Uloga gljivične infekcije u ljudskoj patologiji. Dijagnoza mikoza

Prema uputama SP 1.2.036-95 Državnog odbora za epidemiološki nadzor Ruske Federacije, Moskva, 1996. "Postupak računovodstva, skladištenja, prijenosa i prijevoza mikroorganizama skupina patogenosti I-IV" prema epidemiološkoj opasnosti , gljivice kvasca i plijesni, kao i dermatofiti, pripadaju III-IV skupini uzročnika zaraznih bolesti, stoga je pri radu s njima potrebno poštivati ​​posebna sigurnosna pravila, industrijsku higijenu, protuepidemijski režim i osobnu higijenu, usmjerenu u osiguravanju osobne i društvene prevencije infekcija, alergizacije i širenja infekcija.

Laboratorij za rad s mikroorganizmima III-IV skupine patogenosti opremljen je namještajem koji se lako dezinficira, uključujući ormare za čisto laboratorijsko posuđe, reagense, hranjive podloge, odgovarajuću opremu i alate. Spiritne lampe ili plinski plamenici, mikrobiološke petlje, mikološke lopatice, lopatice, pincete za epilaciju i anatomske pincete, grickalice za nokte, skalpeli, škarice, Volkmannove žlice, pipete, Pasteurove pipete, igle za seciranje, stakleni štapići, štrcaljke, centrifuge male brzine, aparati za mućkanje, Petrijeve zdjelice, epruvete, stakleno posuđe, Woodova ultraljubičasta lampa s filtrom, mikroskopi, iluminatori, termostati, autoklavi, hladnjaci, sušilice, baktericidne lampe.

Uzimanje materijala za istraživanje

Mikroskopska dijagnoza mikoza uključuje otkrivanje micelija i spora u biomaterijalu koji se proučava. Ispitivanim biomaterijalom smatraju se epidermalne ljuskice, kosa i nokti. Neizostavan uvjet prije provođenja studije je odsutnost lokalnog liječenja najmanje deset dana i sustavnog liječenja mjesec dana. Treba imati na umu da uporaba deterdženata od strane pacijenta (osobito onih koji sadrže antiseptike) može utjecati na pouzdanost rezultata studije, pa je pranje zabranjeno 3-4 dana prije njega.

Alati za uzimanje biomaterijala i pripremu preparata prikazani su na slici:

Fotografija. Alati za uzimanje biomaterijala i pripremu lijeka.

Ako sumnjate na mikozu glatke kože, mikozu šaka i stopala bez oštećenja ploča nokta, s površine lezije ispituju se epidermalne ljuskice. S mikozom glatke kože, poželjno je proučavati epidermu iz rubne zone lezije, budući da se u središnjoj zoni patološki proces često rješava. Istodobno, ne treba zaboraviti na mogućnost oštećenja vellus kose, što određuje izbor daljnje taktike liječenja. Dlačice se uklanjaju pincetom za epilaciju. S mikozom šaka i stopala bez oštećenja ploča nokta, pregledaju se ljuske epidermisa s trećeg i četvrtog interdigitalnog nabora, kao i s dlanova i svodova stopala.

Ako se sumnja na gljivičnu infekciju duge kose (tjeme, brada, brkovi i pubis), kao i vellus dlake, radi se njihov mikroskopski pregled. Kod trichophytosis vlasišta, kosa se lomi na udaljenosti od 1-2 mm iznad razine ušća folikula dlake, dok nalikuje panjevima i točkicama. Ako se dlaka ne može uhvatiti pincetom za epilaciju, onda se u tom slučaju pokušava ukloniti oštrim vrhom skalpela ili iglom za seciranje.

Kod mikrosporije vlasišta kosa se lomi na visini od 5-6 mm, nalik na "kosu livadu". Mikroskopom se ispituju upravo te slomljene dlake. Dlake iz lezija uklanjaju se pincetom.

S favusom se ispituje stanjena kosa iznad površine skutule.

Ako se sumnja na onihomikozu, pregledava se lako drobljeni materijal iz zone subungvalne hiperkeratoze, kao i same promijenjene ploče nokta.

Treba imati na umu da je svaki ispitni materijal od pacijenta potencijalno zarazan, pa se mora uzimati u prostoriji u kojoj se svakodnevno provodi mokro čišćenje pomoću dezinficijensa (5% otopina kloramina, 5% pročišćeni izbjeljivač), a zrak se sterilizira s ultraljubičasti iradijatori (oni uključuju 1-1,5 sati i ulaze u sobu 20 minuta nakon isključivanja). Termostati se brišu tjedno s 0,5% otopinom kloramina, zidovi se tretiraju dezinficijensima jednom mjesečno. Pri radu liječnik mora biti zaštićen maskom, zaštitnim naočalama, ogrtačem i rukavicama. Pribor za uzimanje biomaterijala, rukavice, predmetna i pokrovna stakalca, jednokratne pelerine i salvete dezinficiraju se nakon upotrebe uranjanjem u 1,5% otopinu klindezina-extra (5% otopina fenola ili 5% otopina lizola) na 30 minuta. Preostali patološki materijal (kosa, koža i ljuskice noktiju) autoklavira se na 2 atm. i 132˚ C 20 minuta (kontrola - urea) ili na 1,5 atm. i 126˚ C 30 minuta (kontrola - benzojeva kiselina), ili kuhati 1 sat u vodi ili 30 minuta u 1% otopini sapunske sode.

Patološki materijal transportira se u laboratorij u posebnom spremniku ili metalnim biciklima, štiteći ga od izravne sunčeve svjetlosti. Popratni dokument navodi prezime, ime, patronim, spol, dob i adresu pacijenta, predloženu kliničku dijagnozu, naziv materijala za ispitivanje, vrijeme uzimanja, lokalizaciju žarišta, broj povijesti bolesti. , prezime liječnika i ustanove koja šalje materijal.

Priprema lijeka

Nakon dobivanja ljuskica epidermisa iz lezije priprema se preparat za mikroskopsko ispitivanje. Na ispitivani materijal postavljen na predmetno staklo nakapaju se 1-2 kapi 20% KOH, nakon čega se predmetno staklo zagrijava na plamenu plamenika dok se na periferiji ne pojavi bjelkasti rub kristalizirane lužine. Zatim se preparat pokrije pokrovnim stakalcem (koje se pritisne disekcijskom iglom) i mikroskopira. Studija se mora provesti najkasnije 2 sata nakon pripreme pripravka zbog mogućnosti kristalizacije lužine.

Način pripreme preparata za dlake kod sumnje na gljivičnu infekciju odgovara prethodno opisanom, s tom razlikom što se pokrovno stakalce ne pritišće iglom za seciranje (da se dlaka ne gnječi).

Fotografija. Pojava ruba kristalizirane lužine.

Za pripremu pripravka komadići izrezanih nokatnih ploča urone se u epruvetu s 20% KOH i izlože u termostatu 1 sat (t≈37˚C), a zatim se dobivena želeasta masa prenese na predmetno staklo , pokriti pokrovnim stakalcem i ispitati pod mikroskopom.

Za razliku od nokatnih ploča, uzorci iz lako drobljivog materijala subungualne hiperkeratozne zone stavljaju se na stakalce, na njih se nakapaju 1-2 kapi 20% KOH, nakon čega se stakalce zagrijava na plamenu plamenika do bjelkastog ruba kristaliziranog na periferiji se pojavljuje lužina (slika 65) . Zatim se preparat pokrije pokrovnim stakalcem, koje se lagano pritisne disekcijskom iglom i pregleda pod mikroskopom.

Mikroskopija lijeka

Za mikroskopsko ispitivanje koristi se laboratorijski mikroskop bez primjene imerzije. Mikroskopiranje ljuskica epidermisa, ljuskica iz područja subungvalne hiperkeratoze, kao i rastvorenih ploča nokta najprije se radi pri malom povećanju (×100), a ako se otkriju niti micelija koje podsjećaju na „kartu rijeka“ (željeznice), leća se prebacuje na veće povećanje (×400) . Micelij pri srednjem povećanju nalikuje staklenim štapićima bizarnog oblika koji mijenjaju stupanj loma svjetlosti pri radu s mikroskopskim vijkom.

Mikroskopiranje preparata dlake izvodi se odmah pri srednjem povećanju (×200 ili ×400). Kod trihofitoze se unutar dlake nalaze velike spore raspoređene u nizove, dok kod mikrosporije unutar dlake ima mnoštvo malih mozaično raspoređenih spora (odatle i naziv "mikrosporija"). Ponekad se primijeti prisutnost kapice na vanjskoj strani dlake - to je tipično i za trihofitozu (varijanta ektotriksa, dok su spore velike) i za mikrosporiju (u ovom slučaju kapica se sastoji od malih spora). Mikroskopija zahvaćene dlake s favusom, unutar dlake, osim nakupina okruglih ili poligonalnih spora, nalaze se mjehurići zraka i niti micelija.

Preparate je potrebno pregledati najkasnije 2 sata od trenutka pripreme zbog mogućnosti kristalizacije alkalija. Za povećanje pouzdanosti dijagnoze potrebno je napraviti nekoliko preparata (najmanje dva) iz jedne lezije. Moguće pogreške u mikroskopskoj dijagnozi mikoza mogu biti povezane s nekvalitetnom pripremom pripravaka (pregrijavanje na plamenu plamenika, što je popraćeno preuranjenom kristalizacijom lužine), kao i nedovoljnim iskustvom istraživača (kada se niti micelija često griješe). za tkivna vlakna slučajno pronađena u preparatu).

LABORATORIJSKA DIJAGNOSTIKA MIKOZA

Uzimanje materijala za laboratorijsko istraživanje gljive.

1. OST 42-21-2-854: naredba br. 222/80 od 27.06.00.
2. Pribor: pinceta, predmetno staklo, škare, Volkmannova žlica.
4. Indikacije: gljivična oboljenja.
5. Komplikacije: nema.

Priprema sobe za tretman:

Mijenjanje rješenja.

Kuhati:
-1% otopina kloramina za krpe
-3% otopina kloramina - za dezinfekciju zavoja i pinceta
- otopina za pranje (156 ml vodikovog peroksida + 5 g praška za pranje + 839 ml destilirane vode) - za obradu pinceta
- 6% otopina vodikovog peroksida - za liječenje rukavica.

Algoritam manipulacije.

Morate uzeti pincetu, staklo, Volkmannovu žlicu, škare;
- pozvati pacijenta u garderobu;
- pacijent sjedi na stolici ili kauču;
- vrijednost m/s.

Tehnika:

Iz lezije s pincetom, uzmite ljuskice kože i kosu;
- uzeti uzeti materijal staviti na predmetno staklo i zatvoriti ga drugim stakalcem.
- perite ruke sapunom;
- poslali materijal u laboratorij.

SKUPLJANJE GRAĐE

Uzimanje noktiju na pregled.

Uzmite škare i stakalce;
- škarama odrezati komad sa slobodnog ruba nokta;
- pokriti uzeti materijal drugim predmetnim staklom;

Namočite škare i pincetu u 3% otopinu formalina.

Ispravno uzimanje materijala sa zahvaćenih noktiju ključ je uspješne mikrobiološke studije. Prilikom uzimanja materijala ne zahvaćaju uvijek područja nokta koja sadrže održive gljivice. Neodržive gljive u kulturi, naravno, neće rasti, a njihova vrsta se ne može uspostaviti.

Područje nokta koje treba uzeti određeno je oblikom onihomikoze.

Dakle, s površinskim oblikom onihomikoze, potrebno je napraviti struganje s površine ploče nokta.

Kod najčešćeg distalnog subungualnog oblika, najsposobnije gljivice nalaze se ispod ploče nokta. Materijal koji se šalje na istraživanje trebao bi uključivati ​​ne samo rez ploče nokta, već i struganje s kreveta nokta, ispod ploče.

Osim toga, također treba uhvatiti područja nepromijenjenog nokta, jer se najaktivnije gljivice nalaze na granici između njih i zahvaćenih područja nokta.

Kod proksimalnog subungualnog oblika teško je uzeti materijal. U tim slučajevima ponekad, osobito ako će se raditi histološki pregled ili diferencijalna dijagnoza, uzima se biopsija nokta, a povremeno se koristi bušilica.

S paronihijom, struganje se izrađuje s proksimalnog valjka i ispod njega.

U svim slučajevima, kako bi se izbjegla bakterijska kontaminacija, nokat treba tretirati etilnim alkoholom prije uzimanja uzorka.

MIKROSKOPSKA STUDIJA

Mikroskopski pregled patološkog materijala na gljivice provodi se u nativnim i obojenim preparatima.

Za pripremu neobojanih preparata dobiveni materijal se zdrobi skalpelom ili iglom za disekciju i stavi u sredinu predmetnog stakla. Da bi se jasnije identificirali elementi gljive, materijal se bistri (macerira). U tu svrhu pribjegavaju se raznim tvarima, najčešće jetkim lužinama (KOH, NaOH), koje otapaju epidermalne ljuskice, sluz, gnoj, bistre pigment dlake i time gljivice čine dostupnima za istraživanje.

Na omekšanu kožu ili ljuskice nokta koje se stave na sredinu predmetnog stakla nakapaju se 1-3 kapi 20-30% otopine KOH (NaOH). Ispitni materijal u kapima lužine pažljivo se zagrijava na plamenu alkoholne svjetiljke sve dok se na obodu kapi ne pojavi nježni bijeli rub kristala lužine. Ne smije se zagrijavati do vrenja. Nakon zagrijavanja, kap se prekrije pokrovnim stakalcem, izbjegavajući mjehuriće zraka.

R. A. Arabian i G. I. Gorshkova (1995) preporučuju da se preparati kožnih ljuskica i kose ostave pročišćeni i pokriveni pokrovnim staklom 5-10 minuta, a za ploče nokta 30-40 minuta prije mikroskopije.

Bistrenje pripravaka može se provesti bez zagrijavanja, za to se ostavljaju u 20% otopini KOH 30-60 minuta ili se koriste druge metode bistrenja patološkog materijala: klorallaktofenol po Amanu; laktofenol; otopina koja sadrži 15% dimetil sulfoksida i KOH u vodi. Dobri rezultati postižu se nakon bistrenja ploča nokta u 5% otopini KOH tijekom 24 sata, u ovom slučaju nije potrebno zagrijavanje.

Mikroskopski pregled se provodi na konvencionalnom laboratorijskom mikroskopu bez uranjanja.

Kondenzor mikroskopa treba spustiti, aperturu suziti. U početku se lijek nalazi na staklu pri malom povećanju (40x), naknadno ispitivanje provodi se pri većem povećanju (100x);

preparat se detaljno proučava pri povećanju od 400x. Potrebno je testirati više lijekova kako bi se povećala pouzdanost testa i izbjegli lažno pozitivni rezultati.

Pogreške u mikroskopskoj dijagnostici gljiva mogu nastati kako zbog nedostataka u pripremi preparata tako i zbog nedovoljnog iskustva laboranta.

Greške u proizvodnji prvenstveno su povezane s:
s pregrijavanjem lijeka, što može dovesti do taloženja alkalnih kristala, uništavanja kose i pojave finog zrnatog propadanja u patološkom materijalu.

Linearni raspored izduženih, ravnomjernih alkalnih kristala vrlo podsjeća na niti septiranog micelija, čak i na čistom staklu bez patološkog materijala.

Diferencijalno dijagnostičke značajke su izuzetna ujednačenost kristala, njihova staklasta prozirnost, raznovrsnost rubova i nepostojanje neraskidive veze između jednog elementa i drugog. U dvojbenim slučajevima preporuča se u pripravak dodati kapljice blago zagrijane destilirane vode, koje brzo otapaju kristale lužine.

Za elemente gljive, mogu se zamijeniti za:

- kapljice masti,
- mjehurići zraka
- pamučne niti za odjeću
- i takozvana "mozaična gljiva".

Lipidi kože, razgradnja masnih stanica i zrnca keratohijalina, osobito ona pravilnog oblika, mogu nalikovati pojedinačnim gljivičnim sporama. Ali raznolikost oblika i, što je najvažnije, veličina, odsutnost unutarnje strukture formacija (vakuole, školjke) govore protiv gljivične prirode ovih elemenata. Lipidi također mogu dospjeti u lijek prilikom uzimanja patološkog materijala iz nedovoljno očišćene lezije.

Mjehurići zraka mogu nalikovati sporama stanica sličnih kvascu, ali za razliku od potonjih, okruženi su gustom tamnom ljuskom, a čak su i najmanji mjehurići zraka uvijek veći od stanica gljivica.

Niti od tkanine čarapa, odjeće i sl. obično leže odvojeno od patološkog materijala, uvijek su veće od hifa, grublje i nisu septirane.

"Mozaička gljiva" je artefakt koji nastaje tijekom procesa kristalizacije (možda zbog razgradnje kolesterola). Ima oblik mreže ili petlji, čiji obrisi odgovaraju granicama rožnatih ljuskica; za razliku od niti micelija, nikada ne prelazi stijenke epidermalnih stanica.

U nekim se laboratorijima preparati za mikroskopsko ispitivanje bistre s 15–30% otopinom KOH kojoj se dodaje 5–10% komercijalne Parker's Superchrome Blue-Black Ink.

Uz ovu boju, hife i spore su obojene plavo.

Mikroskopija otkriva nitaste hife gljivica ili pupajućih stanica (slika 1).

Dakle, mikroskopija daje zaključak samo o gljivičnoj prirodi infekcije, ali ne io vrsti gljivice-uzročnika.

Naravno, učinkovitost mikroskopskog pregleda ovisi o kvalifikacijama laboratorijskog osoblja.

Riža. 1. Mikroskopija strugotina s noktiju zahvaćenih T. rubrum. Vidljive su hife gljive.

KULTUROLOŠKI STUDIJ

Materijal se inokulira na standardni Sabouraud medij, često s antibiotskim dodacima. U dijagnostici dermatofitnih infekcija uobičajeno je Sabouraudovoj podlozi dodati cikloheksimid koji suzbija rast kontaminantnih gljivica iz zraka. Postoje gotove komercijalne podloge dopunjene antibioticima i cikloheksimidom. Treba imati na umu da mnoge nedermatofitne plijesni i neke vrste Candide ne rastu na podlozi s cikloheksimidom, pa se preporučuje inokulacija na Sabouraudovu podlogu s cikloheksimidom i u podlogu bez njega. Identifikacija vrste obično se provodi mikroskopskim pregledom uzgojene kulture ili subkulturom na selektivnim podlogama (slika 2-15).

Riža. 2. Kultura gljive T. rubrum izolirana iz zahvaćenih noktiju. Dobiveno na Sabouraud mediju (lijevo) i kukuruznom agaru (desno).

Riža. 3. Kultura gljive T. mentagrophytes var. interdigitale izoliran iz zahvaćenih noktiju. Dobiveno na Saburovom mediju.

Riža. 4. Kultura gljivice Candida albicans. Dobiveno na Saburovom mediju.

Riža. 5. Kultura gljive Torulopsis glabrata izolirana iz zahvaćenih noktiju. Dobiveno na Saburovom mediju.

Riža. 6. Kultura gljive Ulocladium sp. izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 7. Mikromorfologija Acremonium sp. izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 8. Mikromorfologija Fusarium sp. izrezana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 9. Mikromorfologija Scopulariopsis sp. izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 10. Mikromorfologija Candide albicans izolirane iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 11. Mikromorfologija Altemaria sp. izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 12. Mikromorfologija Aspergillus sp. izoliranih iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 13. Mikromorfologija Ulocladium sp izoliranog iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 14. Mikromorfologija Chaetomium sp. izoliranog iz zahvaćenih noktiju.

Slika 15. Ploča s unosom hranjivih tvari za identifikaciju dermatofita (lijevo - kultura T rubrum, desno - T mentagrophytes var. mterdigitale).

S lijeva na desno: Sabouraudov medij, Baxterov medij, Christensenov medij, kukuruzni agar

Treba napomenuti da neke plijesni, uključujući dermatofite, rastu sporo u kulturi, za 2-3 tjedna.

Čak i ako se poštuju sva pravila prikupljanja materijala, uz dobru laboratorijsku opremu i visokokvalificirano osoblje, broj pozitivnih rezultata kulturološke studije vrlo je mali.

Prema stranoj literaturi, postotak pozitivnih studija ne prelazi 50.
Postotak pozitivnih rezultata u najboljim domaćim laboratorijima jedva doseže 30.

Tako se u 2 od svaka 3 slučaja onihomikoze ne može utvrditi njezina etiologija.

LUMINISCENTNA STUDIJA

Godine 1925. Margaret i Deveze otkrili su da kosa zahvaćena određenim dermatofitima pokazuje karakterističnu sjajnost pod ultraljubičastim zrakama koje prolaze kroz Byd filter. Byda staklo se sastoji od barijevog sulfata, sadrži oko 9% nikal oksida; propušta zrake duljine 365 nm. Kao izvor ultraljubičastih zraka mogu se koristiti različiti uređaji. Priroda sjaja nije točno utvrđena. Kosa nastavlja svijetliti nakon smrti gljivice i nakon pokušaja ekstrakcije fluorescentnog materijala vrućom vodom ili hladnom otopinom natrijeva bromida. Intenzitet i priroda sjaja ovise o pH otopine. Vjeruje se da se fluorescentna tvar pojavljuje u procesu interakcije između gljivice i rastuće dlake.

Sjaj ultraljubičastih zraka koje prolaze kroz Wood filter karakterističan je samo za dlake zahvaćene gljivicama iz roda Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, a povremeno i M. gypseum i M. nanum), kao kao i Trichophyton schonleinii. Dlake zahvaćene mikrosporuma, posebno M. canis i M. audouinii, daju najjači sjaj; kosa zahvaćena T. schonleinii ima mutnozelenkastu fluorescenciju.

Sjaj se opaža samo u kosi potpuno zahvaćenoj gljivicama. Ne mora biti prisutan u svježim lezijama. U tim slučajevima dlake treba epilirati s rubne, najaktivnije zone, a sjaj se može otkriti u korijenu dlake.

Luminescentna metoda može se koristiti kako za dijagnosticiranje i praćenje učinkovitosti liječenja kod pojedinih bolesnika, tako iu epidemiološkim žarištima. Kompaktne mobilne jedinice prikladne su za pregled kontakt osoba u školama, vrtićima itd.

Luminescentni pregled potrebno je obaviti u zamračenoj prostoriji, lezije prethodno očistiti od krusta, ostataka masti i sl. Luminescentnom metodom može se dijagnosticirati pityriasis versicolor, osobito kada su lezije lokalizirane na tjemenu. Lezije u ovoj bolesti imaju crvenkasto-žuti ili smeđi sjaj. Ovaj sjaj, međutim, nije strogo specifičan, jer se može primijetiti u prisutnosti peruti na tjemenu, pa čak i kod zdravih ljudi u području ušća folikula dlake na licu i gornjem dijelu tijela. Identificirana luminiscentnom metodom, zahvaćena kosa mora se podvrgnuti mikroskopskom pregledu.

IMUNOLOŠKE I BIOLOŠKE STUDIJE

Imunološke metode istraživanja koriste se za prepoznavanje specifičnih promjena u tijelu i serološku dijagnozu gljivičnih bolesti. Za otkrivanje specifičnih protutijela u serumu uzorka provode se sljedeće serološke reakcije: aglutinacija, precipitacija, fiksacija komplementa, imunofluorescencija s odgovarajućim antigenima.

Alergijsko stanje pacijentovog tijela otkriva se pomoću alergijskih kožnih testova. Alergeni se apliciraju na skarificiranu kožu po Pirqueu ili utrljavanjem u kožu po Morou, intradermalno po Mantouxu, a također i injekcijom u kožu. Uz pomoć ovih testova otkrivaju se alergijske reakcije trenutačnog i odgođenog tipa, što omogućuje procjenu stanja humoralne i stanične imunosti.

Za otkrivanje specifične senzibilizacije limfocita koriste se reakcije bazofilne degranulacije, aglomeracije i alteracije, test blast transformacije, supresija migracije makrofaga itd.

Usporedba rezultata seroloških i alergijskih reakcija korisna je i za dijagnozu i za prognozu tijeka mikoza.

biološka metoda. Koristi se za laboratorijsku dijagnostiku dubokih i posebno opasnih mikoza. Temelji se na infekciji životinja patološkim materijalom od pacijenta ili kulturom proučavane gljive. Provodi se u posebnim laboratorijima.

HISTOLOŠKA STUDIJA

Histologija kožnih mikoza uzrokovanih dermatofitima

Patološke promjene u lezijama nastaju zbog unošenja gljivica u stratum corneum epidermisa, kose i noktiju te upalnog odgovora kože koji može biti akutan, subakutan ili kroničan. Dijagnoza se može smatrati postavljenom samo ako se u histološkim preparatima nađu elementi gljiva. Za to se koriste različite histološke boje, od kojih je najinformativnija periodična kisela reakcija (PAS), koja omogućuje identifikaciju polisaharida prisutnih u celulozi i hitinu stanične stijenke većine dermatofita (Schifu boja i njezine modifikacije). Također možete koristiti reakcije sulfatiranja i impregnaciju histoloških sekcija srebrom [Khmelnitsky OK, 1973; Lewer W. F. i Schaumburg-Lewerl., 1983].

Gljivice u stratum corneumu epidermisa, čak i kada se koriste posebne boje, otkrivaju se u malim količinama u obliku micelijskih niti i spora. U rijetkim slučajevima, kada ima mnogo gljivica u lezijama, mogu se naći u dijelovima obojenim hematoksilin-eozinom kao delikatne bazofilne strukture u stratum corneumu.

Upalne promjene u epidermisu mogu varirati od blagog intra- i izvanstaničnog edema bodljikavih stanica do teške spongioze. Spongioza se obično razvija s dishidrotičnim varijantama mikoze stopala i ruku, klinički se u tim slučajevima bilježe vezikule. Uzrok ove reakcije obično je T. mentagrophytes var. interdigitale. Ponekad je izražena hiperkeratoza u epidermisu, što se najčešće opaža kod mikoza uzrokovanih T. rubrum.

Histološke promjene u dermisu su nespecifične i odgovaraju akutnoj, subakutnoj i kroničnoj upali.

Kod mikoze glatke kože uzrokovane T. rubrumom, gljivice se ponekad otkrivaju u puhastoj kosi i folikulima dlake. Oko folikula se razvija upalna reakcija, koja zbog ulaska gljivica u dermis može dobiti granulomatozni karakter. Središnji dio infiltrata u tim slučajevima može doživjeti gnojenje i nekrozu, a periferni dio može se sastojati od limfocita, histocita, epiteloidnih i višejezgrenih divovskih stanica, unutar kojih se ponekad nalaze spore gljivica. Veličina spora ovdje doseže 6 mikrona u promjeru, u kosi obično ne prelazi 2 mikrona.

Kod infiltrativno-gnojnog oblika mikoze vlasišta i područja rasta brade i brkova, gljivični elementi nalaze se u folikulu dlake, unutar i oko kose. U kosi se određuju neposredno iznad zone početka keratinizacije (otprilike na razini od 30 mikrona). U dermisu se primjećuje upalna reakcija različitog intenziteta, najizraženija kod keriona Celsii. U akutnoj gnojnoj reakciji u infiltratu se primjećuje veliki broj neutrofilnih leukocita, gljivični elementi u ovom slučaju mogu potpuno nestati. U kroničnom tijeku procesa, infiltrat može dobiti granulomatozni karakter, u njemu se pojavljuju višejezgrene divovske stanice. Za potvrdu dijagnoze u odsutnosti gljivica u infiltratu mogu se koristiti metode imunofluorescentnog bojenja. U te svrhe koristi se antiserum protiv T. mentagrophytes obilježen fluoresceinom, koji omogućuje detekciju gljivičnih antigena u kosi i perifolikularnom infiltratu.

Stvaranje infiltrativno-gnojne reakcije kože s mikozom vlasišta (kerion Celsii) i područja rasta brade i brkova, uzrokovane gljivicama M. canis, T. tonsurans i T. verrucosum, je manifestacija imunološke reakcije. To dokazuje:

1. Tendencija lezija spontanom rješavanju.

2. Odsutnost gljivičnih elemenata s vrlo izraženom upalnom reakcijom kože s mikozom uzrokovanom T. verrucosum (faviforme) i T. tonsurans.

3. Stalna pozitivna reakcija kao odgovor na intradermalnu primjenu trihofitina s infiltrativno-gnojnim oblicima mikoza uzrokovanih zoofilnim trihofitinima (na primjer, T. tonsurans), a negativna - s površinskim mikozama uzrokovanim istim T. tonsurans.

Kod favusa se u stratum corneumu epidermisa nalazi veliki broj filamenata micelija i pojedinačnih spora gljive. Skutula je predstavljena eksudatom, parakeratotičnim stanicama epidermisa, stanicama upalnog infiltrata, kao i filamentima micelija i sporama gljiva, koji se nalaze uglavnom u perifernoj zoni skutule. U aktivnom stadiju bolesti u dermisu oko degenerativnih folikula dlake nalazi se izražen upalni infiltrat koji sadrži višejezgrene divovske i plazma stanice. U starim lezijama, kosa i lojne žlijezde su odsutne, postoje fenomeni fibroze.

Histologija mikoza kože i sluznica uzrokovanih gljivicama sličnim kvascima

Uz kandidijazu kože i sluznice, gljivice roda Candida nalaze se u stratum corneumu epidermisa ili u površinskim slojevima epitela sluznice. Gljivičnih elemenata obično ima malo, dobro se boje PAS-reakcijom ili po Gramu; predstavljen u obliku niti septatnog razgranatog micelija, promjera 2-4 mikrona, ili jajolikih spora, promjera 3-5 mikrona. Detekcija micelijskog oblika gljive je od dijagnostičke važnosti.

U histološkom pregledu kronične granulomatozne kandidijaze kože i sluznica elementi gljivice također se pretežno nalaze u stratum corneumu epidermisa ili u najgornjim dijelovima epitela sluznice, ali ponekad iu spinoznom sloju, unutar kose i u dermisu. Također postoji izražena hiperkeratoza i papilomatoza; u dermisu - gusti upalni infiltrat koji se sastoji od limfoidnih stanica, neutrofila, plazme i multinuklearnih divovskih stanica. Infiltrat se može proširiti u potkožno masno tkivo.

Uz pityriasis versicolor, veliki broj gljivičnih elemenata nalazi se u stratum corneumu epidermisa u obliku nježnih bazofilnih struktura, koje su jasno vidljive čak i kada su obojene hematoksilin-eozinom. Gljive su predstavljene i filamentima i sporama.

Kod folikularnog oblika pityriasis versicolor dolazi do nakupljanja rožnatih masa i stanica upalnog infiltrata u proširenim ustima folikula dlake. Upalni infiltrat također je zabilježen oko folikula. U PAS reakciji, sferične ili ovalne spore gljivice, promjera 2-4 µm, nalaze se unutar ušća folikula dlake, a ponekad iu perifolikularnom infiltratu. Micelij se nikada ne otkriva.

Kršenje pigmentacije kože u bolesnika s pityriasis versicolor je zbog sposobnosti gljivice Pityrosporum da proizvodi tvar koja inhibira proces stvaranja pigmenta u epidermisu. Elektronsko mikroskopsko ispitivanje bioptata kože s hipopigmentiranih područja pokazalo je da se u melanocitima stvaraju vrlo mali melanosomi koji ne mogu prodrijeti u keratinocite. U hiperpigmentiranim dijelovima kože, naprotiv, melanosomi su veliki i sadrže veliku količinu melanina.

Prema statistikama, oko 20% stanovništva naše zemlje na ovaj ili onaj način pati od mikoze. Ali ne traže svi od njih stručnu pomoć. Jedan od razloga je taj što ljudi jednostavno ne poznaju sve simptome i manifestacije ove bolesti.

Simptomi mikoze

Prije svega, vrijedi napomenuti da to nije specifična bolest, već skupina različitih gljivičnih lezija kože i njezinih dodataka. Stoga simptomi mogu biti vrlo raznoliki, ali najčešće se primjećuju sljedeći:

• Pojava ljuskavih mrlja na koži. Najčešće se pojavljuju između prstiju, na koži stopala. Često uzrokuju svrbež, iritaciju i druge neugodne osjećaje.
• Promjena boje i strukture noktiju. Postaju žućkaste, lomljive, mrve se i ljušte, površina im može biti neravna i neravna.
• Pukotine na koži. Često kod gljivičnih infekcija koža stopala postaje grublja i počinje jako pucati.
• Loš miris. Mnogi se pacijenti žale na neugodan miris zahvaćene kože, osobito kod atletskog stopala.

Kada se pojave takvi znakovi, potrebno je što prije posjetiti dermatologa i provesti potpunu dijagnostiku kako bi se utvrdilo koja je vrsta mikoze zahvatila kožu.

Metode dijagnosticiranja mikoza

Kada se pacijenti obrate dermatologu s karakterističnim znakovima gljivičnih lezija kože, najčešće je primarni vanjski pregled dovoljan da liječnik postavi dijagnozu. Pitanje je samo koja je vrsta mikoze zahvatila kožu.

Ove informacije su neophodne za određivanje daljnje strategije liječenja. Za dijagnozu mikoze mogu se koristiti sljedeće metode:

• Studija Woodove svjetiljke. Poseban spektar ultraljubičastog svjetla omogućuje određivanje prisutnosti gljivičnih infekcija. Ova metoda je vrlo jednostavna i pristupačna, uz njegovu pomoć ne samo da možete postaviti dijagnozu, već i pratiti tijek liječenja. Ali ne dopušta određivanje vrste mikoze.
• Mikroskopija. Jedna od najjednostavnijih i najčešćih metoda za dijagnosticiranje mikoze je mikroskopski pregled strugotina tkiva zahvaćenih gljivicama. Da biste to učinili, stavlja se na predmetno staklo. Postoje dvije vrste pregleda struganjem: korištenjem mrlja i korištenjem posvjetljivača.
• Bakteriološka kultura. Jedna od najpreciznijih dijagnostičkih metoda je sjetva spremnika na hranjivim medijima. Prema izgledu i karakteristikama izrasle kolonije gljivice, liječnik može odrediti vrstu uzročnika. Nedostatak ove metode je trajanje, može potrajati 2-3 tjedna za uzgoj kolonije. Osim toga, moguće je dobiti rezultat samo u polovici slučajeva.
• PCR dijagnostika. Ovo je jedna od najtočnijih i najsuvremenijih dijagnostičkih metoda, ali može biti potrebno nekoliko testova za određivanje vrste mikoze, što zahtijeva određene troškove.

Važno je napomenuti da je dijagnoza mikoze neophodna kako bi se odredila najučinkovitija metoda liječenja ove bolesti. A ako nije moguće odmah posjetiti stručnjaka, možete koristiti uslugu koju pruža naša klinika i

Prvo primanje

Na imenovanju, mikolog provodi pregled, a također propisuje sveobuhvatnu studiju.

Laboratorijska dijagnostika

Najučinkovitije metode za dijagnosticiranje kožnih mikoza su različiti laboratorijski testovi koji mogu identificirati uzročnika i pomoći u odabiru režima terapije. Da bi se identificirao uzročnik mikoze, propisani su sljedeći laboratorijski testovi:

• histološka analiza;
• bakteriološka kultura;
• imunološka istraživanja;
• PCR dijagnostika;
• kulturno ispitivanje;
• mikrobiološka istraživanja.

Mikrobiološka dijagnostika pomaže otkriti gljivicu, odrediti njezin rod i vrstu.

Mikrobiološka dijagnostika najčešća je i najjednostavnija metoda otkrivanja mikoza u krvi i na koži. Da biste utvrdili točnu dijagnozu, trebali biste znati pravilno prikupiti materijal koji je potreban u studiji. Zahvaćenu dlaku treba skupiti pincetom. Ako je koža zaražena, tada je za mikroskopiranje potrebno ostrugati kožu s oštećenog područja. Sav uzeti materijal stavi se u 30% otopinu kalijevog hidroksida, a potom na predmetno staklo. Mikrobiološkom dijagnostikom moguće je točno utvrditi gdje se gljivica nalazi (unutar ili izvan dlake, kože) i njezinu veličinu.

Kako bi se spriječila pogrešna dijagnoza mikoze, potrebno je pravilno i kompetentno uzeti materijal za mikrobiološki pregled.

U medicini postoje takve metode mikrobiološke dijagnostike:

• Mikroskopiranje nativnim ili neobojenim preparatima. Da bi se to postiglo, materijal se bistri s 10-30% otopinama kalijevog ili natrijevog hidroksida. Potom se obrađeni materijal stavlja na laboratorijsko staklo na koje je prethodno nakapano malo glicerina. Gornji poklopac pokriti staklenom pločom i provesti analizu.
• Mikroskopiranje obojenih preparata provodi se na nekoliko načina koji identificiraju bakterije, razlikuju različite bakterije i identificiraju različite gljivice.

Bakteriološka kultura

Bakteriološka kultura jedna je od najučinkovitijih metoda dijagnostike.

Prikupljanje bakteriološke sjetve na hranjivom mediju točan je način dijagnosticiranja mikoze. S obzirom na izgled i karakteristike izrasle kolonije gljivica, dermatolog određuje vrstu patogena koji je izazvao mikozu. Jedini nedostatak istraživanja je što je potrebno dugo vremena za uzgoj kolonije. U prosjeku je potrebno oko 3 tjedna da se otkrije soj patogena. U nekim slučajevima metoda ne donosi očekivane rezultate.

PCR dijagnostika

Dijagnostička metoda PCR uključuje identifikaciju uzročnika mikoze pomoću lančane reakcije polimeraze. Tijekom ispitivanja povećava se osjetljivost hibridizacije, što povećava sadržaj virusne DNA u ispitivanom materijalu. Ova metoda pregleda je nova i zahtijeva nekoliko testova od pacijenta. Vjeruje se da je ova vrsta dijagnostike prilično skupa, ali daje točne rezultate.

Kulturološki pregled

Mjere kulturološke dijagnostike preporučuju se u završnoj fazi dijagnoze. Metoda se sastoji u dobivanju kulture gljivice, koja se zatim šalje na ispitivanje pomoću mikroskopa. Dobiveni materijal stavlja se na umjetno stvorenu hranjivu podlogu i utvrđuje se vrsta patogena, izgled, veličina. Nakon toga je prikazan poseban tretman, koji je usmjeren na borbu protiv određene vrste uzročnika mikoze.

Za dijagnozu mikoza mogu se koristiti mikroskopske, mikološke (kulturalne), alergijske, serološke, biološke i histološke metode istraživanja. Ovisno o patogenezi, materijal za istraživanje može biti gnoj, sputum, zahvaćena kosa, nokti, ljuskice kože, punktati koštane srži, limfni čvorovi, unutarnji organi, krv, žuč, izmet, biopsije tkiva itd.

Mikroskopski pregled uključuje mikroskopiranje nativnih (nebojanih) i obojenih razmaza. Za izradu nativnih pripravaka kosa, strugotine kože i nokti bistre se u 10,30% otopinama KOH ili NaOH. Materijal tretiran lužinom stavi se na predmetno stakalce u kapljicu glicerola, pokrije pokrovnim stakalcem i mikroskopira (može se koristiti fazno kontrastna mikroskopija), što omogućuje proučavanje strukture gljive, položaja spora , no konačan zaključak o vrsti gljive može se donijeti tek nakon proučavanja kulture.

Za bojenje razmaza najčešće se koriste metode po Gramu, Ziehl.Nielsenu, Romanovsky-Giemsa. Metode Saburoa, Adamsona i drugih također se koriste za bojenje dermatofita.

Kulturalna (mikološka) studija provodi se kako bi se izolirala čista kultura gljive i identificirala. Koriste se čvrste i tekuće hranjive podloge (Saburo, wort agar, Chapek i dr.). Inkubacija u termostatu (22,28ºS) je duga (3,4 tjedna). Čista kultura gljive identificira se kombinacijom značajki: oblik kolonija, njihova boja, konzistencija, mikroskopska slika (priroda micelija, položaj spora, konidiofora) i dr. Serološke reakcije za dijagnozu gljivičnih bolesti provode se gljivičnim antigenima prema općeprihvaćenim metodama, kao i za dijagnostiku drugih zaraznih bolesti (RA, RP, RSK, RNGA, RIF i dr.).

Alergijski testovi mogu se provoditi prema općeprihvaćenim metodama intradermalnim davanjem odgovarajućih alergena (polisaharidnih i proteinskih frakcija iz stanica ili staničnih membrana, suspenzija stanica ubijenih gljivica, filtrati kulture). Za otkrivanje HNT može se koristiti test degranulacije tkivnih i serumskih bazofila, a za otkrivanje HTH reakcija inhibicije migracije fagocita, blastna transformacija limfocita.

Biološka istraživanja provode se na laboratorijskim modelima (miševi, štakori, zamorci, kunići, psi, mačke). Biološki model mikoze koristi se za utvrđivanje patogenosti uzročnika, izolaciju čiste kulture i proučavanje novih antimikotika. Histološki pregled omogućuje otkrivanje gljivica u tkivima, proučavanje njegove morfologije i značajki patološkog procesa uzrokovanog njime u tijelu.