Pôvodca syfilisu. Taxonómia

č. 23 Pôvodca syfilisu. Taxonómia. Charakteristický. Mikrobiologická diagnostika. Liečba.
treponema palladium; T. entericum
Morfológia: typické treponémy s 8-12 praslenmi, pohybový systém - 3 periplazmatické bičíky na každom póle bunky. Gramova škvrna nie je podľa Romanovského-Giemsa vnímaná - mierne ružová, zistená impregnáciou striebrom.
kultúrne vlastnosti: virulentný kmeň domáceho zvieraťa. média nerastú, dochádza k akumulácii kultúry infikovaním králika v semenníku. Virulentné kmene sa kultivujú na médiu s mozgovým a obličkovým tkanivom.
Biochemické vlastnosti: mikroaerofilné
Antigénna štruktúra: komplex, má špecifické proteínové a lipoidné antigény, ktoré sú svojím zložením identické s kardiolipínom extrahovaným z hovädzieho srdca (difosfadylglycerol)
Faktory patogenity: adhezíny sa podieľajú na procese prichytenia, lipoproteíny sa podieľajú na vývoji imunopatologických procesov.
Odolnosť: citlivý na sušenie, slnečné žiarenie, zostáva na predmetoch až do zaschnutia. Za nepriaznivých podmienok prechádza do L-foriem a vytvára cysty.
Patogenéza: Spôsobuje syfilis. Z miesta vstupnej brány sa treponémy dostávajú do regionálnych lymfatických uzlín, kde sa množia. Ďalej T. preniká do krvného obehu, kde sa viaže na endoteliocyty, čo spôsobuje endarteritídu, čo vedie k vaskulitíde a nekróze tkaniva. S krvou sa T. šíri po celom tele, sediace orgány: pečeň, obličky, kosti, kardiovaskulárny a nervový systém.
Imunita: Nie je vyvinutá žiadna ochranná imunita. V reakcii na antigény patogénov sa vyvíja HRT a autoimunitné procesy. Humorálna imunita je produkovaná proti lipoidnému antigénu T. a je titrom IgA a IgM.
mikroskopické vyšetrenie. Vykonáva sa s primárnym syfilisom počas objavenia sa tvrdého chancre. Materiál na výskum: výtok chancre, obsah regionálnych lymfatických uzlín, z ktorých sa pripravuje "rozdrvený" kvapkový prípravok a skúma sa v tmavom poli. S pozitívnym výsledkom sú viditeľné tenké skrútené nite dlhé 6-14 mikrónov, ktoré majú 10-12 rovnomerných malých kučier správneho tvaru. Bledý treponém je charakterizovaný pohybmi podobnými kyvadlu a dopredu sa ohýbajúcimi pohybmi. S rozvojom lézií na sliznici úst so sekundárnym syfilisom, ako aj s lokalizáciou tvrdého chancre v ústnej dutine je potrebné odlíšiť bledý treponém od saprofytických treponémov, ktoré sú predstaviteľmi normálnej mikroflóry. V tomto prípade má rozhodujúci diagnostický význam detekcia typických treponémov v bodkovaní regionálnych lymfatických uzlín.
Serodiagnostika. Wassermanova reakcia je nastavená súčasne s 2 antigénmi: 1) špecifický, obsahujúci antigén patogénu - treponém zničený ultrazvukom; 2) nešpecifické - kardiolipín. Skúmané sérum sa zriedi v pomere 1:5 a RSK sa umiestni podľa všeobecne uznávanej metódy. Pri pozitívnej reakcii sa pozoruje oneskorenie hemolýzy, pri negatívnej reakcii dochádza k hemolýze erytrocytov; intenzita reakcie sa odhaduje podľa toho od (+ + + +) po (-). Prvé obdobie syfilisu je séronegatívne a je charakterizované negatívnou Wassermanovou reakciou. U 50% pacientov sa reakcia stáva pozitívnou najskôr 2-3 týždne po objavení sa tvrdého chancre. V druhom a treťom období syfilisu dosahuje frekvencia pozitívnych reakcií 75-90%. Po ukončení liečby sa Wassermanova reakcia stáva negatívnou. Paralelne s Wassermanovou reakciou sa uskutočňuje mikroprecipitačná reakcia s nešpecifickým kardiolipínovým antigénom a študovaným inaktivovaným krvným sérom alebo plazmou. Do jamky na doštičke z plexiskla (alebo na obyčajnom skle) sa nanesú 3 kvapky séra a pridá sa 1 kvapka kardiolipínového antigénu. Zmes sa dôkladne premieša a zohľadnia sa výsledky. Pozitívna reakcia s krvným sérom pacienta so syfilisom je charakterizovaná tvorbou a stratou vločiek rôznych veľkostí; s negatívnym výsledkom sa pozoruje rovnomerná svetelná opalescencia.
RIF – nepriama imunofluorescenčná reakcia – je špecifická v diagnostike syfilisu. Ako antigén sa používa suspenzia tkanivových treponém. Použije sa reakcia RIF_200. Sérum pacienta sa inaktivuje rovnakým spôsobom ako pri Wassermannovej reakcii a zriedi sa v pomere 1:200. Kvapky antigénu sa aplikujú na sklíčka, vysušia sa a fixujú sa 5 minút v acetóne. Potom sa sérum pacienta aplikuje na liek, po 30 minútach sa umyje a vysuší. Ďalším krokom je ošetrenie preparátu fluorescenčným sérom proti ľudským globulínom. Preskúmajte prípravok pomocou fluorescenčného mikroskopu, pričom si všimnite stupeň luminiscencie treponému.
RIT reakcia na imobilizáciu treponému je tiež špecifická. Živá kultúra treponému sa získava kultiváciou v králičom semenníku. Semenník je rozdrvený v špeciálnom médiu, v ktorom zostávajú treponémy mobilné. Reakcia sa nastaví nasledovne: suspenzia tkanivových (mobilných) treponém sa v skúmavke spojí s testovaným sérom a pridá sa čerstvý komplement. Do jednej kontrolnej skúmavky sa namiesto testovacieho séra pridáva sérum zdravého človeka a do druhej namiesto čerstvého komplementu inaktivovaný - neaktívny komplement. Po udržiavaní pri 35 °C v anaeróbnych podmienkach (anaerostat) sa zo všetkých skúmaviek pripraví „rozdrvený“ kvapkový prípravok a v tmavom poli sa stanoví počet mobilných a nepohyblivých treponém.
Liečba: Penicilíny, tetracyklíny, lieky s obsahom bizmutu.

Syfilis je cyklicky sa vyskytujúce sexuálne prenosné ochorenie u ľudí spôsobené spirochétou pallidum; Štádium I sa prejavuje tvrdým chancrem (fr. chancre- vred), II štádium - poškodenie stien ciev a rôzne vyrážky, III - ďasná v rôznych orgánoch s poškodením nervového systému. Gumma (lat. . gummi- guma) - chronický infiltrát vo forme uzla, náchylný na rozpad a ulceráciu. Syfilitická guma ( syn.: syfilitický granulóm, gumovitý syfilis, terciárny syfilóm) je nebolestivé pologuľovité ďasno, ktoré je prejavom terciárneho aktívneho syfilisu. Patogén - Treponema pallidum- objavili v roku 1905 F. Shaudin a E. Hoffmann.

T. pallidum- mikroorganizmus špirálovitého tvaru, s rozmermi 0,09 - 0,18 x 6 - 20 mikrónov. Počet kučier špirály je od 8 do 12, kučery sú rovnomerné, nachádzajú sa v rovnakej vzdialenosti od seba asi 1 μm, výška sa ku koncom znižuje. V elektrónovom mikroskope vyzerá ako had alebo dážďovka. Na oboch koncoch treponému sú blefaroplasty s bičíkmi, ktorých počet sa pohybuje od dvoch do niekoľkých, tvoria axiálny závit skrútený okolo protoplazmatického valca spirochéty. Za nepriaznivých podmienok môže vytvárať cysty. U zvierat sa môže objaviť puzdro podobné kapsule mukopolysacharidovej povahy.

Treponema sa anilínovými farbivami zle farbí, a preto sa pôvodca syfilisu nazýva bledá spirochéta. Redukuje dusičnan strieborný na kovové striebro, ktoré sa ukladá na povrchu mikróba a zviditeľňuje ho v tkanivách: pri farbení podľa Morozova vyzerajú treponémy hnedé alebo takmer čierne. Pri farbení podľa Romanovského - Giemsa získavajú bledoružovú farbu.

Treponémy sa väčšinou množia priečnym delením, pričom rozdelené bunky môžu na seba istý čas susediť. Doba delenia je cca 30 hodín.

Živé treponémy sú veľmi mobilné, vykonávajú pohyby okolo vlastnej pozdĺžnej osi, ako aj flexi, vlnovité a translačné pohyby.

K dnešnému dňu neexistuje taká metóda, ktorá by dokázala konzistentne získavať kultúry treponému. Treponema pallidum, patogénna pre ľudí, nebola nikdy kultivovaná na umelých živných médiách, v kuracích embryách alebo v bunkových kultúrach. Tie odrody ich kmeňov, ktoré rastú v anaeróbnych podmienkach, sú pravdepodobne saprofytické spirochéty, blízke pôvodcovi syfilisu. Ich fyziológia zostáva málo študovaná. Treponémy sú chemoorganotrofy, neobsahujú katalázu a oxidázu a môžu fermentovať sacharidy. Rastú na veľmi bohatom médiu obsahujúcom až 11 aminokyselín, vitamínov, solí a sérového albumínu. Najlepší spôsob, ako pestovať patogénne spirochéty, je infikovať králika v semenníku (experimentálna orchitída). Bolo navrhnuté, že existuje T. pallidumživotný cyklus, zahŕňajúci okrem špirálovitého tvaru aj granulárne štádium a štádium guľovitých teliesok podobných cystám. Práve granulované formy týchto mikroorganizmov sú schopné prechádzať cez bakteriálne filtre.

Treponémové antigény sú zle pochopené. Zistilo sa, že treponém obsahuje proteínové, polysacharidové a lipidové komplexy. Antigénne zloženie kultúrnych a tkanivových treponém je také blízke, že antigény pripravené z kultúrnych treponém môžu byť použité pre CSC v diagnostike syfilisu. V ľudskom tele treponémy stimulujú tvorbu protilátok, ktoré spôsobujú imobilizáciu a smrť živých mobilných treponém, viažu komplement v prítomnosti suspenzie T. pallidum alebo príbuzné spirochéty a sú tiež detegované v nepriamom RIF.

Pôvodca syfilisu netvorí exotoxíny. Bledé treponémy sú relatívne nestabilné voči vonkajším vplyvom. Pri sušení a pri zvýšených teplotách (pri 55 °C 15 minút) rýchlo odumierajú. V 0,3 - 0,5% roztoku HCl okamžite strácajú svoju pohyblivosť; tiež ho rýchlo strácajú a zomierajú v prítomnosti prípravkov arzénu, bizmutu a ortuti. V plnej krvi alebo v sére pri 4 °C zostávajú životaschopné 24 hodín, čo treba vziať do úvahy pri transfúzii krvi.

Epidemiológia. Syfilis je typická pohlavne prenosná choroba. Zdrojom nákazy je chorý človek, zvyčajne nákazlivý 3 až 5 rokov; pacienti s neskorými formami syfilisu nie sú nákazliví. Infekcia sa v prevažnej väčšine prípadov vyskytuje prostredníctvom rôznych druhov sexuálnych a domácich kontaktov, zriedkavo transplacentárne z chorej matky na dieťa (vrodený syfilis) alebo ako profesionálna infekcia kontaktom so zdravotníckym personálom. V prirodzených podmienkach trpí syfilisom iba človek, v experimente je možné infikovať opice, škrečky a králiky. U opíc sa v mieste vpichu treponémov vyvinie tvrdý chancre, u králikov a škrečkov je infekcia asymptomatická.

Patogenéza a klinika. Inkubačná doba získaného syfilisu sa pohybuje od 2 do 10 týždňov, zvyčajne 20 až 28 dní. Vstupnými bránami infekcie sú najčastejšie sliznice pohlavných orgánov, menej často ústna dutina, ako aj poškodená koža. V mieste zavedenia sa patogén množí, vytvára sa primárny syfilóm (tvrdý chancre) - erózia alebo vred so zhutnenou základňou. Ďalej patogén vstupuje do lymfatického systému, vzniká lymfangitída a regionálna lymfadenitída. Ide o typickú kliniku primárneho syfilisu, ktorá trvá 1,5 – 2 mesiace. Potom tieto znaky zmiznú. Sekundárne obdobie syfilisu je spojené so zovšeobecnením procesu, keď sa zvyšuje veľa lymfatických uzlín a na koži a slizniciach sa objavujú vyrážky; možno pozorovať poškodenie vnútorných orgánov a nervového systému. Existuje sekundárny čerstvý a sekundárny recidivujúci syfilis. Pri každom ďalšom relapse sa intenzita vyrážky stáva menej výraznou a intervaly medzi relapsmi sa zvyšujú. Prvky vyrážky obsahujú veľké množstvo živých treponémov, počas tohto obdobia je pacient najviac nákazlivý. Trvanie sekundárneho syfilisu je až 4 roky alebo viac. Ďalej choroba vstupuje do dlhého asymptomatického obdobia, po ktorom sa po niekoľkých rokoch vyvinie terciárny syfilis. Súčasne sa pozorujú hrubé organické lézie vnútorných orgánov, kardiovaskulárneho systému, centrálneho nervového systému, kostí, tvoria sa ďasná, sprevádzané rozpadom tkaniva a degeneratívnymi zmenami. Charakteristickým klinickým znakom syfilisu je absencia akýchkoľvek subjektívnych sťažností pacienta (bolesť, svrbenie, pálenie atď.).

Imunita. Proti syfilisu nevzniká ani prirodzená, ani umelá imunita; existuje len infekčná imunita a kým existuje, človek prakticky nie je náchylný na novú infekciu. Infekčná imunita sa vyvinie 10–11 dní po objavení sa tvrdej škrečky (chankerová imunita), počas tohto obdobia buď nie je pozorovaná opätovná infekcia, alebo nový škrečok, ktorý sa vytvoril, prebieha abortívne (superinfekcia). V budúcnosti pri superinfekcii povaha výsledných lézií zodpovedá štádiu ochorenia v čase opätovnej infekcie. Superinfekcia sa vysvetľuje dočasným oslabením alebo „zlomením“ infekčnej imunity. Od superinfekcie je potrebné odlíšiť reinfekciu, teda novú, reinfekciu človeka, ktorý predtým mal syfilis (vyliečený), a teda stratil infekčnú imunitu. Popísané sú prípady dokonca trojnásobného ochorenia so syfilisom. Inkubačná doba u takýchto pacientov je kratšia, častejšie sa rozvíjajú mnohopočetné ulcerózne chancre s lymfadenitídou, sérologické reakcie sa stávajú pozitívnymi skôr. V sekundárnom období sú papuly na koži často erodované. Vysvetľuje to skutočnosť, že so syfilisom sa vyvíja hypersenzitívna reakcia oneskoreného typu, po liečbe zostávajú senzibilizované lymfocyty v tele dlhú dobu. Infekčná imunita je nesterilnej povahy a je spôsobená humorálnymi faktormi: imunoglobulíny tried G, A a M sa nachádzajú v sére pacienta.

Laboratórna diagnostika. Na diagnostiku syfilisu je optimálny integrovaný prístup, ktorý zahŕňa súčasné použitie viacerých metód. Tradične sa delia na priame, ktoré umožňujú dokázať prítomnosť patogénu v testovanom materiáli (infekcia zvierat, rôzne druhy mikroskopie a molekulárne genetické metódy na detekciu DNA). T. pallidum- PCR a DNA sondovanie) a nepriame - sérologické testy na detekciu protilátok. Sérologické testy sú zas reprezentované netreponémom a treponémom.

Testovacím materiálom na detekciu treponému v priamych metódach je výtok tvrdého chancre alebo jeho bodkovaného, ​​bodkovaného lymfatického uzla, škrabanie roseoly, mozgovomiechový mok. Patogén sa najlepšie deteguje v natívnom materiáli pomocou tmavého poľa (pozri obr. 111.4) alebo mikroskopie s fázovým kontrastom, ktorá umožňuje pozorovať rôzne typy pohybu živého patogénu. Ak už bola zahájená antibiotická liečba, patogén sa v patologickom materiáli nedá zistiť. V prípade potreby sa vykoná priamy (alebo nepriamy) RIF alebo sa prípravok zafarbí podľa Romanovského-Giemsa. Tieto metódy sa používajú iba na včasnú diagnostiku syfilisu.

Sérologické testy možno použiť v rôznych štádiách ochorenia, okrem séronegatívneho primárneho syfilisu. Zvyčajne sa používa komplex sérologických reakcií. TO netreponém testy s vizuálnym stanovením výsledkov zahŕňajú: reakciu fixácie komplementu (Wassermannova reakcia \u003d RSKk \u003d RW) s kardiolipínovým antigénom srdcového svalu býka (antigén s krížovou reakciou), mikroprecipitačná reakcia (MR alebo RMP) - mikroreakcia s plazmou a inaktivovaným sérom; RPR - rýchly plazmatický reagin test a ďalšie reakcie. Odborníci sa domnievajú, že na hromadný skríning je najlepšie použiť dva testy: RPR a RPHA alebo ELISA, pretože RPR je citlivejšia pri primárnom syfilise, RPHA v neskorších štádiách ochorenia a ELISA vo všetkých štádiách. Mikroskopicky čitateľné netreponemálne testy zahŕňajú VDRL test a USR test. Netreponemálne testy sa používajú ako skríningové testy, pretože môžu poskytnúť falošne pozitívne výsledky. IN treponém testy používajú antigény treponémového pôvodu. Používajú sa na potvrdenie výsledkov netreponemových testov (falošne pozitívne?) s klinickým, epidemiologickým a anamnestickým podozrením na syfilis, na diagnostiku latentných a neskorých foriem, na retrospektívnu diagnostiku. Treponemálne testy zahŕňajú: RSKt (RSK s treponémovým antigénom), RIBT (alebo RIT) - reakcia imobilizácie bledého treponému, RIF (jedna z najlepších reakcií), RPHA, ELISA, imunoblotting.

Mikrobiologická diagnostika syfilisu

Praktická práca

Medicína a veterinárstvo

Názov "bledý" treponém dostal kvôli nízkej schopnosti sfarbenia. Existujú aj ďalšie patogénne treponémy: T. pertenue - pôvodca yaws, T. carateum - pôvodca pinty, T. bejel - pôvodca chronickej generalizovanej spirochetózy (bejel). Špecifikovaní pôvodcovia a tzv.

Metodické pokyny pre žiakov na praktickú hodinu č.36.

Téma lekcie:

Cieľ: Štúdium metód mikrobiologickej diagnostiky, terapie a prevencie syfilisu.

Modul 2 . Špeciálna, klinická a ekologická mikrobiológia.

Téma 36: Mikrobiologická diagnostika syfilisu.

Relevantnosť témy:

Pôvodca syfilisu

Syfilis je infekčné sexuálne prenosné ochorenie spôsobené Treponema pallidum, charakterizované poškodením kože, vnútorných orgánov, kostí a nervového systému. Existuje získaný a vrodený syfilis.

Taxonómia. Pôvodcu syfilisu - bledý treponém (Treponema pallidum) - objavili v roku 1905 F. Shaudin a E. Hoffman; patrí do čeľade Spirochaetaceae, divízia Gracilicutes.

Morfológia a farbiace vlastnosti.Názov "bledý" treponém dostal kvôli nízkej schopnosti sfarbenia. Existujú aj ďalšie patogénne treponémy: T. pertenue - pôvodca yaws, T. carateum - pôvodca pinty, T. bejel - pôvodca chronickej generalizovanej spirochetózy (bejel). Tieto patogény a choroby, ktoré spôsobujú, sú bežnejšie v regiónoch s horúcim a vlhkým podnebím. Bledý treponém - tenká baktéria v tvare špirály, dlhá 4 až 14 mikrónov, s rovnomernými malými kučeravkami (8-14 kučier); spolu so špirálou môžu mať iné formy - vo forme cýst, granúl, L-foriem; morené podľa Romanovského-Giemsa v charakteristickej slabo ružovej farbe. Pohyby od špirály do ohybu.

Kultivácia.Bledý treponém je obligátny anaerób, mimoriadne náročný na živné pôdy. Treponémy kultivované na živných pôdach – kultúrna spirochéta – sa líšia od patogénnej nižšej virulencie, ale ich antigény sú podobné, čo sa využíva pri sérodiagnostike syfilisu.

Antigénna štruktúra.Bledý treponém je charakterizovaný antigénnymi asociáciami s inými treponémami, ako aj s lipoidmi zvieracích a ľudských tkanív. V patogéne bolo identifikovaných niekoľko antigénov, z ktorých jeden, lipoidný antigén, je identický s lipoidným extraktom z hovädzieho srdca.

odpor. V prostredí je bledý treponém slabo odolný; v 55 0 C odumiera do 15 minút, citlivý na sušenie, svetlo, ortuťové soli, bizmut, arzén, penicilín. Na domácich predmetoch zostáva infekčný, kým nezaschne; dobre zachované v tkanive mŕtvoly.

vnímavosť zvierat.Experimentálne je možné vyvolať patologický proces v semenníkoch a na koži králikov a v koži ľudoopov.

Epidemiológia. Zdrojom nákazy je chorý človek. Infekcia sa vyskytuje najmä sexuálnym kontaktom, zriedkavo prostredníctvom predmetov pre domácnosť (okuliare, zubné kefky, cigarety atď.) kontaminovaných výtokom od pacienta; je možná infekcia bozkami, mliekom dojčiacej matky (syfilis v domácnosti), nie sú vylúčené prípady infekcie počas transfúzie krvi od darcov so syfilisom.

Patogenéza a klinický obraz.Pôvodca syfilisu vstupuje do tela cez kožu alebo sliznicu, šíri sa cez orgány a tkanivá a spôsobuje ich poškodenie. Inkubačná doba trvá v priemere 3-4 týždne. Po inkubačnej dobe prebieha syfilis cyklicky vo forme primárnych, sekundárnych a terciárnych období. V mieste zavlečenia patogénu (na genitáliách, v ústnej dutine a pod.) sa objaví primárna lézia - tvrdý chancre - ostro ohraničený plomba s vredom na povrchu. Sekundárne obdobie syfilisu trvá 3-4 roky, je charakterizované vyrážkou, porušením celkového stavu tela. Terciárne obdobie je charakterizované poškodením kože, slizníc, vnútorných orgánov, kostí, nervového systému: objavujú sa útvary náchylné na rozpad, ulcerácia.

Imunita. Vrodená imunita voči syfilisu neexistuje. So syfilisom sa vyvinie nesterilná imunita; Po liečbe sa imunita nezachová, takže sú možné opakované ochorenia.

Mikroskopia v tmavom poli sa používa na detekciu bledého treponému vo výboji tvrdého chancre. Na konci primárneho a sekundárneho obdobia sú Wassermannove sergologické reakcie, sedimentárne reakcie Kahna, cytocholické a iné testy, ktoré zisťujú protilátky proti bledému treponému, pozitívne. Pri hromadných vyšetreniach sa používa selekčná reakcia, alebo mikroreakcia na skle, s kvapkou krvi alebo séra a špeciálnym antigénom. Výskumné laboratóriá využívajú aj treponémovú imobilizačnú reakciu a ďalšie moderné metódy.

Schéma mikrobiologického výskumu syfilisu

Mikroskopické vyšetrenie Sérodiagnostika

(komplex sérologických reakcií):

Wassermanova reakcia

Treponémová imobilizačná reakcia

Mikroskopia natívneho preparátu RIF

V tmavom poli

ODPOVEĎ ODPOVEĎ

Liečba. Najúčinnejšími antimikrobiálnymi látkami sú antibiotiká série penicilínov. Používajú sa aj prípravky z bizmutu, jódu atď.

Prevencia. Neexistuje žiadna špecifická profylaxia. Nešpecifická prevencia spočíva v dodržiavaní hygienických pravidiel, ako aj vo vykonávaní komplexu sanitárnych a hygienických opatrení verejného charakteru: účtovanie pacientov so syfilisom, hospitalizácia všetkých pacientov s infekčnými formami so zapojením všetkých rodinných príslušníkov chorého človeka pri vyšetrení, systematické vyšetrenie rizikových skupín, edukácia obyvateľstva a pod.

Konkrétne ciele:

Oboznámte sa s morfológiou pôvodcu syfilisu.

Určite znaky klinického priebehu syfilisu.

Definujte pojmy "tkanivový" a "kultúrny" treponém.

Interpretujte výsledky mikroskopického vyšetrenia.

Študovať metódy sérologickej diagnostiky syfilisu.

Oboznámte sa s metódami prevencie a špecifickej terapie.

Byť schopný:

  • Zbierajte materiál na výskum od pacientov
  • Interpretujte výsledky mikroskopického vyšetrenia
  • Vedieť, ako vykonať Wassermanovu reakciu

Teoretické otázky:

1. Patogén.

  • Vlastnosti. odpor.
  • Patogenita pre ľudí a zvieratá. Patogénne faktory, toxíny.
  • Patogenéza ochorenia u ľudí, imunita.
  • Mikrobiologická diagnostika.
  • Špecifická prevencia a liečba

2. Ciele nastavenia Wassermanovej reakcie.

3. Diagnostická hodnota Wassermannovej reakcie a sedimentárnych reakcií.

4. Mechanizmus Wassermanovej reakcie.

5. Vlastnosti imunity pri syfilise.

Praktické úlohy, ktoré sa vykonávajú v triede:

  • Mikroskopia demonštračných preparátov.
  • Náčrt demonštračných mikroprípravkov v protokole.
  • Analýza schémy laboratórnej diagnostiky.
  • Formulácia protokolu.

Literatúra:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Lekárska mikrobiológia, imunológia a virológia / Učebnica pre lekárske univerzity, Petrohrad: „Špeciálna literatúra“, 1998.- 592 s.

2. Timakov V.D., Levašev V.S., Borisov L.B. Microbiology / Textbook.-2nd ed., Revidované. a doplnkové - M.: Medicína, 1983, - 512s.

3. Pyatkin K.D. Krivoshein Yu.S. Mikrobiológia s virológiou a imunológiou - Kyjev: Vishcha school, 1992. - 431s.

4. Lekárska mikrobiológia /Editoval V.I. Pokrovsky.- M.: GEOTAR-MED, 2001.- 768s.

5. Sprievodca praktickými cvičeniami z mikrobiológie, imunológie a virológie. / Ed. M.P. Zykova.- M. "Medicína". 1977. 288. roky.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Mikrobiológia. / Ed. F.K. Cherkes.M.: Medicína, 1986. 512s.

7. Poznámky k prednáške.

Doplnková literatúra:

1. Makiyarov K.A. Mikrobiológia, virológia a imunológia.- Alma-Ata.: "Kazachstan", 1974. 372s.

2. Titov M.V. Infekčné choroby.- K., 1995. 321s.

3. Šuvalová E.P. Infekčné choroby.- M.: Medicína, 1990.- 559s.

4. BME, zväzok 1, 2, 7.

5. Pavlovič S.A. Lekárska mikrobiológia v grafoch: Proc. príspevok na zdravotnú in-tov.Mn.: Vyš. škola, 1986. 255s.

Stručné pokyny pre prácu na praktickej hodine.

Na začiatku vyučovacej hodiny sa kontroluje úroveň prípravy žiakov na vyučovaciu hodinu.

  • Samostatná práca.
  • formulácia Wassermanovej reakcie.
  • Zaúčtovanie Wassermanovej reakcie a zaznamenanie do protokolu.
  • Analýza a záznam laboratórnych diagnostických schém do protokolu.

Súčasťou samostatnej práce je aj mikroskopovanie ukážkových príprav a ich zakreslenie do protokolu vyučovacej hodiny.

Na konci hodiny je vykonaná kontrola testu a rozbor konečných výsledkov samostatnej práce každého študenta.

Technologická mapa praktickej hodiny

č. p \ p

Etapy

Čas v min.

Spôsoby učenia

Vybavenie

Poloha

Kontrola a oprava výstupnej úrovne prípravy na vyučovaciu hodinu

20

Testovacie položky výstupnej úrovne

Tabuľky.

Predmetové testy.

študovňa

Samostatná práca

35

Graf

logická štruktúra

Odber demonštračných prípravkov, biologických prípravkov.

Sebakontrola a oprava naučeného učiva

15

Cielené tréningové programy

Kontrola testu

15

Testy

Analýza výsledkov práce

Algoritmus laboratórnej práce:

Štúdium schémy laboratórnej diagnostiky syfilisu.

Mikroskopia pripravených náterov z kultúrnych a tkanivových treponémov.

Oboznámenie sa s pravidlami odberu materiálu od pacientov na mikroskopiu testovaného materiálu.

Mikroskopia a analýza demonštračných preparátov.

Kresliace prípravy v protokole.

Zapisovanie schém laboratórnej diagnostiky do protokolu.

Formulácia protokolu.

Kontrola testu a rozbor výsledkov samostatnej práce každého študenta.


Cielené vzdelávacie úlohy:

1. Do ATC bol prijatý pacient s diagnózou „primárny syfilis“. Ktorá z nasledujúcich diagnostických metód sa používa v tomto štádiu ochorenia?

A . mikroskopia v tmavom poli;

C. RP v géli

D. RA

E . nepriama imunofluorescencia

2. U pacientky oddelenia maxilofaciálnej chirurgie pri stagingu Wassermanovej reakcie dopadla negatívne. Ktoré z nasledujúcich výsledkov určujú fenomén negatívneho RSK?

A . aglutináciou erytrocytov;

B . prítomnosťou sedimentu erytrocytov;

C . zmenou farby kvapaliny;

D . tvorbou filmu

E . prítomnosťou hemolýzy v skúmavkách.

3. Vyšetrenie pacienta s CMP odhalilo papulózno-ružové vyrážky na trupe a končatinách a zväčšené lymfatické uzliny. Predbežná diagnóza syfilisu. Aká metóda laboratórnej diagnostiky môže potvrdiť túto diagnózu?

A. alergický;

b. biologické;

C . bakteriologické;

D . bakterioskopické;

E. ELISA

4. Pri príjme našiel zubár v ústnej dutine pacienta tvrdý chancre. Ktoré z nasledujúcich metód laboratórnej diagnostiky možno použiť na stanovenie diagnózy?

A . treponémová imobilizačná reakcia

B . Wassermannova reakcia

C. Kahnova reakcia

D. RA

E . bakterioskopické

5. Žena prišla do predpôrodnej poradne v 8. týždni tehotenstva. Pri vyšetrení jej odobrali krv na kontrolu prítomnosti špecifických protilátok proti treponému. Ktoré z nasledujúcich sérologických testov možno použiť na zistenie protilátok proti treponému?

A. Wrightova reakcia

B . Wassermannova reakcia

C. Vidalova reakcia

D . Bordet-Ganguova reakcia

E. RTGA.

6. Na potvrdenie diagnózy syfilis laborant vykonal sérologické vyšetrenie, pri ktorom použil pacientovo krvné sérum, kardiolipidový antigén, komplement a indikátorový systém. Ako sa volá daná reakcia?

A . imobilizačná reakcia treponému;

B . Wassermanova reakcia;

C. Kahnova reakcia

D. RP

E . imunofluorescenčná reakcia.

7. Pri vykonávaní sérologického testu na zistenie protilátok proti pôvodcovi syfilisu v krvnom sére pacienta boli treponémy inkubované so sérom pacienta v anaeróbnych podmienkach, po ktorých baktérie stratili svoju pohyblivosť. Aká bola reakcia a čo to znamená?

A . Wassermanova reakcia, pacient má syfilis;

B .Wassermanova reakcia, pacient má inkubačnú dobu;

C . treponémová imobilizačná reakcia, pacient má syfilis;

D . nepriama imunofluorescenčná reakcia, pacient má syfilis;

E . treponém imobilizačná reakcia, pacient mal raz syfilis.

8. Na sérologickú diagnostiku syfilisu pomocou Wassermanovej reakcie laborant pripravil tieto reagencie: kardiolipidový antigén, izotonický roztok chloridu sodného, ​​hemolytický systém. Aká ďalšia zložka je potrebná na uskutočnenie tejto reakcie?

A . živé treponémy;

B . ovčie erytrocyty;

C. dopĺňať;

D . antiglobulínové sérum;

E . diagnostické precipitačné sérum.

9. V mikropreparáte pripravenom z bodiek pacientových lymfatických uzlín, farbených podľa Romanovského-Giemsa, lekár odhalil tenké mikroorganizmy s 12-14 jednotnými kučeravkami svetloružovej farby. O pôvodcovi akej infekčnej choroby môžeme v tomto prípade hovoriť?

A . recidivujúca horúčka;

b. leptospiróza;

C. leishmanióza

D. syfilis

E. trypanozomiáza.

10. Zoškrab z ústnej sliznice bol odobratý pacientovi s podozrením na primárny syfilis. Mikroskopia náteru zafarbeného podľa metódy Romanovského-Giemsa odhalila stočené fialové baktérie. Ktorý z nasledujúcich záverov je správny?

A . pacient bol diagnostikovaný T. pallidum;

B . Pacient má atypickú formu T. pallidum;

C . pacient má nepatogénne treponémy;

D . bola zvolená nesprávna metóda farbenia;

E. -

11. Lekár mal u pacienta podozrenie na primárny syfilis. Aký výskumný materiál je potrebné vziať na potvrdenie diagnózy?

A . tkanivový mok z tvrdých žliaz a bodiek lymfatických uzlín;

B . škrabanie z kožných vyrážok;

C. likér;

D. hlien z nosa

E. sliny.

12. Pacientovi s podozrením na sekundárny syfilis bola odobratá krv. Aká diagnostická metóda by sa mala použiť na potvrdenie diagnózy?

A . Vidalova reakcia;

B . alergický test;

D . Bordet-Ganguova reakcia

E . bakteriologická metóda

C . nepriama imunofluorescenčná reakcia.


Rovnako ako ďalšie diela, ktoré by vás mohli zaujímať

68128. Slová vo vіrshі - ja raj v duši 78,5 kB
Meta: zničiť akademické poznatky z teórie literatúry a ideologickej a umeleckej analýzy básnického diela, aby sa uľahčilo čítanie rôznymi spôsobmi; obrazne rozvíjať poetické myšlienky; obrátiť lásku k umeleckému slovu a k rodnej prírode. Prečítam si poetické riadky a vy ste vinní, že ste predložili ...
68129. Intelektuálna hra "Literárna vesselka" Žiješ v srdciach ľudí, Taras! 43,5 kB
Ševčenka rozvíjať logické myšlienky rôznym čítaním, naučiť sa rozumieť Ševčenkovým slovám a rozvíjať svoju kreativitu. Taras Shevchenko Taras Tse rebelantský prorokuje, že meno je známe nielen Ukrajincom, ale celému svetu. Shevchenko tse krinitsa z zhelelny water yak vtamovu duchovnú spraga k ľuďom.
68130. Zoznámenie sa s logikou krajiny 28,5 kB
Dnes sa deti liečia za nepredstaviteľne drahú cenu. Deti môžu chodiť do školy najkratšou cestou, ale roky sa môžu túlať rôznymi labyrintmi. Deti napodobňujú nástup do autobusu a jazdu. Os spoločnosti jaka Deti Borya Petryk Yurko Vira Stas Ira.
68131. Analógia. Dobrir malyunkiv analogicky 263,5 kB
Typ lekcie: naučená myseľ a začiatočník Obladácia: geometrické obrazce a malé predmety pre Grim Photographer; jednotlivé sady geometrických obrazcov graloto baby so sekvenciou. Rukami upratujem postavy. Všetky figúrky rôznych farieb A teraz nechajte svoje oči žasnúť...
68132. Cestujte cez oceán logických úloh 27,5 kB
Meta: Poznať deti s rôznym chápaním; rozvíjať myšlienky, jazyk, pamäť, opatrnosť; vikhovuvat smilivista, rіshuchіst. Vedúci lekcie Informujte tých a označte lekciu. Dnes sme virushaemo na oboplávaní sveta drahší na lodi. Sme kontrolovaní na množstvo dobrôt. Lyudina je namyslený idiot. Myšlienky sú vyjadrené slovami.
68133. Sumy a nesumіsnі rozumejú. Žiadosť o opakovanie 84,5 kB
Meta: systematizovať poznatky učenia o porozumení súčtom a nezrovnalostiach porozumenia dôkladne porozumieť poznaniu logického poriadku rozvoja logického myslenia všímavosti pamäti mysle; prebudiť lásku k tvorom, prebudiť vedomý záujem o všetko živé, formovať sebaosvietenie...
68136. MODERNIZÁCIA VŠETKOHO NA POCHOPENIE UKRAJINE: MECHANIZMY INŠTITUCIONÁLNEJ REGULÁCIE 188 kB
Efektívnosť a efektívnosť fungovania systému vitálneho osvetlenia na Ukrajine na začiatku 21. storočia môže byť bezpečná iba na jeseň, ak to nebude znieť ako oživenie timchasových cieľov, generované ekonomickou a politickou nestabilitou. , demografická kríza, sociokultúrne vákuum.

T. pallidum poddruh pallidum - špirálovitá baktéria s veľkosťou 6-14x0,2-0,3 mikrónov; v kultúrach môžu byť veľké. Kučery špirály sú rovnaké, ale na výšku ich môže byť až 14. Sú schopné vytvoriť tvar L.

Základné ako sa šíri syfilis- priečne delenie. Pôvodca syfilisu vo vonkajšom prostredí nie je stabilný a pri vyschnutí odumiera, no v chlade pretrváva až 50 dní. Zahrievanie na teplotu 40 ° C počas hodiny vedie k strate patogénnych vlastností; pri 48 °C baktérie zahynú do 10 min.

Pôvodca syfilisu slabo zafarbené anilínovými farbivami (odtiaľ názov "bledá spirochéta"). baktérie syfilis redukovať dusičnan strieborný na kovové striebro, čo dáva látkam čiernu alebo tmavohnedú farbu.

V domácej praxi je bežný spôsob striebrenia podľa Morozova. Podľa Romanovského-Giemsa sa stáva ružovým a nepatogénnym treponém- vo fialovej alebo modrej farbe. Používa sa aj Burri negatívne farbenie.

Kultúrne vlastnosti syfilisu. Kultúra pôvodcu syfilisu

Bledá spirochéta náročný na podmienky pestovania, zle rastie na umelých médiách; metódy stabilnej produkcie kultúr ešte nie sú dostupné.

U nás najväčší počet kmene syfilisu identifikovali kazaňskí mikrobiológovia V.M. Aristovsky a P.P. Geltzer.

Tieto "Kazan" kmene syfilisu spolu s kmeňom Reiter sa používajú na výrobu Ag na sérodiagnostiku. Pri dlhodobom pestovaní baktérie syfilis prispôsobiť sa jednoduchšiemu prostrediu (napríklad Kitta-Tarozzi) a stratiť svoje patogénne vlastnosti.

Kolónie syfilisu malé, objavujú sa na 3-5 deň kultivácie.

Obsah článku

Bledý treponém

Morfológia a fyziológia

T.pallidum má špirálovitý tvar, protoplastický valec, ktorý je stočený do 8-12 pralenov. Z koncov bunky vybiehajú 3 periplazmatické bičíky. Bledý treponém nevníma dobre anilínové farbivá, preto je zafarbený farbou Romanovsky-Giemsa. Najúčinnejšou metódou je však štúdium v ​​mikroskope s tmavým poľom alebo mikroskopom s fázovým kontrastom. Mikroaerofilné. Nerastie na umelých živných pôdach. T. pallidum sa kultivuje v tkanive semenníkov králika, kde sa dobre množí a plne si zachováva svoje vlastnosti, čo spôsobuje orchitídu u zvieraťa. Antigény. Antigénna štruktúra T. pallidum je komplexná. Je spojená s proteínmi vonkajšej membrány, lipoproteínmi. Posledne menované sú skrížene reaktívne antigény bežné pre ľudí a dobytok. Používajú sa ako antigén vo Wassermannovom teste na sérodiagnostiku syfilisu.

Patogenita a patogenéza

Faktory virulencie Treponema pallidum zahŕňajú proteíny vonkajšej membrány a LPS, ktoré po uvoľnení z bunky prejavujú svoje toxické vlastnosti. Schopnosť treponému tvoriť počas delenia oddelené fragmenty, prenikajúce hlboko do tkanív, možno zároveň pripísať faktorom virulencie. V patogenéze syfilisu existujú tri štádiá. Pri primárnom syfilise sa pozoruje tvorba primárneho ohniska - tvrdého chancre v mieste vstupnej brány infekcie s následným prienikom do regionálnych lymfatických uzlín, kde sa patogén množí a hromadí. Primárny syfilis trvá približne 6 týždňov. Druhý stupeň je charakterizovaný generalizáciou infekcie sprevádzanou penetráciou a cirkuláciou patogénu v krvi, čo je sprevádzané kožnými vyrážkami. Trvanie sekundárneho syfilisu u neliečených pacientov sa pohybuje od 1 do 2 rokov. V treťom štádiu sa nachádzajú infekčné granulómy (ďasná náchylné na rozpad), lokalizované vo vnútorných orgánoch a tkanivách. Toto obdobie u neliečených pacientov trvá niekoľko rokov a končí sa poškodením centrálneho nervového systému (progresívna paralýza) alebo miechy (tasca dorsalis).

Imunita

So syfilisom existuje humorálna a bunková imunitná odpoveď. Výsledné protilátky nemajú ochranné vlastnosti. Bunková imunitná odpoveď je spojená s fixáciou patogénu a tvorbou granulómov. K eliminácii treponému z tela však nedochádza. Nepriaznivé podmienky prostredia zároveň vyvolávajú tvorbu cýst treponémami, ktoré sú lokalizované v stene ciev. Predpokladá sa, že to naznačuje prechod choroby do štádia remisie. Spolu s cystami tvoria treponémy tvar L. Pri syfilise sa tvorí HRT, ktorá sa dá zistiť kožným alergickým testom so suspenziou usmrteného treponému. Predpokladá sa, že prejav terciárneho obdobia syfilisu je spojený s HRT.

Ekológia a epidemiológia

Syfilis je typická antroponotická infekcia. Ochoria len ľudia, ktorí sú v prírode rezervoárom infekcie. K prenosu infekcie dochádza sexuálne a oveľa menej často - cez spodnú bielizeň a iné predmety. Vo vonkajšom prostredí (vzduch) treponém rýchlo zomrie.

Syfilis a iné treponematózy

Syfilis je chronické infekčné pohlavné ochorenie človeka, má cyklický progresívny priebeh, postihuje kožu, sliznice, vnútorné orgány a nervový systém. Pôvodcom ochorenia je Treponema pallidum , Vo vývoji syfilisu existujú tri hlavné obdobia, ktorých laboratórne diagnostické metódy majú svoje vlastné charakteristiky. V ranom období ochorenia je materiálom pre laboratórnu diagnostiku izolácia z tvrdého chancre, bodkovaného z lymfatických uzlín, škrabky z roseoly, syfilis atď. V sekundárnom a terciárnom období sa vyšetruje krvné sérum a likvor.Vzhľadom k tomu, že izolácia čistých kultúr treponému v bežných bakteriologických laboratóriách je nemožná, v primárnom období ochorenia (zriedkavejšie neskôr) sa používa bakterioskopická diagnostická metóda. sa vykonáva. Počnúc sekundárnym obdobím sa používajú najmä sérologické metódy.

Bakterioskopický výskum

Pred odberom patologického materiálu najskôr utrite syfilitický vred vatovým tampónom, aby ste odstránili mastný povlak a kontaminujúcu mikroflóru. Potom sa skalpelom alebo kovovou špachtľou podráždi dno tvrdého chancre, prípadne sa vred prstami v gumenej rukavici energicky vytlačí zo strán, aby sa vytlačil exsudát z rany. S malým množstvom čírej kvapaliny sa môže pridať do kvapky 0,85% roztoku chloridu sodného. Ak nie je možné odobrať materiál zo spodnej časti chancre (fimóza, zjazvenie vredu atď.), Regionálne lymfatické uzliny sa prepichnú. tmavé zorné pole (lepšie!), Alebo pomocou fázovo kontrastného alebo anoptrálneho mikroskopu. Bledý treponém v tmavom zornom poli vyzerá ako mierne lesklá tenká jemná špirála so strmými rovnomernými zaoblenými primárnymi kučeravkami. Pohyby sú plynulé, takže sa ohýba pod uhlom. Ale výkyvy podobné kyvadlu, ktoré sú pre ňu obzvlášť charakteristické. Pôvodcu syfilisu treba odlíšiť od Treponema refringens (kolonizuje vonkajšie pohlavné orgány), ktorý je hrubší, drsnejší, s nepravidelnými veľkými kučerami a má aktívne nepravidelné pohyby, ale neohýba sa. Fuzosp-irochetózne symbiózne treponémy sa vyznačujú tenkým vzorom, jemnými kučeravkami a nepravidelným pohybom.Pri diagnostike orálneho syfilisu treba odlíšiť aj bledý treponém od zubných treponém, najmä T. dentium a tiež od T. buccalis. Prvý z nich je vo všeobecnosti ťažké odlíšiť od syfilitického. Je pravda, že je kratší, má 4-8 ostrých kučier, nedochádza k kyvadlovému pohybu. T. buccalis je hrubší, má hrubé počiatočné kučery a nepravidelný pohyb.V prípade akýchkoľvek pochybností treba mať na pamäti, že všetky saprofytické treponémy, na rozdiel od bledých, sa dobre farbia anilínovými farbivami. Neprenikajú do lymfatických uzlín, takže štúdium punkcií má veľkú diagnostickú hodnotu. Detekcia typických treponémov v bodkovaných lymfatických uzlinách nepochybne potvrdzuje diagnózu syfilisu. Jeho výhody spočívajú v tom, že materiál sa rýchlo skúma a morfológia treponémov v živom stave je najcharakteristickejšia. Atramentové nátery podľa metódy Burri sa už nepoužívajú.Ak nie je možné vykonať štúdiu v tmavom zornom poli, možno použiť rôzne metódy farbenia. Bledý treponém nevníma dobre anilínové farbivá. Z mnohých navrhovaných metód farbenia sa najlepšie výsledky dosiahnu pri použití farbenia Romanovkim-Giemsa. Vytvorené šmuhy sa fixujú metylalkoholom alebo v Nikiforovovej zmesi. Výsledky jasnosti sa dosiahnu, keď sa do prípravku naleje škvrna Romanovsky-Giemsa. Na tento účel sa do Petriho misky vložia úlomky zápaliek, na ne sa položí sklíčko s náterom nadol a farbivo sa naleje, kým náter nezmáča. Doba farbenia je dvojnásobná. Pod mikroskopom majú bledé treponémy bledoružovú farbu, iné druhy treponémov sa sfarbujú do modra alebo modrofialova, možno použiť aj Morozovovu metódu striebrenia. Treponémy si úplne zachovávajú svoje morfologické znaky a pod mikroskopom vyzerajú hnedo alebo takmer čierno. Ale postriebrené prípravky sa dlho neskladujú. V poslednej dobe sa zriedkavo používajú metódy farbenia treponému.Ak sa syfilis lieči chemoterapeutickými liekmi, je takmer nemožné identifikovať patogén v patologických materiáloch aj pomocou tmavého zorného poľa. Po prijatí negatívnej analýzy sa musí zopakovať.

Sérologická diagnostika syfilisu

Pri vykonávaní sérologických reakcií sa v súčasnosti používajú tieto výskumné metódy zjednotené na Ukrajine: reakcia fixácie komplementu (RCC), imunofluorescencia (RIF), imobilizácia treponému (PIT), precipitačná mikroreakcia (MPR) a enzýmová imunoanalýza (ELISA). za hlavnú a najbežnejšiu reakciu sa považovala reakcia fixácie komplementu alebo Wassermanova reakcia (РВ, RW). Na jej nastavenie sa používa krvné sérum pacienta so syfilisom a likvor pri poškodení nervovej sústavy.Spôsob nastavenia Wassermanovej reakcie sa nelíši od techniky vedenia RSC. Rozdiel je len v tom, že pri RO sa používa nielen špecifický treponém, ale nešpecifický kardiolipínový antigén.Z kubitálnej žily sa odoberá 5-10 ml krvi nalačno alebo najskôr 6 hodín po jedle. Nemôžete odobrať krv pacientom s horúčkou, po požití alkoholu a mastných jedál, tehotným ženám 10 dní pred pôrodom a ženám pri pôrode. Sérum extrahované z krvi sa zahrieva pri teplote 56 °C počas 30 minút, aby sa inaktivoval vlastný komplement. RO je nevyhnutne nastavený s dvoma antigénmi: špecifickým a nešpecifickým.Špecifický ultrazvukový treponémový antigén sa pripravuje z kultúr svetlého treponému (Reiterov kmeň) pestovaných v skúmavkách a vystavených ultrazvuku. Vyrába sa vo forme lyofilizovaného prášku. Nešpecifický kardiolipínový antigén sa pripravuje alkoholovou extrakciou lipidov zo srdca hovädzieho dobytka a purifikáciou z balastných zmesí, balených v 2 ml ampulkách. Na zavedenie antigénu do RO sa titruje podľa tohto návodu. Bezprostredne pred nastavením RV sa vykoná titrácia komplementu a hemolytického séra podľa rovnakej schémy ako v RSK. Wassermanova reakcia sa hodnotí kvalitatívne aj kvantitatívne. Kvalitatívna reakcia sa uskutočňuje v troch skúmavkách s dvoma antigénmi podľa obvyklej schémy.Výsledky reakcie sa hodnotia podľa systému 4 plus: pozitívna reakcia - keď dôjde k úplnému alebo výraznému oneskoreniu hemolýzy (4 +, 3 +); slabo pozitívna reakcia - čiastočné oneskorenie hemolýzy (2 +); pochybná reakcia - mierne oneskorenie hemolýzy (1 +). V prípade úplnej hemolýzy sa RO považuje za negatívne Každé sérum, ktoré poskytlo pozitívnu kvalitatívnu reakciu, musí byť tiež vyšetrené kvantitatívnou metódou s jeho sekvenčným riedením od 1:10 do 1:640. (3+) oneskorenie hemolýzy. Kvantitatívna metóda nastavenia RO je dôležitá pre posúdenie účinnosti liečby syfilisu. Rýchly pokles titra reaginu naznačuje úspešnú liečbu. Ak sérový titer dlhodobo neklesá, svedčí to o nedostatočnej účinnosti používaných liekov a potrebe zmeniť taktiku liečby.Pri pylori pre séronegatívny primárny syfilis alebo latentný, terciárny alebo vrodený sa odporúča dať Wassermanova reakcia za studena podľa rovnakej schémy. Pri podozrení na neurosyfilis sa RO vykonáva likvorom, ktorý je inaktivovaný, pretože neobsahuje vlastný komplement. Do reakcie sa zavádza nezriedený cerebrospinálny mok a v riedeniach 1 : 2 a 1 : 5. Wassermanova reakcia sa stáva pozitívnou 2-3 týždne po objavení sa tvrdého škrečka. Pri sekundárnom syfilise je pozitívny v 100% prípadov, v terciárnom - v 75%.Okrem toho sa v komplexe sérologických reakcií (CSR) používa ako skríningový test mikroprecipitačná reakcia s krvnou plazmou alebo inaktivovaným sérom.

Mikroreakcia zrážania

Precipitačná mikroreakcia s kardiolipínovým antigénom. Princíp reakcie spočíva v tom, že po pridaní emulzie kardiolipínového antigénu do krvnej plazmy alebo séra pacienta so syfilisom sa vytvorí zrazenina (komplex antigén-protilátka), ktorá sa vyzráža vo forme bielych vločiek. Používajú túto techniku: tri kvapky plazmy (alebo inaktivovaného séra) sa napipetujú do jamky platne, potom sa pridá jedna kvapka emulzie štandardného kardiolipínového antigénu. Reakčné zložky sa miešajú trepaním doštičky počas 5 minút, potom sa pridajú tri kvapky 0,9 % roztoku chloridu sodného a zmes sa nechá ďalších 5 minút pri teplote miestnosti. Povinná kontrola so slabo pozitívnym krvným sérom. Výsledky sa vyhodnocujú voľným okom nad umelým zdrojom svetla. Keď sa v jamke objavia veľké vločky, reakcia sa považuje za pozitívnu (4 +, 3 +), strednú a malú - za slabo pozitívnu (2 +, 1 +). Ak je výsledok negatívny, nevytvorí sa žiadna zrazenina Precipitačná mikroreakcia sa môže uskutočniť aj kvantitatívnou metódou na stanovenie titra precipitujúcich protilátok a vyhodnotenie účinnosti liečby na tomto základe. Vyššie titre MRP sa získajú s plazmou ako so sérom. V zahraničí je analógom MRP s pacientskym sérom VDRL (Laboratórium pre výskum pohlavných chorôb) a s plazmou - RPR (Rapid plasma reagin).

Imunofluorescenčná reakcia (RIF)

Skupina špecifických reakcií, ktoré sa široko používajú na sérologickú diagnostiku syfilisu, zahŕňa nepriamu imunofluorescenčnú reakciu. Ako antigén používa suspenziu patogénnych bledých treponém kmeňa Nichols z parenchýmu semenníkov králika na 7. deň po infekcii. Reakcia je v dvoch modifikáciách: RIF-ABS a RIF-200. V prvom variante sa používa protilátkový sorbent (sonikat) - ultrazvukový treponémový antigén pre CSC. Vyrába ho podnik Kaunas na výrobu bakteriálnych prípravkov (Litva). Pri voľbe RIF-200 sa pacientovo sérum zriedi 200-krát, aby sa odstránil účinok skupinových antitreponemálnych protilátok.RIF-ABS sa nastaví na tenké, dobre odtučnené podložné sklíčka. Na rubovej strane pohárov orezávačom skla je vyznačených 10 kruhov s priemerom 0,7 cm.V rámci kruhu sa na sklo aplikuje antigén - suspenzia bledých treponém - v takom množstve, aby bolo 50- 60 z nich v zornom poli. Nátery sa sušia na vzduchu, fixujú nad plameňom a 10 minút v acetóne. Do samostatnej skúmavky pridajte 0,2 ml sorbentu (sonikatu) a 0,5 ml krvného séra pacienta, dobre premiešajte. Zmes sa nanesie na náter (antigén) tak, aby ho rovnomerne pokryl, inkubuje sa 30 minút vo vlhkej komore pri 3-7 °C (fáza II reakcie). Potom sa náter premyje fosfátovým tlmivým roztokom, vysuší sa a na 30 minút sa naň aplikuje fluorescenčné sérum anti-Shobulin, ktoré sa umiestni do vlhkej komory pri 37 °C (fáza II). Liečivo sa opäť premyje fosfátovým tlmivým roztokom, suší a skúma pod fluorescenčným mikroskopom.Pri pozitívnej reakcii vyžarujú bledé treponémy zlatozelené svetlo, pri negatívnej reakcii nežiaria 200x fosfátovým tlmivým roztokom. Pri vykonávaní imunofluorescenčnej reakcie s cerebrospinálnou tekutinou pacienta so syfilisom nervového systému sa používajú RIF-c a RIF-10, t.j. kvapalina sa zavádza do reakcie neinaktivovaná a zriedená alebo zriedená v pomere 1:10.

Treponema pallidum imobilizačný test (PIT)

Reakcia imobilizácie bledých treponémov (PIT) je založená na fenoméne straty ich pohyblivosti v prítomnosti imobilizujúcich antitreponemálnych protilátok séra a komplementu pacienta v podmienkach anaerobiózy. Ako antigén v reakcii sa používa suspenzia bledých treponém z tkaniva semenníkov králika infikovaného laboratórnym kmeňom Nichols. Suspenzia sa zriedi sterilným 0,85% roztokom chloridu sodného tak, aby v zornom poli bolo 10-15 spirochét. Na uskutočnenie reakcie sa odoberie 0,05 ml krvného séra pacienta, 0,35 ml antigénu a 0,15 ml komplementu. zmiešané v sterilnej skúmavke. Skúsenosť je sprevádzaná kontrolami séra, antigénu a komplementu. Skúmavky sa umiestnia do anaerostatu, vytvoria sa anaeróbne podmienky a udržiavajú sa v termostate 18-20 hodín pri teplote 35 °C. Potom sa z každej skúmavky pripravia tlakové kvapky, spočíta sa aspoň 25 treponém a koľko sú mobilné a koľkí sú imobilní. Percento špecifickej imobilizácie bledých treponém sa vypočíta podľa vzorca: x = (A-B) / B * 100, kde X je percento imobilizácie, A je počet mobilných treponém v kontrolnej skúmavke, B je počet mobilných treponémy v skúmavke. Reakcia sa považuje za pozitívnu, keď je percento imobilizácie 50 alebo viac, slabo pozitívne - od 30 do 50, pochybné - od 20 do 30 a negatívne - od 0 do 20. Ovčinnikov. Anaeróbne podmienky experimentu sa vytvoria umiestnením reagujúcej zmesi (sérum, antigén, komplement) do melanžúr, ktorých oba konce sú uzavreté gumeným krúžkom. Melangerínová technika umožňuje zaobísť sa bez zložitých zariadení a prístrojov na vytváranie anaerobiózy, ale poskytuje výsledky, ktoré nie sú dostupné klasickej mikroaneurostatickej technike.Imobilizácia treponému a imunofluorescenčné reakcie sa považujú za najšpecifickejšie v sérologickej diagnostike syfilisu. Napriek tomu sa PIT napriek svojej špecifickosti neodporúča používať v širokej praxi kvôli zložitosti nastavenia.

Enzýmová imunoanalýza (ELISA)

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) sa vykonáva s kadriolipínovým antigénom (nešpecifická, selekčná reakcia) a treponémom (špecifická reakcia), čo potvrdzuje diagnózu syfilis.testovacie sérum. Ak obsahuje protilátky proti treponému, vzniká komplex antigén-protilátka (fáza II). Po vymytí nenaviazaných nešpecifických protilátok sa do jamiek pridá antiglobulínové sérum konjugované s enzýmom (najčastejšie s chrenovou peroxidázou). Konjugát je pevne naviazaný na komplex antigén-protilátka (fáza II) Po zmytí nenaviazaného konjugátu sa do jamiek pridá substrát farbenia OFD - ortofenyléndiamín (fáza III). Reakcia peroxidázy sa zastaví pridaním kyseliny sírovej. Na kontrolu dali tie isté vzorky s pozitívnym a zjavne negatívnym sérom.Výsledky analýzy sa zohľadňujú pomocou fotometra, ktorý určuje optickú hustotu v dvojvlnnom režime (492 nm a 620 nm). Na nastavenie enzýmovej protilátkovej reakcie sú okrem fotometra potrebné jedno- a osemkanálové automatické pipety s polypropylénovým hrotom a príslušné sady diagnostických testovacích systémov.V sérologickej diagnostike syfilisu je široko používaná metóda ELISA. Rovnako účinný je aj na zistenie ochorenia v inkubačnej dobe (1-2 týždne po infekcii), s klinickými prejavmi ochorenia a jeho latentných foriem. Veľmi často sa ELISA využíva pri skríningových vyšetreniach populácie najmä na krvných transfúznych staniciach.V laboratórnej praxi sa niekedy využíva aj imunitná adhézna reakcia (RIP) a nepriama hemaglutinačná reakcia (RNHA). Prvý z nich je založený na skutočnosti, že patogénne testikulárne treponémy kmeňa Nichols po zmiešaní so sérom pacienta za prítomnosti komplementu a ľudských erytrocytov adherujú na povrch červených krviniek. RNHA sa široko používa na diagnostiku syfilisu kvôli svojej metodologickej jednoduchosti. Pozitívne sa stáva už tri týždne po infekcii. Pozitívny výsledok reakcie zostáva roky po zotavení. V zahraničí je analógom tejto reakcie TRHA (Treponema pallidum hemoaglutination).
KATEGÓRIE

POPULÁRNE ČLÁNKY

2023 "kingad.ru" - ultrazvukové vyšetrenie ľudských orgánov