РН на мышах с целью установления экзотоксина. Постановка основного опыта РСК Борде - Жангу

119. Реакции Панди и Нонне - Апельта

В качестве реактива для проведения реакции Панди используют надосадочную прозрачную жидкость, которую получают при сильном взбалтывании 100 г жидкой карболовой кислоты с 1000 мл дистиллированной воды. Для получения осадка и прозрачной жидкости (реактива) данную смесь помещают сначала на 3-4 ч в термостат, а затем 2-3 дня выдерживают при комнатной температуре.

Часовое или предметное стекло кладут на темную бумагу и наносят на него 2-3 капли реактива, затем 1 каплю спинномозговой жидкости. При помутнении капли или появлении нитевидной мути по ее периферии реакцию считают положительной.

Для проведения реакции Нонне - Апельта необходимы чистые пробирки, насыщенный раствор аммония сульфата, дистиллированная вода, темная бумага. Насыщенный раствор аммония сульфата готовят следующим образом: в колбу емкостью 1000 мл помещают 0,5 г химически чистого нейтрального аммония сульфата, затем наливают 100 мл дистиллированной воды, подогретой до 95 °С, взбалтывают до полного растворения соли и оставляют на несколько дней при комнатной температуре. Спустя 2-3 дня раствор фильтруют и определяют рН. Реакция должна быть нейтральной.

В пробирку наливают 0,5-1 мл полученного раствора и осторожно по стенке пробирки добавляют такое же количество спинномозговой жидкости. Через 3 мин оценивают результат. Появление беловатого кольца свидетельствует о положительной реакции. Затем содержимое пробирки взбалтывают, определяют степень помутнения, сравнивая с пробиркой, содержащей дистиллированную воду. Результаты реакции оценивают на фоне черной бумаги.

120. Реакция Борде - Жангу

Ценный диагностический тест при выявлении хронической гонореи среди лиц, страдающих хроническими воспалительными заболеваниями мочеполовой системы. По данным литературы, при правильном использовании этого метода выявляют до 80 % случаев гонореи, не обнаруженной бактериоскопическим или бактериологическим методом.

Реакция Борде - Жангу может быть следовой в результате перенесенного ранее заболевания или применения гоновакцины с диагностической (иммунобиологический метод провокации), а также лечебной (лечение хронических воспалительных процессов мочеполовой системы у женщин по Бакшееву) целью. Поэтому перед ее проведением необходимо тщательно собрать анамнез,

Реакция может быть и ложноположительной при введении молока, использовании в лечебных целях пирогенала.

Следовательно, положительная реакция Борде - Жангу не служит бесспорным доказательством наличия гонококковой инфекции, как и отрицательная не может быть свидетельством отсутствия гонореи. Однако положительные результаты ее в течение длительного времени должны нацелить врача на поиск очага гонококковой инфекции в организме.

В качестве антигена используют убитую гонококковую культуру, содержащую 3-4 млрд. микробных тел в 1 мл. Гонококковый антиген консервируют раствором формальдегида и разливают в ампулы по 1- 5 мл. Не вскрытые ампулы пригодны в течение 6 мес, вскрытые можно сохранять 2-3 дня в стерильной пробирке в холодильной камере при температуре 3-5 °С,

Реакцию связывания комплемента Борде - Жангу проводят аналогично реакции Вассермана (см. № 121). Гонококковый антиген разводят изотоническим раствором натрия хлорида соответственно указанному на этикетке ампулы титру. Реакцию проводят чаще всего в объеме 2,5 мл, поэтому к 0,5 мл разведенной 1: 5 испытуемой сыворотки добавляют в каждую пробирку по 0,5 мл разведенного антигена. Остальные 1,5 мл составляют 1 мл гемолитической системы и 0,5 мл комплемента.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной в разной степени задержки гемолиза в испытуемой сыворотке. В контроле (сыворотка крови здоровых людей) наблюдается полный гемолиз.

121. Реакция Вассермана

В сыворотке крови больных сифилисом находятся реагины и антитела. Реагины обладают свойством вступать в соединения с кардиолипиновым антигеном. Специфические антитела против бледной трепонемы вступают в соединение со специфическими антигенами. Образовавшиеся комплексы антиген - антитело сорбируют добавляемым в реакцию комплементом. Индикацию производят путем введения гемолитической системы (эритроциты барана + гемолитическая сыворотка).

Для проведения реакции требуются:

а) изотонический раствор натрия хлорида;

б) ультраозвученный трепонемный (хранят в холодильнике при температуре +4 °С) и кардиолипиновый (хранят при комнатной температуре) антигены;

в) комплемент, представляющий собой сыворотку крови, полученной при пункции сердца 5-10 здоровых гвинейских свинок. Может сохраняться в холодильнике в течение 2 мес при условии
консервирования 4 % раствором борной кислоты и 5 % раствором натрия Сульфата;

г) гемолизин - гемолитическая сыворотка крови кролика, иммунизированная эритроцитами барана с разными титрами (хранят в холодильнике при температуре 4 °С);

д) эритроциты барана, получаемые пункцией яремной вены. Кровь собирают в стерильную банку со стеклянными шариками (для перемешивания), встряхивают 15 мин. Сгустки фибрина отделяют фильтрованием через стерильную марлю. Дефибринированную кровь можно хранить в холодильнике до 5 сут.

Иногда возникает необходимость более длительного хранения крови барана, в связи с чем ее консервируют специальным консервантом (6 г глюкозы, 4,5 г кислоты борной, 100 мл изотонического раствора натрия хлорида), который кипятят на водяной бане по 20 мин в день в течение 3 сут. На 100 мл дефибринированной крови барана требуется 15 мл консерванта. Консервированную таким образом дефибринированную кровь хранят в холодильнике.

Проведению основного опыта предшествует несколько этапов.

У больного из локтевой вены берут 5-10 мл крови и обрабатывают сыворотку. У детей кровь можно взять из височной вены или разреза на пятке. Пункцию делают стерильными инструментами, шприц и иглу
предварительно промывают изотоническим раствором натрия хлорида.

Кровь для исследования берут натощак; за 3-4 дня до исследования больному запрещают употреблять наркотические средства, препараты наперстянки, принимать алкоголь.

Не следует проводить исследование у больных с повышенной температурой тела, после травмы, операции, наркоза, перенесенных недавно инфекционных заболеваний, у женщин во время менструации, у беременных (в последние 10 дней беременности), рожениц (в первые 10 дней после родов), а также новорожденных (в первые 10 дней жизни).

Полученную кровь в стерильной пробирке помещают на 15-30 мин в термостат при температуре 37 °С. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки стерильной стеклянной палочкой и ставят в холодильник на сутки. Отделившуюся прозрачную сыворотку (над сгустком) отсасывают пастеровской пипеткой с помощью резиновой груши либо осторожно сливают в другую стерильную пробирку и инактивируют на водяной бане в течение 30 мин при температуре 56 °С. Приготовленную таким образом для опыта сыворотку можно хранить в холодильнике до 5-6 дней.

Антигены разводят соответственно способу и титру, указанным на этикетке.

Приготавливают гемолитическую систему. Для этого дефибринированную кровь или эритроциты барана в количестве, необходимом для проведения реакции, центрифугируют, плазму осторожно отделяют, а осадок промывают 5-6 объемами изотонического раствора натрия хлорида до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет совершенно бесцветной. Из осадка готовят 3 % взвесь эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида по утроенному титру.

Раствор гемолитической сыворотки и взвесь эритроцитов барана быстро смешивают и помещают в термостат на 30 мин.

Сухой комплемент разводят изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:10, нормальную инактивированную сыворотку человека- 1:5.

Комплемент титруют в 30 пробирках, помещенных в штатив по 10 пробирок в 3 ряда. В двух рядах его титруют в присутствии двух антигенов, в третьем - с изотоническим раствором натрия хлорида. Пять пробирок являются контрольными: две для соответствующих двух антигенов и по одной - для контроля комплемента, гемолитической сыворотки и изотонического раствора натрия хлорида на гемотоксичность; заполняют их следующим образом:

Пробирки помещают на 45 мин в термостат, после чего их проверяют. Гемолиза не должно быть ни в одной пробирке.

Комплемент в разведении 1:10 разливают в 10 пробирок 1-го ряда штатива в дозах: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 и 0,55 мл. К содержимому каждой пробирки добавляют изотонический раствор натрия хлорида до 1 мл и тщательно перемешивают. По 0,25 мл смеси из каждой пробирки переносят в соответствующие пробирки 2-го и 3-го рядов. Штатив с пробирками встряхивают, в 3-й ряд пробирок добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, вновь встряхивают и помещают на 45 мин в термостат при температуре 37 °С. Нормальную сыворотку крови человека, разведенную изотоническим раствором натрия хлорида в пропорции 1:5, по 0,25 мл разливают во все 30 пробирок.

Антиген I (трепонемный ультраозвученный), разведенный по титру изотоническим раствором натрия хлорида, по 0,25 мл добавляют в 10 пробирок 1-го ряда; антиген II (кардиолипиновый в том же разведении и в том же количестве) - в 10 пробирок 2-го ряда. В 10 пробирок 3-го ряда приливают по 0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида, оставшиеся 0,25 мл выливают. После инкубации в термостате в 20 пробирок (1-го и 2-го ряда) добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и повторно помещают в термостат на 45 мин.

Через 45 мин определяют рабочую дозу комплемента, то есть титр его с надбавкой в пределах 15-20 %.

Титром комплемента считают его минимальное количество, вызывающее полный гемолиз эритроцитов барана в присутствии антигена и нормальной сыворотки крови человека.

Основной опыт заключается в том, что каждую испытуемую инактивированную сыворотку, разведенную в пропорции 1: 5 изотоническим раствором натрия хлорида, разливают по 0,25 мл в три пробирки. В первую пробирку добавляют 0,25 мл антигена I, во вторую - 0,25 мл антигена II, в третью (контроль) -0,25 мл изотонического раствора натрия хлорида. Во все пробирки добавляют также по 0,25 мл разведенного до рабочей дозы комплемента. Все пробирки помещают на 45 мин в термостат, затем в них добавляют по 0,5 мл гемолитической системы, встряхивают и ставят в термостат на 45-50 мин. Результат опыта регистрируют после наступления полного гемолиза в контрольных пробирках.

Результаты реакции оценивают плюсами: полная задержка гемолиза (резкоположительная реакция) ++++, значительная (положительная реакция) +++, частичная (слабоположительная реакция) ++, незначительная (сомнительная реакция) - ±, отсутствие задержки гемолиза (отрицательная реакция) -.

При количественном методе проведения реакции Вассермана опыт ставят с уменьшающимися объемами сыворотки, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида.

Схема проведения основного опыта реакции Вассермана

Клиническое значение реакции Вассермана трудно переоценить. Ее проводят всем больным до начала лечения, но особое значение она имеет при скрытом сифилисе, поражении внутренних органов и нервной системы.

Результаты реакции Вассермана характеризуют качество проведенного лечения, что дает основание в определенные сроки снимать с учета лечившихся больных.

При первичном сифилисе реакция Вассермана положительная обычно в конце 6-й недели с момента заражения; при вторичном свежем сифилисе она положительная почти в 100 % случаев, при вторичном рецидивном -в 98-100%; третичном активном - в 85%; третичном скрытом - в 60 % случаев.

Реакцию Вассермана проводят двукратно всем беременным, больным с соматическими, нервными, психическими и кожными болезнями, а также декретируемым контингентам населения. В то же время к.положительным и слабоположительным результатам реакции следует относиться критически, так как они могут быть в конце беременности и после родов, при гипертиреозе, малярии, проказе, распаде злокачественной опухоли, инфекционных заболеваниях, коллагенозах и др. Поэтому при наличии клинических проявлений болезни их следует учитывать, наряду с данными бактериоскопии, в первую очередь.

Вместе с тем имеются факторы, которые могут исказить истинный характер полученных результатов реакции Вассермана: плохо вымытая лабораторная посуда (следы кислоты и щелочи в пробирках), длительное хранение крови, взятой для исследования, употребление больными жиров и алкоголя перед обследованием, период менструации и др.

Во всех случаях желательно проводить комплексное обследование больного, включающее, помимо реакции Вассермана, также РИБТ (см. 122, 123, 124) и др.

122. Реакция Закса - Витебского (цитохолевая)

Применяется для выявления сифилиса. Основана на образовании осадка при смешивании сыворотки крови больного с антигеном.

Для приготовления антигена мышцы нескольких бычьих сердец очищают от сухожилий, фасций, жира, измельчают на мясорубке и экстрагируют 5-кратным объемом 96 % этилового спирта в течение 15 дней при ежедневном 20-минутном встряхивании. Полученный экстракт выпаривают на водяной бане в фарфоровой чашке под вакуумом. К остатку (ярко-желтой массе липоидов) добавляют горячий 96 % этиловый спирт в количестве 1/3 объема взятых для экстрагирования мышц.

Экстракт держат 3 дня при комнатной температуре, фильтруют (в холодной воде) и добавляют 0,3-0,6 % раствор кристаллического холестерина в зависимости of результатов титрования положительными и отрицательными сыворотками. Хранят цитохолевый антиген при комнатной температуре в запаянных ампулах либо закупоренных пробирках.

Методика. К 2 мл изотонического раствора натрия хлорида быстро приливают 1 мл цитохолевого антигена и оставляют при комнатной температуре на 15 мин до появления хлопьев. В пробирку к 0,2 мл инактивированной сыворотки добавляют 0,1 мл антигенной эмульсии, встряхивают в течение 3 мин и оставляют в покое на 30 мин, после чего добавляют 1 мл изотонического раствора натрия хлорида.

В контрольную пробирку с антигеном добавляют 1,2 мл изотонического раствора натрия хлорида и 0,1 мл антигенной эмульсии. В контроле хлопьев не должно быть. Результаты реакции учитывают визуально или с помощью лупы и обозначают в зависимости от количества выпавших хлопьев плюсами (++++, +++, ++). При отрицательной реакции хлопьев нет, но содержимое пробирки может слегка опалесцировать.

В 1931 г. П. Sachs и Е. Witebsky предложили модификацию данной методики, заключающуюся в том, что антиген разводят двухфазно: к 1 части антигена добавляют 2 части изотонического раствора натрия хлорида, выдерживают при комнатной температуре 5 мин и добавляют еще 9 частей изотонического раствора натрия хлорида. Рекомендовано также разводить антиген 2 % раствором натрия хлорида, что, по мнению авторов, повышает чувствительность реакции. Возможна и количественная модификация реакции с разведением сыворотки (1:4, 1:8, 1: 16, 1:32, 1: 64 и т. д.).

Реакция достаточно чувствительна, занимает мало времени (около 1 ч), результаты ее читаются сразу.

123. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

С помощью реакции в сыворотке крови больных сифилисом выявляют антитела и комплемент, обездвиживающие бледную трепонему.

При первичном сифилисе РИБТ преимущественно отрицательная, при вторичном - положительная в 92-96 % случаев, при третичном - в 92-100 %,при сифилисе нервной системы и врожденном - в 86-89 % случаев.

Положительные результаты РИБТ отмечены при саркоиде, эритематозе, диабете, злокачественных опухолях, вирусном гепатите, циррозе печени, малярии, лепре, инфекционном мононуклеозе, некоторых болезнях жарких стран (пинта, фрамбезия и др.).

Антигеном служит взвесь бледных трепонем, взятых из яичек кролика, зараженного сифилисом путем введения в яичко 0,75-1 мл взвеси бледных трепонем в изотоническом растворе натрия хлорида (50 особей в поле зрения).

Материал из яичка следует брать через 6-8 дней после заражения животного. Перед взятием антигена кролика забивают методом обескровливания (пункция сердца или сонной артерии). Ткань яичка измельчают и заливают сывороткой крови здорового кролика, разведенной изотоническим раствором натрия хлорида, встряхивают в течение -30 мин, а затем 10 мин центрифугируют (1000 оборотов в 1 мин). Надосадочную жидкость микроскопируют. В каждом поле зрения должно быть не менее 10-15 бледных трепонем.

Комплемент готовят обычным способом из крови гвинейских свинок.

Для проведения РИБТ необходимы: 1,2 мл 0,2 % раствора желатина, 2,8 мл 5 % раствора альбумина, 1,6 мл взвеси бледных трепонем; рН среды - 7,2. К указанной смеси прибавляют 0,15 мл комплемента (коктейль). Параллельно ставят две пробы: с активным (опыт) и реактивным (контроль) комплементами.

В меланжеры до отметки «1» набирают исследуемую сыворотку, а затем до отметки «2» - коктейль и закрывают их стерильным резиновым кольцом.

Одновременно аналогичную реакцию проводят с заведомо положительной и заведомо отрицательной сыворотками.

Меланжеры нумеруют и ставят в термостат при температуре 35 °С на 18-20 ч, после чего попарно (опыт - контроль) извлекают их из термостата и содержимое выливают в соответствующие пробирки. На предметное стекло наносят 2 капли: слева - опыт, справа - контроль, накрывают покровным стеклом и микроскопируют в темном поле зрения.

Вначале изучают результаты контроля: определяют процент подвижных и неподвижных бледных трепонем. Формула подсчета: X = (А - В)/А * 100, где А - количество подвижных бледных трепонем в контроле; В - количество подвижных бледных трепонем в опыте.

Пример: (24 - 19) / 24 * 100 = 21 %.

Оценки результатов РИБТ: ниже 20 % - отрицательный. 21-30 % - сомнительный, 31-50 % - слабоположительный, свыше 50 % -положительный.

При коклюше раздражителями являются палочка Борде—Жангу и ее токсины, которые длительно вызывают постоянное раздражение нервных рецепторов на слизистой оболочке дыхательных путей, что ведет к созданию в центральной нервной системе (в дыхательном и кашлевом центрах) застойного очага возбуждения, который оказывает влияние на характер дыхания у детей.

По данным И. А. Аршавского, В. Д. Соболевой (1948), в спазматический период на высоте вдоха задерживается дыхание (инспираторное апноэ). Дыхательная мускулатура в этот момент приходит в состояние тонической судороги, которая особенно сильно выражена в диафрагме. Последняя в это время практически не участвует в акте дыхания.

Длительность инспираторной судороги — 3 — 45 с, на фоне которой происходят короткие выдыхательные толчки небольшой силы, осуществляемые за счет реберного механизма. Продолжаются они до тех пор, пока ребенок не выдыхает весь забранный воздух. Затем следует форсированный шумный вдох, сопровождающийся свистом (реприз). И все это за время приступа повторяется несколько раз. И. А. Аршавский, В. Д. Соболева (1948) считают, что в основе инспираторной судороги лежит феномен Траубе. Traube (1847), раздражая фарадическим током центральный отрезок блуждающего нерва, наблюдал остановку дыхания в фазе инспирации.

При коклюше при возрастающей раздражимости может наступить остановка дыхания в той или иной фазе (экспирации или инспирации), особенно у детей первых месяцев жизни.

Застойный очаг возбуждения в центральной нервной системе приобретает все признаки доминанты по Ухтомскому: возбудимость этого очага повышена, вследствие чего он притягивает и суммирует все раздражения и импульсы, поступающие в центральную нервную систему; возбуждение из доминантного очага иррадиирует на соседние центры — сосудистый (повышается давление), мышечный (наблюдаются судороги мышц лица и конечностей), рвотный (в конце приступа появляется рвота); очаг стойкий, держится долго и оставляет следовую реакцию.

Это хорошо подтверждается в жизни. Нередко у ребенка, перенесшего коклюш, через 2 — 6 мес появляется приступообразный кашель при других заболеваниях дыхательных путей (грипп, вирусные катары верхних дыхательных путей, пневмонии и др.).

«Руководство по воздушно-капельным инфекциям», И.К.Мусабаев

БОРДɖЖАНГУ́ РЕАКЦИЯ , то же, что реакция связывания комплемента.

• - Борде́—Жангу́ реакция, то же, что реакция связывания комплемента...
• - то же, что реакция связывания комплемента...

  Ветеринарный энциклопедический словарь

• - см. Борде-Жангу среда...

  Большой медицинский словарь

• - Schiff reaction) - тест, позволяющий выявить наличие в тканях гликопротеинов, полисахаридов, некоторых мукополисахаридов, гликолипидов и ряда жирных кислот...

  Медицинские термины

• - БОРДЕ, ЖЮЛЬ ЖАН БАТИСТ ВЕНСАН, бельгийский бактериолог и иммунолог, удостоенный в 1919 Нобелевской премии по физиологии и медицине за работы в области иммунологии. Родился 13 июня 1870 в Суаньи...

  Энциклопедия Кольера

• - французская актриса...
• - професс. франц. слов. в высш. уч. зав.; р. 1772, † 27 авг. 1851...

  Большая биографическая энциклопедия

• - см. Палочка коклюша...

  Большой медицинский словарь

• - (J. J. Bordet, 1870-1961, бельг. бактериолог...

  Большой медицинский словарь

• - теория, согласно которой в основе образования комплекса антиген - антитело лежат явления адсорбции...

  Большой медицинский словарь

• - см. Палочка коклюша...

  Большой медицинский словарь

• - см. Реакция связывания комплемента...

  Большой медицинский словарь

• - плотная питательная среда для культивирования гемоглобинофильных бактерий, представляющая собой картофельно-глицериновый кровяной...

  Большой медицинский словарь

• - Жюль, бельгийский иммунолог и бактериолог. Окончил в 1892 Брюссельский университет. В 1894-1901 работал в Институте Пастера в Париже. В 1901 основал и возглавил Институт Пастера в Брюсселе...
• - Бордё Жюль, бельгийский иммунолог и бактериолог. Окончил в 1892 Брюссельский университет. В 1894-1901 работал в Институте Пастера в Париже. В 1901 основал и возглавил Институт Пастера в Брюсселе...

  Большая Советская энциклопедия

• - бельгийский иммунолог и бактериолог. Исследовал механизм серологических реакций; открыл реакцию связывания комплемента. Установил возбудителя и разработал метод иммунизации против коклюша. Нобелевская премия...

  Большой энциклопедический словарь

"Борде Жангу реакция" в книгах

Жюль Борде и Николай Чистович