Taxonómia, pneumokok, chrípkové laboratórne metódy

MINISTERSTVO ZDRAVOTNÍCTVA RUSKEJ FEDERÁCIE KAZAŇSKÁ ŠTÁTNA LEKÁRSKA UNIVERZITA ODDELENIE MIKROBIOLOGIE

PNEUMOKOKKY

Kazaň 1999

MDT 576 851 21 (07)

Publikované rozhodnutím Centrálnej koordinačnej a metodickej rady Kazanskej štátnej lekárskej univerzity.

Skomplikovaný:

(vedúci Katedry mikrobiológie, doktor lekárskych vied, profesor O.K. Pozdeev, asistent Katedry mikrobiológie, Ph.D., E.R. Fedorova.

Recenzenti:

Vedúci Katedry epidemiológie Kazanskej štátnej lekárskej univerzity, doktor lekárskych vied, docent M.Sh. Shafeev, vedúci oddelenia epidemiológie Kazanskej štátnej lekárskej akadémie, doktor lekárskych vied, profesor V.E. Grigoriev.

Pneumokoky /O.K. Pozdeev, E.R. Fedorov-Kazaň: KSMU, 1999. - 14 s.

Kopírovaním, šírením, publikovaním textu alebo jeho časti na svojich zdrojoch preberáte zodpovednosť v súlade s platnými zákonmi.

Výhradne na použitie diela na osobné účely (článok 18, článok 26 zákona Ruskej federácie „o autorských právach a súvisiacich právach“). Komerčná reprodukcia je zakázaná.

Kazanská štátna lekárska univerzita, 1999

Pneumokok (Streptococcus pneumoniae) bol prvýkrát identifikovaný Pasteurom (1881) pri práci na vakcíne proti besnote a spočiatku ho považoval za pôvodcu besnoty. Etiologickú úlohu mikroorganizmu pri vzniku pneumónie u ľudí dokázali Frenkel a Weichselbaum (1884). Baktérie kolonizujú ľudské a zvieracie organizmy a sú zaradené do skupiny takzvaných „orálnych“ streptokokov. Sú hlavnými pôvodcami zápalov pľúc, môžu spôsobiť aj zápal pohrudnice, meningitídu, plazivé vredy rohovky, hnisavé zápaly stredného ucha, septické stavy a iné ochorenia. V IX. vydaní Burgey Bacteria Key (1994) sú pneumokoky zaradené do 17. skupiny „Grampozitívne koky“.

Epidemiológia lézií. Pneumokok je jedným z hlavných pôvodcov bakteriálnej pneumónie registrovaných mimo nemocníc (2-4 prípady na 1000 ľudí); Ročne sa vo svete pozoruje najmenej 500 000 prípadov pneumokokovej pneumónie (skutočná hodnota je oveľa vyššia). Deti a starší ľudia sú najviac náchylní na infekciu. Rezervoárom infekcie sú pacienti a nosiči (20-50% detí predškolského veku a 20-25% dospelých); hlavnou cestou prenosu je kontakt; pri ohniskách aj vo vzduchu. Vrchol výskytu sa vyskytuje v chladnom období. Vo veľkej väčšine prípadov sa klinické formy infekcie vyvíjajú, keď je znížená odolnosť tela (vrátane stresu z chladu), ako aj na pozadí iných patológií (kosáčikovitá anémia, Hodgkinova choroba, infekcia HIV, myelóm, diabetes mellitus , stavy po splenektómii a pod.) alebo s alkoholizmom. Varianty 1, 2 a 3 majú najväčší epidemiologický význam v patológii u dospelých; u detí - 1, 2, 3 a 14 možností. Virulencia sérovarov v zostupnom poradí - 3, 1, 2, 5, 7 a 8 možností. Biele myši sú citlivé na pneumokoky (pri infekcii do jedného dňa uhynú na septikémiu), teľatá, jahňatá, prasiatka, psy a opice.

Morfológia. Pneumokoky sú nepohyblivé, netvoria spóry, majú mierne pretiahnutý tvar, pripomínajúci obrysy plameňa sviečky. V náteroch z klinického materiálu sú usporiadané do párov, z ktorých každý je obklopený hrubou kapsulou. V náteroch z kultivačných médií môžu byť umiestnené v krátkych reťazcoch a byť viac zaoblené. Na jednoduchých médiách tvoria tenkú kapsulu; jeho vývoj je stimulovaný zavedením krvi, séra alebo ascitickej tekutiny. Tvorba kapsúl je najvýraznejšia u baktérií typu III. Pri usporiadaní do reťazcov môže byť kapsula spoločná.

kultúrne vlastnosti. Pneumokokové aeróby alebo fakultatívne anaeróby; pri kultivácii sa uprednostňujú kapnofilné podmienky (5-10 % CO2). Chemoorganogrophy a dobre rastú na krvnom alebo sérovom médiu, doplnené pridaním 0,1% glukózy. Môžu rásť v rozmedzí teplôt 28-42 °C, optimum je 37 °C. Optimálne pH -7,6-7,8. Na hustých médiách tvoria jemné priesvitné, dobre ohraničené kolónie s priemerom asi 1 mm. Niekedy môžu byť ploché so stredovým prehĺbením; ako iné streptokoky, kolónie sa nikdy nezlúčia

medzi sebou. Na krvnom agare tvoria malé priesvitné kolónie zelenošedej farby. Stred kolónií je tmavší, okraj je svetlejší. Pod kolóniou a pozdĺž jej obvodu je viditeľná zóna a-hemolýzy vo forme zelenkastej sfarbenej zóny (v dôsledku prechodu hemoglobínu na methemoglobín). Kolónie pneumokoka typu III majú často hlienovú konzistenciu, ich veľkosť je do 2 mm. Sú nejasné, dokážu navzájom splynúť. Tvoria S- a R-formy kolónií. Pri prechode z S- na R-formu strácajú schopnosť syntetizovať kapsulu. Na tekutých médiách so sérom a 0,2 % glukózy poskytuje jednotný zákal a malú vločkovitú zrazeninu. Pri dlhšej kultivácii sa sediment zvyšuje.

Udržateľnosť. Pneumokoky patria do skupiny nestabilných mikroorganizmov. V suchom spúte pretrvávajú až dva mesiace. Môže sa skladovať dlhú dobu pri nízkych teplotách; pri teplote 60 °C odumierajú do 3-5 minút. 3% roztok kyseliny karbolovej ich zabije za 1-2 minúty. Optochín (v koncentrácii 1:100 000) a žlč sú škodlivé pre pneumokoky, ktoré sa používajú na identifikáciu baktérií.

Pneumokoky sa od ostatných mikroorganizmov líšia množstvom vlastností (tabuľka 1).

Tabuľka 1 Biochemické vlastnosti pneumokokov

Testovací substrát	Výsledok	Testovací substrát	Výsledok
Rast pri 100°C
		Rafinóza
Stredná s 6,5 % Nad
a-hemolýza
B-hemolýza		trehalóza
		Fosfatáza
hippurát		β-galaktozidáza
Glycerol
Označenia: "+" - 90 % alebo viac kmeňov je pozitívnych; (+) - 80-89% kmeňov je pozitívnych; d - 21-79% kmeňov je pozitívnych; (-) - 11-20 % kmeňov je pozitívnych; “- - 90 % alebo viac kmeňov je negatívnych.

Antigénna štruktúra. V pneumokokoch sa našlo niekoľko typov antigénov: polysacharid, 0-somatický antigén lokalizovaný v bunkovej stene; polysacharidové kapsulárne K-antigény a M-proteín. Polysacharidový somatický antigén je podobný C-látke iných streptokokov. Vzťah určuje podobnosť chemickej štruktúry ributeichoových kyselín spojených s cholínfosfátom. Kapsulárne antigény majú tiež polysacharidovú povahu, pozostávajú z monosacharidov opakujúcich sa v rôznych kombináciách: D-glukóza, D-galaktóza a L-ramnóza. Podľa štruktúry kapsulárnych antigénov sa pneumokoky delia na 84 sérovarov. Malo by sa pamätať na to, že kapsulárne antigény skrížene reagujú s antisérami na streptokokové antigény skupiny A a B, ako aj so sérami na antigény Klebsiella a Escherichia. Pri prechode z S na R-formu sa kapsulárne antigény strácajú. Na pneumokokovú sérotypizáciu sa vyrábajú skupinové séra označené latinskými písmenami (A, B, C, D, atď.) a sérovariant, označený rímskymi číslicami. Aglutinačné sérum III nie je súčasťou zmesí sér. Vydáva sa samostatne a nedá sa chovať. U ľudí sa najčastejšie izolujú pneumokoky sérotypov I, II a III. Pre ľudí sú najvirulentnejšie, preto sa aglutinačná reakcia na začiatku nastavuje pomocou antisér pre tieto varianty. Ak je výsledok negatívny, aglutinačná reakcia sa aplikuje so zmesou sér A, B, C atď. (kým sa nedosiahne pozitívny výsledok) a potom samostatnými antisérami. Na rýchlejšiu identifikáciu sérovarov sa využíva Neufeldova reakcia (imunitné napučiavanie kapsuly). Metóda je založená na schopnosti pneumokokových kapsúl zväčšiť svoj objem v prítomnosti homológneho antiséra, čo je zaznamenané svetelnou optickou mikroskopiou. Kapsulárne polysacharidy majú senzibilizačné vlastnosti, ktoré sa prejavujú vývojom hypersenzitívnej reakcie oneskoreného typu, zistenej pomocou kožných testov.

faktory patogénnosti. Hlavným faktorom je kapsula, ktorá chráni baktérie pred mikrobicídnym potenciálom fagocytov a odvádza ich od pôsobenia opsonínov. Neenkapsulované kmene sú prakticky avirulentné a sú zriedkavé. Väčšina zo skupiny antipneumokokových AT sú kapsuly AT až Ag. Dôležitou funkciou kapsuly a M-proteínu je aj zabezpečenie adhézie k sliznici. Podstatná je látka-C, ktorá špecificky interaguje s C-reaktívnym proteínom. Dôsledkom takejto reakcie je aktivácia komplementárnej kaskády a uvoľnenie mediátorov akútnej fázy zápalu; ich akumulácia v pľúcnom tkanive stimuluje migráciu polymorfonukleárnych fagocytov. Tvorba silných zápalových infiltrátov je sprevádzaná porušením homeostázy pľúcneho tkaniva a jeho hepatizáciou. Pneumokoky produkujú endotoxín, a- a b-hemolyzíny (pneumolyzíny), leukocidín. a-pneumolyzín je termolabilný proteín schopný neutralizovať 0-streptolyzín,

erytrogénna látka, neuraminidáza. Pneumokoky tiež syntetizujú množstvo enzýmov, ktoré prispievajú k patogenéze lézií - muramidáza, hyaluronidáza (podporuje šírenie mikroorganizmov v tkanivách), peptidáza (štiepi IgA).

Patogenéza lézií. Biotopom pneumokokov sú horné dýchacie cesty. Patogenéza väčšiny pneumónií zahŕňa aspiráciu slín obsahujúcich S. pneumoniae a vstup baktérií do dolných dýchacích ciest. Nevyhnutné je porušenie ochranných drenážnych mechanizmov – kašľový šok a mukociliárny klírens. U dospelých sa častejšie pozorujú lobárne lézie pľúc, u detí a starších ľudí dominujú peribronchiálne alebo fokálne lézie. Tvorba silných zápalových infiltrátov je sprevádzaná porušením homeostázy pľúcneho tkaniva a jeho hepatizáciou. Infekcie s najvirulentnejším sérovarom 3 môžu byť sprevádzané tvorbou dutín v pľúcnom parenchýme. Z primárneho zamerania môže patogén preniknúť do pleurálnej dutiny a osrdcovníka alebo sa hematogénne šíriť a spôsobiť meningitídu, endokarditídu a kĺbové lézie.

Klinické prejavy. Klasický pneumokokový zápal pľúc začína náhle; všimnite si zvýšenie telesnej teploty, produktívny kašeľ a bolesť na hrudníku. U oslabených jedincov a starších ľudí sa choroba vyvíja pomaly, s miernou horúčkou, poruchou vedomia a príznakmi pľúcneho srdcového zlyhania. Streptokoková meningitída je zaznamenaná vo všetkých vekových skupinách; vyznačujú sa prudkým nástupom so zvýšením telesnej teploty, stuhnutosťou krčných svalov, bolesťami hlavy, nevoľnosťou a vracaním. Meningeálne vaskulárne lézie sú často sprevádzané stratou vedomia; medzi deťmi a v starobe môže úmrtnosť dosiahnuť 80 %. Hematogénne pneumokokové lézie, ako aj sinusitída, mastoiditída, zápal stredného ucha, endokarditída a peritonitída sú celkom bežné u jedincov s oslabenou imunitou (napr. HIV-infikovaných) alebo pacientov so splenektómiou. Po ochorení vzniká nestabilná imunita, ktorá je typovo špecifická a v dôsledku výskytu protilátok proti typickému kapsulárnemu polysacharidu.

Liečba. Základom terapie pri pneumokokovej infekcii sú antibiotiká – penicilín, tetracyklín, levomycetín, vankomycín, rifampicín, ceftriaxón.

Prevencia. Nešpecifická prevencia pneumokokových infekcií je zameraná na identifikáciu pacientov a nosičov s ich následnou liečbou. Pre špecifickú prevenciu infekcie sa polyvalentnou polysacharidovou vakcínou Pneumovex 23 očkujú deti od dvoch rokov, rizikoví dospelí, ale aj zdraví jedinci v období prepuknutia ochorenia. Liek obsahuje 23 pneumokokových kapsulárnych polysacharidových antigénov (1, 2, 3, 4, 5, 6B 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 20, 19, 22F, 23F, 33F). Antigény

pneumokoky boli získané z 90 % kmeňov izolovaných z krvi pacientov s invazívnou pneumokokovou infekciou v USA a zodpovedajúcich kmeňom vyskytujúcim sa v Rusku. Imunizácia sa vykonáva dvakrát v intervale 5-8 rokov.

Po očkovaní vzniká umelá, aktívna, typovo špecifická imunita.

Laboratórna diagnostika. „Zlatým štandardom“ je izolácia patogénu. Malo by sa pamätať na to, že materiál sa musí rýchlo preskúmať, pretože. baktérie sú náchylné na rýchlu autolýzu v dôsledku aktivity vnútrobunkových enzýmov. Materiál na štúdium je spútum, pleurálny výpotok a iné exsudáty, cerebrospinálny mok, krv, hlien z nosa a hrdla, výtok z očných vredov, výtok z ucha, moč, kúsky orgánov (v prípade úmrtia pacienta) . Signál na pneumokokovú infekciu môže byť vydaný, ak sa v náteroch zo spúta detegujú neutrofily a grampozitívne kopijovité diplokoky (najmenej 10 na zorné pole). V opačnom prípade sa uchýlite k izolácii patogénu.

Prvá etapa štúdie. Patologický materiál sa podrobí predbežnej bakterioskopii (okrem krvi). Spútum sa vloží do sterilnej Petriho misky, umyje sa, hnisavo-slizovitá hrčka sa zachytí slučkou, rozotrie na podložnom sklíčku, vysuší a zafarbí podľa Grama. V nátere sa nachádzajú grampozitívne kopijovité alebo oválne koky obklopené kapsulou (tvorba kapsuly sa pozoruje iba u pneumokokov izolovaných z chorých a infikovaných zvierat). Identifikácia pneumokokových kapsúl sa môže uskutočniť pomocou metódy Burri-Gins. Inokulácia patologického materiálu sa uskutočňuje na 5-10% krvnom alebo sérovom agare a obohatenom médiu (8-10% sérový bujón). Pri podozrení na pneumokokovú sepsu sa 5-10 ml krvi pacienta naočkuje do 45-90 ml sérového bujónu. Cerebrospinálny mok, ak je číry, sa odstredí a niekoľko kvapiek zo sedimentu sa naočkuje na živné pôdy. Ako obohacovacie médium sa používa polotekutý sérový agar. Kultúry sa inkubujú pri 37 °C počas 24 hodín. Najlepšou metódou na izoláciu čistej kultúry pneumokokov je infikovanie bielych myší patologickým materiálom. Spútum premyté v Petriho miske sterilným fyziologickým roztokom sa rozomelie v sterilnej mažiari sterilným tĺčikom alebo rozbitým pohárom s prídavkom fyziologického roztoku v pomere 1:2-1:5. Suspenzia sa usadí, supernatant v množstve 0,5 až 1 ml sa podáva bielym myšiam intraperitoneálne. V prítomnosti pneumokokov v materiáli myši uhynú do 72 hodín. V náteroch z orgánov a krvi sa nachádzajú typické pneumokoky. Orgány a krv sa kultivujú aj na sérovom bujóne a na Petriho miskách s krvou alebo sérovým agarom.

Druhá etapa štúdie.Študujte povahu rastu na živných pôdach. Na krvnom agare sú kolónie pneumokokov malé, okrúhle, s hladkými

okraje, jemné, obklopené zónou ekologizácie prostredia (ktorá veľmi pripomína rast zelených streptokokov). Na sérovom agare sú kolónie jemné, priesvitné a priehľadné. S bakterioskopiou náterov zafarbených Gram. nájsť grampozitívne diplokoky bez kapsúl. Po bakterioskopii sa kolónie podozrivé z pneumokokov subkultivujú na šikmom sére alebo krvnom agare alebo sérovom bujóne. Mikroskopia náterov z obohacovacieho média spolu s rôznou mikroflórou môže odhaliť grampozitívne koky usporiadané do párov alebo krátkych reťazcov. Materiál z obohacovacieho média sa prenesie do pevného živného média. Plodiny sa inkubujú pri 37 °C počas 24 hodín.

Tretia etapa štúdie. Na šikmom krvnom agare tvoria pneumokoky jemný, tenký, priesvitný povlak. Na srvátkovom vývare spôsobujú pneumokoky zákal a ľahký sediment. V náteroch z pevných kultivačných médií môžu mať pneumokoky rôzny vzhľad. Spolu s diplokokmi predĺženého tvaru so špičatými vonkajšími koncami pripomínajúcimi plameň sviečky existujú bunky správneho oválneho a okrúhleho tvaru. V bujónovej kultúre sú pneumokoky často usporiadané v reťazcoch. Na základe morfologických a kultúrnych vlastností pneumokokov je ťažké odlíšiť ich od viridujúcich streptokokov, preto bol navrhnutý súbor špeciálnych testov na ich diferenciáciu:

Rozpustnosť v žlči (deoxycholátový test);

Schopnosť rozkladať inulín;

Citlivosť na optochín;

Aglutinačná reakcia so špecifickými antipneumokokovými sérami;

Schopnosť degradovať glukózu, maltózu, sacharózu, laktózu, manitol, sorbitol a salicín.

Najdostupnejšie metódy, ktoré odlíšia pneumokoky od iných streptokokov, sú test s optochínom (inhibuje ich rast); od zelených streptokokov sa vyznačujú schopnosťou fermentovať inulín, ako aj citlivosťou na žlč.

Deoxycholátový test. Po predbežnej bakterioskopii sa 10 kvapiek izolovanej čistej kultúry (výhodne bujónu) pridá do skúmavky s 5 kvapkami sterilnej hovädzej žlče. Kontrolou je kultúra zavedená do skúmavky s 5 kvapkami fyziologického roztoku. Po 30-60 minútach inkubácie pri 37 °C sa pozoruje úplná lýza kultúry vo forme vyčírenia v skúmavke žlčou, v kontrolnej skúmavke zostáva zmes zakalená. Malo by sa pamätať na to, že avirulentné kultúry pneumokokov sú odolné voči žlči.

Odolnosť žlče sa môže testovať aj inokuláciou do 10 % žlčového bujónu. Testovaný materiál sa pridá do média, kým sa bujón zakalí. Po 24-hodinovej inkubácii pri 37 °C sa prítomnosť pneumokokov prejaví vyčistením bujónu v dôsledku lýzy baktérií.

Môžete tiež použiť disky namočené v 20% roztoku žlče. Disky sa umiestnia na pestovanú kultúru v miske a inkubujú sa 1 až 2 hodiny pri 37 °C. V prítomnosti pneumokokov lýzujú kolónie okolo disku vo vzdialenosti 1-2 mm.

Inulínový test. Pneumokoková kultúra sa naočkuje na médium s inulínom. K tomu sa pridá 200 ml sterilnej destilovanej vody, 18 ml lakmusovej tinktúry a 3 g inulínu do 100 ml bovinného séra zahrievaného na 56 °C počas 30 minút, sterilizovaného prúdom pary počas 30 minút. Kultúry sa inkubujú pri 37 °C počas 24 hodín. Pneumokok rozkladá inulín, čo spôsobuje sčervenanie média. Zelený streptokok nespôsobuje začervenanie okolia.

Test s optochínom. Testovaná pneumokoková kultúra sa naočkuje do sérového bujónu s optochínom v riedení 1:100 000 alebo 1:200 000. Pneumokok v takomto prostredí nerastie. Citlivosť na optochín je tiež možné určiť naočkovaním na 10 % krvný agar obsahujúci optochín v riedení 1:50 000. Kontrolou je kultivácia na krvnom agare. Pneumokoky nerastú na médiu s Optochinom, rast pneumokokov je pozorovaný na kontrolnom médiu. Môžete použiť disky impregnované 6 μg optochínu, ktoré sa aplikujú po naočkovaní na povrch média. Pri pneumokokoch sa okolo disku vytvorí zóna inhibujúca rast s priemerom najmenej 18 mm.

Test virulencie. Denná kultúra pneumokoka pestovaná na srvátkovom bujóne sa zriedi 1% sterilnou peptónovou vodou (pH - 7,6) alebo mierne alkalickým bujónom na 1:10. Zriedená kultúra sa podáva intraperitoneálne bielym myšiam s hmotnosťou 16-20 g v objeme 0,5 ml a pozoruje sa 72 hodín. Orgány mŕtvej myši sa naočkujú na živné médiá a odtlačky sa mikroskopicky skúmajú. Medzi vysoko virulentné kultúry patria pneumokoky, ktoré spôsobujú smrť myší po zavedení kultúry v riedení 1:10. Avirulentné kultúry nespôsobujú smrť myší.

Sérotypizácia pneumokokov. 18-hodinová kultúra sa testuje v Sabinovom mikroaglutinačnom teste. Na podložné sklíčko sa aplikujú 4 kvapky pneumokokovej kultúry. Na 1 kvapku pridajte kvapku antipneumokokového séra 1. typu, do 2. - séra typu II, do 3. - séra - 111, do 4. - kvapku normálneho séra. Zmesi na skle sa miešajú slučkou a skúmajú sa pod lupou alebo pod mikroskopom pri malom zväčšení. V pozitívnom prípade sa aglutinácia pozoruje v jednej z prvých troch kvapiek. Typ pneumokoka sa určuje v aglutinačnej reakcii so špecifickými aglutinačnými sérami prvých troch fixných typov. Kultúry, ktoré neaglutinujú s týmito typmi sér, sú zaradené do X-skupiny. Reakcia je nastavená nasledovne. Nalejte 18-hodinovú bujónovú kultúru v 0,5 ml do skúmaviek. Potom pridajte rovnaký objem séra zriedeného fyziologickým roztokom v pomere 1:5. Kontroly sú 2 skúmavky, z ktorých jedna obsahuje zmiešanú testovaciu kultúru

normálne králičie sérum a druhé - iba testovacia kultúra. Obsah skúmaviek sa dôkladne pretrepe a umiestni na 2 hodiny do termostatu pri teplote 37 °C, potom sa uskutoční predbežný výpočet reakcie. Konečné výsledky sa zaznamenajú po ďalšej inkubácii pri teplote miestnosti počas 20 hodín. Aglutinácia je hodnotená 4 plus, ak je obsah skúmaviek úplne číry a aglutinačná kultúra je hustý film, ktorý sa pri trepaní neláme; o tri plusy, ak sa pri úplnom objasnení obsahu skúmavky aglutinačná kultúra ľahko rozbije na kúsky; dva plusy - ak nedôjde k osvieteniu, častice aglutinovanej kultúry sú jasne viditeľné voľným okom v zakalenom obsahu skúmavky; pri aglutinácii o jedno plus v skúmavke sa nájde jemnozrnná zmes zlepených pneumokokov. Pri negatívnej reakcii viditeľnej pre oko nie je pozorovaná aglutinácia;

obsah skúmaviek po pretrepaní je rovnomerný zákal.

Typizácia pneumokokov skupiny X sa uskutočňuje pomocou skupiny

séra obsahujúce zmes typických odobratých aglutinačných sér

v rovnakých objemoch. Nasledujúce skupinové séra sú pripravené

zmiešanie rovnakých objemov neriedeného štandardného diagnostického roztoku

sera (Lund, I960):

sérovary A-1, II, IV, V, XVIII;

sérovary B - VI, VIII, XIX;

C - VII, XX. sérovary XXIV, XXXI, XL;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. sérovary XXXVII;

E - X, XXI. sérovary XXXIII, XXXIX;

F-XII. XVII. sérovary XXII, XXXVII, XXXII, XLI;

G - XIII, XXV. sérovary XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII;

J-XLIII. sérovary XLIV, XLV, XLVI.

Aglutinačné sérum typu III sa používa samo o sebe (bez miešania s inými typickými sérami) kvôli ťažkostiam s jeho získaním v dostatočne vysokom titri. Typizácia sa vykonáva v dvoch krokoch: najprv pomocou skupinových sér a potom individuálnych sér skupiny, s ktorou bola získaná pozitívna reakcia. Pneumokoková sérotypizácia sa používa predovšetkým na epidemiologické štúdie výsledkov špecifickej séroterapie a séroprofylaxie.

Mikroaglutináciu pneumokokov Sabinovou metódou možno dosiahnuť zmiešaním antipneumokokových sér s exsudátom z brušnej dutiny myši infikovanej spúta pacienta. Už štyri hodiny po infekcii sa v exsudáte nachádza čistá kultúra pneumokokov, ktorá dáva pozitívnu Sabinovu aglutináciu.

Zrýchlené metódy detekcie a typizácie pneumokokov. 1. Neufeldova metóda alebo fenomén opuchu pneumokokovej kapsuly. Jedna hrudka čerstvo izolovaného spúta pacienta sa aplikuje na tri

krycích sklíčok, do každého z nich pridajte kvapku neriedeného špecifického antipneumokokového séra (1, II, III typ) a kvapku Loefflerovej modrej. Kvapky sa dôkladne premiešajú, prikryjú sa podložným sklíčkom s otvorom natretým po okrajoch vazelínou. Po dvoch minútach sa visiace kvapky skúmajú pod mikroskopom s imerzným systémom. V pozitívnom prípade sa pozoruje prudký nárast pneumokokových kapsúl. S negatívnym výsledkom sú kapsuly sotva ocenené. Napučiavacia reakcia je špecifická a nedáva pozitívny výsledok s inými kapsulárnymi baktériami. Nepoužívam ho na štúdium spúta od pacientov liečených sulfónamidmi a antibiotikami, tk. v tomto prípade možno izolovať kapsulárne pneumokoky.

2. Spôsob zrážania. 5-10 ml spúta sa varí vo vodnom kúpeli, kým sa nedosiahne hustá zrazenina. Zrazenina sa rozotrie a pridá sa malé množstvo fyziologického roztoku, opäť sa niekoľko minút varí, aby sa extrahoval špecifický polysacharid z pneumokokov. Suspenzia sa odstredí, s výslednou čírou kvapalinou a špecifickým typickým sérom v precipitačných skúmavkách, uskutoční sa kruhová precipitačná reakcia. Vzhľad krúžku na rozhraní medzi kvapalinami naznačuje pozitívny výsledok.

3. Stanovenie pneumokokových kapsúl podľa Burriho. Na koniec podložného sklíčka sa nanesie kvapka testovaného materiálu a kvapka atramentu. Zmes sa premieša a urobí sa náter, vysuší sa na vzduchu a bez fixácie mikroskopicky. Pozadie lieku je tmavé dymové, mikrobiálne telá a ich kapsuly nie sú zafarbené. Prípravok vyrobený podľa Burriho je možné fixovať Nikiforovovou zmesou, premyť vodou, zafarbiť Tsilya fuchsínom, riediť 1:3 po dobu 3-5 minút. Na tmavom pozadí náteru vystupujú nezafarbené kapsuly, vo vnútri ktorých sú baktérie jasne karmínovej farby (metóda Gins).

šarlach spôsobujú rôzne sérotypy beta-hemolytických streptokokov s M-antigénom a produkujú erytrogenín (toxické streptokoky séroskupiny A) - (Streptococcus pyogenes). Pri absencii antitoxickej imunity sa vyskytuje šarlach, v prítomnosti angíny pectoris.

Klinický obraz

 Intoxikácia – horúčka, celková nevoľnosť, bolesti hlavy.

 Scarlatina vyrážka – jemne bodkovaná, pri miernom tlaku sklenenou špachtľou sú škvrny zreteľnejšie viditeľné. Pri silnejšom stlačení vyrážka ustúpi zlatožltému odtieňu pokožky. Objavuje sa na 1. – 3. deň choroby a je lokalizovaný najmä na lícach, v slabinách, po stranách tela. Koža nasolabiálneho trojuholníka zostáva bledá a bez vyrážok. Vyrážka zvyčajne trvá 3-7 dní, potom zmizne a nezanechá žiadnu pigmentáciu. Charakterizované zhrubnutím vyrážky na záhyboch končatín - axilárne, lakťové, popliteálne oblasti.

 Šarlátový jazyk – na 2. – 4. deň choroby sa jazyk pacienta stáva výrazne zrnitým, jasnočerveným, takzvaným „karmínovým“ jazykom.

 Angína je stálym príznakom šarlachu. Môže byť závažnejšia ako bežná angína.

 olupovanie kože - vzniká po vymiznutí vyrážky (14 dní po nástupe ochorenia): v oblasti dlaní a chodidiel je veľkolamelárna, začínajúca od končekov prstov; na trupe, krku, ušných uškách šupinatý peeling.

Pneumokoky, taxonómia. Vlastnosti. Sérologické skupiny. Charakteristické znaky od iných streptokokov. Spôsobené choroby. Princípy a metódy laboratórnej diagnostiky.

Morfológia a biologické vlastnosti. Pneumokoky (Streptococcus pneumoniae) sú párové koky oválneho, mierne pretiahnutého kopijovitého tvaru, pripomínajúce plameň sviečky. Môžu sa nachádzať aj v krátkych reťazcoch, pripomínajúcich streptokoky. Sú nepohyblivé, netvoria spóry a sú grampozitívne.
Pestujú sa na médiách s prídavkom proteínu: krv, sérum, s ascitickou tekutinou. Na krvnom agare sú kolónie pneumokokov malé, pripomínajúce kvapky rosy, priehľadné v prechádzajúcom svetle, s vydutým stredom, obklopené zónou neúplnej hemolýzy, zelenkastým odtieňom, podobne ako kolónie viridujúceho streptokoka. Na tekutých médiách vytvárajú jemný zákal, niekedy tvoriaci zrazeninu. Sú dosť aktívne biochemicky: rozkladajú glukózu, laktózu, maltózu, inulín a iné sacharidy za tvorby kyseliny, neskvapalňujú želatínu, netvoria indol. Štiepenie inulínu je diferenciálny diagnostický znak, ktorý pomáha rozlíšiť pneumokoky od streptokokov, ktoré inulín nerozkladajú. Dôležitým rozlišovacím znakom je schopnosť pneumokokov rozpúšťať sa v žlči, pričom streptokoky sú v nej dobre zachované.

Patogenéza a klinika. Pneumokoky sú pôvodcami lobárnej pneumónie u ľudí. Môžu tiež spôsobiť plazivé vredy rohovky, katary horných dýchacích ciest, meningitídu, endokarditídu, poškodenie kĺbov a iné ochorenia.

Po chorobe je imunita nízkonapäťová, krátkodobá, typovo špecifická.
Mikrobiologická diagnostika. Materiálom pre štúdiu je spútum, krv, výter z hrdla, cerebrospinálna tekutina. Vzhľadom na to, že pneumokok rýchlo umiera, je potrebné čo najskôr dopraviť patologický materiál do laboratória na výskum.

Meningokok. Taxonómia, vlastnosti. Antigénna štruktúra meningokokov, klasifikácia. Patogenéza meningokokovej infekcie, klinické prejavy. Princípy a metódy mikrobiologickej diagnostiky. Diferenciácia pôvodcu meningokokovej infekcie a iných meningokokov. špecifická profylaxia.

N. meningitidis (meningokoky).

Meningokok je pôvodcom meningokokovej infekcie – závažnej antroponózy s kvapôčkovým prenosom patogénu vzduchom. Hlavným zdrojom sú nosiče. Prirodzeným rezervoárom je ľudský nosohltan. Morfologické, kultúrne a biochemické vlastnosti sú podobné gonokokom. Rozdiely - fermentujú nielen glukózu, ale aj maltózu, produkujú hemolyzín. Majú kapsulu, ktorá je väčšia a má inú štruktúru ako gonokok.

antigénne zloženie. Majú štyri hlavné antigénne systémy.

1. Polysacharidové antigény špecifické pre kapsulárnu skupinu. Kmene séroskupiny A najčastejšie spôsobujú epidémiu.

2. Proteínové antigény vonkajšej membrány. Podľa týchto antigénov sa meningokoky séroskupiny B a C delia do tried a sérotypov.

3. Rodovo a druhovo špecifické antigény.

4. Lipopolysacharidové antigény (8 typov). Majú vysokú toxicitu, spôsobujú pyrogénny účinok.

faktory patogénnosti. Adhézne faktory a kolonizácia - pili a proteíny vonkajšej membrány. Faktory invazivity - hyaluronidáza a ďalšie produkované enzýmy (neuraminidáza, proteázy, fibrinolyzín). Veľký význam majú kapsulárne polysacharidové antigény, ktoré chránia mikroorganizmy pred fagocytózou.

Imunita odolný, antimikrobiálny.

Laboratórna diagnostika na báze bakterioskopie, izolácia kultúry a jej biochemická identifikácia, sérologické diagnostické metódy. Inokulácia materiálu sa uskutočňuje na pevných a polotekutých živných médiách obsahujúcich krv, ascitickú tekutinu a krvné sérum.

Oxidáza pozitívne kultúry sa považujú za patriace do rodu Neisseria. Meningokok sa vyznačuje fermentáciou glukózy a maltózy. Príslušnosť k séroskupine sa zisťuje aglutinačným testom (RA).

Gonokoka. Taxonómia, vlastnosti. Patogenéza gonokokovej infekcie, znaky imunity. Princípy a metódy laboratórnej diagnostiky akútnej a chronickej kvapavky, blennorrhea. RSK Borde-Zhangu, účel, mechanizmus, účtovanie odozvy. Prevencia blennorrhea u novorodencov. Prevencia a liečba kvapavky. špecifická terapia.

N.gonorrheae (gonokok).

Gonokok je pôvodcom kvapavky, pohlavného ochorenia so zápalovými prejavmi v močových cestách. Substrátom pre kolonizáciu je epitel močovej trubice, konečníka, spojovky oka, hltana, krčka maternice, vajcovodov a vaječníkov.

Diplokoky sa dobre farbia metylénovou modrou a inými anilínovými farbivami, pleomorfné (polymorfizmus). Veľmi náladový na podmienky pestovania a živných médií. Zo sacharidov sa fermentuje iba glukóza.

Antigénna štruktúra veľmi variabilné – charakterizované fázovými variáciami (miznutie antigénnych determinantov) a antigénnymi variáciami (zmenami antigénnych determinantov).

faktory patogénnosti. Hlavnými faktormi sú vypil, pomocou ktorej gonokoky uskutočňujú adhéziu a kolonizáciu epitelových buniek sliznice močového traktu a lipopolysacharid(endotoxín, uvoľnený pri ničení gonokokov). Gonokoky syntetizujú IgAI, proteázu, ktorá štiepi IgA.

Laboratórna diagnostika. Bakterioskopická diagnóza zahŕňa Gramovo farbenie a metylénovú modrú. Typickými príznakmi gonokoka sú gramnegatívne farbenie, diplokoky v tvare fazule, intracelulárna lokalizácia.

Výsev sa vykonáva na špeciálne médiá (KDS-MPA z králičieho mäsa alebo hovädzieho srdca so sérom, ascites-agar, krvný agar).

Pôvodcovia plynovej anaeróbnej infekcie. Taxonómia. Vlastnosti. vlastnosti toxínov. Patogenéza, klinické formy. Princípy a metódy laboratórnej diagnostiky, lieky na špecifickú prevenciu a liečbu.

Plynová gangréna je anaeróbna polyklostridiová (t. j. spôsobená rôznymi typmi klostrídií) ranná (traumatická) infekcia. Primárny význam má C.perfringens, menej často C.novyi, ako aj iné typy klostrídií v pretrvávajúcich vzájomných asociáciách, aeróbne pyogénne koky a hnilobné anaeróbne baktérie.

C.perfringens je bežným obyvateľom čriev ľudí a zvierat, do pôdy sa dostáva výkalmi. Je pôvodcom infekcie rany – spôsobuje ochorenie, keď sa patogén dostane do rany v anaeróbnych podmienkach. Je vysoko invazívny a toxigénny. Invazívnosť je spojená s produkciou hyaluronidázy a iných enzýmov, ktoré majú deštruktívny účinok na svalové a spojivové tkanivá. Hlavné faktor patogenity - exotoxín, ktorý má hemo-, nekro-, neuro-, leukotoxické a letálne účinky. V súlade s antigénnou špecifickosťou exotoxínov sa izolujú sérotypy patogén. Spolu s plynovou gangrénou spôsobuje C. perfringens otravu jedlom (sú založené na pôsobení enterotoxínov a nekrotoxínov).

Vlastnosti patogenézy. Na rozdiel od hnisavých ochorení spôsobených aeróbmi v anaeróbnej infekcii nedominuje zápal, ale nekróza, edém, tvorba plynu v tkanivách, otravy toxínmi a produktmi rozpadu tkaniva.

Imunita- prevažne antitoxický.

Laboratórna diagnostika zahŕňa bakterioskopiu výtoku z rany, izoláciu a identifikáciu patogénu, detekciu a identifikáciu toxínu v biotestoch pomocou neutralizačnej reakcie so špecifickými antitoxickými protilátkami.

Prevencia a liečba. Prevencia plynatej gangrény je založená na včasnom a správnom chirurgickom ošetrení rán. V prípade ťažkých rán sa podávajú antitoxické séra proti hlavným typom klostrídia, po 10 000 IU, na liečebné účely - po 50 000 IU.

Clostridia tetanus. Taxonómia. Vlastnosti, charakteristika toxínov. Patogenéza ochorenia. Zostupný tetanus. POLIKLINIKA. Princípy a metódy laboratórnej diagnostiky. Účel bakteriologického výskumu, prípravky na špecifickú prevenciu a liečbu.

Tetanus je akútna infekcia rany charakterizovaná léziami neurotoxín motorických buniek miechy a mozgu, čo sa prejavuje v podobe kŕčov priečne pruhovaného svalstva. Ľudia a hospodárske zvieratá ochorejú. Pôda, najmä kontaminovaná ľudskými a zvieracími výkalmi, je stálym zdrojom tetanovej infekcie.

Patogén - C.tetani - veľký grampozitívny bacil tvoriaci spóry. Výtrusy sú umiestnené terminálne (druh paličky), pohyblivé vďaka bičíkom - peritrichózne. Povinné anaeróbne. Spóry sú veľmi odolné.

antigénne vlastnosti. Príčinný činiteľ má O- a H- antigény.

faktory patogénnosti. Hlavným faktorom je najsilnejší exotoxín. Rozlišujú sa jeho dve hlavné frakcie - tetanospazmín (neurotoxín) a tetanolyzín (hemolyzín). Neurotoxín v centrálnom nervovom systéme preniká do oblasti myoneurálnych synapsií, prenáša sa z neurónu na neurón v oblasti synapsií, hromadí sa v motorických oblastiach chrbtice a mozgu, blokuje synaptický prenos. Smrť nastáva ochrnutím dýchacieho centra, asfyxiou (poškodenie svalov hrtana, bránice, medzirebrových svalov) alebo ochrnutím srdca.

Laboratórna diagnostika. Mikrobiologická diagnostika zahŕňa bakterioskopiu surovín, kultiváciu na izoláciu patogénu a jeho identifikáciu, detekciu tetanového toxínu.

Izolácia patogénu sa uskutočňuje podľa štandardnej schémy pre anaeróby s použitím rôznych hustých a tekutých (Kitt-Tarozziho médium) médií, identifikácia je založená na morfologických, kultúrnych, biochemických a toxigénnych vlastnostiach.

Najjednoduchšou a najúčinnejšou metódou mikrobiologickej diagnostiky je biotest na bielych myšiach. Jedna skupina je infikovaná testovaným materiálom, druhá (kontrola) - po zmiešaní vzoriek s antitoxickým tetanovým sérom. V prítomnosti tetanového toxínu pokusná skupina myší uhynie, zatiaľ čo kontrolná skupina zostáva nažive.

Liečba a núdzová prevencia. Používa sa darcovský tetanový imunoglobulín (antitoxín), antitoxické sérum (350 IU/kg), antibiotiká (penicilíny, cefalosporíny). Na vytvorenie vakcinačnej imunity sa používa tetanový toxoid, častejšie ako súčasť DTP vakcíny (tetanové toxoidy, záškrt a usmrtený čierny kašeľ).

Clostridia botulinum. Taxonómia. Vlastnosti. Charakteristika toxínov, rozdiel od exotoxínov patogénov iných alimentárnych infekcií. Princípy a metódy laboratórnej diagnostiky. Lieky na špecifickú prevenciu a liečbu.

Botulizmus je ťažká otrava jedlom spojená s používaním produktov kontaminovaných C. botulinum a je charakterizovaná špecifickou léziou centrálneho nervového systému. Svoj názov dostala od lat. botulus - klobása.

Vlastnosti budiča. Veľké polymorfné grampozitívne tyčinky, pohyblivé, majú peritrichózne bičíky. Výtrusy sú oválne, umiestnené subterminálne (tenisová raketa). Tvorí sa osem typov toxínov, ktoré sa líšia antigénnou špecifickosťou, a podľa toho sa izoluje 8 typov patogénov. Medzi najdôležitejšie charakteristiky patrí prítomnosť alebo absencia proteolytických vlastností (hydrolýza kazeínu, tvorba sírovodíka).

Toxín ​​má neurotoxický účinok. Toxín ​​vstupuje do tela s jedlom, hoci sa pravdepodobne môže hromadiť, keď sa patogén rozmnožuje v tkanivách tela. Toxín ​​je termolabilný, hoci na úplnú inaktiváciu je potrebný až 20-minútový var. Toxín ​​sa rýchlo vstrebáva v gastrointestinálnom trakte, preniká do krvi, selektívne pôsobí na jadrá medulla oblongata a gangliové bunky miechy. Rozvíjajú sa neuroralytické javy - poruchy prehĺtania, afónia, dysfágia, oftalmoplegický syndróm (strabizmus, dvojité videnie, pokles očných viečok), paralýza a paréza hltanových a hrtanových svalov, zástava dýchania a srdca.

Laboratórna diagnostika. Princípy sú spoločné pre klostrídie.

Liečba a prevencia. Základom je skoré použitie antitoxických sér (polyvalentných alebo, keď je daný typ, homológnych). Prevencia je založená na sanitárnom a hygienickom režime pri spracovaní potravinárskych výrobkov. Nebezpečné sú najmä domáce konzervované huby a iné produkty skladované v anaeróbnych podmienkach.

11. Pseudomonas aeruginosa. Taxonómia. Vlastnosti. Spôsobené choroby.
Úloha pri nozokomiálnych infekciách. Princípy a metódy laboratórnej diagnostiky.

Rod pseudomonas, P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) je jedným z hlavných pôvodcov lokálnych a systémových purulentno-zápalových procesov v zdravotníckych nemocniciach.

Patogén je všadeprítomný (voda, pôda, rastliny, živočíchy), bežne sa vyskytuje u človeka (najčastejšie v črevách, na koži a slizniciach). Morfológia- Gramnegatívna rovná alebo mierne zakrivená tyčinka, pohyblivá, umiestnená v škvrnách jednotlivo, v pároch alebo v krátkych reťazcoch. Syntetizuje hlien (kapsulárnu látku), najmä virulentnejšie mukoidné kmene.

kultúrne vlastnosti. Je to aerób a má súbor enzýmov zodpovedajúcich typu dýchania (cytochrómy, cytochrómoxidáza, dehydrázy).Na tekutých médiách vytvára sivasto-strieborný film.Na hustých médiách sa často pozoruje fenomén dúhovej lýzy. koniec dňa v dôsledku syntézy pigmentu pyocyanín objaví sa modrozelená farba kultúry.

biochemické vlastnosti. Pseudomonas aeruginosa sa vyznačuje nízkou sacharolytickou aktivitou (oxiduje iba glukózu), vysokou proteolytickou aktivitou a tvorbou beta-hemolýznej zóny na krvnom agare. Syntetizuje trimetylamín, ktorý dodáva plodinám príjemnú vôňu jazmínu. Vytvára produkciu bakteriocínov - pyocíny.

Antigénne a patogénne vlastnosti. Hlavnými antigénmi Pseudomonas aeruginosa sú skupinovo špecifický somatický O-antigén a typovo špecifický bičíkový H-antigén. O-antigénny komplex - agregát LPS s proteínmi a lipidmi bunkovej steny, má vlastnosti endotoxínu, je jedným z hlavných faktorov patogenity. Pseudomonas aeruginosa má veľký súbor faktorov patogenity - endotoxín (LPS, podobne ako iné gramnegatívne baktérie), množstvo exotoxínov - cytotoxín, exoenzým S, hemolyzíny, exotoxín A (najdôležitejší, pripomína difterický exotoxín), enzýmy (kolagenáza neuraminidáza, proteázy).

Laboratórna diagnostika. P.aeruginisa dostala svoj názov pre modrozelené sfarbenie oddeliteľných rán a obväzov. Hlavná diagnostická metóda je bakteriologická. Dôležitá je detekcia pigmentu pyocyanínu. Liečba a špecifická prevencia.Špecifická prevencia neexistuje. Pri otravách jedlom a črevnej dysbakterióze spôsobenej Pseudomonas aeruginosa je účinný komplexný intesti - bakteriofág, ktorý zahŕňa pseudomonas fág. Z antibakteriálnych liečiv sa častejšie používajú aminoglykozidy, cefalosporíny a chinolóny.

Podmienečne patogénne gramnegatívne baktérie - pôvodcovia purulentno-zápalových procesov (Proteus, Klebsiella, zázračná tyčinka atď.), Taxonómia. Všeobecné charakteristiky enterobaktérií. Princípy a metódy laboratórnej diagnostiky.

Rod Klebsiella.

Rod Klebsiella patrí do čeľade Enterobacteriaceae. Charakteristickým znakom predstaviteľov rodu je schopnosť vytvárať kapsulu. Hlavným druhom je K. Pneumoniae. Spôsobujú oportúnne lézie - nozokomiálne pneumónie, infekcie močových ciest, hnačky u novorodencov. Klebsiella spôsobujú mastitídu, septikémiu a zápal pľúc u zvierat, neustále sa nachádzajú na koži a slizniciach ľudí a zvierat. Klebsiella - rovné, nehybné palice rôznych veľkostí. fakultatívne anaeróby. Oxidáza - negatívna, kataláza - pozitívna.

faktory patogénnosti. Patria sem polysacharidová kapsula (K-antigén), endotoxín, fimbrie, sideroforový systém (viaže železnaté ióny a znižuje ich obsah v tkanivách), termolabilné a termostabilné exotoxíny.

Klinické prejavy. K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) je charakterizovaná nemocničnou bronchitídou a bronchopneumóniou, lobárnou pneumóniou, infekciami močových ciest, léziami mozgových blán, kĺbov, chrbtice, očí, ako aj bakteriémiou a septikopyémiou. Poddruh ozaenae spôsobuje zvláštnu formu chronickej atrofickej rinitídy - jazero.

Laboratórna diagnostika. Hlavná metóda je bakteriologická. Liečba. Jednou z čŕt Klebsielly je ich rezistencia voči viacerým liekom a vývoj lézií na pozadí poklesu odolnosti tela. Antibiotiká sa používajú na generalizované a pomalé chronické formy Klebsiellézy, zvyčajne v kombinácii s liekmi, ktoré stimulujú imunitný systém.

Rod Proteus.

Rod Proteus patrí do čeľade Enterobacteriaceae. Rod bol pomenovaný na počesť syna Poseidona Protea, ktorý je schopný zmeniť svoj vzhľad. Zástupcovia rodu sú schopní meniť vonkajšie prejavy rastu na hustých živných médiách a tiež sa vyznačujú najväčším pleomorfizmom (variabilita morfológie) v porovnaní s inými enterobaktériami.

Proteíny rozkladajú tyrozín, obnovujú dusičnany, oxidáza je negatívna, kataláza je pozitívna. Žijú v črevách mnohých druhov stavovcov a bezstavovcov, pôde, odpadových vodách a rozkladajúcich sa organických zvyškoch. Môže spôsobiť infekcie močových ciest u ľudí, ako aj septické lézie u pacientov s popáleninami a po operáciách. Pomerne často spôsobujú aj otravu jedlom. Najbežnejšiu úlohu v patológii majú P.vulgaris a P.mirabilis.

kultúrne vlastnosti. Protey rastú na jednoduchých médiách v širokom rozsahu teplôt. Optimálne pH je 7,2-7,4, teplota je od +35 do 37 stupňov Celzia. Kolónie Proteus v O-forme sú zaoblené, polopriehľadné a konvexné, H-formy poskytujú nepretržitý rast. Rast proteasov je sprevádzaný hnilobným zápachom. Charakteristický je fenomén rojenia, H-formy dávajú na MPA charakteristický plazivý porast v podobe modrasto-dymového jemného závoja. Pri výseve podľa Shushkevichovej metódy v kondenzačnej vlhkosti čerstvo narezaného MPA kultúra postupne stúpa vo forme závoja po povrchu agaru. Na BCH je zaznamenaný difúzny zákal média s hustým bielym sedimentom na dne.

faktory patogénnosti. Patria sem LPS bunkovej steny, schopnosť „rojenia“, fimbria, proteázy a ureázy, hemolyzíny a hemaglutiníny.

Laboratórna diagnostika. Hlavná metóda je bakteriologická. Diferenciálne diagnostické médiá (Ploskirev), obohacovacie médiá a MPA sa používajú podľa Shushkevichovej metódy. Liečba. Pri črevnej dysbakterióze spojenej s proteasmi (kolitída) je možné použiť proteus fág a prípravky s jeho obsahom (intestifag, coliproteus bakteriofág).

"Úžasná palica" (Serratia marcescens), typ baktérie spomedzi pigmentových mikroorganizmov. Gramnegatívne pohyblivé (peritrichózne) tyčinky bez spór. Podľa typu výmeny - fakultatívne anaeróbne. Na povrchu agaru tvoria hladké alebo zrnité tmavé a jasne červené kolónie s kovovým leskom. Žije v pôde, vode, potrave. Vyvíjajúc sa na chlebe (pri vysokej vlhkosti), v mlieku ich farbí na červeno; takéto výrobky sa nesmú predávať. Podmienečne patogénne pre zvieratá a ľudí; môže spôsobiť hnisavosť.

13. Escherichia. Taxonómia. Choroby spôsobené Escherichia coli. Patogénne varianty hnačkovej Escherichie. Antigénna štruktúra, klasifikácia. Vlastnosti mikrobiologickej diagnostiky. Odlíšenie hnačkovej escherichie od podmienene patogénnej.

Escherichia sú najbežnejšie aeróbne črevné baktérie, ktoré za určitých podmienok môžu spôsobiť širokú skupinu ľudských ochorení, a to ako črevných (hnačka), tak extraintestinálnej (bakteriémia, infekcie močových ciest a pod.) lokalizácie. Hlavný druh - E. coli (E. coli) - najčastejším pôvodcom infekčných ochorení spôsobených enterobaktériami. Tento patogén je indikátorom fekálneho znečistenia, najmä vody.

kultúrne vlastnosti. Na tekutých médiách poskytuje E. coli difúzny zákal, na hustých médiách vytvára S- a R-formy kolónií. Na médiu Endo pre Escherichia tvoria Escherichia coli fermentujúce laktózu intenzívne červené kolónie s kovovým leskom, nefermentujúce - svetloružové alebo bezfarebné kolónie s tmavším stredom, na Ploskirevovom médiu - červené so žltkastým odtieňom, na Levinovom médiu - tmavé modrá s kovovým leskom.

biochemické vlastnosti. Escherichia coli vo väčšine prípadov fermentuje sacharidy (glukózu, laktózu, manitol, arabinózu, galaktózu atď.) za tvorby kyseliny a plynu, tvorí indol, ale netvorí sírovodík a neskvapalňuje želatínu.

Hlavné faktory patogenity hnačkovej E.coli.

1. Faktory adhézie, kolonizácie a invázie spojené s pili, fimbriálne štruktúry, proteíny vonkajšej membrány. Sú kódované plazmidovými génmi a podporujú kolonizáciu dolného tenkého čreva.

2. Exotoxíny: cytotoníny (stimulujú hypersekréciu tekutiny črevnými bunkami, narúšajú metabolizmus voda-soľ a prispievajú k rozvoju hnačky) a enterocytotoxíny (pôsobia na bunky črevnej steny a endotel kapilár).

3. Endotoxín (lipopolysacharid).

V závislosti od prítomnosti rôznych faktorov patogenity sa hnačkové Escherichia coli delia na päť hlavných typov: enterotoxigénne, enteroinvazívne, enteropatogénne, enterohemoragické, enteroadhezívne.

4. Patogénna E. coli je charakterizovaná produkciou bakteriocínov (kolicínov).

Enterotoxigénna E. coli majú termolabilný toxín s vysokou molekulovou hmotnosťou, ktorý pôsobí podobne ako cholera, spôsobujú hnačky podobné cholere (gastroenteritída u malých detí, cestovateľská hnačka atď.).

Enteroinvazívna Escherichia coli schopný prenikať a množiť sa v bunkách črevného epitelu. Spôsobujú profúzne hnačky s prímesou krvi a veľkého množstva leukocytov (indikátor invazívneho procesu) v stolici. Klinicky pripomína úplavicu. Kmene majú určité podobnosti so Shigella (nepohyblivé, nefermentujú laktózu, majú vysoké enteroinvazívne vlastnosti).

Enteropatogénna E.coli- hlavnými pôvodcami hnačky u detí. V srdci lézií je adhézia baktérií na črevný epitel s poškodením mikroklkov. Charakterizované vodnatou hnačkou a ťažkou dehydratáciou.

Enterohemoragická Escherichia coli spôsobiť hnačku s prímesou krvi (hemoragická kolitída), hemolyticko-uremický syndróm (hemolytická anémia v kombinácii so zlyhaním obličiek). Najčastejším sérotypom enterohemoragickej Escherichia coli je O157:H7.

Enteroadhezívne E.coli netvoria cytotoxíny, sú nedostatočne študované.

Laboratórna diagnostika. Hlavným prístupom je izolácia čistej kultúry na diferenciálnom diagnostickom médiu a jej identifikácia antigénnymi vlastnosťami. Nasadili RA sadou polyvalentných OK (k O- a K-antigénom) sér.

Medzi patogénnymi streptokokmi zaujíma osobitné miesto S.pneumoniae (pneumokoky). Hrá veľmi dôležitú úlohu v ľudskej infekčnej patológii. Tento druh je jedným z hlavných pôvodcov lobárnej pneumónie. Podľa zďaleka nie úplných údajov je na svete ročne viac ako 500 000 prípadov zápalov pľúc spôsobených pneumokokmi, najmä u detí a starších ľudí. Tento mikrób spôsobuje okrem zápalu pľúc meningitídu, endokarditídu, peritonitídu, zápal stredného ucha, nádchu, sinusitídu, sepsu, plazivý vred rohovky a množstvo ďalších ochorení. Na laboratórnu diagnostiku sa používajú bakterioskopické, bakteriologické a biologické metódy. Materiál na štúdium spúta, hnisu, krvi, mozgovomiechového moku, hlienu z orofaryngu a nosohltanu, výtoku z maxilárneho sínusu, očí a uší. Je dôležité okamžite poslať materiál do laboratória a veľmi rýchlo ho analyzovať, pretože pneumokoky sú náchylné na autolýzu.

Bakterioskopické vyšetrenie

Bakterioskopické vyšetrenie materiálu (okrem krvi) sa redukuje na výrobu dvoch náterov. Jeden z nich je zafarbený Gramom, druhý - Burri-Gins, čo umožňuje identifikovať kapsulu. Pneumokoky sa nachádzajú vo forme kopijovitých diplokokov, obklopených spoločnou kapsulou. Ak sa v zornom poli zistí 10 a viac typických diplokokov, je vysoko pravdepodobné, že je prítomný S.pneumoniae. Primárna mikroskopia však neoprávňuje na stanovenie konečnej diagnózy, pretože nátery môžu obsahovať kapsulárne nepatogénne diplokoky - zástupcov normálnej mikroflóry. Preto je potrebné vykonať výsev klinického materiálu a izolovať čistú kultúru.

Bakteriologický výskum

V prípade sepsy sa 10 ml krvi naočkuje pri lôžku pacienta do liekovky obsahujúcej 100 ml séra alebo cukrového bujónu, inkubuje sa 18-20 hodín pri 37 °C, potom sa vyseje na krvný agar, izoluje sa čistá kultúra a identifikované. Pri meningitíde sa cerebrospinálny mok odstredí a sediment sa kultivuje na krvnom agare. Na ňom rastú pneumokoky vo forme malých okrúhlych kolónií obklopených zelenou zónou, v strede kolónie je viditeľná charakteristická depresia. Výsev spúta alebo hnisu na živné pôdy sa neodporúča, pretože prítomnosť saprofytickej mikroflóry inhibuje rast S.pneumoniae. Testovaný materiál je lepšie zaviesť do brušnej dutiny bielych myší. Biotest je rýchla, spoľahlivá a presná metóda na izoláciu čistej pneumokokovej kultúry. Biele myši sú na tieto baktérie veľmi citlivé a do 10-12 hodín po infekcii preniknú pneumokoky do krvi a parenchýmových orgánov, čo spôsobí sepsu. Kultivácia krvi zo srdca alebo kúskov vnútorných orgánov počas pitvy zvierat umožňuje izolovať čistú kultúru patogénu. Na identifikáciu pneumokokov sa používajú ich vlastnosti. Na rozdiel od iných druhov streptokokov S.pneumoniae nerastie na médiu s optochínom, inulín je fermentovaný a je veľmi citlivý na pôsobenie žlče (deoxycholátový test). Rýchla lýza pneumokokov pod pôsobením žlče sa dá zistiť, ak sa do 1 ml bujónovej kultúry pridá 0,5 ml žlče. Po 15-20 minútach pobytu v termostate dochádza k úplnej lýze bakteriálnych buniek. Na stanovenie sérovarov pneumokokov (teraz ich je 85) sa využíva aglutinačná reakcia na skle s typickými sérami alebo fenomén „napučiavania kapsúl“. V prítomnosti homológneho séra kapsula pneumokoka silne napučí. Ešte lepšie je, že sérotypizácia sa vykonáva s komerčnými latexovými aglutinačnými alebo koagulačnými činidlami, ktoré zobrazujú kapsulárne antigény. Zo streptokokov je významný aj rod Enterococcus, ktorého najvýznamnejšími druhmi sú E.faecalis, E.faecium a E.durans. V prírode sú dosť rozšírené. Ich hlavnou ekologickou nikou sú črevá ľudí a zvierat, ale nachádzajú sa aj v normálnej mikroflóre kože perinea, urogenitálnych orgánov, orofaryngu a nosohltanu. Môžu spôsobiť hnisavosť rán, bakteriémiu, poškodenie urogenitálneho systému, najmä u pacientov s dlhodobo fungujúcimi katétrami, otravu jedlom, črevnú dysbakteriózu, menej často endokarditídu. V náteroch z testovaného materiálu sú enterokoky usporiadané v pároch, krátkych reťazcoch alebo vo forme zhlukov, grampozitívne. Bakteriologická diagnostika enterokokových infekcií prebieha bez problémov, keďže tieto baktérie dobre rastú na jednoduchých médiách. Agar dif-3 je pre nich selektívny (do 600 ml 3% MPA pridajte 400 ml 40% žlče). Po 24 hodinách inkubácie majú kolónie, ktoré narástli, veľkosť 0,4 až 1,0 mm sivastej farby. Na krvnom agare sa okolo kolónií vyskytuje neúplná alebo úplná hemolýza. Na rozdiel od viridescentných streptokokov môžu enterokoky rásť na MPA so 6,5 % NaCl, čím sa zredukuje mlieko metylénovou modrou pri 37 °C po 4-6 hodinách. Identifikácia izolovaných kultúr sa uskutočňuje podľa morfologických, kultúrnych a biochemických charakteristík.

Strana 40 z 91

Pôvodcom lobárnej pneumónie (pneumónie) je pneumokok – Diplococcus pneumoniae, prvýkrát objavený Pasteurom v slinách muža, ktorý zomrel na besnotu (1881).
Morfológia a farbiace vlastnosti. Pneumokoky (obr. 67 a 68 na vložke) sú párové koky, ktoré majú predĺžený tvar ako lanceta. Preto sa inak nazývajú kopijovité diplokoky. Tvoriac krátke reťazce sa pneumokoky stávajú podobnými streptokokom, a preto II. F. Gamaleya ich nazval Streptococcus lanceolatus. Veľkosť buniek sa pohybuje od 0,5 x 0,75 do 1 x 1,5 mikrónu. Nemajú spóry ani bičíky. Charakteristickým znakom pneumokoka je tvorba kapsuly, ktorá je dobre vyjadrená v patologických materiáloch (spútum, krv atď.). Pri kultivácii na živných pôdach sa kapsula stratí. Pneumokoky ľahko vnímajú anilínové farbivá a pozitívne sa farbia podľa Grama.
Kultúrne a biochemické vlastnosti.

Ryža. 68. Pneumokoky v nátere spúta.

Pneumokoky sú aeróby a fakultatívne anaeróby. Optimálna teplota je okolo 37°C. Pestujte na médiách obsahujúcich živočíšne bielkoviny (krvný alebo sérový agar, ascitagar).
Na povrchu agaru sa po 24 hodinách vytvoria malé kolónie, pripomínajúce streptokoka, ale menšie a priehľadnejšie.
Na šikmom agare s bohatým očkovaním sa získa veľmi jemný priehľadný povlak pozostávajúci z najmenších nezlúčených kolónií na bujóne - mierny zákal a malá vločkovitá zrazenina.
Čerstvo izolované kmene nerastú na želatíne. Staré laboratórne kmene pneumokokov môžu vytvárať malé belavé kolónie už pri 18-22°C. Želatína nie je skvapalnená.
Rastú dobre na mlieku, zrážajú ho tvorbou kyseliny.
Na krvnom agare sa okolo kolónií vytvorí zóna neúplnej hemolýzy so zeleno-hnedým sfarbením média.

Ryža. 67. Pneumokoky v čistej kultúre z bujónu.

Pneumokoky rozkladajú sacharózu, rafinózu a laktózu. Najdôležitejšou vlastnosťou je rozklad inulínu. Väčšina streptokokov túto vlastnosť nemá. Virulentné pneumokoky sú rozpustné v žlči.
Antigénna štruktúra a sérologické typy pneumokokov. Cytoplazma pneumokokov obsahuje proteínový antigén spoločný pre všetky pneumokoky. Tento antigén určuje ich druhovú špecifickosť. Kapsula obsahuje špecifické polysacharidové antigény (haptén), ktoré sa líšia svojim chemickým zložením u rôznych pneumokokov (typické antigény). Na základe týchto typických antigénov sú všetky pneumokoky rozdelené do troch hlavných skupín (I, II, III) a štvrtej kombinovanej skupiny (X-skupina) pomocou aglutinačnej a precipitačnej reakcie. Skupina X zahŕňa viac ako 70 typov.
odpor. Na umelých živných médiách pneumokoky rýchlo zomierajú (4-7 dní). Pod vrstvou vazelínového oleja v tekutom a polotekutom médiu obsahujúcom proteín zostávajú životaschopné 3-12 mesiacov.
Pneumokoky dobre tolerujú sušenie: v suchom spúte v rozptýlenom svetle pretrvávajú až 2 mesiace. Pri zahriatí na 52-55 ° zomrú za 10 minút, pri 60 ° - ešte rýchlejšie. V roztoku kyseliny karbolovej (3%) umierajú pneumokoky za 1-2 minúty.
Pneumokoky sú obzvlášť citlivé na optochín. Pod vplyvom toho druhého zomierajú v koncentrácii 1: 1 000 000.
Tvorba toxínov a patogenita pre zvieratá. Pneumokokový jed je endotoxín. Z laboratórnych zvierat sú na pneumokoky citlivejšie biele myši a králiky. Parenterálne podanie virulentných pneumokokov po 24-48 hodinách spôsobuje smrť zvierat so sepsou. Pri pitve v mieste vpichu sa zistí fibrinózny exsudát, slezina je zväčšená a hyperemická.
Patogenéza a choroby u ľudí. Vstupnou bránou infekcie je zvyčajne sliznica hltana. Zavedenie pneumokokov do tela a ich prenikanie do pľúcneho tkaniva môže zjavne nastať tak cez lymfatický a obehový systém, ako aj priamo cez vetvenie priedušiek. Najčastejším ochorením je krupózna pneumónia, ktorá sa vyznačuje náhlym nástupom, vysokou horúčkou, niekedy so zimnicou, bolesťou v boku pri dýchaní, bolesťou hlavy, niekedy stratou vedomia, delíriom, silným vzrušením. V budúcnosti sa vyskytuje kašeľ s charakteristickým hrdzavočerveným spútom. V pľúcach je proces, ktorý zachytáva častejšie jeden, menej často - dva alebo tri laloky.
Zdrojmi infekcie sú chorý človek a bakterionosič. K infekcii zvonku dochádza jednak aerogénne - kvapôčkami z nosiča, jednak prachovou infekciou. Pneumokoky môžu v zaschnutom spúte pretrvávať dlhú dobu (asi 2 mesiace) a dostať sa do vzduchu s prachom.
Pri vyšetrovaní zdravých ľudí sa často nachádzajú patogénne pneumokoky v nosohltane, preto nie je vylúčená možnosť autoinfekcie a významnú úlohu zohrávajú faktory, ktoré oslabujú odolnosť organizmu, napríklad podchladenie.
Pneumokoky spôsobujú okrem krupózneho zápalu pľúc zápaly stredného ucha, mozgových blán (meningitída), ale aj sliznice nosa a prínosových dutín, bolesti hrdla, plazivý vred rohovky a zápal slzného vaku.
Imunita. Prenesená pneumónia neprináša imunitu. Ochorenie sa môže opakovať viac ako raz. Je to spôsobené prítomnosťou mnohých druhov pneumokokov a skutočnosťou, že zápal pľúc v minulosti zvyšuje citlivosť tela na pneumokoky.
Sérum zotavených pacientov obsahuje protilátky (aglutiníny atď.).
V čase krízy v pneumónii dosiahne koncentrácia protilátok v krvi významný titer a fagocytóza sa dramaticky zvýši (I. Ya. Chistovich). Na základe týchto údajov treba imunitu pri pneumónii považovať predovšetkým za fagocytárnu, v ktorej zohrávajú dôležitú úlohu protilátky (bakteriotropíny).
Mikrobiologická diagnostika. Materiálmi pre výskum pneumokokových ochorení sú spúta, krv a hnis odobraté z rôznych lézií, menej často likvor.
Patologický materiál (okrem krvi) sa vyšetruje bakterioskopicky, bakteriologicky a infikovaním bielych myší. K poslednej uvedenej metóde sa treba uchýliť, pretože východiskový materiál, najmä spútum, zvyčajne obsahuje hojnú cudzorodú mikroflóru, ktorá, keď je materiál priamo zasiaty na živné pôdy, sťažuje izoláciu pneumokoka.
Šmuhy zo spúta, hnisu atď. sú zafarbené podľa Grama. Pod mikroskopom sa nachádzajú kopijovité diplokoky, sfarbené podľa Grama, pozitívne obklopené kapsulou.
Kultúry sa izolujú na krvnom agare alebo ascig agare. Po 24-48 hodinách rastu pri 37° sa objavia charakteristické kolónie, ak je prítomný pneumokok. Kolónie sa nanesú na šikmé sérum alebo ascites agar a izolovaná kultúra sa skontroluje na rozpustnosť v žlči a na schopnosť degradovať inulín.
Infekcia bielej myši je najistejším spôsobom izolácie kultúry pneumokoka. Materiál od pacienta alebo mŕtvoly (spútum, hnis, kúsok orgánu atď.) sa vloží do sterilného pohára, potom sa rozomelie v sterilnej mažiari s 1-2 ml sterilného bujónu a 0,5 ml tejto suspenzie sa injekciou intraperitoneálne bielej myši. Po uhynutí myši, ku ktorému dôjde do 12-48 hodín, sa odoberú hemokultúry zo srdca a takmer vo všetkých prípadoch sa získa čistá kultúra pneumokoka.
Pri podozrení na sepsu sa 10-20 ml krvi naočkuje do ascitického alebo sérového bujónu. Po obohatení z bujónu sa uskutoční očkovanie na krvný agar a izolovaná čistá kultúra sa identifikuje podľa morfologických a biochemických charakteristík.
špecifická terapia a chemoterapia. V súčasnosti sa na liečbu lobárnej pneumónie s veľkým úspechom používajú sulfanilamidové prípravky a antibiotiká (penicilín, biomycín, tetracyklín atď.).

Rod Streptococcus zahŕňa: Streptococcus pyogenes (hemolytický) a Streptococcus pneumoniae (pneumokok). Streptokoky prvýkrát objavili Billroth (1874), L. Pasteur (1879). Skúmal ich E. Rosenbach (1884).

Streptococcus pyogenes (hemolytický)

Morfológia. Streptokoky sú koky, ktoré majú guľovitý tvar. Priemer každého koku je v priemere 0,6-1 μm, vyznačujú sa však polymorfizmom: existujú malé a veľké koky, prísne sférické a oválne. Streptokoky sú usporiadané do reťazca, ktorý je výsledkom ich delenia v rovnakej rovine. Dĺžky reťaze sú rôzne. Na hustej živnej pôde sú reťazce zvyčajne krátke, na tekutých sú dlhé. Streptokoky sú nepohyblivé, nemajú spóry (viď obr. 4) Čerstvo izolované kultúry niekedy tvoria kapsulu. Na ultratenkých rezoch je viditeľná mikrokapsula, pod ňou je trojvrstvová bunková stena a trojvrstvová cytoplazmatická membrána. Gram-pozitívne.

pestovanie. Streptokoky sú fakultatívne anaeróby. Pestujte pri teplote 37°C a pH 7,6-7,8. Optimálne médiá na ich kultiváciu sú médiá obsahujúce krv alebo krvné sérum. Na hustých živných médiách sú streptokokové kolónie malé, ploché, zakalené, sivastej farby. Na krvnom agare niektoré odrody streptokokov tvoria hemolýzu. β-hemolytické streptokoky tvoria jasnú zónu hemolýzy, α-hemolytické streptokoky tvoria malú zelenkastú zónu (výsledok prechodu hemoglobínu na methemoglobín). Existujú streptokoky, ktoré nedávajú hemolýzu.

Na cukrovom vývare rastú streptokoky s tvorbou parietálneho a jemnozrnného sedimentu blízko dna, zatiaľ čo vývar zostáva transparentný.

Enzymatické vlastnosti. Streptokoky majú sacharolytické vlastnosti. Rozkladajú glukózu, laktózu, sacharózu, manitol (nie vždy) a maltózu za vzniku kyseliny. Ich proteolytické vlastnosti sú slabo vyjadrené. Zrážajú mlieko, želatína sa neskvapalňuje.

tvorba toxínov. Streptokoky tvoria množstvo exotoxínov: 1) streptolyzíny – ničia červené krvinky (O-streptolyzín má kardiotoxický účinok); 2) leukocidín - ničí leukocyty (tvorené vysoko virulentnými kmeňmi); 3) erytrogénny (šarlach) toxín - spôsobuje klinický obraz šarlachu - intoxikácia, cievne reakcie, vyrážka atď. Syntézu erytrogénneho toxínu určuje profág; 4) cytotoxíny – majú schopnosť vyvolať glomerulonefritídu.

Streptokoky majú rôzne antigény. Cytoplazma bunky obsahuje antigén špecifickej nukleoproteínovej povahy – rovnaký pre všetky streptokoky. Antigény proteínového typu sa nachádzajú na povrchu bunkovej steny. V bunkovej stene streptokokov sa našiel antigén polysacharidovej skupiny.

Podľa zloženia frakcie antigénu špecifického pre skupinu polysacharidov sa všetky streptokoky delia do skupín, ktoré sa označujú veľkými latinskými písmenami A, B, C, D atď., až po S. Okrem skupín sa streptokoky delia na sérologické typy , ktoré sú označené arabskými číslicami.

Skupina A zahŕňa 70 typov. Do tejto skupiny patrí väčšina streptokokov, ktoré spôsobujú u ľudí rôzne ochorenia. Skupina B zahŕňa najmä oportúnne ľudské streptokoky. Skupina C zahŕňa streptokoky patogénne pre ľudí a zvieratá. Skupinu D tvoria streptokoky, ktoré nie sú patogénne pre ľudí, ale do tejto skupiny patria enterokoky, ktoré sú obyvateľmi črevného traktu ľudí a zvierat. Dostávajú sa do iných orgánov a spôsobujú zápalové procesy: cholecystitídu, pyelitídu atď. Možno ich teda pripísať podmienečne patogénnym mikróbom.

Príslušnosť izolovaných kultúr k jednej zo sérologických skupín sa stanoví pomocou precipitačnej reakcie so skupinovými sérami. Na stanovenie sérologických typov sa používa aglutinačná reakcia s typovo špecifickými sérami.

Streptokoky sú v prostredí pomerne stabilné. Pri teplote 60 ° C odumierajú po 30 minútach.

V sušenom hnise a spúte pretrvávajú mesiace. Bežné koncentrácie dezinfekčných prostriedkov ich zničia za 15-20 minút. Enterokoky sú oveľa odolnejšie, dezinfekčné roztoky ich zabíjajú až po 50-60 minútach.

Vnímavosť zvierat. Dobytok, kone, psy a vtáky sú náchylné na patogénne streptokoky. Z laboratórnych zvierat sú citlivé králiky a biele myši. Avšak streptokoky patogénne pre ľudí nie sú vždy patogénne pre pokusné zvieratá.

Zdroje infekcie. Ľudia (chorí a nosiči), menej často zvieratá alebo infikované produkty.

Prenosové cesty. Vzdušný a vzduchom prenášaný prach, niekedy potraviny, možný kontakt s domácnosťou.

Choroby sa môžu vyskytnúť v dôsledku exogénnej infekcie, ako aj endogénne - s aktiváciou oportúnnych streptokokov, ktoré žijú na slizniciach hltana, nosohltanu a vagíny. Zníženie odolnosti organizmu (ochladzovanie, hladovanie, prepracovanosť a pod.) môže viesť k autoinfekciám.

Veľký význam v patogenéze streptokokových infekcií má predbežná senzibilizácia - v dôsledku predtým prenesenej choroby streptokokovej etiológie.

Pri prenikaní do krvného obehu spôsobujú streptokoky závažný septický proces.

Choroby u ľudíčastejšie spôsobujú β-hemolytické streptokoky sérologickej skupiny A. Produkujú enzýmy patogenity: hyaluronidáza, fibrinolyzín (streptokináza), deoxyribonukleáza atď. Okrem toho sa v streptokokoch nachádza kapsula, M-proteín, ktorý má antifagocytárne vlastnosti.

Streptokoky spôsobujú u ľudí rôzne akútne a chronické infekcie, s tvorbou hnisu aj nehnisavé, líšia sa klinickým obrazom a patogenézou. Hnisavé - flegmóny, abscesy, ranové infekcie, nehnisavé - akútne infekcie horných dýchacích ciest, erysipel, šarlach, reuma atď.

Streptokoky často spôsobujú sekundárne infekcie pri chrípke, osýpkach, čiernom kašli a iných ochoreniach a často komplikujú infekcie rán.

Imunita. Imunita je svojou povahou antitoxická a antibakteriálna. Postinfekčná antimikrobiálna imunita je slabá. Je to spôsobené slabou imunogenicitou streptokokov a veľkým počtom sérovarov, ktoré neposkytujú skríženú imunitu. Okrem toho sa pri streptokokových ochoreniach pozoruje alergizácia tela, čo vysvetľuje tendenciu k relapsu.

Prevencia. Ide o hygienické a hygienické opatrenia, posilňujúce celkovú odolnosť organizmu. Špecifická profylaxia nebola vyvinutá.

Liečba. Aplikujte antibiotiká. Častejšie sa používa penicilín, na ktorý streptokoky nezískali rezistenciu, ako aj erytromycín a tetracyklín.

Hodnota streptokoka v etiológii reumatickej choroby srdca. Patogenéza reumatického ochorenia srdca nie je dobre pochopená. V prospech úlohy streptokoka pri vzniku tohto ochorenia však hovorí množstvo faktov:

1. U pacientov s reumatickým ochorením srdca sa z hltana vysieva B-hemolytický streptokok.

2. Reumatizmus sa často vyskytuje po tom, čo utrpel bolesť hrdla, angínu, faryngitídu, senzibilizáciu organizmu.

3. Antistreptolyzín, antistreptohyaluronidáza – protilátky proti streptokokovým enzýmom, toxíny sa nachádzajú v krvnom sére pacientov.

4. Nepriamym potvrdením úlohy streptokoka je úspešná liečba penicilínom.

V poslednej dobe sa L-formám streptokoka pripisuje význam pri výskyte chronických foriem reumatických ochorení srdca.

Prevencia exacerbácií reumatických ochorení srdca sa redukuje na prevenciu streptokokových ochorení (napríklad na jar a na jeseň sa uskutočňuje profylaktický priebeh podávania penicilínu). Liečba sa znižuje na použitie antibakteriálnych liekov - penicilínu.

Hodnota streptokoka v etiológii šarlachu. G. N. Gabrichevsky (1902) ako prvý naznačil, že hemolytický streptokok je pôvodcom šarlachu. Ale keďže streptokoky izolované pri iných ochoreniach sa nelíšili od pôvodcov šarlachu, tento názor nezdieľal každý. Teraz sa zistilo, že šarlach je spôsobený streptokokmi skupiny A, ktoré produkujú erytrogénny toxín.

U tých, ktorí boli chorí, vzniká imunita - perzistentná, antitoxická. Jeho napätie je určené nastavením Dickovej reakcie - intradermálnej injekcie erytrogénneho toxínu. U tých, ktorí nie sú chorí v okolí miesta vpichu, dochádza k hyperémii a edému, ktorý je charakterizovaný ako pozitívna reakcia (nedostatok antitoxínu v krvnom sére). U tých, ktorí boli chorí, takáto reakcia chýba, pretože v nich vytvorený antitoxín neutralizuje erytrogénny toxín.

Prevencia. Izolácia, hospitalizácia. Kontaktným, oslabeným deťom sa podáva gamaglobulín. Špecifická profylaxia nebola vyvinutá.

Liečba. Použite penicilín, tetracyklín. V závažných prípadoch sa podáva antitoxické sérum.

Účel štúdie: detekcia streptokoka a stanovenie jeho sérovaru.

Výskumný materiál

1. Hlien z hrdla (tonzilitída, šarlach).

2. Škrabanie z postihnutej oblasti kože (erysipel, streptoderma).

3. Hnis (absces).

4. Moč (zápal obličiek).

5. Krv (podozrenie na sepsu; endokarditída).

Základné metódy výskumu

1. Bakteriologické.

2. Mikroskopické.

Pokrok vo výskume

Druhý deň výskumu

Vyberte poháre z termostatu a skontrolujte. V prítomnosti podozrivých kolónií sa z ich časti urobia šmuhy, zafarbené podľa Grama a mikroskopicky. Ak sa v nátere nájdu streptokoky, časť zostávajúcej kolónie sa subkultivuje do skúmaviek na agare so sérom, aby sa izolovala čistá kultúra a na bujóne s krvou v skúmavkách. Na konci dňa sa 5-6-hodinová kultúra z bujónu alebo agaru subkultivuje na Martenovom bujóne s 0,25 % glukózou, aby sa určila sérologická skupina v Lensfieldovej precipitačnej reakcii. Skúmavky a fľaštičky sa umiestnia do termostatu a nechajú sa do druhého dňa.

Tretí deň výskumu

Kultúry sa vyberú z pece, skontroluje sa čistota kultúry na šikmom agare, urobia sa nátery, zafarbia sa podľa Grama a podrobí sa mikroskopii. V prítomnosti čistej kultúry streptokoka sa vysejú na Hiss médium (laktóza, glukóza, maltóza, sacharóza a manitol), mlieko, želatína, 40% žlč a vložia sa do termostatu.

Pozrite sa cez Martinov vývar. V prítomnosti špecifického rastu sa na určenie sérologickej skupiny vykoná Lensfieldov precipitačný test.

Nastavenie precipitačnej reakcie podľa Lensfielda. Denná kultúra pestovaná na martinskom bujóne sa naleje do niekoľkých centrifugačných skúmaviek, odstreďuje sa 10-15 minút (3000 otáčok za minútu).

Supernatant sa naleje do nádoby s dezinfekčným roztokom a zrazenina sa naleje do sterilného izotonického roztoku chloridu sodného a znova sa odstredí. K zrazenine odobranej zo všetkých centrifugačných skúmaviek pridajte 0,4 ml 0,2 % kyseliny chlorovodíkovej. Potom sa skúmavka umiestni do vodného kúpeľa a varí sa 15 minút za občasného pretrepávania. Po varení sa výsledná suspenzia opäť odstredí. Antigén sa potom extrahuje do supernatantu, ktorý sa naleje do čistej skúmavky a neutralizuje sa 0,2% roztokom hydroxidu sodného na pH 7,0-7,2. Ako indikátor sa pridá brómtymolová modrá (0,01 ml 0,04 % roztoku). Pri tejto reakcii sa farba zmení zo slamovo žltej na modrú.

Potom sa 0,5 ml séra antistreptokokovej skupiny, ktoré sa pripraví imunizáciou králikov, naleje do 5 precipitačných skúmaviek (pozri kapitolu 19). Sérum A sa zavedie do 1. skúmavky, sérum B do 2., sérum C do 3., sérum D do 4., izotonický roztok chloridu sodného (kontrola) do 5. skúmavky. Potom sa pomocou Pasteurovej pipety výsledný extrakt (antigén) opatrne navrství pozdĺž steny do všetkých skúmaviek.

Pri pozitívnej reakcii v skúmavke s homológnym sérom sa na hranici extraktu so sérom vytvorí tenký mliečnobiely krúžok (obr. 38).

Štvrtý deň výskumu

Výsledky sú zaznamenané (tabuľka 25).

V súčasnosti sa stanovuje deoxyribonukleáza, ako aj antistreptohyaluronidáza, antistreptolyzín-O.

testovacie otázky

1. Aké hlavné metódy laboratórneho výskumu na detekciu streptokokov poznáte?

2. Na čo slúži Lensfieldova precipitačná reakcia?

3. Prečo by mal byť antigén počas tejto reakcie transparentný? Opíšte techniku ​​inscenovania tejto reakcie.

Získajte od učiteľa antistreptokokové sérum A, B, C, D a izotonický roztok chloridu sodného. Nastavte reakciu zrážania, ukážte výsledky učiteľovi a nakreslite.

Živné médiá

agar s krvou(pozri kapitolu 7).

Sérum agar(pozri kapitolu 7).

Syčanie médií(suchý).

Mäsová peptónová želatína (MPG). Do 100 ml MPB pridajte 10-15 g nadrobno nasekanej želatíny. Želatína by mala napučať, keď sa pomaly zahrieva vo vodnom kúpeli (pri teplote 40-50 ° C). K roztavenej želatíne sa pridá 10% roztok uhličitanu sodného (jedlá sóda) a pH sa upraví na 7,0. Potom sa ihneď prefiltruje cez skladaný filter. Filtrácia je pomalá. Na urýchlenie procesu je možné filtráciu vykonať v horúcom autokláve. Filtrované médium sa naleje do skúmaviek s objemom 6-8 ml a sterilizuje sa. Sterilizácia sa vykonáva buď frakčne pri teplote 100 °C počas 3 dní za sebou, alebo súčasne pri teplote 110 °C počas 20 minút v autokláve. Chladenie média sa vykonáva v skúmavkách umiestnených vertikálne.

Príprava mlieka. Čerstvé mlieko sa privedie do varu, dá sa na deň na chladné miesto, zbaví sa smotany a znova sa uvarí. Nechajte deň pôsobiť a odstráňte vrchnú vrstvu. Odstredené mlieko sa prefiltruje cez vrstvu vaty, potom sa zalkalizuje 10 % roztokom uhličitanu sodného na pH 7,2 a naleje do skúmaviek s objemom 5 až 6 ml.

Martinský bujón. Do mäsovej vody sa pridá rovnaké množstvo peptónu Marten (mleté ​​mäso z bravčových žalúdkov vystavených kyseline chlorovodíkovej). Výsledná zmes sa varí 10 minút, zalkalizuje sa 10 % roztokom hydroxidu sodného na pH 8,0, pridá sa 0,5 octan sodný, znova sa povarí a naleje do sterilných misiek. Do martinského vývaru sa pridá 0,25 % glukózy.

Streda Kitt - Tarozzi(pozri kapitolu 34).

Streptococcus pneumoniae (pneumokok)

Pneumokoky prvýkrát opísal R. Koch (1871).

Morfológia. Pneumokoky sú diplokoky, u ktorých sú strany buniek smerujúce k sebe sploštené a protiľahlé strany predĺžené, takže majú kopijovitý tvar pripomínajúci plameň sviečky (pozri obr. 4). Veľkosť pneumokokov je 0,75-0,5 × 0,5-1 μm, sú usporiadané v pároch. V tekutých živných pôdach často tvoria krátke reťazce, pripomínajúce streptokoky. Prevmokoky sú nepohyblivé, nemajú spóry, tvoria v tele kapsulu, ktorá oba koky obklopuje. Kapsula obsahuje tepelne odolnú látku antifagín (ktorá chráni pneumokoka pred fagocytózou a pôsobením protilátok). Pri pestovaní na umelých živných pôdach strácajú pneumokoky kapsulu. Pneumokoky sú grampozitívne. Gramnegatívne baktérie sa nachádzajú v starých kultúrach.

pestovanie. Pneumokoky sú fakultatívne anaeróby. Pestujte pri teplote 36-37°C a pH 7,2-7,4. Sú náročné na médiá, keďže nedokážu syntetizovať veľa aminokyselín, preto rastú len na médiách s prídavkom natívneho proteínu (krv alebo sérum). Na agare so sérom tvoria malé, jemné, pomerne priehľadné kolónie. Na agare s krvou vyrastajú vlhké zelenošedé kolónie obklopené zelenou zónou, ktorá je výsledkom premeny hemoglobínu na methemoglobín. Pneumokoky dobre rastú v bujóne s prídavkom 0,2% glukózy a v bujóne so srvátkou. Rast v tekutých médiách je charakterizovaný difúznym zákalom a prachovým sedimentom na dne.

Enzymatické vlastnosti. Pneumokoky majú pomerne výraznú sacharolytickú aktivitu. Rozkladajú: laktózu, glukózu, sacharózu, maltózu, inulín za vzniku kys. Manitol nefermentujte. Ich proteolytické vlastnosti sú slabo vyjadrené: koagulujú mlieko, neskvapalňujú želatínu a netvoria indol. Pneumokoky sa rozpúšťajú v žlči. Štiepenie inulínu a rozpúšťanie v žlči je dôležitým diagnostickým znakom, ktorý odlišuje Streptococcus pneumoniae od Streptococcus pyogenes.

faktory patogénnosti. Pneumokoky produkujú hyaluronidázu, fibrinolyzín atď.

tvorba toxínov. Pneumokoky produkujú endotoxín, hemolyzín, leukocidín. Virulencia pneumokokov je tiež spojená s prítomnosťou antifagínu v kapsule.

Antigénna štruktúra a klasifikácia. V cytoplazme pneumokokov je proteínový antigén spoločný pre celú skupinu a v kapsule je polysacharidový antigén. Podľa polysacharidového antigénu sa všetky pneumokoky delia na 84 sérovarov. Sérovary I, II, III sú najbežnejšími patogénmi pre ľudí.

Odolnosť voči životnému prostrediu. Pneumokoky patria do skupiny nestabilných mikroorganizmov. Teplota 60 °C ich zničí za 3-5 minút. Sú celkom odolné voči nízkym teplotám a vysychaniu. V sušenom spúte zostávajú životaschopné až 2 mesiace. Na živnom médiu nezostávajú dlhšie ako 5-6 dní. Preto je pri pestovaní potrebné vykonať presev každé 2-3 dni. Bežné roztoky dezinfekčných prostriedkov: 3% fenol, sublimujú pri riedení 1:1000 ich zničia za pár minút.

Pneumokoky sú obzvlášť citlivé na optochín, ktorý ich zabíja pri riedení 1:100 000.

Vnímavosť zvierat. Ľudia sú prirodzeným hostiteľom pneumokokov. Pneumokoky však môžu spôsobiť ochorenie u teliat, jahniat, prasiatok, psov a opíc. Z pokusných zvierat sú na pneumokoky vysoko citlivé biele myši.

Zdroje infekcie. Chorý človek a bakterionosič.

Prenosové cesty. Vo vzduchu, môže byť vo vzduchu.

vstupná brána. Sliznica horných dýchacích ciest, očí a ucha.

Choroby u ľudí. Pneumokoky môžu spôsobiť hnisavé zápalové ochorenia rôznej lokalizácie. Špecifické pre pneumokoky sú:

1) lobárna pneumónia;

2) plazivý vred rohovky;

Najčastejším ochorením je krupózna pneumónia, ktorá postihuje jeden, menej často dva alebo tri laloky pľúc. Choroba je akútna, sprevádzaná vysokou horúčkou, kašľom. Zvyčajne to končí kriticky.

Imunita. Po ochorení zostáva nestabilná imunita, pretože pneumónia je charakterizovaná recidívami.

Prevencia. Ide o hygienické a preventívne opatrenia. Špecifická profylaxia nebola vyvinutá.

Liečba. Používajú sa antibiotiká - penicilín, tetracyklín atď.

testovacie otázky

1. Morfológia pneumokokov. Kultivačné a enzymatické vlastnosti.

2. Aké faktory určujú patogenitu pneumokokov a čo chráni pneumokoky pred fagocytózou?

3. Aké sú hlavné brány pneumokokovej infekcie. Aké choroby spôsobujú pneumokoky?

Mikrobiologický výskum

Účel štúdie: detekcia pneumokoka.

Výskumný materiál

1. Hlien (zápal pľúc).

2. Hlien z hltana (tonzilitída).

3. Výtok z vredu (plazivý vred rohovky).

4. Výtok z ucha (zápal stredného ucha).

5. Hnis (absces).

6. Pleurálna bodkovaná (pleurisy).

7. Krv (podozrenie na sepsu).

1 (Je lepšie užívať ranný spút (so špecifickým zápalom pľúc má spúta hrdzavú farbu).)

Základné metódy výskumu

1. Mikroskopické.

2. Mikrobiologické.

3. Biologické.

Pokrok vo výskume

biologická vzorka. Trochu (3-5 ml spúta) sa emulguje v sterilnom bujóne, 0,5 ml tejto zmesi sa intraperitoneálne vstrekne bielej myši. Po 6-8 hodinách myši vykazujú príznaky ochorenia. V tomto čase už možno v exsudáte brušnej dutiny zistiť pneumokoka. Exsudát sa odoberá sterilnou injekčnou striekačkou. Vyrábajú sa z neho šmuhy, farbené podľa Grama a mikroskopované. Na izoláciu čistej kultúry sa exsudát naočkuje na agar so sérom. Ak myš uhynie alebo ochorie, krv sa kultivuje zo srdca na sérovom agare, aby sa izolovala čistá kultúra. Plodiny sú umiestnené v termostate.

Zrýchlená metóda na určenie typu pneumokoka(reakcia mikroaglutinácie). Na podložné sklíčko sa aplikujú 4 kvapky exsudátu z brušnej dutiny infikovanej myši. Aglutinačné sérum typu I sa pridá do prvej kvapky, sérum typu II do druhej, typ III do tretej a izotonický roztok chloridu sodného (kontrola) do štvrtej.

Séra typu I a II sú predriedené v pomere 1:10 a sérum typu III - 1:5. Všetky kvapky sa miešajú, sušia, fixujú a farbia zriedenou purpurovou. S pozitívnym výsledkom v jednej z kvapiek je zaznamenaná mikrobiálna agregácia (aglutinácia).

Druhý deň výskumu

Kultúry sa vyberú z termostatu, preskúmajú sa a z podozrivých kolónií sa urobia nátery. V prítomnosti grampozitívnych kopijovitých diplokokov v náteroch sa 2-3 kolónie izolujú na šikmom agare so sérom, aby sa získala čistá kultúra. Plodiny sú umiestnené v termostate. Nátery sa vyrábajú z bujónu, farbené podľa Grama a mikroskopujú sa.

Tretí deň výskumu

Plodiny sú odstránené z termostatu. Skontrolujte čistotu kultúry - urobte nátery, Gramovo farbenie a mikroskop. Ak sú v izolovanej kultúre prítomné grampozitívne kopijovité diplokoky, izolovaná kultúra sa identifikuje očkovaním:

1) na Hiss médiách (laktóza, glukóza, sacharóza, maltóza) sa výsev uskutočňuje obvyklým spôsobom - injekciou do média;

2) na médiu s inulínom;

3) na médiu s optochínom;

4) vložte vzorku s žlčou.

Inulínový test. Študovaná kultúra sa naočkuje na živné médium obsahujúce inulín a lakmusovú tinktúru a umiestni sa do termostatu. Po 18-24 hodinách sa plodiny vyberú z termostatu. V prítomnosti pneumokokov médium sčervená (streptokoky nemenia konzistenciu a farbu média).

Stanovenie citlivosti na optochín. Izolovaná kultúra sa naočkuje na 10% krvný agar obsahujúci optochín 1:50 000. Pneumokoky, na rozdiel od streptokokov, nerastú na médiách obsahujúcich optochín.

Žlčový test. 1 ml študovanej bujónovej kultúry sa naleje do aglutinačných skúmaviek. Do jednej z nich sa pridá kvapka králičej žlče, druhá skúmavka slúži ako kontrola. Obe skúmavky sú umiestnené v termostate. Po 18-24 hodinách dochádza k lýze pneumokokov, čo sa prejavuje vyčistením zakaleného vývaru. V ovládaní zostáva odpruženie zakalené.

Vzorka s žlčou sa môže umiestniť na hustú živnú pôdu. Za týmto účelom sa zrnko suchej žlče aplikuje na kolóniu pneumokokov pestovaných na agare a sérové ​​platne - kolónia sa rozpustí - zmizne.

Štvrtý deň výskumu

Výsledky sú zaznamenané (tabuľka 26).

Poznámka. až - rozklad uhľohydrátov za vzniku kys.

V súčasnosti sa na stanovenie streptokokových protilátok široko používajú metódy sérologického výskumu (RSK a RIGA). Stanovenie skupiny a sérovaru izolovanej kultúry sa uskutočňuje pomocou fluorescenčných protilátok.

Stanovenie pneumokokovej virulencie. Denná kultivácia pneumokoka v bujóne sa zriedi 1% peptónovou vodou od 10-2 do 10-8, 0,5 ml každého riedenia sa podáva dvom bielym myšiam. Kultúra, ktorá spôsobila smrť myší pri zriedení 10 -7, je hodnotená ako virulentná, pri zriedení 10 -4 -10 -6 je považovaná za stredne virulentnú. Kultúra, ktorá nespôsobila smrť myší, je avirulentná.

testovacie otázky

1. Aké metódy izolácie čistej kultúry pneumokokov poznáte?

2. Ktoré zviera je najnáchylnejšie na pneumokoka?

3. Aké reakcie vyvoláva exsudát infikovanej myši a na aký účel?

4. Od akých zástupcov pyogénnych kokov treba pneumokoka odlíšiť a akým testom?

5. Ako určiť virulenciu pneumokokov?

Cvičenie

Vypracujte schému vyšetrenia spúta s uvedením jeho štádií za deň.

Živné médiá

Sérum agar(pozri kapitolu 7).

Srvátkový vývar(pozri kapitolu 7).

agar s krvou(pozri kapitolu 7).

Syčanie médií(suchý).

Inulínové testovacie médium. Do 200 ml destilovanej vody pridajte 10 ml inaktivovaného bovinného séra, 18 ml lakmusovej tinktúry a 3 g inulínu. Sterilizujte prúdom pary pri 100°C 3 po sebe nasledujúce dni. Žlčový vývar (pozri kapitolu 7).