Analýza na syfilis ELISA - interpretácia analýzy. Norma a odchýlky

V súvislosti s rozvojom bunkových technológií, molekulárnej biológie, genetiky, fyziky, chémie a množstva ďalších high-tech disciplín sa do každodennej praxe zavádzajú nové vysoko presné a high-tech metódy. Tieto interdisciplinárne trendy ovplyvňujú tak oblasť medicínskeho poznania, ako aj súvisiace oblasti biologických a biochemických problémov. Za posledných desať rokov sa rozšírila a zaviedla do masovej praxe klinická laboratórna diagnostická metóda nazývaná enzýmová imunoanalýza.

Vo všeobecnosti sú technológie imunologických enzymatických a rádiologických reakcií široko používané pri typizácii buniek, bunkových kultúr a rôznych tkanív od začiatku 80. rokov 20. storočia. Tieto metódy však boli veľmi prácne, neboli unifikované, neštandardizované, čo vylučovalo ich použitie na diagnostické a liečebné účely v masovom meradle. Takéto metódy používali len úzke, znalostne náročné a vysoko špecializované laboratóriá.

S rozvojom technológie, mikrotechnológie a výroby rôznych biopolymérnych materiálov je však možné vyrábať hotové diagnostické súpravy s enzýmami viazanými imunosorbentmi, ktoré môžu používať laboratóriá všeobecných zdravotníckych zariadení. ELISA je široko používaná na diagnostiku všetkých druhov infekcií (chlamýdie, syfilis, cytomegalovírus, toxoplazmóza, herpes atď.), akútnych aj chronických, ako aj latentných foriem, ktoré prebiehajú bez klinických príznakov.Táto metóda sa používa aj na kontrolu chronických ochorení . Skúsme prísť na to, o akú metódu ide a aké princípy sú jej základom?

Zložky enzýmovej imunoanalýzy - imunitná reakcia a enzymatická reakcia

Enzýmová imunoanalýza, ako už názov napovedá, pozostáva z dvoch rôznych zložiek – imunitnej reakcie a enzymatickej reakcie. Imunitná reakcia vytvára väzbu biologických molekúl, prvkov bunky alebo mikroorganizmu, ktoré sa v skutočnosti pokúšajú detekovať, a enzýmová reakcia umožňuje vidieť a zmerať výsledok imunologickej reakcie. To znamená, že imunitná reakcia je súčasťou komplexnej techniky, ktorá skutočne deteguje požadovaný mikrób. A enzýmová reakcia je tá časť komplexnej techniky, ktorá umožňuje previesť výsledok imunitnej reakcie do formy viditeľnej pre oči a dostupnej na meranie pomocou bežných chemických techník. Na základe tejto štruktúry metódy enzýmovej imunoanalýzy budeme analyzovať obe jej časti samostatne.

Imunitná reakcia, čo to je? Čo je to protilátka alebo antigén?

Čo je imunitná odpoveď? Čo je to antigén?
Najprv sa pozrime, čo sú imunitné reakcie. Imunitné reakcie– ide o špecifické reakcie väzby antigénu na protilátku s tvorbou imunitného komplexu. Čo to znamená? Na povrchu každej bunky akéhokoľvek organizmu sa nachádzajú špeciálne štruktúry tzv antigény. Antigény sú vo všeobecnosti molekuly, ktoré nesú informácie o bunke (podobne ako informácie na odznaku osoby, ktorá označuje základné údaje danej osoby).

Individuálne a druhové antigény – čo sú to? Prečo sú potrebné tieto antigény?

K dispozícii jednotlivé antigény, teda vlastné iba tomuto konkrétnemu organizmu. Tieto jednotlivé antigény sa u všetkých ľudí líšia, existujú niektoré, ktoré sú si navzájom podobné, no stále odlišné. V prírode neexistujú dve identické kópie jednotlivých antigénov!

Druhým hlavným typom antigénu je druhové antigény, to znamená, že sú vlastné každému špecifickému typu živých bytostí. Napríklad ľudia majú svoj vlastný druhový antigén, spoločný pre všetkých ľudí, myši majú svoj vlastný myší druhový antigén atď. Na povrchu každej bunky je nevyhnutne prítomný špecifický a individuálny antigén.

Druhový antigén používajú bunky imunitného systému na rozpoznanie „priateľa alebo nepriateľa“.

Ako prebieha rozpoznávanie antigénu?

Imunitná bunka kontaktuje podozrivú bunku a identifikuje ju na základe individuálneho antigénu. V pamäti imunitnej bunky je „zaznamenané“, ako vyzerá „jej antigén“. Ak sa teda antigén podozrivej bunky zhoduje s popisom „vlastný antigén“, potom táto bunka telu vlastné nepredstavuje nebezpečenstvo. Potom sa imunitná bunka „rozviaže“ a odíde. A ak antigén nezodpovedá popisu „ja“, potom imunitná bunka identifikuje túto bunku ako „cudziu“, a preto potenciálne nebezpečnú pre celý organizmus. V tomto prípade sa imunitná bunka „neuvoľní“, ale začne ničiť nebezpečný predmet. Presnosť takéhoto imunologického rozpoznávania je úžasná – 99,97 %. Neexistujú prakticky žiadne chyby!

Čo je to protilátka, imunitný komplex?
Čo je to protilátka?

Protilátka je špeciálna molekula umiestnená na povrchu imunitnej bunky. Je to protilátka, ktorá sa viaže na antigény podozrivej bunky. Potom protilátka prenáša informácie vo vnútri bunky, kde dochádza k rozpoznaniu, a prijíma spätný signál dvoch typov, „vlastný“ alebo „cudzí“. Keď protilátka prijme „vlastný“ signál, preruší väzbu s antigénom a uvoľní bunku.

Čo je to imunitný komplex?
Keď je signál „cudzí“, situácia sa vyvíja inak. Protilátka neprerušuje spojenie s antigénom, ale naopak, vysielaním špecifických signálov spôsobuje „zosilnenie“. Biologicky to znamená, že iné protilátky umiestnené v inej časti bunky sa začnú presúvať na miesto, odkiaľ prichádza signál nebezpečenstva, a tiež vytvoria väzbu medzi sebou a zachyteným antigénom. Nakoniec sa ukáže, že antigén je zo všetkých strán obklopený a pevne pripevnený.Tento komplex antigén + protilátka sa nazýva imunitný komplex. Od tohto momentu začína utilizácia antigénu. Ale teraz nás nezaujímajú detaily procesu neutralizácie antigénu.

Typy protilátok (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Protilátky sú proteínové štruktúry, ktoré majú teda chemický názov, ktorý sa používa ako synonymum pre slovo protilátka. takže, protilátky = imunoglobulíny.

Existuje 5 typov imunoglobulínov (Ig), ktoré sa viažu na rôzne typy antigénov na rôznych miestach ľudského tela (napríklad na koži, na slizniciach, v krvi a pod.). To znamená, že protilátky majú deľbu práce. Tieto imunoglobulíny sa nazývajú písmenami latinskej abecedy - A, M, G, D, E a sú označené nasledovne - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Pri diagnostike sa používa len jeden typ protilátky, ktorý je najšpecifickejší pre detekovaný mikrób. To znamená, že k naviazaniu tohto typu protilátky na detegovaný antigén dochádza vždy. Najčastejšie sa používajú IgG a IgM.

Práve tento princíp imunitnej reakcie (jedinečná presnosť a špecifickosť rozpoznania biologického objektu, ktorý sa určuje), je základom enzýmového imunotestu.Vďaka vysokej presnosti protilátok pri rozpoznávaní antigénov je presnosť celej metódy enzýmového imunotestu najvyšší.

Enzymatická reakcia

Ktorá reakcia je enzymatická? Čo je afinita, substrát a produkt reakcie?
Prejdime k úvahe o enzymatickej reakcii v práci metódy enzýmového imunotestu.

Čo je to enzymatická reakcia?

Enzymatická reakcia je chemická reakcia, pri ktorej sa jedna látka premieňa na inú pôsobením enzýmu. Látka, na ktorú enzým pôsobí, je tzv substrát. A látka, ktorá sa získa v dôsledku pôsobenia enzýmu, sa nazýva reakčný produkt. Okrem toho je zvláštnosť enzymatickej reakcie taká, že určitý enzým pôsobí iba na určitý substrát. Táto vlastnosť enzýmu rozpoznať „svoj“ substrát sa nazýva afinita.

Každý enzým teda vykonáva iba jednu preň špecifickú reakciu. V biologickom svete je známe veľké množstvo enzýmov, ako aj enzymatických reakcií. V enzýmovej imunosorbentnej diagnostike sa používa len niekoľko enzymatických reakcií - nie viac ako 10. Zároveň boli zvolené také enzymatické reakcie, ktorých produktom sú farebné látky. Prečo by mali byť produkty enzymatickej reakcie zafarbené? Pretože na výpočet koncentrácie látky z farebného roztoku existuje jednoduchá chemická metóda - kolorimetria.

Kolorimetrická metóda – podstata a princíp

Kolorimetria používa meranie hustoty farby roztoku a z hustoty farby sa vypočítava koncentrácia látky.V tomto prípade špeciálny prístroj - kolorimeter meria hustotu farby roztoku. V kolorimetrii existujú dve možné možnosti závislosti hustoty farby na koncentrácii látky - priamo úmerná závislosť alebo nepriamo úmerná závislosť. Pri priamo úmernom vzťahu platí, že čím vyššia je koncentrácia látky, tým intenzívnejšia je hustota farby roztoku. Pri nepriamo úmernom vzťahu platí, že čím vyššia je koncentrácia látky, tým nižšia je hustota farby roztoku. Technicky sa to deje takto: vezme sa niekoľko roztokov so známou koncentráciou látky, zmeria sa hustota týchto roztokov a zostrojí sa graf závislosti koncentrácie od hustoty farby ( kalibračná tabuľka).

Ďalej sa zmeria hustota farby roztoku, ktorého koncentrácia sa určí a z kalibračného grafu sa zistí hodnota koncentrácie zodpovedajúca úrovni nameranej hustoty farby roztoku.V moderných automatických kolorimetroch sa kalibrácia vykoná len raz, potom prístroj sám vytvorí kalibračnú krivku, ktorá zostane v pamäti prístroja a meranie prebehne automaticky.

V enzýmovom imunoteste sa najčastejšie používajú tieto enzýmy: peroxidáza, alkalická fosfatáza, avidín.

Ako sa kombinujú imunologické a enzymatické reakcie v enzýmovom imunoteste? Teraz prejdeme k samotnému enzýmovému imunotestu. Aké štádiá zahŕňa a čo sa deje počas týchto reakcií? Enzýmová imunoanalýza môže byť priame a nepriame.

Priama enzýmová imunoanalýza - etapy implementácie

Pri priamom enzýmovom imunoteste sa používajú protilátky proti detegovanému antigénu v kombinácii so špecifickou značkou. Táto špecifická značka je substrátom enzymatickej reakcie.

Prichytenie antigénov na povrch jamky a kombinácia antigénu s protilátkou

Ako sa vykonáva priamy enzýmový imunotest? Odoberie sa biologický materiál (krv, škrabance zo slizníc, šmuhy) a umiestni sa do špeciálnych otvorov. Biologický materiál sa ponechá v jamkách 15-30 minút, aby antigény mohli priľnúť na povrch jamiek. Potom sa do týchto jamiek pridajú protilátky proti detegovanému antigénu. To znamená, že pri detekcii antigénov, napríklad syfilisu, sa pridávajú protilátky proti antigénom syfilisu. Tieto protilátky sa získavajú priemyselne a laboratóriá kupujú hotové súpravy, pričom zmes testovacieho materiálu a protilátok sa nechá nejaký čas (od 30 minút do 4-5 hodín) ponechať, aby protilátky mohli nájsť a kontaktovať „svoj“ antigén. Čím viac antigénov je v biologickej vzorke, tým viac protilátok sa na ne naviaže.

Odstránenie „extra“ protilátok

Ako je uvedené, protilátky sú tiež spojené so špecifickou značkou. Keďže protilátky sú pridané v nadbytku, nie všetky sa naviažu na antigény, a ak vo vzorke nie je žiadny antigén, potom sa ani jedna protilátka nenaviaže na antigén. požadovaný antigén. Aby sa odstránili „extra“ protilátky, obsah z jamiek sa jednoducho vyleje. V dôsledku toho sú všetky „extra“ protilátky odstránené a tie, ktoré sa naviazali na antigény, zostávajú, pretože antigény sú „prilepené“ k povrchu jamiek. Jamky sa niekoľkokrát prepláchnu špeciálnym roztokom, ktorý vám umožní umyť všetky „extra“ protilátky.

Ďalej začína druhá fáza - enzymatická reakcia. Do premytých jamiek sa pridá roztok s enzýmom a nechá sa 30-60 minút. Tento enzým má afinitu k látke (špecifická značka), na ktorú sú protilátky naviazané. Enzým vykoná reakciu, ktorá premení túto špecifickú značku (substrát) na farebnú látku (produkt). Potom sa pomocou kolorimetrie zistí koncentrácia tejto farebnej látky. Keďže táto špecifická značka je spojená s protilátkami, znamená to, že koncentrácia farebného reakčného produktu sa rovná koncentrácii protilátok. A koncentrácia protilátok sa rovná koncentrácii antigénov. Ako výsledok analýzy teda dostaneme odpoveď na koncentráciu detekovaného mikróbu alebo hormónu.

Presne tak funguje priama enzýmová imunoanalýza. V súčasnosti sa však častejšie používa nepriama enzýmová imunoanalýza, pretože citlivosť a presnosť nepriamej je vyššia ako priama. Prejdime teda k nepriamej enzýmovej imunoanalýze.

Nepriamy enzýmový imunotest - etapy implementácie

Nepriamy enzýmový imunotest má dve fázy. V prvej fáze sa používajú neznačené protilátky proti detekovaným antigénom a v druhej fáze sa používajú značené protilátky proti prvým neznačeným protilátkam. To znamená, že nejde o priamu väzbu protilátky na antigén, ale o dvojitú kontrolu: väzbu protilátok na antigén, po ktorej nasleduje väzba druhých protilátok na komplex protilátka + antigén. Protilátky pre prvú fázu sú spravidla myši a pre druhú - kozy.

Fixácia antigénov na povrchu jamky a väzba antigénu na neznačenú protilátku
Rovnako ako pri priamom enzýmovom imunoteste sa odoberá biologický materiál – krv, šrot, stery. Študovaný biologický materiál sa zavedie do jamiek a nechá sa 15 až 30 minút, aby antigény priľnuli na povrch jamiek. Potom sa do jamiek pridajú neoznačené protilátky proti antigénom a nechajú sa po určitú dobu (1-5 hodín), aby sa protilátky naviazali na „ich“ antigény a vytvorili imunitný komplex ( Prvý krok). Potom sa „extra“ nenaviazané protilátky odstránia vyliatím obsahu jamiek. Umyte špeciálnym roztokom, aby ste úplne odstránili všetky nenaviazané protilátky.

Väzba značenej protilátky na komplex antigén + neznačená protilátka
Potom odoberú druhé označené protilátky, pridajú ich do jamiek a opäť chvíľu nechajú - 15-30 minút ( druhá fáza). Počas tejto doby sa značené protilátky naviažu na prvé – neznačené – a vytvoria komplex – protilátka + protilátka + antigén. Avšak značené aj neznačené protilátky sa pridávajú do jamiek v nadbytku. Preto je potrebné opäť odstrániť „extra“ už značené protilátky, ktoré sa nenaviazali na neznačené protilátky. Za týmto účelom zopakujte postup vyliatia obsahu jamiek a umytie špeciálnym roztokom.

Enzymatická reakcia – vznik farebnej zlúčeniny
Potom sa pridá enzým, ktorý vykoná reakciu premeny „štítku“ na farebnú látku. Farba sa rozvinie do 5-30 minút. Potom sa uskutoční kolorimetria a vypočíta sa koncentrácia farebnej látky. Pretože koncentrácia farebnej látky sa rovná koncentrácii značených protilátok a koncentrácia značených protilátok sa rovná koncentrácii neznačených protilátok, čo sa zase rovná koncentrácii antigénu. Takto získame koncentráciu detegovaného antigénu.
Táto dvojitá kontrola v podobe použitia dvoch typov protilátok umožnila zvýšiť senzitivitu a špecifickosť metódy enzýmovej imunoanalýzy. Napriek predĺženiu času analýzy a zahrnutiu ďalších etáp sú tieto straty kompenzované presnosťou výsledku. To je dôvod, prečo v súčasnosti prevažná väčšina metód enzýmovej imunoanalýzy sú nepriame enzýmové imunoanalýzy.

Aké choroby sa zisťujú enzýmovou imunoanalýzou?

Prejdime k úvahe o tom, aké choroby a aké biologicky aktívne látky sa zisťujú enzýmovou imunoanalýzou. Látky detekované enzýmovým imunotestom sú uvedené v tabuľke.

Hormóny a markery ochorenia štítnej žľazy	Peroxidáza štítnej žľazy (TPO)
	tyreoglobulín (TG)
	Hormón stimulujúci štítnu žľazu (TSH)
	tyroxín (T4)
	trijódtyronín (T3)
	Voľný tyroxín (T4)
	Voľný trijódtyronín (T3)
Diagnóza reprodukčnej funkcie	Luteinizačný hormón (LH)
	Folikuly stimulujúci hormón (FSH)
	Prolaktín
	Progesterón
	Estradiol
	Testosterón
	kortizol
	Steroid viažuci globulín (SBG)
	Alfafetoproteín (AFP)
Nádorové markery	Chorionický gonadotropín (CG)
	Prostatický špecifický antigén (PSA)
	SA – 125
	SO – 19.9
	CYFRA-21-1
	M – 12 (SO – 15.3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	Alveomucin
	K – reťaz
	L – reťaz
	Tumor nekrotizujúci faktor (TNFα)
	γ – interferón
	Karcinoembryonálny antigén (CEA)
Diagnostika infekčných chorôb

ELISA je moderný laboratórny test, ktorý hľadá v krvi špecifické protilátky (alebo antigény) na konkrétne ochorenia s cieľom identifikovať nielen etiológiu, ale aj štádium ochorenia.

1. hľadanie špecifických protilátok proti akejkoľvek infekčnej chorobe;
2. hľadanie antigénov akýchkoľvek infekčných chorôb;
3. štúdium hormonálneho stavu pacienta;
4. skríning na prítomnosť autoimunitných ochorení.

Ako každá metóda laboratórnej diagnostiky, aj ELISA má svoje výhody a nevýhody. Medzi výhody metódy patrí:

1. vysoká špecifickosť a citlivosť metódy (viac ako 90 %);
2. schopnosť určiť ochorenie a sledovať dynamiku procesu, to znamená porovnanie počtu protilátok v rôznych časových obdobiach;
3. dostupnosť a rýchlosť tohto výskumu;
4. neinvazívna metóda zberu materiálu, nie výskum;

Nevýhodou metódy je skutočnosť, že pri analýze je možné identifikovať nie samotného pôvodcu ochorenia, ale iba imunitnú odpoveď naň (protilátky).

Podstata metódy ELISA

Existuje niekoľko typov ELISA: priama, nepriama, metóda blokovania, kompetitívna. V praxi sa však najčastejšie používa heterogénna enzýmová imunoanalýza alebo ELISA.

Základom enzýmovej imunoanalýzy je imunitná reakcia antigénu a protilátky s tvorbou imunitného komplexu, ktorej výsledkom je zmena enzymatickej aktivity špecifických značiek na povrchu protilátok.

V zásade možno tento proces rozdeliť do niekoľkých etáp:

1. na povrchu jamiek tablety testovacieho systému je purifikovaný antigén špecifického patogénu. Keď sa pridá zvieracie krvné sérum, dôjde k špecifickej reakcii medzi týmto antigénom a požadovanou protilátkou;
2. Potom sa do jamky pridá špeciálny chromogén (konjugát označený peroxidázou). Dochádza k enzymatickej reakcii, ktorej výsledkom je vznik farebnej látky v jamke platničky. Intenzita jeho farby závisí od množstva imunoglobulínov (protilátok) obsiahnutých v sére zvieraťa;
3. Potom sa vyhodnotí výsledok. Pomocou viackanálového spektrofotometra sa porovná optická hustota testovaného materiálu s optickou hustotou kontrolných vzoriek a výsledky sa spracujú matematicky. Množstvo protilátok u pacienta priamo závisí od výšky optickej hustoty danej jamky.

Je potrebné mať na pamäti: pre každý testovací systém sa vyvíjajú jednotlivé ukazovatele na zaznamenávanie výsledkov, ukazovateľov normality a patológie („referenčné hodnoty“). Toto sa musí vziať do úvahy pri hodnotení výsledkov každej konkrétnej štúdie.

Je nesprávne interpretovať výsledky jedného laboratória na základe „referenčných hodnôt“ iného laboratória. Rovnako je nesprávne porovnávať výsledky rôznych laboratórií medzi sebou.

Pri hodnotení výsledkov pre špecifické infekcie je dôležitá trieda zistených protilátok a ich množstvo. Od toho závisí nielen otázka etiológie infekcie, ale aj očakávané štádium ochorenia (akútne, chronické), ako aj prítomnosť aktívnej infekcie (akútna alebo exacerbácia chronickej) v čase vyšetrenia.

Aký je približný časový rámec pre výskyt protilátok?

Najskoršie protilátky sú IgM. Môžu byť zistené 1-3 týždne po možnej infekcii, ktorá charakterizuje akútnu fázu infekčného procesu. Druhou situáciou pre výskyt protilátok IgM je exacerbácia chronického procesu. IgM cirkulujú v priemere asi 3 mesiace, potom ich množstvo postupne mizne. U niektorých pacientov je však možné zistiť stopové množstvá IgM v priebehu 1-2 rokov po infekcii.

Od 4. týždňa po infekcii sa začínajú objavovať protilátky IgG. Pri väčšine infekcií sa ich titer postupne zvyšuje s maximom v rôznych časoch (v priemere po 1,5-2 mesiacoch), potom zostáva titer na nízkej úrovni a indikuje imunitu. Pri niektorých ochoreniach nie sú hladiny IgG vysoké.

Možnosti detekcie protilátok

• Izolovaná detekcia IgM protilátok naznačuje prítomnosť primárnej infekcie.
• Súčasná detekcia IgM a IgG v krvi je typická pre primárnu infekciu v predchádzajúcich 2-3 mesiacoch, ako aj počas exacerbácie chronického ochorenia.
• Detekcia izolovaného IgG môže naznačovať imunitu voči ochoreniu aj chronickú infekciu. V druhej situácii je dôležité ako množstvo protilátok (titer), tak aj zmena tohto titra v čase. Typicky sa štúdie vykonávajú v intervaloch 2-4-6 týždňov.

Analýza ELISA je moderná laboratórna diagnostická technika pre značný počet rôznych chorôb. Skratka znamená enzýmový imunotest. Podstatou techniky je stanovenie titra (aktivity) protilátok.

Technika ELISA si v súčasnosti získava výraznú obľubu. Používa sa v klinickej medicíne na diagnostiku rôznych patológií, ako aj v experimentálnych štúdiách, ktoré vyžadujú presné stanovenie koncentrácie rôznych zlúčenín v študovaných médiách.

Princíp metódy ELISA

Enzýmová imunoanalýza je imunologická reakcia. Je založená na pridaní špecifických protilátok
alebo antigénov do testovacieho média (najčastejšie do testovanej krvi), po ktorom nasleduje enzymatické stanovenie koncentrácie výsledných komplexov antigén-protilátka. Na základe koncentrácie komplexu je možné posúdiť hladinu alebo aktivitu zlúčeniny, ktorá sa stanovuje v testovacom médiu.

Stanovenie koncentrácie komplexov antigén-protilátka sa zvyčajne uskutočňuje pomocou špeciálneho zariadenia pomocou chromatografickej metódy.

Indikácie na použitie

Analýza ELISA sa vykonáva pre rôzne indikácie, z ktorých hlavné v klinickej medicíne sú:

• Diagnóza infekčnej patológie s prevažne sexuálnym prenosom (STI), ktorá zahŕňa chlamýdie, mykoplazmózu, ureaplazmózu, trichomoniázu, pri identifikácii špecifických protilátok proti infekčnému agens.
• Diagnostika infekčných ochorení rôznej lokalizácie na určenie štádia patologického procesu, predovšetkým v procese diagnostiky parenterálnej vírusovej hepatitídy a HIV.
• Stanovenie koncentrácií hormónov na diagnostiku rôznych patológií orgánov endokrinného systému (žliaz s vnútornou sekréciou).
• Stanovenie rôznych zlúčenín na diagnostiku príčiny intoxikácie tela v prípade otravy, uhryznutia hmyzom alebo hadom.

Pre tieto zdravotné indikácie sa vykonáva krvný test ELISA. Táto technika sa aktívne využíva aj v experimentálnej medicíne počas rôznych klinických štúdií pri vývoji nových liekov a vakcín na imunoprofylaxiu.

Ako prebieha výskum

Krvný test pomocou ELISA sa vykonáva v špecializovanom laboratóriu. Na jej uskutočnenie sa najskôr odoberie venózna krv, zvyčajne z loketnej žily v objeme 5-10 ml, ktorá sa následne odošle do laboratória. V priemere je možné výsledok testu získať už nasledujúci deň, čo je dôležitý bod pre rýchle predpísanie liečby po diagnostikovaní ochorenia.

Ako sa pripraviť na ELISA

Ak chcete získať spoľahlivé výsledky výskumu pomocou enzýmového imunotestu, mali by ste dodržiavať niekoľko jednoduchých prípravných odporúčaní, ktoré zahŕňajú:

• Deň pred testom by ste mali prestať jesť tučné jedlá (mäso, údeniny) a alkohol.
• Materiál na štúdiu sa musí podať ráno na lačný žalúdok.
• V deň štúdie je vhodné vyhnúť sa fyzickému a psycho-emocionálnemu stresu.
• Pred štúdiom by ste sa mali pokúsiť nefajčiť.

Väčšina falošne pozitívnych výsledkov enzýmového imunosorbentného testu je spôsobená nesprávnou implementáciou prípravných odporúčaní. To je vo väčšine prípadov spojené s konzumáciou tučných jedál, ktoré vedú k zvýšeniu koncentrácie triglyceridov (tukov) v krvnej plazme, ktoré znižujú špecifickosť testu ELISA.

Dekódovanie výsledkov

Krvný test na protilátky pomocou ELISA má 2 modifikácie - kvalitatívne a kvantitatívne stanovenie. O
Pri kvalitatívnom stanovení protilátok môže byť výsledok pozitívny (detegujú sa protilátky, čo naznačuje možnú prítomnosť patologického procesu spôsobeného infekčným agensom) alebo negatívny (neexistujú žiadne protilátky, čo naznačuje neprítomnosť infekčného procesu).

Neprítomnosť protilátok nie je vždy 100% indikátorom neprítomnosti infekčného procesu. Je to spôsobené tým, že po infekcii sa protilátky nevytvoria hneď, ale po určitú dobu (minimálne cca 2 týždne). Preto na potvrdenie neprítomnosti infekcie možno po určitom čase zopakovať test ELISA.

Kvantitatívna ELISA sa používa na stanovenie titra (aktivity) protilátok, ako aj ich tried. Vo väčšine prípadov sa na diagnostiku infekčných ochorení stanovujú protilátky triedy IgG (imunoglobulín G) a IgM (imunoglobulín M), ktoré sa v organizme tvoria v rôznych intervaloch po infekcii, takže dešifrovanie výsledku testu môže mať viacero významov:

• Zvýšenie aktivity IgM a absencia IgG je dôkazom nedávnej infekcie a akútneho priebehu infekčného procesu.
• Zvýšenie aktivity IgM a IgG je exacerbáciou infekčného procesu počas jeho chronického priebehu a dlhotrvajúcej infekcie.
• Vysoká aktivita IgG a neprítomnosť IgM je chronický priebeh infekčného procesu na pozadí dlhotrvajúcej infekcie, po ktorej uplynulo viac ako šesť mesiacov (čas potrebný na tvorbu protilátok triedy IgG).

Vo všeobecnosti má dešifrovanie výsledkov ELISA pre každý infekčný proces určité vlastnosti. Presnejšie určenie prítomnosti infekčnej choroby, ako aj štádia jej priebehu vykonáva lekár.

ELISA je v súčasnosti metódou voľby na diagnostiku väčšiny infekčných ochorení. Na základe výsledkov takejto štúdie má lekár možnosť stanoviť presnú diagnózu a určiť štádium patologického procesu s cieľom predpísať následnú adekvátnu a účinnú liečbu.

Moderné diagnostické techniky umožňujú identifikovať konkrétnu chorobu v laboratóriu pomocou špeciálnych testov. Jedným z nich je enzýmový imunosorbentový krvný test, ktorý môže potvrdiť predtým stanovenú diagnózu.

Enzýmová imunoanalýza ELISA je jednou z najúčinnejších a najmodernejších metód na identifikáciu porúch spojených s imunitnou a hormonálnou nerovnováhou, ako aj onkologických procesov. Počas testu sa v krvi dajú zistiť protilátky produkované pri infekcii v tele. Ak vezmeme do úvahy túto nuanciu, chorobu možno zistiť aj v najskoršom štádiu vývoja.

Čo je základom techniky?

Výsledky analýzy ELISA sú založené na získavaní chemických reakcií na enzýmy, ktoré slúžia ako špeciálne identifikačné znaky na rozpoznávanie protilátok. V dôsledku toho počas imunochemických reakcií protilátky začnú interagovať s určitými antigénmi. To všetko dáva dôvod tvrdiť, že falošné výsledky pri darovaní krvi na ELISA sú minimálne.

Štúdia umožňuje určiť počet imunitných buniek, ich vlastnosti, ako aj prítomnosť potrebných protilátok

Výsledok sa považuje za pozitívny, keď sa zistí zafarbenie roztoku. Farba indikuje, že antigény interagujú s protilátkou. Ak sa nič také nestane, výsledok je negatívny.

Na komplexné posúdenie ochranných funkcií tela sa vykonáva enzýmový imunosorbentový test (ELISA). Počas štúdie sa zisťuje počet a vlastnosti imunitných buniek a prítomnosť potrebných protilátok. Na diagnostiku infekčných, hematologických, autoimunitných ochorení, primárnych a sekundárnych imunodeficiencií sa vykonáva krvný test ELISA. Uvažujme, čo je krvný test ELISA a aké indikácie existujú na vykonanie tejto štúdie.

Čo to je

Krvný test metódou ELISA je laboratórna metóda, pomocou ktorej sa vo vzorke krvi stanovujú protilátky alebo antigény. Táto štúdia sa používa na stanovenie hladiny imunoglobulínov, imunologických komplexov a hormónov.

Indikácie pre analýzu

Na predpisovanie krvného testu ELISA existujú nasledujúce indikácie:

• diagnostika pohlavne prenosných infekcií - ureaplazma, mykoplazma, chlamýdie, trichomonas, syfilis;
• diagnostika vírusových ochorení - cytomegalovírus, herpes, hepatitída, vírus Epstein-Barrovej;
• stanovenie hladín hormónov;
• diagnostika onkologických ochorení;
• stanovenie imunodeficiencie;
• diagnostika alergií;
• predoperačné komplexné vyšetrenie pred transplantáciou orgánov;
• hodnotenie účinnosti terapie.

Princíp metódy

Princíp fungovania enzýmovej imunoanalytickej metódy je založený na stanovení špecifických protilátkových proteínov v krvi – imunoglobulínov. Imunoglobulíny sú produkované ľudským imunitným systémom, keď antigény (cudzie mikroorganizmy) vstupujú do tela. Takéto imunitné molekuly sa viažu na rôzne infekčné patogény v tele a neutralizujú ich.

Imunoglobulíny majú dôležitú vlastnosť – špecifickosť. Vďaka tomu sa môžu viazať na špecifický antigén, čím vzniká komplex antigén-protilátka. Počas krvného testu ELISA sa kvalitatívne a kvantitatívne určuje práve tento komplex.

Existuje päť tried imunoglobulínov. Ale zvyčajne sú definované tri triedy - imunoglobulíny A, M, G. Tieto protilátky sa hromadia v tele v rôznych časoch od okamihu infekcie.

• Imunoglobulíny trieda M (IgM) sa objavia v krvi najskôr na piaty deň od okamihu infekcie. Zostávajú v tele 5-6 týždňov, potom zmiznú z krvného obehu. Protilátky IgM naznačujú akútne obdobie ochorenia alebo exacerbáciu ochorenia počas jeho chronického priebehu.
• Približne 3–4 týždne po infekcii sa v krvi objavia imunoglobulíny trieda G (IgG). Môžu existovať v ľudskej krvi niekoľko mesiacov alebo dokonca rokov. Podľa interpretácie krvného testu ELISA, ak v dvoch odberoch krvi odobratých za sebou po dvoch týždňoch je zvýšené množstvo IgG imunoglobulínov, hovorí o aktuálnej infekcii alebo reinfekcii - reinfekcii tou istou infekciou.
• Imunoglobulíny trieda A (IgA) možno zistiť touto výskumnou metódou 2–4 týždne po infekcii alebo exacerbácii infekčnej choroby. Z nich len 20 % cirkuluje v krvi, zvyšok je v sekréte slizníc. IgA protilátky zmiznú z krvného obehu 2–8 týždňov po zničení infekčných agens. Vymiznutie týchto imunoglobulínov znamená vyliečenie infekcie. Ak sa po skončení ochorenia zistí prítomnosť IgA protilátok v krvi, znamená to, že ochorenie prešlo do chronického štádia.

Príprava na analýzu

Na vykonanie krvného testu metódou ELISA sa najčastejšie používa ľudská krv. Vyšetriť však môžete aj obsah sklovca, mozgovomiechový mok a plodovú vodu.

Vzorka krvi na testovanie sa odoberie z antekubitálnej žily pacienta. Odporúča sa darovať krv nalačno (od posledného jedla musí uplynúť aspoň 12 hodín). Je potrebné informovať lekára, ak pacient užíva lieky, pretože niektoré z nich môžu zmeniť výsledok testu. Spoľahlivosť výsledkov štúdie je ovplyvnená užívaním alkoholu a drog.

Dešifrovanie

Výsledná forma tohto testu označuje pozitívny (+) alebo negatívny (-) výsledok stanovenia každej triedy imunoglobulínov.

Uvažujme o interpretácii možnej interpretácie krvného testu ELISA.

• Negatívny výsledok pre IgM, IgG, IgA znamená nedostatok imunity voči infekcii.
• Negatívny výsledok pre IgM, IgA a pozitívny výsledok pre IgG je postinfekčná alebo postvakcinačná imunita.
• Negatívny alebo pozitívny výsledok pre IgG, IgA a pozitívny výsledok pre IgM naznačuje akútnu infekciu.
• Pozitívny výsledok pre IgM, IgG, IgA je exacerbácia chronického infekčného ochorenia.
• Negatívny výsledok IgM a negatívny alebo pozitívny výsledok IgG, IgA – chronická infekcia.
• Negatívny výsledok IgM a IgG, IgA sa nezistia - zotavenie.

Výhody metódy

Krvný test ELISA má mnoho výhod. Tie hlavné možno identifikovať:

• relatívne vysoká presnosť (citlivosť);
• možnosť včasnej diagnózy;
• schopnosť monitorovať dynamiku infekčného procesu;
• vysoká úroveň zjednotenia, ktorá umožňuje hromadné vyšetrenia;
• krátky čas potrebný na získanie výsledku analýzy;
• jednoduchosť použitia;
• automatizácia všetkých fáz analýzy;
• relatívne nízke náklady.

Nedostatky

Nevýhodou metódy ELISA je, že niekedy poskytuje falošne negatívne alebo falošne pozitívne výsledky. Okrem technických chýb počas štúdie môže byť príčinou falošných výsledkov reumatoidný faktor pacienta, prítomnosť chronických ochorení (pri ktorých sa tvoria protilátky), metabolické poruchy alebo užívanie niektorých liekov.

• askarióza;
• trichinelóza - analýza sa vykonáva niekoľkokrát, maximálna hladina protilátok sa stanoví 4-12 týždňov po infekcii;
• cysticerkóza;
• taeniasis;
• fascioliáza – protilátky sa zisťujú v akútnom štádiu ochorenia;
• opisthorchiáza – diferenciálna diagnostika sa vykonáva medzi chronickou a akútnou formou ochorenia;
• giardiáza;
• viscerálna a kožná leishmanióza;
• amebiáza;
• toxoplazmóza.

4.2 4,20 z 5 (5 hlasov)