Ролята на гъбичната инфекция в човешката патология. Диагностика на микози

Съгласно инструкциите SP 1.2.036-95 на Държавния комитет за епидемиологичен надзор на Руската федерация, Москва, 1996 г. "Процедурата за отчитане, съхранение, трансфер и транспортиране на микроорганизми от групи на патогенност I-IV" според епидемиологичната опасност , дрожди и плесени, както и дерматофитите, принадлежат към групи III-IV патогени на инфекциозни заболявания, поради което при работа с тях е необходимо да се спазват специални правила за безопасност, промишлена хигиена, противоепидемичен режим и лична хигиена, насочени за осигуряване на лична и обществена профилактика на инфекции, алергизации и разпространение на инфекции.

Лабораторията за работа с микроорганизми от III-IV група на патогенност е оборудвана с лесно дезинфекцираща се мебел, включваща шкафове за чисто лабораторно стъкло, реактиви, хранителни среди, подходящо оборудване и инструменти. Спиртни лампи или газови горелки, микробиологични бримки, микологични шпатули, шпатули, епилационни и анатомични пинсети, нокторезачки, скалпели, ножици, лъжици Фолкман, пипети, пипети на Пастьор, дисекционни игли, стъклени пръчици, спринцовки, нискооборотна центрофуга, разклащащи апарати са необходими за работа , петриеви панички, епруветки, стъклария, ултравиолетова лампа на Ууд с филтър, микроскопи, осветители, термостати, автоклави, хладилници, сушилни, бактерицидни лампи.

Вземане на материал за изследване

Микроскопската диагностика на микозите включва откриването на мицел и спори в изследвания биоматериал. Като изследван биоматериал се считат епидермалните люспи, косата и ноктите. Задължително изискване преди провеждане на изследването е липсата на локално лечение в продължение на поне десет дни и системно лечение в продължение на един месец. Трябва да се има предвид, че използването на детергенти от пациента (особено тези, съдържащи антисептици) може да повлияе на надеждността на резултатите от изследването, така че измиването е забранено 3-4 дни преди него.

Инструментите за вземане на биоматериал и подготовка на препарата са показани на фигурата:

снимка. Инструменти за вземане на биоматериал и подготовка на лекарството.

Ако подозирате микоза на гладка кожа, микоза на ръцете и краката без увреждане на нокътните плочи, епидермалните люспи се изследват от повърхността на лезията. При микоза на гладка кожа е за предпочитане да се изследва епидермиса от маргиналната зона на лезията, тъй като в централната зона патологичният процес често се разрешава. В същото време не трябва да забравяме за възможността за увреждане на велусната коса, което определя избора на по-нататъшна тактика на лечение. Космите се отстраняват с пинсети за епилация. При микоза на ръцете и краката без увреждане на нокътните плочи се изследват люспите на епидермиса от третата и четвъртата интердигитална гънка, както и от дланите и от арката на краката.

При съмнение за гъбична инфекция на дълга коса (скалп, брада, мустаци и пубис), както и на велус косми, се извършва тяхното микроскопско изследване. При трихофитоза на скалпа косата се откъсва на разстояние 1-2 mm над нивото на устието на космения фоликул, като същевременно прилича на пънове и точки. Ако косата не може да бъде уловена с пинсети за епилация, тогава в този случай те се опитват да я отстранят с острия край на скалпел или дисекционна игла.

При микроспория на скалпа косата се откъсва на височина 5-6 мм, наподобяваща "наклонена поляна". С микроскопия се изследват именно тези счупени косми. Космите от лезиите се отстраняват с помощта на пинсети.

С фавус се изследва изтъняване на косата над повърхността на скутулата.

При съмнение за онихомикоза се изследва лесно раздробен материал от зоната на субунгвална хиперкератоза, както и самите променени нокътни плочки.

Трябва да се разбере, че всеки тестов материал от пациент е потенциално инфекциозен, така че трябва да се вземе в стая, където се извършва ежедневно мокро почистване с дезинфектанти (5% разтвор на хлорамин, 5% избистрена белина) и въздухът се стерилизира с ултравиолетови облъчватели (включват се за 1-1,5 часа и влизат в стаята 20 минути след изключване). Термостатите се избърсват всяка седмица с 0,5% разтвор на хлорамин, стените се третират с дезинфектанти веднъж месечно. При работа лекарят трябва да бъде защитен с маска, очила, халат и ръкавици. Инструменти за вземане на биоматериал, ръкавици, предметни стъкла и покривни стъкла, пелерини и салфетки за еднократна употреба се дезинфекцират след употреба чрез потапяне в 1,5% разтвор на клиндезин-екстра (5% разтвор на фенол или 5% разтвор на лизол) за 30 минути. Останалият патологичен материал (коса, кожа и люспи на ноктите) се автоклавира при 2 atm. и 132˚ С за 20 минути (контрола - урея) или при 1,5 атм. и 126˚ C за 30 минути (контрола - бензоена киселина), или се вари 1 час във вода или 30 минути в 1% разтвор на сапунена сода.

Патологичният материал се транспортира до лабораторията в специален контейнер или метални велосипеди, предпазвайки го от пряка слънчева светлина. В придружаващия документ се посочват фамилията, името, отчеството, полът, възрастта и адресът на пациента, предложената клинична диагноза, наименованието на материала за изследване, времето на вземане, местоположението на фокуса, номерът на историята на заболяването. , фамилията на лекаря и институцията, изпращаща материала.

Приготвяне на лекарството

След получаване на люспите на епидермиса от лезията, препаратът се подготвя за микроскопско изследване. 1-2 капки 20% КОН се нанасят върху тестовия материал, поставен върху предметно стъкло, след което предметното стъкло се нагрява върху пламък на горелка, докато по периферията се появи белезникав ръб от кристализирана основа. След това препаратът се покрива с покривно стъкло (което се притиска с дисекционна игла) и се микроскопира. Изследването трябва да се извърши не по-късно от 2 часа след приготвянето на препарата поради възможността за алкална кристализация.

Методът за приготвяне на препарат за коса при съмнение за гъбична инфекция съответства на описания по-горе, с единствената разлика, че покривното стъкло не се притиска с дисекционна игла (за да се избегне смачкване на косъма).

снимка. Появата на ръб от кристализирана основа.

За приготвяне на препарата парчета отрязани нокътни плочи се потапят в епруветка с 20% КОН и се излагат в термостат за 1 час (t≈37˚C), след което получената желеобразна маса се прехвърля върху предметно стъкло , покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп.

За разлика от нокътните плочки, проби от лесно раздробения материал от зоната на субунгвална хиперкератоза се поставят върху предметно стъкло, върху тях се нанасят 1-2 капки 20% КОН, след което предметното стъкло се нагрява върху пламък на горелка до белезникав цвят. по периферията се появява ръб от кристализирала основа (фиг. 65). След това препаратът се покрива с покривно стъкло, което се притиска внимателно с дисекционна игла и се изследва под микроскоп.

Микроскопия на лекарството

За микроскопско изследване се използва лабораторен микроскоп без използване на потапяне. Микроскопията на люспите на епидермиса, люспите от областта на субунгвалната хиперкератоза, както и разтворените нокътни плочи се извършва първоначално при ниско увеличение (×100) и ако се открият мицелни нишки, наподобяващи „карта на реките“ (железопътни линии), обективът се превключва на по-голямо увеличение (×400) . Мицелът при средно увеличение прилича на стъклени пръчки със странна форма, които променят степента на пречупване на светлината при работа с микровинт на микроскоп.

Микроскопията на препарата за коса се извършва веднага при средно увеличение (×200 или ×400). При трихофитоза вътре в косъма се откриват големи спори, подредени в редици, докато при микроспория има множество малки мозаечно подредени спори вътре в косъма (оттук и терминът "микроспория"). Понякога се отбелязва наличието на капачка от външната страна на косъма - това е типично както за трихофитозата (вариант на ектотрикс, докато спорите са големи), така и за микроспорията (в този случай капачката се състои от малки спори). Микроскопия на засегнатата коса с фавус, вътре в косата, в допълнение към натрупванията на кръгли или многоъгълни спори, се откриват въздушни мехурчета и мицелни нишки.

Препаратите трябва да се прегледат не по-късно от 2 часа от момента на приготвянето им, поради възможността от алкална кристализация. За да се повиши надеждността на диагнозата, трябва да се направят няколко препарата (поне два) от една лезия. Възможните грешки в микроскопската диагностика на микозите могат да бъдат свързани както с лошото качество на подготовката на препаратите (прегряване над пламъка на горелката, което е придружено от преждевременна алкална кристализация), така и с недостатъчен опит на изследователя (когато нишките на мицела често се грешат за тъканни влакна, случайно открити в препарата).

ЛАБОРАТОРНА ДИАГНОСТИКА НА МИКОЗИ

Вземане на материал за лабораторно изследване на гъбичките.

1. OST 42-21-2-854: заповед № 222/80 от 27.06.00 г.
2. Оборудване: пинсети, предметни стъкла, ножици, лъжица на Фолкман.
4. Показания: гъбични заболявания.
5. Усложнения: няма.

Подготовка на стаята за лечение:

Промяна на решенията.

Готвач:
-1% разтвор на хлорамин за парцали
-3% разтвор на хлорамин - за дезинфекция на превръзки и пинсети
- разтвор за измиване (156 ml водороден прекис + 5 g прах за пране + 839 ml дестилирана вода) - за обработка на пинсети
- 6% разтвор на водороден прекис - за обработка на ръкавици.

Алгоритъм за манипулиране.

Трябва да вземете пинсети, предметно стъкло, лъжица Volkmann, ножици;
- поканете пациента в съблекалнята;
- пациентът сяда на стол или диван;
- m / s стойност.

Техника:

От лезията с пинсети вземете кожни люспи и косми;
- поставете взетия материал върху предметно стъкло и го затворете с друго предметно стъкло.
- измийте ръцете си със сапун;
- изпрати материала в лабораторията.

СЪБИРАНЕ НА МАТЕРИАЛ

Вземане на нокти за преглед.

Вземете ножици и предметни стъкла;
- отрежете парче от свободния ръб на нокътя с ножица;
- покрийте взетия материал с друго предметно стъкло;

Накиснете ножици и пинсети в 3% разтвор на формалин.

Правилното вземане на материал от засегнатите нокти е ключът към успешното микробиологично изследване. При вземане на материала те не винаги улавят области на нокътя, съдържащи жизнеспособни гъбички. Нежизнеспособните гъби в културата, разбира се, няма да растат и техният вид не може да бъде установен.

Площта на нокътя, която трябва да се вземе, се определя от формата на онихомикоза.

Така че, с повърхностна форма на онихомикоза, трябва да се направят изстъргвания от повърхността на нокътната плоча.

При най-честата дистална субунгвална форма най-жизнеспособните гъбички се намират под нокътната плочка. Материалът, който се изпраща за изследване, трябва да включва не само разрез на нокътната плоча, но и изстъргване от нокътното легло, изпод плочата.

Освен това трябва да се заснемат и участъци от непроменения нокът, тъй като най-активните гъбички се намират на границата между тях и засегнатите области на нокътя.

При проксимална поднокътна форма е трудно да се вземе материалът. В тези случаи понякога, особено ако ще се прави хистологично изследване или диференциална диагноза, се взема биопсия от нокътя, понякога се използва бормашина.

При паронихия се правят остъргвания от проксималния валяк и отдолу.

Във всички случаи, за да се избегне бактериално замърсяване, нокътят трябва да се третира с етилов алкохол преди вземане на пробата.

МИКРОСКОПИЧЕСКО ИЗСЛЕДВАНЕ

Микроскопското изследване на патологичен материал за гъбички се извършва в нативни и оцветени препарати.

За приготвяне на неоцветени препарати полученият материал се раздробява със скалпел или дисекционна игла и се поставя в средата на предметно стъкло. За по-ясно идентифициране на елементите на гъбичките материалът се избистря (мацерира). За тази цел те прибягват до помощта на различни вещества, най-често разяждащи алкали (KOH, NaOH), които разтварят епидермални люспи, слуз, гной, избистрят пигмента на косата и по този начин правят гъбите достъпни за изследване.

Върху размекната кожа или люспи на ноктите, които се поставят в средата на предметно стъкло, се нанасят 1-3 капки 20-30% разтвор на КОН (NaOH). Тестовият материал в алкални капки се нагрява внимателно върху пламъка на спиртна лампа, докато по периферията на капката се появи деликатен бял ръб от алкални кристали. Не трябва да се нагрява до кипене. След нагряване капката се покрива с покривно стъкло, като се избягват въздушните мехурчета.

R. A. Arabian и G. I. Gorshkova (1995) препоръчват препаратите от кожни люспи и косми да се оставят избистрени и покрити с покривно стъкло за 5-10 минути, а за нокътните плочи за 30-40 минути преди микроскопия.

Избистрянето на препаратите може да се извърши без нагряване, за това те се оставят в 20% разтвор на КОН за 30-60 минути или се използват други методи за избистряне на патологичен материал: хлоралактофенол по Аман; лактофенол; разтвор, съдържащ 15% диметилсулфоксид и KOH във вода. Добри резултати се получават след избистряне на нокътните плочки, поставени в 5% разтвор на КОН за 24 часа, в този случай не се изисква нагряване.

Микроскопското изследване се извършва на конвенционален лабораторен микроскоп без потапяне.

Кондензаторът на микроскопа трябва да се спусне, апертурата да се стесни. В началото лекарството се намира върху стъклото при малко увеличение (40x), последващото изследване се извършва при по-голямо увеличение (100x);

препаратът се изследва детайлно при увеличение 400х. Трябва да се тестват множество лекарства, за да се увеличи надеждността на анализа и да се избегнат фалшиви положителни резултати.

Грешки при микроскопската диагностика на гъбичките могат да възникнат както поради дефекти в подготовката на препарата, така и поради недостатъчен опит на лаборанта.

Производствените дефекти се свързват предимно с:
с прегряване на лекарството, което може да доведе до утаяване на алкални кристали, разрушаване на косата и появата на финозърнест гниене в патологичния материал.

Линейното подреждане на удължени, равномерни алкални кристали много напомня на нишки от септиран мицел, дори върху чисто стъкло без патологичен материал.

Диференциално-диагностичните характеристики са изключителната еднородност на кристалите, тяхната стъкловидна прозрачност, гъвкавостта на ръбовете и липсата на неразривна връзка между един елемент и друг. В съмнителни случаи се препоръчва към препарата да се добавят капчици леко загрята дестилирана вода, които бързо разтварят алкалните кристали.

За елементите на гъбичките те могат да бъдат сбъркани с:

- капчици мазнина,
- въздушни мехурчета
- памучни конци за облекло
- и така наречената "мозаечна гъба".

Кожните липиди, разграждането на мастните клетки и кератохиалиновите зърна, особено тези с правилна форма, могат да наподобяват отделни гъбични спори. Но разнообразието от форми и, най-важното, размери, липсата на вътрешна структура на образувания (вакуоли, черупки) говорят против гъбичната природа на тези елементи. Липидите също могат да попаднат в лекарството при вземане на патологичен материал от недостатъчно почистена лезия.

Въздушните мехурчета могат да приличат на спори на клетки, подобни на дрожди, но за разлика от последните, те са заобиколени от плътна тъмна обвивка и дори най-малките въздушни мехурчета винаги са по-големи от гъбичните клетки.

Нишките от тъканта на чорапи, дрехи и др. Обикновено лежат отделно от патологичния материал, те винаги са по-големи от хифите, по-груби и не септирани.

„Мозаечната гъба“ е артефакт, който възниква по време на процеса на кристализация (вероятно поради разграждането на холестерола). Има формата на мрежа или бримки, чиито очертания съответстват на границите на роговите люспи; за разлика от нишките на мицела, никога не пресича стените на епидермалните клетки.

В някои лаборатории препаратите за микроскопско изследване се избистрят с 15–30% разтвор на КОН, към който се добавят 5–10% търговско мастило Parker’s Superchrome Blue-Black.

При това оцветяване хифите и спорите са оцветени в синьо.

Микроскопията разкрива нишковидни хифи на гъбички или пъпкуващи клетки (фиг. 1).

Така микроскопията дава заключение само за гъбичния характер на инфекцията, но не и за вида на гъбичния причинител.

Разбира се, ефективността на микроскопското изследване зависи от квалификацията на лабораторния персонал.

Ориз. 1. Микроскопия на остъргвания от нокти, засегнати от T. rubrum. Виждат се хифите на гъбата.

КУЛТУРОЛОГИЯ

Материалът се инокулира върху стандартна среда на Sabouraud, често с антибиотични добавки. При диагностицирането на дерматофитни инфекции е обичайно към средата на Sabouraud да се добавя циклохексимид, който потиска растежа на заразените гъбички от въздуха. Има готови търговски среди, допълнени с антибиотици и циклохексимид. Трябва да се помни, че много недерматофитни плесени и някои видове Candida не растат в среда с циклохексимид, така че се препоръчва да се инокулира върху среда на Sabouraud с циклохексимид и върху среда без него. Видовата идентификация обикновено се извършва чрез микроскопско изследване на отглежданата култура или чрез субкултура върху селективна среда (фиг. 2-15).

Ориз. 2. Култура на гъбичките T. rubrum, изолирани от засегнатите нокти. Получено върху среда на Sabouraud (вляво) и царевичен агар (вдясно).

Ориз. 3. Култура на гъбата T. mentagrophytes var. interdigitale, изолиран от засегнатите нокти. Получено от носителя на Сабуро.

Ориз. 4. Култура на гъбата Candida albicans. Получено от носителя на Сабуро.

Ориз. 5. Култура на гъбата Torulopsis glabrata, изолирана от засегнатите нокти. Получено от носителя на Сабуро.

Ориз. 6. Култура на гъбата Ulocladium sp., изолирана от засегнатите нокти.

Ориз. 7. Микроморфология на Acremonium sp., изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 8. Микроморфология на Fusarium sp., изрязани от засегнатите нокти.

Ориз. 9. Микроморфология на Scopulariopsis sp., изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 10. Микроморфология на Candida albicans, изолирана от засегнатите нокти.

Ориз. 11. Микроморфология на Altemaria sp., изолирана от засегнатите нокти.

Ориз. 12. Микроморфология на Aspergillus sp., изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 13. Микроморфология на Ulocladium sp, изолиран от засегнатите нокти.

Ориз. 14. Микроморфология на Chaetomium sp., изолиран от засегнатите нокти.

Фиг. 15. Панел за подаване на хранителни вещества за идентифициране на дерматофити (вляво - T rubrum култура, вдясно - T mentagrophytes var. mterdigitale).

Отляво надясно: среда на Сабуро, среда на Бакстър, среда на Кристенсен, царевичен агар

Трябва да се отбележи, че някои плесени, включително дерматофити, растат бавно в културата, за 2-3 седмици.

Дори при спазване на всички правила за събиране на материал, с добро лабораторно оборудване и висококвалифициран персонал, броят на положителните резултати от културното изследване е много малък.

Според чуждестранна литература процентът на положителните изследвания не надвишава 50.
Процентът на положителните резултати в най-добрите местни лаборатории едва достига 30.

Така при 2 от всеки 3 случая на онихомикоза не може да се установи нейната етиология.

ЛУМИНЕСЦЕНТНО ИЗСЛЕДВАНЕ

През 1925 г. Маргарет и Девез откриват, че косата, засегната от някои дерматофити, показва характерна яркост при ултравиолетови лъчи, преминали през филтър на Byd. Byda стъкло се състои от бариев сулфат, съдържа около 9% никелов оксид; той пропуска лъчи с дължина 365 nm. Като източник на ултравиолетови лъчи могат да се използват различни устройства. Природата на сиянието не е точно установена. Косата продължава да свети след смъртта на гъбичките и след опити за извличане на флуоресцентния материал с гореща вода или студен разтвор на натриев бромид. Интензитетът и естеството на сиянието зависят от рН на разтвора. Смята се, че флуоресцентното вещество се появява в процеса на взаимодействие между гъбичките и растящата коса.

Сиянието в ултравиолетовите лъчи, преминали през филтър на Wood, е характерно само за коси, засегнати от гъбички от рода Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium и понякога M. gypseum и M. nanum), т.к. както и Trichophyton schonleinii. Косата, засегната от микроспори, особено M. canis и M. audouinii, дава най-ярък блясък; косата, засегната от T. schonleinii, има матова зеленикава флуоресценция.

Блясък се наблюдава само при напълно засегната от гъбички коса. Може да не присъства в пресни лезии. В тези случаи космите трябва да се епилират от маргиналната, най-активна зона, като блясъкът може да се открие в корена на косъма.

Луминесцентният метод може да се използва както за диагностика и контрол на ефективността на лечението при отделни пациенти, така и в епидемиологични огнища. Компактните мобилни апарати са удобни за преглед на контактни лица в училища, детски градини и др.

Луминесцентното изследване трябва да се извършва в затъмнено помещение, лезиите трябва да бъдат предварително почистени от крусти, остатъци от мехлеми и др. Луминесцентният метод може да се използва за диагностициране на pityriasis versicolor, особено когато лезиите са локализирани върху скалпа. Лезиите при това заболяване имат червеникаво-жълт или кафяв блясък. Този блясък обаче не е строго специфичен, тъй като може да се наблюдава при наличие на пърхот по скалпа и дори при здрави хора в областта на устието на космените фоликули по лицето и горната част на тялото. Идентифициран чрез луминисцентен метод, засегнатата коса трябва да бъде подложена на микроскопско изследване.

ИМУНОЛОГИЧНИ И БИОЛОГИЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ

Имунологичните методи на изследване се използват за идентифициране на специфични промени в тялото и серологична диагностика на гъбични заболявания. За откриване на специфични антитела в серума на пробата се извършват следните серологични реакции: аглутинация, утаяване, фиксиране на комплемента, имунофлуоресценция със съответните антигени.

Алергичното състояние на тялото на пациента се открива с помощта на алергични кожни тестове. Алергените се прилагат върху скарифицираната кожа по Pirque или чрез втриване в кожата по Moro, интрадермално по Mantoux, а също и чрез инжектиране в кожата. С помощта на тези тестове се откриват алергични реакции от незабавен и забавен тип, което позволява да се оцени състоянието на хуморалния и клетъчния имунитет.

За откриване на специфична сенсибилизация на лимфоцитите се използват реакциите на базофилна дегранулация, агломерация и промяна, тест за бластна трансформация, потискане на миграцията на макрофагите и др.

Сравнението на резултатите от серологичните и алергичните реакции е полезно както за диагнозата, така и за прогнозата на хода на микозите.

биологичен метод. Използва се за лабораторна диагностика на дълбоки и особено опасни микози. Въз основа на заразяване на животни с патологичен материал от пациент или култура от изследваната гъбичка. Извършва се в специални лаборатории.

ХИСТОЛОГИЧНО ИЗСЛЕДВАНЕ

Хистология на кожни микози, причинени от дерматофити

Патологичните промени в лезиите се дължат на въвеждането на гъбички в роговия слой на епидермиса, косата и ноктите и възпалителен отговор на кожата, който може да бъде остър, подостър или хроничен. Диагнозата може да се счита за установена само ако в хистологичните препарати се открият елементи от гъбички. За това се използват различни хистологични оцветявания, най-информативната е периодичната киселинна реакция (PAS), която позволява да се идентифицират полизахаридите, присъстващи в целулозата и хитина на клетъчната стена на повечето дерматофити (оцветяване Shifu и неговите модификации). Можете също така да използвате реакции на сулфатиране и импрегниране на хистологични срезове със сребро [Khmelnitsky OK, 1973; Lewer W. F. и Schaumburg-Lewerl., 1983].

Гъбите в роговия слой на епидермиса, дори когато се използват специални оцветители, се откриват в малки количества под формата на мицелни нишки и спори. В редки случаи, когато има много гъбички в лезиите, те могат да бъдат открити в срезове, оцветени с хематоксилин-еозин, като деликатни базофилни структури в роговия слой.

Възпалителните промени в епидермиса могат да варират от лек интра- и извънклетъчен оток на шиповидни клетки до тежка спонгиоза. Спонгиозата обикновено се развива с дисхидротични варианти на микоза на краката и ръцете, клинично в тези случаи се отбелязват везикули. Причината за тази реакция обикновено е T. mentagrophytes var. interdigitale. Понякога се отбелязва изразена хиперкератоза в епидермиса, която най-често се наблюдава при микоза, причинена от T. rubrum.

Хистологичните промени в дермата са неспецифични и съответстват на остро, подостро и хронично възпаление.

При микоза на гладка кожа, причинена от T. rubrum, понякога се откриват гъбички във велусната коса и космените фоликули. Около фоликулите се развива възпалителна реакция, която поради навлизането на гъбички в дермата може да придобие грануломатозен характер. Централната част на инфилтрата в тези случаи може да претърпи нагнояване и некроза, докато периферната част може да се състои от лимфоцити, хистоцити, епителиоидни и многоядрени гигантски клетки, вътре в които понякога се намират гъбични спори. Размерът на спорите тук достига 6 микрона в диаметър, в косата обикновено не надвишава 2 микрона.

При инфилтративно-гнойна форма на микоза на скалпа и зоната на растеж на брадата и мустаците, гъбичните елементи се откриват в космения фоликул, вътре и около косата. В косата те се определят точно над зоната на началото на кератинизацията (приблизително на ниво от 30 микрона). В дермата се забелязва възпалителна реакция с различна интензивност, най-изразена при kerion Celsii. При остра гнойна реакция в инфилтрата се забелязват голям брой неутрофилни левкоцити, гъбичните елементи в този случай могат напълно да изчезнат. В хроничния ход на процеса инфилтратът може да придобие грануломатозен характер, в него се появяват многоядрени гигантски клетки. За потвърждаване на диагнозата при липса на гъбички в инфилтрата могат да се използват методи за имунофлуоресцентно оцветяване. За тези цели се използва белязан с флуоресцеин антисерум срещу T. mentagrophytes, който прави възможно откриването на гъбични антигени в косата и в перифоликуларния инфилтрат.

Образуването на инфилтративно-гнойна реакция на кожата с микоза на скалпа (kerion Celsii) и зоната на растеж на брадата и мустаците, причинена от гъбичките M. canis, T. tonsurans и T. verrucosum, е проява на имунологична реакция. Това се доказва от:

1. Тенденцията на лезиите към спонтанна резолюция.

2. Липсата на гъбични елементи с много изразена възпалителна реакция от кожата с микоза, причинена от T. verrucosum (faviforme) и T. tonsurans.

3. Постоянна положителна реакция в отговор на интрадермално приложение на трихофитин с инфилтративно-гнойни форми на микоза, причинена от зоофилни трихофитини (например T. tonsurans), и отрицателна - с повърхностни микози, причинени от същия T. tonsurans.

При фавус в роговия слой на епидермиса се откриват голям брой мицелни нишки и единични спори на гъбата. Скутулата е представена от ексудат, паракератотични клетки на епидермиса, клетки на възпалителния инфилтрат, както и мицелни нишки и гъбични спори, които са разположени главно в периферната зона на скутулата. В активния стадий на заболяването в дермата около дегенеративните космени фоликули има изразен възпалителен инфилтрат, съдържащ многоядрени гигантски и плазмоцити. В старите лезии липсват косми и мастни жлези, има явления на фиброза.

Хистология на микози на кожата и лигавиците, причинени от гъбички, подобни на дрожди

При кандидоза на кожата и лигавиците, гъбичките от рода Candida се намират в роговия слой на епидермиса или в повърхностните слоеве на епитела на лигавицата. Гъбичните елементи обикновено са малко, те са добре оцветени чрез PAS-реакция или по Грам; представени под формата на нишки от септиран разклонен мицел с диаметър 2-4 микрона или яйцевидни спори с диаметър 3-5 микрона. Откриването на мицелната форма на гъбата е от диагностично значение.

При хистологично изследване на хронична грануломатозна кандидоза на кожата и лигавиците гъбичните елементи също се откриват предимно в роговия слой на епидермиса или в най-горните участъци на епитела на лигавицата, но понякога и в спинозния слой, вътре в косата и в дермата. Има също изразена хиперкератоза и папиломатоза; в дермата - плътен възпалителен инфилтрат, състоящ се от лимфоидни клетки, неутрофили, плазма и многоядрени гигантски клетки. Инфилтратът може да се разпростре в подкожната мастна тъкан.

При pityriasis versicolor голям брой гъбични елементи се намират в роговия слой на епидермиса под формата на деликатни базофилни структури, които са ясно видими дори при оцветяване на препарати с хематоксилин-еозин. Гъбите са представени както от нишки, така и от спори.

При фоликуларната форма на pityriasis versicolor има натрупване на рогови маси и клетки на възпалителния инфилтрат в разширените устия на космените фоликули. Около фоликулите също се отбелязва възпалителен инфилтрат. При PAS реакцията сферични или овални спори на гъбичките с диаметър 2-4 µm се откриват в устието на космените фоликули, а понякога и в перифоликуларния инфилтрат. Мицелът никога не се разкрива.

Нарушаването на пигментацията на кожата при пациенти с pityriasis versicolor се дължи на способността на гъбата Pityrosporum да произвежда вещество, което инхибира процеса на образуване на пигмент в епидермиса. Електронномикроскопското изследване на кожни биопсии от хипопигментирани зони показа, че в меланоцитите се образуват много малки меланозоми, които не могат да проникнат в кератиноцитите. В хиперпигментираните участъци от кожата, напротив, меланозомите са големи и съдържат голямо количество меланин.

Според статистиката около 20% от населението на нашата страна по един или друг начин страда от микоза. Но не всички от тях търсят професионална помощ. Една от причините е, че хората просто не познават всички симптоми и прояви на това заболяване.

Симптоми на микоза

На първо място, заслужава да се отбележи, че това не е конкретно заболяване, а група от различни гъбични лезии на кожата и нейните придатъци. Следователно симптомите могат да бъдат доста разнообразни, но най-често се отбелязват следните:

• Появата на лющещи се петна по кожата. Най-често се появяват между пръстите на краката, върху кожата на краката. Често те причиняват сърбеж, дразнене и други неприятни усещания.
• Промяна на цвета и структурата на ноктите. Те стават жълтеникави, чупливи, ронят се и се ексфолират, повърхността им може да е неравна и неравна.
• Пукнатини по кожата. Често при гъбични инфекции кожата на краката загрубява и започва силно да се напуква.
• Лоша миризма. Много пациенти се оплакват от неприятна миризма от засегнатата кожа, особено при микоза.

Когато се появят такива признаци, е необходимо да посетите дерматолог възможно най-скоро и да извършите пълна диагностика, за да определите кой тип микоза е засегнала кожата.

Методи за диагностициране на микози

Когато пациентите се обърнат към дерматолог с характерни признаци на гъбични кожни лезии, тогава най-често е достатъчен първичен външен преглед, за да може лекарят да постави диагноза. Единственият въпрос е какъв тип микоза е засегнала кожата.

Тази информация е необходима за определяне на по-нататъшна стратегия за лечение. За диагностика на микоза могат да се използват следните методи:

• Проучване на лампата на Ууд. Специален спектър на ултравиолетова светлина ви позволява да определите наличието на гъбични инфекции. Този метод е много прост и достъпен, с негова помощ можете не само да поставите диагноза, но и да наблюдавате хода на лечението. Но не позволява да се определи вида на микозата.
• Микроскопия. Един от най-простите и често срещани методи за диагностициране на микоза е микроскопско изследване на остъргвания от тъкани, засегнати от гъбичките. За целта се поставя върху предметно стъкло. Има два вида изследване на остъргването: с помощта на петна и с избелители.
• Бактериологична култура. Един от най-точните диагностични методи е засяване в резервоар върху хранителни среди. Според външния вид и характеристиките на израсналите колонии от гъбички лекарят може да определи вида на патогена. Недостатъкът на този метод е продължителността, отглеждането на колония може да отнеме 2-3 седмици. Освен това е възможно да се получи резултат само в половината от случаите.
• PCR диагностика. Това е един от най-точните и модерни диагностични методи, но може да са необходими няколко теста за определяне на вида на микозата, което изисква определени разходи.

Струва си да се отбележи, че диагнозата микоза е необходима, за да се определи най-ефективният метод за лечение на това заболяване. И ако не е възможно незабавно да посетите специалист, можете да използвате услугата, предоставяна от нашата клиника и

Първи прием

При назначаването микологът провежда преглед и предписва цялостно изследване.

Лабораторна диагностика

Най-ефективните методи за диагностициране на кожни микози са различни лабораторни тестове, които могат да идентифицират патогена и да помогнат при избора на терапевтичен режим. За идентифициране на причинителя на микозата се предписват следните лабораторни изследвания:

• хистологичен анализ;
• бактериологична култура;
• имунологични изследвания;
• PCR диагностика;
• културен преглед;
• микробиологични изследвания.

Микробиологичната диагностика помага да се открие гъбичката, да се определи нейният род и вид.

Микробиологичната диагностика е най-разпространеният и прост метод за откриване на микоза в кръвта и кожата. За да установите точна диагноза, трябва да знаете как правилно да съберете материала, необходим за изследването. Засегнатите косми трябва да се събират с пинсети. Ако кожата е заразена, тогава за микроскопия кожата трябва да се изстърже от увредената област. Целият взет материал се поставя в 30% разтвор на калиев хидроксид и след това върху предметно стъкло. Микробиологичната диагностика е в състояние да установи къде точно се намира гъбичката (вътре или извън косата, кожата) и нейния размер.

За да се предотврати погрешната диагноза на микозата, е необходимо правилно и компетентно да се вземе материалът за микробиологично изследване.

В медицината има такива методи за микробиологична диагностика:

• Микроскопия с нативни или неоцветени препарати. За да направите това, материалът се избистря с 10-30% разтвори на калиев или натриев хидроксид. След това обработеният материал се поставя върху лабораторно стъкло, където предварително е капнато малко глицерин. Покрийте отгоре със стъклена плоча и извършете анализа.
• Микроскопията на оцветени препарати се извършва по няколко начина, които идентифицират бактерии, диференцират различни бактерии и идентифицират различни гъбички.

Бактериологична култура

Бактериологичната култура е един от най-ефективните методи за диагностика.

Събирането на бактериологично засяване върху хранителна среда е точен начин за диагностициране на микоза. Предвид външния вид и характеристиките на израсналата колония от гъбички, дерматологът определя вида на патогена, причинил микозата. Единственият недостатък на изследването е, че отглеждането на колония отнема много време. Средно са необходими около 3 седмици, за да се открие щамът на патогена. В някои случаи методът не носи очакваните резултати.

PCR диагностика

PCR диагностичният метод включва идентифициране на причинителя на микоза с помощта на полимеразна верижна реакция. По време на изследването се повишава чувствителността на хибридизацията, което увеличава съдържанието на вирусна ДНК в тестовия материал. Този метод на изследване е нов и изисква няколко изследвания от пациента. Смята се, че този вид диагностика е доста скъпа, но дава точни резултати.

Културен преглед

На последния етап от диагнозата се препоръчват културни диагностични мерки. Методът се състои в получаване на култура от гъбичките, която след това се изпраща за изследване с помощта на микроскоп. Полученият материал се поставя върху изкуствено създадена хранителна среда и се идентифицира вида на патогена, външния вид, размера. След това се показва специално лечение, което е насочено към борба с определен тип причинител на микоза.

За диагностика на микози могат да се използват микроскопски, микологични (културни), алергични, серологични, биологични и хистологични методи на изследване. В зависимост от патогенезата материалът за изследване може да бъде гной, храчка, засегната коса, нокти, кожни люспи, костен мозък, лимфни възли, вътрешни органи, кръв, жлъчка, изпражнения, тъканни биопсии и др.

Микроскопското изследване включва микроскопиране на нативни (неоцветени) и оцветени цитонатривки. За приготвяне на нативни препарати косата, кожата и ноктите се избистрят в 10,30% разтвор на КОН или NaOH. Обработеният с основа материал се поставя върху предметно стъкло в капка глицерол, покрива се с покривно стъкло и се микроскопира (може да се използва фазово-контрастна микроскопия), което позволява да се изследва структурата на гъбичките, местоположението на спори, но окончателното заключение за вида на гъбата може да се направи само след културни изследвания.

За оцветяване на петна най-често се използват методите на Gram, Ziehl.Nielsen, Romanovsky-Giemsa. За оцветяване на дерматофити се използват и методите на Сабуро, Адамсън и др.

Провежда се културно (микологично) изследване, за да се изолира чиста култура на гъбичките и да се идентифицират. Използват се твърди и течни хранителни среди (Saburo, wort agar, Chapek и др.). Инкубацията в термостат (22,28ºС) е дълга (3,4 седмици). Чистата култура на гъбичките се идентифицира чрез комбинация от характеристики: формата на колониите, техния цвят, консистенция, микроскопска картина (естеството на мицела, местоположението на спорите, конидиефорите) и други признаци. на гъбични заболявания се извършват с гъбични антигени по общоприети методи, както и за диагностика на други инфекциозни заболявания (RA, RP, RSK, RNGA, RIF и др.).

Алергичните тестове могат да се извършват съгласно общоприетите методи чрез интрадермално приложение на подходящи алергени (полизахаридни и протеинови фракции от клетки или клетъчни мембрани, суспензия от клетки на убити гъбички, културни филтрати). За да откриете HNT, можете да използвате теста за дегранулация на тъканни и серумни базофили и да откриете HTH, реакцията на инхибиране на миграцията на фагоцитите, бластната трансформация на лимфоцитите.

Биологичните изследвания се извършват върху лабораторни модели (мишки, плъхове, морски свинчета, зайци, кучета, котки). Биологичният модел на микозата се използва за идентифициране на патогенността на патогена, изолиране на чиста култура и изследване на нови антимикотици. Хистологичното изследване позволява да се открие гъбичката в тъканите, да се проучи нейната морфология и характеристиките на патологичния процес, причинен от нея в тялото.