Ekzaminimi mikroskopik i feces. Diagnoza intravitale e helmintiazave

Metodat e drejtpërdrejta: zbulimi i vetë helminthëve, fragmentet e tyre, vezët, larvat në feces, urinë, sekretimin duodenal, pështymë, mukozën e hundës dhe vaginale, përmbajtjen e hapësirave subunguale, copa të indeve të biopsuara.

Gjatë diagnostikimit, është e pamundur të identifikohen me asnjë metodë vezët ose larvat e të gjitha llojeve të helminthëve që jetojnë në sistemin tretës të njeriut. Kështu, kur përdoret metoda e flotacionit, vezët trematodë dhe, në disa raste, vezët e krimbave të pafertilizuara nuk notojnë në filmin sipërfaqësor (për shkak të gravitetit të lartë specifik). Në feçe, është shumë e rrallë të gjesh vezë të krimbave, onkosfera teniide, të cilat zbulohen me metoda të veçanta kërkimore: gërvishtje nga palosjet perianale për krimbat e gjilpërave dhe teniidet, metodat e sedimentimit për trematodat (vezë opistorku, etj.). Prandaj, për një ekzaminim të synuar të një pacienti për helminthiazat, mjeku në referim duhet të tregojë se cilave helminths duhet t'i kushtohet vëmendja kryesore (diagnoza), e cila do t'i lejojë asistentit të laboratorit të zgjedhë teknikën e duhur për identifikimin e këtij lloji helminth. Feçet e marra nga vende të ndryshme të feçeve në një sasi prej të paktën 50 gram (lugë çaji) në një enë qelqi të pastër duhet të dërgohen në laborator jo më vonë se një ditë pas defekimit dhe të ekzaminohen në ditën e marrjes.

Nëse është e nevojshme mbajtja e feçeve deri të nesërmen, vendoset në një vend të ftohtë (0-4 ° C) ose mbushet me një nga konservantët.

Para studimit, feçet përzihen me një shkop në mënyrë që vezët e helminthit të shpërndahen në mënyrë të barabartë në masën totale.

Nëse në preparat gjenden ndonjë vezë helminti, shikimi nuk ndërpritet, sepse. mund të jetë pushtim i dyfishtë ose i trefishtë.

Monitorimi i efektivitetit të trajtimit të helminthiasis kryhet duke ekzaminuar feces për vezë helminth në 2-3 javë ose 2-3 muaj pas trajtimit, në varësi të helminthit të zbuluar.

Metodat makroskopike përdoren për të zbuluar helminthë të tëra seksualisht të pjekur ose fragmente të tyre në feces me sy të lirë ose me një xham zmadhues me dorë.

Shpesh në sipërfaqen e feçeve pas defekimit, mund të shihni krimba që zvarriten në mënyrë aktive; ekskretohet me feces krimb të rrumbullakët; ndonjëherë vetë njerëzit vërejnë shkarkimin e helminthëve. Në pacientët me diphyllobothriasis, fragmentet e strobilës së shiritit (në formën e "petëve") mund të bien në sy, dhe tek ata të infektuar me teniide (krimb derri ose gjedhi), segmente helminthësh (në formën e "prerjeve të bardha" ) shpesh lënë jashtëqitjet (në formën e "prerjeve të bardha") ose ato zvarriten në mënyrë aktive nga anusi.

Metoda makroskopike është ajo kryesore për diagnozën diferenciale të teniadozës dhe teniarhinkozës (në kombinim me një studim).

Nga metodat e veçanta makroskopike, përdoret metoda e larjes sekuenciale të feces.

Feçet përzihen në ujë për të marrë një pezullim uniform, pas së cilës, nën ndriçim të mirë, ato ekzaminohen me kujdes në pjesë të vogla të veçanta në kuveta fotografike të zeza ose në një sfond të errët në enët Petri. Të gjitha grimcat e dyshimta të bardha, formacionet e mëdha të dyshuara për fragmente helminte hiqen me piskatore ose një gjilpërë disekuese dhe ekzaminohen nën një xham zmadhues midis dy rrëshqitjeve të qelqit. Helmintet e vogla ose kokat e cestodave ekzaminohen nën një xham zmadhues në një pikë glicerinë ose nën një mikroskop.

Kur përdoret kjo metodë për diagnostikimin e segmenteve të derrit, shiritit të gjedhit, shiritit të gjerë, segmentet e lara vendosen midis dy gotave dhe, duke parë dritën nën një xham zmadhues ose një zmadhim të ulët të mikroskopit, specia përcaktohet nga struktura e mitrës (në një segment të pjekur të shiritit të derrit, 8-12 degë anësore, dhe në një krimb demi 18-32, më shpesh 28-32, në një shirit të gjerë, segmentet janë më të gjera dhe mitra është në qendra në formën e një "rozete"). Nëse mitra është dobët e dukshme, atëherë së pari mund të mbahet për ca kohë në një zgjidhje 50% të glicerinës, pas së cilës edhe trungjet e zbrazëta të mitrës janë qartë të dukshme.

Gjatë përcaktimit të këtyre cestodave nga struktura e kokave të shkëputura, ato vendosen me kujdes me një qafë në një pikë gliceroli midis rrëshqitjeve të qelqit (ose mbulohen me një mbulesë) dhe, pa shtrydhje, ekzaminohen nën një mikroskop me zmadhim të ulët.

Metodat mikroskopike të ndara në të thjeshta, komplekse dhe të veçanta.

Metodat e thjeshta përfshijnë njollosjen amtare, lyerjen amtare me tretësirën e Lugolit, njollosjen e trashë nën celofan sipas Kato, përdredhjen (sipas Shulman) dhe skrapimin perianal.

Metodat komplekse janë më efikase dhe bazohen në përqendrimin e vezëve në preparate. Ato përfshijnë para-trajtimin e feçeve me reagentë të lëngshëm, si rezultat i të cilave vezët e helminthit ose precipitojnë ose notojnë në sipërfaqen e lëngut.

Metodat komplekse përfshijnë metodat e pasurimit:

a) flotacioni (kur graviteti specifik i vezëve është më i vogël se pesha specifike e tretësirës së kripur dhe vezët notojnë në filmin sipërfaqësor);

b) sedimentimi (kur pesha specifike e vezëve është më e madhe se pesha specifike e tretësirave të kripës dhe vezët vendosen në sediment).

Metoda të veçanta për zbulimin e vezëve dhe larvave të helminthëve, kisteve dhe formave vegjetative të protozoarëve janë metodat e skrapimit, flotacionit, sedimentimit, larvoskopisë, protozooskopisë, studimi i tëmthit dhe metodat e ngjyrosjes së njollave të feçeve, pështymës etj.

Metoda të thjeshta për ekzaminimin e feces

njollosje amtare. Një grimcë e vogël e jashtëqitjes merret me një shkop druri nga pjesë të ndryshme të pjesës së dorëzuar, fërkohet mirë në një rrëshqitës xhami në një pikë solucion glicerine 50% dhe bëhet një njollë e hollë në 2-3 rrëshqitës xhami. Të paktën 3 preparate ekzaminohen nën një mikroskop. Disavantazhi i metodës: shihet një sasi e vogël materiali, prandaj nuk përdoret si metodë e pavarur.

Metoda e përdredhjes(Shulman). 2,0-3,0 g feçe vendosen në një gotë, trazohen plotësisht me një shufër qelqi me një vëllim 5-fish të kripës ose ujit të distiluar, duke bërë lëvizje të shpejta për 2-3 minuta dhe largohet shpejt shkopi nga përzierja. Një pikë e përzierjes në fund të shkopit transferohet në një rrëshqitës xhami dhe mikroskopi. Parimi i forcës centrifugale shkakton akumulimin e vezëve dhe larvave në një shkop.

Metoda e njollosjes së trashë Kato me celofan. Reagentët kimikë: glicerol 100%, tretësirë ​​fenoli 6% (100 ml ujë + 6 g fenol), 3% tretësirë ​​malakit jeshil (2,5 ml ujë të distiluar + 75 ml malakit jeshil).

Përgatitja e tretësirës së punës: 100 ml tretësirë ​​fenoli 6% + 100 ml glicerinë e pastër + 1,2 ml tretësirë ​​e gjelbër malakit 3%.

Përgatitja e shiritave të celofanit: priten shirita celofani, madhësia e të cilave korrespondon me rrëshqitjen e xhamit. Celofani duhet të jetë hidrofil (celofani që digjet është i përshtatshëm; nëse shkrihet, atëherë është i papërshtatshëm). Në tretësirën e punës mund të përpunohen deri në 5 mijë shirita. Koha e ekspozimit të shiritave të celofanit deri në gatishmëri për përdorim në tretësirën e punës është të paktën 24 orë.

Përparimi i kërkimit. 50 mg feçe (madhësia e një bizele të madhe) aplikohet në një rrëshqitje xhami, fërkohet me një shkop individual (xhami, druri), mbulohet me një rrip celofani dhe fërkohet sipër me një tapë gome derisa të merret një njollë uniforme e trashë. . Ilaçi thahet në temperaturën e dhomës për një orë ose në një termostat në 40°C për 20-30 minuta dhe mikroskopikisht (koha e ekspozimit mund të rritet në temperaturën e dhomës deri në 5-6 orë ose më shumë).

Për sa i përket efikasitetit, kjo metodë i afrohet metodës së flotacionit, por zbulon pushtim intensiv dhe me intensitet mesatar.

Përdoret si metodë e pavarur diagnostikuese dhe rekomandohet për ekzaminim masiv të popullatës.

Në laboratorët diagnostikues klinikë, përdoret si një metodë e unifikuar për diagnostikimin e helminthëve në mungesë të diagnozave specifike sipas udhëzimeve të mjekëve.

Metodat për skrapimin perianal dhe njollosjen amtare me tretësirën e Lugol përshkruhen në seksionin mbi metodat speciale.

Metoda të sofistikuara të pasurimit të fekaleve

Metodat e pasurimit bazohen në ndryshimin në peshën specifike të vezëve të helminthit dhe zgjidhjes së kripës së përdorur.

Kur aplikoni metodën e flotacionit, mund të përdoren zgjidhjet e mëposhtme të kripës:

1. Tretësirë ​​e nitratit të plumbit PbNO3 (nitrat plumbi) me dendësi 1,5. Përgatitet në masën 650 g të substancës për 1 litër ujë. Kripa shpërndahet në pjesë në ujë të nxehtë në një tas smalt, nxehet në sobë dhe përzihet vazhdimisht derisa të tretet plotësisht. Nuk është e nevojshme të filtrohet tretësira. Tretësira përgatitet në ditën e studimit, pasi me kalimin e kohës jep precipitat dhe dendësia e tij fillon të bjerë pas 24 orësh.Nëse tretësira përgatitet në sasi të mëdha, atëherë në ditët në vijim para studimit nxehet. duke e trazuar precipitatin. Përgatitja e tretësirës kryhet në një kapuç tymi, pasi nitrati i plumbit është një kripë e metaleve të rënda.

2. Një tretësirë ​​e nitratit të amonit NH4NO3 (nitrat amonit kokrrizore ose të zakonshme) me densitet 1,3 përgatitet në të njëjtën mënyrë si ai i mëparshmi, por në masën 1500 g lëndë për 1 litër ujë të nxehtë.

3. Një tretësirë ​​e nitratit të natriumit NaNO3 ose nitrat natriumi me densitet 1,38-1,4 përgatitet në masën 1000 g të substancës për 1 litër ujë të nxehtë.

4. Përgatitet tretësirë ​​e tiosulfatit të natriumit Na2S2O3×5H2O (hiposulfit natriumi) me densitet 1,4 në masën 1750 g lëndë për 1 litër ujë të nxehtë.

5. Një tretësirë ​​e sulfatit të natriumit Na2SO4 (kripë epsom) me densitet 1,26-1,28 përgatitet në masën 920 g të substancës për 1 litër ujë të nxehtë.

6. Një tretësirë ​​e klorurit të zinkut ZnCl2 (klorur zinku) me densitet 1,82 përgatitet në masën 2000 g të substancës për 1 litër ujë të nxehtë. Tretësira e ftohur nuk kristalizohet.

7. Tretësirë ​​e ngopur e klorurit të natriumit NaCl (kripë e zakonshme) me dendësi 1,18-1,2. Në! l ujë, shtoni 400-420 g kripë në pjesë në një kovë të emaluar me ujë të valë, duke e përzier vazhdimisht derisa të treten plotësisht. Ndërsa tretësira ftohet, kristalet e klorurit të natriumit precipitojnë.

Pesha specifike e solucioneve të flotacionit matet me një aerometër vetëm pasi tretësira të jetë ftohur plotësisht në temperaturën e dhomës.

Metodat e flotacionit janë më efektive për zbulimin e vezëve të shiritit pigme, krimbit të kamxhikut, krimbit të gjilpërave, ascarisit dhe krimbit të gjerë.

Filmi i sipërfaqes mund të hiqet me një lak teli ose rrëshqitës xhami.

Në një zgjidhje të ngopur të kripës së tryezës, filmi mund të ekzaminohet pas 30-40 minutash, në një zgjidhje të nitratit të amonit - pas 10-20-30 minutash pas vendosjes.

Kur hiqni filmin me një lak teli, ekzaminohen të paktën 8 pika.

Rrëshqitjet heqin më shumë vezë nga filmi sesa sythe teli. Xhami duhet të jetë në kontakt me lëngun e solucionit të notimit, i cili shtohet në gotë me një pipetë. Pas vendosjes, xhami hiqet, vendoset sipërfaqja e lagur në një gotë më të madhe dhe ekzaminohet në mikroskop. Slides duhet të degreased para përdorimit.

Për kërkime duhet të keni: rrëshqitës xhami, gota kimike, sythe teli, kuveta, enë Petri, pipeta, dardha, shkopinj qelqi ose druri.

Përparimi i kërkimit. 5 g feçe derdhen me 10 herë më shumë tretësirë ​​flotacioni (mundësisht me peshë specifike 1,38-1,40), grimca të mëdha që nuk treten hiqen nga lart përzihen mirë dhe suspensioni lihet për 10-15 minuta. Filmi hiqet më pas ose me një lak në një rrëshqitje xhami ose me një rrëshqitje xhami. Për të holluar feçet, është më mirë të merrni gota me një kapacitet 30-50 ml, të derdhni tretësirën në të njëjtin nivel me skajet (ose nënmbushni 2-3 mm) dhe të mbuloni përzierjen me një rrëshqitje dhe më pas shtoni tretësirën e flotacionit me një nxirrni me pipetë derisa të bjerë në kontakt me rrëshqitjen. Pas 10-20 minutash, xhami hiqet shpejt dhe filmi i mbetur mbi të skanohet mikroskopikisht pa xhami mbulues.

Metodat e vendosjes-sedimentimit

Metodat e sedimentimit përdoren për zbulimin e vezëve të gjeohelminthëve, biohelmintheve në feces dhe si metoda speciale kërkimore për opisthorkiazën.

Metoda Goryachev-Zolotukhin(metoda e thjeshtuar e Goryachev). Rreth 1,5 g feçe përzihet në një gotë kimike në 3-4 ml ujë. Pezullimi që rezulton filtrohet përmes dy shtresave të garzës në një tub centrifuge, duke u shtruar me kujdes mbi 4-5 ml të një solucioni të ngopur të klorurit të natriumit të pranishëm në të. Provavet vendosen në një raft për 15-20 orë.Gjatë kësaj kohe vendosen vezët e rënda trematode. Merrni dy shtresa të përcaktuara qartë. Sedimenti ekzaminohet mikroskopikisht.

Metoda eter-formalinë. Përdoret për të diagnostikuar të gjitha invazionet intestinale dhe si një metodë e veçantë për vezët e protozoarëve dhe opisthorkias.

Pajisjet: centrifugë në 3000 rpm; tuba gradual centrifugues, hinka; sitë metalike (çaj) ose fashë me dy shtresa; rrëshqitës dhe mbulesa xhami; shkopinj prej druri (ose qelqi); pambuk, fashë

Reagentë kimikë: 10% tretësirë ​​formaline (1 pjesë tretësirë ​​farmaceutike formaline dhe 4 pjesë ujë të distiluar); etilik eter (mjekësor).

7 ml tretësirë ​​formaline 10% hidhen në tuba centrifuge dhe vendoset 1 g feçe (një sasi e tillë feçesh që tretësira në epruvetë të rritet në 8 ml). Feçet përzihen me formalinë derisa të krijohet një përzierje homogjene dhe më pas derdhen përmes një sitë metalike (ose garzë me dy shtresa, fashë) në një tub tjetër centrifuge (nëse feçet mbeten në sitë, atëherë kutia duhet të shpëlahet me formalinë). Shtoni 2 ml eter në këtë tub centrifuge, mbyllni dhe tundeni fort për 30 sekonda.

Përzierja centrifugohet në 3000 rpm për një minutë (e mundur për dy minuta në 1500 rpm). Për shkak të reagimit të eter-formalinës, koagulimi i proteinave ndodh në formën e një tape në krye të epruvetës dhe vezët e helminthit precipitojnë. Shtresa e mpiksjes hiqet, supernatanti kullohet, precipitati aplikohet në një rrëshqitje qelqi direkt nga epruveta ose me një pipetë Pasteur, e mbuluar me një rrëshqitje mbuluese dhe shikohet nën një mikroskop.

Metoda e precipitimit eter-acetik. Parimi i precipitimit eter-acetik të vezëve të helminthit është trajtimi sekuencial i mostrave fekale me një zgjidhje ujore 10% të acidit acetik dhe eterit. Acidi acetik emulsifikon mostrën fekale më mirë se komponimet e tjera kimike. Ai depërton në grimca të patretura, të përbëra kryesisht nga fibra, të cilat, me përmbajtje të lartë, ndërhyjnë në kërkime, duke precipituar pas centrifugimit. Shtimi i mëpasshëm i eterit në tub dhe përzierja çon në nxjerrjen e acidit acetik nga përmbajtja e tubit së bashku me grimcat fekale të ngopura me të. Meqenëse graviteti specifik i përzierjes së eterit dhe acidit acetik është më i vogël se pesha specifike e ujit, mostrat e jashtëqitjes të trajtuara me këto substanca notojnë lart dhe vezët e helminthit, të cilat kanë një peshë specifike të madhe, vendosen.

Sasia e precipitatit të marrë pas precipitimit eter-acetik është 3-4 herë më pak se pas precipitimit eter-formalinë. Kjo lehtëson shumë zbulimin e vezëve të helminthit në të dhe ju lejon të studioni sedimentin në tërësi me një mostër prej 0,5-1 g. Toksiciteti i metodës eter-acetike është 5 herë më i ulët.

Përparimi i kërkimit. 7 ml tretësirë ​​10% të acidit acetik derdhen në një tub centrifuge të graduar dhe shtohet një kampion 1 g feces (d.m.th., një sasi e tillë feçesh në të cilën tretësira e acidit acetik rritet në 8 ml). Përziejini mirë me një gotë ose shkop druri. Kullojeni përmes një hinke me dy shtresa garzë në një tub tjetër centrifugues. 2 ml eter etilik (d.m.th. deri në 10 ml) i shtohen emulsatit. Provëzat mbyllen me një tapë gome (është e mundur nga një shishkë peniciline) dhe tunden për 15 sekonda. Pas heqjes së tapës, tubat centrifugohen për një minutë në 3000 rpm për 2 minuta. Supernatanti hidhet nga tubi. Në disa raste, tapa fekale e formuar ndërhyn në shkarkimin e supernatantit. Në këtë rast, tapa ndahet nga muret e epruvetës me një shufër xhami ose druri. I gjithë precipitati hidhet me pipet në një rrëshqitje xhami dhe mikroskopi nën një mbulesë me zmadhim të ulët. Precipitati është zakonisht i vogël dhe i pangjyrë. Vezët e helminthit, veçanërisht vezët e vogla fluke, zbulohen mirë.

Metoda e sedimentimit kimik. Parimi i studimit bazohet në sedimentimin e vezëve nga një mostër fekale në një tretësirë ​​të kripur me një peshë specifike prej 1.15. Thelbi i metodës qëndron në centrifugimin e drejtpërdrejtë të një epruvetë, në të cilën një tapë jashtëqitje e emulsifikuar në një tretësirë ​​1% të acidit acetik është shtresuar mbi një tretësirë ​​të nitratit të natriumit (peshë sp. 1,16). Graviteti i lartë specifik i tretësirës së kripur dhe flluskat e lëshuara nga reaksioni kimik, duke depërtuar në shtresën e fecesit të homogjenizuar, pengojnë sedimentimin e tij. Vezët e helminthit precipitojnë me një sasi të vogël fibrash. Sedimenti mund të pastrohet nga mbetjet e mbetura duke e trajtuar atë me 10% acid acetik dhe eter. Në këtë rast, mbetet vetëm një vezë helminth, e cila lehtëson shumë identifikimin e tyre.

Përparimi i kërkimit. 6 ml tretësirë ​​nitrat natriumi me peshë specifike 1,15 derdhen në një tub centrifuge të shkallëzuar. Hidhni 7 ml tretësirë ​​të acidit acetik 1% në një provëz tjetër. Futet një mostër e feces (deri në shenjën prej 7,5 ml për një mostër prej 0,5 g dhe deri në 8 ml për një mostër prej 1,0 g). Përzieni plotësisht mostrën me një shufër qelqi. Kullojeni përmes një hinke me një shtresë garzë, duke e shtruar në një tretësirë ​​nitrat natriumi. Tubi me filtratin e shtresuar centrifugohet në 1500-2000 rpm për 5 minuta. Hidhni supernatantin duke e përmbysur me shpejtësi tubin. Shtoni 3-4 ml tretësirë ​​10% të acidit acetik dhe 0,5 ml eter në një provëz me një precipitat, mbylleni me një tapë gome dhe tundeni. Përsëriteni centrifugimin për 1 min. Hidhni supernatantin. Precipitati transferohet në një rrëshqitje xhami, mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet nën një mikroskop.

STUDIME HELMINTOLOGJIKE TË BILEVE, PËRMBAJTJES DUODENALE, sputumit, GJAKUT, URINËS DHE MUSKUJVE

Zbulimi i vezëve dhe larvave të helminthëve në përmbajtjen duodenale dhe biliare. Studimi i përmbajtjes biliare dhe duodenale kryhet me dyshimin për helmintiaza të mëlçisë dhe fshikëzës së tëmthit (opisthorchiasis, klonorchiasis, dicroceliasis) dhe duodenit (strongyloidiasis).

Përparimi i kërkimit. Përmbajtja duodenale dhe biliare (pjeset A, B, C) merren në mënyrën e zakonshme duke përdorur sondë. Për pjesën B, rekomandohet që të merret një refleks i fshikëzës së tëmthit duke futur një zgjidhje 33% të sulfatit të magnezit përmes një sondë. Thekonet që lundrojnë në të zgjidhen dhe shikohen nën një mikroskop nga lëngu i hulumtuar, dhe më pas përzihet me një sasi të barabartë eter sulfurik. Përzierja tundet mirë dhe centrifugohet. Supernatanti hidhet dhe i gjithë precipitati ekzaminohet nën një mikroskop.

Në mungesë të qelbit dhe mukusit, përmbajtja biliare dhe duodenale centrifugohet pa u përzier me eterin.

Ekzaminimi i pështymës. Në praktikën helmintologjike, ekzaminimi i pështymës kryhet me qëllim të diagnostikimit laboratorik të paragonimiazës. Ndonjëherë zbulohen vezë shistosome, larva ascaris, elementë të fshikëzës ekinokokale.

Një njollë amtare përgatitet nga sputum në një rrëshqitje xhami, e cila ekzaminohet nën një mikroskop.

Me një përmbajtje të bollshme qelb në pështymë, ajo përzihet me një zgjidhje 0,5% të sodës kaustike ose kaliumit kaustik, tundet për 5 minuta dhe centrifugohet. Sedimenti ekzaminohet mikroskopikisht.

Studimi i gjakut. Gjaku ekzaminohet nëse një pacient dyshohet se ka filariazë.

Për shkak të faktit se me disa lloje të filariazës (loaosis, wuchereriosis e shkaktuar nga një tendosje subperiodike), larvat (microfilariae) janë në gjakun periferik vetëm gjatë ditës, dhe me disa (brugiasis, wuchereriosis e shkaktuar nga një tendosje periodike) - vetëm gjatë natës, përkatësisht, në këtë kohë merrni gjak për analizë.

Teknika e marrjes së mostrave të gjakut, përgatitja e preparateve (njollosja e hollë dhe pika e trashë), ngjyrosja e tyre (sipas Romanovsky) dhe studimi janë të ngjashme me ato në diagnostikimin laboratorik të malaries.

Mikrofilariet e llojeve të ndryshme dallohen nga gjatësia, gjerësia, lakimi i trupit, prania ose mungesa e një kapaku, forma e skajit bishtor, vendndodhja e substancës bërthamore në trup dhe rajoni bishtor i larvave.

Përparimi i kërkimit. Urina vendoset për të paktën 30 minuta, më pas kullohet shtresa e sipërme, duke lënë 10-15 ml sediment, të cilët derdhen në tubat e centrifugës dhe centrifugohen për 1-2 minuta. Pas kullimit të supernatantit, precipitati transferohet në një rrëshqitës xhami dhe ekzaminohet nën një mikroskop.

STUDIMI I BIOPTISË TË MUSKULLIT

Metoda e trikinoskopisë. Nevoja për studimin e mostrave të biopsisë së muskujve të pacientit lind kur dyshohet për trikinozë.

Një biopsi kryhet sipas rregullave të përgjithshme. Muskuli deltoid zakonisht bëhet biopsi. Gjatë ekzaminimit patoanatomik është e mundur të bëhet një biopsi e muskujve të diafragmës, ezofagut, gjuhës, muskujve përtypës dhe ndër brinjëve, fleksorëve të gjymtyrëve, muskujve të kokës së syrit, pasi preken më intensivisht nga larvat e Trichinella.

Në laborator, një pjesë muskulore e biopsizuar pritet në copa shumë të vogla (mikrotom), të cilat vendosen midis dy gotave, duke shtypur fibrat muskulore dhe ekzaminohen në mikroskop. Aktualisht, mikroskopët specialë, trikineloskopët, përdoren gjerësisht për këtë qëllim.

Në rastin e trikinozës, trikinoskopia përgjatë fibrave muskulore zbulon kapsula trikinoze të theksuara në formë ovale (si limon). Madhësia mesatare e kapsulave njerëzore është 0.4 x 0.26 mm. Kapsula, si rregull, përmban një trichinella të palosur spirale në 2.5 kthesa. Me një intensitet të lartë pushtimi, një kapsulë mund të përmbajë 2 ose 3 larva. Fijet muskulore ngjitur me kapsulën humbasin strijatën e tyre tërthore dhe marrin një pamje homogjene.

Në të njëjtën mënyrë bëhet ekzaminimi i mishit apo produkteve të mishit që kanë shkaktuar infeksionin.

Metoda e tretjes së muskujve. Metoda është më efikase.

Përparimi i kërkimit. Muskujt e studiuar grihen imët dhe mbushen me lëng gastrik artificial në raport 1:15-20. Përzierja që rezulton vendoset në një termostat në 37°C për 12-16 orë.Pas kësaj periudhe ekzaminohet mikroskopikisht sedimenti, në të cilin në masën e mbetjeve të fibrave muskulore të tretura gjenden larvat e lira të Trichinella-s.

Lëngu artificial i stomakut mund të blihet në një farmaci ose të përgatitet në laborator. Për ta bërë këtë, shtoni 10 ml acid klorhidrik të koncentruar në 1 litër ujë të distiluar; para përdorimit, 30 g pepsinë i shtohen 1 litër acid të holluar.

METODAT E HULUMTIMIT SASIOR

Metodat sasiore të kërkimit përdoren në përcaktimin e intensitetit të pushtimit, vlerësimin e efektivitetit të barnave të ndryshme antihelmintike, përcaktimin e cilësisë së deworming, monitorimin e masave të vazhdueshme terapeutike dhe parandaluese masive, etj.

Përcaktimi sasior i vezëve të helminthit kryhet me dy metoda: metoda Stoll dhe metoda e Krasilnikov dhe Volkova (1974).

Metoda Stoll. Për të kryer studimin duhet të keni një mikroskop, një balonë qelqi me shenjë 56 dhe 60 ml, një cilindër matës, rruaza qelqi, një tapë gome për balonën, pipeta të shkallëzuara, rrëshqitës xhami dhe tretësirë ​​0,4% hidroksid natriumi.

Përparimi i kërkimit. Derdhni tretësirë ​​decinormale të hidroksidit të natriumit (përafërsisht përqendrim 0,4%) në balonë me një cilindër matës deri në pikën 56 ml dhe shtoni feces derisa niveli i lëngut të arrijë pikën 60 ml (d.m.th. 4 ml feces). Përzierja tundet mirë me rruaza qelqi për 1 minutë, duke e mbyllur enën me një tapë gome (mund ta përzieni edhe me shkop). Menjëherë pas tundjes mblidhen 0,075 ml të përzierjes me një pipetë të graduar (përmban 0,005 ml feces), transferohen në një rrëshqitje qelqi dhe numri i vezëve në preparat llogaritet me mikroskop. Për të përcaktuar numrin e vezëve në 1 g feces, numri i gjetur shumëzohet me 200.

Krahasimi i numrit të vezëve në preparat, të gjetura tek pacienti para dhe pas trajtimit, na lejon të gjykojmë efektivitetin e heqjes së krimbave.

Metoda e Stoll është e thjeshtë, jep rezultate të krahasueshme në të gjitha helminthiazat, patogjenët e të cilave sekretojnë sistematikisht vezët në zorrët e pacientit. Megjithatë, disavantazhi i metodës është ndjeshmëria e saj relativisht e ulët, veçanërisht në intensitet të ulët të pushtimit.

Metoda Krasilnikov-Volkova. Gjatë ekzaminimit të kësaj metode, të paktën 1 g feçe përzihet në një balonë qelqi ose në një epruvetë të madhe me tretësirë ​​1% Lotus (ose 1,5% tretësirë ​​Extra) në një raport 1:10. Suspensioni tundet tërësisht derisa të formohet një suspension homogjen, më pas 0,1 ml suspension (ekuivalente me 0,01 g feces) mblidhet shpejt me një pipetë të shkallëzuar dhe transferohet në një rrëshqitës xhami. Përgatitja mbulohet me një pjatë xhami ose celofani (20 x 30 mm), e vjetëruar për të paktën një ditë në një tretësirë ​​ujore 50% të glicerinës.

Numëroni numrin e vezëve në të gjithë përgatitjen. Për të llogaritur numrin e vezëve në 1 g feces, numri që rezulton duhet të shumëzohet me 100.

Kjo metodë ka një sërë përparësish mbi metodën Stoll. Së pari, është më i ndjeshëm dhe lejon zbulimin e helminthëve me një shkallë të ulët pushtimi. Së dyti, është shumë i përshtatshëm për ekzaminime masive, pasi solucionet e detergjentit, duke qenë konservues për vezët e helminthit, bëjnë të mundur kryerjen e studimeve të materialit jo mjaft të freskët. Megjithatë, një parakusht për këtë është grumbullimi i feçeve direkt në tretësirën e detergjentit.

Për kërkime sasiore, mund të përdoret ndonjë nga metodat cilësore të unifikuara të përshkruara bazuar në parimin e vezëve lundruese. Por në këtë rast, duhet të merret për analizë e njëjta sasi feçesh, i njëjti vëllim i tretësirës së flotacionit. Llogaritja e shkallës së pushtimit mund të bëhet duke ditur numrin e vezëve në 1 g feçe, sipas tabelës së mëposhtme.

Intensiteti i pushtimit varet nga numri i vezëve të helminthit

në 1 g feçe

DIAGNOZA SEROLOGJIKE

Këto metoda, të bazuara në zbulimin e antitrupave specifikë në serumin e gjakut, përdoren për qëllime diagnostike dhe depistuese.

Metodat serologjike përfshijnë:

Reaksioni i precipitimit unazor (RCP) (trikinoza, cisticerkoza);

Reagimi i precipitimit unazor në epruvetat në të ftohtë (trikinoza, cisticerkoza);

Reagimi i mikroprecipitimit në larvat e gjalla (trikinoza, ascariasis);

Reagimi i hemaglutinimit indirekt (RIHA) (trikinoza, ekinokokoza, alveokokoza, cisticerkoza, etj.);

Reaksioni i aglutinimit të lateksit (RAL) (ekinokokoza, alveokokoza, trikinoza, teniarinhoz, etj.);

Reaksioni i fiksimit të komplementit (RCC) (trikinoza, ekinokokoza, cisticerkoza);

Reagimi i antitrupave të etiketuar me enzimë (REMA) (ekinokokoza, onkocerciaza, shistozomiaza, trikinoza, toksokariaza);

ELISA (trikinoza, opisthorkiaza, toksokariaza, toksoplazmoza, etj.).

Për të vendosur reaksione serologjike, prodhohen antigjene standarde ose përgatiten në mënyrë të pavarur (për shembull, nga fshikëzat ekinokokale të deleve), prodhohen sisteme speciale testimi për ELISA.

Metoda të veçanta kërkimore për enterobiasis, teniarinhoz, teniasis

Scraping nga palosjet perianale. Për të marrë një kruarje nga palosjet perianale, mund të përdorni një shpatull druri, shirit celofani, letër ose shirit celuloze, shkopinj sysh me një shtresë ngjitëse të veçantë:

a) kruarja me një shpatull druri (shpatula është një shkrepës ose shkop i rrafshuar) i lagur me një solucion 1% glicerine (ose një tretësirë ​​0,5% të sodës buke) kryhet me gërvishtje të lehtë nga sipërfaqja e palosjeve perianale rreth të gjithë perimetri i anusit. Gërvishtja që rezulton transferohet me skajin e mbulesës nga fundi i shpatulës në një rrëshqitje qelqi në një pikë solucion gliceroli 50%, të mbuluar me të njëjtën mbulesë dhe me mikroskop. Disavantazhi i metodës është mungesa e zbulimit të vezëve dhe efekti irritues;

b) sipas metodës Torgushin bëhet larja me një shtupë pambuku mbi një shpatull druri ose tjetër të lagur me tretësirë ​​glicerinë 50% dhe në një rrëshqitës xhami në një pikë glicerinë përgatitet një njollë;

c) sipas metodës Kevorkova, rreth 5 ml ujë të zier derdhet në një tub centrifuge, në të vendoset një shpatull (shop) me një shtupë pambuku. Para marrjes së materialit, tamponi shtrydhet pak në murin e brendshëm të epruvetës, me të fshihen palosjet perianale dhe futet shpatula me shtupë në epruvetë. Tamponi në epruvetën tundet tërësisht, larja centrifugohet për 3 minuta dhe precipitati që rezulton ekzaminohet nën mikroskop;

d) kruarje me shirit ngjitës sipas Graham. Një copë shirit ngjitës (një shirit polietileni transparent me një shtresë ngjitëse për kreativitetin e fëmijëve, por është më mirë të përdorni një film operativ LPO-1, LPO-2) 8-10 cm i gjatë është ngjitur me një shtresë ngjitëse në palosjet perianale e lëkurës, duke e mbajtur atë nga skajet dhe më pas transferohet në xhamin e temës me një shtresë ngjitëse poshtë (skajet e shiritit që shtrihen përtej skajeve të xhamit janë prerë), syzet numërohen dhe të dhënat e pacientit dhe numri i gotës regjistrohet në ditar. Në laborator, shiriti qërohet në njërin skaj në një distancë të gjatë, nën të hidhen 1-2 pika vaj vazelinë ose glicerinë (për të eleminuar defektet optike) dhe mikroskopohen;

e) kruarje me shkopinj syri qelqi, sipërfaqja e të cilave është e veshur me një përbërje të veçantë ngjitëse. Shkopinjtë e syrit janë instaluar në një trekëmbësh të veçantë. Materiali merret duke kontaktuar pjesën e sheshtë të shpatullës me lëkurën e hapjes perianale. Pastaj shkopi fiksohet përsëri në një trekëmbësh për transport. Mikroskopi kryhet direkt në shpatull në të dy anët (pa rrëshqitje dhe mbulesa) me montim paraprak në kaseta me zmadhim të ulët (okular x 10, objektivi x 8). Në fund të punës, shkopinjtë dezinfektohen duke zier në një tretësirë ​​sapuni dhe trekëmbëshi dhe kasetat trajtohen me alkool dhe lahen me tretësirë ​​sode me sapun. Përbërja e ngjitësit: cleol - 10 g, vaj ricini - 2,5 g, eter etilik - 5 g, alkool etilik 96% - 2,5 g.

Spatulat zhyten në një tretësirë ​​zam, pastaj thahen në ajër në temperaturën e dhomës. Filmi ngjitës i formuar në sipërfaqe qëndron për disa ditë.

Metoda është e përshtatshme për ekzaminimin masiv të popullsisë së fëmijëve për enterobiosis dhe popullatës së rritur për teniidoza.

Përveç metodës së skrapimit për teniarinkozën dhe teniazën, përdoret edhe metoda e anketimit dhe metoda makroskopike e përshkruar më sipër (kur zbulohen segmente).

Metodat speciale të kërkimit për strongyloidiasis

Metoda eter-acetike përdoret për zbulimin e vezëve (shih më lart) dhe metoda Berman për zbulimin e larvave në jashtëqitje.

Metoda Berman. Ekzaminoni feçet e freskëta, më mirë pasi të keni marrë një laksativ. Një mostër prej 5 g feçe vendoset në një sitë metalike (rrjeta është e veshur me dy shtresa garzë brenda) në një gyp qelqi të fiksuar në një trekëmbësh. Një tub gome me një kapëse vendoset në skajin e poshtëm të hinkës (aparati i Bermanit).

Rrjeta me feces ngrihet dhe uji i ngrohur në 40-50 ° C derdhet në hinkë në mënyrë që pjesa e poshtme e rrjetës të zhytet në ujë dhe feçet të mbulohen plotësisht me ujë. Pas 2-4 orësh, kapësja në tubin e gomës hapet shpejt dhe lëngu zbret në tubin e centrifugës. Pas centrifugimit (1-2 min), pjesa e sipërme e lëngut kullohet shpejt, dhe precipitati në sasi prej 1 ml aplikohet në një shtresë të hollë në një rrëshqitës xhami dhe mikroskopikisht nën një zmadhim të ulët të mikroskopit.

Metoda IMP dhe TM. Një pjesë e feçeve në madhësinë e një arrë vendoset në një gotë kimike, derdhet me kripë të ngrohtë 40 ° C në mënyrë që feçet të mbulohen me një tretësirë, të lënë për 20 minuta. Pas 20 minutash, lëngu derdhet në një enë Petri dhe shikohet nën mikroskopin binocular MBS.

Për diagnozën e strongyloidiasis, veçanërisht për monitorimin e efektivitetit të trajtimit, rekomandohet kombinimi i metodës Berman me studimin e përmbajtjes duodenale.

Metoda të veçanta kërkimore për nematodozën

Nematozat

Askariaza

Në anamnezë, vëmendja tërhiqet nga qëndrimi ndaj kopshtarisë, hortikulturës. Ngrënia e perimeve të papërpunuara, sallatave të bëra nga këto perime.

Manifestimet klinike të fazës së hershme të ascariasis janë për shkak të ndryshimeve alergjike në trup. Faza e hershme ose migratore e larvës së ascariasis shpesh ndodh në prani të etheve me temperaturë trupore deri në 38 ° e lart, me një kompleks simptomash të dëmtimit të mushkërive dhe praninë e eozinofilisë së rëndë të gjakut. Në shumicën e rasteve, tek fëmijët, shenjat e para të sëmundjes janë keqtrajtimi, dobësia, dhimbje koke të përsëritura, djersitje dhe ndonjëherë dhimbje muskujsh dhe kyçesh. Shpesh ka një skuqje të bollshme të tipit urtikarie me kruajtje të rëndë ose të moderuar. Diagnoza e fazës së hershme konfirmohet nga studimet me rreze x për praninë e infiltrateve të paqëndrueshme eozinofilike Löffler në mushkëri. Studimet e freskëta të pështymës shpesh tregojnë qeliza eozinofile, qeliza të kuqe të gjakut, kristale Charcot-Leyden dhe larva ascaris.

Në fazën imagjinare intestinale të ascariasis, ekziston një kombinim i manifestimeve nga sindromat gastrointestinale dhe asthenike, simptoma të dhimbjes enterokolitike. Tek fëmijët, shpesh ka një rënie në peshë, ndonjëherë mjaft të konsiderueshme. Nauze, rritje e pështymës, nervozizëm, zhvillim i vonuar psikomotor, ulje e inteligjencës.

Për diagnostikimin laboratorik të rr

Më të thjeshtat ndahen në 4 klasa:

Kur encistohet, mikroorganizmi merr një formë të rrumbullakosur dhe mbulohet me një guaskë mbrojtëse. Në formën e një kisti, protozoarët bëhen më pak të ndjeshëm ndaj faktorëve të pafavorshëm mjedisor.

Hulumtimi mund të përfshijë:

Shënim:Ka shumë lloje të diagnostifikimit, ne do të shqyrtojmë ato lloje që janë më të zakonshmet në praktikën laboratorike klinike.

Llojet private të diagnostifikimit

Në secilin rast specifik, asistenti i laboratorit ka për detyrë të gjejë një patogjen specifik, ndonjëherë të tjerët gjenden së bashku me atë kryesor.

Ekzistojnë 6 lloje të këtij mikroorganizmi të aftë për të jetuar në zorrën e njeriut. Rëndësi klinike ka vetëm ameba dizenterike, e cila shfaqet në formë vegjetative dhe në formën e cisteve.

Për më tepër, përdoren metoda imunologjike:

• imunofluoreshencë indirekte;
• aglutinimi indirekt (PHA);
• imunodifuzion radial.

Shënim: Metodat serologjike janë joinformative dhe përdoren vetëm si shtesë e atyre kryesore në raste të dyshimta.

Diagnoza e ciliare (ciliates)

Forma patogjene e mikroorganizmave të kësaj gjinie është balantidia. Ky është një mikrob që shkakton balantidiasis - një sëmundje e shoqëruar nga një proces ulceroz i zorrës së trashë. Agjenti shkaktar gjendet në një njollë amtare në formën e një forme vegjetative dhe një kist. Materiali për njollosjen (feçet dhe mukozën) merret gjatë ekzaminimit të sigmoidoskopisë dhe mbillet në media speciale.

Diagnostifikimi i flagjelatave (leishmania, giardia, tripanozomet, trikomonadat)

Leishmania, trypanosoma, giardia, trichomonads janë të rrezikshme për njerëzit.

Leishmania- mikrobet që shkaktojnë leishmaniozë ekzaminohen në strishat e gjakut, materialet e palcës kockore, gërvishtjet nga infiltratet e lëkurës. Në disa raste, në diagnozën e Leishmania, përdoret mbjellja në mjedise ushqyese.

Tripanosomet- Agjentët shkaktarë të sëmundjes së gjumit (tripanosomiaza amerikane/afrikane, ose sëmundja e Chagas).

Varianti afrikan përcaktohet në periudhën fillestare në studimin e gjakut periferik. Mikrobet patologjike gjatë përparimit të sëmundjes gjenden në materialin e shpimeve të nyjeve limfatike, në faza të avancuara - në lëngun cerebrospinal.

Për diagnozën e tripanozomave në sëmundjen e dyshuar Chagas, materiali i testimit ekzaminohet nën një mikroskop me zmadhim të ulët. Në këtë rast, njollat ​​dhe një pikë e trashë janë para-njollosur.

Trichomonas(intestinale, orale) zbulohen me mikroskop të materialeve të marra nga mukozat e prekura.

Identifikimi i sporozoanëve (plazmodiumi i malaries, agjenti shkaktar i kokcidozës, etj.)

Lloji më i zakonshëm dhe më i rrezikshëm për njerëzit është plazmodiumi i malaries, i cili ka 4 lloje kryesore të patogjenit: agjentin shkaktar të malaries tre-ditore, malaries katër-ditore, malaries tropikale dhe malaries ovale.

Zhvillimi seksual i Plasmodiumit (sporogoni) zhvillohet te mushkonjat Anopheles. Aseksuale (skizogonia e indeve dhe eritrociteve) - në indin e mëlçisë dhe në eritrocitet e njeriut. Këto veçori të ciklit jetësor duhet të merren parasysh gjatë diagnostikimit të plazmodiumit të malaries.

Pra, në gjakun e një pacienti të sapo sëmurë mund të gjenden qeliza germinale të ciklit sporogoni. Por në kulmin e sulmeve të malaries, skizontet shfaqen në gjak në numër të madh.

Për më tepër, në faza të ndryshme të etheve malariale, shfaqen forma të ndryshme të plazmodiumit:

• gjatë periudhës së të ftohtit, gjaku mbushet me merozoite, një lloj skizonti;
• në lartësinë e temperaturës, trofozoitët në formë unaze grumbullohen në eritrocite;
• ulja e temperaturës karakterizohet nga mbizotërimi i trofozoitëve amoeboid;
• gjatë periudhave të gjendjes normale, gjaku përmban forma të rritura të skizonteve.

Studimi i agjentit shkaktar të malaries (plazmodiumi i malaries) kryhet në një njollë dhe në një pikë të trashë.

Shënim:diagnoza e malaries në studimin e njollave dhe pikave të trasha të gjakut ndonjëherë është e gabuar. Trombocitet e gjakut në disa raste mund të klasifikohen gabimisht si patogjen i malaries. Gjithashtu, fragmente të leukociteve dhe qelizave të tjera ndonjëherë simulojnë plazmodiumin.

Metodat themelore të kërkimit për protozoarët

Le të hedhim një vështrim të shkurtër në metodat më të zakonshme të kërkimit për praninë e protozoarëve.

Diagnoza e protozoarit duke përdorur një njollë amtare dhe një njollë të lyer me tretësirën e Lugol (në feces)

Ilaçi përgatitet nga një emulsion i feces në një zgjidhje izotonike. Dy pika të klorurit të natriumit dhe tretësirës së Lugolit aplikohen në një rrëshqitje xhami. Materiali i provës u shtohet të dyja kompozimeve me një shkop druri dhe pasi mbulohet me xham, shikohet me rezolucione të ndryshme të mikroskopit.

Sipas shenjave të caktuara, protozoarët e gjetur janë të regjistruar. Për saktësi, nga një material përgatiten 2-3 preparate. Në raste të dyshimta, analiza përsëritet disa herë gjatë 2-3 javëve.

Metoda mund të zbulojë format vegjetative dhe cistike:

• lamblia;
• balantidia;
• ameba dizenterike.

Së bashku me format patogjene përcaktohen edhe protozoarët jopatogjenë. Transportuesit e shëndetshëm kanë gjithashtu forma luminale dhe cistike.

E rëndësishme:kërkimet për të shmangur pasaktësitë dhe gabimet duhet të kryhen në mënyrë të përsëritur.

Rezultati i diagnozës së protozoarit me metodën e një njollosje amtare dhe të njollosur duhet të përmbajë një përshkrim të formës së patogjenit (të tejdukshëm, kist, ind).

Kërkesat e kërkimit:

• materiali i marrë për analizë (feçet e lëngshme) ekzaminohet jo më vonë se 30 minuta pas defekimit;
• feçet e formuara duhet të diagnostikohen brenda 2 orëve pas defekimit;
• materiali nuk duhet të përmbajë papastërti (dezinfektues, ujë, urinë);
• vetëm shkopinj druri përdoren për të punuar me materialin, ato prej qelqi nuk janë të përshtatshme për shkak të rrëshqitjes së mukusit;
• Shkopinjtë duhet të digjen menjëherë pas përdorimit.

Metoda e konservimit (ekzaminimi i feçeve) në diagnostikimin e protozoarëve

Studimi kryhet duke fiksuar protozoarët me një konservues. Dallimi midis kësaj metode dhe asaj të mëparshme është se konservantët ju lejojnë të ruani ilaçin për një periudhë të gjatë.

Konservues të përdorur:

• Barrow. Përmban përbërës konservues: 0,7 ml klorur natriumi, 5 ml formalinë, 12,5 ml alkool 96%, 2 g fenol dhe 100 ml ujë të distiluar. Përbërja e ngjyrosjes: 0.01% tretësirë ​​e tioninës (azure).
• Zgjidhja e Safarliev. Përbërja: 1,65 g sulfat zinku, 10 ml formalinë, 2,5 g fenol kristalor, 5 ml acid acetik, 0,2 g blu metilen, 100 ml ujë. Ky konservues përdoret në rastet kur materiali duhet të ruhet për më shumë se një muaj.

Shishet e zbrazëta mbushen me një ruajtës, materiali transferohet në to, në përmasa 3: 1, pastaj, nëse është e nevojshme, shtohet një bojë. Vlerësimi i rezultateve kryhet në studimin e 2-3 barnave.

Metoda e pasurimit të formalinës me eter (analizë për praninë e protozoarëve në feces)

Kjo metodë diagnostike ju lejon të veçoni dhe përqendroni kistet protozoar. Për analizë nevojiten përbërësit e mëposhtëm: formalinë (10 ml), 0,85 g tretësirë ​​izotonike, ujë të distiluar, eter sulfurik, tretësirë ​​Lugol.

Një përzierje e biomaterialit me lëngjet e listuara përzihet dhe centrifugohet. Precipitati i përftuar në fund të tubit lyhet me tretësirën e Lugolit dhe ekzaminohet për praninë e cisteve dhe formave vegjetative.

Metoda e zbulimit të leishmanisë (njohja e palcës së eshtrave)

Për diagnozën e leishmaniozës, përdoren reagentët: një përzierje e Nikiforov (eter sulfurik dhe alkool etilik), tampon fosfati, Azur-eozin sipas Romanovsky.

Substanca e palcës së eshtrave vendoset me shumë kujdes në një rrëshqitës xhami pas përgatitjes speciale. Përdoret një mikroskop me një sistem zhytjeje.

Në periudhën akute të sëmundjes, një numër i madh i Leishmania gjendet në pikën.

Shënim:ndonjëherë qelizat e gjakut mund t'i ngjajnë leishmanisë së trajtuar, kështu që është shumë e rëndësishme që tekniku i laboratorit të jetë i vëmendshëm dhe të ketë përvojë të mjaftueshme për të studiuar në mënyrë të pavarur.

Metoda për zbulimin e leishmanisë në një njollë nga një infiltrate e lëkurës

Reagentët e kërkuar janë të ngjashëm me analizën e mëparshme.

Materiali i provës është marrë nga përmbajtja ekzistuese e tuberkulozit ose ulçerozës. Skrapi me dyshimin për leishmaniozë bëhet me shumë kujdes me bisturi, pa gjak. Më pas preparati përgatitet në gotë. Për saktësinë e rezultateve të marra, ekzaminohen njëkohësisht disa përgatitje.

Në prani të një sëmundjeje, midis makrofagëve, fibroblasteve dhe qelizave limfoide të pranishme në materialin e testimit, përcaktohet edhe Leishmania.

Metoda për izolimin e një kulture të pastër të Leishmania të marrë nga gërvishtja e indeve patologjike

Me këtë metodë të diagnostikimit, gërvishtjet më të thjeshta të indeve vendosen në një medium të veçantë ushqyes në të cilin Leishmania riprodhohet në mënyrë aktive.

Para marrjes së kruarjes, lëkura trajtohet me kujdes me alkool, më pas bëhet një prerje në tuberkuloz, nga fundi i së cilës hiqet përmbajtja dhe vendoset në një provëz me mediumin. Materiali merret disa herë, pas së cilës vendoset në epruveta të ndryshme. Më pas, në një termostat në një temperaturë prej 22-24 gradë, bëhet kultivimi. Rezultatet vlerësohen nën një mikroskop. Kjo metodë përdoret kur metodat e tjera, më të lira dhe më të shpejta të diagnostikimit të protozoarëve janë joefektive.

Ju mund të shihni se si testet për praninë e protozoarëve deshifrohen në praktikë nga një pikë gjaku duke shikuar një përmbledhje video:

Lotin Alexander, kolumnist mjekësor

Jashtëqitja ekzaminohet në dy mënyra:

1. Makroskopike - gjeni helminthët, kokat e tyre, segmentet, mbetjet e strobilit. Pjesë të vogla të feçeve përzihen me ujë në një banjë të sheshtë ose enë Petri dhe shikohen në dritë të mirë kundër një sfondi të errët, duke përdorur një xham zmadhues nëse është e nevojshme. Të gjitha formacionet e dyshimta transferohen me piskatore në një filxhan tjetër me ujë ose në një rrëshqitje xhami në një pikë glicerinë të holluar.

Me metodën duke mbajtur pjesa e hulumtuar e feçeve përzihet me ujë në një cilindër qelqi, pasi të vendoset, shtresa e sipërme e ujit kullohet. Kjo përsëritet disa herë. Kur lëngu bëhet transparent, ai kullohet dhe sedimenti shikohet në një enë Petri.

2. Mikroskopik - për të zbuluar vezët dhe larvat e helminthëve. Ka shumë metoda kërkimore.

një). njollosje amtare - metoda më e zakonshme dhe teknikisht e disponueshme e kërkimit. Mund të gjeni vezë dhe larva të të gjitha helminthëve. Megjithatë, me një numër të vogël vezësh, ato nuk gjenden gjithmonë. Prandaj, përdoret metoda e pasurimit.

një). Metoda Fülleborg - kjo është një metodë pasurimi, e bazuar në shfaqjen e vezëve të helminthiazës në një zgjidhje të ngopur të NaCl (1,2 - dendësia; 400 g NaCl për 1 litër ujë; 40% zgjidhje NaCl). Metoda është më efektive se njollosja amtare. 2-5 g feçe vendosen në kavanoza qelqi dhe mbushen me tretësirë ​​NaCl, përzihen dhe pas 45 minutash filmi i formuar hiqet me një lak metalik, një pikë glicerinë vendoset në një rrëshqitje xhami. Ekzaminoni nën një mikroskop. Disavantazhi i metodës është shfaqja e vonuar e vezëve të helminthëve të ndryshëm, shiriti xhuxh - pas 15-20 minutash, krimbi i rrumbullakët - 1,5 orë, krimbi i kamxhikut - 2-3 orë.

2) Metoda Kalantaryan - gjithashtu një metodë pasurimi, por përdoret një tretësirë ​​e ngopur e NaNO 3 (densësia 1.38). Shumica e vezëve notojnë, nuk kërkohet ekzaminim i sedimentit. Disavantazhi është se vezët mbahen në tretësirë ​​për një kohë të gjatë, gjë që çon në faktin se disa vezë fillojnë të fryhen dhe vendosen në fund, duke u zhdukur nga filmi sipërfaqësor.

3. Metoda e Goryaçevit - bazuar në parimin e depozitimit të vezëve, zbulimin e vezëve të vogla trematode. Si tretësirë ​​përdoret një tretësirë ​​e ngopur NaCl dhe sipër vendoset me kujdes 3-4 ml tretësirë ​​feçesh. Pas 15-20 orësh, vezët trematodë vendosen në fund. Lëngu kullohet, sedimentohet në një rrëshqitje xhami dhe nën një mikroskop.

4. Metoda e përdredhjes së Shulmanit – për të zbuluar larvat e helminthit në feces. Ekzaminoni vetëm feçet e sapoizoluara. 2-3 g vendosen në një kavanoz qelqi dhe shtohet 5 herë sasia e ujit, përzihet shpejt me shkop, pa prekur muret e kavanozit - 20-30 minuta, pastaj shkopi hiqet shpejt dhe një pikë. lëngu në fund transferohet në një rrëshqitës xhami dhe mikroskopohet.

5. Metoda Berman - bazuar në aftësinë e larvave të helminthit për të migruar drejt ngrohtësisë, dhe shërben për identifikimin e tyre në feçe.

6. Metoda e Haradës dhe Morit (metodë e rritjes së larvave) dhe rekomandohet për testim për ankilostomiazë. Metoda bazohet në faktin se në nxehtësi dhe në letër të lagësht të filtruar, vezët e krimbave të gremisit zhvillohen në larva filariforme, të cilat mund të zbulohen lehtësisht. 15 g feçe aplikohen në mes të një rripi letre të filtruar, letra me jashtëqitje vendoset në një kavanoz, në mënyrë që fundi i poshtëm të zhytet në ujë dhe skaji i sipërm të fiksohet me tapë. Kavanozi mbahet në termostat në 28 0 C për 5-6 ditë. Larvat filariforme zhvillohen gjatë kësaj kohe dhe zbresin në ujë. Lëngu ekzaminohet nën një xham zmadhues. Nëse është e vështirë për t'u zbuluar, lëngu centrifugohet, pasi vriten larvat duke ngrohur në 60 0. Tekniku i laboratorit duhet të mbajë doreza.

7. Metodat për enterobiasis – identifikimi i vezëve të krimbit të gjirit dhe të shiritit të gjedhit.

a) kruarje nga palosjet perianale - me një shtupë pambuku të mbështjellë fort në një shkop druri dhe të lagur me një tretësirë ​​glicerinë 50%. Në laborator, shtupa lahet me 1-2 pika të një zgjidhje ujore 50% të glicerinës.

b) metoda e marimangave ngjitëse (metoda Graham)

Shirit ngjitës aplikohet në palosjet perianale, pastaj me një shtresë ngjitëse në rrëshqitjen e qelqit dhe mikroskopohet.

C) kruarje me ndihmën e shkopinjve të syrit (metoda e Rabinovich). Për gërvishtjet perianale përdoren shkopinj syri prej qelqi, pjesa më e gjerë e të cilave mbulohet me një ngjitës të veçantë, i cili bën të mundur mbajtjen e vezëve të krimbave.

Ekzaminimi i gjakut, biliare, pështymës dhe muskujve

Mikroskopi i gjakut - zbulohen larvat filariae.

Ekzaminimi i pështymës - vezët e paraganimit, larvat e krimbit të rrumbullakët, nekatori, strongjiloidi, elementët e fshikëzës së ekinokokut.

Ekzaminimi i muskujve - nëse dyshohet për trikinozë, ekzaminohen muskujt e pacientit ose të kufomës, si dhe mishi që supozohet se ka shkaktuar infeksionin e personit. Për qëllimin e trikinoskopisë muskuli pritet në copa të vogla dhe vendoset në kompresorë, këto janë dy gota të gjera e të trasha që shtypin muskujt dhe larvat e Trichinellës gjenden në formë kapsulash - metoda e kompresimit.

Metoda e tretjes - muskujt derdhen me lëng gastrik artificial (tretësirë ​​e acidit klorhidrik dhe pepsinë). Muskujt treten dhe larvat identifikohen lehtësisht. Përcaktimi i intensitetit të pushtimit: numri i larvave deri në 200 për 1 g ind muskulor - intensitet i moderuar i pushtimit; deri në 500 - intensive; mbi 500 - pushtim superintensiv.

Metodat serologjike

Kapitulli III. Diagnoza e helminthiazave dhe metodat e hulumtimit helminthologjik

Është e nevojshme të ekzaminohen për helmintiazat të gjithë pacientët që kërkojnë ndihmë mjekësore dhe veçanërisht pacientët që i drejtohen pediatrit, internistit dhe neuropatologut me ankesa për fenomene nga trakti gastrointestinal, sistemi nervor dhe me anemi. Nëse mjeku nuk mund të zbatojë gjithmonë metodat e hulumtimit laboratorik, atëherë çdo punonjës mjekësor që ofron ndihmë në një klinikë ambulatore ose spital është i detyruar të intervistojë pacientin në lidhje me lëshimin e helminthëve prej tij.

Nëse ka indikacione klinike të dhëna në kapitujt përkatës, diagnoza duhet të sqarohet duke përdorur metoda laboratorike për studimin e helminthiazave.

Në lidhje me mbizotërimin e helminthiazave të zorrëve, studimi i fecesit ka rëndësinë më të madhe praktike.

Metodat për studimin e feces për helminthiazat

Feçet dorëzohen në laborator në enë qelqi të pastër (rreth një çerek filxhani feçe të marra nga vende të ndryshme në një porcion); gjatë një ekzaminimi rutinë, lejohet dërgimi i feçeve në laborator në kuti shkrepsesh ose printime të njohura.

Për të kontrolluar heqjen e krimbave, i gjithë pjesa e feçeve të mbledhura pas marrjes së një antihelmintik dhe laksativ (në kavanoza të mëdha qelqi të mbyllura, kova) shpërndahet (siç përshkruhet nga mjeku).

Ekzaminimi mikroskopik i feçeve është kryesori në diagnostikimin e helmintiazave intestinale; gjithmonë duhet të paraprihet nga një ekzaminim i përgjithshëm makroskopik i feçeve për të zbuluar segmente të cestodave të mëdha, krimbave, krimbave të rrumbullakët, etj.

Jashtëqitja duhet të jetë e freskët ose e konservuar (në solucion 5% formalinë), pasi tharja ndryshon në mënyrë dramatike strukturën e vezëve. Për më tepër, kur feçet qëndrojnë në këmbë, vezët e disa helminthëve (për shembull, krimbat e gjilpërave) zhvillohen me shpejtësi, gjë që e bën të vështirë diagnozën.

Sipas udhëzimeve të Ministrisë së Shëndetësisë të BRSS, është e nevojshme të ekzaminohen feçet në të njëjtën kohë duke përdorur metodën Fülleborn dhe një njollë amtare.

njollosje amtare

Ngjyrosje amtare: një copë e vogël feçesh (madhësia e një bizele), e marrë me shkrepse, një gotë ose shkop druri nga vende të ndryshme të pjesës së dorëzuar, triturohet me kujdes në një rrëshqitje xhami në një pikë solucion gliceroli 50% ose në kripë, ose në ujë. Mbulojeni me një mbulesë, duke e shtypur pak këtë të fundit (me një gjilpërë disekuese). Smear duhet të jetë i hollë, transparent dhe uniform. Përdoret vetëm si një shtesë e metodave të tjera që japin pasurimin e ilaçit. Të paktën dy përgatitje duhen parë.

Për të zbuluar larvat e helminthit (si dhe vezët e tyre), bëhet një njollosje amtare si më poshtë (sipas Shulman): 2-3 g feces përzihen plotësisht duke "përdredhur" me një shufër qelqi në një emulsion me pesë herë. sasia e ujit të pastër ose kripës. Gjatë trazimit, larvat grumbullohen në shufrën e qelqit, kështu që menjëherë pas trazimit, një pikë emulsioni transferohet shpejt me një shufër qelqi në një rrëshqitës xhami, mbulohet me një mbulesë dhe ekzaminohet. S. D. Lyubchenko (1936) vërtetoi se metoda e përdredhjes është më efektive se metoda e njollosjes, veçanërisht në lidhje me vezët ascaris. Bazuar në punën e S. D. Lyubchenko, ne e konsiderojmë të përshtatshme zëvendësimin e metodës së njollosjes me metodën e përdredhjes.

Metoda Fülleborn

Metoda Fülleborn: 5-10 g feçe të marra nga vende të ndryshme vendosen në një kavanoz me kapacitet 50-100 ml dhe treten tërësisht me një gotë ose shkop druri në një tretësirë ​​të ngopur të kripës së tryezës (400 g nga kjo kripë treten në 1 litër ujë, ngrohet deri në valë dhe filtrohet përmes një shtrese leshi pambuku ose garzë; tretësira përdoret e ftohtë: pesha specifike 1.2). Tretësira derdhet gradualisht derisa të merret një suspension uniform dhe sasia totale e tretësirës së derdhur duhet të jetë afërsisht 20 herë më e madhe se sasia e feces. Fülleborn rekomandoi përdorimin e gotave të çajit për përzierjen e feçeve, por është më e përshtatshme të përgatitet suspensioni në kavanoza vaji 50-100 ml, duke përdorur dy kavanoza për çdo analizë (ose në gota 100 ml).

Menjëherë pas përgatitjes së suspensionit, ai hiqet nga sipërfaqja me një shpatull, një lugë metalike ose një copë letre të pastër, grimcat e mëdha që kanë notuar në sipërfaqe (formacionet bimore, mbetjet e ushqimit të patretur, etj.), pas së cilës. përzierja lihet të qëndrojë 1-1,5 orë. Pas kësaj kohe, i gjithë filmi hiqet nga sipërfaqja e përzierjes duke prekur një lak teli ose platini (të sheshtë) me një diametër jo më shumë se 1 cm, të përkulur në një kënd të drejtë; Filmi shkundet në një rrëshqitje xhami dhe mbulohet me një mbulesë. 3-4 pika vendosen nën çdo mbulesë (18x18 mm). Në total, duhet të përgatiten të paktën 4 preparate (një mbulesë për çdo përgatitje). Laku kalcinohet në zjarr dhe lahet me ujë pas çdo analize.

Sipas metodës Fülleborn, vezët e të gjitha nematodave (me përjashtim të vezëve të krimbave të pafertilizuara) dhe vezëve të krimbave xhuxh të shiritit zbulohen shpejt dhe lehtë.

Metoda Berman përdoret për të studiuar feces për larvat e helminthit (me strongyloidiasis). Kjo metodë është si më poshtë: 5 g fekale në një rrjetë metalike (për këtë qëllim është i përshtatshëm një sitë qumështi) vendosen në një gyp qelqi të ngjitur në një trekëmbësh. Një tub gome me një kapëse vendoset në skajin e poshtëm të hinkës.

Rrjeta me feces ngrihet dhe uji i ngrohur në afërsisht 50 ° derdhet në hinkë në mënyrë që pjesa e poshtme e rrjetës me feces të zhytet në ujë. Larvat lëvizin në mënyrë aktive në ujë dhe grumbullohen në pjesën e poshtme të tubit të gomës. Pas 2-4 orësh, kapësi hapet dhe lëngu ulet në një ose dy tuba centrifuge.

Pas centrifugimit për 1-2 minuta, pjesa e sipërme e lëngut kullohet shpejt dhe precipitati aplikohet me pika në rrëshqitëse qelqi dhe ekzaminohet nën kapak ose shpërndahet në një shtresë të hollë në 2-3 rrëshqitje të mëdha dhe më pas ekzaminohet pa mbulesë. rrëshqet.

Metoda Berman përdoret gjithashtu për të ekzaminuar tokën për praninë e larvave të krimbit të gremisit.

Metoda Stoll

Metoda Stoll përdoret për të përcaktuar intensitetin e pushtimit. Një solucion decinormal i hidroksidit të natriumit derdhet në një enë qelqi të veçantë deri në shenjën 56 cm 3, dhe më pas shtohen feces derisa niveli i lëngut të arrijë 60 cm 3, d.m.th. 4 cm 3. Pas tundjes me rruaza qelqi, merret për ekzaminim 0,075 ml nga përzierja dhe ekzaminohet nën një ose dy mbulesa të zakonshme. Sasia që rezulton shumëzohet me 200 për të marrë numrin e vezëve që përmbahen në 1 cm 3 feces.

Ekzaminimi i përmbajtjes duodenale

Lëngu duodenal dhe biliare cistike, të marra në mënyrën e zakonshme me sondë (dhe biliare cistike dhe pas një refleksi nga fshikëza e tëmthit), përzihen plotësisht me një vëllim të barabartë eter etilik; përzierja centrifugohet, pas së cilës precipitati ekzaminohet në mikroskop. Përveç sedimentit, thekonet që notojnë në lëng, të cilat mund të përmbajnë vezë helminte, duhet t'i nënshtrohen ekzaminimit mikroskopik. Kur ekzaminoni vezët e helminthëve të lëngut gastrik dhe të vjellave, mund të përdorni të njëjtën teknikë.

Ekzaminimi i lëngut duodenal dhe përmbajtjes së stomakut duhet të bëhet nëse dyshohet për sëmundje helmintike të mëlçisë, fshikëzës së tëmthit (opisthorchiasis, fascioliasis, dicroceliasis) dhe duodenit (strongyloidiasis).

Ekzaminimi i pështymës

Pështyma fërkohet në një pjatë qelqi, mbulohet fort me një pjatë tjetër qelqi dhe ekzaminohet me sy të lirë në një sfond të lehtë dhe të zi, si dhe nën një xham zmadhues në dritën e transmetuar. Copa të veçanta të pështymës (akumulime "të ndryshkura", copëza indi, etj.) aplikohen në një shtresë të hollë në një rrëshqitës xhami, të mbuluara fort me një mbulesë dhe ekzaminohen me mikroskop me zmadhim të ulët dhe të lartë.

a) Për diagnozën e cisticerkozës së lëkurës, indit nënlëkuror ose muskujve, një pjesë e prerë në mënyrë aseptike e indit përkatës ekzaminohet fillimisht me sy të lirë. Seksionet e indeve shpërndahen me ndihmën e gjilpërave disekuese në mënyrë që të zbulohet një vezikulë e dukshme me sy të lirë - një cysticercus (foto A); gjatësia e saj është 6-20 mm, gjerësia është 5-10 mm. Kur gjendet një flluskë që është e dyshimtë për cisticerkun, ajo shtypet midis dy rrëshqitjeve të qelqit dhe ekzaminohet nën një mikroskop. Cysticercus (Cistycercus cellulosae) përcaktohet nga prania e një skoleksi me katër thithëse dhe një aureolë grepash (foto B).

Një foto. A - cisticerci me skolekse të kthyera nga jashtë; B - Koka e shiritit të derrit.

b) Për të diagnostikuar trikinozën, një pjesë muskulore e prerë në mënyrë aseptike (biceps ose gastrocnemius) shtypet me kujdes në një tretësirë ​​glicerine 50% në fijet më të holla duke përdorur gjilpëra disekuese. Muskujt e shtypur shtrydhen midis dy rrëshqitjeve të qelqit dhe ekzaminohen me zmadhim të ulët të mikroskopit në një fushë shikimi të errësuar. Ekzaminimi i muskujve për trikinozë rekomandohet të kryhet jo më herët se në ditën e 8-të të sëmundjes. Larvat e trikinelës janë në muskuj në një pozicion të mbështjellë: ato janë të mbyllura në kapsula në formë limoni.

Një foto. A - Larvat e Trichinella në muskuj; B - Kapsula të kalcifikuara të Trichinella.

Fluoroskopia

Më shpesh, fluoroskopia përdoret për të diagnostikuar ekinokokozën dhe, më rrallë, cisticerkozën. Cisticerkët zbulohen me fluoroskopi vetëm pas kalcifikimit (në rastet e sëmundjes së zgjatur). Vitet e fundit, fluoroskopia është përdorur edhe për të diagnostikuar askariazën si në fazën e hershme të larvës ashtu edhe pjesërisht në atë intestinale.

Gjatë periudhës së migrimit të larvave të ascaris (dhe krimbit të gjirit) në mushkëri, zbulohen vatra inflamatore të paqëndrueshme, ndonjëherë të shumta; në të njëjtën kohë, në gjak shfaqet eozinofili e rëndësishme.

Krimbat e rrumbullakët të pjekur seksualisht janë qartë të dukshëm në fluoroskopinë e zorrëve të individëve të prekur. Kjo metodë, pavarësisht kompleksitetit dhe rëndimit të saj, duhet të përdoret si metodë shtesë për diagnostikimin e askariazës në rastet me analizë skatologjike negative. Sipas E. S. Geselevich, nga 180 pacientë me ascariasis të identifikuar me fluoroskopi, 54 vezë ascaris nuk u gjetën në feces (shih).

7.7. Metodat për përcaktimin e qëndrueshmërisë së vezëve dhe larvave të helminthëve

Qëndrueshmëria e vezëve të helminthit përcaktohet nga pamja e tyre, nga ngjyrosja me ngjyra vitale, nga kultivimi në kushte optimale dhe nga vendosja e një kampioni biologjik.

7.7.1. Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve ose larvave të helminthëve nga pamja

Vezët e helminthit mikroskopohen fillimisht me zmadhim të ulët, pastaj me zmadhim të lartë. Në vezët e helminthit të deformuar dhe të vdekur, guaska është e grisur ose e përkulur nga brenda, plazma është e turbullt, e liruar. Në vezët e segmentuara, topat e ndarjes (blastomeret) janë të pabarabarta në madhësi, në formë të çrregullt dhe shpesh zhvendosen në një pol. Ndonjëherë ka vezë jonormale, të cilat, duke pasur deformime të jashtme, zhvillohen normalisht. Në larvat e gjalla të krimbave të rrumbullakët, grimca e imët është e pranishme vetëm në pjesën e mesme të trupit, pasi ato vdesin, përhapet në të gjithë trupin, shfaqen vakuola të mëdha hialine me shkëlqim, të ashtuquajturat "vargje perlash".

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të pjekura të ascarids, whipworms, pinworms, lëvizjet aktive të larvave duhet të shkaktohen nga ngrohja e lehtë e përgatitjes (në një temperaturë jo më të madhe se 37 ° C). Është më i përshtatshëm për të vëzhguar qëndrueshmërinë e larvave të ascaris dhe krimbit të kamxhikut pasi ato janë izoluar nga lëvozhga e vezës duke shtypur xhamin e kapakut të preparatit me një gjilpërë disekuese ose piskatore.

Në larvat invazive të askarideve, shpesh shihet një kapak që është eksfoluar në fund të kokës dhe në larvat e krimbave të kamxhikut që kanë përfunduar zhvillimin në vezë, në këtë vend gjendet një stilet me zmadhim të lartë. Larvat e vdekura të helminthëve, pavarësisht nga vendndodhja e tyre (në vezë ose jashtë saj), vërejnë prishjen e trupit. Në këtë rast, struktura e brendshme e larvës bëhet me gunga ose grimcuar, dhe trupi bëhet i turbullt dhe i errët. Vakuolat gjenden në trup, dhe thyerjet gjenden në kutikula.

Qëndrueshmëria e onkosferave teniide (krimbi i gjedhit, i derrit, etj.) përcaktohet nga lëvizja e embrioneve kur ato ekspozohen ndaj enzimave tretëse. Vezët vendosen në një gotë ore me lëng stomaku qeni ose lëng artificial duodenal. Përbërja e kësaj të fundit: pankreatinë - 0,5 g, bikarbonat natriumi - 0,09 g, ujë i distiluar - 5 ml. Syzet e orës me vezë vendosen në një termostat në 36 - 38 ° C për 4 orë. Në këtë rast, embrionet e gjalla lirohen nga membranat. Predhat e onkosferave të gjalla gjithashtu treten në pepsinën e acidifikuar dhe në një tretësirë ​​alkaline të tripsinës pas 6-8 orësh në një termostat në 38 °C.

Nëse vezët teniid vendosen në një solucion 1% të sulfurit të natriumit ose në një tretësirë ​​20% të hipokloritit të natriumit, ose në një tretësirë ​​1% të ujit me klor në 36 - 38 ° C, embrionet e pjekur dhe të gjallë çlirohen nga lëvozhga dhe nuk ndryshim gjatë 1 dite. Onkosferat e papjekura dhe të vdekura tkurren ose fryhen dhe zmadhohen në mënyrë dramatike dhe më pas "shpërndahen" brenda 10 minutave deri në 2 orë. Embrionet e gjalla të teniideve gjithashtu lëvizin në mënyrë aktive në një përzierje prej 1% zgjidhje klorur natriumi, 0,5% tretësirë ​​bikarbonat natriumi dhe biliare në 36 - 38 ° C.

Qëndrueshmëria e fasciolia adolescariae e mbledhur nga bimët dhe objektet e tjera të trupave ujorë kontrollohet duke i ekzaminuar ato në një rrëshqitje xhami në kripë nën një mikroskop me një fazë ngrohjeje. Kur nxehen, larvat trematode në kist fillojnë të lëvizin.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbit pigme, metoda e N.S. Ionina është më e thjeshta: në vezët e gjalla, çifti mesatar i grepave embrionalë është ose paralel me ato anësore, ose këto të fundit formojnë një kënd në bazën më pak se 45 °. me mesataren. Në vezët e ngordhura, çiftet anësore formojnë një kënd në bazë me një palë mesatare më shumë se 45 °, ose grepa shpërndahen rastësisht (rregullimi i tyre i çiftëzuar humbet); ndonjëherë ka një rrudhje të embrionit, formimin e granularitetit. Një metodë më e saktë bazohet në shfaqjen e lëvizjeve të onkosferës gjatë një ndryshimi të mprehtë të temperaturës: nga 5 - 10 ° në 38 - 40 ° C.

Përcaktimi i qëndrueshmërisë së vezëve të nematodës së papjekur duhet të studiohet në një dhomë të lagësht (enë Petri), duke i vendosur vezët ascaris në një solucion formaline 3% të përgatitur në një solucion izotonik të klorurit të natriumit në një temperaturë prej 24 - 30 ° C, vezët e krimbit në 3 % tretësirë ​​e acidit klorhidrik në një temperaturë prej 30 - 35 ° C; vezët e krimbit në solucion izotonik të klorurit të natriumit në 37 °C. Enët Petri duhet të hapen 1 deri në 2 herë në javë për ajrim më të mirë dhe njomet letrën filtri përsëri me ujë të pastër.

Vëzhgimet e zhvillimit të vezëve të helminthit kryhen të paktën 2 herë në javë. Mungesa e shenjave të zhvillimit brenda 2-3 muajve tregon jo qëndrueshmërinë e tyre. Shenjat e zhvillimit të vezëve të helminthit janë së pari fazat e shtypjes, ndarja e përmbajtjes së vezës në blastomere të veçanta. Gjatë ditëve të para zhvillohen deri në 16 blastomere, të cilat kalojnë në fazën e dytë - morula etj.

Vezët e krimbit të ngjizjes kultivohen në një cilindër xhami (50 cm i lartë dhe 7 cm në diametër) të mbyllur me tapë. Një përzierje e vëllimeve të barabarta të rërës sterile, qymyrit dhe feçeve me vezë të krimbit të holluar me ujë deri në një konsistencë gjysmë të lëngshme, derdhet me kujdes në fund të cilindrit duke përdorur një tub qelqi. Gjatë 1 - 2 ditëve të vendosjes në errësirë ​​në një temperaturë prej 25 - 30 ° C, larvat rabditoid çelin nga vezët dhe pas 5 - 7 ditësh ato bëhen tashmë filariforme: larvat zvarriten lart në muret e cilindrit, ku ato janë të dukshme edhe me sy të lirë.

Vezët trematode që zhvillohen natyrshëm në ujë, të tilla si opisthorchis, diphyllobothriids, fasciols dhe të tjera, vendosen në një gotë ore, një enë Petri ose në një enë tjetër dhe derdhet një shtresë e vogël me ujë të zakonshëm. Gjatë kultivimit të vezëve fasciola, duhet pasur parasysh se ato zhvillohen më shpejt në errësirë, ndërsa miracidiumi formohet në vezë të gjalla në një temperaturë prej 22-24 ° C pas 9-12 ditësh. Kur mikroskopi i zhvillimit të vezëve trematodë, lëvizjet e miracidiumit janë qartë të dukshme. Fasciola miracidium del nga lëvozhgat e vezëve vetëm në dritë.

Metoda Fulleborn. Larvat e krimbit të gjirit dhe të fortylideve kultivohen në agar në një enë Petri me qymyr të kafshëve. Pas mbajtjes në një termostat në një temperaturë prej 25 - 30 ° C për 5 - 6 orë, larvat përhapen mbi agar, duke lënë pas një shteg bakteresh.

Metoda e Harada dhe Mori. 7 ml ujë të distiluar shtohen në provëza të vendosura në një raft. Merrni 0,5 g feçe me një shkop druri dhe bëni një njollë në letër filtri (15 x 150 mm) 5 cm nga buza e majtë (ky operacion kryhet në një fletë letre për të mbrojtur sipërfaqen e tavolinës së laboratorit). Pastaj shiriti me njollë futet në tub në mënyrë që skaji i majtë i lirë nga njolla të arrijë në fund të tubit. Mbulojeni pjesën e sipërme me një copë celofan dhe mbështilleni fort me një brez elastik. Në epruvetë shkruani numrin, emrin e subjektit. Në këtë gjendje, epruvetat ruhen për 8-10 ditë në një temperaturë prej 28 °C. Për të studiuar larvat, hiqni dhe hiqni mbulesën e celofanit dhe hiqni një rrip letre filtri me piskatore. Në këtë rast duhet pasur kujdes, pasi një numër i vogël larvash infektive mund të lëvizin në skajin e sipërm të letrës filtruese ose në murin e epruvetës dhe të depërtojnë nën sipërfaqen e celofanit.

Tubat vendosen në një banjë me ujë të nxehtë në 50°C për 15 minuta, pas së cilës përmbajtja tundet dhe derdhet shpejt në një tub të sedimentimit të larvave 15 ml. Pas centrifugimit, supernatanti hiqet dhe precipitati transferohet në një rrëshqitje qelqi, të mbuluar me një mbulesë dhe të mikroskopuar me zmadhim të ulët.

Për diagnozën diferenciale të larvave filariforme, është e nevojshme të përdoren të dhënat në Tabelën 3.

Tabela 3

DIAGNOSTIKAT DIFERENCIALE TË LARVËVE FILARIATED TË A. DUODENALE, N. AMERICANUS, S. STERCORALIS, TRICHOStrONGYLUS SP.

Larvat	Dimensionet	Tiparet karakteristike
A. duodenale	Gjatësia e trupit rreth 660 mikron, kapaku - 720 nm	Shtrirja e kapakut është më pak e theksuar, zgjatja e gojës është më pak e dukshme, skaji i përparmë i trupit (por jo kapaku) është i hapur, diametri i tubit të zorrëve është më i vogël se llamba e ezofagut, fundi kaudal është i hapur.
N. americanus	Gjatësia e trupit rreth 590 mikron, kapaku - 660 nm	Këllëfi është dukshëm i strijuar, veçanërisht në pjesën kaudale të trupit, projeksioni i gojës duket i errët, skaji i përparmë i trupit (por jo këllëfi) është i rrumbullakosur si skaji i ngushtë i vezës së pulës, pjesa e përparme e zorrëve tubi ka një diametër të tillë si llamba e ezofagut, fundi kaudal është i theksuar ashpër
S. stercoralis	Gjatësia e trupit rreth 500 mikron	Larva pa këllëf, ezofagu është rreth gjysma e gjatësisë së trupit, bishti është i hapur ose i degëzuar
Trichostrongylus sp.	Gjatësia e trupit rreth 750 mikron	Lumeni i zorrëve nuk është i drejtë, por zigzag, fundi kaudal është i rrumbullakosur dhe ka formën e një butoni

7.7.2. Metodat për ngjyrosjen e vezëve dhe larvave të helminthëve

Indet e vdekura në shumicën e rasteve i perceptojnë ngjyrat më shpejt se ato të gjalla. Këto karakteristika përdoren në helmintologji për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve dhe larvat e helminthëve. Megjithatë, në disa raste, disa bojëra perceptohen më mirë nga indet e gjalla sesa nga ato të vdekura.

Për përcaktimin diferencial të vezëve dhe larvave të gjalla dhe të ngordhura, përdoren ngjyrat dhe metodat e mëposhtme.

Leukobaza blu metilen përdoret shpesh për të njollosur indet e gjalla dhe të vdekura. Një qelizë ose ind i gjallë e redukton blunë e metilenit në një leukobazë të pangjyrë; indi i vdekur nuk e ka këtë aftësi, dhe për këtë arsye fiton një ngjyrë.

Kriteri për gjendjen e vezës është njollosja e embrionit, por jo lëvozhga. Kjo aftësi lidhet me kushtet e vdekjes së vezës. Në ato raste kur lëvozhga fibroze në vezën e ngordhur nuk i humbet vetitë e saj gjysmë të përshkueshme, ajo nuk do të kalojë ngjyra, prandaj embrioni i vdekur nuk do të njolloset. Një embrion me ngjyrë tregon gjithmonë vdekjen e vezës.

Për ngjyrosjen e vezëve Ascaris, mund të përdorni blu metilen në një zgjidhje të acidit laktik me alkali kaustik (blu metilen 0,05 g, sode kaustike 0,5 g, acid laktik - 15 ml). Vezët e gjalla nuk e perceptojnë ngjyrën; embrionet e vezëve të ngordhura bëhen blu. Larvat e Ascaris ngjyrosen me një zgjidhje bazë të bojës blu brilante-kresil në një përqendrim 1:10,000 si më poshtë: një pikë lëngu me vezë ascaris dhe një pikë e tretësirës bazë të bojës aplikohen në një rrëshqitje xhami. Preparati mbulohet me një mbulesë, e cila shtypet fort pas rrëshqitjes së xhamit me një goditje të lehtë me një gjilpërë disektuese. Në mikroskop vërehet numri i larvave të çelura dhe shkalla e ngjyrosjes së tyre; pas së cilës i njëjti medikament rishikohet përsëri pas 2 deri në 3 orë. Vetëm larvat e padeformuara që nuk janë ngjyrosur për 2 orë konsiderohen të gjalla. Larvat e ngordhura ose nuk dalin nga vezët, ose njollosen kur lëvozhga thyhet (pjesërisht ose plotësisht).

Kur përcaktohet qëndrueshmëria e vezëve të ascaridisë së zogjve, është e mundur të ngjyrosni përgatitjet me një zgjidhje alkooli 5% të jodit. Kur aplikohet në ilaç, embrionet e vezëve të ngordhura ascarid për 1 - 3 sekonda. janë lyer portokalli.

Vezët e ngordhura të shiritit të gjedhit dhe onkosferat e shiritit të gjedhit ngjyrosen me një tretësirë ​​të blusë toluidine (1:1000), dhe onkosferat e ngordhura të krimbit të gjedhit njollosen me një tretësirë ​​të blusë brilante-kresil (1:10000). Në të njëjtën kohë, embrionet dhe lëvozhgat e vezëve të ngordhura dhe të gjalla marrin ngjyrë. Prandaj, pas njollosjes, vezët dhe onkosferat lahen në ujë të pastër dhe njollosen shtesë me safranin (në një hollim prej 1:10,000 alkool, 10°C). Alkooli largon bojën nga guaska dhe safranina njolloset me ngjyrë të kuqe. Si rezultat, vezët e gjalla bëhen të kuqe; vezë me embrione të ngordhura - në blu, dhe lëvozhga mbetet e kuqe. Embrionet e ngordhura të onkosferave të shiritit të gjedhit shpejt, brenda pak minutash, ngjyrosen me ngjyrë të kuqe të ndezur ose rozë me safranin ose blu me blu të shkëlqyeshme kresil në një hollim 1:4000, ose me karmine indigo në një hollim 1:1000 - 1. : 2000. Embrionet e gjalla nuk ndryshojnë nën ndikimin e këtyre ngjyrave edhe pas 2 - 7 orësh.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të shiritit pigme, rekomandohet të përdorni bojërat e mëposhtme:

1. Blu kreasil shkëlqyese (1:8000) - pas 1 ore, onkosfera e vezëve të ngordhura është veçanërisht e njollosur me shkëlqim, e cila bie në sy në sfondin e zbehtë ose të pangjyrë të pjesës tjetër të vezës.

2. Safranin (1:8000 për 2 orë dhe 1:5000 për 3 deri në 5 orë).

3. Tretësirë ​​50% e acidit pirogalik në një hollim 1:2 - kur ekspozohet për 1 orë në një temperaturë prej 29 - 30 ° C (sa më e ulët të jetë temperatura, aq më i gjatë është procesi i ngjyrosjes).

7.7.3. Metoda lumineshente për studimin e vezëve dhe larvave të helminthëve

Mikroskopi fluoreshente bën të mundur dallimin e objekteve të gjalla dhe të vdekura pa dëmtuar vezën. Për fluoreshencë, nuk përdoren rrezet ultravjollcë, por pjesa blu-vjollcë e dritës së dukshme, me mikroskop konvencional dhe rrëshqitës xhami; një grup i veçantë filtrash me ngjyra i shtohet ndriçuesit OI-18.

Vezët e gjalla dhe të ngordhura të krimbave të rrumbullakët, gjilpërave, shiritave pigme, shiritave të gjedhit, krimbave shirit dhe helminthëve të tjerë ndriçojnë ndryshe. Ky fenomen vërehet si gjatë lumineshencës parësore pa përdorur ngjyra, ashtu edhe kur ngjyroset me fluorokrom (akridine portokalli, korifosfine, primulinë, auroline, sulfat berlerin, tripaflavinë, rivanol, kinakrinë, etj.).

Vezët e panjollosura, jo të segmentuara të krimbave të rrumbullakëta shkëlqejnë jeshile e ndezur me një nuancë të verdhë; në vezët e ngordhura, guaska lëshon dritë jeshile shumë më e ndritshme se pjesa embrionale e gjelbër e errët; në vezët e krimbave të rrumbullakëta me larvë, shfaqet vetëm lëvozhga, ndërsa tek të ngordhurat, lëvozhga dhe larva kanë ngjyrë të verdhë të ndezur.

Vezët e gjalla jo të pigmentuara dhe jo të segmentuara të krimbave dhe xhuxhëve të shiritit lëshojnë një dritë jeshile-verdhë; në vezët e ngordhura, lëvozhga ndriçon intensivisht në sfondin e një mase embrionale të gjelbër të errët.

Me ndriçim sekondar (kur ngjyroset akridina portokalli në një hollim prej 1:10000 dhe 1:50000 nga 30 minuta në 2 orë), guaska e nematodeve të gjalla dhe të vdekura, trematodave dhe cestodave ndriçon ndryshe.

Lëvozhga e vezëve të gjalla dhe të ngordhura të askarideve, toksokarit, krimbave pink, shiritave pigme, shiritave të minjve, krimbave të demit, shiritave kthehet në të kuqe portokalli. Embrionet e vezëve të gjalla të ascaris, toxascaris, shirit të miut, shiritit të gjerë dhe onkosferës së shiritit të gjedhit ndriçojnë në një ngjyrë jeshile të errët ose gri-jeshile. Embrionet e vdekura të vezëve të këtyre helminthëve lëshojnë një ngjyrë "të djegur" portokalli-kuqe. Larvat e gjalla të krimbave dhe toksokarët (lëvozhgat e vezëve) lëshojnë një dritë të shurdhër gri-jeshile, dhe kur ato vdesin, ngjyra ndryshon nga fundi i kokës në një jeshile të lehtë "të djegur", pastaj në të verdhë, portokalli dhe në fund në portokalli të ndezur.

Kur ngjyroset me fluorokrom - korifosfilum, primulin, vezët e ngordhura të ascarideve dhe krimbave të kamxhikut tregojnë një shkëlqim nga e verdha jargavan në të kuqe bakri. Vezët e qëndrueshme nuk ndriçojnë, por kthehen në jeshile të errët.

Vezët e gjalla të trematodave (paragonimus dhe clonorchis) nuk shkëlqejnë pas ngjyrosjes me akridine portokalli, dhe një ngjyrë e verdhë-jeshile vjen nga vezët e ngordhura.

Metoda e lumineshencës mund të përdoret gjithashtu për të përcaktuar qëndrueshmërinë e larvave të helminthit. Pra, tretësira fluorokromike e larvave të akridinës portokalli (1:2000) me shkëlqim të fortë, rhabdita: e gjallë - jeshile (me një nuancë), e vdekur - dritë portokalli e ndritshme.

Miracidet e gjalla që dalin nga guaska lëshojnë një dritë të zbehtë kaltërosh me një kurorë mezi të dukshme të verdhë të qerpikëve, por 10-15 minuta pas vdekjes ato shfaqen si një dritë e ndritshme "e ndezur" jeshile e lehtë, dhe më pas dritë portokalli-kuqe.

7.7.4. metoda e analizës biologjike

Për shembull, për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të ascaris (krimbi i derrit, njeriu, toxocara, toxascaris, etj.) për një kafshë (derra gini, minj), nevojiten të paktën 100 - 300 vezë me një larvë të zhvilluar. Vezët Ascaris në solucionin izotonik të klorurit të natriumit futen me pipetë përmes gojës së një miu ose derri gini. Pas 6 - 7 ditësh, kafsha theret, hapet dhe mëlçia dhe mushkëritë e saj ekzaminohen veçmas për praninë e larvave ascaris. Për ta bërë këtë, mëlçia dhe mushkëritë priten në copa të vogla me gërshërë dhe ekzaminohen sipas metodës Berman ose Supryaga (seksioni 6.1.2).

Nëse kafshët ishin të infektuara me vezë të gjalla pushtuese, atëherë në autopsi në mëlçi dhe mushkëri, gjenden larvat migratore të ascaris.

Në rast infeksioni, vezët fasciola në feçet e kafshëve laboratorike mund të zbulohen te lepujt pas 2 muajsh, te derrat gini - pas 50 ditësh, te minjtë - pas 35-40 ditësh.

Për një përgjigje më të shpejtë, kafshët laboratorike hapen pas 20-30 ditësh dhe mëlçia ekzaminohet për praninë e fashioleve të rinj.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të krimbit pigme, rekomandohet gjithashtu t'i ushqeni ato te minjtë e bardhë të painfektuar më parë, e ndjekur nga autopsia e kafshëve pas 92-96 orësh dhe zbulimi i cisticerkoideve në vilet e zorrëve ose cestodave në lumenin e zorrëve.

Për të përcaktuar qëndrueshmërinë e vezëve të opisthorchis, rekomandohet një metodë (German S.M., Beer S.A., 1984), bazuar në aktivizimin fiziko-kimik të gjëndrës së çeljes së miracidiumit dhe stimulimin e aktivitetit motorik të larvës, që çon në hapjen e vezës. kapakun dhe çlirimin aktiv të miracidiumit në kushte eksperimentale.

Një pezullim i vezëve opisthorchis në ujë është ftohur paraprakisht në 10 - 12 ° C (të gjitha operacionet e mëvonshme kryhen në temperaturën e dhomës 19 - 20 ° C). 1 pikë e një suspensioni që përmban 100-150 vezë shtohet në një tub centrifuge. Provëza vendoset në trekëmbësh për 5-10 minuta. Gjatë kësaj kohe, të gjitha vezët kanë kohë të zhyten në fund. Më pas, me një rrip letre filtri, uji i tepërt thithet me kujdes dhe në provëz hidhen 2 pika të një mediumi special. Mjeti përgatitet në tampon Tris-HCl 0,005 M; 12 - 13% tretësirë ​​etanoli dhe ngjyrues (magenta, safranin, eozin, blu metilen etj.) i shtohen buferit. Provëza tundet, përmbajtja e saj transferohet me pipetë në një rrëshqitës xhami dhe lihet 10 minuta duke u tundur pak. Më pas shtoni 2 pika të mediumit të treguar. Preparati është gati për mikroskopi nën një mikroskop konvencional me dritë me zmadhim 20x.

Gjatë kësaj kohe, kapaku i larvave të qëndrueshme hapet dhe miracidiumi hyn në mënyrë aktive në mjedisin e treguar. Për shkak të pranisë së etanolit në të, ato imobilizohen pas 2-5 minutash dhe më pas lyhen me bojë. Ato mund të zbulohen dhe numërohen lehtësisht nën mikroskop.