ 9% oxid de nichel; transmite raze cu lungimea de 365 nm. Diferite dispozitive pot fi folosite ca sursă de raze ultraviolete. Natura strălucirii nu a fost stabilită cu precizie. Părul continuă să strălucească după ce ciuperca moare și după ce se încearcă extragerea materialului fluorescent cu apă fierbinte sau soluție rece de bromură de sodiu. Intensitatea și natura strălucirii depind de pH-ul soluției. Se crede că substanța fluorescentă apare în timpul interacțiunii dintre ciuperca și părul în creștere.

Strălucirea în razele ultraviolete trecute printr-un filtru Wood este caracteristică doar părului afectat de ciuperci din genul Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, ocazional M. gypseum și M. nanum), precum și ca Trichophyton schonleinii . Părul infectat cu microsporuri, în special M. canis și M. audouinii, oferă cea mai strălucitoare strălucire; părul afectat de T. schonleinii are o fluorescență verzuie ternă.

Strălucirea se observă numai în părul complet afectat de ciupercă. Este posibil să nu fie prezent în leziuni proaspete. În aceste cazuri, părul trebuie epilat din zona marginală, cea mai activă, iar strălucirea poate fi detectată în partea rădăcină a părului.

Metoda luminiscentă poate fi utilizată atât pentru diagnostic, cât și pentru monitorizarea eficacității tratamentului la pacienți individuali, cât și în focarele epidemiologice. Unitățile mobile compacte sunt convenabile pentru examinarea persoanelor de contact din școli, grădinițe etc.

Examenul luminiscent trebuie efectuat într-o cameră întunecată, leziunile trebuie mai întâi curățate de cruste, reziduuri de unguent etc. Metoda luminiscentă poate fi folosită pentru diagnosticarea pitiriazisului versicolor, mai ales când leziunile sunt localizate pe scalp. Leziunile din această boală au o strălucire galben-roșiatică sau maronie. Această strălucire, totuși, nu este strict specifică, deoarece poate fi observată în prezența mătreții pe scalp și chiar la persoanele sănătoase în zona gurii foliculilor de păr de pe față și partea superioară a corpului. Părul afectat detectat prin metoda luminiscentă trebuie supus examinării microscopice.

CERCETARE IMUNOLOGICĂ ŞI BIOLOGICĂ

Metodele de cercetare imunologică sunt utilizate pentru identificarea modificărilor specifice ale organismului și diagnosticul serologic al bolilor fungice. Pentru detectarea anticorpilor specifici în probele de ser se efectuează următoarele reacții serologice: aglutinare, precipitare, fixare a complementului, imunofluorescență cu antigenii corespunzători.

Starea alergică a corpului pacientului este detectată prin teste cutanate alergice. Alergenii se aplică pe pielea scarificată conform Pirquet sau prin frecare în piele după Moreau, intradermic după Mantoux sau prin injectare în piele. Cu ajutorul acestor teste sunt detectate reacții alergice atât de tip imediat cât și întârziat, ceea ce face posibilă evaluarea stării imunității umorale și celulare.

Pentru identificarea sensibilizării specifice a limfocitelor se folosesc reacții de degranulare, aglomerare și alterare bazofile, test de transformare blastică, suprimare a migrației macrofagelor etc.

Compararea rezultatelor reacțiilor serologice și alergice se dovedește a fi utilă atât pentru diagnostic, cât și pentru prognosticul evoluției micozelor.

Metoda biologică. Folosit pentru diagnosticul de laborator al micozelor profunde și mai ales periculoase. Se bazează pe infectarea animalelor cu material patologic de la un pacient sau o cultură a ciupercii studiate. Efectuat în laboratoare speciale.

STUDIU HISTOLOGIC

Histologia micozelor cutanate cauzate de dermatofite

Modificările patomorfologice ale leziunilor sunt cauzate de introducerea de ciuperci în stratul cornos al epidermei, părului și unghiilor și de răspunsul inflamator al pielii, care poate fi acut, subacut sau cronic. Diagnosticul poate fi considerat stabilit numai dacă în preparatele histologice se găsesc elemente fungice. Pentru aceasta se folosesc diverse colorații histologice, cea mai informativă este reacția periodică acidă (PAS), care permite identificarea polizaharidelor prezente în celuloza și chitina peretelui celular al majorității dermatofitelor (colorația Shifu și modificările acesteia). De asemenea, puteți utiliza reacții de sulfatare și impregnarea secțiunilor histologice cu argint [Khmelnitsky O.K., 1973; Lewer W. F. şi Schaumburg-Lewerl., 1983].

Ciupercile din stratul cornos al epidermei, chiar și atunci când se folosesc pete speciale, sunt detectate în cantități mici sub formă de fire miceliene și spori. În cazuri rare, când în leziuni sunt multe ciuperci, acestea pot fi detectate în secțiuni colorate cu hemotoxilin-eozină, sub formă de structuri bazofile delicate în stratul cornos.

Modificările inflamatorii ale epidermei pot varia: de la edem minor intra și extracelular al celulelor spinoase până la spongioza severă. Spongioza se dezvoltă de obicei cu variante dishidrotice ale micozelor picioarelor și mâinilor; clinic, veziculele sunt observate în aceste cazuri. Această reacție este de obicei cauzată de T. mentagrophytes var. interdigitale. Uneori, hiperkeratoza pronunțată este observată în epidermă, care este cel mai adesea observată cu micoza cauzată de T. rubrum.

Modificările histologice ale dermului sunt nespecifice și corespund inflamației acute, subacute și cronice.

În micoza pielii netede cauzată de T. rubrum, ciupercile sunt uneori detectate în vellus și foliculii de păr. În jurul foliculilor se dezvoltă o reacție inflamatorie, care, datorită pătrunderii ciupercilor în derm, pot deveni granulomatoase în natură. Partea centrală a infiltratului în aceste cazuri poate fi supusă supurației și necrozei, iar partea periferică poate consta din limfocite, histocite, epitelioide și celule gigantice multinucleate, în interiorul cărora se găsesc uneori spori fungici. Dimensiunea sporilor ajunge aici la 6 microni în diametru, în păr nu depășesc de obicei 2 microni.

În forma infiltrativă-supurativă a micozelor scalpului și a zonei de creștere a bărbii și a mustaței, elementele fungice se găsesc în foliculul de păr, în interiorul și în jurul părului. În păr sunt detectate chiar deasupra zonei în care începe keratinizarea (aproximativ la nivelul de 30 de microni). La nivelul dermului se remarcă o reacție inflamatorie de intensitate variabilă, cel mai pronunțată cu Kerion Celsii. În cazul unei reacții purulente acute, în infiltrat se observă un număr mare de leucocite neutrofile, elementele fungice în acest caz pot dispărea complet. În cursul cronic al procesului, infiltratul poate dobândi un caracter granulomatos, iar în el apar celule gigantice multinucleate. Pentru a confirma diagnosticul în absența ciupercilor în infiltrat, pot fi utilizate metode de colorare imunofluorescentă. În aceste scopuri, se utilizează antiser marcat cu fluoresceină pentru T. mentagrophytes, ceea ce face posibilă detectarea antigenelor fungice în păr și în infiltratul perifolicular.

Formarea unei reacții cutanate infiltrative-supurative în timpul micozei scalpului (kerion Celsii) și a zonei de creștere a bărbii și a mustaței cauzate de ciupercile M. canis, T. tonsurans și T. verrucosum este o manifestare a unei reacții imunologice. . Acest lucru este dovedit de:

1. Tendința leziunilor de a se rezolva spontan.

2. Absența elementelor fungice cu reacție inflamatorie foarte pronunțată la nivelul pielii în timpul micozei cauzate de T. verrucosum (faviforme) și T. tonsurans.

3. O reacție pozitivă constantă ca răspuns la administrarea intradermică a tricofitinei în formele infiltrativ-supurative de micoză cauzate de tricofitine zoofile (de exemplu, T. tonsurans), și o reacție negativă în micozele superficiale cauzate de același T. tonsurans.

Cu favus, în stratul cornos al epidermei se găsesc un număr mare de fire de miceliu și spori fungici unici. Scutula este reprezentată de exudat, celule parakeratotice ale epidermei, celule ale infiltratului inflamator, precum și fire miceliene și spori fungici, care sunt localizați în principal în zona periferică a scutulei. În stadiul activ al bolii, se observă un infiltrat inflamator pronunțat care conține celule gigantice multinucleate și plasmatice în dermă din jurul foliculilor de păr degenerativi. În leziunile vechi, părul și glandele sebacee sunt absente și există semne de fibroză.

Histologia micozelor pielii și mucoaselor cauzate de ciuperci asemănătoare drojdiei

Cu candidoza pielii și a mucoaselor, ciupercile din genul Candida se găsesc în stratul cornos al epidermei sau în straturile superficiale ale epiteliului mucoasei. Elementele fungice sunt de obicei puține la număr și sunt bine colorate de reacția PAS sau colorația Gram; se prezintă sub formă de fire de miceliu ramificat septat, cu diametrul de 2-4 µm, sau spori ovoizi, de 3-5 µm în diametru. Detectarea formei miceliale a ciupercii este de importanță diagnostică.

La examenul histologic al candidozei granulomatoase cronice ale pielii și mucoaselor, elementele ciupercii se găsesc predominant și în stratul cornos al epidermei sau în părțile superioare ale epiteliului mucoasei, dar uneori în stratul spinos, în interior. parul si in derm. De asemenea, se remarcă hipercheratoză și papilomatoză severă; în dermă există un infiltrat inflamator gros format din celule limfoide, neutrofile, plasmocite și celule gigantice multinucleate. Infiltratul se poate răspândi în țesutul adipos subcutanat.

Cu pitiriazisul versicolor, un număr mare de elemente fungice se găsesc în stratul cornos al epidermei sub formă de structuri bazofile delicate, care sunt clar vizibile chiar și la colorarea preparatelor cu hemotoxilină-eozină. Ciupercile sunt reprezentate atât de filamente, cât și de spori.

În forma foliculară de pitiriazis versicolor, există o acumulare de mase cornoase și celule infiltrate inflamatorii în deschiderile dilatate ale foliculilor de păr. În jurul foliculilor se observă și un infiltrat inflamator. Odată cu reacția PAS se găsesc spori fungici sferici sau ovali, cu diametrul de 2-4 μm, în interiorul gurii foliculilor de păr, iar uneori în infiltratul perifolicular. Miceliul nu este niciodată detectat.

Pigmentarea afectată a pielii la pacienții cu pitiriazis versicolor este cauzată de capacitatea ciupercii Pityrosporum de a produce o substanță care inhibă procesul de formare a pigmentului în epidermă. Examinarea microscopică electronică a biopsiilor de piele din zonele hipopigmentate a arătat că în melanocite se formează melanozomi foarte mici, care nu sunt capabili să pătrundă în keratinocite. În zonele hiperpigmentate ale pielii, dimpotrivă, melanozomii sunt mari și conțin cantități mari de melanină.

Potrivit statisticilor, aproximativ 20% din populația țării noastre suferă de micoză într-o măsură sau alta. Dar nu toți apelează la ajutor profesional. Unul dintre motive este că oamenii pur și simplu nu cunosc toate simptomele și manifestările acestei boli.

Simptome de micoză

În primul rând, este de remarcat faptul că aceasta nu este o boală specifică, ci un grup de diferite infecții fungice ale pielii și anexelor sale. Prin urmare, simptomele pot fi destul de variate, dar cele mai frecvent observate sunt următoarele:

• Apariția petelor descuamate pe piele. Cel mai adesea apar între degetele picioarelor, pe pielea picioarelor. Adesea provoacă mâncărime, iritații și alte senzații neplăcute.
• Modificări ale culorii și structurii unghiilor. Ele devin gălbui, casante, se sfărâmă și se fulg, suprafața lor poate fi denivelată și neuniformă.
• Crăpături în piele. Adesea, cu infecții fungice ale pielii picioarelor, devine aspră și începe să crape grav.
• Miros neplăcut. Mulți pacienți se plâng de un miros neplăcut din pielea afectată, în special cu micoza picioarelor.

Dacă apar astfel de semne, este necesar să vizitați un dermatolog cât mai curând posibil și să efectuați un diagnostic complet pentru a determina ce tip de micoză a afectat pielea.

Metode de diagnosticare a micozelor

Când pacienții apelează la un dermatolog cu semne caracteristice de leziuni fungice ale pielii, cel mai adesea este suficient un examen extern primar pentru ca medicul să pună un diagnostic. Singura întrebare este ce tip de micoză a afectat pielea.

Aceste informații sunt necesare pentru a determina o strategie de tratament ulterioară. Următoarele metode pot fi utilizate pentru a diagnostica micoza:

• Examinarea lampa lui Wood. Un spectru special de lumină ultravioletă vă permite să determinați prezența infecțiilor fungice. Această metodă este foarte simplă și accesibilă, cu ajutorul ei puteți nu numai să faceți un diagnostic, ci și să monitorizați progresul tratamentului. Dar nu ne permite să stabilim tipul de micoză.
• Microscopie. Una dintre cele mai simple și mai comune metode de diagnosticare a micozei este examinarea la microscop a răzuirii țesutului afectat de ciupercă. Pentru a face acest lucru, este plasat pe o lamă de sticlă. Există două tipuri de examinare prin răzuire: utilizarea agenților de colorare și utilizarea agenților de strălucire.
• Cultura bacteriologică. Una dintre cele mai precise metode de diagnosticare este inocularea rezervorului cu medii nutritive. Pe baza aspectului și caracteristicilor coloniilor crescute ale ciupercii, medicul poate determina tipul de agent patogen. Dezavantajul acestei metode este durata de timp; creșterea unei colonii poate dura 2-3 săptămâni. În plus, este posibil să se obțină rezultate doar în jumătate din cazuri.
• Diagnosticare PCR. Aceasta este una dintre cele mai precise și moderne metode de diagnostic, dar determinarea tipului de micoză poate necesita mai multe teste, ceea ce necesită anumite costuri.

Este de remarcat faptul că diagnosticarea micozei este necesară pentru a determina cea mai eficientă metodă de tratare a acestei boli. Iar dacă nu este posibil să vizitezi imediat un specialist, poți apela la serviciul oferit de clinica noastră și

Prima numire

La întâlnire, micologul efectuează o examinare și, de asemenea, prescrie o examinare cuprinzătoare.

Diagnosticul de laborator

Cele mai eficiente metode de diagnosticare a micozelor cutanate sunt diverse teste de laborator care pot identifica agentul patogen și pot ajuta la selectarea unui regim de tratament. Pentru a identifica agentul cauzal al micozei, sunt prescrise următoarele teste de laborator:

• analiza histologică;
• cultura bacteriologica;
• cercetare imunologică;
• diagnostic PCR;
• examen cultural;
• cercetare microbiologică.

Diagnosticul microbiologic ajută la detectarea ciupercii și la determinarea genului și speciei acesteia.

Diagnosticul microbiologic este cea mai comună și simplă metodă de depistare a micozei în sânge și piele. Pentru a identifica un diagnostic precis, ar trebui să știți cum să colectați corect materialul necesar pentru studiu. Părul afectat trebuie colectat cu o pensetă. Dacă pielea este infectată, pielea din zona deteriorată trebuie răzuită pentru microscopie. Tot materialul colectat este plasat într-o soluție de hidroxid de potasiu 30% și apoi pe o lamă de sticlă. Diagnosticul microbiologic poate dezvălui exact unde se află ciuperca (în interiorul sau în afara părului, pielea) și dimensiunea acesteia.

Pentru a preveni un diagnostic eronat al micozei, materialul trebuie colectat corect și competent pentru examinarea microbiologică.

În medicină, există următoarele metode de diagnostic microbiologic:

• Microscopie folosind preparate native sau necolorate. Pentru a face acest lucru, materialul este clarificat folosind soluții de 10-30% de hidroxid de potasiu sau de sodiu. Apoi materialul prelucrat este așezat pe un pahar de laborator, în care s-a picurat în prealabil puțină glicerină. Blatul este acoperit cu o placă de sticlă și se efectuează analiza.
• Microscopia preparatelor colorate se realizează în mai multe moduri care identifică bacteriile, diferențiază diferite bacterii și identifică diferite ciuperci.

Cultura bacteriologică

Cultura bacteriologică este una dintre cele mai eficiente metode de diagnostic.

Colectarea unei culturi bacteriologice pe un mediu nutritiv este o modalitate precisă de a diagnostica micoza. Luând în considerare aspectul și caracteristicile coloniei de ciuperci crescute, medicul dermatolog determină tipul de agent patogen care a provocat micoza. Singurul dezavantaj al sondajului este că este nevoie de mult timp pentru a crește o colonie. În medie, este nevoie de aproximativ 3 săptămâni pentru a afla tulpina patogenului. În unele cazuri, metoda nu aduce rezultatele așteptate.

Diagnosticare PCR

Metoda de diagnosticare PCR implică identificarea agentului cauzal al micozei folosind o reacție în lanț a polimerazei. În timpul examinării, sensibilitatea hibridizării crește, ceea ce crește conținutul de ADN viral din materialul de testat. Această metodă de examinare este nouă și necesită mai multe teste de la pacient. Se crede că acest tip de diagnostic este destul de costisitor, dar dă rezultate precise.

Examinarea culturii

Măsurile de diagnostic cultural sunt recomandate în etapa finală a diagnosticului. Metoda constă în obținerea unei culturi a ciupercii, care este apoi trimisă spre examinare cu ajutorul unui microscop. Materialul rezultat este plasat pe un mediu nutritiv creat artificial și sunt identificate tipul de agent patogen, aspectul și dimensiunea. După care este indicat un tratament special, care are ca scop combaterea unui anumit tip de patogen de micoză.

Pentru diagnosticarea micozelor se pot folosi metode de cercetare microscopică, micologică (culturală), alergică, serologică, biologică și histologică. În funcție de patogeneză, materialul de cercetare poate fi puroi, spută, păr afectat, unghii, fulgi de piele, puncție de măduvă osoasă, ganglioni limfatici, organe interne, sânge, bilă, fecale, biopsii tisulare etc.

Examenul microscopic include microscopia frotiurilor native (necolorate) și colorate. Pentru a pregăti preparatele native, părul, răzuirea pielii și unghiile sunt clarificate în soluții de 10,30% de KOH sau NaOH. Materialul tratat cu alcali este plasat pe o lamă de sticlă într-o picătură de glicerină, acoperit cu o lametă și microscopat (se poate folosi microscopia cu contrast de fază), ceea ce face posibilă studierea structurii ciupercii și a locației sporilor. , dar o concluzie finală despre specia ciupercii nu se poate face decât după studii culturale.

Pentru colorarea frotiurilor, cele mai des sunt utilizate metodele Gram, Ziehl, Nielsen și Romanovsky-Giemsa. Metodele lui Sabouraud, Adamson și altele sunt, de asemenea, folosite pentru colorarea dermatofitelor.

Cercetările culturale (micologice) sunt efectuate pentru a izola o cultură pură a ciupercii și a o identifica. Utilizați medii nutritive solide și lichide (Sabouraud, agar de must, Chapek etc.). Incubarea într-un termostat (22,28ºС) este lungă (3,4 săptămâni). O cultură pură a ciupercii este identificată printr-un set de caracteristici: forma coloniilor, culoarea lor, consistența, imaginea microscopică (natura miceliului, localizarea sporilor, conidioforilor) și alte caracteristici Reacții serologice pentru diagnostic a bolilor fungice se efectuează cu antigeni fungici conform metodelor general acceptate, precum și pentru diagnosticarea altor boli infecțioase (RA, RP, RSK, RNGA, RIF etc.).

Testele alergice pot fi efectuate conform metodelor general acceptate prin injectarea intradermică a alergenilor corespunzători (fracții de polizaharide și proteine ​​din celule sau membrane celulare, o suspensie de celule de ciuperci omorâte, filtrate de cultură). Pentru a identifica GNT, puteți utiliza testul de degranulare a bazofilelor tisulare și serice, iar pentru a detecta GNT, puteți utiliza reacția de inhibare a migrației fagocitelor și transformarea blastică a limfocitelor.

Cercetările biologice se efectuează pe modele de laborator (șoareci, șobolani, cobai, iepuri, câini, pisici). Modelul biologic al micozei este utilizat pentru a identifica patogenitatea agentului patogen, a izola o cultură pură și a studia noi antimicotice. Examinarea histologică face posibilă detectarea ciupercii în țesuturi, studierea morfologiei acesteia și a caracteristicilor procesului patologic cauzat de aceasta în organism.