डिप्थीरिया का प्रेरक एजेंट (कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया)। कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया (कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया)

डिप्थीरिया का प्रेरक एजेंट जीनस कोरिनेबैक्टीरियम (लैटिन कोरिना से - गदा, डिप्थीरा - फिल्म) से संबंधित है। बैक्टीरिया के सिरों पर क्लब के आकार की मोटी परतें होती हैं। इस जीनस में मनुष्यों के लिए रोगजनक डिप्थीरिया बेसिली और गैर-रोगजनक प्रजातियां शामिल हैं - झूठी डिप्थीरिया बेसिली और श्लेष्म झिल्ली और त्वचा पर पाए जाने वाले डिप्थीरॉइड्स।

डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट - कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया - की खोज टी. क्लेब्स (1883) द्वारा की गई और एफ. लेफ़लर (1884) द्वारा शुद्ध रूप में अलग किया गया।

आकृति विज्ञान. डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट थोड़े घुमावदार, पतली छड़ें, 3-6 × 0.3-0.5 माइक्रोन आकार के होते हैं, जिनके सिरे मोटे होते हैं। इन गाढ़ेपन में वॉलुटिन अनाज (बाबेश-अर्नस्ट अनाज) होते हैं। डिप्थीरिया बैक्टीरिया गतिहीन होते हैं, उनमें बीजाणु और कैप्सूल नहीं होते हैं। ग्राम पॉजिटिव। वे बुनियादी एनिलिन रंगों के साथ अच्छी तरह से दागते हैं, जबकि वोल्टिन अनाज अधिक तीव्रता से दागते हैं। रंग भरने के लिए आमतौर पर क्षारीय मेथिलीन नीला या क्रिस्टल वायलेट का उपयोग किया जाता है। डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरिया की एक विशेषता उनकी बहुरूपता है; एक ही संस्कृति में विभिन्न आकृतियों और आकारों की छड़ें होती हैं: घुमावदार, सीधी, लंबी, छोटी, मोटी, कभी-कभी कोकोबैक्टीरिया। स्मीयरों में बैक्टीरिया का स्थान विशेषता है - वे आमतौर पर एक तीव्र या अधिक कोण पर जोड़े में, फैली हुई उंगलियों आदि के रूप में व्यवस्थित होते हैं। स्मीयरों में स्थान और वॉलुटिन अनाज की उपस्थिति सूक्ष्म परीक्षण के दौरान एक विभेदक निदान संकेत है। जीनस कोरिनेबैक्टीरिया के गैर-रोगजनक प्रतिनिधि - झूठी डिप्थीरिया बेसिली और डिप्थीरियोड्स अक्सर एक पलिसडे के रूप में स्थित होते हैं, उनमें कोई वॉलुटिन अनाज नहीं हो सकता है या एक छोर पर हो सकता है (चित्र 4 देखें)।

खेती. कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया ऐच्छिक अवायवीय जीव हैं। 35-37 डिग्री सेल्सियस, पीएच 7.4-7.8 के तापमान पर बढ़ें। वे पारंपरिक पोषक मीडिया पर प्रजनन नहीं करते हैं। इन्हें रक्त या सीरम युक्त मीडिया पर विकसित करें।

19वीं शताब्दी के अंत में, फ्रांसीसी वैज्ञानिक ई. रॉक्स ने डिप्थीरिया बैक्टीरिया की खेती के लिए दही वाले गोजातीय या घोड़े के सीरम का उपयोग करने का सुझाव दिया, और एफ. लेफ़लर ने इसमें शोरबा (25%) और 1% ग्लूकोज जोड़ने की सिफारिश की। कोरिनेबैक्टीरिया इन मीडिया पर तेजी से बढ़ते हैं; 14-18 घंटों के भीतर वे गैर-विलय उत्तल क्रीम रंग की कॉलोनियां बनाते हैं (झुकाव वाले माध्यम पर वृद्धि शग्रीन चमड़े जैसा दिखता है)। हालाँकि, इन मीडिया पर डिप्थीरिया बेसिली को झूठी डिप्थीरिया से अलग करना असंभव है।

वर्तमान में, मुख्य बढ़ते मीडिया क्लॉबर्ग का माध्यम (रक्त सीरम और पोटेशियम टेलराइट युक्त), बुनिन का क्विनोसोल माध्यम, टिन्सडल का माध्यम इत्यादि हैं। कोरिनेबैक्टीरिया के सांस्कृतिक और एंजाइमैटिक गुणों के आधार पर, डिप्थीरिया को तीन बायोवर्स में विभाजित किया गया है: ग्रेविस (ग्रेविस), एमआई टीआईएस (मिटिस), इंटरमीडिएट (इंटरमेडिन्स)। बायोवर ग्रेविस आमतौर पर आर-फॉर्म में होता है। क्लॉबर्ग के माध्यम पर, इस बायोवर के बैक्टीरिया 2-3 मिमी की बड़ी कॉलोनियों के रूप में विकसित होते हैं, जिनका रंग भूरा-काला होता है (क्योंकि वे टेल्यूराइट को टेल्यूरियम में कम कर देते हैं), दांतेदार किनारे होते हैं, जो उन्हें रोसेट का रूप देते हैं। जब आप कॉलोनी को लूप से छूते हैं, तो यह उखड़ने लगती है। शोरबा पर, इस बायोवर के बैक्टीरिया एक ढहती हुई फिल्म और एक दानेदार तलछट बनाते हैं।

कोरिनेबैक्टीरिया बायोवर माइटिस (मिटिस) क्लॉबर्ग के माध्यम में काले रंग की छोटी, चिकनी कॉलोनियों (एस-फॉर्म) के रूप में बढ़ता है। शोरबा पर, वे एक समान मैलापन देते हैं।

कोरिनेबैक्टीरिया बायोवेरा इंटरमीडियस (इंटरमेडिन्स) मध्यवर्ती हैं। क्लॉबर्ग के माध्यम पर, इस बायोवर के जीवाणु अक्सर चमकदार, छोटी, काली कॉलोनियों के रूप में विकसित होते हैं (यह बायोवर दुर्लभ है)।

एंजाइमैटिक गुण. डिप्थीरिया बैक्टीरिया के सभी तीन बायोवार्स में एंजाइम सिस्टिनेज होता है, जो सिस्टीन को तोड़कर हाइड्रोजन सल्फाइड बनाता है। इन गुणों का उपयोग इस जीनस के गैर-रोगजनक प्रतिनिधियों से डिप्थीरिया रोगजनकों को अलग करने के लिए किया जाता है (तालिका 49)।

टिप्पणी। + सकारात्मक प्रतिक्रिया (विभाजन); - नकारात्मक प्रतिक्रिया (विभाजित नहीं होती)।

तीनों बायोवार्स के प्रेरक एजेंट एसिड बनाने के लिए ग्लूकोज और माल्टोज़ को तोड़ते हैं। सी. ग्रेविस स्टार्च को तोड़ता है। यह गुण इसे अन्य दो बायोवर्स से अलग करता है। कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया नाइट्रेट को नाइट्राइट में कम करता है, इंडोल नहीं बनाता है, यूरिया को विघटित नहीं करता है।

डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरियम न्यूरोमिनिडेज़, हायल्यूरोनिडेज़ और अन्य रोगजनकता एंजाइम पैदा करता है।

विष निर्माण. डिप्थीरिया रोगजनकों के विषैले उपभेद एक्सोटॉक्सिन का उत्पादन करते हैं। रासायनिक रूप से, यह एक थर्मोलैबाइल प्रोटीन है जिसमें दो अंश होते हैं। फ्रैक्शन बी शरीर के संवेदनशील ऊतकों पर विष को स्थिर करता है। अंश ए विषैले प्रभाव के लिए जिम्मेदार है। इस विष के प्रति संवेदनशील गिनी सूअरों में डिप्थीरिया विष संस्कृतियों की ताकत "इन विवो" में स्थापित की जा सकती है। डिम डिप्थीरिया एक्सोटॉक्सिन - न्यूनतम घातक खुराक, यह जहर की न्यूनतम मात्रा है जो चौथे दिन 250 ग्राम वजन वाले गिनी पिग को मार देती है।

एक्सोटॉक्सिन की उपस्थिति का पता "इन विट्रो" में भी लगाया जा सकता है - घने पोषक माध्यम पर। व्यावहारिक कार्यों में इस विधि का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। डिप्थीरिया एक्सोटॉक्सिन अस्थिर है। यह तापमान, प्रकाश और वायुमंडलीय ऑक्सीजन के प्रभाव में तेजी से नष्ट हो जाता है। टॉक्सिन में फॉर्मेलिन (0.3-0.4%) मिलाने और इसे कई हफ्तों तक 37-38 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर रखने के बाद, यह एनाटॉक्सिन में बदल जाता है, जो अपनी विषाक्तता खो देता है, लेकिन टॉक्सिन के एंटीजेनिक गुणों को बरकरार रखता है। विभिन्न उपभेदों द्वारा उत्पादित विषाक्त पदार्थ एक-दूसरे से भिन्न नहीं होते हैं और इन्हें डिप्थीरिया एंटीटॉक्सिन * से बेअसर किया जा सकता है।

* (अब यह स्थापित हो गया है कि कोरिनेबैक्टीरिया के सभी बायोवर्स विषैले और गैर विषैले हो सकते हैं।)

प्रतिजनी संरचना. डिप्थीरिया बैक्टीरिया में एक सतह थर्मोलैबाइल प्रोटीन एंटीजन और एक प्रकार-विशिष्ट पॉलीसेकेराइड ओ-एंटीजन होता है। इसके अलावा, कोरिनेबैक्टीरिया के बीच 19 फागोवर्स को प्रतिष्ठित किया जाता है, जिन्हें संस्कृतियों की पहचान करते समय ध्यान में रखा जाता है। फागोवर्स की मदद से बीमारी के स्रोत की पहचान की जाती है।

पर्यावरण प्रतिरोध. डिप्थीरिया के प्रेरक कारक अपेक्षाकृत स्थिर होते हैं। 60 डिग्री सेल्सियस का तापमान उन्हें 10-15 मिनट में, 100 डिग्री सेल्सियस - एक मिनट में मार देता है। एक फिल्म में, वे 90 डिग्री सेल्सियस तक हीटिंग का सामना कर सकते हैं। कमरे के तापमान पर दही वाले मट्ठे पर, वे 2 महीने तक, बच्चों के खिलौनों पर - कई दिनों तक रहते हैं। कोरिनेबैक्टीरिया कम तापमान को अच्छी तरह सहन कर लेते हैं। डिप्थीरिया के प्रेरक कारक सूखने के प्रति काफी प्रतिरोधी हैं। कीटाणुनाशक (3% फिनोल घोल, 1% सब्लिमेट घोल, 10% हाइड्रोजन पेरोक्साइड घोल) इन जीवाणुओं को मिनटों में मार देते हैं।

पशु संवेदनशीलता. प्राकृतिक परिस्थितियों में जानवर डिप्थीरिया से बीमार नहीं पड़ते। प्रायोगिक जानवरों में से, गिनी सूअर और खरगोश सबसे अधिक संवेदनशील हैं। इंट्राडर्मल या चमड़े के नीचे के संक्रमण के साथ, वे इंजेक्शन स्थल पर सूजन, एडिमा और नेक्रोसिस के गठन के साथ विषाक्त संक्रमण की एक तस्वीर विकसित करते हैं। अधिवृक्क ग्रंथियों में रक्तस्राव देखा जाता है।

रोग के स्रोत. बीमार लोग और बैक्टीरिया वाहक।

संचरण मार्ग. हवाई, संपर्क-घरेलू (बर्तन, खिलौने, किताबें, तौलिये, आदि के माध्यम से)।

मनुष्यों में रोग: 1) ग्रसनी का डिप्थीरिया; 2) नाक का डिप्थीरिया।

श्वासनली, ब्रांकाई, आंख, कान, योनि का डिप्थीरिया और क्षतिग्रस्त त्वचा का डिप्थीरिया कम आम है।

रोगजनन. प्रवेश द्वार श्वसन पथ और क्षतिग्रस्त त्वचा की श्लेष्मा झिल्ली हैं। एक बार श्लेष्मा झिल्ली पर, डिप्थीरिया रोगज़नक़ परिचय स्थल पर गुणा करते हैं और ऊतक परिगलन का कारण बनते हैं। एक फिल्म बनती है जो अंतर्निहित ऊतकों से निकटता से जुड़ी होती है। म्यूकोसा की सतह पर गंदे भूरे या पीले रंग की सजीले टुकड़े दिखाई देते हैं, जिसमें नष्ट हुए उपकला, फाइब्रिन, ल्यूकोसाइट्स और डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरिया होते हैं। रुई के फाहे या स्पैटुला से फिल्म को हटाते समय, म्यूकोसल सतह से खून बह सकता है।

कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया के प्रजनन की प्रक्रिया में, एक्सोटॉक्सिन नेक्रोटिक क्षेत्रों में जमा हो जाता है, जिससे श्लेष्म झिल्ली और फाइबर की सूजन हो सकती है। श्लेष्म झिल्ली से, एडिमा स्वरयंत्र, ब्रांकाई तक फैल सकती है और श्वासावरोध का कारण बन सकती है। रक्त में प्रसारित होने वाला विष हृदय की मांसपेशियों, अधिवृक्क ग्रंथियों और तंत्रिका ऊतक की कोशिकाओं को चुनिंदा रूप से प्रभावित करता है।

डिप्थीरिया एक विषैला संक्रमण है। प्रक्रिया की गंभीरता तनाव की विषाक्तता की डिग्री और शरीर की सुरक्षा पर निर्भर करती है।

रोग प्रतिरोधक क्षमता. रोग प्रतिरोधक क्षमता एंटीटॉक्सिक और एंटीबैक्टीरियल इम्यूनिटी के कारण होती है। बच्चे बीमार नहीं पड़ते, क्योंकि उनमें निष्क्रिय प्रतिरक्षा होती है, जो माँ से संचरित होती है।

एंटीटॉक्सिक प्रतिरक्षा की उपस्थिति का आकलन स्किक प्रतिक्रिया से किया जाता है। प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के 0.2 मिलीलीटर में निहित 1/40 डीएलएम (गिनी पिग के लिए विष की एक घातक खुराक) को अग्रबाहु में इंट्राडर्मली इंजेक्ट किया जाता है। रक्त में एंटीटॉक्सिन की अनुपस्थिति में, 24-48 घंटों के बाद इंजेक्शन स्थल पर लालिमा और सूजन (व्यास में 2 सेमी तक) दिखाई देती है। एंटीटॉक्सिन की उपस्थिति में, कोई सूजन और लालिमा नहीं होती है (रक्त में मौजूद एंटीटॉक्सिन इंजेक्शन वाले विष को निष्क्रिय कर देता है)।

हस्तांतरित रोग प्रतिरोधक क्षमता छोड़ देता है। हालाँकि, 6-7% मामलों में बार-बार होने वाली बीमारियाँ देखी जाती हैं।

रोकथाम. शीघ्र निदान. इन्सुलेशन। कीटाणुशोधन. टॉक्सिजेनिक डिप्थीरिया बैसिलस के वाहकों की पहचान।

विशिष्ट रोकथामटॉक्सोइड की शुरूआत द्वारा किया गया। यूएसएसआर में, डीटीपी वैक्सीन के साथ बच्चों का अनिवार्य टीकाकरण किया जाता है - यह एक जटिल टीका है जिसमें डिप्थीरिया और टेटनस टॉक्सोइड और मारे गए काली खांसी का निलंबन शामिल है। 5-6 महीने के बच्चों को टीका लगाएं, उसके बाद पुन: टीकाकरण करें। पुन: टीकाकरण के लिए, बिना पर्टुसिस का टीका लगाया जाता है।

विशिष्ट उपचार. एंटीडिप्थीरिया एंटीटॉक्सिक सीरम लगाएं। खुराक और आवृत्ति दर उपस्थित चिकित्सक द्वारा निर्धारित की जाती है, रोगाणुरोधी दवाएं भी दी जाती हैं।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया की आकृति विज्ञान क्या है और कौन से बायोवार उपलब्ध हैं?

2. डिप्थीरिया जीवाणु किस माध्यम पर विकसित होते हैं और वृद्धि की प्रकृति क्या है?

3. किस कार्बोहाइड्रेट से संबंध ग्रेविस बायोवार को अन्य डिप्थीरिया बायोवार से अलग करना संभव बनाता है?

4. संचरण का मार्ग क्या है और रोगी में डिप्थीरिया का प्रेरक एजेंट सबसे अधिक बार कहाँ स्थित होता है?

5. डिप्थीरिया के लिए विशिष्ट रोकथाम और विशिष्ट उपचार क्या हैं?

सूक्ष्मजैविक अनुसंधान

अध्ययन का उद्देश्य: निदान के लिए रोगज़नक़ का अलगाव। महामारी विज्ञान के संकेतों के अनुसार डिप्थीरिया के जीवाणुवाहकों की पहचान। पृथक संस्कृति में एक्सोटॉक्सिन की पहचान।

शोध सामग्री

1. ग्रसनी की वियोज्य श्लेष्मा झिल्ली।

2. नाक के म्यूकोसा का स्राव।

3. आँख की वियोज्य श्लेष्मा झिल्ली।

4. कान से मवाद आना।

5. योनि की श्लेष्मा झिल्ली का स्राव।

6. वियोज्य घाव।

शोध के लिए सामग्री प्रक्रिया के स्थानीयकरण पर निर्भर करती है।

प्रक्रिया के किसी भी स्थानीयकरण के साथ, ग्रसनी और नाक के श्लेष्म झिल्ली की जांच करना अनिवार्य है। सामग्री को एक कपास झाड़ू के साथ एकत्र किया जाता है, जिसके लिए एक धातु के तार का उपयोग किया जाता है, अधिमानतः एल्यूमीनियम, जिसके एक छोर पर कपास ऊन को कसकर लपेटा जाता है, फिर झाड़ू को एक कॉर्क स्टॉपर में लगाया जाता है, एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है और एक में निष्फल किया जाता है 160°C के तापमान पर पाश्चर ओवन में एक घंटे के लिए 1 स्वाब या 112°C के तापमान पर आटोक्लेव में रखें।

टिप्पणियाँ। 1. सामग्री को खाली पेट या खाने के 2 घंटे से पहले और एंटीबायोटिक दवाओं या अन्य जीवाणुरोधी एजेंटों के साथ उपचार के 4 दिन से पहले एकत्र नहीं किया जाता है। 2. यदि सामग्री ग्रसनी और नाक से ली गई है, तो दोनों स्वाब वाली टेस्ट ट्यूबों को अंकित किया जाता है और एक साथ बांध दिया जाता है। फसलें अलग-अलग की जाती हैं और प्रत्येक स्वाब से सामग्री का अध्ययन एक स्वतंत्र कार्य के रूप में किया जाता है। 3 सूखे झाड़ू से एकत्र की गई सामग्री को संग्रह के 2-3 घंटे के भीतर बोया जाना चाहिए। यदि एकत्रित सामग्री को परिवहन करना आवश्यक है, तो स्वाब को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान में ग्लिसरॉल के 5% समाधान के साथ पूर्व-सिक्त किया जाता है।

बुनियादी अनुसंधान विधियाँ

1. सूक्ष्मजैविक।

2. बैक्टीरियोस्कोपिक।

3. जैविक.

अनुसंधान प्रगति

शोध का दूसरा दिन

कपों को थर्मोस्टेट से निकालकर देखा जाता है। माध्यम में अवरोधकों की उपस्थिति के कारण क्लॉबर्ग के माध्यम पर बैक्टीरिया की वृद्धि धीमी हो सकती है। इस मामले में, कपों को अगले 24 घंटों के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है।

शोध का तीसरा दिन

कपों को थर्मोस्टेट से हटा दिया जाता है, एक आवर्धक कांच या स्टीरियोस्कोपिक माइक्रोस्कोप से देखा जाता है। संदिग्ध कालोनियों की उपस्थिति में, उनमें से कुछ को, एक स्टीरियोस्कोपिक माइक्रोस्कोप के नियंत्रण में, 25% सीरम के साथ अगर पर और सिस्टिनेज एंजाइम को निर्धारित करने के लिए पिसो के माध्यम के साथ एक स्तंभ पर अलग किया जाता है। कालोनियों के दूसरे भाग से विषाक्तता परीक्षण किया जाता है।

क्लॉबर्ग के माध्यम से ली गई कालोनियों की सूक्ष्म जांच से, डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरिया अपनी विशिष्टता खो देते हैं: कोई ग्रैन्युलैरिटी नहीं होती है, आकार बदल जाता है, स्थान संरक्षित रहता है। जब उन्हें सीरम के साथ मीडिया पर बोया जाता है, तो डिप्थीरिया रोगजनकों की रूपात्मक विशिष्टता बहाल हो जाती है।

डिप्थीरिया रोगजनकों की पहचान में एंजाइम सिस्टिनेज की उपस्थिति और विषाक्तता के निर्धारण के लिए एक परीक्षण अनिवार्य है। यदि क्लॉबर्ग के माध्यम से उपनिवेशों के एक भाग के साथ किए गए इन प्रयोगों का परिणाम पर्याप्त स्पष्ट या नकारात्मक नहीं है, तो प्रयोग को पृथक शुद्ध संस्कृति का उपयोग करके दोहराया जाता है।

सिस्टिनेज के लिए परीक्षण. अध्ययन के तहत संस्कृति को पिस्सू माध्यम के स्तंभ के केंद्र में एक चुभन के साथ टीका लगाया जाता है। सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, 18-24 घंटों के बाद, इंजेक्शन के साथ कालापन देखा जाता है, और काली छड़ के चारों ओर एक काला बादल बन जाता है; कालापन इस तथ्य के परिणामस्वरूप होता है कि एंजाइम सिस्टिनस सिस्टीन को तोड़ देता है, जो कि पिसु माध्यम का हिस्सा है, और जारी सल्फर लेड एसीटेट के साथ प्रतिक्रिया करता है - ब्लैक लेड सल्फाइट बनता है। डिप्थीरॉइड्स और स्यूडोडिप्थीरिया बेसिली में एंजाइम सिस्टिनेज नहीं होता है, इसलिए, जब वे पिसो के माध्यम पर बढ़ते हैं, तो माध्यम का रंग नहीं बदलता है।

एक्सोटॉक्सिन की परिभाषा. जेल में विसरित अवक्षेपण की विधि द्वारा किया गया। यह विधि एक विष और एक प्रतिविष के बीच परस्पर क्रिया पर आधारित है। आगर के उन क्षेत्रों में जहां ये घटक परस्पर क्रिया करते हैं, गोल रेखाओं के रूप में एक अवक्षेप बनता है।

निर्धारण की विधि: 50 डिग्री सेल्सियस तक पिघलाया और ठंडा किया गया मार्टेन एगर पीएच 7.8 को पेट्री डिश में डाला जाता है (मार्टन एगर पर एक्सोटॉक्सिन का उत्पादन बेहतर होता है)। पारदर्शिता बनाए रखने के लिए डिश में अगर की मात्रा 12-15 मिलीलीटर से अधिक नहीं होनी चाहिए - एक मोटी परत में, वर्षा रेखाएं खराब दिखाई देती हैं। एगर के जमने के बाद, एंटी-डिप्थीरिया एंटीटॉक्सिक सीरम से सिक्त बाँझ फिल्टर पेपर की एक पट्टी लगाई जाती है।

परीक्षण संस्कृति को "सजीले टुकड़े" के साथ बीजित किया जाता है। बुआई लूप से की जाती है। पट्टिकाओं का व्यास 0.8-1.0 सेमी है। कागज की पट्टियों के किनारे से पट्टिकाओं की दूरी 0.5-0.7 सेमी है; एक ज्ञात विषैले तनाव की पट्टिकाओं को परीक्षण संस्कृति की दो पट्टियों के बीच टीका लगाया जाता है। परीक्षण कल्चर को विषैला माना जाता है यदि वर्षा रेखाएँ स्पष्ट हैं और नियंत्रण (विषाक्तता) तनाव की वर्षा रेखाओं के साथ विलीन हो जाती हैं। यदि अवक्षेपण रेखाएँ नियंत्रण तनाव की रेखाओं के साथ प्रतिच्छेद करती हैं या अनुपस्थित हैं, तो पृथक संस्कृति को गैर-विषैला माना जाता है (चित्र 50)।

कागज़ की पट्टियाँ तैयार करना. 1.5 × 8 सेमी आकार की स्ट्रिप्स को फिल्टर पेपर से काटा जाता है, कागज में कई टुकड़ों में लपेटा जाता है और 30 मिनट के लिए 120 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है। प्रयोग स्थापित करने से पहले, एक पट्टी को बाँझ चिमटी से बाहर निकाला जाता है, एक बाँझ पेट्री डिश में रखा जाता है और एंटी-डिप्थीरिया एंटीटॉक्सिक सीरम से सिक्त किया जाता है। सीरम को प्रारंभिक रूप से पतला किया जाता है ताकि 1 मिलीलीटर में 500 एयू (एंटीटॉक्सिक इकाइयां) हों। कागज को 0.25 मिली सीरम (125 एयू) से सिक्त किया जाता है और माध्यम की सतह पर रखा जाता है। फिर फसलें ऊपर बताए अनुसार करें। सभी फसलों को थर्मोस्टेट में रखा जाता है। परिणाम 18-24 और 48 घंटों के बाद दर्ज किए जाते हैं।

शोध का चौथा दिन

फसलों को थर्मोस्टेट से बाहर निकालें, परिणाम को ध्यान में रखें। स्मीयर सीरम के माध्यम से उगाए गए कल्चर से बनाए जाते हैं और लोफ्लर के नीले रंग से रंगे जाते हैं।

आकारिकी में विशेषता वाली छड़ों की स्मीयरों में उपस्थिति, पिस्सू के माध्यम में एक बादल के साथ एक काली छड़ और आगर में वर्षा रेखाएं हमें प्रारंभिक उत्तर देने की अनुमति देती हैं: "डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरिया पाए गए।" शोध जारी है. अगर में अवक्षेपण रेखाओं की अनुपस्थिति या उनकी स्पष्टता की कमी में, विषाक्तता के लिए अध्ययन को एक पृथक शुद्ध संस्कृति के साथ दोहराया जाना चाहिए।

पृथक कल्चर की अंतिम पहचान और रोगज़नक़ के बायोवार के निर्धारण के लिए, ग्लूकोज, सुक्रोज़, स्टार्च और यूरिया शोरबा (यूरेज़ एंजाइम का पता लगाने के लिए) के लिए एक कल्चर बनाया जाता है। मीडिया पर बुआई सामान्य तरीके से की जाती है।

यूरिया के लिए परीक्षण. पृथक संस्कृति को यूरिया और एक संकेतक (क्रेसोल लाल) के साथ शोरबा में डाला जाता है और थर्मोस्टेट में रखा जाता है। पहले से ही 30-40 मिनट के बाद, परिणाम को ध्यान में रखा जा सकता है: जब डिप्थीरिया के असली रोगजनकों को बोया जाता है, तो माध्यम का रंग नहीं बदलता है, क्योंकि उनमें यूरिया नहीं होता है। स्यूडोडिप्थीरिया की छड़ें यूरिया को तोड़ती हैं और संकेतक को बदल देती हैं - माध्यम एक लाल-लाल रंग प्राप्त कर लेता है।

शोध का पांचवा दिन

परिणाम दर्ज किए गए हैं (तालिका 50)।

प्रश्नों पर नियंत्रण रखें

1. डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट की पहचान करने के लिए किस सामग्री की जांच की जाती है?

2. ग्रसनी और नाक से डिप्थीरिया के परीक्षण के लिए सामग्री कैसे एकत्र की जाती है?

3. यदि एकत्रित सामग्री को परिवहन की आवश्यकता हो तो स्वाब के साथ क्या किया जाना चाहिए?

4. क्लॉबर्ग माध्यम पर कालोनियों का अध्ययन करने के लिए किस उपकरण का उपयोग किया जाता है?

5. पृथक संस्कृति की अंतिम पहचान के लिए कौन से अध्ययन किए जाते हैं?

6. कौन सी विधियाँ कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया की विषाक्तता निर्धारित करती हैं?

1. शिक्षक से एक तार और रूई लें और 10 स्वैब तैयार करें, उन्हें कॉर्क स्टॉपर में लगाएं, टेस्ट ट्यूब में डालें और स्टरलाइज़ करें।

ध्यान! स्टरलाइज़ेशन से पहले, जांच लें कि स्वाब पर्याप्त कसकर लपेटा गया है या नहीं।

2. शिक्षक से बाँझ स्वैब लें और ग्रसनी और नाक से एक दूसरे से सामग्री लें (अलग-अलग स्वैब के साथ)।

3. तालिका के अनुसार अध्ययन करें। डिप्थीरिया और कोरिनेबैक्टीरिया के प्रेरक एजेंटों के 49 गुण उनसे संबंधित हैं।

4. विषाक्तता के लिए परीक्षण. संस्कृति के बिना एक लूप के साथ पट्टिकाएं बनाएं।

5. अध्ययन के पाठ्यक्रम और विषाक्तता परीक्षण के सकारात्मक और नकारात्मक परिणामों को रेखांकित करें।

पोषक मीडिया

टेल्यूरियम क्लॉबर्ग माध्यम: पहला मिश्रण - 20 मिली भेड़ या घोड़े के खून और 10 मिली ग्लिसरीन का मिश्रण 1.5 महीने पहले तैयार किया जाता है। मध्यम तैयारी के दिन, दो अन्य मिश्रण तैयार किये जाते हैं; दूसरा मिश्रण - एमपीए पीएच 7.5 के 50 मिलीलीटर को पिघलाया जाता है और 50 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर ठंडा किया जाता है, जिसके बाद पहले मिश्रण के 2.5 मिलीलीटर जोड़े जाते हैं; तीसरा मिश्रण - 17 मिली भेड़ का खून और 33 मिली आसुत जल मिलाएं (मिश्रण बाँझ तैयार किया जाता है), पानी के स्नान में 50 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गरम करें। दूसरे और तीसरे मिश्रण को मिलाएं, 1% पोटेशियम के 4 मिलीलीटर जोड़ें टेल्यूराइट घोल K 2 TeO 3, जल्दी से सब कुछ मिलाएं और कपों में डालें। माध्यम साफ़ है और इसका रंग रेड वाइन जैसा है।

बुधवार पीसा. 90 मिलीलीटर पिघले हुए 2% एमपीए (पीएच 7.6) में 2 मिलीलीटर सिस्टीन घोल (0.1 एन सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल में सिस्टीन का 1% घोल) मिलाएं, अच्छी तरह मिलाएं और 0.1 एन की समान मात्रा डालें। सल्फ्यूरिक एसिड समाधान. माध्यम को 112 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। पिघले और 50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किए गए माध्यम में, लेड एसीटेट के 10% घोल का 1 मिलीलीटर मिलाएं, बहती भाप के साथ दो बार निष्फल करें, मिश्रण करें और 9 मिलीलीटर डालें। सामान्य घोड़ा सीरम. माध्यम को 2 मिलीलीटर की छोटी परीक्षण ट्यूबों में रोगाणुहीन रूप से डाला जाता है। बुआई इंजेक्शन द्वारा की जाती है।

बुधवार बुनिन. सूखे क्विनोसोल माध्यम को 100 मिलीलीटर ठंडे पानी (पीएच 7.6-7.8) में मिलाया जाता है, हिलाया जाता है और धीमी आंच पर गर्म किया जाता है जब तक कि एगर पिघल न जाए (लेबल पर दिए गए नुस्खे के अनुसार)। फिर माध्यम को झाग बनने तक 2-3 मिनट तक उबाला जाता है, जिसके बाद माध्यम को 50°C तक ठंडा किया जाता है और 5-10 मिलीलीटर बाँझ डिफाइब्रिनेटेड रक्त मिलाया जाता है। माध्यम को हिलाया जाता है और पेट्री डिश में डाला जाता है। तैयार माध्यम को 4-10 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 3-4 दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है।

टिन्सडेल बुधवार. 2% पोषक तत्व अगर के 100 मिलीलीटर में, पिघला हुआ और 50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया गया, जोड़ें: 1) 1% सिस्टीन समाधान के 12 मिलीलीटर, 0.1 एन। सल्फ्यूरिक एसिड समाधान; 2) 1% सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल का 12 मिली; 3) 2% पोटैशियम टेल्यूराइट घोल का 1.8 मिली; 4) 2.5% सोडियम हाइपोसल्फाइट घोल का 1.8 मिली, सामान्य घोड़े या गोजातीय सीरम का 20 मिली। प्रत्येक घटक को जोड़ने के बाद, माध्यम को अच्छी तरह मिलाया जाता है। माध्यम वाले कपों को 10°C पर 3-4 दिनों के लिए भंडारित किया जाता है।

प्रश्न 7. स्लाइड्स ग्राम स्टेन के लिए जटिल स्टेनिंग विधियाँ

प्रश्न 8. जीवाणु कोशिका की संरचना

विषय 2: एक्टिनोमाइसेट्स, कवक, स्पाइरोकेट्स, वायरस और प्रोटोजोआ की आकृति विज्ञान।

प्रश्न 2. स्पाइरोकेट्स का वर्गीकरण और आकारिकी: बोरेलिया, ट्रेपोनेमा और लेप्टोस्पाइरा। स्पाइरोकेट्स का वर्गीकरण

स्पाइरोकेट्स की आकृति विज्ञान

प्रश्न 3. रिकेट्सिया का वर्गीकरण और संरचना।

प्रश्न 4. क्लैमाइडिया का वर्गीकरण और संरचना।

प्रश्न 5. माइकोप्लाज्मा का वर्गीकरण और संरचना।

प्रश्न 6. कवकों का वर्गीकरण, उनकी संरचना। अध्ययन के तरीके. मशरूम वर्गीकरण

फंगल अल्ट्रास्ट्रक्चर

प्रश्न 7. विषाणुओं की आकृति विज्ञान

प्रश्न 8. प्रोटोजोआ का वर्गीकरण एवं संरचना। सरलतम का वर्गीकरण:

प्रोटोजोआ की अल्ट्रास्ट्रक्चर

विषय 3: सूक्ष्मजीवों का शरीर क्रिया विज्ञान। एरोबिक बैक्टीरिया की शुद्ध संस्कृतियों का अलगाव।

प्रश्न 1. जीवाणुओं का पोषण

प्रश्न 2. पोषक माध्यम, उनका वर्गीकरण।

प्रश्न 3. नसबंदी की अवधारणा, नसबंदी के तरीके।

प्रश्न 4. जीवाणुओं का श्वसन।

प्रश्न 5. रोगाणुओं के एंजाइम, उनका वर्गीकरण

प्रश्न 6. बैक्टीरिया की खेती और पहचान के सिद्धांत:

प्रश्न 7. तरल और ठोस पोषक माध्यम पर सूक्ष्मजीवों की वृद्धि और प्रजनन। विभाजन। जीवाणु आबादी के विकास के चरण। बैक्टीरिया की वृद्धि और प्रजनन

तरल और ठोस पोषक माध्यम पर जीवाणु वृद्धि के प्रकार

जीवाणु आबादी के विकास का चरण

प्रश्न 8. बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान के चरण:

प्रश्न 9. एरोबिक्स की शुद्ध संस्कृतियों को अलग करने की विधियाँ:

प्रश्न 10. विषाणुओं की खेती

प्रश्न 11. बैक्टीरियोफेज

विषय 4: सूक्ष्मजीवों की पारिस्थितिकी

स्व-प्रशिक्षण के लिए सैद्धांतिक सामग्री

प्रश्न 1. मृदा माइक्रोफ्लोरा और इसके अध्ययन के तरीके।

प्रश्न 2. जल का माइक्रोफ्लोरा और इसके अध्ययन की विधियाँ।

प्रश्न 3. वायु माइक्रोफ्लोरा और इसके अध्ययन के तरीके।

प्रश्न 4. मानव शरीर का प्राकृतिक माइक्रोफ्लोरा, इसका महत्व।

सामान्य माइक्रोफ़्लोरा की संरचना

प्रश्न 5. यूबियोसिस और डिस्बिओसिस।

प्रश्न 6. यूबायोटिक्स।

विषय 5: सूक्ष्मजीवों की आनुवंशिकी.

प्रश्न 1. बैक्टीरिया में आनुवंशिक सामग्री का संगठन।

प्रश्न 2. आनुवंशिकता के एक्स्ट्राक्रोमोसोमल कारक: प्लास्मिड, ट्रांसपोज़न, इज़-सीक्वेंस।

प्रश्न 3. संशोधन. आर-एस-विघटन। उत्परिवर्तन. उत्परिवर्तन। क्षतिपूर्ति।

प्रश्न 4. आनुवंशिक पुनर्संयोजन: संयुग्मन, परिवर्तन, पारगमन।

विषय 6: संक्रमण का सिद्धांत. कीमोथेराप्यूटिक दवाएं. एंटीबायोटिक्स।

प्रश्न 1. संक्रमण. रोगज़नक़ की घटना और संचरण के लिए स्थितियाँ

घटना की स्थितियाँ

ट्रांसमिशन मार्ग:

प्रश्न 2. संक्रमण के रूप और उनकी विशेषताएँ।

प्रश्न 3. एक संक्रामक रोग की अवधि।

प्रश्न 4. जीवाणु विषों के लक्षण।

प्रश्न 5. एंटीबायोटिक्स: वर्गीकरण, उपयोग, एंटीबायोटिक्स लेने पर जटिलताएँ।

प्रश्न 4. एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति सूक्ष्मजीवों की संवेदनशीलता निर्धारित करने की विधियाँ।

प्रश्न 5. कीमोथेराप्यूटिक दवाओं के सबसे महत्वपूर्ण समूह और उनकी क्रिया के तंत्र।

विषय 7: प्रतिरक्षा. रोग प्रतिरोधक क्षमता के प्रकार.

प्रश्न 1. प्रतिरक्षा की अवधारणा. रोग प्रतिरोधक क्षमता के प्रकार एवं रूप.

प्रश्न 2. एंटीजन। एंटीजन के मूल गुण और संरचना।

प्रश्न 3. सूक्ष्मजीवों के प्रतिजन।

प्रश्न 4. एंटीबॉडीज (इम्युनोग्लोबुलिन)।

प्रश्न 5. इम्युनोग्लोबुलिन की संरचना। इम्युनोग्लोबुलिन के गुण।

प्रश्न 6. इम्युनोग्लोबुलिन के वर्ग और प्रकार।

विषय 8: प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएँ, उनका व्यावहारिक महत्व। एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाएं, अवक्षेपण, उनके प्रकार और अनुप्रयोग; हेमोलिसिस और पूरक निर्धारण प्रतिक्रियाएं। इम्यूनोबायोलॉजिकल तैयारी।

प्रश्न 1। एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया और इसके प्रकार

प्रश्न 2. अवक्षेपण अभिक्रिया एवं उसके प्रकार।

प्रश्न 3. हेमोलिसिस प्रतिक्रिया।

प्रश्न 4. पूरक निर्धारण अभिक्रिया.

प्रश्न 5. टीके: वर्गीकरण, अनुप्रयोग।

प्रश्न 6. सीरम और इम्युनोग्लोबुलिन।

भाग 2. निजी सूक्ष्म जीव विज्ञान, विषाणु विज्ञान

विषय 1: ऊपरी श्वसन पथ के जीवाणु संक्रमण का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

सैद्धांतिक प्रशिक्षण के लिए सामग्री

प्रश्न 1. स्टैफिलोकोकी (जीनस स्टैफिलोकोकस)

प्रश्न 2. स्ट्रेप्टोकोकी (जीनस स्ट्रेप्टोकोकस)

विषय 2: तपेदिक, डिप्थीरिया और काली खांसी का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

स्व-प्रशिक्षण के लिए सैद्धांतिक सामग्री

प्रश्न 1. माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस

प्रश्न 2. कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया (जीनस कोरिनेबैक्टीरियम)

प्रश्न 3. बोर्डेटेला पर्टुसिस - काली खांसी का प्रेरक एजेंट

विषय 3: घाव के संक्रमण का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

स्व-प्रशिक्षण के लिए सैद्धांतिक सामग्री

प्रश्न 1. टेटनस का प्रेरक एजेंट क्लोस्ट्रीडियम टेटानी है

प्रश्न 2. गैस गैंग्रीन के प्रेरक एजेंट - क्लोस्ट्रीडियम जीनस के बैक्टीरिया क्लोस्ट्रीडियम के प्रकार जो संक्रमण का कारण बनते हैं: सी.परफिरिंगेंस, सी. नोवी, सी. हिस्टोलिटिकम, सी. सेप्टिकम।

विषय 4: यौन संचारित संक्रमणों का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

स्व-अध्ययन के लिए सैद्धांतिक सामग्री प्रश्न 1. निसेरिया गोनोरिया (गोनोकोकी)

प्रश्न 4. मूत्रजन्य क्लैमाइडिया का प्रेरक एजेंट क्लैमाइडिया ट्रैकोमैटिस है

विषय 5: जीवाणु आंत्र संक्रमण का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

स्व-प्रशिक्षण के लिए सैद्धांतिक सामग्री

प्रश्न 1. एस्चेरिचिया (जीनस एस्चेरिचिया)

प्रश्न 2. साल्मोनेला - जीनस साल्मोनेला

प्रश्न 3. साल्मोनेलोसिस का रोगजनन।

प्रश्न 4. पेचिश के प्रेरक एजेंट शिगेला (जीनस शिगेला) हैं

प्रश्न 5. हैजा का प्रेरक एजेंट विब्रियो कॉलेरी (विब्रियो कॉलेरी) है

प्रश्न 6. बोटुलिज़्म के प्रेरक एजेंट (क्लोस्ट्रीडियम बोटुलिनम)

विषय 6: ज़ूनोटिक संक्रमणों का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

स्व-प्रशिक्षण के लिए सैद्धांतिक सामग्री

प्रश्न 1. ब्रुसेला (जीनस ब्रुसेला) - ब्रुसेलोसिस के प्रेरक एजेंट

प्रश्न 3. येर्सिनिया पेस्टिस - प्लेग का प्रेरक एजेंट

प्रश्न 4. फ़्रांसिसेला (फ़्रांसिसेला टुलारेन्सिस) - टुलारेमिया के प्रेरक एजेंट

विषय 7: श्वसन वायरल संक्रमण का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

स्व-प्रशिक्षण के लिए सैद्धांतिक सामग्री

प्रश्न 1. ऑर्थोमेक्सोवायरस (परिवार ऑर्थोमेक्सोविरिडे) - इन्फ्लूएंजा वायरस

प्रश्न 2. खसरा वायरस (परिवार पैरामाइक्सोविरिडे, जीनस मॉर्बिलीवायरस)

प्रश्न 3. रूबेला वायरस (परिवार टोगाविरिडे)

विषय 8. आंतों के वायरल संक्रमण का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

स्व-प्रशिक्षण के लिए सैद्धांतिक सामग्री

प्रश्न 1. पोलियो वायरस 1, 2, 3

प्रश्न 2. हेपेटाइटिस ए वायरस

मानव हेपेटाइटिस ई वायरस (परिवार कैलिसिविरिडे)

विषय 9. बाहरी आवरण के वायरल संक्रमण का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान।

स्व-प्रशिक्षण के लिए सैद्धांतिक सामग्री

प्रश्न 2. हर्पीसवायरस (परिवार हर्पीसविरिडे) हर्पीसवायरस (परिवार हर्पीसविरिडे) बड़े आवरण वाले डीएनए युक्त वायरस हैं।

प्रश्न 3।

हेपेटाइटिस वायरस सी, सी, ई हेपाडनावायरस (परिवार हेपाडनाविरिडे)

हेपेटाइटिस सी वायरस

हेपेटाइटिस डी वायरस (एचडीवी)

धारा 3. छात्रों के ज्ञान की निगरानी के लिए पद्धतिगत समर्थन

धारा 4. अनुशासन का शैक्षिक और पद्धतिगत समर्थन

प्रश्न 2. कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया (जीनस कोरिनेबैक्टीरियम)

सी. डिप्थीरिया - छड़ के आकार का बैक्टीरिया; कारण डिप्थीरिया (ग्रीक डिप्थीरिया - त्वचा, फिल्म) - एक तीव्र संक्रमण जो ग्रसनी, स्वरयंत्र में फाइब्रिनस सूजन, अन्य अंगों में कम बार, और नशा की घटना की विशेषता है।

रूपात्मक और सांस्कृतिक गुण.

कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया पतली, थोड़ी घुमावदार या सीधी ग्राम-पॉजिटिव छड़ें हैं जो रोमन फाइव के रूप में एक दूसरे से कोण पर व्यवस्थित होती हैं। दानों की उपस्थिति के कारण ये सिरों पर गाढ़े हो जाते हैं। मुद्राकोशिका के एक या दोनों ध्रुवों पर। मुद्रा अनाज में पॉलीफॉस्फेट्स होते हैं, वे सेल साइटोप्लाज्म की तुलना में एनिलिन रंगों को अधिक तीव्रता से समझते हैं और नीले-काले कणिकाओं के रूप में नीसर के अनुसार दाग होने पर आसानी से पहचाने जाते हैं, जबकि बैक्टीरिया के शरीर पीले-हरे रंग में रंगे होते हैं। चने से दाग लगने पर मुद्रा के दानों का पता नहीं चलता।

शुद्ध संस्कृति से कलंक का चित्रण। शुद्ध संस्कृति से नीसर का दाग धब्बा।

लेफ़लर के क्षारीय नीले रंग से सना हुआ

डिप्थीरिया बेसिलस में एसिड प्रतिरोध नहीं होता है, यह गतिहीन होता है, बीजाणु नहीं बनाता है, इसकी संरचना में एक कॉर्ड फैक्टर के साथ एक माइक्रोकैप्सूल शामिल होता है। कोशिका भित्ति की संरचना में गैलेक्टोज, मैनोज, अरेबिनोज, साथ ही गैर-एसिड-प्रतिरोधी माइकोलिक एसिड सहित बड़ी संख्या में लिपिड शामिल हैं।

डिप्थीरिया का प्रेरक एजेंट एक ऐच्छिक अवायवीय, एक हेटरोट्रॉफ़ है, जो जटिल पोषक माध्यम पर 37 डिग्री सेल्सियस पर बढ़ता है: क्लॉटेड रक्त सीरम, टेलुराइट रक्त अगर।

ऐच्छिक मीडिया पर, 8-14 घंटों के बाद, यह एक चिकनी या थोड़ी दानेदार सतह के साथ बिंदीदार, उत्तल पीली-क्रीम कालोनियों का निर्माण करता है। कॉलोनियां विलीन नहीं होती हैं और शग्रीन चमड़े की तरह दिखती हैं।

टेल्यूराइट मीडिया पर, डिप्थीरिया का प्रेरक एजेंट 24-48 घंटों के बाद टेल्यूराइट के धात्विक टेल्यूरियम में कमी के परिणामस्वरूप काले या काले-ग्रे कालोनियों का निर्माण करता है।

डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट में उच्च एंजाइमेटिक गतिविधि होती है। विभेदक निदान सुविधाएँसी. डिप्थीरिया हैं:

सुक्रोज को किण्वित करने और यूरिया को विघटित करने की क्षमता की कमी,

एंजाइम सिस्टिनेज का उत्पादन करने की क्षमता।

डिप्थीरिया का प्रेरक एजेंट सांस्कृतिक और जैव रासायनिक गुणों में सजातीय नहीं है। यूरोप के लिए डब्ल्यूएचओ क्षेत्रीय कार्यालय की सिफारिशों के अनुसार, सी. डिप्थीरिया को 4 बायोवार्स में विभाजित किया गया है: ग्रेविस, माइटिस, इंटरमीडियस, बेल्फ़ैंटी।

टेलुराइट माध्यम पर, बायोवर ग्रेविस केंद्र में उभरी हुई सूखी, अपारदर्शी, बड़ी, सपाट, भूरे-काले कालोनियों का निर्माण करती है। कॉलोनी की परिधि रेडियल धारी और असमान किनारे के साथ हल्की है। ऐसी कॉलोनियाँ डेज़ी फूल के समान होती हैं। बायोवर माइटिस एक चिकने किनारे वाली छोटी, चिकनी, चमकदार, काली, उत्तल कालोनियों का निर्माण करता है, जो हेमोलिसिस के क्षेत्र से घिरी होती हैं। इंटरमीडियस और बेलफ़ैंटी बायोवार्स वास्तव में मिटिस बायोवार्स से संबंधित हैं, क्योंकि वे स्टार्च को विघटित नहीं करते हैं, और यह गुण सी. डिप्थीरिया में सबसे अधिक स्थिर है।

प्रतिजनी संरचना.सी. डिप्थीरिया में ओ-एंटीजन (कोशिका की दीवार में गहराई में स्थित लिपिड और पॉलीसेकेराइड अंश) और के-एंटीजन (सतह थर्मोलैबाइल प्रोटीन) होते हैं। O एंटीजन क्रॉस-प्रजाति है। K-एंटीजन के आधार पर, लगभग 58 सेरोवर प्रतिष्ठित हैं।

रोगजनकता कारक.सी. डिप्थीरिया के मुख्य रोगजनकता कारक हैं सतह संरचनाएं, एंजाइम और विषाक्त पदार्थ.

सतही संरचनाएँ (पिया, माइक्रोकैप्सूल घटक: कॉर्ड फैक्टर, के-एंटीजन, माइकोलिक एसिड) एक प्रोटीन और लिपिड प्रकृति है, प्रवेश द्वार के स्थल पर रोगाणुओं के आसंजन को बढ़ावा देता है, बैक्टीरिया के फागोसाइटोसिस को रोकता है, मैक्रोऑर्गेनिज्म की कोशिकाओं पर विषाक्त प्रभाव डालता है और माइटोकॉन्ड्रिया को नष्ट करता है।

रोगजनकता के एंजाइम: न्यूरोमिनिडेज़, हायल्यूरोनिडेज़, हेमोलिसिन, डर्मोनेक्रोटॉक्सिन. न्यूरामिनिडेज़बलगम ग्लाइकोप्रोटीन और कोशिका सतहों से एन-एसिटाइलन्यूरैमिनिक एसिड को साफ़ करता है, lyaseइसे पाइरूवेट और एन-एसिटाइलमैनोसामाइन में विभाजित करता है, और पाइरूवेटबैक्टीरिया के विकास को उत्तेजित करता है। क्रिया के परिणाम स्वरूप hyaluronidaseरक्त वाहिकाओं की पारगम्यता बढ़ जाती है और प्लाज्मा उनकी सीमा से अधिक निकल जाता है, जिससे आसपास के ऊतकों में सूजन आ जाती है। डर्मोनेक्रोटॉक्सिनरोगज़नक़ के स्थल पर कोशिका परिगलन का कारण बनता है। प्लाज्मा फाइब्रिनोजेन जो वाहिकाओं की सीमा से परे चला गया है, शरीर की नेक्रोटिक कोशिकाओं के थ्रोम्बोकिनेज के साथ संपर्क करता है और फाइब्रिन में बदल जाता है, जो डिप्थीरिया सूजन का सार है। डिप्थीरिया फिल्म के अंदर, सी. डिप्थीरिया को प्रतिरक्षा प्रणाली प्रभावकों और एंटीबायोटिक दवाओं से सुरक्षा मिलती है, गुणा करके, वे बड़ी संख्या में बनते हैं रोगजन्यता का मुख्य कारक -डिप्थीरिया हिस्टोटॉक्सिन।

डिप्थीरिया हिस्टोटॉक्सिन रक्त की सबसे अधिक आपूर्ति वाले अंगों में प्रोटीन संश्लेषण पर इसका अवरुद्ध प्रभाव पड़ता है: हृदय प्रणाली, मायोकार्डियम, तंत्रिका तंत्र, गुर्दे और अधिवृक्क ग्रंथियां।

महामारी विज्ञान।प्राकृतिक परिस्थितियों में, केवल वही व्यक्ति डिप्थीरिया से पीड़ित होता है जिसमें रोगज़नक़ और एंटीटॉक्सिक प्रतिरक्षा का प्रतिरोध नहीं होता है। यह बीमारी सर्वव्यापी है. मरीजों की सबसे ज्यादा संख्या सितंबर, अक्टूबर और नवंबर के दूसरे पखवाड़े में देखी जाती है। सबसे अधिक संवेदनशील प्रीस्कूल और प्राइमरी स्कूल उम्र के बच्चे हैं। वयस्कों में, उच्च जोखिम वाले समूह में सार्वजनिक खानपान और व्यापार, स्कूल, प्रीस्कूल और चिकित्सा संस्थानों के कर्मचारी शामिल हैं।

सी. डिप्थीरिया पर्यावरणीय कारकों के प्रति प्रतिरोधी है: बर्तनों या खिलौनों से चिपकी लार की बूंदों में, दरवाज़े के हैंडल पर, वे 15 दिनों तक, पर्यावरणीय वस्तुओं पर - 5.5 महीने तक बने रह सकते हैं, और दूध में गुणा कर सकते हैं। उबालते समय, सी. डिप्थीरिया 1 मिनट के भीतर, 10% हाइड्रोजन पेरोक्साइड घोल में - 3 मिनट के बाद, 5% कार्बोलिक एसिड घोल और 50-60% अल्कोहल में - 1 मिनट के बाद मर जाते हैं।

डिप्थीरिया हिस्टोटॉक्सिन बहुत अस्थिर है और प्रकाश, गर्मी और ऑक्सीकरण से तेजी से नष्ट हो जाता है।

रोगजनन.

संक्रमण का स्रोतहैं:

1. विषैले उपभेदों के वाहक - वे वाहक जिनमें रोग की नैदानिक ​​अभिव्यक्तियाँ नहीं होती हैं, विशेष रूप से खतरनाक होते हैं, क्योंकि उनमें विषरोधी प्रतिरक्षा होती है।

2. रोगी: रोगियों में, ऊपरी श्वसन पथ में प्रक्रिया के स्थानीयकरण वाले व्यक्तियों का सबसे अधिक महत्व है। बीमारी की पूरी अवधि के दौरान रोगी महामारी विज्ञान की दृष्टि से खतरनाक होता है, यहां तक ​​कि ठीक होने की अवधि के दौरान भी वह पर्यावरण में विषाक्त पदार्थ छोड़ता है।

मुख्य संक्रमण तंत्र एरोसोल है. ट्रांसमिशन मार्ग:

अग्रणी भूमिका हवाई जहाज की है,

कभी-कभी हवा-धूल, संपर्क-घरेलू, और आहार (दूध के माध्यम से) संचरण मार्गों से भी किया जा सकता है।

प्रवेश द्वारसंक्रमण में ऑरोफरीनक्स (पैलेटिन टॉन्सिल और आसपास के ऊतक), नाक, स्वरयंत्र, श्वासनली, साथ ही आंखों और जननांग अंगों की श्लेष्मा झिल्ली, क्षतिग्रस्त त्वचा, घाव या जली हुई सतह, ठीक न हुए नाभि घाव की श्लेष्मा झिल्ली शामिल हैं।

अत्यन्त साधारण डिप्थीरिया ग्रसनी ( 90-95%). ऊष्मायन अवधि 2 से 10 दिनों तक रहती है। डिप्थीरिया का रोगजनन है विष संक्रमणजब सूक्ष्म जीव संक्रमण के प्रवेश द्वार पर रहता है, और सभी नैदानिक ​​अभिव्यक्तियाँ एक्सोटॉक्सिन की क्रिया से जुड़ी हैं।

संक्रामक प्रक्रिया का प्रारंभिक चरण प्रवेश द्वार के स्थान पर सूक्ष्म जीव का चिपकना है। वहां प्रजनन करते हुए, सूक्ष्म जीव जी जारी करता है आइसोटॉक्सिन, जिसका ऊतक कोशिकाओं पर स्थानीय प्रभाव पड़ता है, और रक्तप्रवाह में भी प्रवेश करता है, जिससे टॉक्सिनेमिया होता है।

प्रवेश द्वार के क्षेत्र में, एक भड़काऊ प्रतिक्रिया विकसित होती है, जो उपकला कोशिकाओं और एडिमा के परिगलन के साथ होती है, एक भूरे या पीले रंग की टिंट के साथ एक सफेद पट्टिका बनती है, जिसमें बड़ी संख्या में रोगाणु होते हैं जो विष पैदा करते हैं।

डिप्थीरिया की पहचान है रेशेदार फिल्म:

यदि श्लेष्मा झिल्ली बन जाती है एकल परत उपकला(स्वरयंत्र, श्वासनली, ब्रांकाई), होता है लोबार की सूजन, यहां फिल्म सतही रूप से स्थित है और आसानी से अंतर्निहित ऊतकों से अलग हो जाती है।

यदि श्लेष्मा झिल्ली बन जाती है स्तरीकृत उपकला(ऑरोफरीनक्स, एपिग्लॉटिस, वोकल कॉर्ड) होता है डिप्थीरियाजब सभी कोशिकाएं एक-दूसरे से और अंतर्निहित संयोजी ऊतक आधार से मजबूती से जुड़ी होती हैं। इस मामले में फ़ाइब्रिनस फिल्म को अंतर्निहित ऊतकों से कसकर जोड़ा जाता है और इसे स्वैब से नहीं हटाया जाता है। जब आप ऐसा करने की कोशिश करते हैं, तो श्लेष्मा झिल्ली से खून बहने लगता है।

रोग प्रतिरोधक क्षमता।बीमारी के बाद, एक स्थिर और तीव्र ह्यूमरल एंटीटॉक्सिक प्रतिरक्षा बनती है। टीकाकरण के बाद प्रतिरक्षा की अवधि 3-5 वर्ष है।

सूक्ष्मजैविक निदान.

शोध सामग्रीएक रेशेदार फिल्म है, गले या नाक से निकलने वाला बलगम।

सामग्री का संग्रह रोगी के संपर्क के क्षण से 3-4 घंटे के भीतर (12 घंटे से अधिक नहीं) किया जाना चाहिए। सामग्री लेने के लिए, सूखे कपास झाड़ू का उपयोग किया जाता है, यदि टीकाकरण 2-3 घंटों के भीतर किया जाता है, तो सामग्री को परिवहन करते समय, झाड़ू को ग्लिसरीन के 5% समाधान के साथ सिक्त किया जाता है।

निदान के तरीके:

मुख्य निदान पद्धति है जीवाणुविज्ञानी. 48 घंटों के बाद बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशाला को विश्लेषण में सी. डिप्थीरिया की उपस्थिति या अनुपस्थिति के बारे में उत्तर देना चाहिए।

सामग्री को पोषक माध्यम पर बोया जाता है। संदिग्ध कालोनियों का चयन किया जाता है और पृथक संस्कृति की पहचान की जाती है:

सिस्टिनेज (पिसौक्स परीक्षण) की उपस्थिति के अनुसार: परीक्षण संस्कृति को सिस्टीन के साथ पोषक तत्व अगर के एक स्तंभ में टीका लगाया जाता है। संस्कृतियों को 24 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। सी. डिप्थीरिया के कारण इंजेक्शन के दौरान लेड सल्फाइड के निर्माण के कारण माध्यम काला हो जाता है।

यूरिया की उपस्थिति (सैक्स टेस्ट) के अनुसार: यूरिया का एक अल्कोहल घोल और एक संकेतक घोल - फिनोल रेड तैयार किया जाता है, जिसे उपयोग से पहले 1:9 के अनुपात में मिलाया जाता है और एग्लूटिनेशन ट्यूबों में डाला जाता है। अध्ययन किए गए बैक्टीरिया को एक लूप में डाला जाता है और साफ-सुथरी दीवार के साथ रगड़ा जाता है। सकारात्मक मामले में, 37 डिग्री सेल्सियस पर 20-30 मिनट के ऊष्मायन के बाद, यूरिया द्वारा यूरिया के टूटने के परिणामस्वरूप माध्यम लाल रंग प्राप्त कर लेता है।

सी. डिप्थीरिया की विष उत्पन्न करने की क्षमता (अगर अवक्षेपण परीक्षण द्वारा निर्धारित)। ऐसा करने के लिए, 15-20% हॉर्स सीरम, 0.3% माल्टोज़ और 0.03% सिस्टीन युक्त पोषक तत्व अगर के साथ एक पेट्री डिश में, 5000 एयू/एमएल युक्त एंटीटॉक्सिक डिप्थीरिया सीरम में भिगोए गए फिल्टर पेपर की एक पट्टी रखी जाती है। कप को 37 0 C पर 30 मिनट के लिए सुखाया जाता है और परीक्षण स्ट्रेन को कागज के किनारे से 0.6-0.8 सेमी की दूरी पर प्लाक से टीका लगाया जाता है। टीकाकरण को 24 घंटों के लिए 37 0 C पर ऊष्मायन किया जाता है। एक सकारात्मक मामले में, माध्यम में सफेद रेखाओं के रूप में एक अवक्षेप बनता है - एंटीटॉक्सिन के साथ विष के जंक्शन पर "एंटीना"।

डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट की विषाक्तता को निर्धारित करने के लिए इसका उपयोग किया जा सकता है जैवपरख।गिनी पिग को टेस्ट कल्चर के साथ अंतःत्वचीय या चमड़े के नीचे इंजेक्ट किया जाता है। टॉक्सिजेनिक कल्चर जानवरों को 3-5 दिनों के भीतर मार देते हैं, शव परीक्षण में हाइपरेमिक अधिवृक्क ग्रंथियां पाई जाती हैं, और इंट्राडर्मल संक्रमण के मामले में त्वचा परिगलन पाया जाता है।

के लिए बैक्टीरियोस्कोपिक परीक्षा(एक स्वतंत्र निदान पद्धति के रूप में, रोगज़नक़ की बहुरूपता के कारण इसका उपयोग शायद ही कभी किया जाता है, लेकिन डॉक्टर के अनुरोध पर इसे किया जा सकता है) कई ग्लासों पर सामग्री से स्मीयर तैयार किए जाते हैं, एक स्मीयर को ग्राम के अनुसार रंगा जाता है, दूसरे को नीसर के अनुसार, तीसरे को ल्यूमिनसेंट माइक्रोस्कोपी के लिए फ्लोरोक्रोम - कोरिफोस्फीन से उपचारित किया जाता है।

एंटीटॉक्सिक प्रतिरक्षा की उपस्थिति का आकलन स्किक प्रतिक्रिया से किया जाता है - एंटीटॉक्सिन के साथ विष को निष्क्रिय करने की प्रतिक्रिया। डिप्थीरिया विष का 1/40 डीएलएम अग्रबाहु की त्वचा में इंजेक्ट किया जाता है। इंजेक्शन स्थल पर लालिमा और सूजन रक्त में एंटीटॉक्सिन की अनुपस्थिति को इंगित करती है। एक नकारात्मक स्किक परीक्षण एंटीटॉक्सिन की उपस्थिति को इंगित करता है।

बैक्टीरिया कल्चर और रक्त सीरम दोनों में डिप्थीरिया विष का त्वरित पता लगाने के लिए, आवेदन करें: एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम, आरआईए और एलिसा के साथ आरएनजीए।प्रयुक्त आणविक आनुवंशिक अनुसंधान विधियों में से पीसीआर.

डिप्थीरिया के विशिष्ट उपचार की तैयारी।

डिप्थीरिया हिस्टोटॉक्सिन को बेअसर करने के लिए, विशिष्ट एंटी-डिप्थीरिया इक्वाइन शुद्ध केंद्रित सीरम,जो डिप्थीरिया एंटीटॉक्सिन के साथ घोड़ों के हाइपरइम्यूनाइजेशन द्वारा प्राप्त किया जाता है।

चिकित्सकीय रूप से डिप्थीरिया का संदेह होने पर एंटी-डिप्थीरिया सीरम के साथ विशिष्ट उपचार तुरंत शुरू कर दिया जाता है।सीरम के प्रशासन का इष्टतम तरीका चुनना आवश्यक है, क्योंकि एंटीटॉक्सिन केवल उस विष को बेअसर कर सकता है जो ऊतकों से जुड़ा नहीं है। एनाफिलेक्टिक शॉक के विकास को रोकने के लिए, सीरम को ए.एम. के अनुसार आंशिक रूप से प्रशासित किया जाता है। बेज्रेडके. बीमारी के तीसरे दिन के बाद सीरम का परिचय अव्यावहारिक है।

बनाया गया मानव डिप्थीरिया इम्युनोग्लोबुलिनअंतःशिरा प्रशासन के लिए. इसके प्रयोग से कम दुष्प्रभाव होते हैं।

प्रवेश द्वार के स्थल पर सी. डिप्थीरिया के प्रजनन को दबाने के लिए एंटीबायोटिक्स अनिवार्य हैं। पसंद की दवाएं पेनिसिलिन या एरिथ्रोमाइसिन, या अन्य β-लैक्टम और मैक्रोलाइड्स हैं।

डिप्थीरिया की विशिष्ट रोकथाम के लिए तैयारी।

कृत्रिम सक्रिय एंटीटॉक्सिक प्रतिरक्षा बनाने के लिए आवेदन करें डिप्थीरिया टॉक्सोइड।शुद्ध और सांद्रित दवा संबंधित टीकों का हिस्सा है:

1. अधिशोषित पर्टुसिस-डिप्थीरिया-टेटनस टीका (डीटीपी टीका),

2. अधिशोषित डिप्थीरिया-टेटनस टॉक्सॉइड (एडीएस-टॉक्सॉयड),

3. एंटीजन की कम सामग्री (एडीएस-एम) के साथ अधिशोषित डिप्थीरिया-टेटनस टॉक्सॉयड,

4. कम एंटीजन सामग्री (एडी-एम) के साथ अधिशोषित डिप्थीरिया टॉक्सोइड।

टीकाकरण कार्यक्रम के अनुसार बच्चों में बुनियादी प्रतिरक्षा का निर्माण होता है। जनसंख्या का केवल 95% टीकाकरण कवरेज ही टीकाकरण की प्रभावशीलता की गारंटी देता है।

अध्ययनित बायोमटेरियल में डिप्थीरिया (सी. डिप्थीरिया) के प्रेरक एजेंट की पहचान करने के लिए सूक्ष्मजीवविज्ञानी अध्ययन।

रूसी पर्यायवाची

बैसिलि लेफ़लर पर बुआई, बीएल पर बुआई, डिप्थीरिया बैसिलस पर बुआई।

अंग्रेजी पर्यायवाची

कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया संस्कृति, डिप्थीरिया संस्कृति।

अनुसंधान विधि

सूक्ष्मजीवविज्ञानी विधि.

अनुसंधान के लिए किस जैव सामग्री का उपयोग किया जा सकता है?

ग्रसनी और नाक से एक धब्बा।

पढ़ाई कैसे करें?

किसी तैयारी की आवश्यकता नहीं.

अध्ययन के बारे में सामान्य जानकारी

कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया (लेफ़लर बेसिली) जीनस कोरिनेबैक्टीरियम के ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया हैं जो डिप्थीरिया का कारण बनते हैं और डिप्थीरिया विष पैदा करने में सक्षम हैं। यह रोग हवाई बूंदों से फैलता है, संक्रमण का स्रोत बीमार लोग या बैक्टीरिया वाहक होते हैं।

ऊष्मायन अवधि औसतन 2-5 दिन है। ऑरोफरीनक्स और श्वसन पथ के श्लेष्म झिल्ली की फाइब्रिनस सूजन स्यूडोमेम्ब्रेन के गठन और सामान्य नशा के लक्षणों के साथ होती है।

डिप्थीरिया के विषैले रूप में हृदय और तंत्रिका तंत्र भी प्रभावित हो सकता है। कुछ मामलों में, लक्षण रहित गाड़ी चलाना संभव है।

"डिप्थीरिया" का निदान नैदानिक ​​निष्कर्षों पर आधारित है, पुष्टि के लिए डिप्थीरिया का कल्चर किया जाता है।

अनुसंधान का उपयोग किस लिए किया जाता है?

• डिप्थीरिया के निदान की पुष्टि करने के लिए।
• समान लक्षणों के साथ होने वाली बीमारियों के विभेदक निदान के लिए, जैसे कि विभिन्न मूल के टॉन्सिलिटिस, पैराटोनसिलर फोड़ा, संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, तीव्र लैरींगोट्रैसाइटिस, एपिग्लोटाइटिस, ब्रोन्कियल अस्थमा।
• चल रही एंटीबायोटिक चिकित्सा की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करना।

अध्ययन कब निर्धारित है?

• यदि डिप्थीरिया का संदेह हो।
• जब यह ज्ञात हो कि रोगी डिप्थीरिया के रोगियों के संपर्क में था।
• एंटीबायोटिक थेरेपी के बाद - एंटीबायोटिक दवाओं का कोर्स खत्म होने के कम से कम 2 सप्ताह बाद।
• कुछ मामलों में, अस्पताल में भर्ती होने से पहले (रोगनिरोधी उद्देश्यों के लिए)।

नतीजों का क्या मतलब है?

संदर्भ मूल्य:कोई विकास नहीं।

डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट की पहचान डिप्थीरिया के निदान की पुष्टि करती है या, यदि रोग के कोई लक्षण नहीं हैं, तो एक जीवाणुवाहक को इंगित करता है। संदिग्ध डिप्थीरिया वाले रोगी में नकारात्मक कल्चर परिणाम के साथ, निदान की पुष्टि तब की जा सकती है जब संपर्क व्यक्तियों में कल्चर परिणाम सकारात्मक हो, यानी डिप्थीरिया प्रेरक एजेंट को अलग कर दिया जाए।

सकारात्मक परिणाम के कारण

• डिप्थीरिया या सी. डिप्थीरिया का स्पर्शोन्मुख संचरण।

नकारात्मक परिणाम के कारण

• कोई डिप्थीरिया नहीं. अपवाद ऐसे मामले हैं जब अध्ययन के समय एंटीबायोटिक उपचार किया गया था।

परिणाम को क्या प्रभावित कर सकता है?

पूर्व एंटीबायोटिक चिकित्सा.

महत्वपूर्ण लेख

"डिप्थीरिया" का निदान रोग की नैदानिक ​​तस्वीर पर आधारित है, इसलिए रोग की प्रयोगशाला पुष्टि प्राप्त होने से पहले उपचार शुरू किया जाना चाहिए। यदि कल्चर सकारात्मक है, तो विषाक्तता के लिए सी. डिप्थीरिया के पृथक स्ट्रेन की जांच की जानी चाहिए।

• एंटीबायोटिक दवाओं के प्रति संवेदनशीलता के निर्धारण के साथ वनस्पतियों पर बुआई

अध्ययन का आदेश कौन देता है?

संक्रमण विशेषज्ञ, चिकित्सक, सामान्य चिकित्सक, बाल रोग विशेषज्ञ, ईएनटी।

साहित्य

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2. एफ्स्ट्रेटियोउ ए. कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया और सी. अल्सरन / ए. एफ्स्ट्रेटियोउ, आर.सी. के कारण होने वाले संक्रमण के निदान के लिए प्रयोगशाला दिशानिर्देश। जॉर्ज // संचारी रोग और सार्वजनिक स्वास्थ्य। - 1999. - वॉल्यूम। 2, संख्या 4. - पी. 250-257.
3. डिप्थीरिया के प्रयोगशाला निदान के लिए वर्तमान दृष्टिकोण / ए. एफ़स्ट्रेटीउ // जे. संक्रमित। डिस. - 2000. - वॉल्यूम। 181 (सप्ल 1)। - पी. एस138-एस145।

लेख की सामग्री

कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया

पहली बार 1983 में ई. क्लेब्स द्वारा वर्णित और 1984 में एफ. लेफ़लर द्वारा अलग किया गया।

आकृति विज्ञान और शरीर विज्ञान

डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरिया का आकार पूरे जीनस की विशेषता है। वे रोमन फाइव के रूप में एक दूसरे से एक कोण पर स्थित हैं। नीसर विधि के अनुसार एसिटिक नीले रंग से धुंधला करके वॉलुटिन अनाज का पता लगाया जाता है, जो साइटोप्लाज्म को प्रभावित किए बिना केवल समावेशन को दाग देता है। डिप्थीरिया बेसिलस एक माइक्रोकैप्सूल से घिरा होता है और इसमें एक पिली होती है। सी. डिप्थीरिया पोषक तत्व सब्सट्रेट पर मांग कर रहे हैं। उन्हें कई अमीनो एसिड, कार्बोहाइड्रेट, खनिज लवण की आवश्यकता होती है। इन्हें आमतौर पर थक्केदार रक्त सीरम और पोटेशियम टेल्यूराइट के साथ रक्त एगर पर संवर्धित किया जाता है। अंतिम माध्यम पर, दो प्रकार की कॉलोनियाँ बनती हैं: ग्रेविस - गहरा भूरा और माइटिस - काला, जो जैव रासायनिक विशेषताओं में एक दूसरे से भिन्न होते हैं।

एंटीजन

सी. डिप्थीरिया में माइक्रोकैप्सूल में एक के-एंटीजन होता है, जो उन्हें सेरोवर्स और कोशिका दीवार के एक समूह-विशिष्ट पॉलीसेकेराइड एंटीजन में विभेदित करने की अनुमति देता है, जो माइकोबैक्टीरिया और नोकार्डिया के साथ क्रॉस-सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं देता है। रोगजनन और रोगजनन. डिप्थीरिया बैक्टीरिया के विषैले कारक पिली और एक माइक्रोकैप्सूल हैं, जिनकी मदद से वे टॉन्सिल के एपिथेलियोसाइट्स से जुड़ते हैं, कम अक्सर स्वरयंत्र, श्वासनली, नाक गुहा, आंख के कंजाक्तिवा और योनी से जुड़ते हैं। फिर उपकला कोशिकाओं का उपनिवेशीकरण होता है, जो एक सूजन प्रक्रिया की शुरुआत के साथ होता है। विषाक्तता हिस्टोटॉक्सिन के स्राव से जुड़ी है, जिसमें दो उपइकाइयाँ होती हैं: एक विषाक्त पॉलीपेप्टाइड और एक परिवहन पॉलीपेप्टाइड जो विषाक्त घटक को लक्षित कोशिकाओं तक पहुंचाने के लिए जिम्मेदार होता है। पहले का गठन जीवाणु जीन द्वारा नियंत्रित होता है, दूसरा - फ़ेज़ के जीन द्वारा जो जीवाणु कोशिका को लाइसोजेनाइज़ करता है। यह इंगित करता है कि केवल सी. डिप्थीरिया की लाइसोजेनिक कोशिकाएं हिस्टोटॉक्सिन का स्राव कर सकती हैं। हिस्टोटॉक्सिन का निर्धारण हृदय, हृदय पैरेन्काइमा, गुर्दे, अधिवृक्क ग्रंथियों और तंत्रिका गैन्ग्लिया की मांसपेशियों की कोशिकाओं की झिल्लियों के रिसेप्टर्स पर होता है। साथ ही, राइबोसोम पर प्रोटीन संश्लेषण अवरुद्ध हो जाता है, जिससे अंततः कोशिका मृत्यु हो जाती है। डिप्थीरिया के साथ, एक नियम के रूप में, स्वरयंत्र की कोशिकाओं में सी. डिप्थीरिया के स्थानीयकरण के कारण कोई बैक्टीरिया और सेप्टीसीमिया नहीं होता है, जहां फाइब्रिनस-नेक्रोटिक सूजन फिल्मों, लिम्फैडेनाइटिस और एडिमा के गठन के साथ विकसित होती है, जिससे श्वासावरोध हो सकता है। स्वरयंत्र के डिप्थीरिया के अलावा, सी. डिप्थीरिया घाव की सतहों और जननांग अंगों के डिप्थीरिया का कारण बनता है। डिप्थीरिया जैसे कोरिनेबैक्टीरिया में निम्नलिखित शामिल हैं: सी. ज़ेरोसिस क्रोनिक नेत्रश्लेष्मलाशोथ का कारण बनता है, सी. अल्सरन्स - डिप्थीरिया जैसी बीमारियों के हल्के रूप, सी. पाइोजेन्स और सी. हेमोलिटिकम - अल्सरेटिव नेक्रोटिक ग्रसनीशोथ, टॉन्सिलिटिस, जिंजिवोस्टोमैटाइटिस। सी. स्यूडोडाइफ्थीरिया त्वचा और श्लेष्मा झिल्ली का एक स्थायी निवासी है।

रोग प्रतिरोधक क्षमता

डिप्थीरिया में संक्रामक पश्चात प्रतिरक्षा की तीव्रता रक्त सीरम में एंटीटॉक्सिन के उच्च स्तर के कारण होती है। डिप्थीरिया के दौरान बनने वाले जीवाणुरोधी एंटीबॉडी - एग्लूटीनिन, प्रीसिपिटिन और अन्य - में सुरक्षात्मक गुण नहीं होते हैं। एंटीटॉक्सिक प्रतिरक्षा की उपस्थिति या अनुपस्थिति का आकलन शिक प्रतिक्रिया द्वारा किया जाता है - एंटीटॉक्सिन द्वारा विष को निष्क्रिय करना। बांह की बांह की त्वचा में V40 DLM डिप्थीरिया विष के प्रवेश के साथ, रक्त में एंटीटॉक्सिन की अनुपस्थिति में लालिमा और सूजन दिखाई देती है। एंटीटॉक्सिन की उपस्थिति में, स्किक परीक्षण नकारात्मक है।

पारिस्थितिकी और महामारी विज्ञान

सी. डिप्थीरिया का निवास स्थान वे लोग हैं जिनके गले में वे स्थानीयकृत होते हैं। बच्चे डिप्थीरिया के प्रति सबसे अधिक संवेदनशील होते हैं। हालाँकि, पिछले 30 वर्षों में, डिप्थीरिया "बड़ा" हो गया है। वयस्कों में, डिप्थीरिया गंभीर होता है और घातक हो सकता है। पर्यावरण में, डिप्थीरिया बैक्टीरिया कई दिनों तक जीवित रहते हैं क्योंकि वे शुष्कन को सहन करते हैं। संक्रमण हवाई बूंदों से होता है और कम बार संपर्क से होता है।

डिप्थीरिया

डिप्थीरिया एक तीव्र, मुख्य रूप से बचपन का संक्रामक रोग है, जो रोगज़नक़ के स्थल पर विशिष्ट रेशेदार सूजन और डिप्थीरिया एक्सोटॉक्सिन के साथ शरीर के गंभीर नशा से प्रकट होता है। इसका प्रेरक एजेंट कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया है, जो जीनस कोरिनेबैक्टीरियम से संबंधित है। इस जीनस में बैक्टीरिया की लगभग 20 और प्रजातियां शामिल हैं जो मनुष्यों, जानवरों और पौधों के लिए रोगजनक हैं। इनमें से, व्यावहारिक चिकित्सा के लिए सबसे महत्वपूर्ण निम्नलिखित हैं: 1. सी. अल्सर - ग्रसनीशोथ, त्वचा पर घाव का कारण बन सकता है, यह स्वस्थ लोगों में, डेयरी उत्पादों और उनके परिवहन के लिए कंटेनरों में भी पाया जाता है, कुछ उपभेद विषैले होते हैं।2. सी. जेइकियम (पूर्व में कोरिनेबैक्टीरियम जेके) - निमोनिया, एंडोकार्टिटिस, पेरिटोनिटिस का कारण बनता है, घावों, त्वचा को संक्रमित करता है।3. सी. सिस्टिटिडिस (पूर्व में कोरिनेबैक्टीरियम समूह डी2) - मूत्र पथ और निमोनिया में पत्थरों के निर्माण की शुरुआत करता है।4। सी. मिनुटिसिमम - एरिथ्रास्मा, फेफड़े के फोड़े, एंडोकार्टिटिस का कारण बनता है।5. सी. हेमोलिटिकम - टॉन्सिलिटिस, सेल्युलाइटिस, मस्तिष्क फोड़े, ऑस्टियोमाइलाइटिस, क्रोनिक डर्मेटाइटिस का कारण बन सकता है।6. सी. ज़ेरोसिस - ज़ेरोसिस (क्रोनिक कंजंक्टिवाइटिस) का प्रेरक एजेंट माना जाता था, अब इसे सैप्रोफाइट्स कहा जाता है।7. सी. स्यूडोडिफ्थेरिटिकम एक सैप्रोफाइट है जो मानव नासोफरीनक्स की श्लेष्मा झिल्ली पर रहता है।

प्रयोगशाला में सामग्री का संग्रहण एवं वितरण

अध्ययन के लिए सामग्री टॉन्सिल, मेहराब, तालु, जीभ, गले और नाक से बलगम, आंख, कान, घाव, योनि और त्वचा के प्रभावित क्षेत्र से कम अक्सर निर्वहन की एक फिल्म है। महामारी विशेषज्ञ के अनुरोध पर, खिलौनों और अन्य वस्तुओं, कुछ खाद्य उत्पादों (दूध, आइसक्रीम) से स्वाब की जांच की जाती है। सामग्री को एटियोट्रोपिक उपचार शुरू होने से पहले खाली पेट या भोजन के 2 घंटे बाद लिया जाना चाहिए। सामग्री लेने के लिए, स्वाब का उपयोग किया जाता है, 5% ग्लिसरॉल समाधान के साथ सूखा या पूर्व-सिक्त किया जाता है, एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है और निष्फल किया जाता है इसके साथ। जांच की गई सामग्री को ऑरोफरीनक्स और नाक से दो अलग-अलग स्वाबों के साथ लिया जाता है, इसे गालों, दांतों और जीभ के श्लेष्म झिल्ली के साथ स्वाब को छुए बिना, घूर्णी आंदोलनों के साथ स्वस्थ और प्रभावित क्षेत्र की सीमा पर ले जाने की कोशिश की जाती है, जो कि है एक स्पैटुला से दबाया. लैरींगोस्कोपी के साथ, एक फिल्म या बलगम सीधे स्वरयंत्र से लिया जाता है। मुंह और नाक से फिल्में और बलगम सभी मामलों में आवश्यक रूप से लिया जाता है, यहां तक ​​कि दुर्लभ स्थानीयकरण (त्वचा, घाव, आंख, कान, योनी) के डिप्थीरिया के साथ भी। फिल्म, ध्यान से दो ग्लास स्लाइड के बीच पीस लें। सामग्री लेने के बाद, स्वाब रखे जाते हैं उन्हीं टेस्ट ट्यूबों में, जिन पर सैंपल लेने का नंबर, तारीख और समय और डॉक्टर का नाम अंकित होता है। सामग्री लेने के 3 घंटे के भीतर उन्हें प्रयोगशाला में पहुंचाया जाना चाहिए। यदि नमूनाकरण योजना रोगी के बिस्तर के पास अधिभोग प्रदान करती है, तो फसलों के साथ परीक्षण ट्यूब और व्यंजन तुरंत प्रयोगशाला में भेजे जाते हैं या 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है और 20-23 घंटों के बाद, ठंड के मौसम में, हीटिंग पैड वाले बैग में वितरित किया जाता है।

बैक्टीरियोस्कोपिक परीक्षा

रोगी की सामग्री की बैक्टीरियोस्कोपिक जांच केवल डॉक्टर के अनुरोध पर और केवल सिमानोव्स्की-प्लॉट-विंसेंट के नेक्रोटिक एनजाइना (फ्यूसीफॉर्म रॉड्स और विंसेंट के स्पाइरोकेट्स की पहचान, जो पारंपरिक खेती के तरीकों से नहीं बढ़ती है) को पहचानने के लिए की जाती है। कई वर्षों तक, लेफ़लर और नीसर के तरीकों के अनुसार दागे गए अनाज वॉलुटिन की सूक्ष्म जांच और पहचान, डिप्थीरिया के प्रयोगशाला निदान और बैक्टीरियोकैरियर का पता लगाने का आधार थी। अब, एंटीबायोटिक दवाओं के प्रभाव में डिप्थीरिया बैक्टीरिया की परिवर्तनशीलता के कारण, परीक्षण सामग्री की प्राथमिक माइक्रोस्कोपी की सिफारिश नहीं की जाती है। स्मीयर को ग्रैम, लोफ्लर और नीसर के अनुसार रंगा जाता है। आप उन्हें एसिटिक एसिड मिथाइल वायलेट, टोलुइडिन ब्लू या बेंथियाज़ोल और थियाज़िन रंगों से रंग सकते हैं। स्मीयरों में डिप्थीरिया बेसिली लैटिन अक्षरों वी, एक्स, वाई के रूप में एक कोण पर स्थित होते हैं, या बिखरे हुए मैचों के समूह के समान क्लस्टर बनाते हैं। वोलुटिन कण, एक नियम के रूप में, माइक्रोबियल कोशिकाओं के ध्रुवों पर स्थित होते हैं। स्यूडो-डिप्थीरिया बैक्टीरिया और डिप्थीरॉइड्स को समानांतर में रखा जाता है ("पलिसडे" के रूप में) और, ज़ाहिर है, उनमें वॉलुटिन के दाने नहीं होते हैं। बबेश-अर्नस्ट अनाज को कोरिफोस्फिन के साथ धुंधला होने पर फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके पता लगाया जा सकता है। जीवाणु कोशिकाओं के पीले-हरे शरीर की पृष्ठभूमि के विरुद्ध दाने नारंगी-लाल रंग प्राप्त कर लेते हैं।

बैक्टीरियोलॉजिकल अनुसंधान

क्लिनिकल सामग्री को रक्त एगर पर टीका लगाया जाता है और रक्त-टेलुराइट एगर (या क्लॉबर्ग II माध्यम) को पेट्री डिश में डाला जाता है। अन्य माइक्रोफ्लोरा का पता लगाने के लिए ब्लड अगर कल्चर आवश्यक है। इसके अलावा, सीडिप्थीरिया के कुछ उपभेद पोटेशियम टेल्यूराइट की क्रिया के प्रति संवेदनशील होते हैं, इसलिए टेल्यूराइट मीडिया पर उनकी वृद्धि को दबाया जा सकता है। डिप्थीरिया बैक्टीरियोकैरियर की पहचान करने के लिए, टीकाकरण केवल रक्त-टेलुराइट अगर पर किया जाता है, क्योंकि इनोकुलम में डिप्थीरिया बेसिली की थोड़ी मात्रा हो सकती है, गैर-चयनात्मक मीडिया पर इसकी वृद्धि अन्य माइक्रोफ्लोरा द्वारा दबा दी जाएगी। इस मामले में, परिवहन माध्यम के उपयोग की भी अनुमति है।

टेल्यूरिन रक्त आगर

2% पिघले और 50 डिग्री सेल्सियस पोषक तत्व अगर, पीएच 7.6 तक ठंडा होने पर 100 मिलीलीटर में, 10-15 मिलीलीटर डिफाइब्रिनेटेड रक्त और 2 मिलीलीटर 2% पोटेशियम टेल्यूराइट घोल मिलाएं। मिश्रण को अच्छी तरह मिलाया जाता है और 3-4 मिमी मोटी परत में बाँझ पेट्री डिश में डाला जाता है।

बुधवार क्लॉबर्ग II

3% पोषक तत्व अगर पीएच 7.6 के 100 मिलीलीटर में, पिघलाएं और 50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा करें, 2% पोटेशियम टेलराइट समाधान के 3 मिलीलीटर, ग्लिसरॉल मिश्रण के 10 मिलीलीटर और हेमोलाइज्ड रक्त के 50 मिलीलीटर जोड़ें। ग्लिसरीन मिश्रण 40 मिलीलीटर डिफाइब्रिनेटेड रक्त में 20 मिलीलीटर बाँझ ग्लिसरॉल मिलाकर तैयार किया जाता है। मिश्रण को रेफ्रिजरेटर में 4 महीने तक संग्रहीत किया जा सकता है। हेमोलाइज्ड ("लाह") रक्त तैयार करने के लिए, 16 मिलीलीटर डिफाइब्रिनेटेड रक्त को 34 मिलीलीटर बाँझ आसुत जल में मिलाया जाता है।

परिवहन अर्ध-तरल माध्यम

किसी भी वाणिज्यिक एगर का 1 ग्राम हॉटिंगर के डाइजेस्ट या मांस-पेप्टोन शोरबा के 100 मिलीलीटर में जोड़ा जाता है, पीएच 7.6 पर समायोजित किया जाता है, 30 मिनट के लिए 112 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है, 10 मिलीलीटर सीरम और 2% पोटेशियम टेल्यूराइट का 1 मिलीलीटर मिलाया जाता है। सड़न रोकनेवाला ढंग से जोड़ा गया। माध्यम को 5 मिलीलीटर की टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है। यदि संभव हो, तो स्टीवर्ट द्वारा संशोधित एक अधिक जटिल एम्स ट्रांसपोर्ट मीडियम (AMIES) का भी उपयोग किया जाता है। एक रोगी से टीकाकरण एक कप पर किया जाता है, जबकि ऑरोफरीनक्स (टॉन्सिल, आर्च, यूवुला) से टीकाकरण के लिए माध्यम के आधे हिस्से का उपयोग किया जाता है, और दूसरा - नाक से दूसरे स्वाब के साथ टीकाकरण के लिए। यदि त्वचा, आंख, कान और अन्य स्थानों से अध्ययन करने के लिए सामग्री है, तो एक और कप जोड़ें। एक कप पर कई रोगियों की सामग्री बोना असंभव है। बुआई से पहले, मीडिया को 15-20 मिनट के लिए थर्मोस्टेट में गर्म किया जाता है। परीक्षण सामग्री की बुआई करते समय, इसे पहले 2x1 सेमी के क्षेत्र के साथ रक्त अगर के एक अलग क्षेत्र में एक स्वाब के साथ रगड़ें। फिर इसी तरह रक्त-टेलुराइट एगर (या क्लॉबर्ग II माध्यम) पर, स्वाब को हर समय घुमाते हुए उसमें से सारी सामग्री बो दें। फिर, उसी स्वाब के साथ, माध्यम की शेष सतहों (कप का आधा हिस्सा) को स्ट्रोक से टीका लगाया जाता है। यह टीकाकरण तकनीक पृथक कालोनियों (शुद्ध संस्कृति) का उत्पादन करती है जिनका उपयोग विषाक्तता और बाद की पहचान के लिए सीधे प्लेट से किया जाता है। परिवहन माध्यम के साथ टीकाकृत व्यंजन या टेस्ट ट्यूब को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 20-24 घंटों के लिए रखा जाता है। दूसरे दिन, स्टीरियोस्कोपिक माइक्रोस्कोप का उपयोग करके कॉलोनियों की प्रकृति की जांच की जाती है। यदि दोनों मीडिया पर विकास अनुपस्थित है, तो सामग्री का दोबारा नमूना लिया जाता है। सभी परीक्षणों में संस्कृति की आगे की पहचान के लिए विशिष्ट और संदिग्ध सी. डिप्थीरिया कॉलोनियों वाली प्लेटों का चयन किया जाता है। संदिग्ध कॉलोनियों की माइक्रोस्कोपी को छोड़ा जा सकता है। रक्त अगर पर डिप्थीरिया बेसिली की कॉलोनियां सफेद या पीले रंग की, अपारदर्शी, गोल, थोड़ा उत्तल, 1-2 मिमी व्यास वाली होती हैं। उनमें आम तौर पर एक तैलीय स्थिरता होती है, हालांकि कुछ भंगुर कठोर आर-कॉलोनियां बना सकते हैं। कोनोमीसी पर। डिप्थीरिया रक्त-टेलुराइट मीडिया, विकास के 24 घंटों के बाद, वे भूरे, उत्तल, एक चिकनी धार के साथ, चिपचिपे होते हैं। 48 घंटों के बाद, वे धात्विक चमक के साथ गहरे भूरे या काले हो जाते हैं, समान या थोड़े स्कैलप्ड किनारे, चिकने या रेडियल धारीदार सतह (आर-आकार) के साथ, लूप से छूने पर चिपचिपे या भंगुर हो जाते हैं। 48 की संरचना के अनुसार- टेलुराइट मीडिया पर घंटे की कॉलोनियां और डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट की कुछ एंजाइमैटिक विशेषताएं चार सांस्कृतिक और जैव रासायनिक वेरिएंट (बायोवर्स) को अलग करती हैं - ग्रेविस, माइटिस, बेलफैंटी, इंटरमीडियस। बायोवर ग्रेविस आमतौर पर भूरे या काले मैट सूखी कालोनियों का निर्माण करता है, नाजुक, सपाट, चिकनी, 1.5-2 मिमी व्यास की, रेडियल धारीदार सतह के साथ, यह अत्यधिक विषैला होता है, हेमोलिसिस का कारण नहीं बनता है, स्टार्च और ग्लाइकोजन को विघटित करता है। बायोवर्स मिटिस और बेलफैंटी बढ़ते हैं भूरे या काले रंग के रूप में, चिकने किनारों वाली गोल चिकनी उत्तल कालोनियां, व्यास में 1-1.5 मिमी, ये विकल्प कम विषैले होते हैं, हेमोलिसिस का कारण बनते हैं, लेकिन स्टार्च और ग्लाइकोजन को विघटित नहीं करते हैं। इंटरमीडियस बायोवर छोटे, भूरे, पारदर्शी कालोनियों का निर्माण करता है 0.5-1 मिमी का व्यास, एक सपाट चिकनी सतह के साथ, यह थोड़ा विषाक्त है, स्टार्च और ग्लाइकोजन को नहीं तोड़ता है। यदि विशिष्ट वृद्धि अनुपस्थित है, तो अन्य संदिग्ध कॉलोनियों से स्मीयर तैयार किए जाते हैं। यदि उनमें बीजाणु छड़ें, कोक्सी, यीस्ट आदि पाए जाते हैं, तो डिप्थीरिया पर अध्ययन बंद कर दिया जाता है और नकारात्मक उत्तर दिया जाता है। हालाँकि, यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि डिप्थीरिया बैक्टीरिया, जिन्होंने विकास अवरोधकों (पोटेशियम टेल्यूराइट) के साथ मीडिया पर असामान्य कालोनियों का निर्माण किया है, को छोटा किया जा सकता है, गाढ़ा किया जा सकता है, लेकिन बहुरूपता और विशिष्ट स्थान बनाए रखा जा सकता है। जब विशिष्ट कालोनियां बढ़ती हैं, तो वे तुरंत अपनी विषाक्तता का अध्ययन करना शुरू कर देते हैं और पहचान. कम से कम 2 अलग-अलग कॉलोनियों में विषाक्तता गुणों की जांच की जाती है, प्रत्येक कॉलोनी के आधे हिस्से को विषाक्तता निर्धारित करने के लिए एक माध्यम पर टीका लगाया जाता है और पिस्सू माध्यम पर एक लूप के साथ जलाया नहीं जाता है, और एक शुद्ध संस्कृति को अलग करने और इसे तब तक बचाने के लिए तिरछा सीरम अगर पर दूसरे आधे हिस्से को टीका लगाया जाता है। प्रयोगशाला निदान का अंत। यदि डिश पर सी. डिप्थीरिया की विषैली और गैर विषैली दोनों किस्में उगती हैं, तो संदिग्ध कालोनियों के एकाधिक विकास के मामले में लगभग 20 कालोनियों के विषैले गुणों की जांच करना आवश्यक है, 5-6 कालोनियों से सामग्री को एक पट्टिका में टीका लगाना। केवल एक कॉलोनी के विकास के साथ, इसे विषाक्तता निर्धारित करने के लिए एक माध्यम पर रखा जाता है और, एक लूप को कैल्सीन करके, पिसु माध्यम के साथ एक टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है। अगर जेल और एक सकारात्मक सिस्टिनेज परीक्षण में, पृथक संस्कृति को टॉक्सिजेनिक सी निर्धारित किया जाता है डिप्थीरिया. यदि 24 घंटों के बाद कोई वर्षा रेखाएं नहीं हैं, तो प्लेटों को दूसरे दिन के लिए इनक्यूबेट किया जाता है। एक नकारात्मक पीसा परीक्षण के मामले में, कल्चर को कोरिनेबैक्टीरिया के एक प्रकार के रूप में पहचाना जाता है। तिरछी सीरम अगर पर एक शुद्ध कल्चर को ग्लूकोज, सुक्रोज, घुलनशील स्टार्च के साथ हाइड्रोकार्बन मीडिया पर बोया जाता है, और यूरिया, पायराज़िनामाइडेज़ और नाइट्रेट का पता लगाने के लिए नमूने लिए जाते हैं। रिडक्टेज़ चौथे दिन, सभी टीकाकरणों के परिणाम दर्ज किए जाते हैं और पृथक संस्कृति के बारे में एक तर्कसंगत जीवाणुविज्ञानी निष्कर्ष दिया जाता है। कोरिनेबैक्टीरिया की पहचान करने के ऐसे तरीकों का उपयोग किया जाता है।

इन विट्रो में विषाक्तता का निर्धारण

यह अगर जेल में एंटीटॉक्सिन के साथ टॉक्सिन की परस्पर क्रिया पर आधारित है। अगर की मोटाई में विष और एंटीटॉक्सिन के इष्टतम मात्रात्मक अनुपात के स्थानों में, एक अवक्षेप पतली नाजुक सफेद रेखाओं ("तीर", "एंटीना") के रूप में दिखाई देता है। इस परीक्षण को विदेशों में कई देशों में एलेक-परीक्षण कहा जाता है। विषाक्तता परीक्षण आमतौर पर शुद्ध संस्कृतियों के साथ किया जाता है। इसे विदेशी माइक्रोफ्लोरा से दूषित संस्कृतियों के साथ भी निर्धारित किया जा सकता है; यह प्रति दिन डिप्थीरिया के प्रयोगशाला निदान को तेज करता है। लेकिन एक नकारात्मक परीक्षण के साथ, इसे एक पृथक शुद्ध संस्कृति के साथ दोहराया जाता है। इस परीक्षण को स्थापित करने के लिए, सूक्ष्मजीवविज्ञानी उद्योग डिप्थीरिया रोगाणुओं (वीटीडीएम) की विषाक्तता निर्धारित करने के लिए एक विशेष शुष्क मानक माध्यम और एंटीटॉक्सिक एंटीडिप्थीरिया सीरम में भिगोए गए मानक पेपर डिस्क का उत्पादन करता है और सुखाया गया। पेपर डिस्क को एंटीटॉक्सिन (प्रति कप चार से अधिक नहीं) के साथ ताजा तैयार वीटीडीएम माध्यम की सतह पर लगाया जाता है। डिस्क से 0.5 सेमी की दूरी पर, 7-8 मिमी के व्यास के साथ "सजीले टुकड़े" के रूप में संस्कृतियों को इसके चारों ओर बोया जाता है, अध्ययन की गई संस्कृति और नियंत्रण तनाव के "सजीले टुकड़े" को बारी-बारी से। परिणामों को ध्यान में रखा जाता है 18-24 और 48 साल के बाद. अवक्षेपों की विशिष्टता का मानदंड अध्ययनित संस्कृति की अवक्षेपण रेखाओं का विषैले तनाव की रेखाओं के साथ संलयन है। इस मामले में, पृथक कल्चर को विषैला माना जाता है। मानक पेपर डिस्क की अनुपस्थिति में, डिप्थीरिया एंटीटॉक्सिन से संसेचित फिल्टर पेपर स्ट्रिप्स का उपयोग किया जा सकता है। इन्हें सीधे प्रयोगशाला में बनाया जाता है। कागज की पट्टियों को आकार में काटा जाता है और 30 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर ऑटोक्लेव किया जाता है, जिसे 0.25 मिलीलीटर शुद्ध डिप्थीरिया एंटीटॉक्सिन से सिक्त किया जाता है, जिसमें 500 आईयू प्रति मिलीलीटर होता है। इस मामले में, एंटीटॉक्सिन से सिक्त कागज की एक पट्टी को उपयुक्त माध्यम से कप पर लगाया जाता है, कप को थर्मोस्टेट में 15-20 मिनट के लिए खोलकर और उल्टा करके सुखाया जाता है। उसके बाद, पट्टियों के दोनों किनारों पर, संस्कृतियों को परीक्षण और नियंत्रण उपभेदों को बारी-बारी से "सजीले टुकड़े" के साथ टीका लगाया जाता है। डिप्थीरिया रोगज़नक़ की विषाक्तता निर्धारित करने के लिए, आप अन्य मीडिया (एजीवी, ओपन-हर्थ एगर, आदि) का भी उपयोग कर सकते हैं ।), जिसके लिए नुस्खे "डिप्थीरिया के बैक्टीरियोलॉजिकल निदान के लिए निर्देश", कीव (1999) में दिए गए हैं। कई वर्षों तक, डिप्थीरिया बैक्टीरिया की विषाक्तता को दो गिनी सूअरों में एक संस्कृति पेश करके चमड़े के नीचे या इंट्राडर्मल रूप से निर्धारित किया गया था। जिनमें से एक दिन पहले 100-1000 आईयू एंटीटॉक्सिक एंटीडिप्थीरिया सीरम का इंजेक्शन लगाया गया था। अब उच्च लागत और प्रतिक्रिया में महत्वपूर्ण देरी के कारण बैक्टीरियोलॉजिकल प्रयोगशालाएँ लगभग कभी भी इस पद्धति का उपयोग नहीं करती हैं। हाल ही में, पोलीमराइज़ेशन श्रृंखला प्रतिक्रिया द्वारा डिप्थीरिया विष जीन का निर्धारण करने के लिए एक बहुत ही संवेदनशील और अत्यधिक विशिष्ट विधि विकसित की गई है। यह सी. डिप्थीरिया के डीएनए क्षेत्र के निर्धारण पर आधारित है, जहां विशिष्ट प्राइमरों का उपयोग करके डिप्थीरिया विष जीन को स्थानीयकृत किया जाता है। विषाक्तता के पारंपरिक निर्धारण की तुलना में इस विधि के फायदे हैं: उच्च संवेदनशीलता, परिणाम प्राप्त करने की गति (4-6 घंटे), शुद्ध संस्कृति के अलगाव की आवश्यकता नहीं होती है। लेकिन इसके कार्यान्वयन के लिए विशेष उपकरण, महंगे अभिकर्मकों और एक उपयुक्त कमरे की आवश्यकता होती है, और इसलिए इसे केवल एक विशेष प्रयोगशाला में ही किया जा सकता है। सी. डिप्थीरिया के विषैले गुणों के अंतिम निर्धारण के लिए रोगियों और बैक्टीरिया वाहकों से पृथक डिप्थीरिया बैक्टीरिया के सभी गैर-विषाक्त उपभेदों को यूक्रेनी सेंटर फॉर स्टेट सेनेटरी एंड एपिडेमियोलॉजिकल सर्विलांस (जहां ऐसी प्रयोगशाला है) में भेजा जाना चाहिए।

सिस्टिनेज का निर्धारण (पिसो परीक्षण)

सी. डिप्थीरिया, सी. अल्सरन्स एंजाइम सिस्टिनेज का स्राव करते हैं, स्यूडोडिप्थीरिया बैक्टीरिया और अन्य डिप्थीरॉइड्स इसका उत्पादन करते हैं। पृथक संस्कृति को सिस्टीन के साथ एक माध्यम में इंजेक्शन द्वारा टीका लगाया जाता है, एक कॉलम में संकीर्ण परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है। सिस्टीन-पॉजिटिव बैक्टीरिया हाइड्रोजन सल्फाइड की रिहाई के साथ सिस्टीन को तोड़ देते हैं, जो माध्यम में प्रवेश करने वाले लेड एसीटेट के साथ लेड सल्फेट बनाता है, जिसके परिणामस्वरूप माध्यम गहरे भूरे रंग में बदल जाता है। सी. डिप्थीरिया चुभन के बाद न केवल माध्यम को काला कर देता है, बल्कि सतह से 1 सेमी की दूरी पर इसके चारों ओर एक गहरे भूरे रंग का "बादल" बनाता है। थर्मोस्टेट में ऊष्मायन के 20-24 घंटों के बाद परिणामों को ध्यान में रखा जाता है।

यूरिया का निर्धारण (सैक्स परीक्षण)

डिप्थीरिया बैक्टीरिया इस एंजाइम का निर्माण नहीं करते हैं। केवल कुछ अन्य प्रकार के कोरिनेबैक्टीरिया ही यूरिया के लिए सकारात्मक परीक्षण देते हैं। नमूना स्थापित करने के लिए, पृथक संस्कृति को यूरिया के साथ शोरबा में बोया जाता है। यूरिया यूरिया को विघटित कर देता है, माध्यम का पीएच बदल देता है, साथ ही लाल हो जाता है। यदि एंजाइम जारी नहीं होता है, तो शोरबा के रंग में कोई बदलाव नहीं होता है।

पायराज़िनामिडेज़ का निर्धारण

पाइराजिनमिडेज़ का निर्धारण पाइराजिनमाइड से पाइराजिन एसिड और अमोनियम के हाइड्रोलिसिस द्वारा किया जाता है। ऐसा करने के लिए, 0.25 मिलीलीटर बाँझ आसुत जल को एक बाँझ परीक्षण ट्यूब में डाला जाता है, जिसमें पृथक संस्कृति का एक गाढ़ा निलंबन तैयार किया जाता है, फिर रोसको 598-21 का एक डायग्नोस्टिक टैबलेट जोड़ा जाता है। 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे तक इनक्यूबेट करें, जिसके बाद अमोनियम फेरस सल्फेट के ताजा तैयार 5% जलीय घोल की एक बूंद डालें। एंजाइम की उपस्थिति में, निलंबन लाल या नारंगी हो जाता है। रोगजनक कोरिनेबैक्टीरिया पायराज़िनामाइडेज़ का स्राव नहीं करते हैं और इसलिए निलंबन का रंग नहीं बदलते हैं।

सैकेरोलाइटिक एंजाइम

सैकेरोलाइटिक एंजाइमों का निर्धारण अलग-अलग कल्चर के एक पूरे लूप को छोटी विभिन्न प्रकार की हिस श्रृंखला (ग्लूकोज, सुक्रोज, घुलनशील स्टार्च) की प्रत्येक ट्यूब में टीका लगाकर किया जाता है। थर्मोस्टेट में ऊष्मायन के 24 घंटे के बाद परिणामों को ध्यान में रखा जाता है। स्टार्च के टूटने में 48 घंटे तक की देरी हो सकती है।

नाइट्रेट रिडक्टेस का निर्धारण

नाइट्रेट रिडक्टेस का निर्धारण सी. बेल्फ़ैन्टी और सी. अल्सरन्स की पहचान करने के लिए एक अतिरिक्त परीक्षण है जो इस एंजाइम का निर्माण नहीं करते हैं। शोरबा के साथ एक टेस्ट ट्यूब में, जिसमें 0.1% KN03 मिलाया जाता है, टेस्ट कल्चर को टीका लगाया जाता है, एक दिन के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है। असंक्रमित माध्यम से अनिवार्य नियंत्रण। नाइट्रेट रिडक्टेस की उपस्थिति के मामले में, जब कसाटकिन के अभिकर्मक की 3 बूंदें बीज वाले शोरबा में डाली जाती हैं, तो एक लाल रंग दिखाई देता है। नियंत्रण ट्यूब में माध्यम रंग नहीं बदलता है। हाल ही में, "बी" सेट से ग्लूकोज, सुक्रोज, यूरिया और स्टार्च के साथ पेपर संकेतक डिस्क का उपयोग एंटरोबैक्टीरिया (फर्म "इमबियो", निज़नी नोवगोरोड) की पहचान के लिए कोरिनेबैक्टीरिया की पहचान के लिए किया जाता है। 4 टेस्ट ट्यूबों में, अध्ययन के तहत संस्कृति का एक मोटा निलंबन तैयार किया जाता है, और संबंधित कार्बोहाइड्रेट या अन्य अभिकर्मक के साथ एक डिस्क उनमें से प्रत्येक में डुबो दी जाती है। थर्मोस्टेट में ऊष्मायन के बाद, यूरिया रिलीज 40-120 मिनट के बाद दर्ज किया जाता है, और सैकेरोलाइटिक गतिविधि 5-24 घंटों के बाद निर्धारित की जाती है। यूरिया की उपस्थिति में, यूरिया के साथ सफेद डिस्क गुलाबी-लाल रंग की हो जाती है, अनुपस्थिति में यह सफेद ही रहती है। संबंधित एंजाइमों की उपस्थिति में ग्लूकोज और सुक्रोज वाली डिस्क का रंग 5-6 घंटों के बाद लाल से पीला हो जाता है। एमाइलेज़ का निर्धारण करते समय, आयोडीन के साथ एक संकेतक डिस्क को उपयुक्त सब्सट्रेट के साथ टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है। यदि कोई एंजाइम नहीं है, तो गहरा नीला रंग दिखाई देता है; यदि है, तो घोल का रंग अपरिवर्तित रहता है।

विशिष्ट रोकथाम और उपचार

डिप्थीरिया का टीकाकरण फॉर्मेलिन के साथ डिप्थीरिया विष के प्रसंस्करण द्वारा प्राप्त डिप्थीरिया टॉक्सोइड की शुरूआत के साथ किया जाता है। हमारे देश में, टीकाकरण के लिए डीटीपी का उपयोग किया जाता है - सोखने वाली पर्टुसिस-डिप्थीरिया-टेटनस वैक्सीन। एंटीटॉक्सिक सीरम का उपयोग विशिष्ट चिकित्सा के लिए किया जाता है, और एंटीबायोटिक्स का उपयोग बैक्टीरिया वाहकों की स्वच्छता के लिए किया जाता है। एंटीबायोटिक्स में पेनिसिलिन, वैनकोमाइसिन, एरिथ्रोमाइसिन आदि का उपयोग किया जाता है।

कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया की खोज 100 साल पहले की गई थी और फिर उसे शुद्ध संस्कृति में अलग कर दिया गया था। डिप्थीरिया की घटना में इसके अंतिम एटिऑलॉजिकल महत्व की पुष्टि कई वर्षों बाद हुई, जब एक विशिष्ट विष प्राप्त हुआ जो डिप्थीरिया के रोगियों में देखी गई घटनाओं के समान जानवरों की मृत्यु का कारण बना। कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया जीनस कोरिनेबैक्टीरियम से संबंधित है, जो कोरिनेबैक्टीरियम बैक्टीरिया का एक समूह है। कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया सीधी या थोड़ी घुमावदार छड़ें होती हैं जिनके सिरों पर विस्तार या बिंदु होते हैं। फ्रैक्चर विभाजन और विभाजन रोमन अंक वी या फैली हुई उंगलियों के रूप में एक विशिष्ट व्यवस्था प्रदान करते हैं, लेकिन एकल छड़ें अक्सर स्ट्रोक में पाई जाती हैं। उनके बड़े संचय, जो गले, नाक, घाव के स्राव के बलगम से तैयार किए गए स्मीयरों में होते हैं, में एक महसूस जैसा चरित्र होता है। इनकी छड़ियों की औसत लंबाई 1-8 माइक्रोन, चौड़ाई 0.3/0.8 माइक्रोन होती है। वे गतिहीन हैं और बीजाणु या कैप्सूल नहीं बनाते हैं। कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया एक ऐच्छिक अवायवीय जीव है। डिप्थीरिया बेसिली सूखने के प्रति प्रतिरोधी हैं। शुद्ध संस्कृतियों में 60 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर, वे 45-60 मिनट के भीतर नष्ट हो जाते हैं। पैथोलॉजिकल उत्पादों में, यानी, प्रोटीन सुरक्षा की उपस्थिति में, वे 90 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर एक घंटे तक व्यवहार्य रह सकते हैं। कम तापमान का डिप्थीरिया बेसिली पर हानिकारक प्रभाव नहीं पड़ता है। सामान्य सांद्रता वाले कीटाणुनाशकों में, वे जल्दी मर जाते हैं।

डिप्थीरिया की छड़ियों की अत्यंत बड़ी बहुरूपता पर ध्यान देना आवश्यक है, जो उनकी मोटाई और आकार (सूजन, फ्लास्क के आकार, खंडित, फ़िलीफ़ॉर्म, शाखा) में परिवर्तन में प्रकट होती है। अर्न्स्ट, जो वॉलुटिन के संचय हैं। इस बात के प्रमाण हैं कि वॉलुटिन एक लंबी श्रृंखला वाला अकार्बनिक पॉलीफॉस्फेट है। एम. ए. पेशकोव उनकी मेटाफॉस्फेट प्रकृति का सुझाव देते हैं। ए. ए. इम्शानेत्स्की का मानना ​​है कि वॉलुटिन चयापचय प्रक्रियाओं का एक उप-उत्पाद है। यह ज्ञात है कि फास्फोरस अनाज के निर्माण के लिए आवश्यक है। इस प्रक्रिया के लिए मैंगनीज और जिंक की आवश्यकता के बारे में धारणाएँ हैं।

वॉलुटिन अनाज दैनिक संस्कृतियों में पाए जाते हैं, और फिर अनाज की उपस्थिति के साथ बैक्टीरिया की संख्या कम हो जाती है। साइटोप्लाज्म में न्यूक्लियोटाइड्स, इंट्रासाइटोप्लाज्मिक झिल्ली - लाइसोसोम, रिक्तिकाएं भी होती हैं।

बैक्टीरिया सभी एनिलिन रंगों से रंगे होते हैं। ग्राम विधि द्वारा रंजित होने पर - सकारात्मक। वॉलुटिन दानों को रंगने के लिए नीसर विधि का उपयोग किया जाता है। जब इस विधि से दाग लगाया जाता है, तो वॉलुटिन के दाने, जिनमें मेथिलीन नीले रंग के लिए उच्च आकर्षण होता है, स्थायी रूप से नीले रंग में रंग जाते हैं, और मेथिलीन नीला क्राइसॉइडिन या बिस्मार्कब्राउन के साथ अतिरिक्त धुंधलापन के साथ जीवाणु शरीर से विस्थापित हो जाता है।

डिप्थीरिया का प्रेरक एजेंट एक हेटरोट्रॉफ़ है, अर्थात, यह बैक्टीरिया के एक समूह से संबंधित है जिन्हें अपनी वृद्धि के लिए कार्बनिक पदार्थ की आवश्यकता होती है। खेती के लिए उपयोग किए जाने वाले मीडिया में कार्बन और नाइट्रोजन के स्रोत के रूप में अमीनो एसिड - एलेनिन, सिस्टीन, मेथिओनिन, वेलिन आदि शामिल होने चाहिए। इस संबंध में, पशु प्रोटीन युक्त मीडिया वैकल्पिक संस्कृति मीडिया हैं: रक्त, सीरम, जलोदर द्रव। इसके आधार पर, शास्त्रीय लेफ़लर माध्यम बनाया गया, और फिर क्लाउबर्ग, टाइन्डल, संचय माध्यम बनाया गया।

लेफ़लर के माध्यम पर, डिप्थीरिया बैसिलस की कॉलोनियों में चमकदार, नम सतह, चिकने किनारे और पीला रंग होता है। विकास के कुछ दिनों के बाद, कालोनियों की एक रेडियल धारियां और कमजोर रूप से व्यक्त संकेंद्रित रेखाएं दिखाई देती हैं। कालोनियों का व्यास 4 मिमी तक पहुँच जाता है। वृद्धि के पहले लक्षण 36-38 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में 6 घंटे के बाद दिखाई देते हैं। बुआई के 18 घंटे बाद विकास स्पष्ट दिखाई देता है। डिप्थीरिया बेसिलस की वृद्धि के लिए इष्टतम पीएच मान 7.6 है। कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया को कोरिनेबैक्टीरियम की अन्य प्रजातियों से अलग करना अक्सर मुश्किल होता है। प्रजातियों को निर्धारित करने के लिए सांस्कृतिक और जैव रासायनिक विशेषताओं का एक जटिल उपयोग किया जाता है।

डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरियम प्रजाति भी विषम है, इसे 3 सांस्कृतिक और जैव रासायनिक प्रकारों ग्रेविस, माइटिस, इंटरमेडिन्स, दो किस्मों में विभाजित किया गया है - टॉक्सिजेनिक और गैर-टॉक्सिजेनिक, कई सीरोलॉजिकल प्रकार और फेज प्रकार।

वर्तमान में, दो सांस्कृतिक-जैव रासायनिक प्रकार, ग्रेविस और माइटिस, अधिकांश क्षेत्रों में प्रसारित होते हैं। इंटरमेडिन्स प्रकार, जो व्यापक रूप से प्रतिष्ठित हुआ करता था, हाल ही में दुर्लभ हो गया है। जब संस्कृति को टेल्यूराइट के साथ रक्त अगर पर उगाया जाता है, तो उपनिवेशों के आकार के अनुसार प्रकारों का सबसे स्पष्ट भेदभाव किया जा सकता है। ग्रेविस प्रकार की कॉलोनियां 48-72 घंटों के बाद 1-2 मिमी के व्यास तक पहुंच जाती हैं, इनमें लहरदार किनारे, रेडियल धारियां और एक सपाट केंद्र होता है। उनके स्वरूप की तुलना आमतौर पर डेज़ी फूल से की जाती है। बैक्टीरिया की टेल्यूराइट को कम करने की क्षमता के कारण कॉलोनियां अपारदर्शी होती हैं, जो बाद में परिणामी हाइड्रोजन सल्फाइड के साथ मिलकर भूरे-काले रंग की हो जाती हैं। जब शोरबा में उगाया जाता है, तो ग्रेविस-प्रकार की संस्कृतियाँ सतह पर एक ढहती हुई फिल्म बनाती हैं। जब मट्ठे के साथ हिस मीडिया पर बीज डाला जाता है, तो वे एसिड के निर्माण के साथ पॉलीसेकेराइड - स्टार्च, डेक्सट्रिन, ग्लाइकोजन को तोड़ देते हैं।

टेलुराइट के साथ रक्त एगर पर माइटिस प्रकार की संस्कृतियाँ गोल, थोड़ी उत्तल, चिकनी धार वाली, काली अपारदर्शी कालोनियों के साथ बढ़ती हैं। शोरबे पर उगने पर, वे एक समान मैलापन और तलछट देते हैं। वे स्टार्च, डेक्सट्रिन और ग्लाइकोजन को नहीं तोड़ते हैं।

स्मीयरों में, ग्रेविस प्रकार की छड़ें अक्सर छोटी होती हैं, जबकि माइटिस प्रकार की छड़ें पतली और लंबी होती हैं।

विभिन्न जैव रासायनिक प्रकारों के डिप्थीरिया बेसिली के एक तुलनात्मक इलेक्ट्रॉन सूक्ष्म अध्ययन से ग्रेविस और माइटिस प्रकार में तीन-परत कोशिका झिल्ली की उपस्थिति देखी गई। इंटरमेडिन्स प्रकार का खोल दो-परत वाला और लगभग 3 गुना मोटा होता है। साइटोप्लाज्म और झिल्ली के बीच अनाज से भरे स्थान होते हैं, जो एक्सोटॉक्सिन से संबंधित हो सकते हैं। बैक्टीरिया की तिरछी धारियां दिखाई देती हैं, जो बेटी कोशिकाओं के बीच दीवारों को विभाजित करके बनाई जाती हैं। ग्रेविस और माइटिस प्रकार में गुणसूत्र तंत्र, रिक्तिका के साथ साधारण अनाज द्वारा दर्शाया जाता है, इंटरमेडिन प्रकार में यह पूरे साइटोप्लाज्म में वितरित होता है। एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में, एक बहुस्तरीय खोल दिखाई देता है, जिसकी उपस्थिति बताती है कि डिप्थीरिया बेसिली कभी-कभी ग्राम-नकारात्मक क्यों होती है।

डिप्थीरिया बैक्टीरिया की कॉलोनियां एस-, आर- और एसआर-रूपों में होती हैं, बाद वाले को मध्यवर्ती माना जाता है। एन मॉर्टन का मानना ​​​​है कि एस-फॉर्म की कॉलोनियां माइटिस प्रकार में अंतर्निहित हैं, एसआर-फॉर्म - ग्रेविस प्रकार में। इन मूल रूपों के अलावा, म्यूकोइड प्रकार की कॉलोनियां हैं - एम-फॉर्म, बौनी कॉलोनियां - डी-फॉर्म और गोनिडियल कॉलोनियां - एल-फॉर्म। इन सभी को विघटनकारी परिवर्तनशीलता के रूप माना जाता है।

डिप्थीरिया बैक्टीरिया को डिप्थीरॉइड्स और स्यूडोडिप्थीरिया बैसिलस से अलग किया जाना चाहिए।

बड़ी संख्या में अध्ययन डिप्थीरिया बेसिलस की परिवर्तनशीलता के लिए समर्पित हैं। प्रयोगशाला में असामान्य रूपों की घटना की संभावना की पुष्टि महामारी विज्ञान प्रोफ़ाइल के काम से की गई थी।

बड़ी संख्या में शोधकर्ताओं द्वारा मान्यता प्राप्त डिप्थीरिया जीवाणु की जैव रासायनिक, रूपात्मक और भौतिक रासायनिक परिवर्तनशीलता, कई मामलों में बैक्टीरियोलॉजिकल निदान को कठिन बनाती है और संस्कृतियों के व्यापक अध्ययन को मजबूर करती है।

हमने विभिन्न महामारी विज्ञान स्थितियों के तहत पृथक सभी संस्कृतियों को 8 समूहों में वितरित किया है; उनमें कोरिनेबैक्टीरियम के प्रतिनिधियों के सभी संभावित रूपात्मक रूप शामिल हैं जो हमारे लिए रुचिकर हैं:

पहला समूह - छोटी छड़ें, लगभग 2 माइक्रोन लंबी, बिना दाने वाली;

दूसरा समूह - छोटी छड़ें, लगभग 2 माइक्रोन लंबी, लेकिन कभी-कभी अनाज के साथ;

तीसरा समूह - मध्यम आकार की छड़ें, 3-6 माइक्रोन लंबी, 0.3-0.8 माइक्रोन चौड़ी, बिना विशिष्ट ग्रैन्युलैरिटी के;

चौथा समूह - मध्यम आकार की छड़ें, 3-7 माइक्रोन लंबी, 0.3-0.8 माइक्रोन चौड़ी, थोड़ी घुमावदार, कभी-कभी दानों वाली;

5वां समूह - मध्यम आकार की छड़ें, 3-6 माइक्रोन लंबी, 0.3-0.8 माइक्रोन चौड़ी, थोड़ी घुमावदार, दानेदार;

छठा समूह - लंबी छड़ें, 6-8 माइक्रोन लंबी, 0.3-0.6 माइक्रोन चौड़ी, थोड़ी घुमावदार, कभी-कभी दानों वाली;

7वां समूह - लंबी छड़ें, 6-8 माइक्रोन लंबी, 0.3-0.8 माइक्रोन चौड़ी, आमतौर पर घुमावदार, बिना दाने वाली;

8वां समूह - छोटी, खुरदरी छड़ें, लगभग 2 µm लंबी, लगभग 1 µm चौड़ी, बिना दाने वाली।

समूहों में वितरण के दौरान छड़ों के स्थान को ध्यान में नहीं रखा गया था, लेकिन आमतौर पर विशिष्ट स्थान आकृति विज्ञान के अनुरूप था।

समूह 1, 2, 3 और 8 में, जो आकृति विज्ञान में हॉफमैन के बेसिली के अनुरूप थे, व्यवस्था समूह, समानांतर या एकल व्यक्तियों के रूप में थी, समूह 4, 5 और 6 में, जो मूल रूप से स्थित वास्तविक डिप्थीरिया बैक्टीरिया के आकार में अनुरूप थे। एक कोण पर या एकल व्यक्तियों के रूप में। 7वें समूह में, छड़ें अक्सर बेतरतीब ढंग से व्यवस्थित की जाती थीं, एक-दूसरे के साथ गुंथी हुई। 8वें समूह में छड़ें एकल व्यक्तियों के रूप में स्थित थीं।

अध्ययन की गई 428 संस्कृतियों में से 111 को, संकेतों की समग्रता के अनुसार, वास्तविक डिप्थीरिया के रूप में वर्गीकृत किया जाना चाहिए था, 209 हॉफमैन की छड़ियों की संस्कृतियाँ थीं, और 108 ने असामान्य संस्कृतियों का एक समूह बनाया था। डिप्थीरिया के करीब की संस्कृतियों में, असामान्यता जैव रासायनिक गतिविधि में कमी में प्रकट हुई थी, कभी-कभी यूरिया के अपघटन में; संस्कृतियों में रूपात्मक रूप से हॉफमैन की छड़ियों के करीब, एक सकारात्मक सिस्टीन परीक्षण बनाए रखने में, शर्करा में से एक को विघटित करने की क्षमता।

111 डिप्थीरिया संस्कृतियों में से 81 संस्कृतियाँ (73%) रूपात्मक रूप से विशिष्ट थीं, 28 संस्कृतियों (27%) में हॉफमैन छड़ों की आकृति विज्ञान था। 111 डिप्थीरिया संस्कृतियों में से, ग्रेविस प्रकार की 20 संस्कृतियाँ थीं, और उनमें से केवल 9 को 1 और 2 रूपात्मक समूहों को सौंपा गया था।

20% मामलों में, जिन संस्कृतियों को हॉफमैन बैसिलस की संस्कृतियों के लिए जिम्मेदार ठहराया गया था, उनमें विशिष्ट डिप्थीरिया संस्कृतियों की आकृति विज्ञान था।
अध्ययन किए गए 25% उपभेदों को असामान्य संस्कृतियों के रूप में वर्गीकृत किया गया था; उनकी आकृति विज्ञान डिप्थीरिया बेसिली और हॉफमैन बेसिली दोनों से मेल खाती थी।

इस प्रकार, संस्कृतियों के जैव रासायनिक और रूपात्मक गुण हमेशा मेल नहीं खाते हैं, और जैव रासायनिक असामान्यता, साथ ही रूपात्मकता, घटती घटनाओं की अवधि के दौरान अलग-थलग संस्कृतियों में अधिक बार देखी जाती है, और इसलिए परिवहन के स्तर में कमी आती है।

पिछले 10-15 वर्षों में फसलों की जैव रासायनिक गतिविधि में सामान्य कमी पर ध्यान दिया जाना चाहिए। इसका एक संकेतक शर्करा का विलंबित किण्वन है, जो कभी-कभी 5-6वें दिन होता है, साथ ही एक ही संस्कृति की कॉलोनियों की विभिन्न जैव रासायनिक गतिविधि भी होती है।

विभिन्न महामारी विज्ञान स्थितियों के तहत पृथक शुद्ध संस्कृतियों की जैव रासायनिक पहचान से पता चलता है कि हालांकि आकृति विज्ञान और जैव रासायनिक गुण अक्सर मेल नहीं खाते हैं, रूपात्मक डेटा से स्थापित संस्कृतियों के वितरण का सामान्य सिद्धांत नहीं बदलता है। रूपात्मक और जैव रासायनिक डेटा के अनुसार संस्कृतियों के वितरण में, और सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के समावेश के साथ उनकी पूर्ण पहचान में, वितरण का सिद्धांत समान रहता है: महामारी कल्याण की अवधि के दौरान असामान्य संस्कृतियां अधिक आम हैं, हॉफमैन की बेसिली हैं महामारी की परेशानी की अवधि के दौरान अधिक बार पाए जाते हैं और वास्तविक डिप्थीरिया की तुलना में अधिक समय तक बोए जाते हैं।

ठोस पोषक मीडिया पर पृथक संस्कृतियों के विषैले गुणों के अध्ययन से पता चला है कि महामारी की अवधि के दौरान भी, विषैले डिप्थीरिया बेसिली के वाहक पर्याप्त संख्या में होते हैं। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि रोगियों से पृथक संस्कृतियों में भी विषैले गुण हमेशा पता लगाने योग्य नहीं होते हैं। यह संस्कृतियों की विषाक्तता को निर्धारित करने के लिए उपयोग की जाने वाली विधियों में सुधार करने की आवश्यकता को इंगित करता है।

विभिन्न महामारी विज्ञान स्थितियों के तहत पृथक असामान्य संस्कृतियों की एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के परिणामों ने सीरोलॉजिकल गुणों के लिए समान पैटर्न की उपस्थिति दिखाई, जिसे हमने संस्कृतियों की आकृति विज्ञान और जैव रसायन का अध्ययन करते समय नोट किया था। सीरोलॉजी के अनुसार, समृद्ध क्षेत्र में पृथक फसलों की असामान्यता वंचित क्षेत्रों की तुलना में अधिक गहरी थी। तो, एक समृद्ध क्षेत्र में, 26% असामान्य संस्कृतियों ने सकारात्मक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया दी, प्रतिकूल क्षेत्रों में - 19%।

डिप्थीरिया बेसिलस का एक मुख्य गुण विष निर्माण की क्षमता है। कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया का विषजनन प्रोफ़ेज में निहित जीन द्वारा निर्धारित होता है, इसलिए, आक्रामकता का मुख्य साधन - विष निर्माण जीवाणु गुणसूत्र से जुड़ा नहीं है।

डिप्थीरिया विष एक प्रोटीन है जिसका आणविक भार 6200 डाल्टन है। विष की ताकत नेक्रोटिक क्रिया की उपस्थिति और संवेदनशील जानवरों पर प्रभाव (घातक प्रभाव) के लिए इंट्राडर्मल परीक्षण स्थापित करके निर्धारित की जाती है। विष की ताकत को न्यूनतम घातक खुराक का उपयोग करके मापा जाता है, जो कि विष की सबसे छोटी मात्रा है जो इंट्रापेरिटोनियल रूप से प्रशासित होने पर 4-5 दिनों में 250 ग्राम वजन वाले गिनी पिग की मृत्यु का कारण बन सकती है। विष में एंटीजेनिक गुण होते हैं जो फॉर्मेलिन के साथ इलाज करने पर संरक्षित रहते हैं, जो इसके विषैले गुणों को हटा देता है। इससे रोगनिरोधी दवा की तैयारी के लिए इसका उपयोग करना संभव हो गया।

विष अणु में दो टुकड़े होते हैं, जिनमें से एक थर्मोस्टेबल होता है और इसमें एंजाइमेटिक गतिविधि होती है, और दूसरा थर्मोलैबाइल होता है और एक सुरक्षात्मक कार्य करता है। कोशिका दीवार के नलिकाओं के माध्यम से इसकी रिहाई के साथ विष का इंट्रासेल्युलर संश्लेषण साबित हुआ। विष का संश्लेषण तब होता है जब सूक्ष्म जीव को तरल माध्यम - मांस-पेप्टोन शोरबा में ग्लूकोज, माल्टोज़ और पीएच 7.8-8.0 पर वृद्धि कारकों के साथ उगाया जाता है।

हाल के आंकड़ों के अनुसार, डिप्थीरिया विष वायरल मूल का एक उत्पाद है। पुष्टि के रूप में, आई. वी. चिस्त्यकोवा ने फ़ेज़ के प्रभाव में गैर-विषैले कोरिनेबैक्टीरिया को विषैले में बदलने की क्षमता को सामने रखा है। एककोशिकीय संस्कृतियों पर प्रयोगों में गैर-विषाक्त संस्कृतियों को विषजन्य संस्कृतियों में परिवर्तित करने की संभावना की पुष्टि की गई थी। वर्णित घटना को लाइसोजेनिक रूपांतरण कहा जाता है। ग्रेविस के टॉक्सिजेनिक उपभेदों से प्राप्त हल्के वायरस की मदद से, कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया ग्रेविस के गैर-टॉक्सिजेनिक वेरिएंट को टॉक्सिजेनिक में परिवर्तित करना संभव था।

ई. वी. बकुलिना, एम. डी. क्रायलोवा ने सुझाव दिया कि महामारी प्रक्रिया में फोकल रूपांतरण महत्वपूर्ण हो सकता है। इस संबंध में, प्रकृति में कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया के विषैले उपभेदों के निर्माण में इसकी भूमिका का अध्ययन शुरू किया गया था। विषाक्तता रूपांतरण की संभावना न केवल फेज-बैक्टीरिया प्रणालियों में, बल्कि प्राकृतिक परिस्थितियों में भी दिखाई गई थी। लेकिन स्थानीय संस्कृतियों में, कई शोधकर्ताओं के अनुसार, यह प्रक्रिया बहुत बार नहीं की जाती है। इसके कारण संभवतः समशीतोष्ण फेज के उत्पादकों की अनुपस्थिति, स्थानीय उपभेदों की फेज संवेदनशीलता जो संदर्भ उपभेदों से भिन्न है, और इसलिए वे कार्रवाई के ज्ञात स्पेक्ट्रम के परिवर्तित फेज के प्राप्तकर्ता नहीं हो सकते हैं।

केवल माइक्रोबियल आबादी के एक हिस्से में स्टैफिलोकोकल और स्ट्रेप्टोकोकल फेज की कार्रवाई के तहत डिप्थीरिया बेसिली में विषाक्त गुणों का रूपांतरण सफल था। हाल के वर्षों के कार्यों में, महामारी प्रक्रिया में फ़ेज़ रूपांतरण के मुद्दे को और भी अधिक संयमित मूल्यांकन प्राप्त हुआ है। ऐसा माना जाता है कि डिप्थीरिया की महामारी प्रक्रिया में टॉक्स+ कोरिनेफेज स्वतंत्र भूमिका नहीं निभाते हैं। गैर-विषैले छड़ों के वाहक केवल टॉक्सिजेनिक स्ट्रेन के साथ टॉक्स+फेज से संक्रमित हो सकते हैं, और स्टेफिलोकोकल फेज गैर-विषैले कोरिनेबैक्टीरिया को परिवर्तित करने में सक्षम नहीं हैं। मानव शरीर में विषाक्तता की दिशा में रूपांतरण के कार्यान्वयन के लिए, जाहिरा तौर पर, वाहक के निकट संपर्क की उपस्थिति आवश्यक है, जिसमें एक परिवर्तित फेज होता है, वाहक के साथ, जो इस फेज के लिए एक तनाव लाइसोसेंसिव को स्रावित करता है। विष बनाने की क्षमता के अलावा, डिप्थीरिया जीवाणु में हाइलूरोनिडेज़, न्यूरोमिनिडेज़, डीऑक्सीराइबोन्यूक्लिज़, कैटालेज़, एस्टरेज़, पेरोक्सीडेज़ जैसे रोगजनक कारक होते हैं। बाह्यकोशिकीय चयापचय उत्पादों के अध्ययन से टॉक्सिजेनिक और नॉन-टॉक्सिजेनिक डिप्थीरिया कोरिनेबैक्टीरिया के बीच कोई अंतर नहीं दिखा।

वर्तमान में, कोरिनेबैक्टीरियम डिप्थीरिया की अंतःविशिष्ट टाइपिंग के लिए, ऊपर वर्णित जैव रासायनिक विधि के अलावा, सीरोलॉजिकल और फेज विधियों का उपयोग किया जा सकता है।

सीरोलॉजिकल प्रकारों की उपस्थिति प्रकार-विशिष्ट, थर्मोस्टेबल, सतह और थर्मोलैबाइल एंटीजन के कारण होती है।

कई सीरोलॉजिकल टाइपिंग योजनाएं हैं। हमारे देश में, वी. एस. सुसलोवा और एम. वी. पेलेविना द्वारा प्रस्तावित योजना का उपयोग किया जाता है, लेकिन यह सभी गैर-विषाक्त उपभेदों का वर्गीकरण सुनिश्चित नहीं कर सकता है। सीरोटाइप की संख्या बढ़ रही है। I. इविंग ने 4 सीरोलॉजिकल प्रकारों की उपस्थिति स्थापित की - ए, बी, सी और डी; डी. रॉबिन्सन और ए. पीनी 5 प्रकार - I, II, III, IV और V. L.P. डेल्यागिना ने 2 और सीरोलॉजिकल प्रकारों की पहचान की। ऐसा माना जाता है कि सीरोलॉजिकल प्रकारों की संख्या बहुत अधिक है, और मुख्य रूप से माइटिस प्रकार के कारण। साहित्य में उपलब्ध कुछ आंकड़ों से, संक्रामक प्रक्रिया के विभिन्न रूपों और विभिन्न महामारी विज्ञान स्थितियों में एक या दूसरे सीरोटाइप के आवंटन में कोई नियमितता स्थापित नहीं की गई है। विभिन्न सीरोलॉजिकल प्रकारों से संबंधित फसलों की अलग-अलग आक्रामकता पर डेटा के साथ, ऐसी रिपोर्टें भी हैं जिनमें सीरोलॉजिकल प्रकार और फसलों की रोगजनकता के बीच संबंध को खारिज कर दिया गया है।

यह विशेषता है कि विभिन्न क्षेत्रों में विभिन्न सीरोलॉजिकल प्रकार पाए जाते हैं। महामारी विज्ञान विश्लेषण के लिए सीरोलॉजिकल टाइपिंग का उपयोग किया जा सकता है।

छिटपुट रुग्णता की स्थितियों में, वाहकों की संख्या को सीमित करते हुए, जब संक्रमण के स्रोत की खोज करना अधिक कठिन होता है, तो फ़ेज़ टाइपिंग विधि महत्वपूर्ण हो जाती है, जिससे कोरिनेबैक्टीरिया को सीरोलॉजिकल और सांस्कृतिक वेरिएंट में विभाजित करना संभव हो जाता है। कल्चर से पृथक किए गए फेज के गुणों के अनुसार और विशिष्ट बैक्टीरियोफेज के प्रति कल्चर की संवेदनशीलता के अनुसार अंकन किया जा सकता है। आर. सारागिया और ए. मैक्सिमेस्को द्वारा प्रस्तावित योजना सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाती है। यह आपको सभी सांस्कृतिक प्रकारों के विषैले और गैर विषैले उपभेदों को लेबल करने की अनुमति देता है। 22 विशिष्ट फ़ेज़ की सहायता से, संस्कृतियों को 3 समूहों में विभाजित किया जा सकता है, जिसमें 21 फ़ेज़ वेरिएंट संयुक्त होते हैं: समूह 1 - मिटिस प्रकार के टॉक्सिजेनिक और गैर-टॉक्सिजेनिक उपभेद (फेज वेरिएंट I, la, II, III); दूसरा - इंटरमेडिन्स प्रकार के टॉक्सिजेनिक और गैर-टॉक्सिजेनिक उपभेद और गैर-टॉक्सिजेनिक ग्रेविस (फेज वेरिएंट IV, V, VI, VII); तीसरे समूह में 13 फ़ेज़ वेरिएंट (आठवीं से XIX तक) शामिल किए गए थे, जो ग्रेविस टॉक्सिजेनिक उपभेदों को मिलाते थे।

इस योजना का रोमानिया में पृथक और 14 देशों के संग्रहालयों से प्राप्त बड़ी संख्या में उपभेदों पर परीक्षण किया गया था। 62% उपभेदों में फेज टाइपिंग सकारात्मक थी, विशेष रूप से ग्रेविस प्रकार के उपभेदों को सफलतापूर्वक चिह्नित किया गया था। उत्तरार्द्ध में, फागोवेरिएंट में से एक से संबंधित 93% में स्थापित किया गया था। इन लेखकों की योजना के अनुसार ग्रेविस प्रकार के टॉक्सिजेनिक उपभेदों में प्रकार के फेज के साथ विशिष्ट प्रतिक्रियाएं विभिन्न वायरस के साथ उपभेदों के संक्रमण पर आधारित होती हैं।

हमारे देश में फेज टाइपिंग के क्षेत्र में शोध एम. डी. क्रायलोवा द्वारा किया गया था। लेखक ने प्लाज़्माकोएग्युलेटिंग स्टेफिलोकोसी को टाइप करने के लिए विलियम्स और रिपन द्वारा प्रस्तावित सिद्धांत के आधार पर एक फेज लेबलिंग योजना विकसित की: फेज वैरिएंट को उस प्रकार के फेज के नाम से नामित किया गया था जिसने इसे परीक्षण कमजोर पड़ने में शामिल किया था। एम. डी. क्रायलोवा की योजना में फेज और फेज वेरिएंट को लैटिन वर्णमाला के अक्षरों द्वारा दर्शाया गया है: बड़े अक्षर - फेज जो संगम और अर्ध-संगम लसीका देते हैं, लोअरकेस - सजीले टुकड़े के रूप में लसीका देते हैं। इसके आधार पर, गैर-टॉक्सिजेनिक कोरिनेबैक्टीरियम ग्रेविस वेरिएंट के लिए एक संशोधित फेज टाइपिंग योजना और टॉक्सिजेनिक कोरिनेबैक्टीरियम ग्रेविस वेरिएंट के लिए एक फेज टाइपिंग योजना विकसित की गई थी।