Roli i infeksionit fungal në patologjinë njerëzore. Diagnoza e mykozave

Sipas udhëzimeve SP 1.2.036-95 të Komitetit Shtetëror për Mbikëqyrjen Epidemiologjike të Federatës Ruse, Moskë, 1996 "Procedura për regjistrimin, ruajtjen, transferimin dhe transportin e mikroorganizmave të grupeve të patogjenitetit I-IV" sipas rrezikut epidemiologjik, maja dhe kërpudhat e mykut, si dhe dermatofitet i përkasin grupeve III-IV të patogjenëve sëmundjet infektive, prandaj, kur punoni me ta, është e nevojshme të respektohen rregullat e veçanta të sigurisë, higjiena industriale, regjimi anti-epidemik dhe higjiena personale, që synojnë sigurimin personal. dhe parandalimin publik të infeksionit, alergjive dhe përhapjes së infeksionit.

Laboratori për punën me mikroorganizmat e grupeve të patogjenitetit III-IV është i pajisur me mobilje të dezinfektuara lehtësisht, duke përfshirë kabinete për qelqe të pastra laboratorike, reagentë, mjete kulture, pajisje dhe mjete të përshtatshme. Për punë ju nevojiten llamba alkooli ose ndezës gazi, sythe mikrobiologjike, spatula mykologjike, spatula, piskatore për epilim dhe anatomike, thonjsh, bisturi, gërshërë, lugë Volkmann, pipeta, pipeta Pasteur, gjilpëra disektuese, shufra qelqi, shiringa, bisturi të ulëta , aparate shkundëse, enë Petri, epruveta, enë qelqi, llambë ultraviolet Wood me filtër, mikroskop, ndriçues, termostate, autoklava, frigoriferë, furra me ngrohje të thatë, llamba baktericid.

Marrja e materialit për kërkime

Diagnoza mikroskopike e mykozave përfshin zbulimin e miceli dhe sporeve në biomaterialin që studiohet. Luspat epidermale, flokët dhe thonjtë konsiderohen si biomaterial në studim. Një kërkesë e domosdoshme para kryerjes së studimit është mungesa e trajtimit lokal për të paktën dhjetë ditë dhe trajtimi sistemik për një muaj. Duhet të kihet parasysh se përdorimi i detergjenteve nga pacienti (veçanërisht ato që përmbajnë antiseptikë) mund të ndikojë në besueshmërinë e rezultateve të testit, prandaj larja është e ndaluar 3-4 ditë para testit.

Mjetet për marrjen e biomaterialit dhe përgatitjen e ilaçit janë paraqitur në figurë:

Foto. Instrumentet për marrjen e biomaterialit dhe përgatitjen e barit.

Nëse dyshohet për mykozë të lëkurës së lëmuar, mikozë të duarve dhe këmbëve pa dëmtim të pllakave të thonjve, ekzaminohen shkallët epidermale nga sipërfaqja e lezionit. Për mykozën e lëkurës së lëmuar, preferohet të studiohet epiderma nga zona margjinale e lezionit, pasi procesi patologjik shpesh zgjidhet në zonën qendrore. Në të njëjtën kohë, nuk duhet të harrojmë mundësinë e dëmtimit të flokëve të velusit, i cili përcakton zgjedhjen e taktikave të mëtejshme të trajtimit. Qimet hiqen me piskatore epilimi. Për mykozën e duarve dhe këmbëve pa dëmtim të pllakave të thonjve, ekzaminohen luspat epidermale nga palosjet e treta dhe të katërta ndërdixhitale, si dhe nga pëllëmbët dhe harqet e këmbëve.

Nëse dyshohet për infeksion mykotik të flokëve të gjatë (skalp, mjekër, mustaqe dhe pubis), si dhe qime velus, bëhet një ekzaminim mikroskopik. Me trikofitozën e kokës, flokët shkëputen në një distancë prej 1-2 mm mbi nivelin e grykës së gjëndrës së flokëve, duke u ngjan me trungje dhe pika. Nëse flokët nuk mund të kapen me piskatore depilimi, atëherë ata përpiqen t'i heqin me majën e mprehtë të një bisturi ose një gjilpërë disekuese.

Me mikrosporinë e kokës, flokët thyhen në një lartësi prej 5-6 mm, duke i ngjan një "livadhit të kositur". Janë këto qime të thyera që ekzaminohen në mikroskop. Flokët hiqen nga lezionet duke përdorur piskatore.

Me favus, shqyrtohet rrallimi i flokëve mbi sipërfaqen e skutulës.

Nëse dyshohet për onikomikozë, ekzaminohen materialet e grimcuara lehtësisht nga zona e hiperkeratozës subunguale, si dhe vetë pllakat e thonjve të ndryshuara.

Është e nevojshme të kuptohet se çdo material testimi nga një pacient është potencialisht infektiv, kështu që mbledhja e tij duhet të kryhet në një dhomë ku kryhet pastrimi i lagësht ditor duke përdorur dezinfektues (5% zgjidhje kloramine, 5% zbardhues i pastruar) dhe ajrin. është sterilizuar me rrezatues ultravjollcë (këto përfshijnë për 1-1,5 orë dhe hyjnë në dhomë 20 minuta pas fikjes). Termostatet fshihen çdo javë me një zgjidhje kloramine 0,5%, muret trajtohen me dezinfektues një herë në muaj. Gjatë punës, mjeku duhet të mbrohet me maskë, syze, fustan dhe doreza. Instrumentet për marrjen e biomaterialit, dorezat, rrëshqitjet dhe mbulesat, mbulesat e disponueshme dhe pecetat dezinfektohen pas përdorimit duke i zhytur në një tretësirë ​​1,5% të clindesin-ekstra (tretësirë ​​5% fenol ose tretësirë ​​5% Lysol) për 30 minuta. Materiali patologjik i mbetur (luspat e flokëve, lëkurës dhe thonjve) autoklavohet në 2 atm. dhe 132˚ C për 20 minuta (kontrolli - ure) ose në 1.5 atm. dhe 126˚ C për 30 minuta (kontrolli - acid benzoik), ose zihet për 1 orë në ujë ose 30 minuta në një tretësirë ​​1% sapun-sode.

Materiali patologjik transportohet në laborator në një enë të veçantë ose kuti metalike, duke e mbrojtur atë nga rrezet e diellit direkte. Dokumenti shoqërues tregon mbiemrin, emrin, patronimin, gjininë, moshën dhe adresën e pacientit, diagnozën e pritshme klinike, emrin e materialit që studiohet, kohën e mbledhjes së tij, vendndodhjen e lezionit, historinë mjekësore. numrin, emrin e mjekut dhe institucionin që dërgon materialin.

Përgatitja e barit

Pas marrjes së thekoneve epidermale nga lezioni, përgatitet një preparat për ekzaminim mikroskopik. 1-2 pika KOH 20% aplikohen në materialin e provës të vendosur në një rrëshqitës xhami, pas së cilës rrëshqitja e qelqit nxehet mbi një flakë djegëse derisa një buzë e bardhë e alkalit të kristalizuar të shfaqet rreth periferi. Mostra më pas mbulohet me një mbulesë (e cila shtypet me një gjilpërë disektuese) dhe ekzaminohet nën një mikroskop. Studimi duhet të kryhet jo më vonë se 2 orë pas përgatitjes së ilaçit për shkak të mundësisë së kristalizimit të alkalit.

Metoda e përgatitjes së preparatit të flokëve për infeksion të dyshuar mykotik korrespondon me atë të përshkruar më parë, me ndryshimin e vetëm që xhami i mbulimit nuk shtypet me një gjilpërë disektuese (për të shmangur shtypjen e flokëve).

Foto. Shfaqja e një buze alkali të kristalizuar.

Për të përgatitur ilaçin, copat e pllakave të thonjve të prera zhyten në një provëz me 20% KOH dhe ekspozohen në një termostat për 1 orë (t≈37˚C), dhe më pas masa e përftuar në formë pelte transferohet në një rrëshqitës xhami. , i mbuluar me një mbulesë dhe i ekzaminuar në mikroskop.

Ndryshe nga pllakat e thonjve, mostrat e bëra nga materiali lehtësisht i grimcuar nga zona e hiperkeratozës subunguale vendosen në një rrëshqitje xhami, 1-2 pika KOH 20% aplikohen në to, pas së cilës rrëshqitja nxehet mbi një flakë djegëse deri në një buzë të bardhë. alkali i kristalizuar shfaqet përgjatë periferisë (Fig. 65) . Mostra më pas mbulohet me një mbulesë, e cila shtypet butësisht me një gjilpërë disekuese dhe ekzaminohet nën një mikroskop.

Mikroskopi i preparatit

Për të kryer një ekzaminim mikroskopik, përdoret një mikroskop laboratorik pa përdorimin e zhytjes. Mikroskopi i luspave epidermale, luspave nga zona e hiperkeratozës subunguale, si dhe pllakave të tretura të thonjve kryhet fillimisht me zmadhim të ulët (×100), dhe kur zbulohen fijet miceliale, që të kujtojnë një "hartë lumenjsh" (hekurudha). , lentja kalon në një zmadhim më të lartë (×400) . Në zmadhim mesatar, miceli ngjan me shufra qelqi në formë të çuditshme që ndryshojnë shkallën e thyerjes së dritës kur punoni me një mikrovidë mikroskop.

Mikroskopi i mostrës së flokëve kryhet menjëherë me zmadhim mesatar (×200 ose ×400). Me trikofitozë, spore të mëdha të renditura në rreshta gjenden brenda flokëve, ndërsa me mikrosporinë, ka shumë spore të vogla mozaiku brenda flokëve (nga rrjedh edhe termi "mikrosporia"). Ndonjëherë vërehet prania e një këllëfi në pjesën e jashtme të flokëve - kjo është tipike si për trikofitozën (një variant i ektotriksit, sporet janë të mëdha) ashtu edhe për mikrosporinë (në këtë rast mbështjellja përbëhet nga spore të vogla). Gjatë mikroskopimit të flokëve të prekur me favus, brenda flokëve, përveç grupeve të sporeve të rrumbullakëta ose poligonale, gjenden flluska ajri dhe fije miceli.

Përgatitjet duhet të shihen jo më vonë se 2 orë nga momenti i përgatitjes së tyre për shkak të mundësisë së kristalizimit të alkalit. Për të rritur besueshmërinë e diagnozës, duhet të bëhen disa preparate (të paktën dy) nga një lezion. Gabimet e mundshme në diagnozën mikroskopike të mykozave mund të shoqërohen si me përgatitjen me cilësi të dobët të preparateve (mbinxehje mbi flakën e djegësit, e cila shoqërohet me kristalizimin e parakohshëm të alkalit), ashtu edhe me përvojën e pamjaftueshme të studiuesit (kur fibrat e indet e gjetura aksidentalisht në preparat shpesh ngatërrohen me fijet e miceli).

DIAGNOSTIKA LABORATORIKE E MIKOZAVE

Marrja e materialit për testim laboratorik për kërpudhat.

1.OST 42-21-2-854: urdhri nr 222/80 dat 27.06.2000.
2. Pajisjet: piskatore, rrëshqitës xhami, gërshërë, lugë Volkmann.
4.Indikacionet: sëmundje mykotike.
5. Komplikimet: asnjë.

Përgatitja e dhomës së trajtimit:

Ndryshimi i zgjidhjeve.

Përgatitni:
-1% tretësirë ​​kloramine për lecka
-3% tretësirë ​​kloramine – për dezinfektimin e veshjeve dhe piskatores
- tretësirë ​​larës (156 ml peroksid hidrogjeni + 5 g pluhur larës + 839 ml ujë të distiluar) - për përpunimin e piskatores
- Tretësirë ​​6% peroksid hidrogjeni – për trajtimin e dorezave.

Algoritmi për kryerjen e manipulimit.

Ju duhet të merrni piskatore, një rrëshqitës xhami, një lugë Volkmann dhe gërshërë;
- ftoni pacientin në dhomën e zhveshjes;
- pacienti ulet në një karrige ose divan;
- m/s është në këmbë.

Teknika:

Merrni thekon lëkurë dhe qime nga lezioni me piskatore;
- vendoseni materialin e marrë në një rrëshqitës xhami dhe mbulojeni me një rrëshqitës tjetër xhami.
- lani duart me sapun;
- dërgoni materialin e marrë në laborator.

MBLEDHJA E MATERIALIT

Marrja e thonjve për ekzaminim.

Merrni gërshërë dhe rrëshqitës xhami;
- përdorni gërshërë për të prerë një copë nga buza e lirë e gozhdës;
- mbulojeni materialin e marrë me një tjetër rrëshqitës xhami;

Thithni gërshërët dhe piskatore në solucion formaldehid 3%.

Mbledhja e saktë e materialit nga thonjtë e prekur është çelësi i hulumtimit të suksesshëm mikrobiologjik. Kur marrin materialin, ata jo gjithmonë kapin zona të gozhdës që përmbajnë kërpudha të qëndrueshme. Natyrisht, kërpudhat jo të qëndrueshme nuk do të rriten në kulturë dhe speciet e tyre nuk mund të përcaktohen.

Zona e gozhdës që duhet të merret përcaktohet nga forma e onikomikozës.

Pra, me një formë sipërfaqësore të onikomikozës, gërvishtjet duhet të bëhen nga sipërfaqja e pllakës së thonjve.

Në formën më të zakonshme subunguale distale, kërpudhat më të qëndrueshme ndodhen nën pllakën e thonjve. Materiali i dërguar për ekzaminim duhet të përfshijë jo vetëm prerje të pllakës së thonjve, por edhe gërvishtje nga shtrati i thonjve, nga poshtë pllakës.

Për më tepër, zonat e gozhdës së pandryshuar gjithashtu duhet të kapen, pasi kërpudhat më aktive ndodhen në kufirin midis tyre dhe zonave të prekura të gozhdës.

Me formën subunguale proksimale, është e vështirë të merret materiali. Në këto raste, ndonjëherë, veçanërisht nëse do të bëjnë një ekzaminim histologjik ose diagnozë diferenciale, bëhet një biopsi e thonjve dhe herë pas here përdoret një stërvitje.

Për paronikinë, kruajtjet bëhen nga kreshta proksimale dhe nga poshtë saj.

Në të gjitha rastet, për të shmangur kontaminimin bakterial, gozhda duhet të trajtohet me alkool etilik përpara marrjes së mostrës.

HETIMI MIKROSKOPIK

Ekzaminimi mikroskopik i materialit patologjik për kërpudhat kryhet në preparate vendase dhe të ngjyrosura.

Për të përgatitur preparate të panjollosura, materiali që rezulton grimcohet duke përdorur një bisturi ose gjilpërë disekuese dhe vendoset në mes të një rrëshqitjeje xhami. Për të identifikuar më qartë elementët e kërpudhave, materiali sqarohet (macerohet). Për këtë qëllim, ata përdorin substanca të ndryshme, më së shpeshti alkalin kaustik (KOH, NaOH), të cilat shpërndajnë luspat epidermale, mukozën, qelbën, ndriçojnë pigmentin e flokëve dhe në këtë mënyrë i bëjnë kërpudhat të disponueshme për kërkime.

Aplikoni 1-3 pika të një solucioni 20-30% KOH (NaOH) në lëkurën e zbutur ose në thonj, të cilat vendosen në mes të një rrëshqitjeje xhami. Materiali në studim në pika alkali nxehet me kujdes mbi flakën e një llambë alkooli derisa një buzë e bardhë delikate e kristaleve alkali të shfaqet përgjatë periferisë së pikës. Mos e ngrohni deri në pikën e vlimit. Pas ngrohjes, pika mbulohet me një gotë mbuluese, duke shmangur hyrjen e flluskave të ajrit.

R. A. Arabian dhe G. I. Gorshkova (1995) rekomandojnë lënien e preparateve të luspave të lëkurës dhe flokëve të pastruara dhe të mbuluara me një gotë mbuluese për 5 - 10 minuta, dhe përgatitjet e pllakave të thonjve për 30 - 40 minuta para mikroskopit.

Pastrimi i preparateve mund të bëhet pa ngrohje, për këtë ato lihen në një tretësirë ​​KOH 20% për 30 - 60 minuta ose përdoren metoda të tjera të pastrimit të materialit patologjik: kloralaktofenol sipas Aman; laktofenol; një tretësirë ​​që përmban 15% dimetil sulfoksid dhe KOH në ujë. Rezultate të mira merren pas pastrimit të pllakave të thonjve, të vendosura në një tretësirë ​​5% KOH për 24 orë; në këtë rast nuk kërkohet ngrohje.

Ekzaminimi mikroskopik kryhet në një mikroskop laboratorik konvencional pa zhytje.

Kondensuesi i mikroskopit duhet të ulet dhe hapja duhet të ngushtohet. Në fillim, ilaçi gjendet në xhami me zmadhim të ulët (40x), hulumtimi i mëvonshëm kryhet me zmadhim më të lartë (100x);

Ilaçi studiohet në detaje në një zmadhim prej 400x. Është e nevojshme të studiohen disa ilaçe për të rritur besueshmërinë e analizës dhe për të shmangur rezultatet false-pozitive.

Gabimet në diagnozën mikroskopike të kërpudhave mund të ndodhin si për shkak të defekteve në përgatitjen e ilaçit dhe përvojës së pamjaftueshme të asistentit të laboratorit.

Defektet e prodhimit lidhen kryesisht me:
me mbinxehje të drogës, e cila mund të çojë në humbjen e kristaleve alkaline, shkatërrimin e flokëve dhe shfaqjen e kalbjes së grimcuar në materialin patologjik.

Rregullimi linear i kristaleve të zgjatura dhe të lëmuara të alkalit të kujton shumë fijet e miceli septate, madje edhe në xhami të pastër pa material patologjik.

Karakteristikat diferenciale të diagnostikimit janë uniformiteti i jashtëzakonshëm i kristaleve, transparenca e tyre e qelqtë, skajet shumëplanëshe dhe mungesa e një lidhjeje të pandashme midis një elementi dhe një tjetër. Në raste të dyshimta, rekomandohet të shtoni në preparat pika uji të distiluar pak të ngrohur, të cilat shpërndajnë shpejt kristalet e alkalit.

Më poshtë mund të gabohen për elementët e kërpudhave:

- pikat e yndyrës,
- flluska ajri,
- fije veshje pambuku
- dhe të ashtuquajturat "kërpudha mozaike".

Lipidet e lëkurës, shpërbërja e qelizave yndyrore dhe kokrrat e keratohyalinës, veçanërisht ato me formë të rregullt, mund t'i ngjajnë sporeve individuale të kërpudhave. Por shumëllojshmëria e formave dhe, më e rëndësishmja, përmasat, mungesa e strukturës së brendshme të formacioneve (vakuola, predha) flasin kundër natyrës mykotike të këtyre elementeve. Lipidet gjithashtu mund të futen në preparat kur marrin material patologjik nga një lezion i pastruar në mënyrë të pamjaftueshme.

Flluskat e ajrit mund të ngjajnë me sporet e qelizave të ngjashme me majanë, por ndryshe nga këto të fundit, ato janë të rrethuara nga një membranë e errët e dendur, madje edhe flluskat më të vogla të ajrit janë gjithmonë më të mëdha se qelizat e kërpudhave.

Fijet nga pëlhura e çorapeve, veshjeve etj. zakonisht shtrihen veçmas nga materiali patologjik, ato janë gjithmonë më të mëdha se hifat, më të trashë dhe jo të ndarë.

"Kërpudhat e mozaikut" janë një artefakt që shfaqet gjatë procesit të kristalizimit (ndoshta për shkak të prishjes së kolesterolit). Ka pamjen e një rrjetë ose sythe, skicat e të cilave korrespondojnë me kufijtë e luspave me brirë; ndryshe nga fijet e miceli, ajo kurrë nuk i kalon muret e qelizave epidermale.

Në disa laboratorë, përgatitjet për ekzaminim mikroskopik pastrohen me një tretësirë ​​15-30% KOH, së cilës i shtohet 5-10% bojë komerciale blu e errët nga Parker (Bojë Superchrome Blue-Black Parker).

Me këtë ngjyrosje, hifet dhe sporet janë me ngjyrë blu.

Mikroskopi zbulon hife kërpudhore filamentoze ose qeliza të lulëzuara (Fig. 1).

Kështu, mikroskopi jep një përfundim vetëm për natyrën mykotike të infeksionit, por jo për llojin e mykut që e shkakton atë.

Sigurisht, efektiviteti i ekzaminimit mikroskopik varet nga kualifikimet e punonjësit të laboratorit.

Oriz. 1. Mikroskopi i gërvishtjeve nga thonjtë e prekur nga T. rubrum. Hifet fungale janë të dukshme.

KËRKIM KULTURORE

Materiali inokulohet në medium standard Sabouraud, shpesh me antibiotikë të shtuar. Në diagnostikimin e infeksioneve dermatofite, është e zakonshme të shtohet ciklohekimidi në mediumin e Sabouraud, i cili shtyp rritjen e kërpudhave ndotëse që vijnë nga ajri. Janë të disponueshme media komerciale të gatshme me antibiotikë të shtuar dhe cikloheximide. Duhet mbajtur mend se shumë myqe jo dermatofite dhe disa lloje Candida nuk rriten në mjedis me cikloheksimid, kështu që rekomandohet të inokulohet në mjedisin e Sabouraud me cikloheksimid dhe në mjedis pa të. Identifikimi i specieve zakonisht kryhet me ekzaminim mikroskopik të kulturës së rritur ose me nënkulturë në mjedise selektive (Fig. 2-15).

Oriz. 2. Kultura e mykut T. rubrum të izoluar nga thonjtë e prekur. Marrë në medium Sabouraud (majtas) dhe agar misri (djathtas).

Oriz. 3. Kultura e mykut T. mentagrophytes var. interdigitale e izoluar nga thonjtë e prekur. Marrë në mediumin Sabouraud.

Oriz. 4. Kultura e mykut Candida albicans. Marrë në mediumin Sabouraud.

Oriz. 5. Kultura e kërpudhave Torulopsis glabrata e izoluar nga thonjtë e prekur. Marrë në mediumin Sabouraud.

Oriz. 6. Kultura e mykut Ulocladium sp., e izoluar nga thonjtë e prekur.

Oriz. 7. Mikromorfologjia e Acremonium sp. e izoluar nga thonjtë e prekur.

Oriz. 8. Mikromorfologjia e Fusarium sp., e izoluar nga thonjtë e prekur.

Oriz. 9. Mikromorfologjia e Scopulariopsis sp e izoluar nga thonjtë e prekur.

Oriz. 10. Mikromorfologjia e Candida albicans e izoluar nga thonjtë e prekur.

Oriz. 11. Mikromorfologjia e Altemaria sp e izoluar nga thonjtë e prekur.

Oriz. 12. Mikromorfologjia e Aspergillus sp. e izoluar nga thonjtë e prekur.

Oriz. 13. Mikromorfologjia e Ulocladium sp e izoluar nga thonjtë e prekur.

Oriz. 14. Mikromorfologjia e Chaetomium sp. e izoluar nga thonjtë e prekur.

Fig. 15. Paneli i përbërjeve ushqyese për identifikimin e dermatofiteve (në të majtë - kultura T rubrum, në të djathtë - T mentagrophytes var. mterdigitale).

Nga e majta në të djathtë: mediumi i Sabouraud-it, mediumi i Baxter-it, mediumi i Christensen-it, agari i misrit

Duhet të theksohet se disa myk, përfshirë dermatofitet, rriten ngadalë në kulturë, brenda 2-3 javësh.

Edhe nëse respektohen të gjitha rregullat për grumbullimin e materialit, me pajisje të mira laboratorike dhe personel shumë të kualifikuar, numri i rezultateve pozitive të kërkimeve kulturore është shumë i vogël.

Sipas literaturës së huaj, përqindja e studimeve pozitive nuk i kalon 50.
Përqindja e rezultateve pozitive në laboratorët më të mirë vendas mezi arrin në 30.

Kështu, në 2 nga çdo 3 raste të onikomikozës, etiologjia e saj nuk mund të përcaktohet.

STUDIMI I LUMINESCENCËS

Në vitin 1925, Margaret dhe Deveze zbuluan se flokët e infektuar me dermatofite të caktuara lëshonin një shkëlqim karakteristik në rrezet ultravjollcë të kaluara përmes një filtri Deveze. Xhami Wuda përbëhet nga sulfat bariumi, përmban rreth 9% oksid nikeli; transmeton rreze me gjatësi 365 nm. Pajisje të ndryshme mund të përdoren si burim i rrezeve ultravjollcë. Natyra e shkëlqimit nuk është përcaktuar saktësisht. Flokët vazhdojnë të shkëlqejnë pasi kërpudhat vdesin dhe pasi bëhen përpjekje për të nxjerrë materialin fluoreshent me ujë të nxehtë ose tretësirë ​​të ftohtë të bromit natriumi. Intensiteti dhe natyra e shkëlqimit varen nga pH e tretësirës. Besohet se substanca fluoreshente shfaqet gjatë ndërveprimit të kërpudhave dhe flokëve në rritje.

Shkëlqimi në rrezet ultravjollcë të kaluar nëpër një filtër druri është karakteristik vetëm për flokët e prekur nga kërpudhat e gjinisë Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, herë pas here M. gypseum dhe M. nanum). si Trichophyton schonleinii. Flokët e infektuar me mikrosporume, veçanërisht M. canis dhe M. audouinii, japin shkëlqimin më të shndritshëm; flokët e prekur nga T. schonleinii kanë një fluoreshencë të shurdhër të gjelbër.

Shkëlqimi vërehet vetëm në flokë të prekur plotësisht nga kërpudhat. Mund të mos jetë i pranishëm në lezione të freskëta. Në këto raste, flokët duhet të depilohen nga zona margjinale, më aktive dhe shkëlqimi mund të zbulohet në pjesën rrënjësore të flokëve.

Metoda lumineshente mund të përdoret si për diagnostikimin ashtu edhe për monitorimin e efektivitetit të trajtimit në pacientë individualë dhe në vatra epidemiologjike. Njësitë celulare kompakte janë të përshtatshme për ekzaminimin e njerëzve të kontaktit në shkolla, kopshte, etj.

Ekzaminimi luminescent duhet të kryhet në një dhomë të errësuar, lezionet duhet të pastrohen fillimisht nga koret, mbetjet e pomadës, etj. Metoda luminescente mund të përdoret për të diagnostikuar pityriasis versicolor, veçanërisht kur lezionet janë të lokalizuara në lëkurën e kokës. Lezionet në këtë sëmundje kanë një shkëlqim të kuqërremtë në të verdhë ose kafe. Ky shkëlqim, megjithatë, nuk është rreptësisht specifik, pasi mund të vërehet në prani të zbokthit në lëkurën e kokës dhe madje edhe te njerëzit e shëndetshëm në zonën e gojës së folikulave të flokëve në fytyrë dhe në pjesën e sipërme të trupit. Flokët e prekur të zbuluar duke përdorur metodën lumineshente duhet t'i nënshtrohen ekzaminimit mikroskopik.

KËRKIMET IMUNOLOGJIKE DHE BIOLOGJIKE

Metodat e kërkimit imunologjik përdoren për të identifikuar ndryshimet specifike në trup dhe diagnostikimin serologjik të sëmundjeve kërpudhore. Për zbulimin e antitrupave specifikë në mostrat e serumit, kryhen këto reaksione serologjike: aglutinimi, precipitimi, fiksimi i komplementit, imunofluoreshenca me antigjenet përkatëse.

Gjendja alergjike e trupit të pacientit zbulohet duke përdorur teste alergjike të lëkurës. Alergjenët aplikohen në lëkurën e gërvishtur sipas Pirquet ose duke fërkuar në lëkurë sipas Moreau, në mënyrë intradermale sipas Mantoux ose me injeksion në lëkurë. Me ndihmën e këtyre testeve zbulohen reaksione alergjike të tipit të menjëhershëm dhe të vonuar, gjë që bën të mundur vlerësimin e gjendjes së imunitetit humoral dhe qelizor.

Për të identifikuar sensibilizimin specifik të limfociteve, përdoren reaksionet e degranulimit të bazofileve, grumbullimit dhe alterimit, testi i transformimit të blastit, shtypja e migrimit të makrofagëve, etj.

Krahasimi i rezultateve të reaksioneve serologjike dhe alergjike rezulton të jetë i dobishëm si për diagnostikimin ashtu edhe për prognozën e rrjedhës së mykozave.

Metoda biologjike. Përdoret për diagnostikimin laboratorik të mykozave të thella dhe veçanërisht të rrezikshme. Ai bazohet në infeksionin e kafshëve me material patologjik nga një pacient ose një kulturë e kërpudhave që studiohen. Kryhet në laboratorë të posaçëm.

STUDIM HISTOLOGJIK

Histologjia e mykozave të lëkurës të shkaktuara nga dermatofitet

Ndryshimet patomorfologjike në lezione shkaktohen nga futja e kërpudhave në shtresën korneum të epidermës, flokëve dhe thonjve dhe nga përgjigja inflamatore e lëkurës, e cila mund të jetë akute, subakute ose kronike. Diagnoza mund të konsiderohet e vendosur vetëm nëse në preparatet histologjike gjenden elemente mykotike. Për këtë përdoren njolla të ndryshme histologjike, më informative është reaksioni acidik periodik (PAS), i cili lejon identifikimin e polisaharideve të pranishme në celulozën dhe kitinën e murit qelizor të shumicës së dermatofiteve (njolla Shifu dhe modifikimet e saj). Ju gjithashtu mund të përdorni reaksione sulfacioni dhe impregnim të seksioneve histologjike me argjend [Khmelnitsky O.K., 1973; Lewer W. F. dhe Schaumburg-Lewerl., 1983].

Kërpudhat në shtresën korneum të epidermës, edhe kur përdoren njolla të veçanta, zbulohen në sasi të vogla në formën e fijeve dhe sporeve miceliale. Në raste të rralla, kur ka shumë kërpudha në lezione, ato mund të zbulohen në seksione të lyera me hemotoksilin-eozinë, në formën e strukturave delikate bazofile në shtresën e korneumit.

Ndryshimet inflamatore në epidermë mund të ndryshojnë: nga edema e vogël brenda dhe jashtëqelizore e qelizave spinoze deri te spongioza e rëndë. Spongjioza zakonisht zhvillohet me variante dyshidrotike të mykozave të këmbëve dhe duarve; klinikisht, në këto raste vërehen vezikula. Ky reaksion zakonisht shkaktohet nga T. mentagrophytes var. interdigitale. Ndonjëherë në epidermë vërehet hiperkeratozë e theksuar, e cila më së shpeshti vërehet me mykozë të shkaktuar nga T. rubrum.

Ndryshimet histologjike në dermë janë jospecifike dhe korrespondojnë me inflamacion akut, subakut dhe kronik.

Në mykozën e lëkurës së lëmuar të shkaktuar nga T. rubrum, kërpudhat nganjëherë zbulohen në qimet e velusit dhe në gjëndrat e flokëve. Një reaksion inflamator zhvillohet rreth folikulave, të cilat, për shkak të kërpudhave që hyjnë në dermë, mund të bëhen granulomatoze. Pjesa qendrore e infiltratit në këto raste mund t'i nënshtrohet supurimit dhe nekrozës dhe pjesa periferike mund të përbëhet nga limfocitet, histocite, qeliza gjigande epitelioide dhe shumëbërthamore, në brendësi të të cilave ndonjëherë gjenden spore mykotike. Madhësia e sporeve këtu arrin 6 mikronë në diametër, në flokë ato zakonisht nuk kalojnë 2 mikronë.

Në formën infiltrative-supurative të mykozave të kokës dhe në zonën e rritjes së mjekrës dhe mustaqeve, elementët mykotikë gjenden në gjëndrën e flokëve, brenda dhe rreth flokëve. Në flokë ato zbulohen pikërisht mbi zonën ku fillon keratinizimi (afërsisht në nivelin 30 mikron). Në dermë vërehet një reaksion inflamator me intensitet të ndryshëm, më i theksuar me kerion Celsii. Në rast të një reaksioni purulent akut, vërehet një numër i madh i leukociteve neutrofile në infiltrat; elementët fungale në këtë rast mund të zhduken plotësisht. Në rrjedhën kronike të procesit, infiltrati mund të fitojë një karakter granulomatoz dhe në të shfaqen qeliza gjigante me shumë bërthama. Për të konfirmuar diagnozën në mungesë të kërpudhave në infiltrat, mund të përdoren metoda të ngjyrosjes imunofluoreshente. Për këto qëllime përdoret antiserumi i etiketuar me fluoresceinë ndaj T. mentagrophytes, i cili bën të mundur zbulimin e antigjeneve mykotike në flokë dhe në infiltratin perifollikular.

Formimi i një reaksioni të lëkurës infiltrative-supurative gjatë mykozës së kokës (kerion Celsii) dhe zonës së rritjes së mjekrës dhe mustaqeve të shkaktuar nga kërpudhat M. canis, T. tonsurans dhe T. verrucosum është një manifestim i një reaksioni imunologjik. . Kjo dëshmohet nga:

1. Tendenca e lezioneve për t'u zgjidhur në mënyrë spontane.

2. Mungesa e elementeve mykotike me reaksion inflamator shume te theksuar nga ana e lekures gjate mykozes te shkaktuar nga T. verrucosum (faviforme) dhe T. tonsurans.

3. Një reagim pozitiv i vazhdueshëm në përgjigje të administrimit intradermal të trikofitinës në format infiltrative-supurative të mykozës të shkaktuara nga trikofitina zoofile (për shembull, T. tonsurans), dhe një reagim negativ në mykozat sipërfaqësore të shkaktuara nga i njëjti T. tonsurans.

Me favus, një numër i madh i fijeve të miceliumit dhe sporeve të vetme të kërpudhave gjenden në shtresën korneum të epidermës. Skutula përfaqësohet nga eksudat, qeliza parakeratotike të epidermës, qeliza të infiltratit inflamator, si dhe fije miceliale dhe spore mykotike, të cilat ndodhen kryesisht në zonën periferike të skutulës. Në fazën aktive të sëmundjes, vërehet një infiltrat i theksuar inflamator që përmban qeliza gjigante dhe plazmatike me shumë bërthama në dermë rreth folikulave degjenerative të flokëve. Në lezionet e vjetra, flokët dhe gjëndrat dhjamore mungojnë dhe ka shenja të fibrozës.

Histologjia e mykozave të lëkurës dhe mukozave të shkaktuara nga kërpudhat e ngjashme me majanë

Me kandidiazë të lëkurës dhe mukozave, kërpudhat e gjinisë Candida gjenden në shtresën korneum të epidermës ose në shtresat sipërfaqësore të epitelit të mukozës. Elementet mykotike zakonisht janë të pakët në numër dhe njollosen mirë nga reaksioni PAS ose ngjyrosja me Gram; paraqiten në formën e fijeve të miceli me degëzim septate, me diametër 2-4 μm, ose spore vezake, me diametër 3-5 μm. Zbulimi i formës miceliale të kërpudhave ka rëndësi diagnostike.

Në ekzaminimin histologjik të kandidiazës kronike granulomatoze të lëkurës dhe mukozave, elementët e kërpudhave gjenden gjithashtu kryesisht në shtresën korneum të epidermës ose në pjesët më të sipërme të epitelit të mukozës, por ndonjëherë në shtresën spinosum, brenda. flokët dhe në dermë. Vihen re gjithashtu hiperkeratoza dhe papillomatoza e rëndë; ne dermis ka nje infiltrate te trashe inflamatore qe perbehet nga qeliza limfoide, neutrofile, qeliza plazmatike dhe qeliza gjigande me shume berthame. Infiltrati mund të përhapet në indin yndyror nënlëkuror.

Me pityriasis versicolor, në shtresën korneum të epidermës gjenden një numër i madh elementesh mykotike në formën e strukturave delikate bazofile, të cilat duken qartë edhe gjatë ngjyrosjes së preparateve me hemotoksilin-eozinë. Kërpudhat përfaqësohen si nga filamente ashtu edhe nga spore.

Në formën folikulare të pityriasis versicolor, ka një grumbullim të masave me brirë dhe qelizave infiltrate inflamatore në vrimat e zgjeruara të folikulave të flokëve. Gjithashtu vërehet një infiltrat inflamator rreth folikulave. Me reaksionin PAS, spore kërpudhore sferike ose ovale, me diametër 2-4 μm, gjenden brenda grykës së folikulave të qimeve dhe ndonjëherë në infiltratin perifolikular. Miceliumi nuk zbulohet kurrë.

Pigmentimi i dëmtuar i lëkurës në pacientët me pityriasis versicolor shkaktohet nga aftësia e kërpudhave Pityrosporum për të prodhuar një substancë që pengon procesin e formimit të pigmentit në epidermë. Ekzaminimi mikroskopik elektronik i biopsive të lëkurës nga zonat e hipopigmentuara tregoi se në melanocite formohen melanosome shumë të vogla, të cilat nuk janë në gjendje të depërtojnë në keratinocitet. Në zonat e hiperpigmentuara të lëkurës, përkundrazi, melanosomet janë të mëdha dhe përmbajnë sasi të mëdha melanine.

Sipas statistikave, rreth 20% e popullsisë së vendit tonë vuajnë nga mykoza në një shkallë ose në një tjetër. Por jo të gjithë i drejtohen ndihmës profesionale. Një nga arsyet është se njerëzit thjesht nuk i dinë të gjitha simptomat dhe manifestimet e kësaj sëmundjeje.

Simptomat e mykozës

Para së gjithash, vlen të përmendet se kjo nuk është një sëmundje specifike, por një grup infeksionesh të ndryshme kërpudhore të lëkurës dhe shtojcave të saj. Prandaj, simptomat mund të jenë mjaft të ndryshme, por më të zakonshmet janë këto:

• Shfaqja e njollave të krisura në lëkurë. Më shpesh ato shfaqen midis gishtërinjve, në lëkurën e këmbëve. Ata shpesh shkaktojnë kruajtje, acarim dhe ndjesi të tjera të pakëndshme.
• Ndryshime në ngjyrën dhe strukturën e thonjve. Ato bëhen të verdha, të brishta, shkërmoqen dhe shkërmoqen, sipërfaqja e tyre mund të jetë me gunga dhe e pabarabartë.
• Çarje në lëkurë. Shpesh, me infeksione mykotike të lëkurës së këmbëve, ajo bëhet e ashpër dhe fillon të plasaritet rëndë.
• Erë e pakëndshme. Shumë pacientë ankohen për një erë të pakëndshme nga lëkura e prekur, veçanërisht me mykozën e këmbëve.

Nëse shfaqen shenja të tilla, është e nevojshme të vizitoni një dermatolog sa më shpejt të jetë e mundur dhe të bëni një diagnozë të plotë për të përcaktuar se çfarë lloj mykoze ka prekur lëkurën.

Metodat për diagnostikimin e mykozave

Kur pacientët i drejtohen dermatologut me shenja karakteristike të lezioneve mykotike të lëkurës, më së shpeshti mjafton një ekzaminim parësor i jashtëm që mjeku të bëjë një diagnozë. Pyetja e vetme është se çfarë lloj mykoze ka prekur lëkurën.

Ky informacion është i nevojshëm për të përcaktuar strategjinë e mëtejshme të trajtimit. Metodat e mëposhtme mund të përdoren për të diagnostikuar mykozën:

• Ekzaminimi i llambës së drurit. Një spektër i veçantë i dritës ultravjollcë ju lejon të përcaktoni praninë e infeksioneve kërpudhore. Kjo metodë është shumë e thjeshtë dhe e arritshme, me ndihmën e saj jo vetëm që mund të bëni një diagnozë, por edhe të monitoroni ecurinë e trajtimit. Por nuk na lejon të përcaktojmë llojin e mykozës.
• Mikroskopi. Një nga metodat më të thjeshta dhe më të zakonshme për diagnostikimin e mykozës është ekzaminimi i gërvishtjeve të indeve të prekura nga kërpudhat nën një mikroskop. Për ta bërë këtë, vendoset në një rrëshqitje xhami. Ekzistojnë dy lloje të ekzaminimit me gërvishtje: përdorimi i agjentëve ngjyrues dhe përdorimi i agjentëve ndriçues.
• Kultura bakteriologjike. Një nga metodat më të sakta diagnostikuese është inokulimi i rezervuarit me lëndë ushqyese. Bazuar në pamjen dhe karakteristikat e kolonive të rritura të kërpudhave, mjeku mund të përcaktojë llojin e patogjenit. Disavantazhi i kësaj metode është kohëzgjatja; rritja e një kolonie mund të zgjasë 2-3 javë. Për më tepër, është e mundur të merren rezultate vetëm në gjysmën e rasteve.
• Diagnostifikimi PCR. Kjo është një nga metodat diagnostikuese më të sakta dhe moderne, por përcaktimi i llojit të mykozës mund të kërkojë disa teste, gjë që kërkon kosto të caktuara.

Vlen të përmendet se diagnostikimi i mykozës është i nevojshëm për të përcaktuar metodën më efektive të trajtimit të kësaj sëmundjeje. Dhe nëse nuk është e mundur të vizitoni menjëherë një specialist, mund të përdorni shërbimin e ofruar nga klinika jonë dhe

Takimi i parë

Në takim, mikologu kryen një ekzaminim dhe gjithashtu përshkruan një ekzaminim gjithëpërfshirës.

Diagnostifikimi laboratorik

Metodat më efektive për diagnostikimin e mykozave të lëkurës janë teste të ndryshme laboratorike që mund të identifikojnë patogjenin dhe të ndihmojnë në zgjedhjen e një regjimi trajtimi. Për të identifikuar agjentin shkaktar të mykozës, përshkruhen testet e mëposhtme laboratorike:

• analiza histologjike;
• kultura bakteriologjike;
• hulumtim imunologjik;
• Diagnostifikimi PCR;
• ekzaminim kulturor;
• hulumtim mikrobiologjik.

Diagnostifikimi mikrobiologjik ndihmon në zbulimin e kërpudhave dhe përcaktimin e gjinisë dhe specieve të saj.

Diagnoza mikrobiologjike është metoda më e zakonshme dhe më e thjeshtë për zbulimin e mykozës në gjak dhe lëkurë. Për të identifikuar një diagnozë të saktë, duhet të dini se si të mblidhni saktë materialin që është i nevojshëm për studimin. Flokët e prekur duhet të mblidhen me piskatore. Nëse lëkura është e infektuar, lëkura nga zona e dëmtuar duhet të kruahet për mikroskopi. I gjithë materiali i mbledhur vendoset në një tretësirë ​​30% hidroksid kaliumi dhe më pas në një rrëshqitje xhami. Diagnostifikimi mikrobiologjik mund të zbulojë saktësisht se ku ndodhet kërpudhat (brenda ose jashtë flokëve, lëkurës) dhe madhësinë e saj.

Për të parandaluar një diagnozë të gabuar të mykozës, materiali duhet të mblidhet saktë dhe me kompetencë për ekzaminim mikrobiologjik.

Në mjekësi, ekzistojnë metodat e mëposhtme të diagnostikimit mikrobiologjik:

• Mikroskopi duke përdorur preparate vendase ose të panjollosura. Për ta bërë këtë, materiali pastrohet duke përdorur zgjidhje 10-30% të hidroksidit të kaliumit ose natriumit. Më pas materiali i përpunuar vendoset në një gotë laboratori, në të cilën më parë është hedhur pak glicerinë. Pjesa e sipërme është e mbuluar me një pllakë xhami dhe bëhet analiza.
• Mikroskopi i preparateve të ngjyrosura kryhet në disa mënyra që identifikojnë bakteret, diferencojnë bakteret e ndryshme dhe identifikojnë kërpudhat e ndryshme.

Kultura bakteriologjike

Kultura bakteriologjike është një nga metodat më efektive për diagnostikimin.

Mbledhja e një kulture bakteriologjike në një mjedis ushqyes është një mënyrë e saktë për të diagnostikuar mykozën. Duke marrë parasysh pamjen dhe karakteristikat e kolonisë së rritur të kërpudhave, dermatologu përcakton llojin e patogjenit që shkaktoi mykozën. E vetmja pengesë e sondazhit është se kërkon shumë kohë për të rritur një koloni. Mesatarisht, duhen rreth 3 javë për të zbuluar llojin patogjen. Në disa raste, metoda nuk sjell rezultatet e pritura.

Diagnostifikimi PCR

Metoda e diagnostikimit PCR përfshin identifikimin e agjentit shkaktar të mykozës duke përdorur një reaksion zinxhir polimerazë. Gjatë ekzaminimit, ndjeshmëria e hibridizimit rritet, gjë që rrit përmbajtjen e ADN-së virale në materialin e testimit. Kjo metodë e ekzaminimit është e re dhe kërkon disa analiza nga pacienti. Besohet se ky lloj diagnoze është mjaft i shtrenjtë, por jep rezultate të sakta.

Ekzaminimi i kulturës

Masat diagnostikuese kulturore rekomandohen në fazën përfundimtare të diagnozës. Metoda konsiston në marrjen e një kulture të kërpudhave, e cila më pas dërgohet për ekzaminim duke përdorur një mikroskop. Materiali që rezulton vendoset në një lëndë ushqyese të krijuar artificialisht dhe identifikohet lloji i patogjenit, pamja dhe madhësia. Pas së cilës tregohet trajtim i veçantë, i cili ka për qëllim luftimin e një lloji specifik të patogjenit të mykozës.

Për të diagnostikuar mykozat mund të përdoren metoda kërkimore mikroskopike, mikologjike (kulturore), alergjike, serologjike, biologjike dhe histologjike. Në varësi të patogjenezës, materiali për hulumtim mund të jetë qelbi, pështyma, flokët e prekur, thonjtë, thekonet e lëkurës, shpimet e palcës së eshtrave, nyjat limfatike, organet e brendshme, gjaku, bilia, feçet, biopsitë e indeve etj.

Ekzaminimi mikroskopik përfshin mikroskopinë e njollave amtare (të panjollosura) dhe të njollosura. Për përgatitjen e preparateve vendase, gërvishtjet e flokëve, lëkurës dhe thonjve pastrohen në tretësirë ​​10.30% të KOH ose NaOH. Materiali i trajtuar me alkali vendoset në një rrëshqitje qelqi në një pikë glicerinë, i mbuluar me një mbulesë dhe i mikroskopuar (mund të përdoret mikroskopi me kontrast fazor), i cili bën të mundur studimin e strukturës së kërpudhave dhe vendndodhjes së sporeve. , por një përfundim përfundimtar për llojin e kërpudhave mund të bëhet vetëm pas studimeve kulturore.

Për ngjyrosjen e njollave, më shpesh përdoren metodat Gram, Ziehl, Nielsen dhe Romanovsky-Giemsa. Metodat e Sabouraud, Adamson dhe të tjerë përdoren gjithashtu për ngjyrosjen e dermatofiteve.

Hulumtimi kulturor (mikologjik) kryhet për të izoluar një kulturë të pastër të kërpudhave dhe për ta identifikuar atë. Përdorni lëndë ushqyese të ngurta dhe të lëngshme (Sabouraud, wort agar, Chapek, etj.). Inkubimi në një termostat (22.28ºС) është i gjatë (3.4 javë). Një kulturë e pastër e kërpudhave identifikohet nga një grup karakteristikash: forma e kolonive, ngjyra e tyre, konsistenca, fotografia mikroskopike (natyra e miceli, vendndodhja e sporeve, konidioforet) dhe karakteristika të tjera.Reaksionet serologjike për diagnozën e sëmundjeve mykotike kryhen me antigjene mykotike sipas metodave të pranuara përgjithësisht, si dhe për diagnostikimin e sëmundjeve të tjera infektive (RA, RP, RSK, RNGA, RIF, etj.).

Testet e alergjisë mund të kryhen sipas metodave të pranuara përgjithësisht me injeksion intradermal të alergjenëve të duhur (fraksionet e polisaharideve dhe proteinave nga qelizat ose membranat qelizore, një pezullim i qelizave të kërpudhave të vrarë, filtrate të kulturës). Për të identifikuar GNT, mund të përdorni testin e degranulimit të bazofileve të indeve dhe serumit, dhe për të zbuluar GNT, mund të përdorni reaksionin e frenimit të migrimit të fagociteve dhe transformimit blastik të limfociteve.

Hulumtimi biologjik kryhet në modele laboratorike (minj, minj, derra gini, lepuj, qen, mace). Modeli biologjik i mykozës përdoret për të identifikuar patogjenitetin e patogjenit, për të izoluar një kulturë të pastër dhe për të studiuar antimikotikët e rinj. Ekzaminimi histologjik bën të mundur zbulimin e kërpudhave në inde, studimin e morfologjisë së tij dhe karakteristikat e procesit patologjik të shkaktuar prej tij në trup.