Uloga gljivične infekcije u ljudskoj patologiji. Dijagnoza mikoza

Prema uputama SP 1.2.036-95 Državnog odbora za epidemiološki nadzor Ruske Federacije, Moskva, 1996. „Postupak za snimanje, skladištenje, prijenos i transport mikroorganizama I-IV skupina patogenosti” prema epidemiološkoj opasnosti, kvasac i plijesni, kao i dermatofiti pripadaju III-IV skupini uzročnika zaraznih bolesti, stoga je pri radu s njima potrebno pridržavati se posebnih sigurnosnih pravila, industrijske sanitarne norme, protuepidemijskog režima i osobne higijene, s ciljem osiguranja osobne i javno sprječavanje zaraze, alergizacije i širenja zaraze.

Laboratorij za rad s mikroorganizmima III-IV skupine patogenosti opremljen je namještajem koji se lako dezinficira, uključujući ormare za čisto laboratorijsko posuđe, reagense, podloge za kulture, odgovarajuću opremu i alate. Za rad su vam potrebne alkoholne lampe ili plinski plamenici, mikrobiološke petlje, mikološke lopatice, spatule, epilacijska i anatomska pinceta, grickalice za nokte, skalpeli, škarice, Volkmann žlice, pipete, Pasteurove pipete, igle za seciranje, stakleni štapići, štrcaljke, sporohodna centrifuga , aparati za mućkanje, Petrijeve zdjelice, epruvete, stakleno posuđe, Woodova ultraljubičasta svjetiljka s filtrom, mikroskopi, iluminatori, termostati, autoklavi, hladnjaci, suhe peći, baktericidne lampe.

Uzimanje materijala za istraživanje

Mikroskopska dijagnoza mikoza uključuje otkrivanje micelija i spora u biomaterijalu koji se proučava. Epidermalne ljuske, kosa i nokti smatraju se biomaterijalom koji se proučava. Neizostavan uvjet prije provođenja studije je odsutnost lokalnog liječenja najmanje deset dana i sustavnog liječenja mjesec dana. Treba imati na umu da pacijentova uporaba deterdženata (osobito onih koji sadrže antiseptike) može utjecati na pouzdanost rezultata testa, stoga je pranje zabranjeno 3-4 dana prije testa.

Alati za uzimanje biomaterijala i pripremu lijeka prikazani su na slici:

Fotografija. Instrumentacija za uzimanje biomaterijala i pripremu lijeka.

Ako se sumnja na mikozu glatke kože, mikozu šaka i stopala bez oštećenja ploča nokta, pregledaju se epidermalne ljuske s površine lezije. Za mikozu glatke kože, poželjno je proučavati epidermu iz rubne zone lezije, budući da se patološki proces često rješava u središnjoj zoni. Istodobno, ne treba zaboraviti na mogućnost oštećenja vellus dlaka, što određuje izbor daljnje taktike liječenja. Dlačice se uklanjaju pincetom za epilaciju. Za mikozu šaka i stopala bez oštećenja ploča nokta ispituju se epidermalne ljuske s trećeg i četvrtog interdigitalnog nabora, kao i s dlanova i svodova stopala.

Ako postoji sumnja na gljivičnu infekciju duge kose (tjeme, brada, brkovi i pubis), kao i vellus dlake, radi se mikroskopski pregled. Kod trichophytosis vlasišta, kosa se lomi na udaljenosti od 1-2 mm iznad razine ušća folikula dlake, nalik na panjeve i točkice. Ako se dlaka ne može uhvatiti epilacijskom pincetom, onda se pokušava ukloniti oštrim vrhom skalpela ili iglom za seciranje.

Kod mikrosporije vlasišta kosa se lomi na visini od 5-6 mm, podsjećajući na "pokošenu livadu". Upravo se te slomljene dlake ispituju pod mikroskopom. Dlake se uklanjaju s lezija pomoću pincete.

S favusom se ispituje stanjena kosa iznad površine skutule.

Ako se sumnja na onihomikozu, pregledava se lako usitnjeni materijal iz područja subungvalne hiperkeratoze, kao i same promijenjene ploče nokta.

Potrebno je razumjeti da je svaki testni materijal od pacijenta potencijalno zarazan, pa se njegovo prikupljanje mora provesti u prostoriji u kojoj se svakodnevno provodi mokro čišćenje pomoću dezinficijensa (5% otopina kloramina, 5% pročišćeni izbjeljivač) i zraka sterilizira se ultraljubičastim ozračivačima (to uključuje 1-1,5 sati i ulazi u prostoriju 20 minuta nakon isključivanja). Termostati se brišu tjedno s 0,5% otopinom kloramina, zidovi se tretiraju dezinficijensima jednom mjesečno. Pri radu liječnik mora biti zaštićen maskom, zaštitnim naočalama, ogrtačem i rukavicama. Instrumenti za uzimanje biomaterijala, rukavice, predmetna i pokrovna stakalca, jednokratne garniture i salvete dezinficiraju se nakon upotrebe uranjanjem u 1,5% otopinu klindezina-extra (5% otopina fenola ili 5% otopina lizola) 30 minuta. Preostali patološki materijal (kosa, koža i ljuskice noktiju) autoklavira se na 2 atm. i 132˚ C 20 minuta (kontrola - urea) ili na 1,5 atm. i 126˚ C 30 minuta (kontrola - benzojeva kiselina), ili kuhati 1 sat u vodi ili 30 minuta u 1% otopini sapunske sode.

Patološki materijal se transportira u laboratorij u posebnom spremniku ili metalnim kutijama, štiteći ga od izravne sunčeve svjetlosti. Popratni dokument navodi prezime, ime, patronim, spol, dob i adresu pacijenta, očekivanu kliničku dijagnozu, naziv materijala koji se proučava, vrijeme njegovog prikupljanja, mjesto lezije, povijest bolesti. broj, ime liječnika i ustanove koja šalje materijal.

Priprema lijeka

Nakon uzimanja epidermalnih ljuskica iz lezije priprema se preparat za mikroskopsko ispitivanje. Na ispitni materijal postavljen na predmetno staklo nakapaju se 1-2 kapi 20% KOH, nakon čega se predmetno staklo zagrijava na plamenu plamenika dok se po obodu ne pojavi bjelkasti rub kristalizirane lužine. Uzorak se zatim prekrije pokrovnim stakalcem (koje se pritisne iglom za seciranje) i pregleda pod mikroskopom. Studija se mora provesti najkasnije 2 sata nakon pripreme lijeka zbog mogućnosti kristalizacije lužine.

Način pripreme preparata za kosu za sumnju na gljivičnu infekciju odgovara prethodno opisanom, s tom razlikom što se pokrovno staklo ne pritišće iglom za seciranje (kako bi se izbjeglo gnječenje dlake).

Fotografija. Pojava ruba kristalizirane lužine.

Za pripremu lijeka, komadići izrezanih nokatnih ploča urone se u epruvetu s 20% KOH i izlože u termostatu 1 sat (t≈37˚C), a zatim se dobivena želeasta masa prenese na predmetno staklo. , pokriti pokrovnim stakalcem i ispitati pod mikroskopom.

Za razliku od ploča nokta, uzorci od lako drobljivog materijala iz zone subungualne hiperkeratoze stavljaju se na predmetno staklo, na njih se nakapaju 1-2 kapi 20% KOH, nakon čega se stakalce zagrijava na plamenu plamenika do bjelkastog ruba. po obodu se pojavljuje kristalizirana lužina (slika 65) . Uzorak se zatim prekrije pokrovnim stakalcem, koje se nježno pritisne disekcijskom iglom i pregleda pod mikroskopom.

Mikroskopiranje preparata

Za provođenje mikroskopskog pregleda koristi se laboratorijski mikroskop bez upotrebe uranjanja. Mikroskopiranje epidermalnih ljuskica, ljuskica iz područja subungvalne hiperkeratoze, kao i rastvorenih ploča nokta vrši se najprije pri malom povećanju (×100), a kada se otkriju niti micelija, podsjeća na „kartu rijeka“ (željeznica) , leća se prebacuje na veće povećanje (×400) . Pri srednjem povećanju, micelij nalikuje staklenim štapićima bizarnog oblika koji mijenjaju stupanj loma svjetlosti pri radu s mikroskopskim vijkom.

Mikroskopiranje uzorka dlake izvodi se odmah pri srednjem povećanju (×200 ili ×400). Kod trihofitoze se unutar dlake nalaze velike spore raspoređene u nizove, dok kod mikrosporije unutar dlake ima puno malih mozaičnih spora (otuda i izraz "mikrosporija"). Ponekad se primijeti prisutnost omotača na vanjskoj strani dlake - to je tipično i za trihofitozu (varijanta ektotriksa, spore su velike) i za mikrosporiju (u ovom slučaju omotač se sastoji od malih spora). Pri mikroskopiranju zahvaćene dlake s favusom, unutar dlake, osim nakupina okruglih ili poligonalnih spora, nalaze se mjehurići zraka i niti micelija.

Preparate je potrebno pregledati najkasnije 2 sata od trenutka pripreme zbog mogućnosti kristalizacije alkalija. Za povećanje pouzdanosti dijagnoze potrebno je napraviti nekoliko preparata (najmanje dva) iz jedne lezije. Moguće pogreške u mikroskopskoj dijagnozi mikoza mogu biti povezane s nekvalitetnom pripremom preparata (pregrijavanje na plamenu plamenika, što je popraćeno preuranjenom kristalizacijom lužine), kao i s nedovoljnim iskustvom istraživača (kada vlakna tkivo koje se slučajno nađe u preparatu često se pogrešno zamjenjuje s nitima micelija).

LABORATORIJSKA DIJAGNOSTIKA MIKOZA

Uzimanje materijala za laboratorijsku pretragu na gljivice.

1.OST 42-21-2-854: Naredba br. 222/80 od 27.06.2000.
2. Pribor: pinceta, predmetno staklo, škare, Volkmann žlica.
4. Indikacije: gljivična oboljenja.
5. Komplikacije: nema.

Priprema sobe za tretman:

Mijenjanje rješenja.

Pripremiti:
-1% otopina kloramina za krpe
-3% otopina kloramina – za dezinfekciju zavoja i pinceta
- otopina za pranje (156 ml vodikovog peroksida + 5 g praška za pranje + 839 ml destilirane vode) - za obradu pinceta
- 6% otopina vodikovog peroksida – za tretiranje rukavica.

Algoritam za izvođenje manipulacije.

Morate uzeti pincetu, predmetno staklo, Volkmannovu žlicu i škare;
- pozvati pacijenta u garderobu;
- pacijent sjedi na stolici ili kauču;
- m/s stoji.

Tehnika:

Uzmite ljuskice kože i dlake s lezije pincetom;
- uzeti uzeti materijal staviti na predmetno staklo i prekriti ga drugim stakalcem.
- perite ruke sapunom;
- poslati uzeti materijal u laboratorij.

SKUPLJANJE GRAĐE

Uzimanje noktiju na pregled.

Uzmite škare i stakalce;
- škarama odrežite dio slobodnog ruba nokta;
- pokriti uzeti materijal drugim predmetnim staklom;

Namočite škare i pincetu u 3% otopinu formaldehida.

Ispravno uzimanje materijala sa zahvaćenih noktiju ključ je uspješnog mikrobiološkog istraživanja. Prilikom uzimanja materijala ne zahvaćaju uvijek područja nokta koja sadrže održive gljivice. Naravno, neodržive gljive neće rasti u kulturi, a njihova vrsta se ne može odrediti.

Područje nokta koje je potrebno uzeti određeno je oblikom onihomikoze.

Dakle, s površinskim oblikom onihomikoze, potrebno je napraviti struganje s površine ploče nokta.

U najčešćem distalnom subungualnom obliku, najživlje gljivice nalaze se ispod ploče nokta. Materijal koji se šalje na pregled treba sadržavati ne samo rezove ploče nokta, već i strugotine s ležišta nokta, ispod ploče.

Osim toga, također treba uhvatiti područja nepromijenjenog nokta, jer se najaktivnije gljivice nalaze na granici između njih i zahvaćenih područja nokta.

Kod proksimalnog subungualnog oblika teško je uzeti materijal. U tim se slučajevima ponekad, osobito ako će se raditi histološki pregled ili diferencijalna dijagnoza, radi biopsija nokta, a ponekad i bušilica.

Za paronihiju, strugotine se izrađuju s proksimalnog grebena i ispod njega.

U svim slučajevima, kako bi se izbjegla bakterijska kontaminacija, nokat treba tretirati etilnim alkoholom prije uzimanja uzorka.

MIKROSKOPSKI PREGLED

Mikroskopski pregled patološkog materijala na gljivice provodi se u nativnim i obojenim preparatima.

Za pripremu neobojanih pripravaka dobiveni materijal se zdrobi skalpelom ili iglom za disekciju i stavi u sredinu predmetnog stakla. Da bi se jasnije identificirali elementi gljive, materijal se bistri (macerira). U tu svrhu pribjegavaju se raznim tvarima, najčešće kaustičnim lužinama (KOH, NaOH), koje otapaju epidermalne ljuskice, sluz, gnoj, posvjetljuju pigment dlake i time gljive čine dostupnima za istraživanje.

Nanesite 1-3 kapi 20-30% otopine KOH (NaOH) na omekšanu kožu ili ljuskice nokta koje stavite u sredinu predmetnog stakla. Materijal koji se proučava u kapima lužine pažljivo se zagrijava na plamenu alkoholne svjetiljke sve dok se na obodu kapi ne pojavi nježni bijeli rub kristala lužine. Nemojte zagrijavati do točke vrenja. Nakon zagrijavanja, kap se pokrije pokrovnim staklom, izbjegavajući ulazak mjehurića zraka.

R. A. Arabian i G. I. Gorshkova (1995) preporučuju da se preparati ljuskica kože i kose ostave pročišćeni i pokriveni pokrovnim staklom 5 - 10 minuta, a preparati ploča nokta 30 - 40 minuta prije mikroskopije.

Čišćenje preparata može se provesti bez zagrijavanja, za to se ostavljaju u 20% otopini KOH 30 - 60 minuta ili se koriste druge metode čišćenja patološkog materijala: klorallaktofenol po Amanu; laktofenol; otopina koja sadrži 15% dimetil sulfoksida i KOH u vodi. Dobri rezultati se postižu nakon čišćenja ploča nokta, stavljanja u 5% otopinu KOH 24 sata, u ovom slučaju nije potrebno zagrijavanje.

Mikroskopski pregled se provodi na konvencionalnom laboratorijskom mikroskopu bez uranjanja.

Kondenzor mikroskopa treba spustiti i suziti otvor. Najprije se lijek nalazi na staklu pri malom povećanju (40x), naknadno se istraživanje provodi pri većem povećanju (100x);

Lijek se detaljno proučava pri povećanju od 400x. Potrebno je proučiti nekoliko lijekova kako bi se povećala pouzdanost analize i izbjegli lažno pozitivni rezultati.

Pogreške u mikroskopskoj dijagnozi gljivica mogu nastati i zbog nedostataka u pripremi lijeka i zbog nedovoljnog iskustva laboranta.

Greške u proizvodnji prvenstveno su povezane s:
s pregrijavanjem lijeka, što može dovesti do gubitka alkalnih kristala, uništavanja kose i pojave finog zrnatog propadanja u patološkom materijalu.

Linearni raspored duguljastih, glatkih kristala lužine vrlo podsjeća na niti septiranog micelija, čak i na čistom staklu bez patološkog materijala.

Diferencijalno dijagnostička obilježja su izuzetna ujednačenost kristala, njihova staklasta prozirnost, višeslojni rubovi i nepostojanje neraskidive veze između jednog elementa i drugog. U dvojbenim slučajevima preporuča se u pripravak dodati kapi blago zagrijane destilirane vode, koje brzo otapaju kristale lužine.

Sljedeće se može pogrešno smatrati elementima gljiva:

- kapljice masti,
- mjehurići zraka,
- pamučne niti za odjeću
- i takozvane "mozaične gljive".

Lipidi kože, razgradnja masnih stanica i zrnca keratohijalina, osobito ona pravilnog oblika, mogu nalikovati pojedinačnim sporama gljivica. Ali raznolikost oblika i, što je najvažnije, veličina, nedostatak unutarnje strukture formacija (vakuole, školjke) govore protiv gljivične prirode ovih elemenata. Lipidi također mogu dospjeti u preparat prilikom uzimanja patološkog materijala iz nedovoljno očišćene lezije.

Mjehurići zraka mogu nalikovati sporama stanica sličnih kvascima, ali za razliku od potonjih, okruženi su gustom tamnom membranom, a čak i najmanji mjehurići zraka uvijek su veći od stanica gljivica.

Niti od tkanine čarapa, odjeće i sl. obično leže odvojeno od patološkog materijala, uvijek su veće od hifa, grublje i nisu septirane.

"Mozaička gljiva" je artefakt koji nastaje tijekom procesa kristalizacije (vjerojatno zbog razgradnje kolesterola). Ima izgled mreže ili petlji, čiji obrisi odgovaraju granicama rožnatih ljuskica; za razliku od niti micelija, nikada ne prelazi zidove epidermalnih stanica.

U nekim se laboratorijima preparati za mikroskopsko ispitivanje bistre 15-30% otopinom KOH u koju se dodaje 5-10% komercijalne tamnoplave tinte tvrtke Parker (Parker's Superchrome Blue-Black Ink).

S ovom bojom, hife i spore su obojene plavo.

Mikroskopija otkriva filamentozne gljivične hife ili pupajuće stanice (slika 1).

Dakle, mikroskopiranje daje zaključak samo o gljivičnoj prirodi infekcije, ali ne i o vrsti gljivice koja ju uzrokuje.

Naravno, učinkovitost mikroskopskog pregleda ovisi o kvalifikacijama laboratorijskog zaposlenika.

Riža. 1. Mikroskopija strugotina s noktiju zahvaćenih T. rubrum. Vidljive su hife gljiva.

ISTRAŽIVANJE KULTURE

Materijal se inokulira na standardni Sabouraud medij, često s dodanim antibioticima. U dijagnostici dermatofitnih infekcija uobičajeno je Sabouraudovoj podlozi dodati cikloheksimid koji suzbija rast kontaminantnih gljivica koje dolaze iz zraka. Dostupne su gotove komercijalne podloge s dodatkom antibiotika i cikloheksimida. Treba imati na umu da mnoge nedermatofitne plijesni i neke vrste Candida ne rastu na podlozi s cikloheksimidom, pa se preporučuje inokulacija na Sabouraudovu podlogu s cikloheksimidom i u podlogu bez njega. Identifikacija vrste obično se provodi mikroskopskim pregledom uzgojene kulture ili supkulturom na selektivnim podlogama (slika 2-15).

Riža. 2. Kultura gljive T. rubrum izolirana iz zahvaćenih noktiju. Dobiveno na Sabouraud mediju (lijevo) i kukuruznom agaru (desno).

Riža. 3. Kultura gljive T. mentagrophytes var. interdigitale izoliran iz zahvaćenih noktiju. Dobiveno na mediju Sabouraud.

Riža. 4. Kultura gljivice Candida albicans. Dobiveno na mediju Sabouraud.

Riža. 5. Kultura gljivice Torulopsis glabrata izolirana iz zahvaćenih noktiju. Dobiveno na mediju Sabouraud.

Riža. 6. Kultura gljive Ulocladium sp., izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 7. Mikromorfologija Acremonium sp. izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 8. Mikromorfologija Fusarium sp., izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 9. Mikromorfologija Scopulariopsis sp. izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 10. Mikromorfologija Candide albicans izolirane iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 11. Mikromorfologija Altemaria sp. izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 12. Mikromorfologija Aspergillus sp. izolirana iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 13. Mikromorfologija Ulocladium sp izoliranog iz zahvaćenih noktiju.

Riža. 14. Mikromorfologija Chaetomium sp. izoliranog iz zahvaćenih noktiju.

Slika 15. Panel hranjivih spojeva za identifikaciju dermatofita (lijevo - kultura T rubrum, desno - T mentagrophytes var. mterdigitale).

S lijeva na desno: Sabouraudov medij, Baxterov medij, Christensenov medij, kukuruzni agar

Treba napomenuti da neke plijesni, uključujući dermatofite, rastu sporo u kulturi, unutar 2-3 tjedna.

Čak i ako se poštuju sva pravila prikupljanja materijala, uz dobru opremljenost laboratorija i visokokvalificirano osoblje, broj pozitivnih rezultata kulturoloških istraživanja vrlo je mali.

Prema stranoj literaturi, postotak pozitivnih studija ne prelazi 50.
Postotak pozitivnih rezultata u najboljim domaćim laboratorijima jedva doseže 30.

Tako se u 2 od svaka 3 slučaja onihomikoze ne može utvrditi njezina etiologija.

STUDIJA LUMINISCENCIJE

Godine 1925. Margaret i Deveze otkrili su da kosa zaražena određenim dermatofitima daje karakterističan sjaj u ultraljubičastim zrakama koje prolaze kroz Deveze filter. Wuda staklo se sastoji od barijevog sulfata, sadrži oko 9% nikal oksida; propušta zrake duljine 365 nm. Kao izvor ultraljubičastih zraka mogu se koristiti različiti uređaji. Priroda sjaja nije točno utvrđena. Kosa nastavlja svijetliti nakon što gljivica umre i nakon pokušaja ekstrakcije fluorescentnog materijala vrućom vodom ili hladnom otopinom natrijeva bromida. Intenzitet i priroda sjaja ovise o pH otopine. Vjeruje se da se fluorescentna tvar pojavljuje tijekom interakcije gljivice i rastuće kose.

Sjaj ultraljubičastih zraka koje prolaze kroz Wood filter karakterističan je samo za dlake zahvaćene gljivicama iz roda Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, povremeno M. gypseum i M. nanum), kao i kao Trichophyton schonleinii. Kosa zaražena mikrosporima, posebno M. canis i M. audouinii, daje najjači sjaj; kosa zahvaćena T. schonleinii ima mutnozelenkastu fluorescenciju.

Sjaj se opaža samo u kosi potpuno zahvaćenoj gljivicama. Ne mora biti prisutan u svježim lezijama. U tim slučajevima dlake treba epilirati s rubne, najaktivnije zone, a sjaj se može otkriti u korijenskom dijelu dlake.

Luminescentna metoda može se koristiti kako za dijagnozu, tako i za praćenje učinkovitosti liječenja u pojedinačnih bolesnika iu epidemiološkim žarištima. Kompaktne mobilne jedinice prikladne su za pregled kontakt osoba u školama, vrtićima itd.

Luminescentni pregled mora se obaviti u zamračenoj prostoriji, a lezije prethodno moraju biti očišćene od krasta, ostataka masti i sl. Luminescentna metoda može se koristiti za dijagnosticiranje pityriasis versicolor, osobito kada su lezije lokalizirane na tjemenu. Lezije u ovoj bolesti imaju crvenkasto-žuti ili smeđi sjaj. Ovaj sjaj, međutim, nije strogo specifičan, jer se može primijetiti u prisutnosti peruti na tjemenu, pa čak i kod zdravih ljudi u području ušća folikula dlake na licu i gornjem dijelu tijela. Zahvaćena dlaka otkrivena luminiscentnom metodom mora se podvrgnuti mikroskopskom pregledu.

IMUNOLOŠKA I BIOLOŠKA ISTRAŽIVANJA

Imunološke metode istraživanja koriste se za prepoznavanje specifičnih promjena u tijelu i serološku dijagnozu gljivičnih bolesti. Za otkrivanje specifičnih protutijela u uzorcima seruma provode se sljedeće serološke reakcije: aglutinacija, precipitacija, fiksacija komplementa, imunofluorescencija s odgovarajućim antigenima.

Alergijsko stanje pacijentovog tijela otkriva se pomoću alergijskih kožnih testova. Alergeni se apliciraju na skarificiranu kožu po Pirquetu ili utrljavanjem u kožu po Moreauu, intradermalno po Mantouxu ili injekcijom u kožu. Uz pomoć ovih testova otkrivaju se alergijske reakcije trenutačnog i odgođenog tipa, što omogućuje procjenu stanja humoralne i stanične imunosti.

Za identifikaciju specifične senzibilizacije limfocita koriste se reakcije bazofilne degranulacije, aglomeracije i alteracije, test blast transformacije, supresija migracije makrofaga itd.

Usporedba rezultata seroloških i alergijskih reakcija pokazala se korisnom kako za dijagnozu tako i za prognozu tijeka mikoza.

Biološka metoda. Koristi se za laboratorijsku dijagnostiku dubokih i posebno opasnih mikoza. Temelji se na infekciji životinja patološkim materijalom od pacijenta ili kulturom gljivice koja se proučava. Provodi se u posebnim laboratorijima.

HISTOLOŠKA STUDIJA

Histologija kožnih mikoza uzrokovanih dermatofitima

Patomorfološke promjene u lezijama uzrokovane su unošenjem gljivica u stratum corneum epiderme, kose i noktiju te upalnim odgovorom kože koji može biti akutan, subakutan ili kroničan. Dijagnoza se može smatrati utvrđenom samo ako se u histološkim pripravcima nađu gljivični elementi. Za to se koriste različite histološke boje, od kojih je najinformativnija periodična kisela reakcija (PAS), koja omogućuje identifikaciju polisaharida prisutnih u celulozi i hitinu stanične stijenke većine dermatofita (Shifu boja i njezine modifikacije). Također možete koristiti reakcije sulfatiranja i impregnaciju histoloških rezova srebrom [Khmelnitsky O.K., 1973; Lewer W. F. i Schaumburg-Lewerl., 1983].

Gljivice u stratum corneumu epidermisa, čak i kada se koriste posebne boje, otkrivaju se u malim količinama u obliku niti micelija i spora. U rijetkim slučajevima, kada ima mnogo gljivica u lezijama, one se mogu otkriti u rezovima obojenim hemotoksilin-eozinom, u obliku nježnih bazofilnih struktura u stratum corneumu.

Upalne promjene u epidermisu mogu biti različite: od manjeg intra- i ekstracelularnog edema spinoznih stanica do teške spongioze. Spongioza se obično razvija s dishidrotičnim varijantama mikoza stopala i šaka; klinički se u tim slučajevima bilježe vezikule. Ovu reakciju obično uzrokuje T. mentagrophytes var. interdigitale. Ponekad se uočava izražena hiperkeratoza u epidermisu, što se najčešće opaža kod mikoza uzrokovanih T. rubrum.

Histološke promjene u dermisu su nespecifične i odgovaraju akutnoj, subakutnoj i kroničnoj upali.

Kod mikoze glatke kože uzrokovane T. rubrumom, gljivice se ponekad otkriju u vellus dlaci i folikulima dlake. Oko folikula se razvija upalna reakcija koja, zbog ulaska gljivica u dermis, može postati granulomatozna. Središnji dio infiltrata u tim slučajevima može biti podložan gnojenju i nekrozi, a periferni dio može se sastojati od limfocita, histocita, epiteloidnih i višejezgrenih divovskih stanica, unutar kojih se ponekad nalaze spore gljivica. Veličina spora ovdje doseže 6 mikrona u promjeru, u kosi obično ne prelaze 2 mikrona.

U infiltrativno-supurativnom obliku mikoza vlasišta i područja rasta brade i brkova, gljivični elementi nalaze se u folikulu dlake, unutar i oko dlake. U kosi se otkrivaju neposredno iznad zone u kojoj počinje keratinizacija (otprilike na razini od 30 mikrona). U dermisu se primjećuje upalna reakcija različitog intenziteta, najizraženija kod keriona Celsii. U slučaju akutne gnojne reakcije, u infiltratu se primjećuje veliki broj neutrofilnih leukocita, gljivični elementi u ovom slučaju mogu potpuno nestati. U kroničnom tijeku procesa, infiltrat može dobiti granulomatozni karakter, au njemu se pojavljuju višejezgrene divovske stanice. Za potvrdu dijagnoze u odsutnosti gljivica u infiltratu mogu se koristiti metode imunofluorescentnog bojenja. U te svrhe koristi se antiserum protiv T. mentagrophytes obilježen fluoresceinom, koji omogućuje otkrivanje gljivičnih antigena u kosi i perifolikularnom infiltratu.

Stvaranje infiltrativno-gnojne kožne reakcije tijekom mikoze vlasišta (kerion Celsii) i područja rasta brade i brkova uzrokovane gljivicama M. canis, T. tonsurans i T. verrucosum manifestacija je imunološke reakcije . To dokazuje:

1. Tendencija lezija da se spontano povuku.

2. Odsutnost gljivičnih elemenata s vrlo izraženom upalnom reakcijom na dijelu kože tijekom mikoze uzrokovane T. verrucosum (faviforme) i T. tonsurans.

3. Stalna pozitivna reakcija kao odgovor na intradermalnu primjenu trihofitina u infiltrativno-gnojnim oblicima mikoza uzrokovanih zoofilnim trihofitinima (na primjer, T. tonsurans), i negativna reakcija u površinskim mikozama uzrokovanim istim T. tonsurans.

Kod favusa se u stratum corneumu epidermisa nalazi veliki broj niti micelija i pojedinačnih gljivičnih spora. Skutula je predstavljena eksudatom, parakeratotičnim stanicama epidermisa, stanicama upalnog infiltrata, kao i nitima micelija i sporama gljiva, koje se nalaze uglavnom u perifernoj zoni skutule. U aktivnom stadiju bolesti, u dermisu oko degenerativnih folikula dlake uočen je izražen upalni infiltrat koji sadrži višejezgrene divovske i plazma stanice. U starim lezijama nedostaju dlake i žlijezde lojnice, a postoje znakovi fibroze.

Histologija mikoza kože i sluznica uzrokovanih gljivicama sličnim kvascima

Uz kandidijazu kože i sluznice, gljivice roda Candida nalaze se u stratum corneumu epidermisa ili u površinskim slojevima epitela sluznice. Gljivični elementi obično su malobrojni i dobro se boje PAS reakcijom ili bojenjem po Gramu; prisutni su u obliku niti septatnog razgranatog micelija, promjera 2-4 µm, ili jajolikih spora, promjera 3-5 µm. Detekcija micelijskog oblika gljive je od dijagnostičke važnosti.

U histološkom pregledu kronične granulomatozne kandidijaze kože i sluznica elementi gljivice također se pretežno nalaze u stratum corneumu epidermisa ili u najgornjim dijelovima epitela sluznice, ali ponekad i u stratum spinosum, unutar kosi i u dermisu. Također se primjećuju teška hiperkeratoza i papilomatoza; u dermisu se nalazi gusti upalni infiltrat koji se sastoji od limfoidnih stanica, neutrofila, plazma stanica i višejezgrenih divovskih stanica. Infiltrat se može proširiti u potkožno masno tkivo.

Uz pityriasis versicolor, veliki broj gljivičnih elemenata nalazi se u stratum corneumu epidermisa u obliku nježnih bazofilnih struktura, koje su jasno vidljive čak i kada se preparati boje hemotoksilin-eozinom. Gljive su predstavljene i filamentima i sporama.

Kod folikularnog oblika pityriasis versicolor dolazi do nakupljanja rožnatih masa i stanica upalnog infiltrata u proširenim otvorima folikula dlake. Upalni infiltrat također je zabilježen oko folikula. S PAS reakcijom, sferične ili ovalne gljivične spore, promjera 2-4 μm, nalaze se unutar ušća folikula dlake, a ponekad iu perifolikularnom infiltratu. Micelij se nikada ne otkriva.

Poremećena pigmentacija kože u bolesnika s pityriasis versicolor uzrokovana je sposobnošću gljive Pityrosporum da proizvodi tvar koja inhibira proces stvaranja pigmenta u epidermisu. Elektronsko mikroskopsko ispitivanje biopsija kože s hipopigmentiranih područja pokazalo je da se u melanocitima stvaraju vrlo mali melanosomi koji ne mogu prodrijeti u keratinocite. U hiperpigmentiranim dijelovima kože, naprotiv, melanosomi su veliki i sadrže velike količine melanina.

Prema statistikama, oko 20% stanovništva naše zemlje u jednom ili drugom stupnju pati od mikoze. Ali ne obraćaju se svi za pomoć stručnjaka. Jedan od razloga je taj što ljudi jednostavno ne poznaju sve simptome i manifestacije ove bolesti.

Simptomi mikoze

Prije svega, vrijedi napomenuti da to nije specifična bolest, već skupina različitih gljivičnih infekcija kože i njezinih dodataka. Stoga simptomi mogu biti vrlo različiti, ali najčešće se navode sljedeći:

• Pojava ljuskavih mrlja na koži. Najčešće se pojavljuju između prstiju, na koži stopala. Često uzrokuju svrbež, iritaciju i druge neugodne senzacije.
• Promjene u boji i strukturi noktiju. Postaju žućkaste, lomljive, mrve se i ljušte, površina im može biti neravna i neravna.
• Pukotine na koži. Često kod gljivičnih infekcija koža stopala postaje gruba i počinje jako pucati.
• Neugodan miris. Mnogi se pacijenti žale na neugodan miris zahvaćene kože, osobito s mikozom stopala.

Ako se pojave takvi znakovi, potrebno je što prije posjetiti dermatologa i provesti potpunu dijagnozu kako bi se utvrdilo koja je vrsta mikoze zahvatila kožu.

Metode dijagnosticiranja mikoza

Kada se pacijenti obrate dermatologu s karakterističnim znakovima gljivičnih lezija kože, najčešće je primarni vanjski pregled dovoljan da liječnik postavi dijagnozu. Pitanje je samo koja je vrsta mikoze zahvatila kožu.

Ove informacije su neophodne za određivanje daljnje strategije liječenja. Za dijagnosticiranje mikoze mogu se koristiti sljedeće metode:

• Ispitivanje Woodovom svjetiljkom. Poseban spektar ultraljubičastog svjetla omogućuje određivanje prisutnosti gljivičnih infekcija. Ova metoda je vrlo jednostavna i pristupačna, uz njegovu pomoć ne samo da možete postaviti dijagnozu, već i pratiti napredak liječenja. Ali ne dopušta nam da odredimo vrstu mikoze.
• Mikroskopija. Jedna od najjednostavnijih i najčešćih metoda za dijagnosticiranje mikoze je ispitivanje strugotina tkiva zahvaćenih gljivicama pod mikroskopom. Da biste to učinili, stavlja se na predmetno staklo. Postoje dvije vrste pregleda struganjem: pomoću sredstava za bojenje i pomoću sredstava za posvjetljivanje.
• Bakteriološka kultura. Jedna od najpreciznijih dijagnostičkih metoda je inokulacija spremnika hranjivim medijima. Na temelju izgleda i karakteristika naraslih kolonija gljivica liječnik može odrediti vrstu uzročnika. Nedostatak ove metode je dugotrajnost, uzgoj kolonije može trajati 2-3 tjedna. Osim toga, rezultate je moguće dobiti samo u polovici slučajeva.
• PCR dijagnostika. Ovo je jedna od najtočnijih i najsuvremenijih dijagnostičkih metoda, ali određivanje vrste mikoze može zahtijevati nekoliko testova, što zahtijeva određene troškove.

Važno je napomenuti da je dijagnosticiranje mikoze neophodno za određivanje najučinkovitije metode liječenja ove bolesti. A ako nije moguće odmah posjetiti stručnjaka, možete koristiti uslugu koju pruža naša klinika i

Prvi termin

Na imenovanju, mikolog provodi pregled i također propisuje sveobuhvatan pregled.

Laboratorijska dijagnostika

Najučinkovitije metode za dijagnosticiranje mikoza kože su različiti laboratorijski testovi koji mogu identificirati uzročnika i pomoći u odabiru režima liječenja. Da bi se identificirao uzročnik mikoze, propisani su sljedeći laboratorijski testovi:

• histološka analiza;
• bakteriološka kultura;
• imunološka istraživanja;
• PCR dijagnostika;
• kulturno ispitivanje;
• mikrobiološka istraživanja.

Mikrobiološka dijagnostika pomaže u otkrivanju gljivice i određivanju njezinog roda i vrste.

Mikrobiološka dijagnostika najčešća je i najjednostavnija metoda otkrivanja mikoza u krvi i koži. Da biste utvrdili točnu dijagnozu, trebali biste znati kako pravilno prikupiti materijal koji je potreban za studiju. Zahvaćenu dlaku potrebno je sakupiti pincetom. Ako je koža inficirana, potrebno je ostrugati kožu s oštećenog područja za mikroskopiranje. Sav prikupljeni materijal se stavi u 30% otopinu kalijevog hidroksida, a zatim na predmetno staklo. Mikrobiološkom dijagnostikom može se točno utvrditi gdje se gljivica nalazi (unutar ili izvan dlake, kože) i njezinu veličinu.

Kako bi se spriječila pogrešna dijagnoza mikoze, potrebno je ispravno i kompetentno prikupiti materijal za mikrobiološki pregled.

U medicini postoje sljedeće mikrobiološke dijagnostičke metode:

• Mikroskopiranje nativnim ili neobojenim preparatima. Da bi se to postiglo, materijal se bistri pomoću 10-30% otopine kalijevog ili natrijevog hidroksida. Zatim se obrađeni materijal stavlja na laboratorijsko staklo u koje je prethodno nakapano malo glicerina. Gornji dio je prekriven staklenom pločom i provodi se analiza.
• Mikroskopiranje obojenih preparata provodi se na nekoliko načina koji identificiraju bakterije, razlikuju različite bakterije i identificiraju različite gljivice.

Bakteriološka kultura

Bakteriološka kultura jedna je od najučinkovitijih metoda dijagnostike.

Prikupljanje bakteriološke kulture na hranjivom mediju točan je način dijagnosticiranja mikoze. Uzimajući u obzir izgled i karakteristike uzgojene gljivične kolonije, dermatolog određuje vrstu patogena koji je izazvao mikozu. Jedina mana istraživanja je da je potrebno puno vremena za uzgoj kolonije. U prosjeku je potrebno oko 3 tjedna da se otkrije soj patogena. U nekim slučajevima metoda ne donosi očekivane rezultate.

PCR dijagnostika

Dijagnostička metoda PCR uključuje identifikaciju uzročnika mikoze pomoću lančane reakcije polimeraze. Tijekom ispitivanja povećava se osjetljivost hibridizacije, što povećava sadržaj virusne DNA u ispitivanom materijalu. Ova metoda pregleda je nova i zahtijeva nekoliko testova od pacijenta. Vjeruje se da je ova vrsta dijagnoze prilično skupa, ali daje točne rezultate.

Ispitivanje kulture

Mjere kulturološke dijagnostike preporučuju se u završnoj fazi dijagnoze. Metoda se sastoji u dobivanju kulture gljivice, koja se zatim šalje na ispitivanje pomoću mikroskopa. Dobiveni materijal stavlja se na umjetno stvorenu hranjivu podlogu i utvrđuje se vrsta patogena, izgled i veličina. Nakon čega je indiciran poseban tretman, koji je usmjeren na borbu protiv određene vrste patogena mikoze.

Za dijagnosticiranje mikoza mogu se koristiti mikroskopske, mikološke (kulturalne), alergijske, serološke, biološke i histološke metode istraživanja. Ovisno o patogenezi, materijal za istraživanje može biti gnoj, sputum, zahvaćena kosa, nokti, ljuskice kože, ubodi koštane srži, limfni čvorovi, unutarnji organi, krv, žuč, izmet, biopsije tkiva itd.

Mikroskopski pregled uključuje mikroskopiranje nativnih (nebojanih) i obojenih razmaza. Za pripremu nativnih pripravaka kosa, strugotine kože i nokti bistre se u 10,30% otopinama KOH ili NaOH. Alkalijski tretirani materijal stavi se na predmetno stakalce u kapljicu glicerina, pokrije pokrovnim stakalcem i mikroskopira (može se koristiti fazno-kontrastna mikroskopija), što omogućuje proučavanje strukture gljive i položaja spora. , no konačan zaključak o vrsti gljive može se donijeti tek nakon proučavanja kulture.

Za bojenje razmaza najčešće se koriste metode po Gramu, Ziehlu, Nielsenu i Romanovsky-Giemsa. Metode Sabourauda, ​​Adamsona i drugih također se koriste za bojenje dermatofita.

Kulturalna (mikološka) istraživanja provode se kako bi se izolirala čista kultura gljive i identificirala. Koristite čvrste i tekuće hranjive podloge (Sabouraud, wort agar, Chapek itd.). Inkubacija u termostatu (22,28ºS) je duga (3,4 tjedna). Čista kultura gljive identificira se skupom karakteristika: oblikom kolonija, njihovom bojom, konzistencijom, mikroskopskom slikom (priroda micelija, položaj spora, konidiofora) i drugim karakteristikama Serološke reakcije za dijagnozu gljivičnih bolesti provode se gljivičnim antigenima prema općeprihvaćenim metodama, kao i za dijagnostiku drugih zaraznih bolesti (RA, RP, RSK, RNGA, RIF i dr.).

Alergotestovi se mogu provoditi prema općeprihvaćenim metodama intradermalnim ubrizgavanjem odgovarajućih alergena (polisaharidnih i proteinskih frakcija iz stanica ili staničnih membrana, suspenzija stanica ubijenih gljivica, filtrati kulture). Za identifikaciju GNT-a može se koristiti test degranulacije tkivnih i serumskih bazofila, a za detekciju GNT-a reakcija inhibicije migracije fagocita i blast transformacije limfocita.

Biološka istraživanja provode se na laboratorijskim modelima (miševi, štakori, zamorci, kunići, psi, mačke). Biološki model mikoze koristi se za utvrđivanje patogenosti uzročnika, izolaciju čiste kulture i proučavanje novih antimikotika. Histološki pregled omogućuje otkrivanje gljivica u tkivima, proučavanje njegove morfologije i obilježja patološkog procesa uzrokovanog njime u tijelu.