Анализ за сифилис ELISA - декодиране на анализа. Норма и отклонения

Във връзка с развитието на клетъчните технологии, молекулярната биология, генетиката, физиката, химията и редица други високотехнологични дисциплини в ежедневната практика се въвеждат нови високопрецизни и високотехнологични методи. Тези интердисциплинарни тенденции засягат както областта на медицинските познания, така и свързаните с тях области на биологични и биохимични проблеми. През последните десет години методът за клинична лабораторна диагностика, наречен ензимен имуноанализ, стана широко разпространен и въведен в масовата практика.

Като цяло технологиите на имунологичните ензимни и радиологични реакции са широко използвани при типизирането на клетки, клетъчни култури и различни тъкани от началото на 80-те години на миналия век. Тези методи обаче бяха много трудоемки, неунифицирани, нестандартизирани, което изключваше използването им за медицински и диагностични цели в масов мащаб. Само тесни, интензивни и високоспециализирани лаборатории използваха такива методи.

Въпреки това, с развитието на технологиите, микротехнологиите и производството на различни биополимерни материали, стана възможно да се произвеждат готови комплекти за ензимен имуноанализ, които могат да се използват от лаборатории на общи медицински институции. ELISA се използва широко за диагностициране на всякакви инфекции (хламидия, сифилис, цитомегаловирус, токсоплазмоза, херпес и др.), както остри, така и хронични, както и латентни форми, които протичат без клинични симптоми.Този метод се използва и за контрол на хронични заболявания . Нека се опитаме да разберем какъв е методът и какви принципи са в основата му?

Компоненти на ензимен имуноанализ - имунна реакция и ензимна реакция

Ензимният имуноанализ, както подсказва името, се състои от два различни компонента - имунен отговор и ензимна реакция. Имунната реакция произвежда свързването на биологични молекули, елементи на клетката или микроорганизма, които всъщност се опитват да открият, а ензимната реакция ви позволява да видите и измерите резултата от имунологичната реакция. Тоест, имунният отговор е част от сложна техника, която всъщност открива желания микроб. А ензимната реакция е тази част от сложна техника, която ви позволява да преведете резултата от имунна реакция във форма, която е видима за окото и достъпна за измерване чрез рутинни химични методи. Въз основа на тази структура на метода за имуноензимен анализ ще анализираме двете му части поотделно.

Имунна реакция, какво е това? Какво е антитяло или антиген?

Какво е имунен отговор? Какво е антиген?
Първо, нека да разгледаме какво представляват имунните реакции. имунни реакции- Това са специфични реакции на свързване на антиген с антитяло с образуване на имунен комплекс. Какво означава? На повърхността на всяка клетка на всеки организъм има специални структури, наречени антигени. Антигените като цяло са молекули, които носят информация за клетката (подобно на информацията на значката на човек, която показва основните данни на този човек).

Индивидуални и видови антигени - какво е това? Защо са необходими тези антигени?

На разположение антигени индивидуални, тоест присъщи само на този конкретен организъм. Тези индивидуални антигени са различни за всички хора, някои са подобни един на друг, но все пак са различни. В природата не съществуват две еднакви копия на отделните антигени!

Вторият основен тип антигени е видови антигени, тоест присъщи на всеки отделен вид живи същества. Например, хората имат свой собствен видов антиген, общ за всички хора, мишките имат свой собствен миши видов антиген и т.н. На повърхността на всяка клетка задължително присъства специфичен и индивидуален антиген.

Видовият антиген се използва от клетките на имунната система за идентифициране на „приятел или враг“.

Как става разпознаването на антигена?

Имунната клетка се свързва със съмнителна клетка и извършва идентификация точно по индивидуален антиген. В паметта на имунната клетка се „записва“ как изглежда „нейният антиген“. По този начин, ако антигенът на подозрителна клетка съответства на описанието „собствен антиген“, тогава тази клетка на собственото тяло не представлява опасност. Тогава имунната клетка се „развързва“ и си тръгва. И ако антигенът не отговаря на описанието на "себе си", тогава имунната клетка идентифицира тази клетка като "чужда" и следователно потенциално опасна за целия организъм. В този случай имунната клетка не се „отървава“, а започва да унищожава опасния обект. Точността на подобно имунологично разпознаване е удивителна – 99,97%. Почти няма грешки!

Какво е антитяло, имунен комплекс?
Какво е антитяло?

Антитялото е специална молекула, разположена на повърхността на имунната клетка. Това е антитялото, което се свързва с антигените на подозрителната клетка. Освен това антитялото предава информация вътре в клетката, където се извършва идентификацията, и получава обратен сигнал от два вида, „свое“ или „извънземно“. При сигнал „собствен” антитялото разрушава връзката с антигена и освобождава клетката.

Какво е имунен комплекс?
При сигнала „извънземно“ ситуацията се развива по различен начин. Антитялото не прекъсва връзката с антигена, а напротив, изпращайки специфични сигнали, предизвиква "подсилване". Биологично това означава, че други антитела, разположени в друга част на клетката, започват да се придвижват към зоната, откъдето идва сигналът за опасност, и също така образуват връзка между себе си и уловения антиген. В крайна сметка антигенът се оказва обграден от всички страни и здраво закрепен.Такъв комплекс антиген + антитяло се нарича имунен комплекс. От този момент започва използването на антигена. Но сега не се интересуваме от подробностите на процеса на неутрализация на антигена.

Видове антитела (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Антителата са протеинови структури, които съответно имат химично наименование, което се използва като синоним на думата антитяло. Така, антитела = имуноглобулини.

Има 5 вида имуноглобулини (Ig), които се свързват с различни видове антигени на различни места в човешкото тяло (например върху кожата, върху лигавиците, в кръвта и др.). Тоест, антителата имат разделение на труда. Тези имуноглобулини се наричат ​​буквите от латинската азбука - A, M, G, D, E и се обозначават по следния начин - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

При диагностиката се използва само един вид антитяло, което е най-специфично за определяния микроб. Тоест, свързването на този тип антитяло с определяния антиген винаги се случва. Най-често използваните са IgG и IgM.

Именно този принцип на имунния отговор (уникалната точност и специфичност на разпознаването на определяния биологичен обект) е в основата на ензимния имуноанализ. Поради високата точност на антителата при разпознаване на антигени, точността на целия метод на ензимен имуноанализ също е най-високата.

ензимна реакция

Какво е ензимна реакция? Какво е афинитет, субстрат и реакционен продукт?
Нека се обърнем към разглеждането на ензимната реакция в работата на метода за имуноензимен анализ.

Какво е ензимна реакция?

Ензимната реакция е химическа реакция, при която едно вещество се превръща в друго чрез действието на ензим. Веществото, върху което действа ензимът, се нарича субстрат. Вещество, което се получава в резултат на действието на ензим, се нарича реакционен продукт. Освен това, особеностите на ензимната реакция са такива, че определен ензим действа само върху определен субстрат. Това свойство на ензима да разпознава своя „собствен” субстрат се нарича афинитет.

Така всеки ензим извършва само една специфична за него реакция. В биологичния свят има много ензими, както и ензимни реакции. При ензимния имуноанализ се използват само няколко ензимни реакции - не повече от 10. В този случай са избрани такива ензимни реакции, чиито продукти са оцветени вещества. Защо продуктите от ензимната реакция трябва да бъдат оцветени? Тъй като има прост химичен метод за изчисляване на концентрацията на вещество от оцветен разтвор - колориметрия.

Колориметричен метод – същност и принцип

Колориметрияизползва измерването на плътността на цвета на разтвора, а концентрацията на веществото се изчислява от плътността на цвета.В този случай специално устройство - колориметър измерва плътността на цвета на разтвора. В колориметрията са възможни два варианта на зависимостта на плътността на цвета от концентрацията на веществото - това е правопропорционална зависимост или обратно пропорционална зависимост. При пряко пропорционална връзка, колкото по-висока е концентрацията на веществото, толкова по-интензивна е плътността на цвета на разтвора. В обратно пропорционална зависимост, колкото по-висока е концентрацията на дадено вещество, толкова по-ниска е плътността на цвета на разтвора. Технически това се случва по следния начин: вземат се няколко разтвора с известна концентрация на вещество, измерва се плътността на тези разтвори и се начертава графика на зависимостта на концентрацията от плътността на цвета ( графика за калибриране).

След това се измерва плътността на цвета на разтвора, чиято концентрация се определя, и според графиката за калибриране се намира стойността на концентрацията, съответстваща на нивото на измерената плътност на цвета на разтвора.се случва автоматично.

При имуноензимния анализ най-често се използват следните ензими: пероксидаза, алкална фосфатаза, авидин.

Как се комбинират имунологичните и ензимните реакции в ензимния имуноанализ? Сега се обръщаме към разглеждането на самия ензимно-свързан имуносорбентен анализ. Какви стъпки включва и какво се случва по време на тези реакции? Ензимният имуноанализ е преки и непреки.

Директен имуноензимен анализ - етапи на изпълнение

При директен ензимен имуноанализ се използват антитела към открития антиген, комбинирани със специфичен етикет. Този специфичен етикет е субстратът на ензимната реакция.

Прикрепване на антигени към повърхността на ямката и свързване на антиген с антитяло

Как се извършва директен ензимен имуноанализ? Взема се биологичен материал (кръв, изстъргвания от лигавиците, намазки) и се поставя в специални ямки. Биологичният материал се оставя в ямките за 15-30 минути, за да могат антигените да полепнат по повърхността на ямките. Освен това към тези ямки се добавят антитела към открития антиген. Това означава, че при откриване на антигени, например сифилис, се добавят антитела срещу антигени на сифилис. Тези антитела се произвеждат индустриално и лабораториите купуват готови комплекти.Тази смес от тестов материал и антитела се оставя за известно време (от 30 минути до 4-5 часа), за да могат антителата да намерят и да се свържат с "своя" антиген. пробни антигени, толкова повече антитела ще се свържат с тях.

Отстраняване на "допълнителни" антитела

Както е посочено, антителата също са свързани със специфичен етикет.Тъй като антителата се добавят в излишък, не всички от тях ще се свържат с антигени и ако изобщо няма антиген в пробата, тогава, съответно, нито едно антитяло няма да се свърже до желания антиген. За да се отстранят "допълнителните" антитела, съдържанието на ямките просто се излива. В резултат на това всички "допълнителни" антитела се отстраняват и тези, които са се свързали с антигени, остават, тъй като антигените са "залепени" към повърхността на ямките. Ямките се изплакват няколко пъти със специален разтвор, който ви позволява да измиете всички "допълнителни" антитела.

След това започва вторият етап - ензимната реакция. Разтворът с ензима се добавя към измитите ямки и се оставя за 30-60 минути. Този ензим има афинитет към веществото (специфичен етикет), към което са свързани антителата. Ензимът извършва реакция, в резултат на която този специфичен етикет (субстрат) се превръща в оцветено вещество (продукт). След това концентрацията на това оцветено вещество се намира чрез колориметрия. Тъй като този специфичен етикет е свързан с антитела, това означава, че концентрацията на оцветения реакционен продукт е равна на концентрацията на антителата. А концентрацията на антитела е равна на концентрацията на антигени. Така в резултат на анализа получаваме отговора каква е концентрацията на открития микроб или хормон.

Ето как работи директният ензимен имуноанализ. Индиректният ензимен имуноанализ обаче се използва по-често днес, тъй като чувствителността и точността на индиректния е по-висока от тази на директния. И така, нека да преминем към индиректния ензимен имуноанализ.

Индиректен ензимен имуноанализ - етапи

Индиректният ензимен имуноанализ има два етапа. През първия етап се използват небелязани антитела към откритите антигени, а през втория етап се използват белязани антитела срещу първите небелязани антитела. Тоест получава се не директно свързване на антитялото с антигена, а двоен контрол: свързване на антитела с антигена, след което свързване на второто антитяло с комплекса антитяло + антиген. По правило антителата за първи стадий са миши, а за втори стадий кози.

Фиксиране на антигени върху повърхността на ямката и свързване на антиген с небелязано антитяло
Както и за директен имуноензимен анализ, се взема биологичен материал - кръв, остъргвания, цитонамазки. Изследваният биологичен материал се въвежда в ямките и се оставя за 15-30 минути, за да се залепят антигените към повърхността на ямките. След това към ямките се добавят небелязани антитела към антигени и се оставят за определен период от време (1-5 часа), така че антителата да се свържат със „своите“ антигени и да образуват имунен комплекс ( Първа стъпка). След това „допълнителните“, несвързани антитела се отстраняват чрез изливане на съдържанието на ямките. Измиването се извършва със специален разтвор за пълно отстраняване на всички несвързани антитела.

Свързване на белязано антитяло с комплекс антиген + небелязано антитяло
След това се вземат вторите антитела - маркират се, добавят се в ямките и отново се оставят за известно време - 15-30 минути ( втора фаза). През това време белязаните антитела се свързват с първите – немаркирани и образуват комплекс – антитяло + антитяло + антиген. Въпреки това, както белязани, така и небелязани антитела се добавят към ямките в излишък. Следователно е необходимо отново да се премахнат „допълнителните“, вече маркирани антитела, които не са се свързали с немаркирани антитела. За да направите това, повторете процедурата за изливане на съдържанието на ямките и измиване със специален разтвор.

Ензимна реакция - образуване на оцветено съединение
След това се въвежда ензим, който извършва реакцията на превръщане на "етикета" в цветно вещество. Цветът се развива в рамките на 5-30 минути. След това се извършва колориметрия и се изчислява концентрацията на оцветеното вещество. Тъй като концентрацията на оцветеното вещество е равна на концентрацията на белязаните антитела, а концентрацията на белязаните е равна на концентрацията на небелязаните антитела, което от своя страна е равно на концентрацията на антигена. Така получаваме концентрацията на открития антиген.
Такъв двоен контрол под формата на използване на два вида антитела направи възможно повишаването на чувствителността и специфичността на метода за ензимен имуноанализ. Въпреки удължаването на времето за анализ и включването на допълнителни етапи, тези загуби се компенсират от точността на резултата. Ето защо понастоящем по-голямата част от методите за ензимен имуноанализ са индиректни ензимни имуноанализи.

Какви заболявания се откриват чрез имуноензимен анализ?

Нека да преминем към разглеждането на какви заболявания и какви биологично активни вещества се откриват чрез ензимен имуноанализ. Веществата, открити чрез ензимен имуноанализ, са представени в таблицата.

Хормони и маркери на заболяване на щитовидната жлеза	тиреопероксидаза (TPO)
	тиреоглобулин (TG)
	Тиреоиден стимулиращ хормон (TSH)
	тироксин (Т4)
	Трийодтиронин (Т3)
	Свободен тироксин (Т4)
	Свободен трийодтиронин (Т3)
Диагностика на репродуктивната функция	лутеинизиращ хормон (LH)
	Фоликулостимулиращ хормон (FSH)
	Пролактин
	Прогестерон
	Естрадиол
	тестостерон
	кортизол
	Стероид свързващ глобулин (SHB)
	Алфафетопротеин (AFP)
туморни маркери	Хорионгонадотропин (CG)
	Простатен специфичен антиген (PSA)
	SA - 125
	SA - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15.3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1(M–20)
	Алвеомуцин
	К - верига
	L - верига
	Фактор на туморна некроза (TNFα)
	γ - интерферон
	Раково-ембрионален антиген (CEA)
Диагностика на инфекциозни заболявания

ELISA е модерно лабораторно изследване, по време на което се търсят специфични кръвни антитела (или антигени) за специфични заболявания, за да се идентифицира не само етиологията, но и стадият на заболяването.

1. търсене на специфични антитела към всяко инфекциозно заболяване;
2. търсене на антигени на всякакви инфекциозни заболявания;
3. изследване на хормоналния статус на пациента;
4. изследване за наличие на автоимунни заболявания.

Както всеки метод за лабораторна диагностика, ELISA има своите предимства и недостатъци. Предимствата на метода включват:

1. висока специфичност и чувствителност на метода (повече от 90%);
2. способността за определяне на заболяването и проследяване на динамиката на процеса, т.е. сравняване на количеството антитела в различни интервали от време;
3. наличието и скоростта на това проучване;
4. неинвазивен метод за вземане на материални проби не е изследване;

Недостатъкът на метода е фактът, че по време на анализа е възможно да се идентифицира не причинителя на заболяването, а само имунния отговор към него (антитела).

Същността на метода ELISA

Има няколко вида ELISA: директен, индиректен, блокиращ метод, конкурентен. На практика обаче най-често се използва хетерогенен твърдофазов имуноанализ или ELISA.

Основата на ензимно-свързания имуносорбентен анализ е имунната реакция на антиген и антитяло с образуването на имунен комплекс, което води до промяна в ензимната активност на специфични етикети на повърхността на антителата.

Всъщност този процес може да бъде разделен на няколко етапа:

1. на повърхността на ямките на тестовата система има пречистен антиген на определен патоген. Когато се добави кръвен серум на животно, настъпва специфична реакция между този антиген и желаното антитяло;
2. освен това към ямката се добавя специален хромоген (конюгат, белязан с пероксидаза). Протича ензимна реакция, водеща до образуването на оцветено вещество в гнездото на таблетката. Интензивността на цвета му зависи от количеството имуноглобулини (антитела), съдържащи се в серума на животното;
3. Следва оценката на резултата. С помощта на многоканален спектрофотометър оптичната плътност на изследвания материал се сравнява с оптичната плътност на контролните проби и резултатите се обработват математически. Количеството антитела в пациента зависи пряко от височината на оптичната плътност на дадено гнездо.

Трябва да се помни: за всяка тестова система се разработват индивидуални показатели, за да се вземат предвид резултатите, показатели за норма и патология („референтни стойности“). Това трябва да се има предвид при оценката на резултатите от всяко конкретно изследване.

Не е правилно резултатите от една лаборатория да се интерпретират от „референтните стойности“ на друга лаборатория. Също така е некоректно да се сравняват резултатите от различни лаборатории една с друга.

При оценката на резултатите за специфични инфекции класът на откритите антитела и техният брой са важни. От това зависи не само въпросът за етиологията на инфекцията, но и очакваният стадий на заболяването (остър, хроничен), както и наличието на активна инфекция (остра или обостряне на хронична) по време на изследването. .

Какъв е приблизителният момент на появата на антителата?

Най-ранните антитела са IgM. Те могат да бъдат открити 1-3 седмици след евентуална инфекция, което характеризира острата фаза на инфекциозния процес. Втората ситуация на появата на IgM антитела е обостряне на хроничен процес. IgM циркулират средно около 3 месеца, след което броят им постепенно изчезва. Въпреки това, при някои пациенти следи от IgM могат да бъдат открити в рамките на 1-2 години след инфекцията.

От 4-та седмица след инфекцията започват да се появяват IgG антитела. При повечето инфекции техният титър постепенно се увеличава с максимум в различно време (средно след 1,5-2 месеца), след което титърът остава на ниско ниво и показва имунитет. При някои заболявания нивото на IgG не е високо.

Опции за откриване на антитела

• Изолирано откриване на IgM антитела предполага първична инфекция.
• Едновременното откриване на IgM и IgG в кръвта е типично за първична инфекция през предходните 2-3 месеца, както и по време на обостряне на хронично заболяване.
• Откриването на IgG в изолация може да показва както имунитет към болестта, така и хронична инфекция. Във втората ситуация има значение както количеството антитела (титър), така и промяната в този титър във времето. Обикновено изследванията се провеждат на интервали от 2-4-6 седмици.

ELISA анализът е съвременна техника за лабораторна диагностика на значителен брой различни заболявания. Съкращението означава ензимен имуноанализ. Същността на техниката е да се определи титърът (активността) на антителата.

Техниката ELISA придобива значителна популярност днес. Използва се в клиничната медицина за диагностика на различни патологии, както и в експериментални изследвания, които изискват точно определяне на концентрацията на различни съединения в изследваната среда.

Принципът на техниката ELISA

ELISA е имунологична реакция. Основава се на добавянето на специфични антитела
или антигени в тестовата среда (най-често тестовата кръв) с последващо ензимно определяне на концентрацията на получените комплекси антиген-антитяло. По концентрацията на комплекса може да се прецени нивото или активността на аналита в тестовата среда.

Определянето на концентрацията на комплексите антиген-антитяло обикновено се извършва с помощта на специално оборудване чрез хроматографски метод.

Показания за провеждане

ELISA анализът се извършва за различни показания, основните в клиничната медицина са:

• Диагностика на инфекциозна патология с преобладаващо сексуално предаване (ППИ), която включва хламидия, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомониаза, докато се откриват специфични антитела към инфекциозния агент.
• Диагностика на инфекциозни заболявания с различна локализация за определяне на етапа на патологичния процес, предимно в процеса на диагностициране на парентерален вирусен хепатит и ХИВ.
• Определяне на концентрацията на хормони за диагностика на различни патологии на органите на ендокринната система (ендокринни жлези).
• Определяне на различни съединения за диагностициране на причината за интоксикация на организма при отравяне, ухапване от насекоми или змии.

При тези медицински показания се извършва кръвен тест ELISA. Също така тази техника се използва активно в експерименталната медицина по време на различни клинични проучвания при разработването на нови лекарства, ваксини за имунопрофилактика.

Как се прави изследването

Кръвният тест ELISA се извършва в специализирана лаборатория. Преди това, за неговото прилагане, се взема венозна кръв, обикновено от кубиталната вена в обем от 5-10 ml, която след това се изпраща в лабораторията. Средно резултатът от анализа може да бъде получен още на следващия ден, което е важен момент за навременното назначаване на лечение след установяване на диагнозата на заболяването.

Как да се подготвим за ELISA

За да получите надеждни резултати от изследването чрез ензимен имуноанализ, трябва да следвате няколко прости подготвителни препоръки, които включват:

• В деня преди теста трябва да спрете да ядете мазни храни (месо, пушено месо) и алкохол.
• Материалът за изследване трябва да се вземе сутрин на празен стомах.
• В деня на изследването е желателно да се избягва физически и психо-емоционален стрес.
• Преди изследването трябва да се опитате да не пушите.

Повечето от получените фалшиво положителни резултати от имуноензимния анализ се дължат на неправилно изпълнение на подготвителните препоръки. Това в повечето случаи се свързва с приема на мазни храни, което води до повишаване на концентрацията на триглицериди (мазнини) в кръвната плазма, което намалява специфичността на ELISA.

Дешифриране на резултатите

Кръвният тест за антитела с помощта на ELISA има 2 модификации - качествено и количествено определяне. При
качествено определяне на антитела, резултатът може да бъде положителен (откриват се антитела, което показва възможното наличие на патологичен процес, причинен от инфекциозния агент) или отрицателен (няма антитела, което показва липса на инфекциозен процес).

Липсата на антитела не винаги е 100% показател за липсата на инфекциозен процес. Това се дължи на факта, че след инфекцията антителата не се образуват веднага, а през определен период от време (поне около 2 седмици). Следователно, за да се потвърди липсата на инфекция, ELISA може да се повтори след известно време.

С количествен ELISA се определя титърът (активността) на антителата, както и техните класове. В повечето случаи за диагностика на инфекциозни заболявания се определят антитела от клас IgG (имуноглобулини G) и IgM (имуноглобулини М), които се образуват в тялото на различни интервали след инфекцията, така че дешифрирането на резултата от анализа може да има няколко значения:

• Увеличаването на активността на IgM и липсата на IgG са доказателство за скорошна инфекция и остър ход на инфекциозния процес.
• Увеличаването на активността на IgM и IgG е обостряне на инфекциозния процес при хронично протичане и продължителна инфекция.
• Високата активност на IgG и липсата на IgM е хроничен ход на инфекциозния процес на фона на дългогодишна инфекция, след която са изминали повече от шест месеца (времето, необходимо за образуване на антитела от клас IgG).

Като цяло, тълкуването на резултатите от ELISA за всеки инфекциозен процес има определени характеристики. По-точното определяне на наличието на инфекциозно заболяване, както и етапа на неговото протичане, се извършва от лекар.

Понастоящем ELISA е методът на избор за диагностициране на повечето инфекциозни заболявания. Въз основа на резултатите от такова изследване лекарят има възможност да установи точна диагноза и да определи етапа на хода на патологичния процес, за да предпише последващото адекватно и ефективно лечение.

Съвременните диагностични методи позволяват в лабораторията да се идентифицира конкретно заболяване с помощта на специални тестове. Един от тях трябва да включва ензимен имуноанализ, чрез който можете да потвърдите предварителната диагноза.

ELISA е един от най-ефективните и модерни методи за откриване на нарушения, свързани с имунни и хормонални сривове, както и с онкологични процеси. По време на анализа в кръвта могат да бъдат открити антитела, които се произвеждат, когато има инфекция в тялото. Като се има предвид този нюанс, е възможно да се открие заболяването дори в много ранен стадий на неговото развитие.

Каква е основата на методологията

Резултатите от анализа ELISA се основават на получаването на химични реакции към ензими, които служат като специални идентификационни знаци за разпознаване на антитела. Следователно по време на имунохимичните реакции антителата започват да взаимодействат с някои антигени. Всичко това дава основание да се твърди, че фалшивите резултати при кръводаряване за ELISA са минимални.

Проучването ви позволява да определите броя на имунните клетки, техните свойства, както и наличието на необходимите антитела

За положителен резултат се счита, когато се открие цветът на разтвора. Цветът показва, че антигените взаимодействат с антитялото. В случай, че нищо подобно не се случи, резултатът е отрицателен.

Имуноензимният анализ (ELISA) се провежда за цялостна оценка на защитните функции на тялото. По време на изследването се определя броят и свойствата на имунните клетки, наличието на необходимите антитела. Кръвният тест ELISA се извършва за диагностициране на инфекциозни, хематологични, автоимунни заболявания, първични и вторични имунодефицити. Помислете какво е кръвен тест чрез ELISA и какви индикации съществуват за това изследване.

Какво е

Кръвният тест ELISA е лабораторен метод, който открива антитела или антигени в кръвна проба. Това изследване се използва за откриване на нивото на имуноглобулини, имунологични комплекси, хормони.

Показания за анализ

За назначаването на кръвен тест ELISA има следните показания:

• диагностика на полово предавани инфекции - уреаплазма, микоплазма, хламидия, трихомонада, сифилис;
• диагностика на вирусни заболявания - цитомегаловирус, херпес, хепатит, вирус на Епщайн-Бар;
• определяне на нивото на хормоните;
• диагностика на онкологични заболявания;
• определяне на имунодефицит;
• диагностика на алергии;
• предоперативен цялостен преглед преди трансплантация на органи;
• оценка на ефективността на терапията.

Принцип на метода

Принципът на действие на метода за ензимен имуноанализ се основава на определянето на специфични протеинови антитела в кръвта - имуноглобулини. Имуноглобулините се произвеждат от човешката имунна система, когато антигени (чужди микроорганизми) навлязат в тялото. Тези имунни молекули се свързват с различни инфекциозни агенти в тялото и ги неутрализират.

Имуноглобулините имат важна характеристика - специфичност. Благодарение на това те могат да се свържат със специфичен антиген, образувайки комплекс антиген-антитяло. По време на кръвен тест ELISA именно този комплекс се определя качествено и количествено.

Има пет класа имуноглобулини. Но обикновено се определят три класа - имуноглобулини A, M, G. Тези антитела се натрупват в тялото по различно време от момента на инфекцията.

• Имуноглобулини клас M (IgM)се появяват в кръвта най-напред на петия ден от момента на заразяването. Те са в тялото в продължение на 5-6 седмици, след което изчезват от кръвния поток. IgM антителата показват остър период на заболяването или обостряне на заболяването в хроничния му ход.
• Приблизително 3-4 седмици след инфекцията имуноглобулините се появяват в кръвта клас G (IgG). Те могат да съществуват в човешката кръв в продължение на няколко месеца или дори години. Според декодирането на кръвния тест ELISA, ако в две кръвни проби, взети последователно две седмици по-късно, количеството IgG имуноглобулини е повишено, те говорят за текуща инфекция или реинфекция - повторно заразяване със същата инфекция.
• Имуноглобулини клас А (IgA)могат да бъдат открити чрез този изследователски метод 2-4 седмици след инфекция или обостряне на инфекциозно заболяване. От тях само 20% циркулират в кръвта, останалите се секретират от лигавиците. IgA антителата изчезват от кръвния поток 2-8 седмици след унищожаването на инфекциозните агенти. Изчезването на тези имуноглобулини означава излекуване на инфекцията. Ако след края на заболяването се установи наличието на IgA антитела в кръвта, тогава заболяването е преминало в хроничен стадий.

Подготовка за анализ

Човешка кръв най-често се използва за провеждане на кръвен тест ELISA. Но можете също да изследвате съдържанието на стъкловидното тяло, цереброспиналната течност, амниотичната течност.

На пациента се взема кръвна проба за изследване от кубиталната вена. Препоръчва се кръводаряване на празен стомах (от момента на последното хранене трябва да минат поне 12 часа). Необходимо е да се каже на лекаря, ако пациентът приема лекарства, тъй като някои от тях могат да променят резултата от анализа. Надеждността на резултатите от изследването се влияе от употребата на алкохол и наркотици.

Декриптиране

Формата на резултата от този анализ показва положителен (+) или отрицателен (-) резултат за всеки клас имуноглобулини.

Помислете за интерпретацията на възможно декодиране на кръвния тест ELISA.

• Отрицателен резултат на IgM, IgG, IgA - липса на имунитет към инфекция.
• Отрицателен IgM, IgA и положителен IgG резултат - слединфекциозен или следваксинален имунитет.
• Отрицателни или положителни IgG, IgA и положителни IgM е остра инфекция.
• Положителният резултат от IgM, IgG, IgA е обостряне на хронично инфекциозно заболяване.
• Отрицателен IgM резултат и отрицателен или положителен IgG, IgA резултат е хронична инфекция.
• Отрицателен IgM резултат и без IgG, IgA - възстановяване.

Предимства на метода

Кръвният тест ELISA има много предимства. Основните могат да бъдат разграничени:

• относително висока точност (чувствителност);
• възможност за ранна диагностика;
• способността да се проследява динамиката на инфекциозния процес;
• високо ниво на унификация, което позволява масови проучвания;
• кратък период от време, необходим за получаване на резултата от анализа;
• удобство при работа;
• автоматизация на всички етапи на анализа;
• относително ниска цена.

недостатъци

Недостатъкът на метода ELISA е, че понякога дава фалшиво отрицателни или фалшиво положителни резултати. В допълнение към техническите грешки по време на изследването, причината за фалшивите резултати може да бъде ревматоидният фактор при пациента, наличието на хронични заболявания (при които се произвеждат антитела), метаболитни нарушения и прием на определени лекарства.

• аскаридоза;
• трихинелоза - анализът се извършва няколко пъти, максималното ниво на антитела се определя на 4-12 седмица след инфекцията;
• цистицеркоза;
• тениоза;
• фасциолиаза - антителата се определят в острия стадий на заболяването;
• описторхоза - извършва диференциална диагноза между хронични и остри форми на заболяването;
• лямблиоза;
• висцерална и кожна лайшманиоза;
• амебиаза;
• токсоплазмоза.

4.2 4.20 от 5 (5 гласа)