Agentul cauzal al sifilisului. Taxonomie

Nr. 23 Agentul cauzal al sifilisului. Taxonomie. Caracteristică. Diagnosticul microbiologic. Tratament.
Treponema paladiu; T. entericum
Morfologie: treponeame tipice cu 8-12 spirale, aparatul locomotor - 3 flageli periplasmatici la fiecare pol al celulei. Pata Gram nu este percepută, conform Romanovsky-Giemsa - ușor roz, detectată prin impregnare cu argint.
proprietăți culturale: tulpină virulentă asupra animalului de companie. mediul nu crește, acumularea culturii are loc prin infectarea iepurelui în testicul. Tulpinile virulente sunt cultivate pe medii cu țesut cerebral și renal.
Proprietăți biochimice: microaerofil
Structura antigenică: complex, are proteine ​​specifice și antigene lipoide, acestea din urmă fiind identice ca compoziție cu cardiolipina extrasă dintr-o inimă de bovină (difosfadilglicerină)
Factori de patogenitate: adezinele sunt implicate în procesul de atașare, lipoproteinele sunt implicate în dezvoltarea proceselor imunopatologice.
Rezistenta: sensibil la uscare, lumina soarelui, ramane pe obiecte pana la uscare. În condiții nefavorabile, trece în forme L și formează chisturi.
Patogeneza: Cauza sifilis. De la locul porții de intrare, treponeamele intră în ganglionii limfatici regionali, unde se înmulțesc. În plus, T. pătrunde în fluxul sanguin, unde se atașează de endoteliocite, provocând endarterită, ducând la vasculită și necroză tisulară. Odată cu sângele, T. se răspândește în tot corpul, însămânțând organe: ficatul, rinichii, sistemul osos, cardiovascular și nervos.
Imunitatea: Nu se dezvoltă imunitate protectoare. Ca răspuns la antigenii patogeni, se dezvoltă HRT și procesele autoimune. Imunitatea umorală este produsă împotriva antigenului lipoid al T. și este un titru de IgA și IgM.
examinare microscopica. Se efectuează cu sifilis primar în timpul apariției unui șancru dur. Material pentru cercetare: descărcarea șancrului, conținutul ganglionilor limfatici regionali, din care se prepară un preparat de picătură „zdrobit” și se examinează într-un câmp întunecat. Cu un rezultat pozitiv, sunt vizibile fire subțiri răsucite lungi de 6-14 microni, având 10-12 bucle mici uniforme de forma corectă. Treponemul palid se caracterizează prin mișcări de tip pendul și de flexie înainte. Odată cu dezvoltarea leziunilor pe mucoasa bucală cu sifilis secundar, precum și cu localizarea unui șancru dur în cavitatea bucală, este necesar să se diferențieze treponemul palid de treponemul saprofit, care sunt reprezentanți ai microflorei normale. În acest caz, detectarea treponemelor tipice în punctatul ganglionilor limfatici regionali are o importanță diagnostică decisivă.
Serodiagnostic. Reacția Wasserman se setează simultan cu 2 antigene: 1) specifici, care conțin antigenul patogen - treponem distrus prin ultrasunete; 2) nespecific - cardiolipina. Serul investigat este diluat într-un raport de 1:5 și RSK este plasat conform metodei general acceptate. Cu o reacție pozitivă, se observă o întârziere a hemolizei, cu o reacție negativă, are loc hemoliza eritrocitelor; intensitatea reacției se estimează corespunzător de la (+ + + +) la (-). Prima perioadă de sifilis este seronegativă și se caracterizează printr-o reacție Wasserman negativă. La 50% dintre pacienți, reacția devine pozitivă nu mai devreme de 2-3 săptămâni după apariția unui șancru dur. În a doua și a treia perioadă de sifilis, frecvența reacțiilor pozitive ajunge la 75-90%. După cursul tratamentului, reacția Wasserman devine negativă. Paralel cu reacția Wassermann, se realizează o reacție de microprecipitare cu un antigen cardiolipin nespecific și serul sau plasma inactivată studiată. Pe godeu se aplică 3 picături de ser pe o placă de plexiglas (sau pe sticlă obișnuită) și se adaugă 1 picătură de antigen cardiolipin. Amestecul este bine amestecat și rezultatele sunt luate în considerare. O reacție pozitivă cu serul sanguin al unui pacient cu sifilis se caracterizează prin formarea și pierderea de fulgi de diferite dimensiuni; cu rezultat negativ se observă opalescență uniformă a luminii.
RIF – reactie indirecta de imunofluorescenta – este specifica in diagnosticul sifilisului. O suspensie de treponeme tisulare este utilizată ca antigen. Este utilizată reacția RIF_200. Serul pacientului este inactivat în același mod ca și pentru reacția Wassermann și diluat în raport de 1:200. Picăturile de antigen se aplică pe lamele de sticlă, se usucă și se fixează timp de 5 minute în acetonă. Apoi, serul pacientului este aplicat pe medicament, după 30 de minute este spălat și uscat. Următorul pas este tratamentul preparatului cu ser fluorescent împotriva globulinelor umane. Examinați preparatul folosind un microscop fluorescent, notând gradul de luminescență a treponemului.
Reacția RIT de imobilizare a treponemului este de asemenea specifică. O cultură vie de treponem se obține prin cultivare într-un testicul de iepure. Testiculul este zdrobit într-un mediu special în care treponeamele rămân mobile. Reacția se realizează după cum urmează: o suspensie de treponeame tisulare (mobile) este combinată într-o eprubetă cu serul de testare și se adaugă complement proaspăt. Serul unei persoane sănătoase se adaugă într-un tub de control în loc de serul de testare, iar inactivat - complement inactiv este adăugat la celălalt în loc de complement proaspăt. După menținerea la 35 °C în condiții anaerobe (anaerostat), se prepară un preparat de picătură „zdrobit” din toate eprubetele și se determină numărul de treponeme mobile și imobile într-un câmp întunecat.
Tratament: peniciline, tetracicline, medicamente care conțin bismut.

Sifilisul este o boală cu transmitere sexuală care apare ciclic la om, cauzată de spirochete pallidum; Stadiul I se manifestă prin șancru dur (fr. şancrul- ulcer), stadiul II - afectarea pereților vaselor de sânge și diverse erupții cutanate, III - gingii în diferite organe cu afectare a sistemului nervos. Gumma (lat. . gumii- gingie) - un infiltrat cronic sub formă de nod, predispus la carii și ulcerații. gumă sifilitică ( sin.: granulom sifilitic, sifilis gingival, sifilomul terțiar) este o gingie emisferică nedureroasă care este o manifestare a sifilisului terțiar activ. Agent patogen - Treponema pallidum- a fost descoperit în 1905 de F. Shaudin și E. Hoffmann.

T. pallidum- un microorganism de forma spiralata, cu dimensiunile de 0,09 - 0,18 x 6 - 20 microni. Numărul de bucle ale spiralei este de la 8 la 12, buclele sunt uniforme, situate la aceeași distanță unele de altele aproximativ 1 μm, înălțimea scade spre capete. Într-un microscop electronic, arată ca un șarpe sau un râme. La ambele capete ale treponemului sunt atașate blefaroplaste cu flageli, al căror număr variază de la două la mai multe, formează un fir axial răsucit în jurul cilindrului protoplasmatic al spirochetei. În condiții nefavorabile, poate forma chisturi. La animale, poate apărea o înveliș asemănător unei capsule de natură mucopolizaharidă.

Treponemul se colorează slab cu coloranții cu anilină, motiv pentru care agentul cauzal al sifilisului se numește spirochetă palid. Reduce azotatul de argint la argint metalic, care se depune pe suprafața microbilor și îl face vizibil în țesuturi: atunci când sunt colorate conform lui Morozov, treponemele arată maro sau aproape negru. Când sunt colorate conform Romanovsky - Giemsa, acestea capătă o culoare roz pal.

Treponemele se înmulțesc de obicei prin diviziune transversală, în timp ce celulele divizate se pot alătura unele cu altele pentru o perioadă de timp. Timpul de împărțire este de aproximativ 30 de ore.

Treponeamele vii sunt foarte mobile, fac mișcări în jurul propriei axe longitudinale, precum și mișcări de flexie, de valuri și de translație.

Până în prezent, nu există o astfel de metodă care să poată obține în mod constant culturi de treponem. Treponema pallidum, patogen pentru om, nu a fost niciodată cultivat pe medii nutritive artificiale, în embrioni de pui sau în culturi celulare. Acele varietăți ale tulpinilor lor care cresc în condiții anaerobe sunt probabil spirochete saprofite, apropiate de agentul cauzal al sifilisului. Fiziologia lor rămâne puțin studiată. Treponemele sunt chemoorganotrofe, nu au catalază și oxidază și pot fermenta carbohidrații. Ele cresc pe medii foarte bogate care conțin până la 11 aminoacizi, vitamine, săruri și albumină serică. Cel mai bun mod de a crește spirochete patogene este de a infecta un iepure în testicul (orhită experimentală). S-a sugerat că există T. pallidum ciclul de viață, incluzând, pe lângă forma spirală, stadiul granular și stadiul corpurilor sferice asemănătoare chistului. Formele granulare ale acestor microorganisme sunt capabile să treacă prin filtrele bacteriene.

Antigenele de treponemă sunt puțin înțelese. S-a stabilit că treponemul conține proteine, polizaharide și complexe lipidice. Compoziția antigenică a treponeamelor culturale și tisulare este atât de apropiată încât antigenele preparate din treponeamele culturale pot fi utilizate pentru CSC în diagnosticul sifilisului. În corpul uman, treponeamele stimulează producția de anticorpi care provoacă imobilizarea și moartea treponemelor mobile vii, leagă complementul în prezența unei suspensii. T. pallidum sau spirochete înrudite și sunt de asemenea detectate în RIF indirect.

Agentul cauzal al sifilisului nu formează exotoxine. Treponemele palide sunt relativ instabile la influențele externe. Mor rapid atunci când sunt uscate și la temperaturi ridicate (la 55 °C timp de 15 minute). Într-o soluție 0,3 - 0,5% HCI își pierd instantaneu mobilitatea; de asemenea, o pierd rapid și mor în prezența preparatelor de arsen, bismut și mercur. În sânge integral sau în ser la 4 °C, acestea rămân viabile timp de 24 de ore, lucru care trebuie luat în considerare la transfuzarea sângelui.

Epidemiologie. Sifilisul este o boală tipică cu transmitere sexuală. Sursa de infecție este o persoană bolnavă, de obicei contagioasă timp de 3 până la 5 ani; pacienții cu forme tardive de sifilis nu sunt contagioși. Infecția în marea majoritate a cazurilor apare prin diferite tipuri de contacte sexuale și domestice, rareori transplacentare de la o mamă bolnavă la copil (sifilis congenital) sau ca infecție profesională prin contact cu personalul medical. În condiții naturale, doar o persoană suferă de sifilis, în experiment este posibil să se infecteze maimuțe, hamsteri și iepuri. La maimuțe, un șancru dur se dezvoltă la locul injectării treponemelor; la iepuri și hamsteri, infecția este asimptomatică.

Patogenie și clinică. Perioada de incubație pentru sifilisul dobândit variază de la 2 la 10 săptămâni, de obicei 20 până la 28 de zile. Porțile de intrare ale infecției sunt cel mai adesea membranele mucoase ale organelor genitale, mai rar - cavitatea bucală, precum și pielea deteriorată. La locul introducerii, agentul patogen se înmulțește, se formează un sifilom primar (șancru dur) - eroziune sau un ulcer cu o bază compactată. În plus, agentul patogen intră în sistemul limfatic, se dezvoltă limfangita și limfadenita regională. Aceasta este o clinică tipică a sifilisului primar, care durează 1,5 - 2 luni. Apoi aceste semne dispar. Perioada secundară a sifilisului este asociată cu o generalizare a procesului, când mulți ganglioni limfatici cresc și apar erupții cutanate pe piele și mucoase; pot fi observate leziuni ale organelor interne și ale sistemului nervos. Există sifilis secundar proaspăt și secundar recurent. Cu fiecare recidivă ulterioară, intensitatea erupției cutanate devine mai puțin pronunțată, iar perioadele dintre recidive cresc. Elementele erupției cutanate conțin un număr mare de treponeme vii, în această perioadă pacientul este cel mai contagios. Durata sifilisului secundar este de până la 4 ani sau mai mult. Mai departe, boala intră într-o perioadă lungă asimptomatică, după care, după câțiva ani, se dezvoltă sifilisul terțiar. În același timp, se observă leziuni organice brute ale organelor interne, ale sistemului cardiovascular, ale sistemului nervos central, ale oaselor, se formează gume, însoțite de degradarea țesuturilor și modificări degenerative. O trăsătură clinică caracteristică a sifilisului este absența oricăror plângeri subiective din partea pacientului (durere, mâncărime, arsură etc.).

Imunitate.Împotriva sifilisului nu apare nici imunitatea naturală, nici artificială; există doar imunitate infecțioasă și, în timp ce aceasta există, o persoană nu este practic susceptibilă la o nouă infecție. Imunitatea infecțioasă se dezvoltă la 10-11 zile de la apariția unui șancru dur (imunitate chanker), în această perioadă fie nu se observă reinfecția, fie un nou șancru care s-a format decurge abortiv (superinfecție). În viitor, cu suprainfecție, natura leziunilor rezultate corespunde stadiului bolii în momentul reinfectării. Suprainfecția se explică printr-o slăbire temporară sau „defalcare” a imunității infecțioase. De suprainfecție, este necesar să se distingă reinfecția, adică o nouă reinfecție a unei persoane care a avut anterior sifilis (vindecat) și, prin urmare, și-a pierdut imunitatea infecțioasă. Sunt descrise cazuri chiar de trei ori mai mari decât boala cu sifilis. Perioada de incubație la astfel de pacienți este mai scurtă, șancrele ulcerative multiple cu limfadenită se dezvoltă mai des, reacțiile serologice devin pozitive mai devreme. În perioada secundară, papulele de pe piele sunt adesea erodate. Acest lucru se explică prin faptul că la sifilis se dezvoltă o reacție de hipersensibilitate de tip întârziat, după tratament, limfocitele sensibilizate rămân în organism mult timp. Imunitatea infecțioasă este de natură nesterilă și se datorează unor factori umorali: în serul pacientului se găsesc imunoglobuline din clasele G, A și M.

Diagnosticul de laborator. Pentru diagnosticul sifilisului este optimă o abordare integrată, care implică utilizarea simultană a mai multor metode. Ele sunt împărțite în mod tradițional în cele directe, care fac posibilă demonstrarea prezenței unui agent patogen în materialul de testat (infecția animalelor, diferite tipuri de microscopie și metode genetice moleculare pentru detectarea ADN-ului). T. pallidum- sondarea PCR și ADN), și indirecte - teste serologice pentru depistarea anticorpilor. La rândul lor, testele serologice sunt reprezentate de netreponemale și treponemale.

Materialul de testare pentru detectarea treponemului în metode directe este descărcarea unui șancru dur sau punctat al acestuia, punctat al ganglionului limfatic, răzuirea rozolei, lichidul cefalorahidian. Agentul patogen este cel mai bine detectat în materialul nativ prin microscopie cu câmp întunecat (vezi Fig. 111.4) sau cu contrast de fază, ceea ce face posibilă observarea diferitelor tipuri de mișcare ale unui agent patogen viu. Dacă tratamentul cu antibiotic a fost deja început, agentul patogen nu poate fi detectat în materialul patologic. Dacă este necesar, se efectuează RIF direct (sau indirect) sau preparatul este colorat conform Romanovsky-Giemsa. Aceste metode sunt utilizate numai pentru diagnosticarea precoce a sifilisului.

Testele serologice pot fi utilizate în diferite stadii ale bolii, cu excepția sifilisului primar seronegativ. De obicei se utilizează un complex de reacții serologice. La non-treponemic testele cu determinarea vizuală a rezultatelor includ: reacția de fixare a complementului (reacția Wasserman \u003d RSKk \u003d RW) cu antigenul cardiolipin al mușchiului cardiac al taurului (antigen cu reacție încrucișată), reacția de microprecipitare (MR sau RMP) - microreacție cu plasmă și ser inactivat; RPR - test rapid de reagină în plasmă și alte reacții. Experții consideră că cel mai bine este să folosiți două teste pentru screening-ul în masă: RPR și RPHA sau ELISA, deoarece RPR este mai sensibil în sifilisul primar, RPHA se află în stadiile ulterioare ale bolii, iar ELISA este în toate etapele. Testele non-treponemale care pot fi citite la microscop includ testul VDRL și testul USR. Testele non-treponemale sunt folosite ca teste de screening, deoarece pot da rezultate fals pozitive. LA treponemală testele folosesc antigene de origine treponemală. Sunt utilizate pentru confirmarea rezultatelor testelor non-treponemice (fals pozitive?) cu suspiciune clinică, epidemiologică și anamnestică de sifilis, pentru diagnosticarea formelor latente și tardive, pentru diagnostic retrospectiv. Testele treponemice includ: RSKt (RSK cu antigen treponemic), RIBT (sau RIT) - reacția de imobilizare a treponemului palid, RIF (una dintre cele mai bune reacții), RPHA, ELISA, imunoblot.

Diagnosticul microbiologic al sifilisului

Munca practica

Medicină și Veterinară

Numele de treponemă „palid” a primit din cauza capacității scăzute de a colora. Există și alte treponeame patogene: T. pertenue - agentul cauzator al tianei, T. carateum - agentul cauzator al halbei, T. bejel - agentul cauzator al spirochetozei cronice generalizate (bejel). Agenți cauzali specificați și numiți...

Instrucțiuni metodice pentru elevi pentru lecția practică nr. 36.

Tema lecției:

Ţintă: Studiul metodelor de diagnostic microbiologic, terapie și prevenire a sifilisului.

Modulul 2 . Microbiologie specială, clinică și ecologică.

Subiectul 36: Diagnosticul microbiologic al sifilisului.

Relevanța subiectului:

Agentul cauzal al sifilisului

Sifilisul este o boală infecțioasă cu transmitere sexuală cauzată de Treponema pallidum, caracterizată prin leziuni ale pielii, organelor interne, oaselor și sistemului nervos. Există sifilis dobândit și congenital.

Taxonomie. Agentul cauzal al sifilisului - treponemul palid (Treponema pallidum) - a fost descoperit în 1905 de F. Shaudin și E. Hoffman; aparține familiei Spirochaetaceae, divizia Gracilicutes.

Morfologie și proprietăți tinctoriale.Numele de treponemă „palid” a primit din cauza capacității scăzute de a colora. Există și alte treponeame patogene: T. pertenue - agentul cauzator al tianei, T. carateum - agentul cauzator al halbei, T. bejel - agentul cauzator al spirochetozei cronice generalizate (bejel). Acești agenți patogeni și bolile pe care le provoacă sunt mai frecvente în regiunile cu un climat cald și umed. Treponema palid - o bacterie subțire în formă de spirală, de 4 până la 14 microni lungime, cu bucle mici uniforme (8-14 bucle); împreună cu spirală poate avea alte forme - sub formă de chisturi, granule, forme L; colorat conform Romanovsky-Giemsa într-o culoare caracteristică roz slab. Mișcări de la elicoidal la flexie.

Cultivare.Treponemul palid este un anaerob obligatoriu, extrem de exigent cu mediile nutritive. Treponemul cultivat pe medii nutritive - spirocheta de cultură - diferă de virulența inferioară patogenă, dar antigenele lor sunt similare, ceea ce este utilizat în serodiagnosticul sifilisului.

Structura antigenică.Treponemul palid se caracterizează prin asociații antigenice cu alte treponeame, precum și cu lipoizi din țesuturile animale și umane. În agentul patogen au fost identificate mai multe antigene, dintre care unul, antigenul lipoid, este identic cu extractul lipoid al inimii de bovine.

rezistenţă. În mediu, treponemul palid este slab rezistent; la 55 0 C moare în 15 minute, sensibil la uscare, lumină, săruri de mercur, bismut, arsenic, penicilină. Pe articolele de uz casnic, rămâne infecțios până se usucă; bine conservat în țesutul cadavru.

susceptibilitatea animalelor.Experimental, un proces patologic poate fi indus în testicul și pe pielea iepurilor și în pielea marilor maimuțe.

Epidemiologie. Sursa de infecție este o persoană bolnavă. Infecția apare în principal prin contact sexual, rar prin obiecte de uz casnic (ochelari, periuțe de dinți, țigări etc.) contaminate cu scurgeri de la pacient; infecția prin sărutări, laptele unei mame care alăptează (sifilis casnic) este posibil, nu sunt excluse cazurile de infecție în timpul transfuziei de sânge de la donatori cu sifilis.

Patogenie și tablou clinic.Agentul cauzal al sifilisului intră în organism prin piele sau membrana mucoasă, se răspândește prin organe și țesuturi, provocând deteriorarea acestora. Perioada de incubație durează în medie 3-4 săptămâni. După perioada de incubație, sifilisul se desfășoară ciclic sub formă de perioade primare, secundare și terțiare. La locul introducerii agentului patogen (pe organele genitale, în cavitatea bucală etc.), apare o leziune primară - un șancru dur - un sigiliu puternic delimitat cu un ulcer la suprafață. Perioada secundară de sifilis durează 3-4 ani, se caracterizează printr-o erupție cutanată, o încălcare a stării generale a corpului. Perioada terțiară se caracterizează prin afectarea pielii, mucoaselor, organelor interne, oaselor, sistemului nervos: apar formațiuni care sunt predispuse la degradare, ulcerații.

Imunitate. Nu există imunitate înnăscută la sifilis. Cu sifilis, se dezvoltă imunitatea nesterilă; După tratament, imunitatea nu este păstrată, astfel încât bolile repetate sunt posibile.

Microscopia în câmp întunecat este utilizată pentru a detecta treponemul palid în descărcarea unui șancru dur. Până la sfârșitul perioadei primare și secundare, reacțiile sergologice ale lui Wassermann, reacțiile sedimentare ale lui Kahn, testele citocolice și alte teste care detectează anticorpi la treponemul palid devin pozitive. În examenele de masă, se folosește o reacție de selecție sau microreacție pe sticlă, cu o picătură de sânge sau ser și un antigen special. Laboratoarele de cercetare folosesc, de asemenea, reacția de imobilizare a treponemului și alte metode moderne.

Schema cercetării microbiologice în sifilis

Examen microscopic Serodiagnostic

(complex de reacții serologice):

Reacția lui Wasserman

Reacție de imobilizare a treponemului

Microscopia preparatului nativ RIF

În câmpul întunecat

RĂSPUNS RĂSPUNS

Tratament. Cei mai eficienți agenți antimicrobieni sunt antibioticele din seria penicilinei. Se mai folosesc preparate din bismut, iod etc.

Prevenirea. Nu există o profilaxie specifică. Prevenirea nespecifică constă în respectarea regulilor de igienă, precum și în realizarea unui complex de măsuri sanitare și igienice cu caracter public: înregistrarea bolnavilor cu sifilis, internarea tuturor bolnavilor cu forme infecțioase, implicarea tuturor membrilor familiei persoanei bolnave. în examinarea, examinarea sistematică a grupurilor de risc, educația populației etc.

Obiective specifice:

Familiarizați-vă cu morfologia agentului cauzal al sifilisului.

Determinați caracteristicile cursului clinic al sifilisului.

Definiți conceptele de treponem „țesut” și „cultural”.

Interpretați rezultatele examinării microscopice.

Pentru a studia metodele de diagnostic serologic al sifilisului.

Familiarizați-vă cu metodele de prevenire și terapie specifică.

A fi capabil să:

  • Colectați material pentru cercetare de la pacienți
  • Interpretați rezultatele examinării microscopice
  • Aflați cum să efectuați reacția Wasserman

Întrebări teoretice:

1. Agent patogen.

  • Proprietăți. rezistenţă.
  • Patogenitate pentru oameni și animale. Factori patogeni, toxine.
  • Patogenia bolii la om, imunitatea.
  • Diagnosticul microbiologic.
  • Prevenție și tratament specific

2. Obiectivele stabilirii reacției Wasserman.

3. Valoarea diagnostică a reacției Wasserman și a reacțiilor sedimentare.

4. Mecanismul reacției Wasserman.

5. Caracteristici ale imunității în sifilis.

Sarcini practice care se execută în clasă:

  • Microscopia preparatelor demonstrative.
  • Schițarea micropreparatelor demonstrative în protocol.
  • Analiza schemei de diagnosticare de laborator.
  • Formularea protocolului.

Literatură:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Microbiologie medicală, imunologie și virologie / Manual pentru universitățile medicale, Sankt Petersburg: „Literatura specială”, 1998.- 592p.

2. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Microbiologie / Manual.-ed. a II-a, revăzută. şi adaugă.- M.: Medicină, 1983, - 512s.

3. Pyatkin K.D. Krivoshein Yu.S. Microbiologie cu virologie și imunologie - Kiev: școala Vishcha, 1992. - 431s.

4. Microbiologie medicală /Ed. V.I. Pokrovsky.- M.: GEOTAR-MED, 2001.- 768s.

5. Ghid de exerciții practice de microbiologie, imunologie și virologie. / Ed. M.P. Zykova.- M. „Medicina”. 1977. 288s.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Microbiologie. / Ed. F.K. Cherkes.M.: Medicină, 1986. 512s.

7. Note de curs.

Literatură suplimentară:

1. Makiyarov K.A. Microbiologie, virologie și imunologie.- Alma-Ata.: „Kazahstan”, 1974. 372p.

2. Titov M.V. Boli infectioase.- K., 1995. 321s.

3. Shuvalova E.P. Boli infecţioase.- M.: Medicină, 1990.- 559s.

4. BME, Vol. 1, 2, 7.

5. Pavlovich S.A. Microbiologie medicală în grafice: Proc. indemnizatie medicala in-tovarăş.Mn.: Vysh. scoala, 1986. 255p.

Scurte linii directoare pentru lucru într-o lecție practică.

La începutul lecției se verifică nivelul de pregătire a elevilor pentru lecție.

  • Muncă independentă.
  • formularea reacției Wasserman.
  • Contabilizarea reacției Wasserman și înregistrarea în protocol.
  • Analiza și înregistrarea schemelor de diagnostic de laborator în protocol.

Alcătuirea lucrării independente include și microscopia preparatelor demonstrative și schițarea acestora în protocolul lecției.

La sfârșitul lecției, se efectuează un test de control și o analiză a rezultatelor finale ale muncii independente ale fiecărui elev.

Harta tehnologică a lecției practice

Nu. p \ p

Etape

Timp în min.

Modalitati de invatare

Echipamente

Locație

Verificarea și corectarea nivelului de ieșire al pregătirii pentru lecție

20

Elemente de testare la nivel de ieșire

Mese.

Teste de subiect.

cameră de studiu

Muncă independentă

35

Grafic

structura logica

Colectare preparate demonstrative, preparate biologice.

Autocontrolul si corectarea materialului invatat

15

Programe de instruire țintite

Controlul de testare

15

Teste

Analiza rezultatelor muncii

Algoritmul muncii de laborator:

Studiul schemei de diagnostic de laborator al sifilisului.

Microscopia frotiurilor preparate din treponeame culturale și tisulare.

Familiarizarea cu regulile de preluare a materialului de la pacienți pentru microscopia materialului de testat.

Microscopia și analiza preparatelor demonstrative.

Pregătirile de desen în protocol.

Scheme de înregistrare a diagnosticelor de laborator în protocol.

Formularea protocolului.

Testarea de control și analiza rezultatelor muncii independente a fiecărui elev.


Sarcini de învățare vizate:

1. Un pacient cu diagnostic de „sifilis primar” a fost internat la ATC. Care dintre următoarele metode de diagnostic este utilizată în acest stadiu al bolii?

A . microscopie în câmp întunecat;

C. RP în gel

D. RA

E . imunofluorescență indirectă

2. La un pacient al secției de chirurgie maxilo-facială, la stadializarea reacției Wasserman, aceasta s-a dovedit a fi negativă. Care dintre următoarele rezultate determină fenomenul RSK negativ?

A . prin aglutinarea eritrocitelor;

B . prin prezența sedimentului eritrocitar;

C . prin schimbarea culorii lichidului;

D . prin formarea peliculei

E . prin prezenţa hemolizei în eprubete.

3. Examinarea unui pacient cu AVC a evidențiat erupții cutanate papulare-rozeoloase pe trunchi și extremități și ganglioni limfatici măriți. Diagnosticul preliminar de sifilis. Ce metodă de diagnostic de laborator poate confirma acest diagnostic?

A. alergic;

b. biologic;

C . bacteriologic;

D . bacterioscopic;

E. ELISA

4. În timpul recepției, medicul dentist a găsit un șancru dur în cavitatea bucală a pacientului. Care dintre următoarele metode de diagnosticare de laborator poate fi utilizată pentru a face un diagnostic?

A . reacție de imobilizare a treponemului

B . Reacția Wassermann

C. Reacția lui Kahn

D. RA

E . bacterioscopic

5. O femeie a venit la clinica prenatală în săptămâna a 8-a de sarcină. În timpul examinării, i s-a prelevat sânge pentru a verifica prezența anticorpilor specifici la treponem. Care dintre următoarele teste serologice pot fi utilizate pentru a detecta anticorpii la treponem?

A. Reacția lui Wright

B . Reacția Wassermann

C. Reacția Vidal

D . Reacția Bordet-Gangu

E. RTGA.

6. Pentru a confirma diagnosticul de sifilis, asistentul de laborator a efectuat un test serologic, în care a folosit serul sanguin al pacientului, antigenul cardiolipidic, complementul și un sistem indicator. Care este numele reacției date?

A . reacție de imobilizare a treponemului;

B . Reacția Wasserman;

C. Reacția lui Kahn

D. RP

E . reacție de imunofluorescență.

7. La efectuarea unui test serologic pentru detectarea anticorpilor la agentul cauzal al sifilisului în serul sanguin al pacientului, treponeamele au fost incubate cu serul pacientului în condiții anaerobe, după care bacteriile și-au pierdut mobilitatea. Care a fost răspunsul și ce înseamnă?

A . Reacție Wasserman, pacientul are sifilis;

B .Reacția lui Wasserman, pacientul are o perioadă de incubație;

C . reacție de imobilizare a treponemului, pacientul are sifilis;

D . reacție indirectă de imunofluorescență, pacientul are sifilis;

E . reacție de imobilizare a treponemului, pacientul a avut odată sifilis.

8. Pentru diagnosticul serologic al sifilisului folosind reacția Wasserman, asistentul de laborator a pregătit următorii reactivi: antigen cardiolipidic, soluție izotonică de clorură de sodiu, sistem hemolitic. Ce altă componentă este necesară pentru a pune în scenă această reacție?

A . treponeme vii;

B . eritrocite de oaie;

C. completa;

D . ser antiglobulinic;

E . ser precipitant diagnostic.

9. Într-un micropreparat preparat dintr-un punctat al ganglionilor limfatici ai pacientului, colorat conform Romanovsky-Giemsa, medicul a dezvăluit microorganisme subțiri cu 12-14 bucle uniforme de culoare roz pal. Despre agentul cauzal al ce boli infecțioase putem vorbi în acest caz?

A . febră recurentă;

b. leptospiroza;

C. leishmanioza

D. sifilis

E. tripanosomiaza.

10. O răzuire a mucoasei bucale a fost luată de la un pacient cu suspiciune de sifilis primar. Microscopia unui frotiu colorat conform metodei Romanovsky-Giemsa a evidențiat bacterii violete contorte. Care dintre următoarele concluzii este corectă?

A . pacientul a fost diagnosticat T . pallidum;

B . Pacientul are o formă atipică T . pallidum;

C . pacientul are treponeame nepatogene;

D . a fost aleasă metoda greșită de colorare;

E. -

11. Clinicianul a suspectat sifilis primar la un pacient. Ce material de cercetare ar trebui luat pentru a confirma diagnosticul?

A . lichid tisular din șancrul dur și punctatul ganglionilor limfatici;

B . răzuire de la erupții cutanate;

C. lichior;

D. mucus din nas

E. salivă.

12. S-a prelevat sânge de la un pacient cu suspiciune de sifilis secundar. Ce metodă de diagnostic ar trebui utilizată pentru a confirma diagnosticul?

A . Reacția Vidal;

B . test alergic;

D . Reacția Bordet-Gangu

E . metoda bacteriologica

C . reacție indirectă de imunofluorescență.


Precum și alte lucrări care te-ar putea interesa

68128. Cuvinte în vіrshі - i paradis în suflet 78,5 KB
Meta: distruge cunoștințele academice ale teoriei literaturii și analiza ideologică și artistică a operei poetice pentru a facilita citirea în diferite moduri; să dezvolte gândurile poetice la figurat; întoarce dragostea la cuvântul artistic și la natura nativă. Voi citi rândurile poetice și ești vinovat că ai depus...
68129. Jocul intelectual „Literary Vesselka” Trăiești în inimile oamenilor, Taras! 43,5 KB
Shevchenko să dezvolte gânduri logice prin lecturi diferite, să învețe să înțeleagă cuvintele lui Shevchenko și să-și dezvolte creativitatea. Taras Shevchenko Taras Tse proorociază că numele este cunoscut nu numai de ucraineni, ci și de întreaga lume. Shevchenko tse krinitsa z zhelelny iac de apă vtamovu spraga spirituală către oameni.
68130. Cunoașterea țării Logica 28,5 KB
Astăzi, copiii sunt tratați la un preț inimaginabil de scump. Copiii pot merge la școală pe calea cea mai scurtă, dar ani de zile pot rătăci prin diverse labirinturi. Copiii imită urcarea în autobuz și călătoria. Axa companiei unui iac Copii Borya Petryk Yurko Vira Stas Ira.
68131. Analogie. Dobrir malyunkiv prin analogie 263,5 KB
Tipul lecției: lecție învățată minte și începător Obligație: figuri geometrice și obiecte mici către Grim Photographer; іndivіdualnі seturi de figuri geometrice graloto malunki z sledovnіstyu. Îmi fac ordine figurile cu mâinile. Toate figurile de diferite culori Și acum lasă-ți ochii să se minuneze...
68132. Călătorește peste oceanul sarcinilor logice 27,5 KB
Meta: Cunoașteți copii cu înțelegeri diferite; dezvoltarea gândurilor, limbajului, memoriei, prudenței; vikhovuvat smilivist, rіshuchіst. Șeful lecției Informați-i pe aceștia și notați lecția. Astăzi suntem virushaemo la circumnavigarea lumii mai scumpe pe navă. Suntem verificați pentru o mulțime de bunătăți. Lyudina este un idiot chibzuit. Gândurile sunt exprimate în cuvinte.
68133. Sumіsnі și nezumіsnі înțeleg. Cerere de repetare 84,5 KB
Meta: să sistematizeze cunoștințele de învățare despre înțelegerea sumelor și inconsecvențele înțelegerii, să înțeleagă temeinic cunoașterea ordinii logice a dezvoltării gândurilor logice, respectul pentru memoria minții; pentru a trezi dragostea pentru creaturi, pentru a trezi un interes conștient pentru toate lucrurile vii, pentru a modela autoiluminarea...
68136. MODERNIZAREA TOTULUI PENTRU A ÎNȚELEGE UCRAINA: MECANISME DE REGLEMENTARE INSTITUȚIONALĂ 188KB
Eficacitatea și eficiența funcționării sistemului de iluminare vitală a Ucrainei pe cobul secolului XXI poate fi sigură doar în toamnă, dacă nu sună ca renașterea obiectivelor timchas, generate de instabilitatea economică și politică. , demografie, demografie.

T. pallidum subspecia pallidum - o bacterie spirală cu dimensiunea de 6-14x0,2-0,3 microni; în culturi poate fi mare. Buclele spiralei sunt aceleași, dar în înălțime pot fi până la 14. Ele sunt capabile să formeze o formă L.

De bază cum se răspândește sifilisul- diviziune transversală. Agentul cauzal al sifilisului nu este stabil în mediul extern și moare când se usucă, dar persistă la frig până la 50 de zile. Încălzirea la o temperatură de 40 ° C timp de o oră duce la pierderea proprietăților patogene; la 48 °C bacteriile mor în 10 minute.

Agentul cauzal al sifilisului slab colorat cu coloranți anilină (de unde și denumirea de „spirochetă palid”). bacterii sifilis reduceți azotatul de argint la argint metalic, ceea ce conferă țesăturilor o culoare neagră sau maro închis.

În practica casnică, metoda de argint conform lui Morozov este larg răspândită. Potrivit Romanovsky-Giemsa, devine roz și non-patogen treponem- în mov sau albastru. Se folosește și colorarea negativă Burri.

Proprietățile culturale ale sifilisului. Cultura agentului cauzal al sifilisului

Spirochet palid exigent la condițiile de cultivare, crește slab pe medii artificiale; metodele de producere stabilă a culturilor nu sunt încă disponibile.

La noi, cel mai mare număr tulpini de sifilis au identificat microbiologii din Kazan V.M. Aristovsky și P.P. Geltzer.

Aceste „Kazan” tulpini de sifilisîmpreună cu tulpina Reiter, sunt utilizate pentru fabricarea Ag pentru serodiagnostic. Cu cultivare pe termen lung bacterii sifilis se adaptează la medii mai simple (de exemplu, Kitta-Tarozzi) și își pierd proprietățile patogene.

Colonii de sifilis mici, apar în a 3-5-a zi de cultură.

Conținutul articolului

Treponem palid

Morfologie și fiziologie

T.pallidum are o formă spiralată, un cilindru protoplastic, care este răsucit în 8-12 spire. 3 flageli periplasmatici se extind de la capetele celulei. Treponemul palid nu percepe bine coloranții cu anilină, prin urmare este colorat cu vopsea Romanovsky-Giemsa. Cu toate acestea, cea mai eficientă metodă este studierea acesteia într-un microscop cu câmp întunecat sau cu contrast de fază. Microaerofil. Nu crește pe medii nutritive artificiale. T. pallidum este cultivat în țesutul testicul de iepure, unde se înmulțește bine și își păstrează pe deplin proprietățile, provocând orhită la animal. Antigene. Structura antigenică a T. pallidum este complexă. Este asociat cu proteinele membranei exterioare, lipoproteinele. Acestea din urmă sunt antigene reactive încrucișate comune oamenilor și bovinelor. Ele sunt utilizate ca antigen în testul Wassermann pentru serodiagnosticul sifilisului.

Patogenitate și patogeneză

Factorii de virulență Treponema pallidum includ proteinele membranei exterioare și LPS, care își manifestă proprietățile toxice după ce sunt eliberate din celulă. În același timp, aparent, capacitatea treponemului de a forma fragmente separate în timpul diviziunii, pătrunzând adânc în țesuturi, poate fi atribuită și factorilor de virulență. Există trei etape în patogeneza sifilisului. În sifilisul primar, se observă formarea unui focar primar - un șancru dur la locul porții de intrare a infecției, urmat de pătrunderea în ganglionii limfatici regionali, unde agentul patogen se înmulțește și se acumulează. Sifilisul primar durează aproximativ 6 săptămâni. A doua etapă se caracterizează prin generalizarea infecției, însoțită de pătrunderea și circulația agentului patogen în sânge, care este însoțită de erupții cutanate. Durata sifilisului secundar la pacientii netratati variaza intre 1-2 ani. In a treia etapa se gasesc granuloame infectioase (gingii predispuse la carii), localizate in organe si tesuturi interne. Aceasta perioada la pacientii netratati dureaza cativa ani si se termina cu afectarea sistemului nervos central (paralizie progresiva) sau a maduvei spinarii (tasca dorsalis).

Imunitate

În cazul sifilisului, există un răspuns imun umoral și celular. Anticorpii rezultați nu au proprietăți protectoare. Răspunsul imun celular este asociat cu fixarea agentului patogen și formarea de granuloame. Cu toate acestea, eliminarea treponemului din organism nu are loc. În același timp, condițiile de mediu nefavorabile induc formarea de chisturi prin treponeame, care sunt localizate în peretele vaselor de sânge. Se crede că acest lucru indică tranziția bolii la stadiul de remisie. Împreună cu chisturile, treponeamele formează forme de L. Cu sifilis, se formează HRT, care poate fi detectată printr-un test alergic cutanat cu suspensie de treponem ucis. Se crede că manifestarea perioadei terțiare a sifilisului este asociată cu HRT.

Ecologie și epidemiologie

Sifilisul este o infecție antroponotică tipică. Doar oamenii care sunt un rezervor de infecție în natură se îmbolnăvesc. Transmiterea infecției are loc pe cale sexuală și mult mai rar - prin lenjerie intimă și alte obiecte. În mediul extern (aer), treponemul moare rapid.

Sifilis și alte treponematoze

Sifilisul este o boală venerică infecțioasă cronică a unei persoane, are un curs ciclic progresiv, afectează pielea, mucoasele, organele interne și sistemul nervos. Agentul cauzal al bolii este Treponema pallidum.Există trei perioade principale în dezvoltarea sifilisului, ale căror metode de diagnostic de laborator au propriile caracteristici. În perioada incipientă a bolii, materialul pentru diagnosticul de laborator este izolarea dintr-un șancru dur, punctat din ganglionii limfatici, răzuire de la rozeola, sifilis etc. În perioadele secundare și terțiare se examinează serul sanguin și lichidul cefalorahidian Datorită faptului că izolarea culturilor de treponem pur în laboratoarele bacteriologice convenționale este imposibilă, în perioada primară a bolii (rar mai târziu) se face o metodă de diagnostic bacterioscopică. efectuat. Începând din perioada secundară se folosesc în principal metode serologice.

Cercetare bacterioscopică

Înainte de a lua materialul patologic, ștergeți mai întâi ulcerul sifilitic cu un tampon de bumbac pentru a îndepărta placa grasă și microflora contaminantă. Apoi fundul șancrului dur este iritat cu un bisturiu sau cu o spatulă de metal, sau ulcerul este strâns energic din lateral cu degetele într-o mănușă de cauciuc pentru a emana exudatul plăgii. Cu o cantitate mică de lichid limpede, acesta poate fi adăugat la o picătură de soluție de clorură de sodiu 0,85%. Dacă este imposibil să se preleveze material din partea inferioară a șancrului (fimoza, cicatrizarea ulcerului etc.), ganglionii regionali sunt perforați, câmp vizual întunecat (mai bine!), sau folosind un microscop cu contrast de fază sau anoptral. Treponemul palid în câmpul întunecat de vedere arată ca o spirală subțire și delicată ușor strălucitoare, cu bucle primare rotunjite, uniforme, abrupte. Mișcările sunt line, așa că se îndoaie într-un unghi. Dar oscilațiile de tip pendul, care îi sunt deosebit de caracteristice. Agentul cauzal al sifilisului trebuie distins de Treponema refringens (care colonizează organele genitale externe), care este mai gros, mai aspru, cu bucle mari neregulate și are mișcări active neregulate, dar nu se îndoaie. Treponeamele cu simbioză fuzosp-irochetoasă se disting printr-un model subțire, bucle blânde și mișcare neregulată.La diagnosticarea sifilisului oral, treponemul palid trebuie, de asemenea, diferențiat de treponeamele dentare, în special T. dentium, și, de asemenea, de T. buccalis. Primul dintre ele este, în general, greu de distins de sifilitic. Adevărat, este mai scurt, are 4-8 bucle ascuțite, nu există mișcare pendulului. T. buccalis este mai gros, are bucle inițiale grosiere și mișcare neregulată În caz de îndoială, trebuie avut în vedere că toate treponemele saprofite, spre deosebire de cele palide, se colorează bine cu coloranți anilină. Nu pătrund în ganglionii limfatici, deci studiul puncției are o mare valoare diagnostică. Detectarea treponemelor tipice în punctatul ganglionilor limfatici confirmă fără îndoială diagnosticul de sifilis. Avantajele sale constau în faptul că materialul este examinat rapid, iar morfologia treponemelor în stare de viață este cea mai caracteristică. Frotiurile de cerneală conform metodei Burri nu se mai folosesc.Dacă nu este posibilă efectuarea unui studiu în câmpul întunecat al vederii, se pot folosi diverse metode de colorare. Treponemul palid nu percepe bine coloranții cu anilină. Dintre numeroasele metode de colorare propuse, cele mai bune rezultate se obțin prin utilizarea colorației Romanovkim-Giemsa. Frotiurile realizate se fixează cu alcool metilic sau în amestecul lui Nikiforov. Rezultatele de claritate se obțin atunci când pata Romanovsky-Giemsa este turnată în preparat. Pentru a face acest lucru, fragmente de chibrituri sunt așezate într-o cutie Petri, pe ele se pune o lamă cu un frotiu în jos și se toarnă colorantul până când udă frotiul. Timpul de colorare este dublat. La microscopie, treponeamele pal au o culoare roz pal, în timp ce alte tipuri de treponeamele devin albastre sau albastru-violet.Se poate folosi și metoda de argint a lui Morozov. Treponemele își păstrează complet caracteristicile morfologice și arată maro sau aproape negru la microscop. Dar preparatele placate cu argint nu se păstrează mult timp. Recent, metodele de colorare a treponemului sunt rar utilizate.Dacă sifilisul este tratat cu medicamente chimioterapice, este aproape imposibil să se identifice agentul patogen în materiale patologice chiar și cu ajutorul unui câmp vizual întunecat. La primirea unei analize negative, aceasta trebuie repetată.

Diagnosticul serologic al sifilisului

La efectuarea reacțiilor serologice, se folosesc acum următoarele metode de cercetare unificate în Ucraina: reacția de fixare a complementului (RSC), imunofluorescența (RIF), imobilizarea treponemului (PIT), microreacția de precipitare (MPR) și imunotestul enzimatic (ELISA). Timp de mulți ani, reacția principală și cea mai comună a fost considerată a fi reacția de fixare a complementului sau reacția Wasserman (РВ, RW). Pentru formularea sa, serul de sânge al unui pacient cu sifilis și lichid cefalorahidian este utilizat în caz de afectare a sistemului nervos.Metoda de stabilire a reacției Wasserman nu diferă de tehnica de efectuare a RSC. Singura diferență este că pentru RO se folosește nu doar un antigen treponemic specific, ci și un antigen cardiolipin nespecific.Se prelevează 5-10 ml de sânge din vena cubitală pe stomacul gol sau nu mai devreme de 6 ore după masă. Nu se poate lua sânge de la pacientele cu febră, după consumul de alcool și alimente grase, de la femeile însărcinate cu 10 zile înainte de naștere și de la femeile aflate în travaliu. Serul extras din sânge este încălzit la o temperatură de 56 ° C timp de 30 de minute pentru a-și inactiva propriul complement. RO este setat neapărat cu două antigene: specific și nespecific Antigenul treponemic ecografic specific este preparat din culturi de treponem pal (tulpina Reiter) crescute în eprubete și expuse la ultrasunete. Este produs sub formă de pulbere liofilizată. Antigenul cardiolipin nespecific se prepară prin extracția alcoolică a lipidelor dintr-o inimă de bovină și purificarea din amestecuri de balast, ambalate în fiole de 2 ml. Pentru a introduce antigenul în RO, acesta este titrat conform acestor instrucțiuni. Imediat înainte de configurarea RV, titrarea complementului și a serului hemolitic se efectuează conform aceleiași scheme ca în RSK. Reacția Wasserman este pusă atât calitativ, cât și cantitativ. O reacție calitativă se efectuează în trei eprubete cu două antigene conform schemei obișnuite.Rezultatele reacției sunt evaluate conform unui sistem 4 plus: o reacție pozitivă - când există o întârziere completă sau semnificativă a hemolizei (4 +, 3). +); reacție slab pozitivă - întârziere parțială a hemolizei (2 +); reacție îndoielnică - o ușoară întârziere a hemolizei (1 +). În cazul hemolizei complete, RO este considerat negativ.Fiecare ser care a dat o reacție calitativă pozitivă trebuie investigat și printr-o metodă cantitativă cu diluția sa secvențială de la 1:10 la 1:640.care vine complet (4+) sau ecuson. (3 +) întârziere a hemolizei. Metoda cantitativă de stabilire a RO este importantă pentru evaluarea eficacității tratamentului sifilisului. O scădere rapidă a titrului de reagină indică o terapie de succes. Dacă titrul seric nu scade mult timp, aceasta indică o lipsă de eficacitate a medicamentelor utilizate și necesitatea schimbării tacticii de tratament.Cu pylori pentru sifilisul primar seronegativ sau latent, terțiar sau congenital, se recomandă să se pună reacţia Wasserman la frig după aceeaşi schemă. Dacă se suspectează neurosifilis, RO se efectuează cu lichid cefalorahidian, care este inactivat deoarece nu conține propriul complement. Lichidul cefalorahidian nediluat este introdus în reacție și în diluții de 1:2 și 1:5.Reacția Wasserman devine pozitivă la 2-3 săptămâni după apariția unui șancru dur. În sifilisul secundar, este pozitiv în 100% din cazuri, în terțiar - în 75. În plus, în complexul de reacții serologice (CSR), se folosește ca test de screening o reacție de microprecipitare cu plasmă sanguină sau ser inactivat.

Microreacția de precipitare

Microreacția de precipitare pusă cu antigen cardiolipin. Principiul reacției este că atunci când se adaugă o emulsie de antigen de cardiolipină în plasma sanguină sau serul unui pacient cu sifilis, se formează un precipitat (complex antigen-anticorp), care precipită sub formă de fulgi albi. Se utilizează această tehnică: se pipetează trei picături de plasmă (sau ser inactivat) în godeul plăcii, apoi se adaugă o picătură de emulsie a antigenului cardiolipin standard. Componentele de reacție se amestecă prin agitarea plăcii timp de 5 minute, după care se adaugă trei picături de soluție de clorură de sodiu 0,9% și se lasă la temperatura camerei pentru încă 5 minute. Control obligatoriu cu ser de sânge slab pozitiv. Rezultatele sunt evaluate cu ochiul liber pe o sursă de lumină artificială. Când apar fulgi mari în puț, reacția este considerată pozitivă (4 +, 3 +), medie și mică - ca slab pozitivă (2 +, 1 +). Dacă rezultatul este negativ, nu se formează nici un precipitat.Microreacția de precipitare poate fi efectuată și printr-o metodă cantitativă pentru a stabili titrul anticorpilor de precipitare și a evalua eficacitatea tratamentului pe această bază. Titruri MRP mai mari se obțin cu plasmă decât cu ser. În străinătate, un analog al MRP cu serul pacientului este VDRL (laborator general de cercetare a bolii), iar cu plasmă - RPR (reagină rapidă în plasmă).

Reacția de imunofluorescență (RIF)

Grupul de reacții specifice care sunt utilizate pe scară largă pentru diagnosticul serologic al sifilisului include o reacție indirectă de imunofluorescență. Ca antigen, folosește o suspensie de treponem patogen pal al tulpinii Nichols din parenchimul testiculelor de iepure în a 7-a zi după infecție. Reacția este pusă în două modificări: RIF-ABS și RIF-200. În prima variantă, se utilizează un sorbent de anticorpi (sonicat) - un antigen treponemic ultrasonic pentru CSC. Este produs de întreprinderea Kaunas pentru producția de preparate bacteriene (Lituania). Cu optiunea RIF-200, serul pacientului este diluat de 200 de ori pentru a elimina efectul anticorpilor antitreponemici de grup RIF-ABS este montat pe lame de sticla subtiri, bine degresate. Pe reversul ochelarilor cu un tăietor de sticlă sunt indicate 10 cercuri cu diametrul de 0,7 cm. În cerc, pe sticlă se aplică un antigen - o suspensie de treponeme palide - într-o asemenea cantitate încât există 50- 60 dintre ele în câmpul vizual. Frotiurile se usucă la aer, se fixează pe flacără și 10 min în acetonă. Adăugați 0,2 ml de sorbent (sonicat) și 0,5 ml de ser sanguin al pacientului într-un tub separat, amestecați bine. Amestecul se aplică pe un frotiu (antigen) astfel încât să-l acopere uniform, incubat timp de 30 de minute într-o cameră umedă la 3-7 ° C (faza II a reacției). După aceea, frotiul se spală cu tampon fosfat, se usucă și se aplică ser fluorescent antishobulin timp de 30 de minute, plasat într-o cameră umedă la 37 ° C (faza II). Medicamentul se spală din nou cu tampon fosfat, se usucă și se examinează la microscop fluorescent.Cu o reacție pozitivă, treponemele palide emit o lumină verde-aurie, cu una negativă, nu strălucesc.de 200 de ori cu tampon fosfat. Când se efectuează o reacție de imunofluorescență cu lichidul cefalorahidian al unui pacient cu sifilis al sistemului nervos, se utilizează RIF-c și RIF-10, adică lichidul este introdus în reacție neinactivat și diluat, sau diluat 1:10.

Testul de imobilizare cu Treponema pallidum (PIT)

Reacția de imobilizare a treponemelor palide (PIT) se bazează pe fenomenul de pierdere a mobilității lor în prezența anticorpilor antitreponemici imobilizatori ai serului și complementului pacientului în condiții de anaerobioză. Ca antigen în reacție, se utilizează o suspensie de treponeme palide din țesutul testicular al unui iepure infectat cu o tulpină de laborator de Nichols. Suspensia se diluează cu o soluție sterilă de clorură de sodiu 0,85% astfel încât să existe 10-15 spirochete în câmpul vizual.Pentru a efectua reacția, se utilizează 0,05 ml de ser sanguin al pacientului, 0,35 ml de antigen și 0,15 ml de complement. amestecat într-o eprubetă sterilă. Experiența este însoțită de controale ale serului, antigenului și complementului. Eprubetele sunt plasate într-un anaerostat, se creează condiții anaerobe și se țin într-un termostat timp de 18-20 ore la o temperatură de 35 ° C. Apoi se prepară căderi de presiune din fiecare tub, se numără cel puțin 25 de treponeme și câte dintre ei sunt mobili și câți sunt imobili. Procentul de imobilizare specifică a treponeamelor palide se calculează prin formula: x = (A-B) / B * 100, unde X este procentul de imobilizare, A este numărul de treponeame mobile din tubul de control, B este numărul de mobile. treponeame în eprubetă. Reacția este considerată pozitivă atunci când procentul de imobilizare este de 50 sau mai mult, slab pozitiv - de la 30 la 50, îndoielnic - de la 20 la 30 și negativ - de la 0 la 20. Ovchinnikov. Condițiile anaerobe ale experimentului sunt create prin plasarea amestecului de reacție (ser, antigen, complement) în melangeuri, ambele capete sunt închise cu un inel de cauciuc. Metoda melangerină face posibilă renunțarea la echipamente și aparate complexe pentru crearea anaerobiozei, dar dă rezultate care nu sunt disponibile metodei microaneurostatice clasice.Reacțiile de imobilizare a treponemului și de imunofluorescență sunt considerate cele mai specifice în diagnosticul serologic al sifilisului. Și totuși, PIT, în ciuda specificității sale, nu este recomandat pentru utilizare în practica largă din cauza complexității setării.

Imunotestul enzimatic (ELISA)

Testul imunosorbent enzimatic (ELISA) se efectuează atât cu un antigen kadriolipin (reacție nespecifică, de selecție) cât și treponemic (reacție specifică), care confirmă diagnosticul de sifilis Principiul metodei ELISA indirectă este că antigenul adsorbit pe fază solidă în godeurile serului de testare pentru tablete. Dacă conține anticorpi împotriva treponemului, se formează un complex antigen-anticorp (faza II). După spălarea anticorpilor nespecifici nelegați, în godeuri se adaugă ser antiglobulină conjugat cu o enzimă (cel mai adesea cu peroxidază de hrean). Conjugatul este atașat ferm de complexul antigen-anticorp (faza II) După spălarea conjugatului nelegat, se adaugă în godeuri substratul de colorare OFD - ortofenilendiamină (faza III). Reacția peroxidazei este oprită prin adăugarea de acid sulfuric. Pentru control se pun aceleasi probe cu ser pozitiv si evident negativ.Rezultatele analizei se iau in considerare cu ajutorul unui fotometru care determina densitatea optica in mod cu doua unde (492 nm si 620 nm). Pe lângă un fotometru, sunt necesare pipete automate cu unul și opt canale cu vârf de polipropilenă și seturi adecvate de sisteme de testare de diagnosticare pentru a stabili reacția anticorpilor enzimatici.Metoda ELISA este utilizată pe scară largă în diagnosticul serologic al sifilisului. Este la fel de eficient pentru depistarea bolii în perioada de incubație (1-2 săptămâni după infectare), cu manifestări clinice ale bolii și formelor sale latente. Foarte des, ELISA este utilizată în examinările de screening ale populației, în special la stațiile de transfuzie de sânge.În practica de laborator, uneori sunt folosite și reacția de adeziune imună (RIP) și reacția de hemaglutinare indirectă (RNHA). Primul dintre ele se bazează pe faptul că treponemele testiculare patogene ale tulpinii Nichols, atunci când sunt amestecate cu serul pacientului în prezența complementului și a eritrocitelor umane, aderă la suprafața globulelor roșii. RNHA este utilizat pe scară largă pentru diagnosticarea sifilisului datorită simplității sale metodologice. Devine pozitiv la trei săptămâni după infectare. Un rezultat pozitiv de reacție rămâne ani de zile după recuperare. Un analog al acestei reacții în străinătate este TRHA (hemoaglutinarea Treponema pallidum).
CATEGORII

ARTICOLE POPULARE

2022 "kingad.ru" - examinarea cu ultrasunete a organelor umane