Objawy grzybicy stóp. Diagnostyka laboratoryjna grzybiczych chorób skóry Nie stosuje się w diagnostyce grzybic powierzchownych

Łuski lub włosy umieszcza się na szkiełku (szkło należy odtłuścić) i zalewa jedną, dwiema lub trzema kroplami 30% roztworu potasu kaustycznego lub sody kaustycznej i przykrywa szkiełkiem nakrywkowym. Przez 2-3 minuty, lekko podgrzewając nad płomieniem palnika spirytusowego, lekko dociśnij preparat szkiełkiem nakrywkowym, aż
szara chmura podczas badania łusek. Włosów nie należy niszczyć, przy takim nagrzaniu jedynie pęcznieją. Badanie mikroskopowe (powiększenie 100-200 razy) z przyciemnioną przysłoną ujawnia elementy grzybowe - zarodniki lub nici grzybni. Warunkiem powodzenia badania mikroskopowego jest dokładność pobrania łusek i włosów, które należy usunąć z dotkniętych miejsc specjalną pęsetą (pęsetą do rzęs). Należy zwrócić uwagę nie tylko na wyraźnie widoczne włosy, strupy i łuski, ale także na ledwo zauważalne resztki włosów (tzw. kikuty) oraz zaskórniki, które usuwa się skalpelem lub igłą histologiczną. Nigdy nie należy poprzestawać na wskazywaniu pacjentowi dotkniętych obszarów, lekarz sam musi dokładnie zbadać całą skórę głowy.

We włosach dotkniętych trichofitozą zarodniki grzybów ułożone są w łańcuszek. W przypadku mikrosporii zarodniki są znacznie mniejsze niż w przypadku grzybicy, nie tworzą łańcuchów i znajdują się na zewnątrz włosa. Wewnątrz włosów biegną pasma grzybni z przegrodami. Włosy są jakby ubrane w osłonę i spierają się. W przypadku parcha obserwuje się polimorficzne zarodniki, grube, zróżnicowane nitki i zwykle pęcherzyki powietrza (ryc. 48).

W tym przypadku grzyby nie wpływają całkowicie na całe włosy, ale pozostają nienaruszone obszary.
Aby uzyskać materiał z gładkiej skóry, zdrapuje się łuski. peryferyjne obszary zmiany ostrą łyżką lub skalpelem. Wygodniej jest zeskrobać paznokcie ostrym nożem medycznym (skalpelem), usuwając małe, ale głębokie fragmenty z wewnętrznej powierzchni płytki paznokcia lub zeskrobując proszek łupieżowy z rogowych płytek paznokcia.
Materiał wyjściowy gotuje się w probówce z zasadą, a następnie pozostawia w tej probówce na 12-20 godzin.
Następnie zawartość odwirowuje się, a osad bada pod mikroskopem (metoda N.A. Czernogubowa).
Grzyby dobrze rosną na sztucznych pożywkach zawierających węglowodany i substancje białkowe. Szczególnie popularne są tzw. oryginalne podłoże Sabourauda, ​​brzeczka piwna, agar i warzywa.

2. Badania laboratoryjne materiału patologicznego

2.1. Badania mikroskopowe

W celu wykrycia elementów morfologicznych grzyba - komórek drożdży, pseudogrzybni, grzybni, konidioforów, konidiów, form tkankowych głębokich grzybic - materiał patologiczny bada się w preparatach natywnych i barwionych.

Płynny materiał patologiczny bada się w stanie niezabarwionym w następujących cieczach klarujących: mieszanina alkoholu z gliceryną (alkohol etylowy 1 część, gliceryna 2 części, woda destylowana 2 części), roztwór Lugola (1 g jodu krystalicznego, 2 g jodku potasu, 150 ml wody), a także w wodzie lub soli fizjologicznej. W celu przygotowania preparatów natywnych za pomocą ezy lub pipety nanosi się kroplę materiału na szkiełko szklane, następnie nanosi się 1-2 krople płynu klarującego, przykrywa szkiełkiem nakrywkowym i pod mikroskopem przy małym powiększeniu 1:80 (okular 10x) i obiektyw 8x), na którym widać skupiska komórek drożdży oraz pseudogrzybnię, grzybnię i inne elementy grzybów. Przy dużym powiększeniu 1:400 można scharakteryzować poszczególne komórki.

Gęsty materiał patologiczny (skóra, łuski paznokci) umieszcza się w kropli 10-20% roztworu KOH, lekko podgrzewa nad płomieniem palnika (w celu lepszej maceracji), aż do pojawienia się kryształów alkalicznych na obwodzie kropli. Następnie kroplę przykrywa się szkiełkiem nakrywkowym, lekko dociska i bada pod mikroskopem, najpierw przy małym powiększeniu w celu ustalenia skali, następnie przy dużym powiększeniu.

W materiale włosowym płaszcz zarodników otaczający włos (ectothrix) lub wewnątrz włosa (endothrix) elementy grzybów są zwykle bardzo wyraźnie widoczne. Zmiany na włosach, a także wielkość zarodników są specyficzne dla różnych typów dermatofitów. Konieczna jest diagnostyka różnicowa struktur grzybowych i artefaktów. Możliwe źródła wyników fałszywie dodatnich obejmują kropelki lipidów, pęcherzyki powietrza, włókna tekstylne i tzw. „grzyb mozaikowy”. Krople lipidów mogą przypominać komórki drożdży, co jest najczęściej spotykane w słabo oczyszczonym materiale. Włókna tekstylne zwykle oddzielają się od materiału naskórka, włosów lub paznokci. Są większe niż strzępki grzybów, mają nierówną grubość i nie zawierają przegród. „Grzyb mozaikowy” to artefakt powstały podczas krystalizacji KOH na skutek nadmiernego nagrzewania preparatów. W przeciwieństwie do grzybów nie ma wyraźnych podziałów na komórki.

Ważnym krokiem w diagnostyce infekcji grzybiczych jest przygotowanie preparatów kolorowych. Każdy materiał patologiczny (preparaty wymazowe, odciski narządów, wirówki i oczywiście skrawki histologiczne) muszą zostać poddane trzem głównym rodzajom przetwarzania: 1) barwienie metodą PAS w celu identyfikacji prawdziwych grzybów - eumycetes; 2) barwienie metodą Grama lub w modyfikacjach metodą Grama-Weigerta, według Bogolepova, według Browna-Brenny – w celu identyfikacji towarzyszącej mikroflory bakteryjnej, w celu identyfikacji promieniowców i nokardii; 3) barwienie metodą Ziehl-Nielsona lub modyfikacja metodą Kinyona – w celu identyfikacji mikroorganizmów kwasoodpornych, przede wszystkim w celu wskazania i różnicowania z Mycobacterium tuberculosis, w celu wykrycia czynników wywołujących trąd, nocardię i drożdżaki przetrwalnikujące.

Metoda PAS (Piodic Acid Schiff) polega na identyfikacji obojętnych polisacharydów w ścianach mikroorganizmów. W ścianach większości eumycetów znajduje się kompleks glukan-mannan w różnych stężeniach, dzięki czemu następuje zabarwienie.

Prokarionty (bakterie), w tym promieniowce i nokardia będące przedmiotem zainteresowania mikologa, okazują się być ujemne pod względem PAS. Jednakże podczas tworzenia druz promieniowców tworzy się tak zwany „cement”, sklejając wegetatywną grzybnię promieniowców w granulkę, co również daje zabarwienie dodatnie pod względem PAS. W związku z tym metoda ta ma również zastosowanie w diagnostyce promienicy.

Reakcja PAS (i ​​jej modyfikacja) jest najważniejszą metodą diagnozowania tkankowych postaci zakażenia grzybiczego. Metoda polega na utlenianiu grup glikolowych węglowodanów kwasem nadjodowym lub chromowym. Kwas nadjodowy utlenia glikole 1,2 i 1,4 do aldehydów i rozrywa wiązania między atomami węgla zawierającymi grupy hydroksylowe. Grupy aldehydowe można również wykryć za pomocą aldehydowego odczynnika Schiffa. In situ w ściankach grzyba kompleks heteropolisacharydowy ulega intensywnemu wybarwieniu na fioletowo-czerwony (metodologia - patrz załączniki).

Aby stłumić kolor otaczających tkanek, stosuje się leczenie („kontrakolor”) jasnozielonym, żółtym metanilowym itp. W tym przypadku wykrywane są jedynie komórki grzybów, co jest bardzo przydatne na etapie oznaczania patogenu w tkankach lub w preparatach wymazowych. Jednocześnie nie można ocenić reakcji organizmu i zmian w tkankach na takie leki. Zawsze konieczne jest równoległe barwienie preparatów metodą PAS z dodatkowym barwieniem hematoksyliną.

W praktyce stosuje się nie tylko metodę PAS w wersji klasycznej, ale także różne jej modyfikacje: utlenianie kwasem chromowym (zamiast kwasu jodowego) – jest to reakcja Bauera, barwienie Gridleya, impregnacja srebrem metenaminą metodą Gomory-Grocotta metoda. Wszystkie z powodzeniem stosowane są do wykrywania form tkankowych grzybów i opierają się na tej samej zasadzie (technika – patrz załącznik). Tabela 3.

Tabela 3

Nalewki właściwości form tkankowych grzybów

(w materiale patologicznym, w skrawkach histologicznych)

Grzyby oportunistyczne	Metody wykrywania
Kandydoza	Barwienie PAS lub Gridley
Aspergiloza	Hematoksylina i eozyna, impregnacja Gomori-Grocott
Zygomykoza	Hematoksylina i eozyna
Kryptokokoza	Błękit alcjanowy (wg metody Mowry’ego) + reakcja PAS + hematoksylina
Pneumocystis	Barwienie metodą Bauera, impregnacja według Gomory-Grocotta, barwienie tioniną
Fusarium	Barwienie metodą Romanovsky-Giemsa, metodą Wrighta
Scedosporoza
Trichosporoza	Hematoksylina i eozyna, barwienie Romanowskiego-Giemsy
Feohyfomykoza i chromomykoza	Hematoksylina i eozyna
Pierwotne grzybice chorobotwórcze:	Metody wykrywania
Kokcydioidoza	Reakcja PAS + hematoksylina
Histoplazmoza	impregnacja wg Gomory-Grocotta, barwienie metodą Bauera, barwienie metodą Romanovsky-Giemsa
Blastomykoza w Ameryce Północnej
Parakokcydioza	Reakcja PAS, impregnacja wg Gomory-Grocotta
Adiaspiromykoza	Hematoksylina i eozyna, reakcja RAS
Pseudomykozy:	Metody wykrywania
Promienica	Hematoksylina i eozyna, barwienie metodą Grama-Weigerta
Nokardioza	barwienie metodą Ziehl-Neelsena, metodą Kinyona, metodą Grama.

Jeżeli zakłada się rozpoznanie kryptokokozy, zaleca się zastosowanie metod specyficznej detekcji materiału otoczkowego Cr.neoformans zawierające glikozaminoglikany (kwaśne polisacharydy). W tym celu stosuje się barwienie błękitem alcjanowym (wg metody Mowry'ego), brązem zasadowym (wg metody Shubicha) oraz barwienie mucykarminą. Bardzo przydatne jest potrójne barwienie: reakcja PAS, następnie traktowanie błękitem Alcian, a następnie hematoksyliną. W tym przypadku możliwe staje się rozróżnienie kryptokoków od form tkankowych innych grzybów o podobnej morfologii.

Opis materiału patologicznego (preparaty histologiczne) obejmuje dane dotyczące morfologii i wielkości form tkankowych grzybów, ich charakterystyki nalewkowej, stosunku do tkanek żywiciela, obecności fagocytozy i określenia towarzyszącej mikroflory.

2.2. Wysiew materiału patologicznego i ilościowe liczenie komórek w grzybicach wywołanych przez grzyby drożdżakowe

Pobranie kultur grzybów jest niezbędne do ich identyfikacji i określenia wrażliwości na leki przeciwgrzybicze.

Przed badaniem plwocinę homogenizuje się przez 5-10 minut poprzez wytrząsanie jałowymi kulkami. Jeśli plwocina zawiera dużo śluzu i jest słabo homogenizowana, można do niej dodać 1-2 ml sterylnego roztworu soli fizjologicznej. Plwocinę bada się mikroskopowo w preparatach natywnych lub barwionych. Jeżeli mikroskopia plwociny przy dużym powiększeniu wykazuje w polu widzenia elementy grzybów, należy ją wysiewać w rozcieńczeniach 1:10, 1:100, 1:1000, w przypadku nie wykrycia elementów grzybów plwocinę wysiewa się w stanie nierozcieńczonym. Rozcieńczenia sporządza się w płynnej pożywce (brzeczka, Sabouraud, 1% woda peptonowa) lub w sterylnej soli fizjologicznej. Z każdego rozcieńczenia posiewa się szpatułką 0,1 ml na 2 szklanki agaru brzekowego, agaru Sabourauda lub MPA z dodatkiem antybiotyków przeciwbakteryjnych – penicyliny i streptomycyny, biomycyny (100-200 jednostek/ml podłoża). Pożywkę suszy się wstępnie w termostacie w temperaturze +37 C, ponieważ w obecności kondensatu wzrost kolonii może być zlewny. Uprawy inkubuje się w termostacie w temperaturze + 37 o C przez 48 h. Następnie, jeśli obserwuje się wzrost kolonii drożdży tego samego rodzaju, należy je zliczyć ilościowo. Liczbę komórek drożdży (n) w 1 ml lub 1 g materiału badawczego oblicza się według wzoru n = авс, gdzie a jest średnią liczbą kolonii na jednej szalce Petriego, b = 10 o objętości inokulum 0,1 ml, c to stopień rozcieńczenia odchodów (10 100 1000).

Przykład obliczeń: na szalkach o rozcieńczeniu 1:1000 wyrastało średnio 60 kolonii, natomiast 1 ml badanych odchodów zawiera 60 x 10 x 1000 = 600 000 komórek drożdży.

BAL, płyn płuczący oskrzela, jamę szczękową, żółć (części A, B, C), sok żołądkowy, treść dwunastnicy, mocz przenosi się do probówek wirówkowych i odwirowuje przez 10-15 minut, po czym supernatant szybko odsącza się. Z osadu przygotowuje się rodzime preparaty do mikroskopii. Jeżeli mikroskopia ujawni komórki drożdży w każdym polu widzenia, wówczas wysiewa się w rozcieńczeniach 1:100 i 1:1000, po 0,1 ml każdy, na stałe podłoże odżywcze i inkubuje w temperaturze 37°C przez 48 godzin. nie ujawnią się komórki drożdży, osad wysiewa się bez rozcieńczenia. Ilość flory drożdżowej oblicza się na 1 ml materiału patologicznego.

Kał pobiera się łyżką miarową w ilości 0,2 g, umieszcza w 1,8 ml płynnej brzeczki i dokładnie miesza szklaną pałeczką. Powstałe rozcieńczenie (1:10) pozostawia się na 5-10 minut, przygotowuje się rozcieńczenia 1:100, 1:1000 i inokuluje w objętości 0,1 ml na 2 szalkach Petriego z podłożem agarowym. Ilość flory drożdżowej rejestruje się na 1 g kału.

Płyn mózgowo-rdzeniowy. Scharakteryzuj jego wygląd (przezroczysty lub mętny, bezbarwny lub kolorowy, obecność krwi, osadu). Rozmazy mikroskopowe z osadu płynu mózgowo-rdzeniowego po odwirowaniu. Przygotowuje się trzy preparaty: natywny – w kropli sterylnej soli fizjologicznej, natywny – w kropli tuszu i rozmazu do barwienia metodą PAS, błękit Gram i Alcian według Mowry’ego.

Mikroskopia płyn mózgowo-rdzeniowy w preparatach natywnych i kolorowych pozwala na stwierdzenie obecności pączkujących komórek drożdży i fragmentów grzybni grzybów, czy bakterii wywołujących ropne zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych (meningokoki, pneumokoki, Haemophilus influenzae itp.). W preparacie atramentu można wykryć grzyb otoczkowy. Cryptococcus neoformans. Jednocześnie na szarym tle atramentu widoczne są pączkujące komórki drożdży, otoczone jasną aureolą kapsułki. Preparaty atramentowe mogą również zawierać formy drożdży Candida albicans które nie mają lekkiej aureoli otoczki wokół komórki.

Kr. neoformanie można również wykryć za pomocą barwienia błękitem Alcian (Mowry). Zabarwienie następuje w wyniku selektywnego wykrywania charakterystycznego heteropolisacharydu otoczkowego Cr.neoformans. W przypadku wykrycia flory bakteryjnej w preparacie barwionym metodą Grama, przeprowadza się dalsze badanie płynu mózgowo-rdzeniowego odpowiednimi metodami bakteriologicznymi. Po mikroskopii osadu płynem zaszczepia się 3 szklanki świeżo przygotowanego, suszonego agaru brzeczkowego lub agaru Sabourauda, ​​a także płynną brzeczkę lub płynne podłoże Sabourauda. Nałóż 2-3 krople płynnego osadu na powierzchnię agaru odżywczego kubków 1 i 2 i dokładnie wetrzyj szpatułką, a następnie zaszczepij 1 kroplą w trzech punktach powierzchni agaru kubka 3 w celu wykrycia grzybów nitkowatych. Pozostałą ciecz przenosi się do 5 ml płynnej brzeczki lub agaru Sabourauda. Plony inkubuje się w dwóch warunkach temperaturowych: kubka 1 - w temperaturze +37 o C oraz kubka 2 i 3 i wysiewa się w podłożu płynnym - w temperaturze +28 o C - +30 o C. Ogląda się plony w temperaturze +37 o C w 2 i 5 dniu oraz w temperaturze 28 - 30 o C - w 4, 7, 10 dniu wzrostu. Jeżeli 5 dnia w temperaturze +37 o C i 10 dnia w temperaturze 28-30 o C nie ma wzrostu, wysiewamy z płynnej pożywki na płytki z brzeczką lub agarem Sabourauda. W przypadku braku wzrostu flory drożdżowej wynik zaszczepienia płynu rejestruje się jako ujemny.

WYLEWANIE przetok. Badanie rozpoczyna się od mikroskopii materiału w preparatach natywnych lub wybarwionych. Następnie materiałem zaszczepia się podłoże agarowe (brzeczka lub Sabourauda), do którego nanosi się 2-3 krople wydzieliny i rozprowadza szpatułką po powierzchni agaru. Uprawy inkubuje się przez 48 godzin w temperaturze +37 o C.

WYŁADOWANIE błon śluzowych.

1. Tampon umieszcza się w probówce zawierającej 2 ml płynnej pożywki (brzeczki, pożywki Sabourauda lub MPB) i wytrząsa przez 5-7 minut bez moczenia korka. Przygotować rozcieńczenia 1:10, 1:100 i zaszczepić 0,1 ml każdego rozcieńczenia na dwóch filiżankach agaru brzeczkowego, agaru Sabourauda lub MPA. Posiewy na podłoża stałe oraz probówkę z pożywką płynną z wacikiem (w celu wzbogacenia) inkubuje się w temperaturze +37 C. Po 48 godzinach zlicza się liczbę kolonii i liczbę komórek drożdży pobranych wymazem. w przybliżeniu ustalony. W tym celu liczbę wyhodowanych kolonii drożdży mnoży się przez 20 i rozcieńczenie. Jeśli na płytkach nie ma wzrostu kolonii, pobrane rozcieńczenia ponownie wysiewa się z podłoża wzbogacającego na jedną płytkę z agarem brzeczkowym.

2. Wysiew można wykonać przesuwając rotacyjnym wacikiem po powierzchni pożywki. W tym przypadku nie bierze się pod uwagę liczby kolonii drożdży, a jedynie odnotowuje się obecność i intensywność wzrostu: pojedyncze kolonie, znaczny lub ciągły wzrost, brak wzrostu mikroflory.

KREW. Próbki krwi żylnej do posiewu krwi należy rozcieńczyć pożywką wzbogacającą w stosunku co najmniej 1:5, aby właściwości bakteriobójcze krwi nie hamowały rozwoju grzybów. Zaszczepić odpowiednio 5-10 ml świeżo pobranej krwi do 50-100 ml pożywki (płynna pożywka Sabourauda z 2% glukozą lub pożywka Kitta-Tarozziego po regeneracji). Do hodowli można pobrać krew z antykoagulantem (1:10 5% roztwór cytrynianu sodu). Uprawy uprawia się przez 10 dni w temperaturze +37 o C z wysiewem kontrolnym w dniach 5 i 10. Za pomocą sterylnej pipety pobrać osad, którego 3 krople nanosi się za pomocą pętli bakteriologicznej na powierzchnię agaru brzeczkowego na płytki Petriego. Zasiane kubki umieszcza się w termostacie o temperaturze +37 o C na 2-5 dni. W przypadku wzrostu flory drożdżowej podaje się wstępną odpowiedź na obecność grzyba we krwi i określa się kulturę do rodzaju i gatunku.

Opisano inną metodę posiewu krwi na mykoflorę (H. Rieth). W takim przypadku kroplami zaszczepia się 5-10 ml krwi. Na powierzchnię gęstej pożywki na szalce Petriego za pomocą sterylnej pipety nanieść 40-50 kropli krwi, w odległości 0,5 cm pomiędzy kroplami. Szczepienie przeprowadza się na dwóch szalkach Petriego, inkubując na jednym naczyniu w temperaturze +37 o C, a na drugim w temperaturze pokojowej przez 2-5 dni.

CZĘŚCI tkanki narządów. Za pomocą badanej tkanki wykonuje się odcisk na powierzchni gęstej pożywki na szalce Petriego, następnie przeprowadza się przesiewanie za pomocą pętli. Ten sam kawałek tkanki umieszcza się w 50 ml płynnej pożywki (brzeczka, podłoże Sabourauda). Uprawy inkubuje się w termostacie w temperaturze +37 o C przez 5 dni.

SKÓRA i łuski paznokci. Wysiew łusek przeprowadza się niezależnie od wyników mikroskopii. W tym celu za pomocą sterylnej szpatułki mikologicznej zwilżonej w kondensacie pożywki, łuski przenosi się w 2-3 punktach do probówki na ukośny agar brzekowy, dociskając je do powierzchni pożywki. W zależności od ilości materiału otrzymanego do badań inokulację przeprowadza się w 2-3 probówkach. Uprawy inkubuje się w termostacie w temperaturze 28-37 o C przez maksymalnie 5 dni.

Powszechnie stosowane są metody szybkiej identyfikacji C.albicans. Gatunek ten jest zdolny do tworzenia rurek zarodkowych i krótkich włókienek pseudogrzybni w ciągu kilku godzin (2-4 godzin w temperaturze 37 o C) na surowicy krwi, białku jaja, pożywce Eagle'a, pożywce 199 itp. W praktyce w laboratoriach wykorzystuje się surowicę ludzką (pozostałości po reakcjach serologicznych), w której w temperaturze 37 o C tworzą się pęcherzyki zarodkowe, a po 24 godzinach tworzą się splątki pseudogrzybni. Ze względu na wygląd C.albicans zjawisko to jest typowe w 90% przypadków. Kiełki tworzą się rzadziej C. tropikalna.

2.3. Badanie mikroskopowe i posiew materiału patologicznego w kierunku podejrzenia grzybicy wywołanej pleśnią

Materiał patologiczny można badać w preparatach natywnych i barwionych. Szkiełka i szkiełka nakrywkowe przeznaczone do sporządzania mikroszkiełek należy przechowywać w mieszaninie alkoholu i eteru (1:1), aby uniknąć zanieczyszczenia powietrza mykobiotami. Przed użyciem szkiełka i szkiełka nakrywkowe sterylizuje się nad płomieniem palnika.

Mikroskopia materiału

MIKROSKOPIA plwociny. Aby przygotować preparaty natywne, plwocinę przenosi się na sterylną szalkę Petriego i bada na czarnym tle w celu wykrycia małych cząstek (grudek). Guzki mogą być ropne, ropno-śluzowe, ropno-krwawe. Wielkość grudek waha się w granicach 0,3-3 mm średnicy, ich kolor może być szary, żółtawy, zielonkawy. W celu przygotowania mikroszkiełek natywnych poszczególne grudki przenosi się za pomocą igieł preparacyjnych lub pętli bakteriologicznej do kropli alkoholu z gliceryną lub do kropli 10% roztworu KOH. Przykryć szkiełkiem nakrywkowym, lekko docisnąć igłą preparacyjną i mikroskopem przy niskim (1:80, okular 10x i obiektyw 8x) i dużym (1:400, okular 10x i obiektyw 40x) powiększeniu mikroskopu.

Preparaty z wód popłucznych, wysięku, a także żółci, moczu, soku żołądkowego i płynu przygotowuje się z osadu natywnego lub z osadu uzyskanego w wyniku odwirowania (przy 1500 obr/min przez 5 minut). Osad przenosi się za pomocą ezy lub pipety Pasteura do kropli 10% roztworu KOH na szkiełko, przykrywa szkiełkiem nakrywkowym i bada przy małych i dużych powiększeniach mikroskopu.

Aby przygotować wybarwione preparaty, badane grudki lub krople osadu równomiernie rozprowadza się za pomocą igieł preparacyjnych lub mniejszego szkiełka po powierzchni sterylnego szkiełka, aż do uzyskania cienkiego rozmazu. Powstałą mazię suszy się na powietrzu, utrwala za pomocą alkoholu metylowego lub mieszaniny Nikiforowa (równe części 96% alkoholu etylowego i eteru) przez 3-5 minut lub przez trzykrotne opalenie płomieniem palnika. Utrwalony rozmaz barwi się metodą Grama, metodą PAS i metodą calcofluor white. Zabarwioną próbkę poddaje się mikroskopii przy użyciu systemu mikroskopu zanurzeniowego (1:900, okular 10x, obiektyw 90x).

Materiał do siewu

Podczas badania materiału patologicznego na obecność grzybów nitkowatych inokuluje się go na stałym podłożu Sabourauda lub brzeczce z dodatkiem penicyliny i streptomycyny (100-200 jednostek/ml podłoża). Wysiew odbywa się w dwóch powtórzeniach, uwzględniając różne warunki temperaturowe uprawy grzybów strzępkowych (+37 o C i +28 o C), zawsze w 3 punktach pośrodku kubka. Czas inkubacji wynosi 4-5 dni.

Plwocinę (wybrane grudki) przenosi się za pomocą ezy bakteriologicznej lub pipety Pasteura na powierzchnię pożywki Sabourauda lub brzeczki. Miejsce wysiewu zaznaczono ołówkiem na dnie szalki Petriego. Posiane szalki Petriego umieszcza się w termostacie pokrywką skierowaną do góry.

Po pewnym okresie inkubacji posiane szalki są badane i w przypadku wykrycia zarodnikowania określa się kulturę grzybów. Jeżeli nie ma sporulacji, grzyb hoduje się na podłożu różnicującym Czapka w celu dalszej identyfikacji.

Osad wody po przemywaniu oskrzeli, jam szczękowych, wysięku, moczu, soku żołądkowego (natywnego lub po odwirowaniu) pobiera się pipetą i zaszczepia w objętości 0,1 ml. Kał rozcieńcza się w stosunku 1:10 (1 g kału i 9 ml płynu) w płynnej pożywce Sabourauda lub ciekłym sterylnym izotonicznym roztworze chlorku sodu, emulguje, pozostawia na 10 minut do osadzenia się dużych cząstek, a supernatant zaszczepia się w objętości o pojemności 0,1 ml. Wydzielinę z przewodu słuchowego zewnętrznego i gardła pobraną wacikiem inokuluje się poprzez ostrożne przesuwanie każdej strony wymazu po powierzchni pożywki. Można zaszczepiać wymazy z wymazów. W tym celu tampony umieszcza się w 10 ml płynnej pożywki Sabourauda lub płynnej brzeczki z kulkami szklanymi i emulguje na 10 minut, zaszczepia 0,1 ml wymazu wypłukanego trawnikiem (wg Leshchenko V.M., 1973) lub w trzech punktach.

Łuski skóry i paznokci umieszcza się na powierzchni pożywki, ostrożnie je dociskając.

Osad płynu mózgowo-rdzeniowego (odwirowywany przy 1500 obr./min przez 5 minut) inokuluje się do dwóch kubków pożywki o pojemności 0,1 ml, a pozostałą część zaszczepia się do pożywki wzbogacającej (płynna pożywka Sabourauda lub płynna brzeczka) i wlewa do probówek o pojemności 5 ml. Zaszczepione płytki inkubuje się w zwykły sposób, a probówki zaszczepione na pożywce wzbogacającej inkubuje się w temperaturze +28°C przez 10 dni.

Jeżeli na podłożu stałym rośnie grzyb nitkowaty, na podstawie tej inokulacji określa się jego hodowlę; jeżeli na agarze Sabourauda lub agarze z brzeczką nie obserwuje się wzrostu, grzyb bada się na podłożu wzbogacającym. W tym celu kulturę grzybów ponownie hoduje się na gęstej pożywce różnicowej Czapka, a następnie identyfikuje.

Z fragmentu tkanki narządu (biopsja, sekcja zwłok) wykonuje się odcisk na powierzchni podłoża stałego, badając odciętą stronę fragmentu w trzech punktach. Jednocześnie kawałki tkanki umieszcza się w 50 ml płynnej pożywki (Saburo, brzeczka).

Jeśli podejrzewa się fungemię, krew bada się w dwóch do trzech powtórzeniach. Zaszczepić odpowiednio 5 lub 10 ml krwi w 50 lub 100 ml płynnej pożywki Sabourauda z 2% glukozą. Uprawy uprawia się w temperaturze +37 C i +28 C przez 10 dni. Pierwszą kontrolę upraw przeprowadza się po 5 dniach, drugą po 10 dniach. Piątego dnia można zaobserwować wzrost grzyba nitkowatego w postaci filcowej grudki na dnie i filmu powierzchniowego. Grzybnię hoduje się na podłożu różnicującym Czapka w celu określenia rodzaju i typu grzyba. Jeśli w 5. dniu nie zaobserwuje się wzrostu grzybów, plony przetrzymuje się do 10 dni, a w przypadku braku wzrostu, wyniki testu zapisuje się jako negatywne.

Przy wysiewie w trzech punktach wzrost grzyba w dwóch i trzech punktach określa się jako istotny diagnostycznie, w jednym punkcie - losowy. W razie potrzeby możliwy jest ponowny siew.

Identyfikacja izolowanych kultur pleśni

Po wyizolowaniu kultury grzyby nitkowate hoduje się na podłożu różnicującym Czapka w celu określenia rodzaju i, jeśli to możliwe, gatunku.

W praktyce laboratoriów diagnostycznych z reguły stosują kryteria identyfikacji kulturowej i morfologicznej: oceniają wzór wzrostu kultury grzybów na podłożu agarowym (diagnostyka kulturowa, makromorfologia) oraz mikromorfologię grzyba.

W trudnych przypadkach stosuje się dodatkowe metody diagnostyczne (badanie aktywności enzymatycznej, charakterystyki temperaturowej rozwoju niektórych pleśni).

Pojęcie makromorfologii (cech kulturowych) obejmuje strukturę kolonii (puszysta, filcowa, aksamitna, pajęczyna, wełnista, postrzępiona, mączna itp.), Powierzchnię (płaska, pofałdowana, wyboista, w kształcie kopuły, w kształcie rdzenia, strefowa itp.), pigmentację kolonii grzybów i podłoża (różne odcienie zieleni, błękitu, fioletu, czerni, szarości itp.), obecność wysięku na powierzchni kolonii.

Mikromorfologię grzyba z hodowli bada się za pomocą preparatów, które w zależności od rodzaju grzyba przygotowuje się w następujący sposób: na szklankę nanosi się kroplę płynu do sporządzania preparatów (równe części alkoholu, gliceryny i wody). slajd; umieszcza się w nim kawałek grzybni, wycina się szpatułką mikologiczną z kolonii w kształcie trójkąta, chwytając część środkową i obwodową, a wycięty kawałek prostuje dwiema igłami preparacyjnymi, zachowując ostrożność, aby nie utworzyły się pęcherzyki powietrza . W niektórych przypadkach (śluz i ryzopus) podczas przygotowywania leku grzybnię rozprowadza się na suchym szkiełku, nanosi się na nią kroplę płynu i przykrywa szkiełkiem nakrywkowym. Preparaty ogląda się pod mikroskopem przy małych i dużych powiększeniach. Bada się podłoże i grzybnię powietrzną, odnotowuje się obecność lub brak przegród (przegród) i zwraca się uwagę na charakter sporulacji: konidiofory z konidiami i zarodnie z sporangiami.

Konidiofory różnią się budową: od prostych pojedynczych strzępek zawierających zarodniki po rozgałęzione formacje przypominające drzewa. Konidiofory znajdują się pojedynczo lub w grupach, różnią się wyraźnie od strzępek wegetatywnych grzybni, bezbarwne lub kolorowe, wznoszące się, wyprostowane, kaskadowe, pełzające. Mogą składać się z jednej komórki i dużej liczby komórek o różnych kształtach i rozmiarach, z których każda ma swoją nazwę. Na przykład w rodzaju Aspergillus konidiofor składa się z następujących komórek: łodygi, obrzęku pęcherzykowego, sterigmatów, łańcuchów konidiów. W rodzaju Penicillium konidiofor ma postać prostych lub złożonych szczotek, składających się również z różnych komórek: gałęzi ramii, metulae, fialid, łańcuchów konidiów.

Grzyby pleśniowe Mucor i Rhizopus zarodnikują w postaci zarodni z endosporangiosporami. Zarodnia znajduje się na końcu sporangioforu. Zarodnie są kuliste lub gruszkowate, większość ze specjalną kolumną, która jest kontynuacją sporangioforu wewnątrz zarodni. Sporangiospory są okrągłe, bezbarwne lub kolorowe.

Konidia (zarodniki) grzybów pleśniowych są polimorficzne (cylindryczne, kuliste, owalne, elipsoidalne, jajowate, gruszkowate, maczugowate), jedno- i wielokomórkowe, różnią się wielkością i kolorem, pojedyncze, w łańcuszkach lub zebrane w główki i ułożone w klastrach. Powierzchnia konidiów może być gładka, szorstka, kolczasta, brodawkowata, szczeciniasta itp.

Badanie mikroskopowe i hodowla materiału patologicznego w kierunku grzybic wywołanych przez grzyby dymorficzne

W przypadku tych grzybic należy wziąć pod uwagę dymorfizm patogenów.

Materiałem patologicznym pierwotnych patogennych infekcji grzybiczych (kokcydioidoza, histoplazmoza, parakokcydioidoza, blastomykoza północnoamerykańska), a także chromomykozy, sporotrychozy i grzybaków, mogą być ropa, plwocina, zeskrobiny ze zmian wrzodziejących na skórze i błonach śluzowych, płyn mózgowo-rdzeniowy, krew, pobrane fragmenty zmian chorobowych.

Trudność w identyfikacji czynników sprawczych tych grzybic polega na tym, że ze względu na ich dymorfizm, mikroskopia materiału patologicznego ujawni formy tkankowe grzyba, najczęściej komórki drożdży o różnej morfologii lub sferule z endosporami, całkowicie różne od elementów tego samego grzyba grzyb wyekstrahowany z kultury uprawianej w temperaturze +28 - +30 o C na zwykłej agawie Sabouraud, o wartości pH zbliżonej do kwaśnej. Należy jednak mieć na uwadze, że u niektórych grzybów dymorficznych możliwe jest uzyskanie w hodowli drożdżowej fazy wzrostu grzyba, często przypominającej jej postać tkankową, jednak przy hodowli na podłożach bogatych w białka o odczynie lekko zasadowym (pH = 7,6 - 7,8 ), w temperaturze 37 o C.

Powyższe dotyczy grzybów: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis I Sporothrix schenckii.

Diagnostyka laboratoryjna grzybic wywoływanych przez wymienione grzyby opiera się na wykrywaniu form tkankowych w materiale patologicznym za pomocą mikroskopu, izolacji kultury patogenu i jej identyfikacji na podstawie cech kulturowych i morfologicznych.

Badanie mikroskopowe przeprowadza się w preparatach niezabarwionych na szkiełku w kropli 10% roztworu żrącej zasady lub mieszaniny alkoholu i gliceryny w równych objętościach lub w wybarwionych rozmazach (tab. 3).

Zaszczepianie materiału patologicznego przeprowadza się na ww. pożywce na płytkach Petriego przy użyciu szpatułki bakteriologicznej, zgodnie z ogólnie przyjętą metodą.

2.5. Badanie mikroskopowe i posiew materiału patologicznego w kierunku grzybicy skóry (keratomykozy i dermatofitozy).

Obiektem badań są grzybice powierzchowne, atakujące jedynie warstwę keratynową naskórka oraz dermatofity, atakujące skórę i jej przydatki (włosy, paznokcie), których czynnikiem sprawczym są grzyby z rodzaju Trichophyton, Microsporum i Epidermophyton.

Laboratoryjne badania mikologiczne obejmują te same etapy, co w przypadku innych grzybic: mikroskopię materiału i uzyskanie czystej kultury podczas jego wysiewu. Prawidłowe pobranie materiału ma ogromny wpływ na powodzenie mikroskopii i pobrania hodowli.

Materiał patologiczny bada się możliwie jak najszybciej po pobraniu. Najpierw dzieli się go na trzy części: do mikroskopii, hodowli i ponownego badania. Najprostszą i najszybszą metodą ustalenia obecności grzyba w tkankach jest mikroskopia materiału patologicznego. Rozdrobniony materiał umieszcza się na środku szkiełka w kropli 10-20% roztworu KOH i lekko podgrzewa nad płomieniem lampki alkoholowej, aż do uzyskania wzdłuż krawędzi kropli białawego obrzeża, przykrytego szkiełkiem nakrywkowym i pozostawić na 5-10 minut (włosy, łuski skóry) i 30 - 40 minut (paznokieć) w celu maceracji i klaryfikacji; materiał można obrabiać bez podgrzewania, w tym celu preparat pozostawia się w 20% roztworze KOH na 30-60 minut.

Mikroskopia najpierw pod mikroskopem o małym, a następnie dużym powiększeniu.

Do wyizolowania i identyfikacji patogenu niezbędna jest kultura. Zaszczepiony materiał należy w miarę możliwości rozdrobnić i zaszczepić w minimalnych ilościach na skośny agar w probówkach w 2-3 punktach w odległości 1-2 cm, co najmniej 2-3 probówki (włosy) i 4-5 probówek (łuski skóry i paznokci) zaszczepia się materiałem z jednej próbki. Do pierwotnej izolacji dermatofitów najlepiej zastosować standardowe podłoże agarowe Sabourauda z 2-4% glukozą lub agar brzeczkowy zawierający antybiotyki antybakteryjne (penicylina 50 µg/ml + streptomycyna 50 µg/ml lub biomycyna 200 jednostek/ml) i anty- Antybiotyk pleśniowy aktidion (cykloheksymid) 0,1 - 0,5 mg/ml. Actidione nie wpływa na rozwój dermatofitów oraz hamuje wiele pleśni, a także gatunki Candida i Cryptococcus.

Uprawy inkubuje się w temperaturze 22-30 o C (najlepiej 28 o C). Pojawienie się wzrostu dermatofitów obserwuje się od 4 do 12 dnia inkubacji w miejscach siewu wzdłuż krawędzi nałożonego materiału. Jeżeli w ciągu 30 dni nie nastąpi wzrost, wyniki hodowli uważa się za ujemne. W optymalnych warunkach hodowle pierwotne wielu dermatofitów można zidentyfikować po 7-10 dniach od wysiewu, jednak uprawy należy monitorować przez 20-30 dni. Kultury pierwotne rosną stosunkowo wolno i w przypadku stosowania pożywek bez antybiotyków, dermatofity mogą zostać zahamowane przez szybciej rosnące bakterie lub pleśnie. Gdy w wysiewie pierwotnym pojawi się wzrost, należy przesiać kolonię od krawędzi na świeżą pożywkę różnicującą w celu uzyskania czystej kultury, która posłuży jako materiał do identyfikacji wyizolowanego dermatofitu.

2.6. Serologiczne metody diagnostyki grzybic

Znaczenie metod serologicznych polega przede wszystkim na: identyfikacji pacjentów z prawdopodobną inwazyjną grzybicą; potwierdzenie grzybiczego charakteru chorób alergicznych; badania przesiewowe grup ryzyka rozwoju grzybic.

Fałszywie dodatnie wyniki badań serologicznych mogą wystąpić w przypadku mykonośności oraz u osób zdrowych uczulonych na antygeny grzybowe, natomiast ujemne w przypadku niedoborów odporności mogą wystąpić nawet na tle trwającej grzybicy inwazyjnej.

Rutynowe, ogólnie przyjęte metody diagnostyki serologicznej grzybic
opisane wystarczająco szczegółowo / P.N. Kashkin, V.V. Lisin. "Praktyczny
przewodnik po mikologii lekarskiej, Medycyna, 1983/. Jednak w ostatnim czasie
od dziesięcioleci zauważalne są zmiany w podejściu metodologicznym /Elinov N.P.,
2001/. Zaproponowano oryginalne procedury wykrywania antygenów i przeciwciał
niektóre metabolity komórek grzybów; stworzono specjalne testy diagnostyczne
zestawy („wieloryby”), na przykład Pastorex ® Candida, do oznaczania w
Reakcje „aglutynacji lateksowej” powtarzających się epitopów oligomannozowych o charakterze antygenowym
struktury/wyrażone na dużej liczbie makrocząsteczek
Grzyb; do oznaczania antygenu mannanowego Candida, np.
surowicy pacjenta chorego na kandydemię można zastosować zestaw Platelia ® Candida.
Stosując pierwszy zestaw, próg do określenia struktur antygenowych wynosi 2,5 ng/ml, przy drugim w połączeniu z metodą _____________ próg do określenia - 0,5 ng/ml.

Czynniki wywołujące grzybice najczęściej identyfikowane są podczas badań laboratoryjnych różnych materiałów klinicznych

Krew

• Candida
• Kryptokoki
• Patogeny grzybni są rzadko wykrywane w badaniach krwi, z wyjątkiem Fusarium

Płyn mózgowo-rdzeniowy

• Candida
• Kryptokoki

Wydzielina ropna z ropni, wrzodów itp.

• Candida
• Kryptokoki
• Fusarium
• Aspergillus
• Sporotrix

Wydzieliny z dróg oddechowych (plwocina, płyn BAL, biopsja szczoteczkowa oskrzeli, aspirat przeztchawiczy)

• Aspergillus
• Candida
• Kryptokoki
• Mucor
• Scedosporium
• Rhizopus
• Sporotrix

Wydzielina, materiał biopsyjny z ran

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium
• Rhizopus

Inne biosubstraty

• Candida
• Kryptokoki

Materiał z klatki piersiowej i jamy brzusznej; płyn maziowy

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium

Ciało szkliste

• Candida
• Aspergillus

IV. Kryteria diagnostyki grzybic układowych: parametry kliniczne i laboratoryjne ostatecznego rozpoznania

Zapalenie przełyku

• obecność charakterystycznych zmian podczas esofagoskopii
• identyfikacja grzyba podczas hodowli materiału biopsyjnego
• obecność pseudomycelium w wybarwionych rozmazach lub oznaki inwazyjnego wzrostu grzybów w materiale biopsyjnym

Zapalenie płuc

Zapalenie płuc z powodu Candida sp.

• ostre zmiany naciekowe na zdjęciu rentgenowskim klatki piersiowej, zbiegające się z klinicznymi objawami grzybiczego zapalenia płuc
• identyfikacja Candida sp. Podczas hodowli materiału z dolnych dróg oddechowych uzyskanego z biopsji przezklatkowej, biopsji przezoskrzelowej, wyników biopsji płuc lub biopsji pod kontrolą torakoskopową
• identyfikacja pseudogrzybni w odpowiednio wybarwionym materiale biopsyjnym

Zapalenie płuc z powodu Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• identyfikacja elementów grzybów w tkankach i posiew pozytywny
• uporczywe lub postępujące nacieki w płucach, oporne na antybiotykoterapię
• wykrycie jednego z tych patogenów poprzez posiew plwociny lub BAL
• objawy kliniczne zapalenia płuc (kaszel, duszność, ból „opłucnowy”, świszczący oddech, odgłos tarcia opłucnej)
• charakterystyczne zmiany na zdjęciu rentgenowskim lub tomografii komputerowej płuc:

Zmiany naciekowe podopłucnowe, guzkowe, kątowe lub jamiste

Objaw „halo” w tomografii komputerowej płuc

Postęp zmian naciekowych wraz z powstawaniem ubytków i pojawieniem się objawu „sierpa”.

• brak innych patogenów podczas hodowli płynu BAL, które mogłyby powodować przedstawione zmiany w płucach

Zapalenie zatok

• kliniczne i radiologiczne objawy ostrego zapalenia zatok
• mikroskopowe i kulturowe oznaki grzybicy podczas badania aspiratu lub materiału biopsyjnego

Zakażenie dróg moczowych

• wykrycie >1x10 CFU/ml w powtarzanych hodowlach prawidłowo zebranego moczu

Fungemia

• Pojedyncze wykrycie grzybów w posiewie krwi w okresie wzrostu temperatury ciała > 38 o C

Ostra rozsiana grzybica

• Fungemia w połączeniu z kulturowymi lub histologicznymi oznakami uszkodzenia tkanek głębokich (w tym tkanki podskórnej) lub identyfikacja patogenu z dwóch normalnie sterylnych biosubstratów

Zapalenie wnętrza gałki ocznej

• okulistyczne objawy zapalenia wnętrza gałki ocznej
• identyfikacja patogenu z oka, krwi lub innych ognisk rozsiewu

Ropień lub zapalenie kości i szpiku

• objawy radiologiczne/CT/MRI zapalenia kości i szpiku
• identyfikacja patogenu w materiale aspiracyjnym lub biopsyjnym

Zapalenie opon mózgowych

• oznaczenie zmian w płynie mózgowo-rdzeniowym potwierdzające obecność stanu zapalnego oraz wykrycie grzybów metodą mikroskopową płynu mózgowo-rdzeniowego
• wykrywanie grzybów poprzez hodowlę płynu mózgowo-rdzeniowego lub oznaczanie antygenów Cr.neoformans, Candida i Aspergillus w CSF

Przewlekła rozsiana kandydoza (wątrobowo-wątrobowa).

Możliwy

• utrzymująca się lub przerywana gorączka po zakończeniu okresu neutropenii w połączeniu z charakterystycznymi objawami uszkodzenia wątroby, śledziony lub nerek

Udowodniony

• powyższe w połączeniu z siewem Candida sp. z krwi przed pojawieniem się cech uszkodzenia wątroby, śledziony lub nerek lub z kulturowymi, histologicznymi cechami kandydozy w materiale biopsyjnym ze zmian

V. PRZYCZYNY ZAKAŻEŃ GRZYBICZYCH

Istnieją różne zasady klasyfikacji infekcji grzybiczych i ich czynników sprawczych. Wydaje nam się, że praktycznie najprościej i najbardziej celowo jest podzielić grzyby chorobotwórcze na 5 głównych grup:

1. Patogeny grzybic powierzchownych;

2. Patogeny grzybicy skóry;

3. Patogeny grzybic podskórnych;

4. Czynniki wywołujące głębokie grzybice (pierwotne patogenne mikromycety, czynniki wywołujące infekcje oportunistyczne).

5. Patogeny pseudomykozy.

* Należy podkreślić, że patogeny z trzech pierwszych grup u pacjentów z obniżoną odpornością mogą powodować fungemię i zmiany wielonarządowe.

W kolejnych podrozdziałach opisujemy czynniki wywołujące grzybice według jednego schematu: jej nazwę zgodnie z przyjętą nomenklaturą, listę synonimów, makroskopową charakterystykę kolonii na pożywce oraz cechy mikroskopowe elementów grzybowych widocznych pod mikroskopu w preparatach rodzimych i z kolonii. Podano także dane na temat rozmieszczenia grzybów w przyrodzie oraz wymieniono wywoływane przez nie choroby.

Diagnostyka laboratoryjna chorób grzybiczych polega na wykryciu grzyba oraz ustaleniu jego rodzaju i gatunku. Składa się z dwóch głównych etapów: badań mikroskopowych i kulturowych.

Badanie mikroskopowe

Badanie mikroskopowe jest pierwszym i ważnym ogniwem potwierdzającym wstępną diagnozę.

Powodzenie badania mikroskopowego w dużej mierze zależy od prawidłowego pobrania materiału patologicznego. Do badania mikroskopowego należy wybrać włosy, które mają widoczne oznaki uszkodzeń grzybiczych (matowe, łamliwe, pogrubione). Włosy, które zmieniły wygląd, usuwa się pęsetą do depilacji. Aby wykryć pojedyncze włosy dotknięte mikrosporią, możesz użyć lampy fluorescencyjnej z filtrem Wood (zielonkawo-niebieski blask).

Wybierając dotknięte włosy, można zastosować szereg dodatkowych cech. Włosy dotknięte mikrosporami mają u nasady szarą osłonkę złożoną z zewnętrznych zarodników. W przypadku przewlekłej trichofitozy, na włosach pojawiają się krótkie, siwe włosy, zakrzywione w kształcie „przecinków” i „znaków zapytania” oraz „czarne kropki” (pogrubione, czarne, dotknięte włosami, odłamywane przy ujściu mieszka włosowego). grubość łusek. W przypadku naciekowo-ropnej trichofitozy, do badania mikroskopowego, oprócz dotkniętych włosów, można użyć ropy i strupów ze zmiany chorobowej.

W przypadku zmian skórnych z mikrosporią, trichofitozą i grzybicą fałdów pachwinowych należy zeskrobać łuski z obwodowej strefy zmiany, gdzie grzyb występuje w większych ilościach. Włosy welusowe są zdrapywane wraz z płatkami skóry.

Podczas badania włosów dotkniętych mikrosporią i trichofitozą zwraca się uwagę na lokalizację zarodników (wewnątrz lub na zewnątrz włosa) i ich wielkość. Dane te pozwalają w niektórych przypadkach na wyjaśnienie rozpoznania, postaci klinicznej grzybicy i epidemiologii.

W międzypalcowej postaci grzybicy stóp do badania mikroskopowego wykorzystuje się łuski skóry i skrawki zmacerowanej warstwy rogowej naskórka. Obszar paznokcia, który należy pobrać do badania mikroskopowego, zależy od postaci grzybicy paznokci. W przypadku powierzchownej formy konieczne jest zeskrobanie powierzchni płytki paznokcia.

W najczęstszej postaci dystalno-bocznej stosuje się zeskrobanie z łożyska paznokcia, spod płytki (hiperkeratoza podpaznokciowa) fragmentem odciętej zmienionej płytki paznokcia. W przypadku postaci podpaznokciowej bliższej stosuje się specjalne metody pobierania materiału (wiercenie okienek wiertłem, biopsja paznokcia).

W płaskonabłonkowo-hiperkeratotycznej postaci grzybicy stóp łuski są zdrapywane z powierzchni podeszwowej. W dyshydrotycznej postaci grzybicy stóp osłony pęcherzy są odcinane w celu zbadania.

Technika przygotowania materiału do badania mikroskopowego włosów . Niewielką kroplę 30% KOH nanosi się na szklane szkiełko i za pomocą igły preparacyjnej umieszcza się w nim zaatakowane włosy. Kroplę z włosami lekko podgrzewa się nad płomieniem lampy alkoholowej, aż nad powierzchnią cieczy pojawi się para lub brzeg kryształków wypadnie wzdłuż krawędzi kropli zasady. Po przykryciu szkiełkiem nakrywkowym nadmiar alkaliów usuwa się bibułą filtracyjną. Lek bada się najpierw pod małym, a następnie pod dużym (x 400) powiększeniem mikroskopu.

Łuski skóry i paznokci . Cienkie łuski paznokci do badania mikroskopowego umieszcza się na szkiełku w kropli 30% KOH i podgrzewa, dodając w miarę odparowywania alkalia. Ochłodzoną, niezabarwioną próbkę przykrywa się szkiełkiem nakrywkowym i ogląda pod mikroskopem.

Grubą skórę i łuski paznokci umieszcza się w probówce wirówkowej i napełnia kilkoma kroplami 30% KOH. Probówkę ogrzewa się do wrzenia i pozostawia na 20-30 minut. Część zmiękczonego materiału przenosi się na szkiełko szklane za pomocą szklanego pręta, dociskając zapałką, aż pojawi się „chmura”, po czym bada się ją pod mikroskopem.

Ropa . Kroplę ropy miesza się z kroplą alkoholu i półtorej gliceryny i bada w preparacie natywnym.

Diagnostyka kulturowa

Diagnostykę kulturową przeprowadza się w celu ostatecznego wyjaśnienia diagnozy i wyjaśnienia epidemiologii. Polega na pobraniu kultury grzyba, a następnie badaniu mikroskopowym.

Dotknięte włosy, łuski (skóra i paznokcie), pęcherze lub ropa zaszczepia się na sztucznej pożywce. Pojawienie się gigantycznych kolonii na szalkach Petriego pozwala zorientować się w rodzaju patogenu (Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton), jego typie (L. canis lub ferrugineum, T. violaceum, verrucosum lub gypseum). Ostateczne wyjaśnienie rodzaju i gatunku grzyba jest możliwe jedynie na podstawie badania mikroskopowego powstałej kultury.

Diagnostyka laboratoryjna powierzchownej kandydozy

Do badań laboratoryjnych na obecność grzybów drożdżopodobnych wymagany jest świeży materiał. Do badania mikroskopowego, w zależności od obrazu klinicznego i lokalizacji zmian, stwierdza się łuszczenie się skóry, zeskrobiny z paznokci, kroplę ropy spod paznokcia, białawe złogi z zajętych obszarów błony śluzowej jamy ustnej i zewnętrznych narządów płciowych, ścian pochwy, można pobrać zeskrobiny z błon śluzowych, błon cewki moczowej, a także popłuczyny z czerwonej krawędzi warg, dotknięte obszary skóry z dużymi i małymi fałdami.

W zależności od umiejscowienia zmiany oraz charakteru objawów klinicznych materiał do badań pobiera się za pomocą wacika, skalpela, pętelki itp. Wstępnie pobiera się łuski skóry i paznokci, skrawki naskórka i zeskrobiny błony śluzowej. traktowane 30% KOH. Materiał patologiczny bada się w preparatach niezabarwionych lub wybarwionych.

W pierwszym przypadku materiał miesza się z równą ilością alkoholu i gliceryny. Po wybarwieniu metodą Grama komórki drożdży i pseudogrzybnia wydają się ciemnofioletowe, Ziehl-Neelsen – niebieskie, a Romanovsky-Giemsa – różowo-fioletowe. W tym przypadku charakterystyczną cechą komórki drożdży jest pączkowanie - odkrycie postaci „klepsydry”. Pobieranie materiału z błony śluzowej jamy ustnej, narządów płciowych, skóry czerwonego brzegu warg, kącików ust, skóry dużych i małych fałdów odbywa się za pomocą sterylnego wacika. Po pobraniu materiału wymaz umieszcza się w kolejnej sterylnej probówce z płynną brzeczką. Probówkę wraz z wymazem wysyła się do laboratorium mikrobiologicznego. Izolację czystej kultury grzybów drożdżopodobnych z rodzaju Candida przeprowadza się według ogólnie przyjętych metod mikrobiologicznych.

Według naukowców 70% światowej populacji ma objawy grzybicy stóp. Choroba ta atakuje fałdy międzypalcowe i skórę podeszew. Przyczyną choroby jest grzyb, który początkowo występował tylko na ograniczonych obszarach południowo-wschodniej Azji i Afryki. Pierwsza wojna światowa, powodując masowe migracje ludności i pogarszające się warunki sanitarne, doprowadziła do rozprzestrzenienia się choroby na cały świat.

Co powoduje grzybicę stóp

Głównym czynnikiem sprawczym choroby jest Trichophyton rubrum. Zakażenie może być spowodowane przez T. mentagrophytes i Epidermophyton floccosum. Grzyby z rodzaju Candida i mikroorganizmy pleśniowe znacznie rzadziej mogą stać się drobnoustrojami chorobotwórczymi.

Najważniejsze czynniki ryzyka choroby:

• cukrzyca;
• stan niedoboru odporności (AIDS);
• płaskostopie;
• miażdżyca tętnic obwodowych;
• żylaki kończyn dolnych.

Warunki zewnętrzne sprzyjające rozwojowi infekcji:

• zamknięte buty niechłonne;
• urazy stóp (odciski, otarcia);
• uprawiać sport.

Objawy stopy sportowca najczęściej występują u dorosłych mężczyzn. Dzieci rzadko chorują.

Objawy grzybicy stóp

W miarę rozwoju choroby pojawia się łuszczenie i suchość skóry, swędzenie i pieczenie, zwłaszcza w przestrzeniach między palcami, a także pojawiają się bolesne pęknięcia pod palcami. Czasami pierwszym objawem grzybicy stóp są pęcherze, które pękają wraz z powstawaniem nadżerek. Często choroba występuje w postaci wymazanej, objawiającej się jedynie lekkim łuszczeniem się, przypominającym mąkę, w fałdach między palcami.

Wyróżnia się 4 postacie kliniczne choroby.

Najbardziej powszechny jest wariant międzypalcowy lub międzywyprzeniowy. Skóra między palcami czerwienieje, pęka, wierzchnia warstwa staje się mokra i łuszczy się. Objawy te rozciągają się na podeszwę i towarzyszy im silny świąd i pieczenie. Często towarzyszy temu zapalenie bakteryjne.

Wariant płaskonabłonkowo-hiperkeratotyczny wiąże się z silnym zgrubieniem i pękaniem skóry. Podeszwa zmienia kolor na czerwony i łuszczy się. W okolicy pięty pojawiają się głębokie, bolesne pęknięcia, swędzenie jest zwykle nietypowe. Często jest to zmiana obustronna i nazywana jest także „stopą mokasynową”.

Wariantowi dyshydrotycznemu towarzyszy pojawienie się wielu małych, swędzących i bolesnych pęcherzy. Łączą się ze sobą, tworząc duże bąbelki. Osłony pęcherzy pękają, odsłaniając błyszczącą, wrażliwą, bolesną powierzchnię - erozję. Objawy zewnętrzne przypominają egzemę.

Zapalenie drobnoustrojowe często wiąże się z powiększonymi pachwinowymi węzłami chłonnymi, gorączką, bólem nóg, nudnościami, bólem głowy i innymi objawami zatrucia. W przypadku postaci dyshydrotycznej często występuje alergia na grzyby - wyprysk grzybiczy. Towarzyszą mu wysypki na obszarach ciała niezakażonych grzybem, na przykład na rękach.

Usunięta wersja zwykle pozostaje niezauważona. Towarzyszy mu lekkie złuszczanie się skóry pomiędzy palcem dużym i wskazującym i/lub serdecznym i małym na stopie. Nie ma swędzenia.

Objawy grzybicy stóp

Różne rodzaje grzybicy stóp mogą być chorobami niezależnymi lub występować w ramach ogólnej infekcji grzybiczej organizmu. Czasami znak „dwie stopy - jedna ręka” pojawia się przy zajęciu tych narządów. Może wystąpić grzybica paznokci, czyli grzybicze zniszczenie paznokci. Czasami jednocześnie zajęte są fałdy pachwinowe.

Główne objawy i leczenie grzybicy stóp przedstawiono na zdjęciu:

Złuszczanie skóry

Sucha i popękana skóra

Pęcherzyki i nadżerki

Diagnostyka

Doświadczony dermatolog już podczas pierwszego badania potrafi rozpoznać różne rodzaje grzybicy stóp. Aby potwierdzić diagnozę, konieczne jest jednak badanie mikroskopowe. W tym celu stosuje się łuski ze zmiany chorobowej, zdrapywane szpatułką i traktowane roztworem alkalicznym. Powstały materiał bada się pod mikroskopem i wykrywa patogeny.

Mikroskopia bezpośrednia jest szybka, tania i łatwa do wykonania, ale nie pozwala określić, który rodzaj grzyba powoduje chorobę. Dlatego materiał inokuluje się na pożywce, a następnie przeprowadza się badanie kulturowe powstałego materiału. Jednak dopiero w 20–6% przypadków możliwe jest uzyskanie hodowli grzyba po wykryciu go pod mikroskopem.

Rodzaje leczenia grzybicy stóp

Leki stosowane w leczeniu chorób grzybiczych powinny być przepisywane przez dermatologa. Zwykle leczenie grzybicy stóp odbywa się za pomocą środków zewnętrznych.

Jednym ze skutecznych leków na tę chorobę jest klotrimazol. W naszym sklepie kupisz go w niskiej cenie. Lek w postaci balsamu Clotrimazol do paznokci i skóry, hamuje namnażanie się grzybów w grubości warstwy rogowej nabłonka. W przypadku zajęcia fałdów międzypalcowych balsam nakłada się codziennie na czystą, suchą skórę stóp przez tydzień, a w razie potrzeby dłużej.

W przypadku silnego rogowacenia i pękania skóry należy najpierw usunąć martwy naskórek. Wymaga to stosowania leków złuszczających. Na przykład przepisywane są maści salicylowe, kremy z kwasem mlekowym lub mocznikiem. Po usunięciu złogów zrogowaciałych balsam stosuje się 1 – 2 razy dziennie.

W wariancie dyshydrotycznym pierwszym krokiem jest ograniczenie płaczu. W tym celu stosuje się płyny z garbnikami lub kwasem borowym. W ciężkich przypadkach do leczenia dodaje się glikokortykosteroidy. Następnie nałóż balsam Clotrimazol zgodnie ze zwykłym schematem.

Jeśli stopa jest zużyta, należy leczyć ją balsamem raz dziennie przez 7-10 dni, ale czas trwania kursu jest indywidualny i ustalany przez lekarza.

Terapia systemowa

Długotrwała lub nawracająca stopa sportowca może wymagać doustnych leków przeciwgrzybiczych. Z przewodu pokarmowego przedostają się do krwioobiegu, a następnie do skóry, gdzie niszczą grzyby. Stosuje się trzy główne leki:

• flukonazol;
• itrakonazol;
• terbinafina

Czas przyjmowania tych leków wynosi co najmniej miesiąc. Ich cena jest dość wysoka. Dlatego zapobieganie grzybicy stóp jest zawsze łatwiejsze i bardziej opłacalne niż jej leczenie.

Leki ogólnoustrojowe są szczególnie często przepisywane, jeśli grzyb wpływa nie tylko na skórę, ale także na paznokcie. W takim przypadku leki gromadzą się w rosnącej części płytki paznokcia, a zdrowy paznokieć stopniowo odrasta. Aby poprawić efekt, paznokieć można całkowicie usunąć chirurgicznie, po czym zostanie przywrócony bez grzyba.

U pacjentów w podeszłym wieku często konieczne jest skojarzenie usuwania paznokci z ogólnoustrojową i miejscową terapią przeciwgrzybiczą. U tej grupy pacjentów paznokcie często rosną powoli, krążenie krwi w stopach jest upośledzone, dlatego aby uzyskać efekt, wymagana jest duża dawka leków i długa kuracja.

Leczenie środkami ludowymi

Stosowanie wyłącznie receptur tradycyjnej medycyny nie pomoże pozbyć się grzyba. Jednak taki dodatek do konwencjonalnej terapii skraca przebieg leczenia i przyspiesza powrót do zdrowia.

Warto codziennie wieczorem przez 10 minut brać ciepłą kąpiel stóp, następnie dokładnie osuszyć stopy ręcznikiem, zwłaszcza między palcami, i nałożyć leczniczy balsam do paznokci i skóry Clotrimazol. Przydatne składniki kąpieli, które łagodzą stany zapalne i zmniejszają swędzenie:

• ziele glistnika i dziurawca;
• korzenie łopianu;
• trawa piołunu;
• liście eukaliptusa;
• igły jodłowe;
• świeże fusy z parzonej kawy mielonej;
• sól;
• mieszanina startego mydła do prania, sody oczyszczonej, nadmanganianu potasu i proszku musztardowego.

Zaatakowane miejsca można nasmarować smołą brzozową lub samodzielnie przygotowaną maścią sporządzoną ze 100 g masła zmieszanego z rozgniecioną główką czosnku. Przydaje się również propolis, który można zabandażować na obolałe paznokcie.

Przydatne jest wykonywanie okładów z naturalnych środków. Najpierw pozostawia się je na 1 do 2 godzin, a jeśli są tolerowane, na noc. Stosowane są następujące składniki:

• miazga dyniowa;
• zmiażdżone nasiona czarnej rzodkwi;
• mięta pieprzowa mielona solą;
• liście łopianu lub jarzębiny lekko rozmiękczone wałkiem do ciasta.

Skuteczne jest smarowanie dotkniętych obszarów sokami z niektórych roślin i innymi naturalnymi środkami:

• alkoholowy roztwór propolisu;
• sok z cebuli lub czosnku;
• sok z glistnika;
• olejek z drzewa herbacianego.

Zapobieganie chorobom

Aby uniknąć grzybicy lub zapobiec jej nawrotom, konieczna jest prosta, ale stała profilaktyka:

• latem noś oddychające buty z naturalnego materiału;
• odwiedzając baseny, łaźnie, prysznice publiczne, noś indywidualne gumowe klapki;
• nie zakładaj cudzych butów np. podczas wizyty;
• korzystaj wyłącznie z własnego sprzętu higienicznego – nożyczek, pumeksu, pilnika do paznokci.

Aby uniknąć ponownego zakażenia, wkładki i wewnętrzne powierzchnie butów należy regularnie czyścić środkami dezynfekcyjnymi. Znany przepis ludowy to roztwór esencji octowej, ale ma ostry, nieprzyjemny zapach.

Lekarze zalecają stosowanie leku Mikospray, który ma działanie nie tylko przeciwgrzybicze, ale także przeciwbakteryjne. Mycospray świetnie nadaje się nie tylko do pielęgnacji butów, ale także do nałożenia na stopy przed wizytą w miejscach publicznych w celu ochrony stóp.

Mieszkańcy Moskwy i regionów mogą kupić w naszym sklepie internetowym leki do leczenia grzybicy stóp i jej zapobiegania. Mają udowodnioną skuteczność i bezpieczeństwo. Ich stosowanie zalecane jest wszystkim osobom, które nie chcą zarazić się grzybicą stóp lub szybko się jej pozbyć.

Precyzyjna diagnostyka inwazyjnych grzybic niełatwe. Tłumaczy się to nie tylko trudnościami w uzyskaniu kultury grzybów, ale także w interpretacji wyników badań, gdyż grzyby, zarówno drożdżowe, jak i nitkowate, mogą kolonizować błony śluzowe i zanieczyszczać badane próbki. Pod tym względem diagnostyka grzybic inwazyjnych opiera się na podejściu zintegrowanym, obejmującym nie tylko wyniki badań mikologicznych (kulturowych) i serologicznych (oznaczanie antygenów grzybiczych), ale także objawy kliniczne zakażenia grzybiczego, dane z pomocniczych metod badawczych (komputerowe lub rezonans magnetyczny, USG).

Europejsko-Amerykańska Grupa Współpracy do badania inwazyjnych grzybic Opracowano kryteria rozpoznawania inwazyjnych grzybic u pacjentów z obniżoną odpornością. Zostały one zaprezentowane w 2001 r. na Międzynarodowej Konferencji na temat Środków Przeciwdrobnoustrojowych i Chemioterapii (ICAAC, Chicago), a w 2002 r. w formie drukowanej. Zdefiniowano kryteria potwierdzonej, prawdopodobnej i możliwej inwazyjnej grzybicy, które rekomenduje się do stosowania w badaniach klinicznych i epidemiologicznych

Udowodniona inwazyjna grzybica wywołana przez grzyby nitkowate: wykrycie grzybni grzybowej w biopsjach lub aspiratach podczas badania histologicznego lub cytologicznego lub izolacja hodowli z próbek pobranych w warunkach aseptycznych z normalnie sterylnej zmiany, która według wyników badań klinicznych i radiologicznych jest związana z infekcją, z z wyjątkiem badań moczu i błon śluzowych.

Udowodniona inwazyjna grzybica wywołana przez grzyby drożdżakowe: wykrywanie komórek drożdżaków (grzyby z rodzaju Candida mogą tworzyć grzybnię pseudomycelium lub grzybnię prawdziwą) w biopsjach lub aspiratach, z wyjątkiem próbek z błon śluzowych, lub izolowanie hodowli z próbek uzyskanych w warunkach aseptycznych z normalnie sterylnej zmiany chorobowej, które według na wyniki badań klinicznych i radiologicznych związanych z zakażeniem, z wyjątkiem moczu, próbek z zatok i błon śluzowych lub wykrycia za pomocą mikroskopu i specyficznego barwienia (w kropli atramentu indyjskiego, barwnika śluzowokarminowego) komórek drożdży lub dodatni antygen Cryptococcus spp. w płynie mózgowo-rdzeniowym.

Fungemia wywołana przez grzyby nitkowate: izolacja posiewu krwi grzybów, z wyjątkiem Aspergillus spp. i Penicillium spp., w tym Penicillium marneffei, w połączeniu z klinicznymi objawami procesu zakaźnego zgodnego z izolowanym patogenem.

Fungemia wywołana przez grzyby drożdżowe: izolacja posiewu krwi Candida lub innych grzybów drożdżakowych od pacjentów z klinicznymi objawami zakażenia tym patogenem.

Kompleks badań diagnostycznych w kierunku grzybic inwazyjnych

Badany biomateriał	Wskazania, użyte media, znaczenie
Krew	Wskazania: utrzymująca się gorączka (4-5 dni lub dłużej) podczas leczenia antybiotykami o szerokim spektrum działania; druga „fala” gorączki podczas antybiotykoterapii Pobieranie krwi z żyły do ​​fiolek na bakterie tlenowe* lub na pożywkę selektywną dla grzybów, powtarzać (2-3 razy dziennie w odstępie 1 godziny) Znaczenie diagnostyczne: izolacja grzybów drożdżowych, dokładna interpretacja przy izolacji grzybów nitkowatych, z wyjątkiem Fusarium spp.
Cewnik żylny	Wskazania: izolacja grzybów drożdżakowych z krwi We wszystkich przypadkach izolacji drożdżaków z krwi usuwa się cewnik do żyły centralnej lub obwodowej Do badań mikologicznych wykorzystuje się aseptycznie usunięty odcinek dystalny cewnika o długości 5-6 cm, badanie przeprowadza się metodą półilościową (metoda Makiego) lub metodą ilościową na podłożu Sabourauda Znaczenie diagnostyczne: izolacja grzybów drożdżakowych w badaniu półilościowym 15 CFU lub więcej, w badaniu ilościowym - 103 CFU/ml i więcej w celu potwierdzenia rozpoznania zakażenia odcewnikowego lub zakażenia cewnika
Wydzielina z górnych dróg oddechowych, plwocina, popłuczyny z tchawicy, oskrzeli, płyn z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego	Wskazania: podejrzenie grzybicy wywołanej przez grzyby nitkowate lub Cryptococcus neoformans; długotrwała gorączka podczas antybiotykoterapii o szerokim spektrum działania i neutropenia Mikroskopia próbek za pomocą bieli wapniowo-fluorowej (wykrywanie grzybni lub pseudogrzybni); siew na podłożu Sabourauda; oznaczenie antygenu Aspergillus w płynie z popłuczyn oskrzelowo-pęcherzykowych w obecności zmian w płucach charakterystycznych dla inwazyjnej aspergilozy Znaczenie diagnostyczne: izolacja grzybów strzępkowych lub Cryptococcus neoformans
Płyn mózgowo-rdzeniowy	Wskazania: objawy zapalenia opon mózgowych; wykrycie zmiany(-ów) w mózgu za pomocą tomografii komputerowej lub rezonansu magnetycznego; objawy „mózgowe” spowodowane gorączką i neutropenią Mikroskopia z białym wapnem, w kropli atramentu; oznaczenie antygenu Aspergillus, Cryptococcus; siew w środę Sabouraud Znaczenie diagnostyczne: wykrywanie grzybów, zarówno drożdżowych, jak i nitkowatych; antygen dodatni
Biopsje, aspiraty, płyn otrzewnowy, płyn opłucnowy	Wskazania: kliniczne i/lub radiologiczne objawy inwazyjnej grzybicy; gorączka podczas leczenia antybiotykami o szerokim spektrum działania. Mikroskopia z bielą wapniowo-fluorową, hodowla na pożywce Sabourauda Znaczenie diagnostyczne: wykrywanie grzybów, zarówno drożdżowych, jak i nitkowatych

* Częstotliwość izolacji grzybów z krwi była identyczna, gdy początkową krew pobierano do obu fiolek z pożywką bakteryjną i selektywną pożywką grzybową. Badania przeprowadzono przy użyciu analizatora bakteriologicznego VASTES 9240.

Możliwa inwazyjna grzybica diagnozowany na podstawie kombinacji następujących kryteriów:
jeden znak z kategorii kryteriów mikrobiologicznych;
jeden objaw z kategorii „istotne” lub dwa z grupy „mniej istotnych” objawów klinicznych procesu zakaźnego.

Możliwa inwazyjna grzybica zdiagnozowany na podstawie kombinacji następujących kryteriów:
obecność co najmniej jednego czynnika ryzyka indukującego rozwój inwazyjnej grzybicy;
jeden znak z kategorii kryteriów mikrobiologicznych lub jeden znak z kategorii „istotne” (dwa z grupy „mniej istotne”) objawy kliniczne procesu zakaźnego.

Koncepcja " możliwa inwazyjna grzybica» Nie zaleca się stosowania w badaniach klinicznych oceniających skuteczność leków przeciwgrzybiczych. Można użyć tego terminu analizując empiryczną terapię przeciwgrzybiczą, badania epidemiologiczne i studiując farmakoekonomikę.

Na badania mykologiczne sterylne aspiraty lub biopsje uwzględniają nie tylko izolację kultur grzybów, ale także wykrycie grzybni lub pseudogrzybni za pomocą mikroskopu. W preparatach histologicznych Aspergillus jest trudny do odróżnienia od Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum i niektórych innych grzybów nitkowatych. W celu diagnostyki różnicowej należy wykonać badanie immunohistochemiczne z przeciwciałami przeciwko Aspergillus.

Izolacja grzybów drożdżowych z krwi przynajmniej w jednym badaniu należy do kategorii „udowodnionej” grzybicy inwazyjnej i stanowi bezwzględne wskazanie do przepisywania ogólnoustrojowych leków przeciwgrzybiczych pacjentom z neutropenią. Częstotliwość wykrywania grzybów drożdżakowych we krwi jest niska, nawet przy rozsianej kandydozie wynosi 35-50%.
Przeprowadzanie powtarzane posiewy krwi zwiększa prawdopodobieństwo uzyskania pozytywnych wyników.

Inny interpretacja wyniki w przypadku wykrycia grzybów nitkowatych we krwi. Wysoka częstotliwość izolacji grzybów nitkowatych jest charakterystyczna dla Fusarium spp. i wynosi 40-60%. Aspergillus wykrywany jest niezwykle rzadko, w większości przypadków jest uważany za zakażenie, z wyjątkiem Aspergillus terreus.

Wybór Aspergillus terreus z krwi pacjentów chorych na hemoblastozy może wskazywać na prawdziwą aspergillemię, a w przypadku klinicznych objawów zakażenia stanowi podstawę do przepisania leków przeciwgrzybiczych.

Kryteria inwazyjnej grzybicy

Indeks	Kryteria
Czynniki wywołujące występowanie grzybicy inwazyjnej (makroorganizm)	Neutropenia (< 0,5*109/л в течение 10 дней) Utrzymująca się gorączka utrzymująca się przez ponad 96 godzin podczas antybiotykoterapii o szerokim spektrum działania Temperatura ciała powyżej 38°C lub poniżej 36°C i którykolwiek z następujących objawów predysponujących: długotrwała neutropenia (ponad 10 dni) w ciągu ostatnich 60 dni, intensywna terapia immunosupresyjna w ciągu ostatnich 30 dni, potwierdzona lub prawdopodobna inwazyjna grzybica w przeszłości neutropenia okresowa lub AIDS Obecność objawów GVHD, przede wszystkim przypadki o ciężkim przebiegu (II stopień) lub rozległym przebiegu choroby przewlekłej Długotrwałe (ponad 3 tygodnie) stosowanie glikokortykosteroidów w ciągu ostatnich 60 dni
Znaki mikrobiologiczne	Izolacja kultur grzybów nitkowatych (w tym Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. i zygomycetes) i Cryptococcus neqformans z plwociny lub płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego Pozytywne wyniki badania posiewowego lub cytologicznego (mikroskopia bezpośrednia) na obecność grzybów nitkowatych w aspiratach zatok przynosowych Wykrywanie grzybów nitkowatych lub Cryptococcus neoformans za pomocą cytologii/bezpośredniej mikroskopii z plwociny lub płynu z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego Dodatni antygen Aspergillus w płynie z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego, płynie mózgowo-rdzeniowym i próbkach krwi (co najmniej dwie) Dodatni antygen kryptokokowy w próbkach krwi Wykrywanie elementów grzybów poprzez badanie cytologiczne lub bezpośrednią mikroskopię w próbkach normalnie sterylnych płynów (na przykład Cryptococcus spp. w płynie mózgowo-rdzeniowym) Dwa pozytywne wyniki badań dotyczących wykrywania kultur drożdży w moczu przy braku cewnika moczowego Kryształy Candida w moczu bez cewnika moczowego Izolacja Candida spp. z posiewów krwi
Objawy kliniczne Dolne drogi oddechowe	Musi być powiązany z miejscem, z którego pobierane są próbki do badań mikrobiologicznych Którykolwiek z poniższych typów nowych nacieków płucnych w badaniu CT: objaw halo, objaw półksiężyca, jama z obszarami zagęszczenia* Objawy infekcji dolnych dróg oddechowych (kaszel, ból w klatce piersiowej, krwioplucie, duszność), tarcie opłucnej, wszelkie nowe nacieki nie zaliczane do objawów o dużym znaczeniu; wysięk opłucnowy
Górne drogi oddechowe Znaki o dużym znaczeniu Znaki o mniejszym znaczeniu	Radiologiczne objawy inwazyjnego zakażenia zatok nosowych (nadżerka ściany lub rozprzestrzenienie się zakażenia na sąsiednie struktury, rozległe zniszczenie kości czaszki) Katar, przekrwienie błony śluzowej nosa, owrzodzenie nosa, krwawienie z nosa, obrzęk okołooczodołowy, ból górnej szczęki, czarne martwicze owrzodzenie lub perforacja podniebienia twardego
ośrodkowy układ nerwowy Znaki o dużym znaczeniu Znaki o mniejszym znaczeniu	Radiologiczne objawy podejrzenia zakażenia OUN (zapalenie wyrostka sutkowatego lub inne ognisko okołooponowe, ropniak zewnątrztwardówkowy, liczne zmiany w istocie mózgu lub rdzenia kręgowego) Ogniskowe objawy neurologiczne, w tym napady ogniskowe, niedowład połowiczy; zaburzenia świadomości, objawy oponowe, zaburzenia składu biochemicznego płynu mózgowo-rdzeniowego i jego składu komórkowego (przy braku innych patogenów, według hodowli i mikroskopii, przy braku komórek nowotworowych)

*W przypadku braku zakażenia wywołanego przez mikroorganizmy, które mogą powodować podobny obraz radiologiczny, w tym powstawanie ubytków (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.).

Na wykrycie we krwi lub inne sterylne biosubstraty grzybów drożdżowych należy przeprowadzić identyfikację gatunkową i określić wrażliwość na leki przeciwgrzybicze, przy izolacji grzybów nitkowatych (pleśniowych) należy przeprowadzić jedynie identyfikację gatunkową, wrażliwości nie określa się.

W klinicznym ćwiczyć Wrażliwość grzybów nitkowatych nie jest badana ze względu na niedoskonałe standardy określania wrażliwości takich grzybów na leki przeciwgrzybicze. Co więcej, tylko w jednym badaniu wykazano korelację pomiędzy wrażliwością Aspergillus spp. oraz wyniki leczenia inwazyjnej aspergilozy u pacjentów z nowotworami hematologicznymi. Żadne z kolejnych badań nie dało podobnych wyników.

Ostatnio zaczęły pojawiać się pojedyncze doniesienia o powstawaniu oporności nabytej grzybów A. fumigatus na itrakonazol i worykonazol.

Identyfikacja grzybów według gatunków, szczególnie te uzyskane z loci sterylnych, są niezbędne przede wszystkim do doboru leku przeciwgrzybiczego i prowadzenia odpowiedniej terapii przeciwgrzybiczej. Zatem Candida krusei jest oporna na flukonazol i mniej wrażliwa niż inne gatunki drożdży na amfoterycynę B; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beżowy, Scopulariopsis spp. oporny na amfoterycynę B; Mucorales są oporne na itrakonazol, worykonazol, Candida glabrata wykazuje zależną od dawki wrażliwość na flukonazol, a w przypadku wyizolowania tego rodzaju grzyba, nawet wrażliwych szczepów, należy zwiększyć dawkę flukonazolu (dorosłym przepisuje się 800 mg zamiast 400 mg); Candida lusitaniae jest oporna na amfoterycynę B.

Identyfikacja grzybów według gatunków jest również ważne dla przeprowadzenia analizy epidemiologicznej w szpitalu - identyfikacji czynników sprawczych ognisk infekcji i, jeśli to możliwe, źródła infekcji. Opisano ogniska infekcji wywołanych przez tak rzadkie grzyby jak C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Na podstawie identyfikacja gatunków grzybów Można przypuszczać inwazyjną grzybicę lub kolonizację błon śluzowych przez grzyby. Na przykład prawdopodobieństwo, że Aspergillus niger wywoła inwazyjną aspergilozę u pacjentów z ostrą białaczką, jest znacznie mniejsze niż Aspergillus fumigatus. Izolacja Aspergillus niger z popłuczyn oskrzelowo-pęcherzykowych jest najczęściej uważana za kolonizację dróg oddechowych, a z plwociny za zanieczyszczenie powietrza i wymaga dodatkowych badań w celu potwierdzenia rozpoznania inwazyjnej aspergilozy.

Na podstawie wydzieliny grzybów nitkowatych z plwociny, płynu oskrzelowo-pęcherzykowego i aspiratu zatok przynosowych można przypuszczać jedynie grzybicę inwazyjną, nie zaliczając jej do kategorii „udowodnione”. Jednakże należy zawsze brać pod uwagę wykrycie Aspergillus w plwocinie, zwłaszcza Aspergillus fumigatus lub Aspergillus flavus, u pacjentów z neutropenią otrzymujących allogeniczny szpik kostny. Wymaga to powtórnego badania mykologicznego i tomografii komputerowej płuc. Zatem w przypadku neutropenii prawdopodobieństwo wykrycia inwazyjnej aspergilozy w przypadku dodatniego wyniku hodowli Aspergillus spp. w plwocinie wynosi 80%.

Wybór Cryptococcus neoformans u pacjentów z obniżoną odpornością z dróg oddechowych (płukanie, płukanie) ma znaczenie diagnostyczne. Jeżeli identyfikacja grzybów drożdżakowych z płynów pobranych z dróg oddechowych (tchawicy, popłuczyn oskrzeli, popłuczyn oskrzelowo-pęcherzykowych) pacjentów z obniżoną odpornością nie wymaga badań, wówczas konieczne jest przeprowadzenie badań przesiewowych w celu identyfikacji Cryptococcus neoformans z tych próbek.

Wykrywanie Candida w moczu u pacjentów z neutropenią i gorączką jest to zwykle uważane za objaw rozsianego zakażenia drożdżakowego.

W odpowiednim czasie diagnostyka inwazyjne z powodzeniem wykorzystują komercyjny test do wykrywania krążenia specyficznego antygenu Aspergillus spp. galaktomann (polisacharydowy, rozpuszczalny w wodzie składnik ściany komórkowej grzyba).

Galaktomann można oznaczyć dwiema metodami: metodą aglutynacji lateksowej (Pastorex Aspergillus, BioRAD) i metodą testu immunologicznego enzymatycznego (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Korzyść metoda immunoenzymatyczna to dolny próg czułości oznaczania poziomu galaktomannu we krwi – 1 ng/ml lub mniej, a przy zastosowaniu aglutynacji lateksowej – 15 ng/ml. Oznaczenie galaktomannu we krwi (co najmniej 2 próbki), płynie mózgowo-rdzeniowym i popłuczynach oskrzelowo-pęcherzykowych ma wartość diagnostyczną. Czułość metody immunoenzymatycznej wynosi około 90%, swoistość 90-99%, u biorców allogenicznego szpiku wskaźniki te są niższe i wynoszą odpowiednio 60-70% i 80-90%, ze względu na działanie profilaktyczne stosowanie leków przeciwgrzybiczych (leki przeciwgrzybicze obniżają poziom progowy galaktomannu).

W 40% przypadków wykrycie galaktomann we krwi wyprzedza objawy inwazyjnej aspergilozy, stwierdzone w komputerowym badaniu płuc, a w 70% wyprzedza objawy kliniczne zakażenia.

Wartość diagnostyczna testu na wykrywanie antygenu Aspergillus ma to miejsce w przypadku, gdy badanie jest przeprowadzane wielokrotnie. Oznaczenie antygenu Aspergillus we krwi należy wykonywać w czasie gorączki podczas leczenia antybiotykami o szerokim spektrum działania u pacjentów z neutropenią 2 razy w tygodniu; w przypadku zapalenia płuc, które występuje lub utrzymuje się podczas leczenia przeciwbakteryjnego; po wykryciu zmian w tkance płuc (tomografia komputerowa).