Хелминтологични методи. Изследване на ентеробиоза и тениидоза

За да се открият фрагменти от хелминти, изпражненията се разглеждат голи, след това се смесват с вода и се изследват на малки порции в петриево блюдо на тъмен фон. Всички подозрителни частици се поставят върху предметно стъкло в капка вода и се изследват под лупа. Можете да поставите дневната порция в цилиндър с добавяне на 5-10 пъти количество вода. След разбъркване съдът се оставя до пълното утаяване на суспендираните частици. Повърхностният слой на течността се отцежда и се налива чиста вода. Промитата утайка се разглежда на малки порции с просто око или под лупа. За откриване на яйца се използват микроскопски методи за изследване.

Метод нативна цитонамазка. Малко количество изпражнения от различни места на пробата се стриват върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, изотоничен разтвор на натриев хлорид или вода. Сместа се покрива с покривно стъкло и се гледа под микроскоп.

Плаващ метод на Fülleborn. Една част от изпражненията се смесва с 20 части наситен разтвор на натриев хлорид (специфично тегло 1,18), добавен на малки порции. Едрите частици, изплували на повърхността, веднага се отстраняват и сместа се оставя за 45 минути. През това време яйцата на хелминтите, които имат по-ниско специфично тегло от разтвора на натриев хлорид, изплуват на повърхността. Повърхностният филм се отстранява с телена примка с диаметър около 1 cm и се прехвърля върху предметно стъкло за изследване под микроскоп.

Метод на Калантарян. Ефективността на плаващия метод се повишава чрез замяна на натриевия хлорид с наситен разтвор на натриев нитрат. В този случай сместа се държи 10-15 минути.

Повърхностният филм, образуван след утаяване на смес от изпражнения с разтвор на натриев хлорид или натриев нитрат, също може да бъде отстранен с предметно стъкло. За тази цел буркан, напълнен до ръба със смес от изпражнения със солен разтвор, се покрива с предметно стъкло, така че долната му повърхност да е в контакт с течността. След утаяване стъклото се отстранява и бързо се обръща повърхността, върху която е разположен филмът, се разглежда под микроскоп.

Остъргването на сперианалните гънки (за идентифициране на яйца от острици и онкосфери от говежда тения) се извършва сутрин преди тоалетна. С дървена шпатула, потопена във вода или 50% разтвор на глицерин, се изстъргва около ануса. Полученият материал се прехвърля върху предметно стъкло в капка вода или 50% разтвор на глицерол и се гледа под микроскоп. Шпатулата може да бъде заменена с влажен памучен тампон, който се използва за избърсване на перианалната област, след което се изплаква добре с вода. Водата се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп.

Метод на Берман (за откриване на ларви). Метална мрежа, покрита с 5-6 g изпражнения, се фиксира върху стъклена фуния, поставена в стойка. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба. Фунията се пълни с вода, загрята до t ° 50 °, така че долната част на мрежата с изпражнения влиза в контакт с вода. Ларвите активно се движат във водата и се натрупват в долната част на гумената тръба. След 4 часа течността се спуска в центрофужни епруветки, центрофугира се и утайката се изследва под микроскоп.

Анализ на храчки, назална слуз и вагинален секрет за откриване на яйца от белодробен трематоден парагонимус, ларви на ascaris и анкилостоми, яйца на острици, фрагменти от ехинококов мехур. Изследваната порция слуз (секрет) се намазва върху стъкло и се гледа макроскопски на черно-бял фон, а след това под микроскоп. Можете да добавите 25% разтвор на антиформин към тестовия материал, разклатете добре и задръжте за 1-1,5 часа, за да разтворите слузта. Сместа се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп.

Анализ на дуоденален и стомашен сок за откриване на яйца на чернодробен метил, анкилостома, ларви на Strongyloides. И трите порции от дуоденалното съдържимо, получени с, се центрофугират и утайката се изследва под микроскоп. Също така проучете и.

Изследване на тъкани. За да се идентифицират ларвите на Trichinella, парчета от биопсирания мускул внимателно се разделят на влакна, притискат се между компресорни стъкла (дебели стъкла с винтове) и се изследват под микроскоп със засенчена светлина. За идентифициране на цистицерци мускулите се разслояват с дисекционни игли, изолираната везикула се почиства от околната тъкан, притиска се между две предметни стъкла и се изследва под лупа.

Кръвен тест (за откриване на ларви на филарии). Висяща капка се изследва върху покривно стъкло, покрито с вазелин. Можете да смесите 0,3 ml кръв с 10 пъти повече от 3% разтвор. Сместа се центрофугира и утайката се изследва под микроскоп. За обогатяване на препаратите се добавят 3 ml 2% разтвор на формалин или 5-кратно количество течност, състояща се от 95 ml 5% разтвор на формалин, 5 ml оцетна киселина и 2 ml концентриран алкохолен разтвор на хематоксилин. към 1 ml венозна кръв. Сместа се центрофугира, утайката се промива с дестилирана вода и се изследва под микроскоп. За разграничаване на различни видове филярии се изследват петна, оцветени по метода на Giemsa-Romanovsky.

Методи за имунологична диагностика. Приложете (аглутинация, фиксиране на комплемента) и алергични диагностични тестове (вижте) със съответния тип хелминти.

Хелминтологични методи за изследване. Ориз. Яйца от хелминти. 1-10 - яйца на кръгли червеи (нематоди): 1 - 3 - кръгли червеи (1 - оплодено яйце, 2 - оплодено яйце без протеинова обвивка, 3 - неоплодено яйце); 4 - котешки кръгъл червей; 5 - кръгли червеи месоядни; 5 - острици; 7 - камшичен удар; 8 - томинкс; 9 - анкилостома; 10 - трихо-стронгилид. 11-15 - яйца на тения (цестоди): 11 - говежда тения; 12 - тения джудже; 13 - плъх тения; 14 - кратуна тения; 15 - широка лента. 16 - 24 - яйца на метили (трематоди): 16 - трематоди (шистозоми) японски; 17 - трематоди (шистозоми) урина - полови; 18 - трематоди (шистозоми) Munson; 19 - трематоди (парогонимус) белодробен; 20 - трематоди (описторхис) сибирски (котешки); 21 - трематоди (clonorchis) китайски; 22 - чревни трематоди (метагонимус); 23 - трематоди (фасциоли) на черния дроб; 24 - трематоди (дикроцелий) ланцетни.

Ефективен и удобен метод за хелминтологично изследване е изследване на дебела цитонамазка по Kato, чиято същност е откриването на яйца на хелминти в дебела намазка от изпражнения, избистрена с глицерин и оцветена с малахитово зелено. Съставът на сместа Kato е 6 ml 3% воден разтвор на малахитово зелено, 500 ml глицерин, 500 ml 6% разтвор на фенол. Разтворът е стабилен и може да се съхранява при стайна температура. За да се приготвят препарати, парчета изпражнения с размер на грахово зърно се поставят върху предметно стъкло, покриват се с филм от хидрофилен целофан, остарял в Kato смес за 24 часа, и се притискат към стъклото, за да се разпредели равномерно материала. Намазки, избистрени за 40-60 минути, се изследват под микроскоп. Откритите яйца на хелминти се преброяват и по морфологични признаци се определя видовата им принадлежност. Методът позволява да се разкрият яйцата на ascaris, камшичен червей, цестоди, трематоди, в по-малка степен - анкилостома и малка тения.

Също така широко използван методи за обогатяване. Принципът на флотационните методи е да се суспендират фекалиите във физиологичен разтвор, който има по-висока относителна плътност в сравнение с яйцата на хелминтите, в резултат на което те изплуват на повърхността. Съдържанието на повърхностния филм се изследва под микроскоп. Като обогатителни смеси се използват разтвори: готварска сол - 400 g в 1 литър вода (относителна плътност по Fülleborn -1,18); натриев нитрат - 1 кг в 1 л вода (относителна плътност по Калантарьян-1,38); натриев нитрат - 900 г и калиев нитрат - 400 г в 1 л вода (относителна плътност по Брудастов и Краснонос-1,48). разтворите са сварени и охладени.
За изследване 5-10 g изпражнения се добавят към чаша или фаянсово стъкло, към него се добавят 100-200 ml физиологичен разтвор и се разбъркват добре. След това големите частици, които са се появили на повърхността, се отстраняват с дървена шпатула или лъжичка от хартия или картон и незабавно върху повърхностния филм се поставя широко предметно стъкло, така че физиологичният разтвор и предметното стъкло да са в пълен контакт. След 30-40 минути утаяване на сместа предметното стъкло се отстранява, поставя се под микроскоп с филма нагоре и цялата повърхност се оглежда внимателно. За да избегнете изсушаване, можете да добавите 2-3 капки 50% разтвор на глицерин. Повърхностният филм може да се отстрани и с телена примка. Ефективността на флотационните методи се увеличава с увеличаване на относителната плътност на солните разтвори. С помощта на тези методи е възможно да се открият яйца от нематоди, цестоди и трематоди.

За откриване на яйца във фекалиите се използва методът на утаяване на Красилников.. Изпражненията се смесват с 1% разтвор на препарат (прах за пране Lotos и др.) в съотношение 1:10 до образуване на суспензия. Под въздействието на детергента се разтварят различни компоненти на изпражненията (протеини, мазнини, тъканни елементи). След 30 минути съдържанието на епруветката се разклаща за 1-2 минути, след което се центрофугира за 5 минути. Препаратите се приготвят от утайката и се разглеждат под микроскоп.
В полеви условия, както и по време на масови изследвания на населението за хелминтна инвазия, е удобно да се използва методът на дебелото намазване Като. В стационарни условия при изследване на пациенти е за предпочитане да се използват най-ефективните флотационни методи. При използване на тези методи по време на микроскопия е препоръчително да се преброят яйцата, намерени в препарата. При спазване на стандартното тегло или обем, взет за изследване на изпражненията (например 1 чаена лъжица или супена лъжица) и постоянен единичен обем физиологични разтвори, може грубо да се прецени интензивността на инвазиите. Този количествен запис може да бъде полезен при обосноваване на предписаното лечение и оценка на ефективността на обезпаразитяването. В допълнение, други по-точни количествени методи, по-специално методът на Stoll, могат да се използват за установяване на интензивността на инфекцията.

За диагностика на тениаринхоза и ентеробиозаприлагат метода за изследване на перианално-ректални изстъргвания. С дървена шпатула, напоена с 50% разтвор на глицерол, се изстъргват перианалните гънки сутрин преди дефекация около ануса и долната част на ректума. Полученият материал, почистен с шпатула от ръба на покривното стъкло, се поставя върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп. Можете също така да разгледате лента от целулозна лента, която първо се притиска с лепилна страна към пернаналните гънки, след което се поставя върху предметно стъкло и се микроскопира.

Откриване на ларви на нематоди във фекалиите по метода на Берман. Методът се основава на термотропното свойство на ларвите. За изследване се взема 1 супена лъжица изпражнения, поставени в метална мрежа или мрежа от няколко слоя марля върху телена рамка. Решетката е монтирана във фуния, фиксирана в статив. Към фунията се присъединява гумена тръба със скоба. Повдигайки мрежата, фунията се напълва с вода (температура +40°...+50°C), така че долната част на мрежата да е потопена във вода. Ларвите от изпражненията активно мигрират в топла вода и, утаявайки се, се натрупват в долната част на фунията. След 2-4 часа скобата се отваря, водата се спуска в центрофужна епруветка и се центрофугира за 2-3 минути. След това супернатантата се отцежда, утайката се прехвърля върху предметно стъкло и се гледа под микроскоп, където се откриват подвижни ларви на патогена на стронгилоидозата.

Метод на Харад и Mori позволява да се разграничат ларвите на анкилостомите и некаторите. Ларвите на анкилостомите се култивират върху филтърна хартия. За целта върху ленти филтърна хартия с размери 12Х1,5 см се нанасят 0,5 g пресни изпражнения, взети от болния не по-късно от 1 час след дефекацията, като двата края на лентата се оставят чисти. Единият край на лентата се потапя в епруветка, чиято четвърта част се пълни с вода, а другата се затяга с тапа. Тръбите се поставят в термостат при температура от +26 ... + 28°C. Ларвите, които са се развили от яйцата, се спускат по филтърната хартия и се утаяват на дъното на епруветката. След 5-6 дни хартиената лента се отстранява и течността, останала в епруветката, се изследва под лупа или се центрофугира. Образуваната при центрофугирането утайка се изследва под светлинен микроскоп. Когато вместо епруветки се използват тетраедрични стъклени буркани (размер 15XYX7 cm), към стените на които са прикрепени 4 хартиени ленти, ефективността на анализите се увеличава (GM Maruashvili et al., 1966).

Методи за изследване на шистозомиаза . Изследване на изпражнения - порция изпражнения се смесва с 250 мл вода, прецежда се през 3 пласта марля в коничен съд, който се пълни до горе с вода. След 30 минути течният слой се отцежда, към утайката се добавя прясна порция вода. Утайката се промива до получаване на бистър супернатант и се изследва под микроскоп.

Метод на ларвоскопия - 20-25 g изпражнения се поставят в ерленмайерова колба със запоена отстрани стъклена тръба и се измиват с чешмяна вода. След това колбата се покрива с тъмна хартия, оставяйки запоената стъклена тръба на светлина при температура +25...+30°C. Излюпените мирацидии се концентрират в менискуса в страничната тръба, където могат да се видят с лупа или с просто око. Изследване на урина - 100 ml урина се събират между 10 и 14 часа или дневната порция се отстоява, след което се центрофугира на 1500 rpm. Получената утайка се нанася* върху предметно стъкло и се микроскопира. СЗО препоръчва метод за филтриране на цялата порция урина. След филтриране филтрите се обработват с формалин или се нагряват (за унищожаване на яйцата) и след това се навлажняват с воден разтвор на нинхидрин. В изсушени препарати яйчните ембриони придобиват лилав цвят.

Използването на имунологични изследователските методи за диагностициране на шистозомиаза са трудни, тъй като възрастните шистозоми и техните яйца съдържат голям брой антигени, които причиняват имунни отговори, които не са специфични за вида (D. Bradley, 1979).

В нашата страна за формулиране на имунологични реакции при хелминтоза се произвеждат редица стандартни диагностикуми. Алергичният кожен тест за ехинококоза и алвеококоза, RLA с ехинококозен антиген, RSK на студено, преципитационна реакция на студено в различни модификации (пръстенообразно утаяване, утаяване в епруветки или капиляри, които се поставят с антигени на трихинелоза, цистицеркоза и мигроаскариаза) имат практическо приложение. приложение. Стандартни диагностикуми за поставяне на горните серологични реакции се изработват от предприятия, произвеждащи бактериални препарати. Производителят прилага подробни инструкции за правилата за съхранение, сроковете на годност на лекарството и инструкциите за употребата на подходящите антигени с техниката за настройка на реакцията към произведените диагностикуми.

През последните години списъкът на серологичните тестове, използвани за диагностициране на хелминтоза, се разшири значително. За тази цел се използват следните реакции: RIGA, индиректна имунофлуоресценция (RIF), гел имунодифузия (RID), контра имуноелектрофореза (VIEF), REAMA. Тези реакции могат да се използват при аскариаза, токсокароза, трихинелоза, анкилостомоза, филариаза, ехинококоза и алвеококоза, описторхоза, шистозомиаза, парагонимиаза. За тези реакции обаче у нас не се издават стандартни диагностикуми и не е регламентирана техниката за поставянето им. Отделни лаборатории, предимно научни, подготвят свои специфични антигени и ги използват в различни модификации. Описанието на тези методи е широко представено в литературата и не е строго унифицирано. Интерпретацията на имунологичните данни трябва да се основава на изследване на динамиката на имунния отговор, като се вземе предвид нивото на специфичност и чувствителност на всеки приложен серологичен тест. Ето защо при поставяне на диагноза, както и по време на сероепидемиологични изследвания на населението, е препоръчително да се използват няколко от най-чувствителните реакции. От тези позиции реакциите VIEF и REMA са се доказали добре, които се отличават с висока чувствителност и доста висока специфичност (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negryanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Я. Лисенко, 1978 г. и др.). Ефективността на REAMA е тествана при амебиаза, лайшманиоза, трипанозомиаза и токсоплазмоза (GA Ermolin, 1980).

Глава III. Диагностика на хелминтози и методи за хелминтологично изследване

Необходимо е да се изследват за хелминтиази всички пациенти, търсещи медицинска помощ, и особено пациенти, които се обръщат към педиатър, интернист и невролог с оплаквания от явления от стомашно-чревния тракт, нервната система и с анемия. Ако лекарят не винаги може да приложи лабораторни методи за изследване, тогава всеки медицински работник, който оказва помощ в амбулаторна клиника или болница, е длъжен да интервюира пациента за освобождаването на хелминти от него.

Ако има клинични показания, дадени в съответните глави, диагнозата трябва да се изясни с помощта на лабораторни методи за изследване на хелминтиазите.

Във връзка с преобладаването на чревни хелминтиази изследването на изпражненията е от най-голямо практическо значение.

Методи за изследване на изпражненията за хелминтози

Изпражненията се доставят в лабораторията в чисти стъклени съдове (около четвърт чаша изпражнения, взети от различни места в една порция); по време на рутинен преглед е разрешено доставяне на изпражнения в лабораторията в кибритени кутии или популярни отпечатъци.

За контрол на обезпаразитяването се доставя цялата порция изпражнения, събрана след прием на антихелминтно и слабително (в големи затворени стъклени буркани, кофи) (по лекарско предписание).

Микроскопското изследване на изпражненията е основното в диагностиката на чревните хелминтиази; винаги трябва да се предхожда от общо макроскопско изследване на изпражненията за откриване на сегменти от големи цестоди, острици, кръгли червеи и др.

Изпражненията трябва да са пресни или консервирани (в 5% разтвор на формалин), тъй като изсушаването драстично променя структурата на яйцата. В допълнение, когато изпражненията стоят, яйцата на някои хелминти (например анкилостоми) се развиват бързо, което затруднява диагностиката.

Съгласно инструкциите на Министерството на здравеопазването на СССР е необходимо да се изследват изпражненията едновременно по метода на Fülleborn и нативна намазка.

нативна цитонамазка

Нативна цитонамазка: малка част от изпражненията (с размер на грахово зърно), взета с кибрит, стъклена или дървена пръчица от различни места на доставената порция, внимателно се стрива върху предметно стъкло в капка 50% разтвор на глицерол или във физиологичен разтвор или във вода. Покрива се с покривно стъкло, като се притиска леко (с дисекционна игла). Намазката трябва да е тънка, прозрачна и еднородна. Използва се само като допълнение към други методи, които дават обогатяване на лекарството. Трябва да се видят поне два препарата.

За откриване на ларви на хелминти (както и техните яйца) се прави нативна цитонамазка по следния начин (по Шулман): 2-3 g изпражнения се разбъркват старателно чрез „усукване“ със стъклена пръчица в емулсия с пет пъти. количеството чиста вода или физиологичен разтвор. По време на разбъркване ларвите се натрупват на стъклената пръчка, поради което веднага след края на разбъркването капка от емулсията бързо се прехвърля със стъклена пръчка върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се изследва. S. D. Lyubchenko (1936) доказва, че методът на усукване е по-ефективен от метода на намазката, особено по отношение на яйцата на Ascaris. Въз основа на работата на С. Д. Любченко считаме за целесъобразно да заменим метода на намазката с метода на усукване.

Метод на Фюлеборн

Метод на Fülleborn: 5-10 g изпражнения, взети от различни места, се поставят в буркан с вместимост 50-100 ml и се стриват добре със стъклена или дървена пръчица в наситен разтвор на натриев хлорид (400 g от тази сол се разтварят в 1 литър вода, загрята до кипене и филтрирана през слой памук или марля; разтворът се използва студен: специфично тегло 1,2). Разтворът се налива постепенно до получаване на еднородна суспензия, като общото количество на излятия разтвор трябва да бъде приблизително 20 пъти количеството на изпражненията. Fülleborn препоръчва използването на чаени чаши за смесване на изпражненията, но е по-удобно суспензията да се приготвя в 50-100 ml буркани за мехлем, като се използват два буркана за всеки анализ (или в 100 ml чаши).

Веднага след приготвянето на суспензията от повърхността се отстраняват с шпатула, метална лъжичка или парче чиста хартия изплувалите на повърхността големи частици (растителни образувания, несмлени остатъци от храна и др.), след което сместа се оставя да престои 1-1,5 часа. След това време целият филм се отстранява от повърхността на сместа чрез докосване на тел или платинен контур (плосък) с диаметър не повече от 1 cm, огънат под прав ъгъл; Филмът се изтръсква върху предметно стъкло и се покрива с покривно стъкло. Под всяко покривно стъкло (18х18 mm) се поставят 3-4 капки. Общо трябва да се приготвят поне 4 препарата (по едно покривно стъкло за всеки препарат). Примката се калцинира на огън и се измива с вода след всеки анализ.

По метода на Fülleborn бързо и лесно се откриват яйца на всички нематоди (с изключение на неоплодените яйца на кръгли червеи) и яйца на тения джудже.

Методът на Берман се използва за изследване на изпражненията за ларви на хелминти (със стронгилоидоза). Този метод е следният: 5 g фекалии върху метална решетка (за тази цел е удобна цедка за мляко) се поставят върху стъклена фуния, закрепена на статив. В долния край на фунията се поставя гумена тръба със скоба.

Мрежата с изпражнения се повдига и във фунията се излива вода, загрята до приблизително 50 °, така че долната част на мрежата с изпражнения да се потопи във вода. Ларвите активно се движат във водата и се натрупват в долната част на гумената тръба. След 2-4 часа скобата се отваря и течността се спуска в една или две центрофужни епруветки.

След центрофугиране за 1-2 минути, горната част на течността бързо се отцежда, а утайката се нанася на капки върху предметни стъкла и се изследва под покривни стъкла или се разпределя на тънък слой върху 2-3 големи предметни стъкла и след това се изследва без покритие фишове.

Методът на Берман се използва и за изследване на почвата за наличие на ларви на анкилостома.

Метод на Стол

Методът Stoll се използва за определяне на интензивността на инвазията. Децинормален разтвор на натриев хидроксид се излива в специална стъклена колба до марката 56 cm 3 и след това се добавят изпражнения, докато нивото на течността достигне 60 cm 3, т.е. 4 cm 3. След разклащане със стъклени перли се взема 0,075 ml от сместа за изследване и се изследва под едно или две обикновени покривни стъкла. Полученото количество се умножава по 200, за да се получи броят на яйцата, съдържащи се в 1 cm 3 изпражнения.

Изследване на съдържанието на дванадесетопръстника

Дуоденален сок и кистозна жлъчка, получени по обичайния начин чрез сондиране (и кистозна жлъчка и след рефлекс от жлъчния мехур), се смесват старателно с равен обем етилов етер; сместа се центрофугира, след което утайката се изследва под микроскоп. В допълнение към утайката, люспите, плаващи в течността, които могат да съдържат яйца на хелминти, трябва да бъдат подложени на микроскопско изследване. При изследване на яйца от хелминти от стомашен сок и повръщане можете да използвате същата техника.

При съмнение за хелминтни заболявания на черния дроб, жлъчния мехур (описторхоза, фасциолиаза, дикроцелиаза) и дванадесетопръстника (стронгилоидоза) трябва да се извърши изследване на дуоденален сок и стомашно съдържимо.

Изследване на храчки

Храчките се разтриват върху стъклена пластина, плътно се покриват с друга стъклена пластина и се изследват с невъоръжено око на светъл и черен фон, както и под лупа в пропускаща светлина. Отделни парчета храчка („ръждиви” натрупвания, остатъци от тъкани и др.) се нанасят в тънък слой върху предметно стъкло, плътно се покриват с покривно стъкло и се изследват под микроскоп с ниско и голямо увеличение.

а) За диагностициране на цистицеркоза на кожата, подкожната тъкан или мускулите първо се изследва с невъоръжено око асептично изрязано парче от съответната тъкан. Тъканните срезове се раздалечават с помощта на дисекционни игли, за да се открие везикула, видима с невъоръжено око - цистицерк (снимка А); дължината му е 6-20 мм, ширината е 5-10 мм. Когато се открие мехурче, което е съмнително за цистицерк, то се смачква между две предметни стъкла и се изследва под микроскоп. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) се определя от наличието на сколекс с четири издънки и ореол от куки (снимка B).

Снимка.А - цистицерки със сколекси, обърнати навън; B - Глава на свинска тения.

б) За диагностициране на трихинелоза, асептично нарязано парче мускул (бицепс или гастрокнемиус) внимателно се натрошава в 50% разтвор на глицерол в най-тънките влакна с помощта на дисекционни игли. Натрошените мускули се притискат между две предметни стъкла и се изследват при ниско увеличение на микроскопа в затъмнено зрително поле. Изследването на мускулите за трихинелоза се препоръчва да се извърши не по-рано от 8-ия ден от заболяването. Ларвите на трихинелата са в мускулите в навита позиция: те са затворени в капсули с форма на лимон.

Снимка.А - ларви на трихинела в мускулите; Б - Калцирани капсули от трихинела.

Флуороскопия

Най-често флуороскопията се използва за диагностициране на ехинококоза и по-рядко цистицеркоза. Цистицерките се откриват при флуороскопия само след калцификация (при продължително заболяване). През последните години флуороскопията също се използва за диагностициране на аскаридоза както в ранния ларвен стадий, така и отчасти в чревния стадий.

По време на миграцията на ларвите на ascaris (и анкилостома) в белите дробове се откриват нестабилни, понякога множество възпалителни огнища; в същото време се появява значителна еозинофилия в кръвта.

Полово зрелите кръгли червеи са ясно видими при флуороскопия на червата на засегнатите индивиди. Този метод, въпреки неговата сложност и тромавост, трябва да се използва като допълнителен метод за диагностициране на аскаридоза в случаи с отрицателен скатологичен анализ. Според E. S. Geselevich, от 180 пациенти с аскариаза, идентифицирани чрез флуороскопия, 54 яйца от ascaris не са открити в изпражненията (виж).

Хелминтологични методи за изследване. Методите за диагностициране на хелминти се разделят на директни, базирани на директното откриване на самите хелминти или техни фрагменти, както и на ларви и яйца на хелминти (методи за изследване на изпражнения, урина, жлъчка и дуоденално съдържание, храчки, кръв и тъкани, материал, получен чрез изстъргване от перианалната област и субунгвалните пространства), и косвени, с помощта на които се откриват вторични промени, настъпващи в човешкото тяло в резултат на активността на хелминтите (изследвания на морфологичния състав на кръвта, имунологични методи за диагностициране на хелминтози, рентгенови изследвания и др.). От директните методи най-разпространени са копрологичните, които се делят на макро- и микрохелминтоскопия. В някои случаи се използват специални методи.

Макрогелмитоскопски методи за изследваненасочени към търсене на хелминти или техни фрагменти (сколекси, сегменти, части от стробили на цестоди). Те се използват за диагностициране на тези хелминтиази, при които яйцата не се екскретират с екскрементите на пациента или се екскретират в малки количества и не винаги (например при ентеробиоза се откриват острици в изпражненията, при тениидози се откриват сегменти).

За да се открият острици или сегменти от цестоди в изпражненията, изпражненията се гледат с просто око. За диференциална диагноза на тениидозите се препоръчва да се гледат изпражненията, разредени с вода, на отделни малки порции в черни фотографски кювети или в панички на Петри на тъмен фон. Големи образувания, подозрителни за фрагменти от хелминти, се изследват под лупа между две предметни стъкла. Ако според клиничните показания се предполага откриване на малки хелминти или глави на цестоди след лечение, тогава подозрителните частици се изследват под лупа в капка глицерол и, ако е необходимо, под микроскоп.

Микрохелминтоскопски методи за изследване(качествени) са насочени към идентифициране на яйца и ларви на хелминти. Приложете метода на дебелото намазване с целофанова покривна плоча според Kato. Като блендът се състои от 6 мл 3% воден разтвор на малахитово зелено, 500 млглицерин и 500 мл 6% разтвор на фенол. Kato плочи (хидрофилен целофан, нарязан на парчета 20´ 40 мм) се потапят на 24 чв сместа Като, така че да са съседни една на друга (3-5 млРазтвор на Kato за 100 чинии). 100 мгизпражненията се нанасят върху предметно стъкло, покриват се с целофаново покритие според Като и се притискат надолу, така че изпражненията да се размажат върху предметното стъкло в целофановата пластина. Намазката се оставя на стайна температура за избистряне на 40-50 мин.,и след това се гледа под микроскоп. В горещия сезон, за да се предотврати изсъхването на препарата, върху чинията на приготвения препарат се поставя влажна гъба.

За пълно откриване на всички видове хелминти трябва да се използва методът за дебело намазване с целофанова покривна плоча Kato заедно с един от методите за обогатяване. Най-често срещаните от тях са методът на Калантарян и методът на Фюлеборн.

Метод на Калантарян: в колби с широко гърло от 100 млразбъркайте старателно със стъклена пръчка 5 Жизпражнения, като постепенно се добавя наситен разтвор на натриев нитрат (1 килограманатриев нитрат на 1 лвода при кипене) до ръба на чашата. Едрите частици, изплували на повърхността, се отстраняват с хартиена лъжичка. Предметно стъкло се нанася върху повърхността на физиологичния разтвор (физиологичен разтвор се добавя, докато сместа влезе в пълен контакт с предметното стъкло). След 20-30 минПредметното стъкло се отстранява и филмът се гледа под микроскоп. При липса на тази сол можете да използвате наситен разтвор на готварска сол според Fholleborn (400 Жсол в 1 лвряща вода).

Поради факта, че яйцата с голямо специфично тегло (неоплодени яйца на ascaris, яйца на трематоди и големи цестоди) не плават, в допълнение към изследването на повърхностния слой на течността, когато се използва методът на Fülleborn, е необходимо да се прегледат 2- 4 препарата от утайката под микроскоп.

Специални лабораторни методи за изследване на различни хелминтози.

7.7. Методи за определяне на жизнеспособността на яйца и ларви на хелминти

Жизнеспособността на яйцата на хелминтите се определя от външния им вид, чрез оцветяване с витални багрила, чрез култивиране при оптимални условия и чрез поставяне на биологична проба.

7.7.1. Определяне на жизнеспособността на яйца или ларви на хелминти по външен вид

Яйцата на хелминтите се микроскопират първо при ниско увеличение, след това при голямо увеличение. При деформирани и мъртви яйца на хелминти черупката е разкъсана или огъната навътре, плазмата е мътна, разхлабена. В сегментираните яйца топчетата за разцепване (бластомерите) са различни по размер, с неправилна форма и често изместени към единия полюс. Понякога има анормални яйца, които, имайки външни деформации, се развиват нормално. Живите ларви на ascarids имат фина зърнистост само в средната част на тялото, тъй като умират, тя се разпространява по цялото тяло, появяват се големи лъскави хиалинни вакуоли, така наречените "низи от перли".

За да се определи жизнеспособността на зрелите яйца на ascarids, whipworms, pinworms, активните движения на ларвите трябва да бъдат предизвикани чрез леко нагряване на препарата (до температура не по-висока от 37 ° C). По-удобно е да се наблюдава жизнеспособността на ларвите на ascaris и камшичен червей, след като са изолирани от черупката на яйцето чрез натискане върху покривното стъкло на препарата с дисекционна игла или пинсети.

При инвазивните ларви на ascarids често се вижда капачка, която се е ексфолирала в края на главата, а при ларвите на камшичестите червеи, които са завършили развитието си в яйцето, при голямо увеличение на това място се открива стилет. Мъртвите ларви на хелминти, независимо от тяхното местоположение (в яйцето или извън него), забелязват разпадането на тялото. В този случай вътрешната структура на ларвата става бучка или гранулирана, а тялото става мътна и непрозрачна. В тялото се намират вакуоли, а на кутикулата се откриват счупвания.

Жизнеспособността на тениидните онкосфери (говежда, свинска тения и др.) се определя от движението на ембрионите, когато са изложени на храносмилателни ензими. Яйцата се поставят върху часовниково стъкло с кучешки стомашен сок или изкуствен дуоденален сок. Съставът на последния: панкреатин - 0,5 g, натриев бикарбонат - 0,09 g, дестилирана вода - 5 ml. Часовникови стъкла с яйца се поставят в термостат при 36 - 38°С за 4 часа. В този случай живите ембриони се освобождават от мембраните. Обвивките на живите онкосфери също се разтварят в подкислен пепсин и в алкален разтвор на трипсин след 6-8 часа в термостат при 38 °C.

Ако яйцата на тениите се поставят в 1% разтвор на натриев сулфид или 20% разтвор на натриев хипохлорит, или в 1% разтвор на хлорна вода при 36 - 38 ° C, зрелите и живи ембриони се освобождават от черупките и не промяна за 1 ден. Незрелите и мъртви онкосфери се свиват или набъбват и се уголемяват драматично и след това се "разтварят" в рамките на 10 минути до 2 часа. Живите ембриони на тениидите също се движат активно в смес от 1% разтвор на натриев хлорид, 0,5% разтвор на натриев бикарбонат и жлъчка при 36 - 38 ° C.

Жизнеспособността на fasciolia adolescaria, събрана от растения и други обекти от водни обекти, се проверява чрез изследването им върху предметно стъкло във физиологичен разтвор под микроскоп с нагряващ етап. При нагряване ларвите на трематодите в кистата започват да се движат.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на малката тения, методът на Ionina N.S. е най-простият: в живите яйца средната двойка ембрионални куки е или успоредна на страничните, или последните образуват ъгъл в основата на по-малко от 45 ° с медианата. В мъртвите яйца страничните двойки образуват ъгъл в основата със средна двойка повече от 45 ° или куките са произволно разпръснати (тяхното сдвоено разположение е загубено); понякога има набръчкване на ембриона, образуване на грануларност. По-точен метод се основава на появата на движения на онкосферата по време на рязка промяна на температурата: от 5 - 10 ° до 38 - 40 ° C.

Определянето на жизнеспособността на незрели яйца на нематоди трябва да се изследва във влажна камера (блюда на Петри), като яйцата на ascaris се поставят в 3% разтвор на формалин, приготвен в изотоничен разтвор на натриев хлорид при температура 24 - 30 ° C, яйцата на камшичен червей в 3 % разтвор на солна киселина при температура 30 - 35 ° С; яйца на острици в изотоничен разтвор на натриев хлорид при 37 °C. Петриевите панички трябва да се отварят 1 до 2 пъти седмично за по-добра аерация и отново да се намокри филтърната хартия с чиста вода.

Наблюденията за развитието на яйцата на хелминтите се извършват най-малко 2 пъти седмично. Липсата на признаци на развитие в рамките на 2-3 месеца показва тяхната нежизнеспособност. Признаци за развитието на хелминтни яйца са първо етапите на раздробяване, разделянето на съдържанието на яйцето на отделни бластомери. През първите дни се развиват до 16 бластомера, които преминават във втори стадий - морула и т.н.

Яйцата на анкилостомите се култивират в стъклен цилиндър (висок 50 cm и диаметър 7 cm), затворен със запушалка. Смес от равни обеми стерилен пясък, въглен и изпражнения с яйца от анкилостоми, разредени с вода до полутечна консистенция, внимателно се изсипват върху дъното на цилиндъра с помощта на стъклена тръба. По време на 1 - 2 дни утаяване на тъмно при температура 25 - 30 ° C, рабдитоподобните ларви се излюпват от яйцата и след 5 - 7 дни те вече стават филариформени: ларвите пълзят по стените на цилиндъра, където се виждат дори с просто око.

Яйцата на трематоди, които естествено се развиват във вода, като описторхис, дифилоботрииди, фасциоли и други, се поставят върху часовниково стъкло, петриево блюдо или в друг съд и се излива малък слой обикновена вода. При култивиране на яйца на фасциола трябва да се има предвид, че те се развиват по-бързо на тъмно, докато мирацидият се образува в живи яйца при температура 22–24 ° C след 9–12 дни. При микроскопия на развиващите се трематодни яйца ясно се виждат движенията на мирацидия. Fasciola miracidium излиза от черупките на яйцата само на светлина.

Метод на Фуллеборн. Ларвите на анкилостомата и стронгилида се култивират върху агар в петриево блюдо с животински въглен. След задържане в термостат при температура 25 - 30 ° C в продължение на 5 - 6 часа, ларвите се разпространяват върху агара, оставяйки след себе си пътека от бактерии.

Метод на Харада и Мори. 7 ml дестилирана вода се добавят към епруветките, поставени в стойка. Вземете 0,5 g изпражнения с дървена клечка и направете намазка върху филтърна хартия (15 х 150 mm) на 5 cm от левия ръб (тази операция се извършва върху лист хартия, за да се предпази повърхността на лабораторната маса). След това лентата с петна се вкарва в епруветката така, че левият край, свободен от петна, да достигне дъното на епруветката. Покрийте горния край с парче целофан и го увийте плътно с ластик. На епруветката напишете номера, името на предмета. В това състояние епруветките се съхраняват 8-10 дни при температура 28 °С. За да изследвате ларвите, отстранете и отстранете целофановото покритие и отстранете лента от филтърна хартия с пинсети. В този случай трябва да се внимава, тъй като малък брой инфекциозни ларви могат да се придвижат до горния край на филтърната хартия или до стената на епруветката и да проникнат под повърхността на целофана.

Епруветките се поставят в гореща водна баня при 50°C за 15 минути, след което съдържанието се разклаща и бързо се излива в 15 ml епруветка за утаяване на ларви. След центрофугиране, супернатантата се отстранява и утайката се прехвърля върху предметно стъкло, покрива се с покривно стъкло и се микроскопира при слабо увеличение.

За диференциална диагноза на филариформени ларви е необходимо да се използват данните в таблица 3.

Таблица 3

ДИФЕРЕНЦИАЛНА ДИАГНОСТИКА НА ФИЛАРИИРАНИ ЛАРВОИ НА A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, triCHOStrONGYLUS SP.

Ларви	Размери	Характерни особености
A. duodenale	Дължина на тялото около 660 микрона, шапка - 720 nm	Набраздяването на капачката е по-слабо изразено, изпъкналостта на устата е по-малко забележима, предният край на тялото (но не и капачката) е тъп, диаметърът на чревната тръба е по-малък от луковицата на хранопровода, опашният край е тъп
N. americanus	Дължина на тялото около 590 μm, шапка - 660 nm	Обвивката е забележимо набраздена, особено в опашната част на тялото, проекцията на устата изглежда тъмна, предният край на тялото (но не и обвивката) е заоблен като тесния край на пилешко яйце, предната част на червата тръбата е с диаметър като луковицата на хранопровода, опашният край е остро заострен
S. stercoralis	Дължина на тялото около 500 µm	Ларва без обвивка, хранопроводът е около половината от дължината на тялото, опашката е тъпа или разклонена
Trichostrongylus sp.	Дължина на тялото около 750 микрона	Чревният лумен не е прав, а зигзагообразен, каудалният край е заоблен и има формата на копче

7.7.2. Методи за оцветяване на яйца и ларви на хелминти

Мъртвите тъкани в повечето случаи възприемат цветовете по-бързо от живите. Тези характеристики се използват в хелминтологията за определяне на жизнеспособността на яйцата и ларвите на хелминтите. В някои случаи обаче някои бои се възприемат по-добре от живите тъкани, отколкото от мъртвите.

За диференциалното определяне на живи и мъртви яйца и ларви се използват следните бои и методи.

Метилен синьо левкобаза често се използва за оцветяване на живи и мъртви тъкани. Жива клетка или тъкан редуцира метиленово синьо до безцветна левкобаза; мъртвата тъкан няма тази способност и следователно придобива цвят.

Критерият за състоянието на яйцето е оцветяването на ембриона, но не и на черупката. Тази способност е свързана с условията на смърт на яйцеклетката. В случаите, когато влакнестата обвивка в мъртвото яйце не губи своите полупропускливи свойства, тя няма да премине багрила, следователно мъртвият ембрион няма да бъде оцветен. Оцветеният ембрион винаги показва смъртта на яйцето.

За оцветяване на яйца на Ascaris можете да използвате метиленово синьо в разтвор на млечна киселина с каустик алкали (метиленово синьо 0,05 g, сода каустик 0,5 g, млечна киселина - 15 ml). Живите яйца не възприемат цвят; ембрионите на мъртвите яйца посиняват. Ларвите на Ascaris се оцветяват с основен разтвор на брилянтно-крезилова синя боя в концентрация 1:10 000, както следва: капка течност с яйца на ascaris и капка основен разтвор на боята се нанасят върху предметно стъкло. Препаратът се покрива с покривно стъкло, което се притиска плътно към предметното стъкло с леко почукване с дисекционна игла. Под микроскоп се наблюдават броят на излюпените ларви и степента на тяхното оцветяване; след което същото лекарство се преразглежда отново след 2 до 3 часа. Само недеформирани ларви, които не са оцветени в продължение на 2 часа, се считат за живи. Мъртвите ларви или не излизат от яйцата, или се оцветяват, когато черупката се счупи (частично или напълно).

При определяне на жизнеспособността на яйца от аскаридия на птици е възможно препаратите да се оцветят с 5% алкохолен разтвор на йод. Когато се прилага към лекарството, ембрионите на мъртвите яйца на ascarid за 1 - 3 секунди. са боядисани в оранжево.

Мъртвите яйца на описторхиса и онкосферите на говежди тения се оцветяват с разтвор на толуидиново синьо (1: 1000), а мъртвите онкосфери на говежди тения се оцветяват с разтвор на брилянтно-крезилово синьо (1: 10 000). В същото време ембрионите и черупките на мъртвите и живите яйца придобиват цвят. Затова след оцветяването яйцата и онкосферите се измиват с чиста вода и се оцветяват допълнително със сафранин (в разреждане 1:10 000 алкохол, 10°С). Алкохолът премахва боята от черупките, а сафранинът оцветява в червено. В резултат на това живите яйца стават червени; яйца с мъртви ембриони - в синьо, а черупката остава червена. Мъртвите ембриони на онкосфери от говежди тения бързо, в рамките на няколко минути, се оцветяват в яркочервено или розово със сафранин или синьо с брилянтно-крезилово синьо при разреждане 1:4000 или с индигокармин при разреждане 1:1000 - 1 :2000. Живите ембриони не се променят под въздействието на тези цветове дори след 2 - 7 часа.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на малката тения, се препоръчва използването на следните бои:

1. Брилянтно creasyl blue (1:8000) - след 1 час онкосферата на мъртвите яйца е особено ярко оцветена, което се откроява рязко на бледия или безцветен фон на останалата част от яйцето.

2. Сафранин (1:8000 за 2 часа и 1:5000 за 3 до 5 часа).

3. 50% разтвор на пирогалова киселина в разреждане 1: 2 - при излагане в продължение на 1 час при температура 29 - 30 ° C (колкото по-ниска е температурата, толкова по-дълъг е процесът на оцветяване).

7.7.3. Луминесцентен метод за изследване на яйца и ларви на хелминти

Луминесцентната микроскопия дава възможност да се разграничат живи и мъртви обекти, без да се повреди яйцето. За флуоресценция не се използват ултравиолетови лъчи, а синьо-виолетовата част на видимата светлина, с конвенционален микроскоп и предметни стъкла; към осветителя OI-18 се добавя специален набор от цветни филтри.

Живите и мъртвите яйца на кръгли червеи, острици, малки тении, говежди тении, тении и други хелминти светят по различен начин. Това явление се наблюдава както по време на първична луминесценция без използване на багрила, така и при оцветяване с флуорохроми (акридин оранжево, корифосфин, примулин, ауролин, берлерин сулфат, трипафлавин, риванол, хинакрин и др.).

Неоцветени, живи несегментирани яйца на кръгли червеи светят ярко зелено с жълтеникав оттенък; в мъртвите яйца черупката излъчва зелена светлина много по-ярка от тъмнозелената ембрионална част; при яйцата на кръгли червеи с ларва се появява само черупката, докато при мъртвите и черупката, и ларвата са ярко жълти.

Непигментираните и несегментираните живи яйца на острици и тении джуджета излъчват зеленикаво-жълта светлина; в мъртвите яйца черупката интензивно свети на фона на тъмнозелена ембрионална маса.

С вторична луминесценция (при оцветяване на акридиново оранжево при разреждане 1: 10 000 и 1: 50 000 от 30 минути до 2 часа) черупката на живи и мъртви нематоди, трематоди и цестоди луминесцира по различен начин.

Черупката на живи и мъртви яйца на аскариди, токсокари, острици, малки тении, тении на плъхове, тении, тении става оранжево-червена. Ембрионите на живи яйца на ascaris, toxascaris, плъхова тения, широка тения и онкосфера на говежда тения луминесцират в мътно тъмнозелен или сиво-зелен цвят. Мъртвите ембриони от яйца на тези хелминти излъчват "горящ" оранжево-червен цвят. Живите ларви на острици и токсокари (яйчени черупки) излъчват матова сиво-зелена светлина, когато умрат, цветът се променя от края на главата до "горящо" светлозелено, след това жълто, оранжево и накрая до ярко оранжево.

При оцветяване с флуорохроми - корифосфилум, примулин, мъртвите яйца на аскариди и червеи показват блясък от лилаво-жълто до медно-червено. Жизнеспособните яйца не луминесцират, а стават тъмнозелени.

Живите яйца на трематодите (Paragonimus и Clonorchis) не луминесцират след оцветяване с акридиново оранжево, а от мъртвите яйца идва жълтеникаво-зелен цвят.

Методът на луминесценция може да се използва и за определяне на жизнеспособността на ларвите на хелминтите. И така, флуорохромирани с разтвор на акридин оранжев (1: 2000) ларви на стронгилат, рабдита светят: живи - зелени (с оттенък), мъртви - ярко оранжева светлина.

Живите мирацидии, излизащи от черупката, излъчват слаба синкава светлина с едва забележимо светло жълто венче от реснички, но 10-15 минути след смъртта те се появяват като ярка "горяща" светлозелена, а след това оранжево-червена светлина.

7.7.4. биологичен метод за изследване

Например, за да се определи жизнеспособността на яйцата от аскариди (аскариди, прасета, хора, токсокари, токсаскари и др.) На животно (морски свинчета, мишки) са необходими най-малко 100 - 300 яйца с развита ларва. Яйцата Ascaris в изотоничен разтвор на натриев хлорид се пипетират през устата на мишка или морско свинче. След 6-7 дни животното се заколва, отваря се и отделно се изследват черния и белия дроб за наличие на ларви на аскарис. За целта черният дроб и белите дробове се нарязват на малки парчета с ножица и се изследват по метода на Берман или Супряга (точка 6.1.2).

Ако животните са били заразени с живи инвазивни яйца, тогава при аутопсия в черния дроб и белите дробове се откриват мигриращи ларви на Ascaris.

В случай на инфекция яйцата на фасциола в изпражненията на лабораторни животни могат да бъдат открити при зайци след 2 месеца, при морски свинчета - след 50 дни, при мишки - след 35-40 дни.

За по-бърза реакция лабораторните животни се отварят след 20-30 дни и черният дроб се изследва за наличие на млади фасциоли.

За да се определи жизнеспособността на яйцата на малката тения, се препоръчва също така да се хранят с тях незаразени преди това бели мишки, последвано от аутопсия на животните след 92-96 часа и откриване на цистицеркоиди в чревните въси или цестоди в чревния лумен.

За определяне на жизнеспособността на яйцата на opisthorchis се препоръчва метод (German S.M., Beer S.A., 1984), базиран на физикохимичното активиране на жлезата за люпене на мирацидиум и стимулиране на двигателната активност на ларвата, което води до отваряне на яйцето капак и активното освобождаване на мирацидий в експериментални условия.

Суспензия от яйца на описторхис във вода предварително се охлажда до 10 - 12 ° C (всички последващи операции се извършват при стайна температура 19 - 20 ° C). 1 капка суспензия, съдържаща 100-150 яйца, се добавя към центрофужна епруветка. Епруветката се поставя в статив за 5-10 минути. През това време всички яйца имат време да потънат на дъното. След това с лента от филтърна хартия внимателно се изсмуква излишната вода и в епруветката се добавят 2 капки специална среда. Средата се приготвя в 0.005 М Tris-HCl буфер; Към буфера се добавят 12 - 13% разтвор на етанол и багрило (магента, сафранин, еозин, метиленово синьо и др.). Епруветката се разклаща, съдържанието й се прехвърля с пипета върху предметно стъкло и се оставя за 10 минути при леко разклащане. След това добавете 2 капки от посочената среда. Препаратът е готов за микроскопиране под конвенционален светлинен микроскоп при 20x увеличение.

През това време капакът на жизнеспособните ларви се отваря и мирацидиумът активно навлиза в посочената среда. Поради наличието на етанол в него, те се обездвижват след 2-5 минути и след това се оцветяват с багрило. Те могат лесно да бъдат открити и преброени под микроскоп.