Diagnosticum vi vi antigénny erytrocyt. Diagnosticum salmonela erytrocytov o
Osvedčenie o evidencii č. RZN 2016/3905 zo dňa 4.4.2016
Účel
Súprava reagencií „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen for RPHA“ (ED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu brušného týfusu v ľudských krvných sérach reakciou pasívnej hemaglutinácie (RPHA ).
Charakteristika súpravy
Princíp fungovania
V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných Vi antigénom, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek v tvare U doštičky. . Pri absencii protilátok proti pôvodcovi týfusu tvoria usadené červené krvinky „bodku“.
Nastavte obsah
| Názov činidla | Popis | Množstvo v súprave |
|---|---|---|
| Diagnosticum erytrocytový salmonella Vi-antigén, suchý 6% (EDS) | Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované antigénom Vi S. typhi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení má suspenzia červenohnedú farbu. | 1 fl., od 0,6 ml |
| Diagnostické sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, suché (riedené 1:20, (K+)) | Králičie sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, zriedené 1:20. Suchá hygroskopická porézna hmota bielej farby. Po rozpustení je to priehľadná žltkastá alebo bezfarebná kvapalina. | 1 fl., od 0,3 ml |
| Riedidlo testovacej vzorky (RSD) | Transparentná kvapalina modrofialovej farby. | 1 fl., 10 ml |
| Fosfátový tlmivý roztok (PBS) | Priehľadná bezfarebná kvapalina. | 1 fl., 10 ml |
| Polymérová tableta na jedno použitie na imunologické reakcie | Jednorazová polymérová tableta na imunologické reakcie vyrobená z priehľadného bezfarebného polystyrénu. | 1 PC. |
Diagnostické charakteristiky
Diagnostikum sa musí aglutinovať v RPHA s adsorbovaným diagnostickým sérom salmonely, Vi receptor, suché (riedenie 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra od zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na testovanie 42 krvných sér pri skríningovej možnosti alebo 10 krvných sér pri možnosti titrácie.
Preventívne opatrenia
Súprava je určená len na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v súprave sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatočné vybavenie a materiály
Vybavenie, materiály, riešenia:
- 1-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl; 40 - 200 ul; 200 - 1000 ul a 1000 - 5000 ul;
- 8- alebo 12-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl a 40 - 200 µl;
- destilovaná voda (GOST 6709-72).
Analyzované vzorky
Študované vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 °C maximálne 3 dni od momentu odberu krvi. Srvátka sa môže skladovať zmrazená pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky rozmrazia pri teplote 16 až 25 °C a premiešajú sa pretrepaním. Opätovné zmrazenie nie je povolené. Vzorky s rastom baktérií a hemolýzou by sa nemali používať. Pred uskutočnením reakcie sa testovacie séra zahrievajú na 56 °C počas 30 minút.
Vykonávanie analýzy
Príprava kontrolného diagnostického séra (K+)
Pripravte pracovný roztok diagnostického séra Salmonella adsorbovaného, Vi receptor, suchý (riedenie 1:20) z 0,3 ml (K+). K tomu pridajte 0,3 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS) k obsahu fľaštičky s K+. Zostávajúce množstvo séra sa môže rozdeliť na alikvóty a uchovávať zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 6 mesiacov.
Príprava Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)
Na prípravu pracovného riedenia suspenzie Salmonella erythrocyte diagnosticum sa k obsahu fľaše so suchým 6 % SED pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa hydratovať 2 hodiny pri teplote 16 až 25 °C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS). Pracovný roztok sa uchováva pri teplote 2 až 8 °C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.
Stanovenie RPGA počas skríningu krvných sér
Krvné séra na skríningové štúdie sa zriedia v jamkách tablety nasledovne:
- V prvých jamkách platne sa pripravia predbežné riedenia 1:20, do ktorých sa najskôr pridá 190 μl RIP roztoku, potom 10 μl testovacieho séra. Každé sérum sa pridáva samostatnou špičkou a opatrne sa pipetuje (farba roztoku v jamkách po pridaní séra by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú);
- skríningové riedenia 1:40 sa pripravia v druhých jamkách tak, že sa do nich najprv pridá 25 μl roztoku PBS a potom 25 μl predriedeného séra a opatrne sa pipetuje.
Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120. 50 ul roztoku PBS sa pridá do ďalších 4 jamiek, aby sa monitorovala neprítomnosť spontánnej hemaglutinácie EDS.
25 μl SED sa pridá do všetkých jamiek doštičky so skríningovými riedeniami testovacích sér (okrem prvých obsahujúcich RIP) a kontrol. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.
Stanovenie RPGA počas titrácie testovaného krvného séra
Titrácia testovacieho séra a pracovného roztoku K+ sa uskutočňuje v krátkych radoch platne. Ďalší krátky riadok sa používa na sledovanie absencie spontánnej hemaglutinácie EDS.
Do prvých jamiek krátkych radov sa pridá 180 μl RIP roztoku na titráciu testovacieho séra. Pridajte 50 μl roztoku PBS do všetkých ostatných jamiek.
Do jamiek s RIP roztokom sa pridá 20 μl testovacieho séra (dosiahne sa riedenie 1:10). Každé sérum sa pridá vlastnou špičkou a opatrne sa odpipetuje (farba roztoku v jamkách by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú). Potom sa 50 μl prenesie z prvých jamiek do ďalších jamiek v radoch, čím sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1:1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odoberú roztoky v objeme 50 μl.
Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120.
Na kontrolu diagnostiky na absenciu spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 ul roztoku PBS.
Do všetkých jamiek sa pridá 25 μl SED (okrem prvých jamiek každého radu pre testovacie séra obsahujúce RIP). Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.
Účtovanie a interpretácia výsledkov
Účtovanie výsledkov pri skríningu krvného séra
Výsledky sa berú do úvahy na konvenčnej stupnici štyroch krížikov. Za titer séra sa považuje jeho zriedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu najmenej 3 (+++) kríženiami.
- ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje padajú;
- +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje sú hladké;
- ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi je na dne jamky sediment vo forme malého „krúžku“ neaglutinovaných erytrocytov;
- + (1+) - väčšina červených krviniek nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého „krúžku“;
- (-) - neaglutinované červené krvinky tvoria „bodku“ na dne jamky.
Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov zaťažených Vi-antigénom aspoň 3 kríženiami (+++).
Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú 4 jamky kontrolného radu, do ktorých sa pridával len roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.
Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za neobsahujúce protilátky proti antigénu Vi s diagnostickým titrom 1:40 alebo nižším.
Séra, ktoré poskytujú pozitívny výsledok pri riedení 1:40, by sa mali znova otestovať titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.
Účtovanie výsledkov pri titrácii krvného séra
Za titer séra sa považuje jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu aspoň 3 (+++) kríženia.
Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú jamky radu na riadenie EDS. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.
Súprava Diagnosticum Salmonella VI-antigén je určená na detekciu špecifických protilátok proti Salmonella tyfus VI-antigénu v ľudskom krvnom sére pri pasívnej hemaglutinačnej reakcii (RPHA).
SET CHARAKTERISTIKY
2.1. Princíp metódy.
Aktívnou zložkou Antigénu Diagnosticum Salmonella VI je Vi-antigén fixovaný na povrchu červených krviniek. Pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti Vi-antigénu sa pozoruje fenomén aglutinácie erytrocytov.
2.2. SET OBSAH
| Činidlá | Množstvo |
| Diagnosticum erytrocytová salmonela Vi-antigénna kvapalina- je 1% suspenzia formalinizovaných a senzibilizovaných erytrocytov oviec Salmonella Tyfus s B-antigénom vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH 7,2 + 0,2; koncentrácia 0,06 mol/l). Homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 fľaša - 3 ml |
| Diagnostické sérum Salmonella adsorbovaný B receptor suchý - homogénna hmota od bielej s hnedastým odtieňom po béžovú | 1 fľaša – 0,1 ml |
| 1 % suspenzia formalinizovaných, nesenzibilizovaných ovčích erytrocytov— homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 fľaša - |
| Roztok na riedenie séra a staging RPGA - 0,9% roztok chloridu sodného - priehľadná bezfarebná kvapalina, pH od 6,5 do 7,5 | 2 fľaštičky – každá po 8 ml |
| Jednorazová platnička s okrúhlym dnom na imunologické reakcie - pozostáva z 8 radov, z ktorých každý obsahuje 12 otvorov s priehľadným, bezfarebným, okrúhlym dnom | 1 PC |
ANALYTICKÉ A DIAGNOSTICKÉ CHARAKTERISTIKY.
3.1. Diagnostikum sa musí aglutinovať v RPHA s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným suchým B receptorom v zriedení najmenej 1:160.
Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra od zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20.
3.2. Čas analýzy: 2 hodiny.
3.3. Sada obsahuje 8 definícií.
PREVENTÍVNE OPATRENIA
Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať „Pravidlá dizajnu, bezpečnostných opatrení, priemyselnej sanitácie, protiepidemického režimu a osobnej hygieny pri práci v laboratóriách (oddelenia, oddelenia) sanitárnych a epidemiologických inštitúcií Ministerstva zdravotníctva ZSSR ( M., 1981).
Analyzované séra, ako aj činidlá, ktoré sú s nimi v kontakte, by sa mali považovať za potenciálne infikované, schopné dlhodobého uchovávania alebo prenosu HIV, vírusu hepatitídy alebo akéhokoľvek iného pôvodcu vírusovej infekcie – treba s nimi zaobchádzať opatrne:
- pracovať s gumenými rukavicami;
- pri pipetovaní je potrebné použiť automatické dávkovače;
- po ukončení práce ošetrite analyzované séra a reagencie a nástroje, ktoré sú s nimi v kontakte, dezinfekčným roztokom
- Pred a po použití utrite vybavenie 70% etylalkoholom.
Analyzované séra sa musia inaktivovať pri teplote 56 °C počas 30 minút.
Diagnostické sérum Salmonella adsorbované receptorom B, ktoré je súčasťou súpravy, je suché a inaktivované.
Objektívne výsledky analýzy sú zaručené, ak sú splnené nasledujúce podmienky:
- Všetky reagencie súpravy by sa mali skladovať pri teplotách od 2 do 8 0 C;
- nepoužívajte reagencie po expirácii;
- nepoužívajte reagencie súpravy, ak na ich obale nie je vhodné označenie;
- Na vykonanie RPHA používajte reagencie, ktoré sú súčasťou tejto súpravy.
2.diagnostika
4.od zničených mikróbov (izolácia špecifického Ag)
Diagnostika HBs erytrocytov
2.diagnostika
4. suspenzia vzduchu-ovce ošetrená tanínom a vyzrážaná a\g HBs
5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Diagnostika gp120
2.diagnostika
4.oddeliť a\g napr. HIV
5. na detekciu a\t HIV
Diagnostika tetanových erytrocytov
2.diagnostika
4. suspenzia er.ram, ošetrená tanínom a a\g tetanu
5. na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére (proti tetanu
Kardiolipínový antigén na mikroprecipitáciu
2.diagnostika
4. extrahované lipidové frakcie zo srdca zdravého býka
5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Ultrazvukový treponémový antigén
2.diagnostika
4. zo zabitých výk. syfilis
5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Diagnostika korpuskulárnej tularémie
2.diagnostika
4.z jednotlivých častíc patogénu
5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Diagnostika úplavice
2.diagnostika
4. suspenzia zo zabitých zvierat
5. na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére pacienta
Diagnostika erytrocytov od Shigella Sonne
2.diagnostika
4.suspenzia er.ram, ošetrená tonínom
5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Diagnosticum zo Salmonella typhimurium
2.diagnostika
4. zo zabitých výk. salmonela
5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére
Séra
Konské sérum proti gangréne 5000 IU
2.sérum
4.z krvného séra hyperimických koní s anatoxínom excitačnej plynovej gangrény
6. parenterálne, po teste globulínom 1:100
Normálny ľudský imunoglobulín
2.sérum
4.z darcovského krvného séra
5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm
6.parenterálne
Precipitujúce antraxové sérum
2.sérum
4. z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a\g exc.sib. vredy
6.zrážacia reakcia (RP)
Typ botulínového séra – A 400 IU
2.sérum
5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
6.neutralizačná reakcia (RN)
Anti-antraxový globulín
2.sérum
4.z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a/alebo mimo antraxu
5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm
6.parenterálne
Hemolytické sérum
2.sérum
4.zo séra hyperimunizovaných zvierat s erytrocytmi zvierat iného typu
5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
Ogawa cholera aglutinačné sérum
2.sérum
4.z krvného séra hyperimunizovaných zvierat
5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
Luminiscenčné sérum na tularémiu
2.sérum
4.z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a\g ex.tulár.
5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
Imunoglobulín proti ľudskej kliešťovej encefalitíde
2.sérum
4.z darcovského krvného séra
5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm
6.parenterálne
ESNO diagnostické sérum
2.sérum
4.z krvného séra zvierat hyperimunizovaných ESNO vírusmi
5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli
Ľudský imunoglobulín proti hepatitíde B
2.sérum
4.z krvného séra darcu očkovaného proti hepatitíde B
5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm
6.parenterálne
Antiglobulínové sérum označené peroxidázou
2.sérum
4.z krvného séra hyperimunizovaných zvierat
5. na zistenie špecifického antigénu v testovacom materiáli (HIV)
Imunoglobulín proti besnote
2.sérum
4.z darcovského krvného séra
5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm
Osvedčenie o evidencii č. RZN 2016/3905 zo dňa 4.4.2016
Účel
Súprava reagencií „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen for RPHA“ (ED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu brušného týfusu v ľudských krvných sérach reakciou pasívnej hemaglutinácie (RPHA ).
Charakteristika súpravy
Princíp fungovania
V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných Vi antigénom, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek v tvare U doštičky. . Pri absencii protilátok proti pôvodcovi týfusu tvoria usadené červené krvinky „bodku“.
Nastavte obsah
| Názov činidla | Popis | Množstvo v súprave |
|---|---|---|
| Diagnosticum erytrocytový salmonella Vi-antigén, suchý 6% (EDS) | Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované antigénom Vi S. typhi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení má suspenzia červenohnedú farbu. | 1 fl., od 0,6 ml |
| Diagnostické sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, suché (riedené 1:20, (K+)) | Králičie sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, zriedené 1:20. Suchá hygroskopická porézna hmota bielej farby. Po rozpustení je to priehľadná žltkastá alebo bezfarebná kvapalina. | 1 fl., od 0,3 ml |
| Riedidlo testovacej vzorky (RSD) | Transparentná kvapalina modrofialovej farby. | 1 fl., 10 ml |
| Fosfátový tlmivý roztok (PBS) | Priehľadná bezfarebná kvapalina. | 1 fl., 10 ml |
| Polymérová tableta na jedno použitie na imunologické reakcie | Jednorazová polymérová tableta na imunologické reakcie vyrobená z priehľadného bezfarebného polystyrénu. | 1 PC. |
Diagnostické charakteristiky
Diagnostikum sa musí aglutinovať v RPHA s adsorbovaným diagnostickým sérom salmonely, Vi receptor, suché (riedenie 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra od zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na testovanie 42 krvných sér pri skríningovej možnosti alebo 10 krvných sér pri možnosti titrácie.
Preventívne opatrenia
Súprava je určená len na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v súprave sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.
Dodatočné vybavenie a materiály
Vybavenie, materiály, riešenia:
- 1-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl; 40 - 200 ul; 200 - 1000 ul a 1000 - 5000 ul;
- 8- alebo 12-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl a 40 - 200 µl;
- destilovaná voda (GOST 6709-72).
Analyzované vzorky
Študované vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 °C maximálne 3 dni od momentu odberu krvi. Srvátka sa môže skladovať zmrazená pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky rozmrazia pri teplote 16 až 25 °C a premiešajú sa pretrepaním. Opätovné zmrazenie nie je povolené. Vzorky s rastom baktérií a hemolýzou by sa nemali používať. Pred uskutočnením reakcie sa testovacie séra zahrievajú na 56 °C počas 30 minút.
Vykonávanie analýzy
Príprava kontrolného diagnostického séra (K+)
Pripravte pracovný roztok diagnostického séra Salmonella adsorbovaného, Vi receptor, suchý (riedenie 1:20) z 0,3 ml (K+). K tomu pridajte 0,3 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS) k obsahu fľaštičky s K+. Zostávajúce množstvo séra sa môže rozdeliť na alikvóty a uchovávať zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 6 mesiacov.
Príprava Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)
Na prípravu pracovného riedenia suspenzie Salmonella erythrocyte diagnosticum sa k obsahu fľaše so suchým 6 % SED pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa hydratovať 2 hodiny pri teplote 16 až 25 °C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS). Pracovný roztok sa uchováva pri teplote 2 až 8 °C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.
Stanovenie RPGA počas skríningu krvných sér
Krvné séra na skríningové štúdie sa zriedia v jamkách tablety nasledovne:
- V prvých jamkách platne sa pripravia predbežné riedenia 1:20, do ktorých sa najskôr pridá 190 μl RIP roztoku, potom 10 μl testovacieho séra. Každé sérum sa pridáva samostatnou špičkou a opatrne sa pipetuje (farba roztoku v jamkách po pridaní séra by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú);
- skríningové riedenia 1:40 sa pripravia v druhých jamkách tak, že sa do nich najprv pridá 25 μl roztoku PBS a potom 25 μl predriedeného séra a opatrne sa pipetuje.
Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120. 50 ul roztoku PBS sa pridá do ďalších 4 jamiek, aby sa monitorovala neprítomnosť spontánnej hemaglutinácie EDS.
25 μl SED sa pridá do všetkých jamiek doštičky so skríningovými riedeniami testovacích sér (okrem prvých obsahujúcich RIP) a kontrol. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.
Stanovenie RPGA počas titrácie testovaného krvného séra
Titrácia testovacieho séra a pracovného roztoku K+ sa uskutočňuje v krátkych radoch platne. Ďalší krátky riadok sa používa na sledovanie absencie spontánnej hemaglutinácie EDS.
Do prvých jamiek krátkych radov sa pridá 180 μl RIP roztoku na titráciu testovacieho séra. Pridajte 50 μl roztoku PBS do všetkých ostatných jamiek.
Do jamiek s RIP roztokom sa pridá 20 μl testovacieho séra (dosiahne sa riedenie 1:10). Každé sérum sa pridá vlastnou špičkou a opatrne sa odpipetuje (farba roztoku v jamkách by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú). Potom sa 50 μl prenesie z prvých jamiek do ďalších jamiek v radoch, čím sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1:1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odoberú roztoky v objeme 50 μl.
Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120.
Na kontrolu diagnostiky na absenciu spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 ul roztoku PBS.
Do všetkých jamiek sa pridá 25 μl SED (okrem prvých jamiek každého radu pre testovacie séra obsahujúce RIP). Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.
Účtovanie a interpretácia výsledkov
Účtovanie výsledkov pri skríningu krvného séra
Výsledky sa berú do úvahy na konvenčnej stupnici štyroch krížikov. Za titer séra sa považuje jeho zriedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu najmenej 3 (+++) kríženiami.
- ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje padajú;
- +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje sú hladké;
- ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi je na dne jamky sediment vo forme malého „krúžku“ neaglutinovaných erytrocytov;
- + (1+) - väčšina červených krviniek nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého „krúžku“;
- (-) - neaglutinované červené krvinky tvoria „bodku“ na dne jamky.
Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov zaťažených Vi-antigénom aspoň 3 kríženiami (+++).
Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú 4 jamky kontrolného radu, do ktorých sa pridával len roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.
Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za neobsahujúce protilátky proti antigénu Vi s diagnostickým titrom 1:40 alebo nižším.
Séra, ktoré poskytujú pozitívny výsledok pri riedení 1:40, by sa mali znova otestovať titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.
Účtovanie výsledkov pri titrácii krvného séra
Za titer séra sa považuje jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu aspoň 3 (+++) kríženia.
Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú jamky radu na riadenie EDS. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.
Súprava Diagnosticum Salmonella VI-antigén je určená na detekciu špecifických protilátok proti Salmonella tyfus VI-antigénu v ľudskom krvnom sére pri pasívnej hemaglutinačnej reakcii (RPHA).
SET CHARAKTERISTIKY
2.1. Princíp metódy.
Aktívnou zložkou Antigénu Diagnosticum Salmonella VI je Vi-antigén fixovaný na povrchu červených krviniek. Pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti Vi-antigénu sa pozoruje fenomén aglutinácie erytrocytov.
2.2. SET OBSAH
| Činidlá | Množstvo |
| Diagnosticum erytrocytová salmonela Vi-antigénna kvapalina- je 1% suspenzia formalinizovaných a senzibilizovaných erytrocytov oviec Salmonella Tyfus s B-antigénom vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH 7,2 + 0,2; koncentrácia 0,06 mol/l). Homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 fľaša - 6 ml |
| Diagnostické sérum Salmonella adsorbovaný B receptor suchý - homogénna hmota od bielej s hnedastým odtieňom po béžovú | 1 fľaša – 0,1 ml |
| 1 % suspenzia formalinizovaných, nesenzibilizovaných ovčích erytrocytov— homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant | 1 fľaša - |
| Roztok na riedenie séra a staging RPGA - 0,9% roztok chloridu sodného - priehľadná bezfarebná kvapalina, pH od 6,5 do 7,5 | 2 fľaštičky – každá po 8 ml |
| Jednorazová platnička s okrúhlym dnom na imunologické reakcie - pozostáva z 8 radov, z ktorých každý obsahuje 12 otvorov s priehľadným, bezfarebným, okrúhlym dnom | 1 PC |
ANALYTICKÉ A DIAGNOSTICKÉ CHARAKTERISTIKY.
3.1. Diagnostikum sa musí aglutinovať v RPHA s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným suchým B receptorom v zriedení najmenej 1:160.
Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra od zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20.
3.2. Čas analýzy: 2 hodiny.
3.3. Sada obsahuje 8 definícií.
PREVENTÍVNE OPATRENIA
Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať „Pravidlá dizajnu, bezpečnostných opatrení, priemyselnej sanitácie, protiepidemického režimu a osobnej hygieny pri práci v laboratóriách (oddelenia, oddelenia) sanitárnych a epidemiologických inštitúcií Ministerstva zdravotníctva ZSSR ( M., 1981).
Analyzované séra, ako aj činidlá, ktoré sú s nimi v kontakte, by sa mali považovať za potenciálne infikované, schopné dlhodobého uchovávania alebo prenosu HIV, vírusu hepatitídy alebo akéhokoľvek iného pôvodcu vírusovej infekcie – treba s nimi zaobchádzať opatrne:
- pracovať s gumenými rukavicami;
- pri pipetovaní je potrebné použiť automatické dávkovače;
- po ukončení práce ošetrite analyzované séra a reagencie a nástroje, ktoré sú s nimi v kontakte, dezinfekčným roztokom
- Pred a po použití utrite vybavenie 70% etylalkoholom.
Analyzované séra sa musia inaktivovať pri teplote 56 °C počas 30 minút.
Diagnostické sérum Salmonella adsorbované receptorom B, ktoré je súčasťou súpravy, je suché a inaktivované.
Objektívne výsledky analýzy sú zaručené, ak sú splnené nasledujúce podmienky:
- Všetky reagencie súpravy by sa mali skladovať pri teplotách od 2 do 8 0 C;
- nepoužívajte reagencie po expirácii;
- nepoužívajte reagencie súpravy, ak na ich obale nie je vhodné označenie;
- Na vykonanie RPHA používajte reagencie, ktoré sú súčasťou tejto súpravy.
Vi-Diagnosticum
Diagnosticum Vi
Vi-Antigénne
