Pôvodca syfilisu. Taxonómia

č. 23 Pôvodca syfilisu. Taxonómia. Charakteristický. Mikrobiologická diagnostika. Liečba.
treponema palladium; T. entericum
Morfológia: typické treponémy s 8-12 praslenmi, motorický aparát - 3 periplazmatické bičíky na každom póle bunky. Gramova škvrna nie je vnímaná, škvrna Romanovsky-Giemsa je slabo ružová, odhalená impregnáciou striebrom.
Kultúrne vlastnosti: virulentný kmeň na jamke. nerastie v prostredí, akumulácia kultúry nastáva infekciou králika v semenníku. Virulentné kmene sa kultivujú na médiách obsahujúcich mozgové a obličkové tkanivo.
Biochemické vlastnosti: mikroaerofilné
Antigénna štruktúra: komplex, má špecifické proteínové a lipoidné antigény, ktoré sú svojím zložením identické s kardiolipínom extrahovaným z hovädzieho srdca (difosfadylglycerol)
Faktory patogenity: adhezíny sa podieľajú na procese prichytenia, lipoproteíny sa podieľajú na vývoji imunopatologických procesov.
Odolnosť: citlivý na sušenie, slnečné žiarenie, zostáva na predmetoch až do zaschnutia. Za nepriaznivých podmienok sa premieňa na L-formy a tvorí cysty.
Patogenéza: Spôsobuje syfilis. Od vstupnej brány sa treponémy dostávajú do regionálnych lymfatických uzlín, kde sa množia. Ďalej T. preniká do krvného obehu, kde sa pripája k endotelovým bunkám, čo spôsobuje endarteritídu, čo vedie k vaskulitíde a nekróze tkaniva. Krvou sa T. šíri po celom tele, zasieva orgány: pečeň, obličky, kosti, kardiovaskulárny a nervový systém.
Imunita: ochranná imunita nie je vyvinutá. V reakcii na antigény patogénov sa vyvíja HRT a autoimunitné procesy. Humorálna imunita je vyvinutá ako odpoveď na T. lipoidný antigén a je titrom IgA a IgM.
Mikroskopické vyšetrenie. Vykonajte pre primárny syfilis počas objavenia sa chancre. Materiál pre výskum: chancre výtok, obsah regionálnych lymfatických uzlín, z ktorých sa pripravuje „rozdrvená“ kvapka a skúma sa v tmavom poli. Ak je výsledok pozitívny, sú viditeľné tenké zvlnené nite dlhé 6-14 mikrónov, ktoré majú 10-12 rovnomerných malých kučier pravidelného tvaru. Treponema pallidum je charakterizovaná kyvadlovými a translačno-flexnými pohybmi. S rozvojom lézií na sliznici úst počas sekundárneho syfilisu, ako aj s lokalizáciou chancroidu v ústnej dutine je potrebné odlíšiť Treponema pallidum od saprofytického Treponema, ktoré sú predstaviteľmi normálnej mikroflóry. V tomto prípade má rozhodujúci diagnostický význam detekcia typických treponémov v bodkovaní regionálnych lymfatických uzlín.
Sérodiagnostika. Wassermanova reakcia sa uskutočňuje súčasne s 2 antigénmi: 1) špecifický, obsahujúci antigén patogénu - treponémy zničené ultrazvukom; 2) nešpecifické - kardiolipín. Testovacie sérum sa zriedi v pomere 1:5 a RSC sa umiestni podľa všeobecne uznávanej metódy. Pri pozitívnej reakcii sa pozoruje oneskorenie hemolýzy, pri negatívnej reakcii dochádza k hemolýze červených krviniek; intenzita reakcie sa hodnotí podľa toho od (+ + + +) po (-). Prvé obdobie syfilisu je séronegatívne a je charakterizované negatívnou Wassermanovou reakciou. U 50% pacientov sa reakcia stáva pozitívnou najskôr 2-3 týždne po objavení sa chancre. V druhom a treťom období syfilisu dosahuje frekvencia pozitívnych reakcií 75-90%. Po ukončení liečby sa Wassermanova reakcia stáva negatívnou. Paralelne s Wassermanovou reakciou sa uskutočňuje mikroprecipitačná reakcia s nešpecifickým kardiolipínovým antigénom a testovaným inaktivovaným krvným sérom alebo plazmou. 3 kvapky séra sa aplikujú do jamky na doštičke z plexiskla (alebo obyčajného skla) a pridá sa 1 kvapka kardiolipínového antigénu. Zmes sa dôkladne premieša a zohľadnia sa výsledky. Pozitívna reakcia s krvným sérom pacienta so syfilisom je charakterizovaná tvorbou a stratou vločiek rôznych veľkostí; s negatívnym výsledkom sa pozoruje rovnomerná svetelná opalescencia.
RIF – nepriama imunofluorescenčná reakcia – je špecifická pre diagnostiku syfilisu. Ako antigén sa používa suspenzia tkanivových treponémov. Použije sa reakcia RIF_200. Sérum pacienta sa inaktivuje rovnakým spôsobom ako pri Wassermannovej reakcii a zriedi sa v pomere 1:200. Kvapky antigénu sa aplikujú na sklíčka, vysušia sa a fixujú sa v acetóne počas 5 minút. Potom sa na prípravok aplikuje sérum pacienta, po 30 minútach sa umyje a vysuší. Ďalším krokom je ošetrenie lieku fluorescenčným sérom proti ľudským globulínom. Prípravok sa študuje pomocou fluorescenčného mikroskopu, pričom sa zaznamenáva stupeň luminiscencie treponémov.
Špecifická je aj RIT reakcia imobilizácie treponémov. Živá kultúra Treponema sa získava kultiváciou v králičom semenníku. Semenník je rozdrvený v špeciálnom médiu, v ktorom zostávajú treponémy pohyblivé. Reakcia sa nastaví nasledovne: suspenzia tkanivových (pohyblivých) treponémov sa zmieša v skúmavke s testovaným sérom a pridá sa čerstvý komplement. V jednej kontrolnej skúmavke sa namiesto testovacieho séra pridáva sérum zdravého človeka, v druhej namiesto čerstvého komplementu inaktivovaný - neaktívny. Po udržiavaní pri 35 °C v anaeróbnych podmienkach (anaerostat) sa zo všetkých skúmaviek pripraví „rozdrvená“ kvapka a v tmavom poli sa stanoví počet mobilných a nepohyblivých treponém.
Liečba: Penicilíny, tetracyklíny, lieky s obsahom bizmutu.

Syfilis je cyklické ľudské pohlavné ochorenie spôsobené pallidovou spirochétou; Štádium I sa prejavuje chancroidom (fr. chancre– vred), štádium II – poškodenie stien ciev a rôzne vyrážky, štádium III – ďasná v rôznych orgánoch s poškodením nervového systému. Gumma (lat. . gummi- guma) je chronický infiltrát vo forme uzla, náchylný na rozpad a ulceráciu. Syfilitická guma ( syn.: syfilitický granulóm, syfilid ďasien, terciárny syfilóm) je nebolestivá pologuľovitá guma, ktorá je prejavom terciárneho aktívneho syfilisu. patogén – Treponema pallidum- objavili v roku 1905 F. Schaudin a E. Hoffmann.

T. pallidum– špirálovitý mikroorganizmus, rozmery 0,09 – 0,18 x 6 – 20 mikrónov. Počet závitov špirály je od 8 do 12, závity sú rovnomerné, nachádzajú sa v rovnakej vzdialenosti od seba, asi 1 mikrón, výška sa smerom ku koncom znižuje. V elektrónovom mikroskope vyzerá ako had alebo dážďovka. Na oboch koncoch treponému sú blefaroplasty s bičíkmi, ktorých počet sa pohybuje od dvoch do niekoľkých, tvoria axiálny závit skrútený okolo protoplazmatického valca spirochéty. Za nepriaznivých podmienok môže vytvárať cysty. V tele zvierat sa môže objaviť puzdro podobné kapsule mukopolysacharidovej povahy.

Treponém sa anilínovými farbivami nefarbí dobre, a preto sa pôvodca syfilisu nazýva bledá spirochéta. Redukuje dusičnan strieborný na kovové striebro, ktoré sa ukladá na povrchu mikróba a zviditeľňuje ho v tkanivách: pri farbení podľa Morozova sa treponémy javia ako hnedé alebo takmer čierne. Pri farbení podľa Romanovského-Giemsa získajú svetloružovú farbu.

Treponémy sa zvyčajne rozmnožujú priečnym delením a rozdelené bunky môžu k sebe nejaký čas priľnúť. Čas delenia je cca 30 hodín.

Živé treponémy sú veľmi pohyblivé a vykonávajú pohyby okolo svojej pozdĺžnej osi, ako aj ohybové, vlnové a translačné pohyby.

Dodnes neexistuje metóda, ktorou by bolo možné stabilne získavať treponémové kultúry. Treponema pallidum, patogénna pre ľudí, nebola nikdy kultivovaná v umelých živných médiách, v kuracích embryách alebo bunkových kultúrach. Tie odrody ich kmeňov, ktoré rastú v anaeróbnych podmienkach, sú pravdepodobne saprofytické spirochéty, blízke pôvodcovi syfilisu. Ich fyziológia zostáva málo študovaná. Treponémy sú chemoorganotrofy, neobsahujú katalázu a oxidázu a môžu fermentovať sacharidy. Rastú na veľmi bohatom médiu obsahujúcom až 11 aminokyselín, vitamínov, solí a sérového albumínu. Najlepší spôsob, ako pestovať patogénne spirochéty, je infikovať králika v semenníku (experimentálna orchitída). Bolo navrhnuté, že existuje T. pallidumživotný cyklus, zahŕňajúci okrem špirálovitého tvaru aj granulárne štádium a štádium guľovitých teliesok podobných cystám. Práve granulované formy týchto mikroorganizmov sú schopné prechádzať cez bakteriálne filtre.

Treponémové antigény sú nedostatočne študované. Zistilo sa, že treponémy obsahujú proteínové, polysacharidové a lipidové komplexy. Antigénne zloženie kultúrnych a tkanivových treponémov je také blízke, že antigény pripravené z kultúrnych treponémov možno použiť na RSC v diagnostike syfilisu. V ľudskom tele treponémy stimulujú tvorbu protilátok, ktoré spôsobujú imobilizáciu a smrť živých pohyblivých treponém, fixujú komplement v prítomnosti suspenzie T. pallidum alebo príbuzné spirochéty a sú tiež detegované v nepriamom RIF.

Pôvodca syfilisu neprodukuje exotoxíny. Treponema pallidum je pomerne málo odolná voči vonkajším vplyvom. Pri sušení a pri zvýšených teplotách (pri 55 °C 15 minút) rýchlo odumierajú. V 0,3 – 0,5 % roztoku HCl okamžite strácajú svoju pohyblivosť; Tiež ho rýchlo strácajú a zomierajú v prítomnosti arzénu, bizmutu a ortuti. V plnej krvi alebo sére pri 4 °C zostávajú životaschopné 24 hodín, čo treba vziať do úvahy pri transfúzii krvi.

Epidemiológia. Syfilis je typické pohlavné ochorenie. Zdrojom nákazy je chorý človek, zvyčajne nákazlivý 3 až 5 rokov; pacienti s neskorými formami syfilisu nie sú nákazliví. Infekcia sa v prevažnej väčšine prípadov vyskytuje rôznymi typmi sexuálnych a domácich kontaktov, zriedkavo transplacentárnou cestou od chorej matky k dieťaťu (vrodený syfilis) alebo ako profesionálna infekcia kontaktom medzi zdravotníckym personálom. Syfilisom v prirodzených podmienkach trpia len ľudia, pri pokusoch sa môžu nakaziť opice, škrečky a králiky. U opíc vzniká chancre v mieste vpichu treponému, u králikov a škrečkov je infekcia asymptomatická.

Patogenéza a klinika. Inkubačná doba získaného syfilisu sa pohybuje od 2 do 10 týždňov, zvyčajne 20 – 28 dní. Vstupnou bránou infekcie sú najčastejšie sliznice pohlavných orgánov, menej často ústna dutina, ako aj poškodená koža. V mieste penetrácie sa patogén množí, vzniká primárny syfilóm (tvrdý chancre) - erózia alebo vred so zhutnenou základňou. Ďalej patogén vstupuje do lymfatického systému a vzniká lymfangitída a regionálna lymfadenitída. Ide o typický klinický obraz primárneho syfilisu, ktorý trvá 1,5 – 2 mesiace. Potom tieto znaky zmiznú. Sekundárne obdobie syfilisu je spojené so zovšeobecnením procesu, keď sa mnohé lymfatické uzliny zväčšujú a na koži a slizniciach sa objavujú vyrážky; Môže dôjsť k poškodeniu vnútorných orgánov a nervového systému. Existuje sekundárny čerstvý a sekundárny recidivujúci syfilis. Pri každom ďalšom relapse sa intenzita vyrážky stáva menej výraznou a intervaly medzi relapsmi sa zvyšujú. Prvky vyrážky obsahujú veľké množstvo živých treponém, počas tohto obdobia je pacient najviac nákazlivý. Trvanie sekundárneho syfilisu je až 4 roky alebo viac. Ochorenie potom prejde do dlhého asymptomatického obdobia, po ktorom sa po niekoľkých rokoch rozvinie terciárny syfilis. V tomto prípade sa pozoruje hrubé organické poškodenie vnútorných orgánov, kardiovaskulárneho systému, centrálneho nervového systému, kostí, tvoria sa ďasná, sprevádzané rozpadom tkaniva a degeneratívnymi zmenami. Charakteristickým klinickým znakom syfilisu je absencia akýchkoľvek subjektívnych sťažností pacienta (bolesť, svrbenie, pálenie atď.).

Imunita. Neexistuje žiadna prirodzená alebo umelá imunita proti syfilisu; Existuje len infekčná imunita a pokiaľ existuje, človek prakticky nie je náchylný na novú infekciu. Infekčná imunita sa vyvinie 10–11 dní po objavení sa tvrdej škáry (imunita chancroidov); počas tohto obdobia buď nie je pozorovaná opätovná infekcia, alebo novovzniknutý škrečok je abortívny (superinfekcia). Následne pri superinfekcii charakter výsledných lézií zodpovedá štádiu ochorenia v čase opätovnej infekcie. Superinfekcia sa vysvetľuje dočasným oslabením alebo „zlomením“ infekčnej imunity. Je potrebné odlíšiť reinfekciu od superinfekcie, teda novej, opakovanej infekcie človeka, ktorý predtým mal syfilis (vyliečený), a teda stratil infekčnú imunitu. Boli popísané prípady dokonca troch prípadov syfilisu. Inkubačná doba u takýchto pacientov je kratšia, častejšie vzniká mnohopočetný ulcerózny chancre s lymfadenitídou a sérologické reakcie sú skôr pozitívne. V sekundárnom období papuly na koži často erodujú. Vysvetľuje to skutočnosť, že so syfilisom sa vyvíja hypersenzitívna reakcia oneskoreného typu, po liečbe zostávajú senzibilizované lymfocyty v tele dlhú dobu. Infekčná imunita je nesterilnej povahy a je spôsobená humorálnymi faktormi: v sére pacienta sa nachádzajú imunoglobulíny tried G, A a M.

Laboratórna diagnostika. Na diagnostiku syfilisu je optimálny integrovaný prístup, ktorý zahŕňa súčasné použitie niekoľkých metód. Tradične sa delia na priame, ktoré umožňujú dokázať prítomnosť patogénu v skúmanom materiáli (infekcia zvierat, rôzne druhy mikroskopie a molekulárne genetické metódy detekcie DNA T. pallidum– PCR a DNA sondovanie) a nepriame – sérologické testy na detekciu protilátok. Sérologické testy sú zas reprezentované netreponemálnymi a treponemálnymi testami.

Materiál, ktorý sa má testovať na detekciu treponémov priamymi metódami, je výtok chancre alebo jeho bodkovaný, bodkovaný lymfatický uzlový bod, škrabanie z roseoly a cerebrospinálny mok. Patogén sa najlepšie deteguje v natívnom materiáli pomocou tmavého poľa (pozri obr. 111.4) alebo mikroskopie s fázovým kontrastom, ktorá umožňuje pozorovať rôzne typy pohybu živého patogénu. Ak už liečba antibiotikami začala, patogén sa v patologickom materiáli nedá zistiť. V prípade potreby sa vykoná priamy (alebo nepriamy) RIF alebo sa prípravok zafarbí podľa Romanovského-Giemsa. Tieto metódy sa používajú iba na včasnú diagnostiku syfilisu.

Sérologické testy možno použiť v rôznych štádiách ochorenia, okrem séronegatívneho primárneho syfilisu. Zvyčajne sa používa komplex sérologických reakcií. TO netreponém testy s vizuálnym stanovením výsledkov zahŕňajú: reakciu fixácie komplementu (Wassermannova reakcia = RSKk = RW) s kardiolipínovým antigénom srdcového svalu hovädzieho dobytka (cross-reacting antigén), mikroprecipitačná reakcia (MR, alebo RMP) - mikroreakcia s plazmou a inaktivovaným sérom; RPR - rýchly plazmatický reagin test a ďalšie reakcie. Odborníci sa domnievajú, že na hromadné vyšetrenie je najlepšie použiť dva testy: RPR a RPGA alebo ELISA, pretože RPR je citlivejšia pri primárnom syfilise, RPGA - v neskorších štádiách ochorenia a ELISA - vo všetkých štádiách. Netreponemálne testy s mikroskopickým odčítaním výsledkov zahŕňajú test VDRL a test USR. Netreponemálne testy sa používajú ako skríningové testy, pretože môžu poskytnúť falošne pozitívne výsledky. IN treponém testy používajú antigény treponémového pôvodu. Používajú sa na potvrdenie výsledkov netreponemových testov (falošne pozitívne?) pre klinické, epidemiologické a anamnestické podozrenie na syfilis, na diagnostiku latentných a neskorých foriem, na retrospektívnu diagnostiku. Treponemálne testy zahŕňajú: RSKt (RSK s treponemálnym antigénom), RIBT (alebo RIT) - imobilizačná reakcia Treponema pallidum, RIF (jedna z najlepších reakcií), RPHA, ELISA, imunoblotting.

Mikrobiologická diagnostika syfilisu

Praktická práca

Medicína a veterinárna medicína

Názov „bledý“ treponém dostal kvôli nízkej farbiacej schopnosti. Existujú ďalšie patogénne treponémy: T. pertenue - pôvodca yaws, T. carateum - pôvodca pinty, T. bejel - pôvodca chronickej generalizovanej spirochetózy (bejel). Špecifikované patogény a tie, ktoré spôsobili...

Pokyny pre žiakov na praktickú hodinu č.36.

Téma lekcie:

Cieľ: Štúdium metód mikrobiologickej diagnostiky, terapie a prevencie syfilisu.

Modul 2 . Špeciálna, klinická a environmentálna mikrobiológia.

Téma 36: Mikrobiologická diagnostika syfilisu.

Relevantnosť témy:

Pôvodca syfilisu

Syfilis je infekčné pohlavné ochorenie spôsobené Treponema pallidum, charakterizované poškodením kože, vnútorných orgánov, kostí a nervového systému. Existuje získaný a vrodený syfilis.

Taxonómia. Pôvodcu syfilisu - treponema pallidum (Treponema pallidum) - objavili v roku 1905 F. Schaudinn a E. Hoffman; patrí do čeľade Spirochaetaceae, divízia Gracilicutes.

Morfológia a farbiace vlastnosti.Názov „bledý“ treponém dostal kvôli nízkej farbiacej schopnosti. Existujú ďalšie patogénne treponémy: T. pertenue - pôvodca yaws, T. carateum - pôvodca pinty, T. bejel - pôvodca chronickej generalizovanej spirochetózy (bejel). Tieto patogény a choroby, ktoré spôsobujú, sú bežnejšie v regiónoch s horúcim a vlhkým podnebím. Treponema pallidum je tenká baktéria v tvare špirály, dlhá 4 až 14 mikrónov, s rovnomernými malými kučeravkami (8-14 kučier); spolu so špirálovitým tvarom môže mať aj iné formy - vo forme cýst, granúl, L-foriem; morené podľa Romanovského-Giemsa v charakteristickej slabo ružovej farbe. Pohyby sa pohybujú od skrutkovice po ohyb.

Kultivácia.Treponema pallidum je obligátny anaerób, mimoriadne náročný na živné pôdy. Treponema kultivovaná na živných médiách – kultúrna spirochéta – sa od patogénnej líši tým, že je menej virulentná, ale ich antigény sú podobné, čo sa využíva pri sérodiagnostike syfilisu.

Antigénna štruktúra.Treponema pallidum je charakterizovaná antigénnymi spojeniami s inými treponémami, ako aj s lipoidmi zvieracích a ľudských tkanív. V patogéne bolo identifikovaných niekoľko antigénov, z ktorých jeden, lipoidný antigén, je identický s lipoidným extraktom z hovädzieho srdca.

Odpor. Treponema pallidum je v prostredí slabo odolná; v 55 0 C odumiera do 15 minút, je citlivý na sušenie, svetlo, ortuťové soli, bizmut, arzén, penicilín. Na domácich predmetoch zostáva infekčný, kým nezaschne; dobre zachované v kadaveróznom tkanive.

Vnímavosť zvierat.Experimentálne možno patologický proces vyvolať v semenníkoch a koži králikov a v koži ľudoopov.

Epidemiológia. Zdrojom nákazy je chorý človek. Infekcia sa vyskytuje najmä sexuálnym kontaktom, zriedkavo prostredníctvom predmetov pre domácnosť (okuliare, zubné kefky, cigarety atď.) kontaminovaných výtokom od pacienta; Je možná infekcia bozkami, mliekom od dojčiacej matky (domáci syfilis), nemožno vylúčiť ani prípady infekcie krvnou transfúziou od darcov so syfilisom.

Patogenéza a klinický obraz.Pôvodca syfilisu vstupuje do tela cez kožu alebo sliznicu, šíri sa cez orgány a tkanivá a spôsobuje ich poškodenie. Inkubačná doba trvá v priemere 3-4 týždne. Po inkubačnej dobe sa syfilis vyskytuje cyklicky vo forme primárnych, sekundárnych a terciárnych období. V mieste zavlečenia patogénu (na genitáliách, v dutine ústnej a pod.) sa objaví primárna lézia - chancre - ostro ohraničené zhutnenie s vredom na povrchu. Sekundárne obdobie syfilisu trvá 3-4 roky, charakterizované vyrážkou a porušením celkového stavu tela. Terciárne obdobie je charakterizované poškodením kože, slizníc, vnútorných orgánov, kostí a nervového systému: objavujú sa útvary, ktoré sú náchylné na rozpad a ulceráciu.

Imunita. Vrodená imunita proti syfilisu neexistuje. So syfilisom sa vyvinie nesterilná imunita; Po zotavení sa imunita nezachová, takže sú možné opakované ochorenia.

Mikroskopia v tmavom poli sa používa na detekciu Treponema pallidum v chancroidnom výboji. Na konci primárneho a v sekundárnom období sú Wassermanove sergologické reakcie, Kahnove sedimentové reakcie, cytocholické a iné testy, ktoré zisťujú protilátky proti treponema pallidum, pozitívne. Pri hromadných vyšetreniach sa využíva selekčná reakcia, čiže mikroreakcia na skle s kvapkou krvi alebo séra a špeciálnym antigénom. Výskumné laboratóriá využívajú aj treponémovú imobilizačnú reakciu a ďalšie moderné metódy.

Schéma mikrobiologického výskumu syfilisu

Mikroskopické vyšetrenie Sérodiagnostika

(súbor sérologických reakcií):

Wassermanova reakcia

Treponémová imobilizačná reakcia

Mikroskopia natívneho preparátu RIF

V tmavom poli

REPLY REPLY

Liečba. Najúčinnejšími antimikrobiálnymi látkami sú penicilínové antibiotiká. Používajú sa aj prípravky z bizmutu, jódu atď.

Prevencia. Špecifická prevencia neexistuje. Nešpecifická prevencia spočíva v dodržiavaní hygienických pravidiel, ako aj vo vykonávaní súboru sanitárnych a hygienických opatrení verejného charakteru: registrácia pacientov so syfilisom, hospitalizácia všetkých pacientov s infekčnými formami, účasť na vyšetrení všetkých rodinných príslušníkov chorého, systematické vyšetrenie rizikových skupín, edukácia obyvateľstva a pod.

Konkrétne ciele:

Zoznámte sa s morfológiou pôvodcu syfilisu.

Určite znaky klinického priebehu syfilisu.

Definujte pojmy „tkanivové“ a „kultúrne“ treponémy.

Interpretujte výsledky mikroskopického vyšetrenia.

Študijné metódy sérologickej diagnostiky syfilisu.

Oboznámte sa s metódami prevencie a špecifickej terapie.

Byť schopný:

  • Zbierajte materiál na výskum od pacientov
  • Interpretujte výsledky mikroskopického vyšetrenia
  • Byť schopný uskutočniť Wassermanovu reakciu

Teoretické otázky:

1. Patogén.

  • Vlastnosti. Odpor.
  • Patogenita pre ľudí a zvieratá. Faktory patogenity, toxíny.
  • Patogenéza ochorenia u ľudí, imunita.
  • Mikrobiologická diagnostika.
  • Špecifická prevencia a liečba

2. Ciele inscenovania Wassermanovej reakcie.

3. Diagnostická hodnota Wassermanovej reakcie a sedimentárnych reakcií.

4. Mechanizmus Wassermanovej reakcie.

5. Vlastnosti imunity pri syfilise.

Praktické úlohy vykonávané v triede:

  • Mikroskopia demonštračných preparátov.
  • Skicovanie demonštračných mikrosklíčok do protokolu.
  • Analýza laboratórnej diagnostickej schémy.
  • Vypracovanie protokolu.

Literatúra:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Lekárska mikrobiológia, imunológia a virológia / Učebnica pre lekárske univerzity, Petrohrad: „Špeciálna literatúra“, 1998. - 592 s.

2. Timakov V.D., Levašev V.S., Borisov L.B. Mikrobiológia / Učebnica - 2. vyd., prepracovaná. a doplnkové - M.: Medicína, 1983, - 512 s.

3. Pyatkin K.D. Krivoshein Yu.S. Mikrobiológia s virológiou a imunológiou - Kyjev: Vishcha School, 1992. - 431 s.

4. Lekárska mikrobiológia /Editoval V.I. Pokrovsky.- M.: GEOTAR-MED, 2001.- 768 s.

5. Sprievodca praktickými hodinami z mikrobiológie, imunológie a virológie. /Ed. M.P. Zykova.- M. „Medicína“. 1977. 288 s.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Mikrobiológia. /Ed. F.K. Čerkesský M.: Medicína, 1986. 512 s.

7. Poznámky k prednáške.

Doplnková literatúra:

1. Makiyarov K.A. Mikrobiológia, virológia a imunológia - Alma-Ata.: “Kazachstan”, 1974. 372 s.

2. Titov M.V. Infekčné choroby - K., 1995. 321 s.

3. Šuvalová E.P. Infekčné choroby - M.: Medicína, 1990. - 559 s.

4. BME, T. 1, 2, 7.

5. Pavlovič S.A. Lekárska mikrobiológia v grafoch: Učebnica. príspevok na zdravotnú in-tov.Mn.: Vyššie. škola, 1986. 255 s.

Stručné pokyny pre prácu na praktickej hodine.

Na začiatku vyučovacej hodiny sa kontroluje úroveň prípravy žiakov na vyučovaciu hodinu.

  • Samostatná práca.
  • inscenovanie Wassermanovej reakcie.
  • Zaúčtovanie Wassermanovej reakcie a zaznamenanie do protokolu.
  • Analýza a záznam laboratórnych diagnostických schém do protokolu.

Samostatná práca zahŕňa aj mikroskopovanie demonštračných príprav a ich zakresľovanie do protokolu vyučovacej hodiny.

Na konci hodiny sa vykoná testová kontrola a analýza konečných výsledkov samostatnej práce každého študenta.

Technologická mapa na vedenie praktickej hodiny

Nie

Etapy

Čas v min.

Spôsoby učenia

Vybavenie

Poloha

Kontrola a korekcia výstupnej úrovne prípravy na vyučovaciu hodinu

20

Testy výstupnej úrovne

Tabuľky.

Testy na danú tému.

Študovňa

Samostatná práca

35

Graf

logická štruktúra

Zber demonštračných liekov, biologických produktov.

Sebamonitorovanie a oprava naučeného učiva

15

Cielené tréningové programy

Kontrola testu

15

Testy

Analýza výsledkov práce

Algoritmus laboratórnej práce:

Štúdium laboratórnej diagnostickej schémy pre syfilis.

Mikroskopia pripravených náterov z kultivovaných a tkanivových treponémov.

Oboznámenie sa s pravidlami pre odber materiálu od pacientov na mikroskopovanie študovaného materiálu.

Mikroskopia a analýza demonštračných preparátov.

Načrtnutie drog do protokolu.

Zaznamenávanie laboratórnych diagnostických schém do protokolu.

Vypracovanie protokolu.

Kontrola testu a analýza výsledkov samostatnej práce každého študenta.


Cieľové tréningové úlohy:

1. Do nemocnice bol prijatý pacient s diagnózou primárny syfilis. Ktorá z nasledujúcich diagnostických metód sa používa v tomto štádiu ochorenia?

A . mikroskopia v tmavom poli;

C. RP v géli

D. RA

E . nepriama imunofluorescencia

2. U pacientky z oddelenia maxilofaciálnej chirurgie pri Wassermanovej reakcii dopadla negatívne. Ktorý z nasledujúcich výsledkov sa používa na určenie fenoménu negatívneho RSC?

A . aglutináciou erytrocytov;

B . prítomnosťou sedimentu červených krviniek;

C . zmenou farby kvapaliny;

D . tvorbou filmu

E . prítomnosťou hemolýzy v skúmavkách.

3. Pri vyšetrení pacienta s KVD boli odhalené papulózno-roseolózne vyrážky na trupe a končatinách a zväčšené lymfatické uzliny. Predbežná diagnóza syfilisu. Aká laboratórna diagnostická metóda môže potvrdiť túto diagnózu?

A. alergický;

B. biologické;

C . bakteriologické;

D . bakterioskopické;

E. ELISA

4. Počas návštevy zubný lekár objavil v ústach pacienta tvrdý škrečok. Ktoré z nasledujúcich laboratórnych diagnostických metód možno použiť na stanovenie diagnózy?

A . Treponémová imobilizačná reakcia

B . Wassermanova reakcia

C. Kahnova reakcia

D. RA

E . bakterioskopické

5. Žena prišla do predpôrodnej poradne v 8. týždni tehotenstva. Pri vyšetrení jej odobrali krv na zistenie prítomnosti špecifických protilátok proti treponéme. Ktoré z nasledujúcich sérologických testov možno použiť na zistenie protilátok proti treponému?

A. Wrightova reakcia

B . Wassermanova reakcia

C. Vidalova reakcia

D . Bordet-Gengouova reakcia

E. RTGA.

6. Na potvrdenie diagnózy syfilis laborant vykonal sérologickú reakciu, pri ktorej použil pacientovo krvné sérum, kardiolipidový antigén, komplement a indikačný systém. Ako sa volá daná reakcia?

A . Treponémová imobilizačná reakcia;

B . Wassermanova reakcia;

C. Kahnova reakcia

D. RP

E . imunofluorescenčná reakcia.

7. Pri vykonávaní sérologickej reakcie na detekciu protilátok proti pôvodcovi syfilisu v krvnom sére pacienta boli treponémy inkubované so sérom pacienta za anaeróbnych podmienok, po ktorých baktérie stratili svoju pohyblivosť. Aká bola reakcia a čo to znamená?

A . Wassermanova reakcia, pacient má syfilis;

B .Wassermannova reakcia, pacient je v inkubačnej dobe;

C . Treponémová imobilizačná reakcia, pacient má syfilis;

D . nepriama imunofluorescenčná reakcia, pacient má syfilis;

E . Treponémová imobilizačná reakcia, pacient raz trpel syfilisom.

8. Na sérologickú diagnostiku syfilisu pomocou Wassermanovej reakcie pripravil laboratórny lekár tieto reagencie: kardiolipidový antigén, izotonický roztok chloridu sodného, ​​hemolytický systém. Aká ďalšia zložka je potrebná na uskutočnenie tejto reakcie?

A . živý treponém;

B . ovčie červené krvinky;

C. dopĺňať;

D . antiglobulínové sérum;

E . diagnostické precipitačné sérum.

9. Na mikrosklíčku pripravenom z bodiek pacientových lymfatických uzlín, zafarbenom podľa Romanovského-Giemsa, lekár identifikoval tenké mikroorganizmy s 12-14 rovnomernými kučeravkami svetloružovej farby. O akom pôvodcovi infekčnej choroby môžeme v tomto prípade hovoriť?

A . recidivujúca horúčka;

B. leptospiróza;

C. leishmanióza

D. syfilis

E. trypanozomiáza.

10. Zoškrab z ústnej sliznice bol odobratý pacientovi s podozrením na primárny syfilis. Mikroskopia náteru zafarbeného metódou Romanovského-Giemsa odhalila spletité fialové baktérie. Ktorý z nasledujúcich záverov je správny?

A . pacient bol diagnostikovaný T. pallidum;

B . U pacienta sa zistilo, že má atypické formy T. pallidum;

C . Pacientovi bol diagnostikovaný nepatogénny treponém;

D . bola zvolená nesprávna metóda lakovania;

E. -

11. Lekár mal u pacienta podozrenie na primárny syfilis. Aký výskumný materiál je vhodné zbierať na potvrdenie diagnózy?

A . tkanivová tekutina z chancre a bodkovaných lymfatických uzlín;

B . škrabanie z kožných vyrážok;

C. cerebrospinálna tekutina;

D. hlien z nosa

E. sliny.

12. Pacientovi s podozrením na sekundárny syfilis bola odobratá krv na testovanie. Akú diagnostickú metódu je vhodné použiť na potvrdenie diagnózy?

A . Vidalova reakcia;

B . test na alergiu;

D . Bordet-Gengouova reakcia

E . bakteriologická metóda

C . nepriama imunofluorescenčná reakcia.


Rovnako ako ďalšie diela, ktoré by vás mohli zaujímať

68128. Slová na vrchole sú nebom v duši 78,5 kB
Meta: absorbovať akademické poznatky z teórie literatúry, ideologickej a umeleckej analýzy básnického diela a zlepšiť chápanie zmysluplného čítania; rozvíjať poetickejšie videnie obrazov; rozdeliť lásku na umelecké slovo a na prirodzenú prírodu. Prečítam vám poetické riadky a budete vinní...
68129. Intelektuálna hra „Literárna zábava“ Vždy budeš v srdciach ľudí, Taras! 43,5 kB
Shevchenko rozvíjať logické chápanie virazneho čítania vikhovuvaty až po Shevchenko slovo a tsikavіst až po rozvoj jeho kreativity. Taras Ševčenko Taras Toto rebelské a prorocké meno poznajú nielen Ukrajinci, ale aj zvyšok sveta. Ševčenkov prameň s vodou Dzherelnoy je ako duchovná modlitba za ľudí.
68130. Spoznávanie Zeme logiky 28,5 kB
Dnes sa k nám posielajú deti za bezprecedentné náklady. Deti chodia do školy najkratšou cestou, no rôznymi labyrintmi sa dokážu túlať roky. Deti nastupujú a vystupujú z autobusu. Osou spoločnosti je poradie, v ktorom sedia deti. Borya Petrik Yurko Vira Stas Ira.
68131. Analógia. Získajte malých za prirovnanie 263,5 kB
Typ lekcie: zvládnutá lekcia a začiatočník Zručnosti: geometrické obrazce a malé predmety na hru Fotograf; Jednotlivé sady geometrických tvarov úst dieťaťa v poradí. Mením miesta a robím poriadok. Všetky figúrky sú v rôznych farbách A teraz otvor oči a čuduj sa...
68132. Cestovanie po oceáne logických smerov 27,5 kB
Meta: Spoznajte deti s rôznymi konceptmi; rozvíjať myslenie, jazyk, pamäť, usilovnosť; ukázať pokoru, odvahu. Prejsť na lekciu Všimnite si prosím témy a lekciu. Dnes sa náklady na cestovanie loďou po celom svete zvyšujú. Čaká na nás množstvo rôznych výhod. Lyudina je sladká vec. Myšlienky sa menia na slová.
68133. Bláznivé a nezmyselné pojmy. Žiadosť o opakovanie 84,5 kB
Meta: objasniť a systematizovať vedomosti študentov o pojmoch bláznivých a absurdných pojmov dôkladne porozumieť vedomostiam študentov rozviazať logické úlohy, aby sa rozvíjala logická všímavosť všímavosti rešpektu k pamäti reality; inšpirovať lásku k tvorom, prebúdzať kognitívny záujem o každú živú vec, formulovať sebailuminácie...
68136. MODERNIZÁCIA VOZIDIEL NA UKRAJINE: MECHANIZMY INŠTITUCIONÁLNEJ REGULÁCIE 188 kB
Efektívnosť a efektívnosť fungovania systému vysokého osvetlenia Ukrajiny na začiatku 21. storočia bude zabezpečená len vtedy, ak nebudú podliehať najvyšším časovo-hodinovým mandátom generovaným ekonomikou.Táto nestabilita, demografická kríza, soc. -kultúrne vákuum.

T. pallidum poddruh pallidum je špirálovitá baktéria s rozmermi 6-14x0,2-0,3 um; v plodinách môžu byť veľké. Špirálovité kučery majú rovnakú výšku, môže ich byť až 14. Schopné vytvárať tvary L.

Základné spôsob reprodukcie syfilisu- priečne delenie. Pôvodca syfilisu Vo vonkajšom prostredí nie je veľmi stabilný a pri vyschnutí odumiera, no v chlade vydrží až 50 dní. Zahriatie na teplotu 40 °C po dobu jednej hodiny vedie k strate patogénnych vlastností; pri 48 °C baktérie zahynú do 10 minút.

Pôvodca syfilisu nefarbí sa dobre anilínovými farbivami (odtiaľ názov „bledá spirochéta“). Baktérie syfilis redukovať dusičnan strieborný na kovové striebro, ktoré dáva látkam čiernu alebo tmavohnedú farbu.

V domácej praxi je rozšírená morozovská metóda striebrenia. Podľa Romanovského-Giemsa je sfarbený do ružova a je nepatogénny Treponéma- vo fialovej alebo modrej farbe. Používa sa aj Burri negatívny kontrast.

Kultúrne vlastnosti syfilisu. Kultúra pôvodcu syfilisu

Bledá spirochéta náročný na podmienky pestovania, zle rastie na umelých médiách; Metódy stabilnej produkcie kultúr stále chýbajú.

V našej krajine najväčší počet syfilisové kmene identifikované kazanskými mikrobiológmi V.M. Aristovsky a P.P. Geltser.

Tieto "Kazan" syfilisové kmene spolu s kmeňom Reiter sa používa na produkciu Ag na sérodiagnostiku. Pri dlhodobom pestovaní baktérie syfilis prispôsobiť sa jednoduchšiemu prostrediu (napríklad Kitta-Tarozzi) a stratiť patogénne vlastnosti.

Kolónie syfilisu malé, objavujú sa na 3-5 deň kultivácie.

Obsah článku

Treponema pallidum

Morfológia a fyziológia

T. pallidum má špirálovitý tvar, protoplastický valec, ktorý je stočený do 8-12 praslenov. Z koncov bunky vybiehajú 3 periplazmatické bičíky. Treponema pallidum dobre neprijíma anilínové farbivá, preto sa farbí farbou Romanovsky-Giemsa. Najúčinnejšou metódou je však štúdium v ​​mikroskope s tmavým poľom alebo mikroskopom s fázovým kontrastom. Mikroaerofilné. Nerastie na umelých živných pôdach. T. pallidum sa kultivuje v tkanive semenníkov králika, kde sa dobre množí a plne si zachováva svoje vlastnosti, čo spôsobuje orchitídu u zvieraťa. Antigény. Antigénna štruktúra T. pallidum je komplexná. Je spojená s proteínmi vonkajšej membrány, lipoproteínmi. Posledne menované sú skrížene reagujúce antigény bežné u ľudí a dobytka. Používajú sa ako antigén vo Wassermannovej reakcii na sérodiagnostiku syfilisu.

Patogenita a patogenéza

Faktory virulencie Treponema pallidum zahŕňajú proteíny vonkajšej membrány a LPS, ktoré po uvoľnení z bunky vykazujú svoje toxické vlastnosti. Zároveň sa zdá, že schopnosť treponému pri delení vytvárať samostatné fragmenty, ktoré prenikajú hlboko do tkanív, možno pripísať aj faktorom virulencie. V patogenéze syfilisu existujú tri štádiá. Pri primárnom syfilise sa pozoruje tvorba primárneho ohniska - tvrdého chancre v mieste vstupnej brány infekcie, po ktorej nasleduje prienik do regionálnych lymfatických uzlín, kde sa patogén množí a hromadí. Primárny syfilis trvá približne 6 týždňov. Druhý stupeň je charakterizovaný generalizáciou infekcie sprevádzanou penetráciou a cirkuláciou patogénu v krvi, čo je sprevádzané kožnými vyrážkami. Trvanie sekundárneho syfilisu u neliečených pacientov sa pohybuje od 1 do 2 rokov. V treťom štádiu sa zisťujú infekčné granulómy (gumy náchylné na rozpad), lokalizované vo vnútorných orgánoch a tkanivách. Toto obdobie u neliečených pacientov trvá niekoľko rokov a končí sa poškodením centrálneho nervového systému (progresívna paralýza) alebo miechy (tabes dorsalis).

Imunita

Pri syfilise dochádza k humorálnej a bunkovej imunitnej odpovedi. Výsledné protilátky nemajú ochranné vlastnosti. Bunková imunitná odpoveď je spojená s fixáciou patogénu a tvorbou granulómov. K eliminácii treponémov z tela však nedochádza. Nepriaznivé podmienky prostredia zároveň vyvolávajú tvorbu cýst treponémom, ktoré sú lokalizované v stene ciev. Predpokladá sa, že to naznačuje prechod choroby do remisie. Spolu s cystami tvoria treponémy L-formy. So syfilisom sa tvorí HRT, ktorá sa dá zistiť alergickým kožným testom s usmrtenou suspenziou treponémov. Predpokladá sa, že prejav terciárneho obdobia syfilisu je spojený s HRT.

Ekológia a epidemiológia

Syfilis je typická antroponotická infekcia. Ochoria len ľudia, ktorí sú v prírode rezervoármi infekcie. K prenosu infekcie dochádza sexuálnym kontaktom a oveľa menej často cez spodnú bielizeň a iné predmety. Vo vonkajšom prostredí (vzduch) treponémy rýchlo odumierajú.

Syfilis a iné treponematózy

Syfilis je chronické infekčné pohlavné ochorenie človeka, má cyklicky progresívny priebeh, postihuje kožu, sliznice, vnútorné orgány a nervový systém. Pôvodcom ochorenia je Treponema pallidum , Existujú tri hlavné obdobia vývoja syfilisu, ktorých laboratórne diagnostické metódy majú svoje vlastné charakteristiky. V počiatočnom období ochorenia je materiálom na laboratórnu diagnostiku výtok z chancre, bodkovaný z lymfatických uzlín, škrabky z roseoly, syfilidy atď. V sekundárnom a terciárnom období sa vyšetruje krvné sérum a likvor.Vzhľadom na to, že izolácia čistých kultúr treponémov v bežných bakteriologických laboratóriách je nemožná, v primárnom období ochorenia (zriedkavejšie neskôr) sa vykonáva bakterioskopická diagnostická metóda. Počnúc sekundárnym obdobím sa používajú najmä sérologické metódy.

Bakterioskopické vyšetrenie

Pred odberom patologického materiálu sa syfilitický vred najskôr utrie vatovým tampónom, aby sa odstránil mazový povlak a kontaminujúca mikroflóra. Potom sa skalpelom alebo kovovou špachtľou podráždi dno chancre, prípadne sa vred prstami v gumenej rukavici zo strán energicky vytlačí, aby sa uvoľnil exsudát rany. Ak existuje malé množstvo čírej kvapaliny, môže sa pridať do kvapky 0,85% roztoku chloridu sodného. Ak nie je možné odobrať materiál zo spodnej časti chancre (fimóza, zjazvenie vredu atď.), vykoná sa punkcia regionálnych lymfatických uzlín. Kvapka tekutiny z vredu alebo bodky sa nanesie na tenké sklo podložné sklíčko (1,1-1,2 mm), prekryté krycím sklíčkom a skúmané v tmavom zornom poli (krásnejšie!), alebo pomocou fázovo kontrastného alebo anoptrálneho mikroskopu.Bledý treponém v tmavom zornom poli má vzhľad mierne lesklého tenká jemná špirála so strmými, rovnomernými, zaoblenými primárnymi kučeravkami. Pohyby sú plynulé, takže sa ohýba pod uhlom. Ale obzvlášť charakteristické sú pre ňu oscilácie podobné kyvadlu. Pôvodcu syfilisu treba odlíšiť od Treponema refringens (kolonizuje vonkajšie pohlavné orgány), ktorý je hrubší, drsnejší, s nerovnomerne veľkými kučerami a má aktívne nepravidelné pohyby, ale neohýba sa. Treponémy fusosp-irochetóznej symbiózy sa vyznačujú tenkým vzorom, jemnými kučeravkami a nepravidelným pohybom.Pri diagnostike orálneho syfilisu treba odlíšiť bledý treponém od zubných treponém, najmä T. dentium, ako aj od T. buccalis. Prvý z nich je vo všeobecnosti ťažké odlíšiť od syfilitického. Je však kratší, má 4-8 ostrých kučier a nedochádza pri ňom k žiadnemu kyvadlovému pohybu. T. buccalis je hrubší, má hrubé počiatočné kučery a nepravidelný pohyb.Ak existujú pochybnosti, treba vziať do úvahy, že všetky saprofytické treponémy, na rozdiel od bledého, sú dobre zafarbené anilínovými farbivami. Neprenikajú do lymfatických uzlín, takže štúdium bodiek má veľkú diagnostickú hodnotu. Identifikácia typických treponémov v bodkovitých lymfatických uzlinách nepochybne potvrdzuje diagnózu syfilisu, takže vyšetrenie vylisovaných kvapiek v tmavom poli je najlepšou metódou na identifikáciu pôvodcu syfilisu. Jeho výhodou je, že materiál sa rýchlo skúma a morfológia treponémov v živom stave je najcharakteristickejšia. Atramentové šmuhy pomocou metódy Burri sa už nepoužívajú.Ak nie je možné vykonať výskum v tmavom zornom poli, možno použiť rôzne metódy farbenia. Treponema pallidum neprijíma dobre anilínové farbivá. Z mnohých navrhovaných metód farbenia sa najlepšie výsledky dosiahnu pri použití farbenia Romanoveki-Giemsa. Pripravené nátery sa fixujú metylalkoholom alebo Nikiforovovou zmesou. Výsledky jasnosti sa dosiahnu, keď sa do prípravku naleje farba Romanovsky-Giemsa. Na tento účel sa do Petriho misky vložia úlomky zápaliek, na ne sa položí podložné sklíčko, rozotrie sa a farbivo sa naleje, až kým nezmáča. Doba lakovania je dvojnásobná. Pod mikroskopom majú bledé treponémy jemnú ružovú farbu, iné druhy treponémov sú natreté modrou alebo modrofialovou farbou.Môžete použiť aj metódu Morozovho striebrenia. Treponémy si úplne zachovávajú svoje morfologické vlastnosti a pod mikroskopom vyzerajú hnedo alebo takmer čierno. Ale postriebrené prípravky sa dlho neskladujú. V poslednej dobe sa zriedka používajú metódy farbenia treponémov.Ak sa začne liečba syfilisu chemoterapiou, je prakticky nemožné identifikovať patogén v patologických materiáloch ani pomocou tmavého zorného poľa. Ak je test negatívny, musí sa zopakovať.

Sérologická diagnostika syfilisu

Pri vykonávaní sérologických reakcií sa teraz používajú tieto výskumné metódy, zjednotené na Ukrajine: reakcia fixácie komplementu (CFR), imunofluorescencia (RIF), treponémová imobilizácia (PIT), mikroprecipitačná reakcia (MPR) a enzýmová imunoanalýza (ELISA). Po mnoho rokov bola hlavnou a najbežnejšou reakciou reakcia fixácie komplementu alebo Wassermannova reakcia (RW). Na jej vykonanie použite krvné sérum pacienta so syfilisom a mozgovomiechovým mokom pri poškodení nervového systému Technika stagingu Wassermanovej reakcie sa nelíši od techniky vykonania RSC. Jediný rozdiel je v tom, že pre RO sa používa nielen špecifický treponém, ale aj nešpecifický kardiolipínový antigén.l Odber 5-10 ml krvi z ulnárnej žily sa vykonáva nalačno alebo najskôr 6 hodín po jedle. Krv by ste nemali odoberať pacientom s horúčkou, po požití alkoholu a mastných jedál, tehotným ženám 10 dní pred pôrodom a rodiacim ženám. Sérum získané z krvi sa zahrieva pri teplote 56 °C počas 30 minút, aby sa inaktivoval vlastný komplement. RO sa musí umiestniť s dvoma antigénmi: špecifickým a nešpecifickým. Ultrazvukovo špecifický treponémový antigén sa pripraví z kultúr Treponema pallidum (kmeň Reiter) pestovaných v skúmavkách a vystavených ultrazvuku. Vyrába sa vo forme lyofilizovaného prášku. Nešpecifický kardiolipínový antigén sa pripravuje alkoholovou extrakciou lipidov z hovädzieho srdca a purifikáciou z balastných zmesí, balených v 2 ml ampulkách. Na zavedenie antigénu do PO sa titruje podľa tohto návodu. Bezprostredne pred stagingom RV sa titrácia komplementu a hemolytického séra uskutoční podľa rovnakej schémy ako pri RSC. Wassermanova reakcia sa uskutočňuje pomocou kvalitatívnych aj kvantitatívnych metód. Kvalitatívna reakcia sa uskutočňuje v troch skúmavkách s dvoma antigénmi podľa obvyklej schémy. Výsledky reakcie sa hodnotia podľa systému 4 plus: pozitívna reakcia - keď dôjde k úplnému alebo výraznému oneskoreniu hemolýzy (4 +, 3+); slabo pozitívna reakcia - čiastočné oneskorenie hemolýzy (2 +); pochybná reakcia - mierne oneskorenie hemolýzy (1 +). V prípade úplnej hemolýzy sa RO považuje za negatívne Každé sérum, ktoré poskytlo pozitívnu kvalitatívnu reakciu, sa musí vyšetriť kvantitatívnou metódou s jeho sériovým riedením od 1:10 do 1:640. Titer testovacieho séra (reaginový titer ) sa považuje za jeho maximálne zriedenie, pri ktorom dôjde k úplnému (4 +) alebo významnému (3 +) oneskoreniu hemolýzy. Kvantitatívna metóda stagingu RO je dôležitá pre hodnotenie účinnosti liečby syfilisu. Rýchly pokles titra reaginu naznačuje úspešnú liečbu. Ak sérový titer dlhodobo neklesá, svedčí to o nedostatočnej účinnosti užívaných liekov a potrebe zmeniť taktiku liečby.V prípade pilózy pre séronegatívny primárny syfilis alebo latentnej, terciárnej alebo vrodenej sa odporúča vykonať Wassermanov test v chlade podľa rovnakej schémy. Pri podozrení na neurosyfilis sa RO vykonáva s mozgovomiechovým mokom, ktorý je inaktivovaný, keďže neobsahuje vlastný komplement. Neriedený lúh sa zavádza do reakcie v riedeniach 1 : 2 a 1 : 5. Wassermanova reakcia sa stáva pozitívnou 2-3 týždne po objavení sa chancre. Pri sekundárnom syfilise je pozitívny v 100% prípadov, pri terciárnom syfilise - v 75%.Okrem toho sa v komplexe sérologických reakcií (CSR) používa ako skríningový test mikroprecipitačná reakcia s krvnou plazmou alebo inaktivovaným sérom.

Mikroreakcia zrážania

Precipitačná mikroreakcia sa uskutočňuje s kardiolipínovým antigénom. Princíp reakcie spočíva v tom, že po pridaní emulzie kardiolipínového antigénu do plazmy alebo séra pacienta so syfilisom sa vytvorí zrazenina (komplex antigén-protilátka), ktorá sa vyzráža vo forme bielych vločiek. Používa sa nasledujúca technika: tri kvapky plazmy (alebo inaktivovaného séra) sa napipetujú do jamky platne, potom sa pridá jedna kvapka štandardnej emulzie kardiolipínového antigénu. Reakčné zložky sa miešajú trepaním doštičky počas 5 minút, potom sa pridajú tri kvapky 0,9 % roztoku chloridu sodného a zmes sa nechá ďalších 5 minút pri teplote miestnosti. Povinná kontrola so slabo pozitívnym krvným sérom. Výsledky sa hodnotia voľným okom nad umelým zdrojom svetla. Keď sa v diere objavia veľké vločky, reakcia sa považuje za pozitívnu (4 +, 3 +), stredné a malé vločky sa považujú za slabo pozitívne (2 +, 1 +). Ak je výsledok negatívny, nevytvorí sa žiadna zrazenina Mikroreakcia precipitácie sa môže uskutočniť aj pomocou kvantitatívnej metódy na stanovenie titra precipitujúcich protilátok a vyhodnotenie účinnosti liečby na tomto základe. Vyššie titre MRP sa získajú s plazmou ako so sérom. V zahraničí je analógom MRP s pacientskym sérom VDRL (Laboratórium pre výskum pohlavných chorôb) a s plazmou - RPR (Rapid plasma reagin).

Imunofluorescenčná reakcia (RIF)

Skupina špecifických reakcií, ktoré sa široko používajú na sérologickú diagnostiku syfilisu, zahŕňa nepriamu imunofluorescenčnú reakciu. Ako antigén používa suspenziu patogénneho bledého kmeňa Treponema Nichols z parenchýmu semenníkov králika na 7. deň po infekcii. Reakcia sa uskutočňuje v dvoch modifikáciách: RIF-ABS a RIF-200. V prvej možnosti sa používa protilátkový sorbent (sonikát) - ultrazvukový treponémový antigén pre CSC. Vyrába ho podnik Kaunas na výrobu bakteriálnych prípravkov (Litva). Pri voľbe RIF-200 sa pacientovo sérum zriedi 200-krát, aby sa odstránil vplyv skupinových antitreponemálnych protilátok.RIF-ABS sa vykonáva na tenkých, dobre odtučnených sklenených sklíčkach. Na zadnej strane pohára vykrajovač na sklo vyznačí 10 kruhov s priemerom 0,7 cm.V rámci kruhu sa na sklo nanesie antigén - suspenzia bledého treponému - v takom množstve, aby ich bolo 50-60 v zornom poli. Nátery sa sušia na vzduchu, fixujú sa nad plameňom a v acetóne počas 10 minút. Pridajte 0,2 ml sorbentu (sonikatu) a 0,5 ml krvného séra pacienta do samostatnej skúmavky a dobre premiešajte. Zmes sa nanesie na náter (antigén) tak, aby ho rovnomerne pokryl, a ponechá sa 30 minút vo vlhkej komore pri teplote 3–7 °C (reakcia fázy II). Potom sa náter premyje fosfátovým tlmivým roztokom, vysuší sa a na 30 minút sa naň aplikuje fluorescenčné sérum proti shobulínom, ktoré sa umiestni do vlhkej komory pri 37 °C (fáza II). Prípravok sa opäť premyje fosfátovým tlmivým roztokom, suší sa a skúma pod fluorescenčným mikroskopom.Pri pozitívnej reakcii vyžarujú bledé treponémy zlatozelené svetlo, pri negatívnej reakcii nežiaria.Technika nastavenia RIF-200 je rovnako ako RIF-ABS, len pacientovo krvné sérum je predriedené 200-krát fosfátovým pufrom. Pri vykonávaní imunofluorescenčnej reakcie s cerebrospinálnou tekutinou pacienta so syfilisom nervového systému sa používajú RIF-c a RIF-10, t.j. Kvapalina sa zavádza do reakcie neinaktivovaná a zriedená alebo zriedená v pomere 1:10.

Treponema pallidum imobilizačná reakcia (PIT)

Imobilizačná reakcia bledého treponému (PIT) je založená na fenoméne straty ich pohyblivosti v prítomnosti imobilizujúcich antitreponemálnych protilátok zo séra a komplementu pacienta v podmienkach anaerobiózy. Ako antigén v reakcii sa používa suspenzia bledého treponému z tkaniva semenníkov králika infikovaného laboratórnym kmeňom Nichols. Suspenzia sa zriedi sterilným 0,85% roztokom chloridu sodného tak, aby v zornom poli bolo 10-15 spirochét. Na uskutočnenie reakcie sa odoberie 0,05 ml krvného séra pacienta, 0,35 ml antigénu a 0,15 ml komplementu. zmiešané v sterilnej skúmavke. Experiment je sprevádzaný kontrolami séra, antigénu a komplementu. Skúmavky sa vložia do anerostatu, vytvoria sa anatomické podmienky a udržiavajú sa v termostate 18-20 hodín pri teplote 35 °C. Potom sa z každej skúmavky pripravia vylisované kvapky, spočíta sa aspoň 25 treponém a koľko z nich sú mobilné a koľko z nich je zaznamenaných. Percento špecifickej imobilizácie pallidum treponema sa vypočíta pomocou vzorca: x = (A-B) / B * 100, kde X je percento imobilizácie, A je počet pohyblivých treponém v kontrolnej skúmavke, B je počet pohyblivých treponém v skúmavke. Reakcia sa považuje za pozitívnu, keď je percento imobilizácie 50 alebo viac, slabo pozitívne - od 30 do 50, pochybné - od 20 do 30 a negatívne - od 0 do 20. V praktických laboratóriách používajú jednoduchšiu melangerovú metódu PIT pre M.M. Ovčinnikov. Anaeróbne experimentálne podmienky sa vytvoria umiestnením reagujúcej zmesi (sérum, antigén, komplement) do melangeuru, ktorého oba konce sú uzavreté gumeným krúžkom. Melangerová technika vám umožňuje zaobísť sa bez zložitých zariadení a prístrojov na vytváranie anaerobiózy, ale poskytuje výsledky, ktoré nie sú dosiahnuté klasickou mikroanaerostatovou technikou.Treponémové imobilizačné reakcie a imunofluorescencia sa považujú za najšpecifickejšie v sérologickej diagnostike syfilisu. A napriek tomu sa PIT napriek svojej špecifickosti neodporúča používať v rozšírenej praxi z dôvodu prácnosti jej implementácie.

Enzymovo viazaný imunosorbentový test (ELISA)

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) sa vykonáva s kadriolipínovým antigénom (nešpecifická, selekčná reakcia) a treponémovým antigénom (špecifická reakcia), ktorý potvrdzuje diagnózu syfilisu.Princíp nepriamej metódy ELISA spočíva v tom, že antigén adsorbovaný na tuhej fáze sa do jamiek tablety pridá testovacie sérum. Ak obsahuje protilátky proti treponémom, vzniká komplex antigén-protilátka (fáza II). Po vymytí nenaviazaných nešpecifických protilátok sa do jamiek pridá antiglobulínové sérum konjugované s enzýmom (najčastejšie chrenovou peroxidázou). Konjugát je pevne pripojený ku komplexu antigén-protilátka (fáza II) Po premytí nenaviazaného konjugátu sa do jamiek pridá substrát farbenia OPD - ortofenyléndiamín (fáza III). Reakcia peroxidázy sa zastaví pridaním kyseliny sírovej. Na kontrolu sa použijú rovnaké vzorky s pozitívnymi a zjavne negatívnymi sérami Výsledky analýzy sa zaznamenávajú pomocou fotometra, ktorý určuje optickú hustotu v režime dvoch vĺn (492 nm a 620 nm). Na nastavenie enzýmovej protilátkovej reakcie sú okrem fotometra potrebné jedno- a osemkanálové automatické pipety s polypropylénovým hrotom a zodpovedajúce sady diagnostických testovacích systémov Metóda ELISA je široko používaná v sérologickej diagnostike syfilisu. Rovnako účinný je aj na zistenie ochorenia v inkubačnej dobe (1-2 týždne po infekcii), s klinickými prejavmi ochorenia a jeho latentných foriem. Veľmi často sa ELISA využíva pri skríningových vyšetreniach populácie najmä na krvných transfúznych staniciach.V laboratórnej praxi sa niekedy využíva aj imunitná adhézna reakcia (IAR) a nepriama hemaglutinačná reakcia (IRHA). Prvý z nich je založený na skutočnosti, že patogénne testikulárne treponémy kmeňa Nichols, keď sa zmiešajú so sérom pacienta v prítomnosti komplementu a ľudských červených krviniek, priľnú na povrch červených krviniek. RNGA je široko používaný na diagnostiku syfilisu kvôli svojej metodologickej jednoduchosti. Stane sa pozitívnym do troch týždňov po infekcii. Pozitívny výsledok reakcie zostáva roky po zotavení. V zahraničí je analógom tejto reakcie TRHA (Treponema pallidum hemoaglutination).
KATEGÓRIE

POPULÁRNE ČLÁNKY

2023 „kingad.ru“ - ultrazvukové vyšetrenie ľudských orgánov