Adauga la favorite

Taxonomie, pneumococ, metode de laborator gripale

MINISTERUL SĂNĂTĂȚII AL FEDERATIEI RUSE UNIVERSITATEA MEDICALĂ DE STAT KAZAN DEPARTAMENTUL DE MICROBIOLOGIE

PNEUMOCOCIS

Kazan 1999

UDC 576.851.21(07)

Publicat prin decizie a Consiliului Central Coordonator și Metodologic al Universității de Stat de Medicină din Kazan.

Compilat de:

(Șeful Departamentului de Microbiologie, Doctor în Științe Medicale, Profesor O.K. Pozdeev, asistent al Departamentului de Microbiologie, Ph.D., E.R. Fedorova.

Recenzători:

Șef al Departamentului de Epidemiologie, Universitatea de Medicină de Stat din Kazan, doctor în științe medicale, profesor asociat M.Sh. Shafeev, șeful Departamentului de Epidemiologie al Academiei Medicale de Stat din Kazan, doctor în științe medicale, profesorul V.E. Grigoriev.

Pneumococi /O.K. Pozdeev, E.R. Fedorov-Kazan: KSMU, 1999. - 14 s.

Prin copierea, distribuirea, publicarea textului sau a unei părți din acesta pe resursele dumneavoastră, vă asumați responsabilitatea în conformitate cu legislația în vigoare.

Exclusiv pentru utilizarea operei în scopuri personale (articolul 18, articolul 26 din Legea Federației Ruse „Cu privire la drepturile de autor și drepturile conexe”). Reproducerea comercială este interzisă.

Universitatea Medicală de Stat din Kazan, 1999

Pneumococul (Streptococcus pneumoniae) a fost identificat pentru prima dată de Pasteur (1881) în timp ce lucra la un vaccin antirabic și inițial l-a considerat agentul cauzal al rabiei. Rolul etiologic al microorganismului în dezvoltarea pneumoniei la om a fost dovedit de Frenkel și Weichselbaum (1884). Bacteriile colonizează organismele umane și animale și sunt incluse în grupul așa-numitelor streptococi „orale”. Sunt principalii agenți cauzali ai pneumoniei, pot provoca, de asemenea, pleurezie, meningită, ulcere târâtoare ale corneei, inflamație purulentă a urechii medii, afecțiuni septice și alte boli. În ediția a IX-a a Burgey Bacteria Key (1994), pneumococii sunt incluși în al 17-lea grup „coci gram-pozitivi”.

Epidemiologia leziunilor. Pneumococul este unul dintre principalii agenți cauzali ai pneumoniei bacteriene înregistrate în afara spitalelor (2-4 cazuri la 1000 de persoane); Cel puțin 500.000 de cazuri de pneumonie pneumococică sunt observate anual în lume (valoarea reală este mult mai mare). Copiii și bătrânii sunt cei mai susceptibili la infecție. Rezervorul infecției sunt pacienții și purtătorii (20-50% dintre copiii preșcolari și 20-25% dintre adulți); calea principală de transmitere este contactul; în timpul focarelor tot în aer. Incidenta maxima apare in sezonul rece. În marea majoritate a cazurilor, formele clinice de infecție se dezvoltă atunci când rezistența organismului este afectată (inclusiv din cauza stresului la frig), precum și pe fondul altor patologii (anemie falciformă, boala Hodgkin, infecția cu HIV, mielom, diabet zaharat). , afecțiuni după splenectomie etc.) sau cu alcoolism. Variantele 1, 2 și 3 joacă cea mai mare semnificație epidemiologică în patologia la adulți; la copii - 1, 2, 3 și 14 opțiuni. Virulența serovariilor în ordine descrescătoare - 3, 1, 2, 5, 7 și 8 opțiuni. Șoarecii albi sunt sensibili la pneumococi (atunci când sunt infectați, mor din cauza septicemiei într-o zi), viței, miei, purcei, câini și maimuțe.

Morfologie. Pneumococii sunt imobili, nu formează spori, au o formă ușor alungită, care seamănă cu contururile flăcării unei lumânări. În frotiurile din material clinic, acestea sunt aranjate în perechi, fiecare fiind înconjurată de o capsulă groasă. În frotiurile din mediile de cultură, acestea pot fi localizate în lanțuri scurte și pot fi mai rotunjite. Pe medii simple, ele formează o capsulă subțire; dezvoltarea sa este stimulată prin introducerea de sânge, ser sau lichid ascitic. Formarea capsulelor este cea mai pronunțată la bacteriile de tip III. Când este aranjată în lanțuri, capsula poate fi comună.

proprietăți culturale. Pneumococi aerobi sau anaerobi facultativi; în timpul cultivării se preferă condiţiile capnofile (5-10% CO2). Chemoorganogrophy și cresc bine pe medii de sânge sau ser, suplimentat prin adăugarea de glucoză 0,1%. Pot crește în intervalul de temperatură de 28-42 °C, optimul este de 37 °C. pH optim -7,6-7,8. Pe medii dense, formează colonii delicate, translucide, bine definite, cu un diametru de aproximativ 1 mm. Uneori pot fi plate cu o adâncitură centrală; ca și alți streptococi, coloniile nu se unesc niciodată

între ei. Pe agar-sânge formează mici colonii translucide de culoare gri-verzuie. Centrul coloniilor este mai întunecat, periferia este mai deschisă. Sub colonie și de-a lungul periferiei acesteia, o zonă de a-hemoliză este vizibilă sub forma unei zone decolorate verzui (datorită tranziției hemoglobinei la methemoglobină). Coloniile de pneumococ de tip III au adesea o consistență mucoasă, dimensiunea lor este de până la 2 mm. Sunt neclare, pot fuziona unul cu celălalt. Ele formează forme S și R de colonii. În timpul tranziției de la forma S la forma R, ei își pierd capacitatea de a sintetiza o capsulă. Pe medii lichide cu ser și glucoză 0,2% dau o turbiditate uniformă și un mic precipitat floculant. Cu cultivarea prelungită, sedimentul crește.

Durabilitate. Pneumococii aparțin grupului de microorganisme instabile. În sputa uscată, acestea persistă până la două luni. Poate fi păstrat timp îndelungat la temperaturi scăzute; la o temperatură de 60 ° C, ei mor în 3-5 minute. O soluție de 3% de acid carbolic îi ucide în 1-2 minute. Optochina (la o concentrație de 1:100.000) și bila sunt dăunătoare pneumococilor, care sunt folosite pentru identificarea bacteriilor.

Pneumococii diferă de alte microorganisme printr-o serie de proprietăți (Tabelul 1).

Tabelul 1 Proprietățile biochimice ale pneumococilor

Substratul de testare	Rezultat	Substratul de testare	Rezultat
Creștere la 100°C

		Rafinoza
Mediu cu 6,5% Nad

a-hemoliza
B-hemoliza		Trehaloză
		Fosfatază
hipurat		β-galactozidaza


Glicerol

Denumiri: "+" - 90% sau mai multe tulpini sunt pozitive; (+) - 80-89% dintre tulpini sunt pozitive; d - 21-79% dintre tulpini sunt pozitive; (-) - 11-20% dintre tulpini sunt pozitive; „- - 90% sau mai multe dintre tulpini sunt negative.

Structura antigenică. La pneumococi s-au găsit mai multe tipuri de antigene: un polizaharid, antigen 0-somatic situat în peretele celular; antigenele K capsulare polizaharide și proteina M. Antigenul somatic polizaharidic este similar cu substanța C a altor streptococi. Relația determină asemănarea structurii chimice a acizilor ributeicoici asociați cu fosfatul de colină. Antigenele capsulare au și natură polizaharidă, constând din monozaharide repetate în diverse combinații: D-glucoză, D-galactoză și L-ramnoză. Conform structurii antigenelor capsulare, pneumococii sunt împărțiți în 84 de serovari. Trebuie amintit că antigenele capsulare reacționează încrucișat cu antiserurile la antigenele streptococilor din grupele A și B, precum și cu serurile la antigenele Klebsiella și Escherichia. În timpul tranziției de la forma S la forma R, antigenele capsulare se pierd. Pentru serotiparea pneumococică se produc seruri de grup, indicate prin litere latine (A, B, C, D etc.) și serovariante, indicate cu cifre romane. Serul aglutinant III nu este inclus în amestecurile de ser. Este eliberat separat și nu poate fi crescut. La om, pneumococii de serotipuri I, II și III sunt cel mai adesea izolați. Sunt cele mai virulente pentru oameni, astfel încât reacția de aglutinare este stabilită inițial folosind antiseruri pentru aceste variante. Dacă rezultatul este negativ, reacția de aglutinare se pune cu un amestec de seruri A, B, C etc. (până se obține un rezultat pozitiv), apoi cu antiseruri separate. Pentru o identificare mai rapidă a serovariilor, se utilizează reacția Neufeld (umflarea imună a capsulei). Metoda se bazează pe capacitatea capsulelor pneumococice de a crește în volum în prezența antiserului omolog, care este înregistrat prin microscopie optică luminoasă. Polizaharidele capsulare au proprietăți sensibilizante, manifestate prin dezvoltarea unei reacții de hipersensibilitate de tip întârziat, detectată cu ajutorul testelor cutanate.

factori de patogenitate. Factorul principal este capsula, care protejează bacteriile de potențialul microbicid al fagocitelor și le îndepărtează de acțiunea opsoninelor. Tulpinile neîncapsulate sunt practic avirulente și sunt rare. Majoritatea grupului de AT anti-pneumococice sunt capsule AT la Ag. O funcție importantă a capsulei și a proteinei M este, de asemenea, de a asigura aderența la mucoasă. Substanța-C, care interacționează în mod specific cu proteina C-reactivă, este esențială. Consecința unui astfel de răspuns este activarea cascadei complementare și eliberarea de mediatori ai fazei acute a inflamației; acumularea lor în ţesutul pulmonar stimulează migrarea fagocitelor polimorfonucleare. Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o încălcare a homeostaziei țesutului pulmonar și de hepatizarea acestuia. Pneumococii produc endotoxină, a- și b-hemolisine (pneumolizine), leucocidină. a-pneumolysin este o proteină termolabilă capabilă să neutralizeze 0-streptolizina,

substanță eritrogenă, neuraminidaza. De asemenea, pneumococii sintetizează o serie de enzime care contribuie la patogeneza leziunilor - muramidaza, hialuronidaza (promovează răspândirea microorganismelor în țesuturi), peptidaza (cliva IgA).

Patogeneza leziunilor. Biotopul pneumococilor este tractul respirator superior. Patogenia majorității pneumoniilor implică aspirarea salivei care conține S. pneumoniae și intrarea bacteriilor în căile respiratorii inferioare. Încălcarea mecanismelor de drenaj de protecție – șocul tusei și clearance-ul mucociliar este esențială. La adulți se observă mai des leziunile lobare ale plămânilor, la copii și vârstnici predomină leziunile peribronșice sau focale. Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o încălcare a homeostaziei țesutului pulmonar și de hepatizarea acestuia. Infecțiile cu serovarul 3 cel mai virulent pot fi însoțite de formarea de cavități în parenchimul pulmonar. Din focarul primar, agentul patogen poate pătrunde în cavitatea pleurală și pericard sau poate disemina pe cale hematogenă și poate provoca meningită, endocardită și leziuni articulare.

Manifestari clinice. Pneumonia pneumococică clasică începe brusc; observați creșterea temperaturii corpului, tuse productivă și dureri în piept. La persoanele debilitate și la vârstnici, boala se dezvoltă lent, cu o ușoară febră, tulburări de conștiență și semne de insuficiență cardiacă pulmonară. Meningita streptococică este înregistrată la toate grupele de vârstă; se caracterizează printr-un debut violent cu creșterea temperaturii corpului, rigiditate a mușchilor gâtului, dureri de cap, greață și vărsături. Leziunile vasculare meningiene sunt adesea însoțite de pierderea conștienței; în rândul copiilor și la bătrânețe, mortalitatea poate ajunge la 80%. Leziunile pneumococice hematogene, precum și sinuzita, mastoidita, otita medie, endocardita și peritonita, sunt destul de frecvente la persoanele imunodeprimate (de exemplu, infectate cu HIV) sau la pacienții cu splenectomie. După boală, se dezvoltă o imunitate instabilă, care este de natură specifică tipului și datorită apariției anticorpilor împotriva polizaharidei capsulare tipice.

Tratament. Baza terapiei pentru infecția pneumococică este antibioticele - penicilină, tetraciclină, levomicetina, vancomicina, rifampicina, ceftriaxonă.

Prevenirea. Prevenirea nespecifică a infecțiilor pneumococice are ca scop identificarea pacienților și purtătorilor cu tratamentul ulterior. Pentru prevenirea specifică a infecției, copiii cu vârsta peste doi ani, adulții cu risc, precum și persoanele sănătoase în timpul izbucnirii bolii sunt vaccinați cu vaccinul polizaharidic polivalent Pneumovex 23. Medicamentul conține 23 de antigene polizaharide capsulare pneumococice (1, 2, 3, 4, 5, 6B 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 1-9F, 1, 2, 1 22F, 23F, 33F). Antigene

pneumococii au fost obținuți din 90% din tulpinile izolate din sângele pacienților cu infecție pneumococică invazivă din SUA și corespunzătoare tulpinilor întâlnite în Rusia. Imunizarea se efectuează de două ori cu un interval de 5-8 ani.

După vaccinare, se creează imunitatea artificială, activă, specifică tipului.

Diagnosticul de laborator. „Standardul de aur” este izolarea agentului patogen. Trebuie amintit că materialul trebuie examinat rapid, deoarece. bacteriile sunt predispuse la autoliză rapidă datorită activității enzimelor intracelulare. Materialul pentru studiu este spută, revărsare pleurală și alte exsudate, lichid cefalorahidian, sânge, mucus din nas și gât, secreții din ulcere oculare, scurgeri din ureche, urină, bucăți de organe (în caz de deces al pacientului) . Un răspuns semnal la infecția pneumococică poate fi emis dacă neutrofile și diplococi lanceolați Gram-pozitivi sunt detectați în frotiurile de spută (cel puțin 10 pe câmp vizual). În caz contrar, recurgeți la izolarea agentului patogen.

Prima etapă a studiului. Materialul patologic este supus unei bacterioscopii preliminare (cu excepția sângelui). Sputa se pune într-o cutie Petri sterilă, se spală, se captează un nod purulent-mucos cu o ansă, se freacă pe o lamă de sticlă, se usucă și se colorează conform Gram. În frotiu se găsesc coci gram-pozitivi lanceolati sau de formă ovală înconjurați de o capsulă (formarea capsulei se observă numai la pneumococii izolați de la animalele bolnave și infectate). Identificarea capsulelor pneumococice poate fi efectuată folosind metoda Burri-Gins. Inocularea materialului patologic se efectuează pe 5-10% agar sânge sau ser și mediu de îmbogățire (8-10% bulion de ser). Dacă se suspectează sepsis pneumococic, se inoculează 5-10 ml din sângele pacientului în 45-90 ml bulion de ser. Lichidul cefalorahidian, dacă este limpede, este centrifugat și câteva picături din sediment sunt inoculate pe medii nutritive. Ca mediu de îmbogățire se utilizează agar-seric semi-lichid. Culturile sunt incubate la 37°C timp de 24 de ore. Cea mai bună metodă pentru izolarea unei culturi pure de pneumococi este de a infecta șoarecii albi cu material patologic. Sputa, spălată într-o cutie Petri cu soluție salină sterilă, este măcinată într-un mojar steril cu un pistil steril sau sticlă spartă cu adăugarea de soluție salină în proporție de 1:2-1:5. Suspensia este decantată, supernatantul în cantitate de 0,5-1 ml este administrat la șoareci albi intraperitoneal. În prezența pneumococilor în material, șoarecii mor în 72 de ore. În frotiurile de organe și sânge se găsesc pneumococi tipici. Organele și sângele sunt, de asemenea, cultivate pe bulion de ser și pe vase Petri cu agar sânge sau ser.

A doua etapă a studiului. Studiați natura creșterii pe medii nutritive. Pe agar-sânge, coloniile de pneumococ sunt mici, rotunde, cu netede

margini, fragede, înconjurate de o zonă de înverzire a mediului (care amintește foarte mult de creșterea streptococilor verzi). Pe agar seric, coloniile sunt fragede, translucide și transparente. Cu bacterioscopie a frotiurilor colorate cu Gram. găsiți diplococi Gram pozitivi fără capsule. După bacterioscopie, coloniile suspectate de pneumococi sunt subcultivate pe ser oblic sau agar cu sânge sau bulion de ser. Microscopia frotiurilor din mediul de îmbogățire, împreună cu diverse microflore, pot dezvălui coci gram-pozitivi dispuși în perechi sau lanțuri scurte. Materialul din mediul de îmbogățire este transferat în medii nutritive solide. Culturile sunt incubate la 37°C timp de 24 de ore.

A treia etapă a studiului. Pe agar cu sânge înclinat, pneumococii formează o acoperire delicată, subțire, translucidă. Pe bulionul de zer, pneumococii provoacă turbiditate și sedimente ușoare. În frotiurile din medii de cultură solide, pneumococii pot avea un aspect diferit. Împreună cu diplococii de formă alungită cu capete exterioare ascuțite asemănătoare cu o flacără de lumânare, există celule cu forma corectă ovală și rotundă. În cultura bulionului, pneumococii sunt adesea aranjați în lanțuri. Pe baza proprietăților morfologice și culturale ale pneumococilor, este dificil să se distingă de streptococii viridescenți, prin urmare, a fost propus un set de teste speciale pentru diferențierea lor:

Solubilitate în bilă (testul dezoxicolat);

Capacitatea de a descompune inulina;

Sensibilitate la optochin;

Reacție de aglutinare cu seruri specifice anti-pneumococice;

Abilitatea de a degrada glucoza, maltoza, zaharoza, lactoza, manitolul, sorbitolul si salicina.

Cele mai accesibile metode care diferențiază pneumococii de alți streptococi sunt un test cu optochin (inhibă creșterea acestora); din streptococii verzi se disting prin capacitatea de a fermenta inulină, precum și prin sensibilitatea la bilă.

Testul dezoxicolat. După o bacterioscopie preliminară, într-o eprubetă se adaugă 10 picături de cultură pură izolată (de preferință bulion) cu 5 picături de bilă bovină sterilă. Martorul este o cultură introdusă într-o eprubetă cu 5 picături de ser fiziologic. După 30-60 de minute de incubare la 37 °C, se observă liza completă a culturii sub formă de limpezire în eprubetă cu bilă, amestecul rămâne tulbure în tubul de control. Trebuie amintit că culturile avirulente de pneumococ sunt rezistente la bilă.

Rezistența biliară poate fi testată și prin inoculare în bulion de bilă 10%. Materialul de testat este adăugat în mediu, în timp ce bulionul devine tulbure. După o incubare de 24 de ore la 37°C, prezența pneumococilor va fi indicată prin curățarea bulionului ca urmare a lizei bacteriene.

Puteți folosi și discuri înmuiate într-o soluție de bilă 20%. Discurile sunt plasate pe cultura crescută în vas și incubate timp de 1-2 ore la 37°C. În prezența pneumococilor, coloniile lizează în jurul discului la o distanță de 1-2 mm.

Testul la inulină. Cultura de pneumococ este însămânțată pe mediu cu inulină. Pentru a face acest lucru, se adaugă 200 ml de apă distilată sterilă, 18 ml de tinctură de turnesol și 3 g de inulină la 100 ml de ser bovin încălzit la 56 ° C timp de 30 de minute, sterilizat cu abur curgător timp de 30 de minute. Culturile sunt incubate la 37°C timp de 24 de ore. Pneumococul descompune inulina, determinând mediul să devină roșu. Streptococul verde nu provoacă înroșirea mediului.

Testați cu optochin. Cultura pneumococică de test este inoculată în bulion de ser cu optochin la o diluție de 1:100.000 sau 1:200.000. Pneumococul nu crește într-un astfel de mediu. De asemenea, este posibil să se determine sensibilitatea la optochin prin inoculare pe agar sânge 10% care conține optochin la o diluție de 1:50.000. Controlul este cultura pe agar-sânge. Pneumococii nu cresc pe mediul cu Optochin; creșterea pneumococilor se observă pe mediul de control. Puteți folosi discuri impregnate cu 6 μg de optochin, care se aplică după inoculare pe suprafața mediului. La pneumococi, în jurul discului se formează o zonă de inhibare a creșterii de cel puțin 18 mm în diametru.

Test de virulență. Cultura zilnică de pneumococ crescut pe bulion de zer se diluează cu 1% apă peptonă sterilă (pH - 7,6) sau bulion ușor alcalin la 1:10. Cultura diluată se administrează intraperitoneal la șoareci albi cu o greutate de 16-20 g într-un volum de 0,5 ml și se observă timp de 72 de ore. Din organele șoarecelui mort, se fac inoculări pe medii nutritive și se examinează microscopic amprentele frotiurilor. Culturile foarte virulente includ pneumococii, care provoacă moartea șoarecilor după introducerea culturii la o diluție de 1:10. Culturile avirulente nu provoacă moartea la șoareci.

Serotiparea pneumococilor. Cultura de 18 ore este testată în reacția de microaglutinare Sabin. Pe o lamă de sticlă se aplică 4 picături de cultură pneumococică. La 1 picătură se adaugă o picătură de ser antipneumococic de tip 1, la al 2-lea - ser de tip II, la a 3-a - ser - 111, la a 4-a - o picătură de ser normal. Amestecurile de pe sticlă sunt amestecate cu o buclă și examinate cu lupă sau la microscop la mărire mică. Într-un caz pozitiv, se observă aglutinarea într-una dintre primele trei picături. Tipul de pneumococ se determină în reacția de aglutinare cu seruri de aglutinare specifice primelor trei tipuri fixe. Culturile care nu se aglutinează cu aceste tipuri de seruri sunt atribuite grupului X. Reacția este stabilită după cum urmează. Se toarnă cultura de bulion de 18 ore în 0,5 ml în eprubete. Apoi adăugați un volum egal de ser, diluat cu ser fiziologic într-un raport de 1:5. Martorii sunt 2 eprubete, dintre care una conține cultura de testare amestecată cu

ser normal de iepure, iar celălalt - doar cultura de testare. Conținutul eprubetelor se agită bine și se pune timp de 2 ore într-un termostat la o temperatură de 37 °C, după care se efectuează un calcul preliminar al reacției. Rezultatele finale se notează după o incubare suplimentară la temperatura camerei timp de 20 de ore. Aglutinarea este punctată cu patru plus dacă conținutul tuburilor este complet clar și cultura de aglutinare este o peliculă densă care nu se rupe la agitare; cu trei plusuri dacă, cu clarificarea completă a conținutului tubului, cultura aglutinantă se sparge ușor în bucăți; două plusuri - dacă iluminarea nu are loc, particulele unei culturi aglutinate sunt clar vizibile cu ochiul liber în conținutul tulbure al tubului; cu aglutinare cu un plus într-o eprubetă se găsește un amestec cu granulație fină de pneumococi lipiți. Cu o reacție negativă vizibilă pentru ochi, aglutinarea nu se observă;

conţinutul eprubetelor după agitare este o turbiditate uniformă.

Tiparea pneumococilor din grupul X se realizează folosind grupul

seruri care conțin un amestec de seruri aglutinante tipice luate

în volume egale. Următoarele seruri de grup sunt preparate de

amestecând volume egale de diagnostic standard nediluat

sera (Lund, 1960):

serovarii A -1, II, IV, V, XVIII;

serovariile B - VI, VIII, XIX;

C - VII, XX. serovare XXIV, XXXI, XL;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII serovare;

E - X, XXI. XXXIII, XXXIX serovare;

F-XII. XVII. serovarii XXII, XXXVII, XXXII, XLI;

G - XIII, XXV. serovare XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII;

J-XLIII. Serovarii XLIV, XLV, XLVI.

Serul aglutinant de tip III se foloseste per se (fara amestecare cu alte seruri tipice) datorita dificultatii de a-l obtine intr-un titru suficient de mare. Tiparea se realizează în două etape: mai întâi cu ajutorul serurilor de grup și apoi cu serurile individuale ale grupului cu care s-a obținut o reacție pozitivă. Serotipizarea pneumococică este utilizată în primul rând pentru studii epidemiologice ale rezultatelor seroterapiei specifice și seroprofilaxiei.

Microaglutinarea pneumococilor prin metoda Sabin poate fi obținută prin amestecarea serurilor antipneumococice cu exudatul din cavitatea abdominală a unui șoarece infectat cu sputa pacientului. Deja la patru ore după infecție, în exudat se găsește o cultură pură de pneumococi, dând aglutinare Sabin pozitivă.

Metode accelerate pentru detectarea și tiparea pneumococilor. 1. Metoda Neufeld sau fenomenul de umflare a capsulei pneumococice. Un bulgăre de sputa proaspăt izolată a pacientului se aplică la trei

lamele, la fiecare se adauga cate o picatura de ser specific antipneumococic nediluat (tipurile 1, II, III) si o picatura de albastru Loeffler. Picăturile sunt bine amestecate, acoperite cu o lamă de sticlă cu o gaură unsă pe margini cu vaselină. După două minute, picăturile suspendate sunt examinate la microscop cu sistem de imersie. Într-un caz pozitiv, se observă o creștere bruscă a capsulelor pneumococice. Cu un rezultat negativ, capsulele sunt cu greu prețuite. Reacția de umflare este specifică și nu dă un rezultat pozitiv cu alte bacterii capsulare. Nu îl folosesc pentru studiul sputei de la pacienții tratați cu sulfonamide și antibiotice, tk. în acest caz se pot izola pneumococii capsulari.

2. Metoda de precipitare. 5-10 ml de spută se fierb într-o baie de apă până se obține un cheag dens. Cheagul se triturează și se adaugă o cantitate mică de ser fiziologic, se fierbe din nou câteva minute pentru a extrage polizaharida specifică din pneumococi. Suspensia este centrifugată, cu lichidul limpede rezultat și serurile tipice specifice în tuburi de precipitare, se efectuează o reacție de precipitare inelară. Apariția unui inel la interfața dintre lichide indică un rezultat pozitiv.

3. Determinarea capsulelor pneumococice după Burri. O picătură din materialul de testat și o picătură de cerneală sunt aplicate la capătul lamei de sticlă. Amestecul se agită și se face un frotiu, se usucă la aer și, fără fixare, microscopic. Fundalul medicamentului este fumuriu închis, corpurile microbiene și capsulele lor nu sunt pătate. Preparatul făcut conform lui Burri poate fi fixat cu amestecul lui Nikiforov, spălat cu apă, colorat cu Tsilia fuchsin, diluat 1:3 timp de 3-5 minute. Pe fundalul întunecat al frotiului ies în evidență capsule nepătate, în interiorul cărora există bacterii de culoare purpurie strălucitoare (metoda Gins).

scarlatină provoacă diferite serotipuri de streptococi beta-hemolitici cu antigen M și producând eritrogenină (streptococi toxigeni ai serogrupului A) - (Streptococcus pyogenes). În absența imunității antitoxice, apare scarlatina, în prezența anginei.

Tabloul clinic

 Intoxicatii – febra, stare generala de rau, dureri de cap.

 Erupție cutanată scarlatina - punctată fin, cu presiune moderată cu o spatulă de sticlă, petele sunt mai clar vizibile. Când este apăsată mai tare, erupția lasă loc unei nuanțe de piele auriu-gălbui. Apare in a 1-3 zi de boala si este localizata mai ales pe obraji, in zona inghinala, pe lateralele corpului. Pielea triunghiului nazolabial rămâne palidă și fără erupții cutanate. Erupția durează de obicei 3-7 zile, apoi dispare, fără a lăsa pigmentare. Caracterizat printr-o îngroșare a erupției cutanate pe pliurile membrelor - zone axilare, cotului, poplitee.

 Limba stacojie - în a 2-4-a zi de boală, limba pacientului devine pronunțată granulată, roșu aprins, așa-numita limbă „crimson”.

 Angina este un simptom constant al scarlatinei. Poate fi mai severă decât durerea obișnuită în gât.

 Peelingul pielii - apare după dispariția erupției cutanate (după 14 zile de la debutul bolii): în zona palmelor și picioarelor este lamelară mare, începând de la vârful degetelor; pe trunchi, gât, auriculare peeling solzos.

Pneumococi, taxonomie. Proprietăți. Grupuri serologice. Caracteristici distinctive față de alți streptococi. Boli provocate. Principii și metode de diagnostic de laborator.

Morfologie și proprietăți biologice. Pneumococii (Streptococcus pneumoniae) sunt coci perechi de formă ovală, ușor alungită, lanceolate, care seamănă cu o flacără de lumânare. De asemenea, pot fi localizați în lanțuri scurte, asemănătoare cu streptococii. Sunt immobile, nu formează spori și sunt Gram-pozitive.
Sunt cultivate pe medii cu adaos de proteine: sânge, ser, cu lichid ascitic. Pe agar-sânge, coloniile de pneumococ sunt mici, asemănătoare cu picăturile de rouă, transparente în lumina transmisă, cu un centru deprimat, înconjurate de o zonă de hemoliză incompletă, o nuanță verzuie, asemănătoare cu coloniile de streptococ viridescent. Pe medii lichide, ele dau o turbiditate blândă, formând uneori un precipitat. Sunt destul de active din punct de vedere biochimic: descompun glucoza, lactoza, maltoza, inulina și alți carbohidrați cu formarea de acid, nu lichefiază gelatina, nu formează indol. Divizarea inulinei este o caracteristică de diagnostic diferențial care ajută la distingerea pneumococilor de streptococi, care nu descompun inulina. O caracteristică distinctivă importantă este capacitatea pneumococilor de a se dizolva în bilă, în timp ce streptococii sunt bine conservați în ea.

Patogenie și clinică. Pneumococii sunt agenții cauzali ai pneumoniei lobare la om. De asemenea, pot provoca ulcere corneene târâtoare, cataruri ale căilor respiratorii superioare, meningită, endocardită, leziuni articulare și alte boli.

După boală, imunitatea este tensionată scăzută, pe termen scurt, specifică tipului.
Diagnosticul microbiologic. Materialul pentru studiu este spută, sânge, tampon de gât, lichid cefalorahidian. Datorită faptului că pneumococul moare rapid, materialul patologic trebuie livrat la laborator cât mai curând posibil pentru cercetare.

Meningococul. Taxonomie, proprietăți. Structura antigenică a meningococilor, clasificare. Patogenia infecției meningococice, manifestări clinice. Principii și metode de diagnostic microbiologic. Diferențierea agentului cauzal al infecției meningococice și a altor meningococi. profilaxie specifică.

N. meningitidis (meningococi).

Meningococul este agentul cauzal al infecției meningococice - o antroponoză severă cu transmitere prin picături în aer a agentului patogen. Sursa principală sunt transportatorii. Rezervorul natural este nazofaringele uman. Proprietățile morfologice, culturale și biochimice sunt similare cu gonococul. Diferențe - ei fermentează nu numai glucoza, ci și maltoza, produc hemolizină. Au o capsulă care este mai mare și are o structură diferită de cea a gonococului.

compoziție antigenică. Au patru sisteme antigenice principale.

1. Antigene polizaharide specifice grupului capsular. Tulpinile de serogrup A cauzează cel mai frecvent focare epidemice.

2. Antigenele proteice ale membranei exterioare. Conform acestor antigene, meningococii din serogrupurile B și C sunt împărțiți în clase și serotipuri.

3. Antigene specifice genului și speciei.

4. Antigene lipopolizaharide (8 tipuri). Au o toxicitate ridicată, provoacă un efect pirogenic.

factori de patogenitate. Factori de adeziune și colonizare - pili și proteine ale membranei externe. Factori de invaziune - hialuronidază și alte enzime produse (neuraminidază, proteaze, fibrinolizină). De mare importanță sunt antigenele polizaharide capsulare care protejează microorganismele de fagocitoză.

Imunitate rezistent, antimicrobian.

Diagnosticul de laborator pe baza bacterioscopiei, izolarea culturii si identificarea biochimica a acesteia, metode de diagnostic serologic. Inocularea materialului se efectuează pe medii nutritive solide și semi-lichide care conțin sânge, lichid ascitic și ser sanguin.

Culturile de oxidază pozitive sunt considerate a aparține genului Neisseria. Meningococul se caracterizează prin fermentarea glucozei și a maltozei. Apartenența la serogrup este determinată în testul de aglutinare (RA).

Gonococ. Taxonomie, proprietăți. Patogenia infecției gonococice, caracteristici ale imunității. Principii și metode de diagnostic de laborator al gonoreei acute și cronice, blennoreei. RSK Borde-Zhangu, scop, mecanism, contabilitate răspuns. Prevenirea blennoreei la nou-născuți. Prevenirea și tratamentul gonoreei. terapie specifică.

N.gonoree (gonococ).

Gonococul este agentul cauzal al gonoreei, o boală cu transmitere sexuală cu manifestări inflamatorii la nivelul tractului urinar. Substratul pentru colonizare este epiteliul uretrei, rectului, conjunctivei ochiului, faringelui, colului uterin, trompelor uterine și ovarului.

Diplococii se colorează bine cu albastru de metilen și alți coloranți de anilină, pleomorfi (polimorfism). Foarte capricios pentru condițiile de cultivare și mediile nutritive. Dintre carbohidrați, doar glucoza este fermentată.

Structura antigenică foarte variabil – caracterizat prin variații de fază (dispariția determinanților antigenici) și variații antigenice (modificări ale determinanților antigenici).

factori de patogenitate. Principalii factori sunt băut, cu ajutorul cărora gonococii efectuează aderența și colonizarea celulelor epiteliale ale membranei mucoase a tractului urinar și lipopolizaharidă(endotoxina, eliberată în timpul distrugerii gonococilor). Gonococii sintetizează IgAI, o protează care scindează IgA.

Diagnosticul de laborator. Diagnosticul bacterioscopic include colorarea Gram și albastru de metilen. Semnele tipice ale gonococului sunt colorarea gram-negativă, diplococii în formă de fasole, localizarea intracelulară.

Semănatul se realizează pe medii speciale (KDS-MPA din carne de iepure sau inimă de bovină cu ser, agar-ascita, agar sânge).

Agenți cauzatori ai infecției anaerobe gazoase. Taxonomie. Proprietăți. caracteristicile toxinelor. Patogenie, forme clinice. Principii și metode de diagnostic de laborator, medicamente pentru prevenirea și tratamentul specific.

Gangrena gazoasă este o infecție anaerobă policlostridiană (adică cauzată de diferite tipuri de clostridii) (traumatică) a plăgii. De importanță primordială este C.perfringens, mai rar C.novyi, precum și alte tipuri de clostridii în asocieri persistente între ele, cocii piogeni aerobi și bacteriile anaerobe putrefactive.

C.perfringens este un locuitor normal al intestinelor oamenilor și animalelor, intră în sol cu fecale. Este agentul cauzal al infecției rănilor - provoacă boală atunci când agentul patogen intră în rană în condiții anaerobe. Este extrem de invaziv și toxigen. Invazivitatea este asociată cu producția de hialuronidază și alte enzime care au un efect distructiv asupra mușchilor și țesuturilor conjunctive. Principal factor de patogenitate - exotoxina, care are efecte hemo-, necro-, neuro-, leucotoxice și letale. În conformitate cu specificitatea antigenică a exotoxinelor, acestea sunt izolate serotipuri patogen. Alături de gangrena gazoasă, C. perfringens provoacă toxiinfecții alimentare (au la bază acțiunea enterotoxinelor și necrotoxinelor).

Caracteristicile patogenezei. Spre deosebire de bolile purulente cauzate de aerobi, infecția anaerobă nu este dominată de inflamație, dar necroză, edem, formare de gaze în țesuturi, otrăvire cu toxine și produse de degradare a țesuturilor.

Imunitate- predominant antitoxic.

Diagnosticul de laborator include microscopia secreției plăgii, izolarea și identificarea agentului patogen, detectarea și identificarea toxinei în biotestele folosind o reacție de neutralizare cu anticorpi antitoxici specifici.

Prevenire și tratament. Prevenirea gangrenei gazoase se bazează pe tratamentul chirurgical oportun și corect al rănilor. În cazul rănilor severe, se administrează seruri antitoxice împotriva principalelor tipuri de clostridium, câte 10 mii UI fiecare, în scop medicinal - 50 mii UI fiecare.

Clostridia tetanos. Taxonomie. Proprietăți, caracteristici ale toxinelor. Patogeneza bolii. tetanos descendent. Clinica. Principii și metode de diagnostic de laborator. Scopul cercetării bacteriologice, preparate pentru prevenirea și tratamentul specific.

Tetanusul este o infecție acută a plăgii caracterizată prin leziuni neurotoxina celulele motorii ale măduvei spinării și ale creierului, care se manifestă sub formă de spasme ale mușchilor striați. Oamenii și animalele de fermă se îmbolnăvesc. Solul, în special contaminat cu fecale umane și animale, este o sursă constantă de infecție cu tetanos.

Agent patogen - C.tetani - un mare bacil gram pozitiv formator de spori. Sporii sunt localizați terminal (un tip de tobă), mobili datorită flagelilor - peritric. anaerob obligatoriu. Sporii sunt foarte rezistenți.

proprietăți antigenice. Agentul cauzal are antigene O- și H-.

factori de patogenitate. Factorul principal este cea mai puternică exotoxină. Se disting cele două fracții principale ale sale - tetanospasmina (neurotoxină) și tetanolizina (hemolizină). Neurotoxina din sistemul nervos central pătrunde în zona sinapselor mioneurale, se transmite de la neuron la neuron în zona sinapselor, se acumulează în zonele motorii ale coloanei vertebrale și ale creierului, blochează transmiterea sinaptică. Moartea apare din paralizia centrului respirator, asfixie (lezarea mușchilor laringelui, diafragmei, mușchilor intercostali) sau paralizia inimii.

Diagnosticul de laborator. Diagnosticul microbiologic include bacterioscopia materiilor prime, cultura pentru izolarea agentului patogen și identificarea acestuia, detectarea toxinei tetanice.

Izolarea agentului patogen se realizează conform schemei standard pentru anaerobi, folosind diverse medii dense și lichide (mediu Kitt-Tarozzi), identificarea se bazează pe proprietăți morfologice, culturale, biochimice și toxice.

Cea mai simplă și eficientă metodă de diagnosticare microbiologică este un biotest pe șoareci albi. Un grup este infectat cu materialul de testat, al doilea (martor) - după amestecarea probelor cu ser antitoxic tetanos. În prezența toxinei tetanice, grupul experimental de șoareci moare, în timp ce grupul de control rămâne în viață.

Tratament și prevenire a urgențelor. Se folosesc imunoglobulina tetanica donatoare (antitoxina), ser antitoxic (350 UI/kg), antibiotice (peniciline, cefalosporine). Pentru a crea imunitate la vaccin, toxoidul tetanic este utilizat, mai des ca parte a vaccinului DTP (anatoxina tetanica, difteria și tusea convulsivă).

Clostridia botulinum. Taxonomie. Proprietăți. Caracteristicile toxinelor, diferență față de exotoxine ale agenților patogeni ai altor infecții alimentare. Principii și metode de diagnostic de laborator. Medicamente pentru prevenire și tratament specific.

Botulismul este o intoxicație alimentară severă asociată cu utilizarea produselor contaminate cu C.botulinum și se caracterizează printr-o leziune specifică a sistemului nervos central. Și-a luat numele de la lat. botulus - cârnați.

Proprietățile excitatorului. Tije gram-pozitive polimorfe mari, mobile, au flageli peritric. Sporii sunt ovali, situati subterminal (racheta de tenis). Se formează opt tipuri de toxine, care diferă ca specificitate antigenică și, în consecință, sunt izolate 8 tipuri de patogeni. Printre cele mai importante caracteristici se numără prezența sau absența proprietăților proteolitice (hidroliza cazeinei, producerea de hidrogen sulfurat).

Toxina are un efect neurotoxic. Toxina intră în organism cu alimente, deși probabil se poate acumula atunci când agentul patogen se înmulțește în țesuturile corpului. Toxina este termolabilă, deși fierberea timp de până la 20 de minute este necesară pentru inactivarea completă. Toxina este absorbită rapid în tractul gastrointestinal, pătrunde în sânge, acționează selectiv asupra nucleilor medulei oblongate și a celulelor ganglionare ale măduvei spinării. Se dezvoltă fenomene neuroralitice - tulburări de deglutiție, afonie, disfagie, sindrom oftalmo-plegic (strabism, vedere dublă, căderea pleoapelor), paralizii și pareze ale mușchilor faringieni și laringieni, stop respirator și cardiac.

Diagnosticul de laborator. Principiile sunt comune clostridiilor.

Tratament și prevenire. Baza este utilizarea timpurie a serurilor antitoxice (polivalente sau, când se stabilește tipul, omoloage). Prevenirea se bazează pe regimul sanitar și igienic în prelucrarea produselor alimentare. Conservele de ciuperci de casă și alte produse depozitate în condiții anaerobe sunt deosebit de periculoase.

11. Pseudomonas aeruginosa. Taxonomie. Proprietăți. Boli provocate.
Rolul in infectiile nosocomiale. Principii și metode de diagnostic de laborator.

Genul pseudomonas, P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) este unul dintre principalii agenți cauzali ai proceselor purulent-inflamatorii locale și sistemice din spitalele medicale.

Agentul patogen este omniprezent (apă, sol, plante, animale), apare în mod normal la om (cel mai adesea în intestine, pe piele și mucoase). Morfologie- Tija Gram-negativă dreaptă sau ușor curbată, mobilă, situată în frotiuri individual, în perechi sau în lanțuri scurte. Sintetizează mucusul (substanță capsulară), în special tulpinile mucoide mai virulente.

proprietăți culturale. Este aerob și are un set de enzime corespunzătoare tipului de respirație (citocromi, citocrom oxidază, dehidraze). Formează o peliculă gri-argintie pe medii lichide. Pe medii dense se observă adesea fenomenul de liză irizată. Prin sfârşitul zilei datorită sintezei pigmentului piocianina apare o culoare albastru-verde a culturii.

proprietăți biochimice. Pseudomonas aeruginosa se caracterizează prin activitate zaharolitică scăzută (oxidează doar glucoza), activitate proteolitică ridicată și formarea unei zone de beta-hemoliză pe agar sânge. Sintetizează trimetilamina, care conferă culturilor un miros plăcut de iasomie. Produce producerea de bacteriocine - piocine.

Proprietăți antigenice și patogene. Principalii antigeni ai Pseudomonas aeruginosa sunt un antigen O somatic specific de grup și un antigen H flagelar specific de tip. Complexul O-antigenic - un agregat de LPS cu proteine și lipide ale peretelui celular, are proprietățile endotoxinei, este unul dintre principalii factori de patogenitate. Pseudomonas aeruginosa are un set mare de factori de patogenitate - endotoxina (LPS, similară cu alte bacterii gram-negative), o serie de exotoxine - citotoxina, exoenzima S, hemolizine, exotoxina A (cea mai importantă, seamănă cu exotoxina difteriei), enzime (colagenază). , neuraminidază, proteaze).

Diagnosticul de laborator. P.aeruginisa și-a primit numele pentru colorarea albăstruie - verde a rănilor și pansamentelor detașabile. Principala metodă de diagnostic este bacteriologică. Important este detectarea pigmentului piocianina. Tratament și prevenire specifică. Nu există o prevenire specifică. Cu toxiinfecția alimentară și disbacterioza intestinală cauzată de Pseudomonas aeruginosa, un complex intestinal - bacteriofag, care include fagul pseudomonas, este eficient. Dintre medicamentele antibacteriene, aminoglicozidele, cefalosporinele și chinolonele sunt mai des utilizate.

Bacteriile gram-negative patogene condiționat - agenți cauzali ai proceselor purulent-inflamatorii (Proteus, Klebsiella, tijă miraculoasă etc.), taxonomie. Caracteristicile generale ale enterobacteriilor. Principii și metode de diagnostic de laborator.

Genul Klebsiella.

Genul Klebsiella aparține familiei Enterobacteriaceae. O caracteristică a reprezentanților genului este capacitatea de a forma o capsulă. Principala specie este K. Pneumoniae. Provoacă leziuni oportuniste - pneumonie nosocomială, infecții ale tractului urinar, diaree la nou-născuți. Klebsiella provoacă mastită, septicemie și pneumonie la animale, se găsesc în mod constant pe pielea și mucoasele oamenilor și animalelor. Klebsiella - bastoane drepte, nemișcate de diferite dimensiuni. anaerobi facultativi. Oxidaza - negativ, catalaza - pozitiv.

factori de patogenitate. Acestea includ o capsulă polizaharidă (antigen K), endotoxină, fimbrie, sistem siderofor (leagă ionii feroși și reduce conținutul acestora în țesuturi), exotoxine termolabile și termostabile.

Manifestari clinice. K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) se caracterizează prin bronșită și bronhopneumonie spitalicească, pneumonie lobară, infecții ale tractului urinar, leziuni ale meningelor, articulațiilor, coloanei vertebrale, ochilor, precum și bacteriemie și septicopiemie. Subspecia ozaenae provoacă o formă specială de rinită atrofică cronică - lac.

Diagnosticul de laborator. Metoda principală este bacteriologică. Tratament. Una dintre caracteristicile Klebsiella este rezistența lor la mai multe medicamente și dezvoltarea leziunilor pe fondul scăderii rezistenței organismului. Antibioticele sunt utilizate pentru formele cronice generalizate și lene de Klebsiellesis, de obicei în combinație cu medicamente care stimulează sistemul imunitar.

Genul Proteus.

Genul Proteus aparține familiei Enterobacteriaceae. Genul a fost numit în onoarea fiului lui Poseidon Proteus, capabil să-și schimbe aspectul. Reprezentanții genului sunt capabili să modifice manifestările externe ale creșterii pe medii nutritive dense și, de asemenea, se disting prin cel mai mare pleomorfism (variabilitatea morfologică) în comparație cu alte enterobacterii.

Proteinele descompun tirozina, refac nitrații, oxidaza este negativă, catalaza este pozitivă. Ei trăiesc în intestinele multor specii de vertebrate și nevertebrate, sol, canalizare și reziduuri organice în descompunere. Poate provoca infecții ale tractului urinar la om, precum și leziuni septice la pacienții cu arsuri și după intervenții chirurgicale. Destul de des provoacă și toxiinfecții alimentare. P.vulgaris și P.mirabilis au rolul cel mai frecvent în patologie.

proprietăți culturale. Proteele cresc pe medii simple pe o gamă largă de temperaturi. pH-ul optim este de 7,2-7,4, temperatura este de la +35 la 37 de grade Celsius. Coloniile Proteus în forma O sunt rotunjite, semi-transparente și convexe, formele H dau creștere continuă. Creșterea proteelor este însoțită de un miros putred. Fenomenul de roire este caracteristic, formele H conferă MPA o creștere târâtoare caracteristică sub forma unui văl delicat albăstrui-fumuriu. La însămânțarea conform metodei Shushkevich în umiditatea de condensare a MPA proaspăt tăiat, cultura crește treptat sub forma unui văl pe suprafața agarului. Turbiditatea difuză a mediului cu un sediment alb gros în partea de jos este notă pe BCH.

factori de patogenitate. Acestea includ LPS al peretelui celular, capacitatea de a „roi”, fimbria, proteaze și urază, hemolizine și hemaglutinine.

Diagnosticul de laborator. Metoda principală este bacteriologică. Mediile de diagnostic diferențial (Ploskirev), mediile de îmbogățire și MPA sunt utilizate conform metodei Shushkevich. Tratament. În cazul disbacteriozei intestinale asociate cu proteine (colită), este posibil să se utilizeze fagul proteus și preparatele care îl conțin (intestifag, bacteriofag coliproteus).

„Top minunat” (Serratia marcescens), tip de bacterii din rândul microorganismelor pigmentare. Baghete gram-negative mobile (peritricos) care nu poartă spori. După tipul schimbului - anaerob facultativ. Pe suprafața agarului formează colonii netede sau granulare de culoare roșu închis și strălucitor, cu un luciu metalic. Trăiește în sol, apă, hrană. Dezvoltându-se pe pâine (la umiditate ridicată), în lapte, le colorează roșu; astfel de produse nu au voie să fie vândute. Condițional patogen pentru animale și oameni; poate provoca supurație.

13. Escherichia. Taxonomie. Boli cauzate de Escherichia coli. Variante patogene ale Escherichiei diareice. Structura antigenică, clasificare. Caracteristicile diagnosticului microbiologic. Diferențierea Escherichia diareeică de cea condiționată patogenă.

Escherichia sunt cele mai frecvente bacterii intestinale aerobe care, in anumite conditii, pot provoca un grup larg de afectiuni umane, atat cu localizare intestinala (diaree), cat si extraintestinala (bacteremie, infectii urinare etc.). Principalele specii - E. coli (E. coli) - cel mai frecvent agent cauzator al bolilor infecțioase cauzate de enterobacterii. Acest agent patogen este un indicator al contaminării fecale, în special al apei.

proprietăți culturale. Pe medii lichide, E. coli dă turbiditate difuză, pe medii dense formează forme S- și R- de colonii. Pe mediul Endo pentru Escherichia, Escherichia coli fermentatoare de lactoză formează colonii de culoare roșie intens, cu luciu metalic, nefermentante - roz pal sau colonii incolore cu un centru mai închis, pe mediul Ploskirev - roșu cu o tentă gălbuie, pe mediul Levin - închis. albastru cu un luciu metalic.

proprietăți biochimice. Escherichia coli în cele mai multe cazuri fermentează carbohidrații (glucoză, lactoză, manitol, arabinoză, galactoză etc.) cu formare de acid și gaz, formează indol, dar nu formează hidrogen sulfurat și nu lichefiază gelatina.

Principalii factori de patogenitate ai E.coli diareice.

1. Factori de aderență, colonizare și invazie asociați cu pili, structuri fimbriale, proteine ale membranei exterioare. Ele sunt codificate de gene plasmide și promovează colonizarea intestinului subțire inferior.

2. Exotoxine: citotonine (stimulează hipersecreția de lichid de către celulele intestinale, perturbă metabolismul apă-sare și contribuie la dezvoltarea diareei) și enterocitotoxine (acționează asupra celulelor peretelui intestinal și a endoteliului capilar).

3. Endotoxina (lipopolizaharidă).

În funcție de prezența diverșilor factori de patogenitate, Escherichia coli diareeică este împărțită în cinci tipuri principale: enterotoxigenă, enteroinvazivă, enteropatogenă, enterohemoragică, enteroadeziva.

4. E. coli patogenă se caracterizează prin producerea de bacteriocine (colicine).

E. coli enterotoxigenă au o toxină termolabilă cu greutate moleculară mare, asemănătoare cu acțiunea holerei, provoacă diaree asemănătoare holerei (gastroenterita la copii mici, diareea călătoriei etc.).

Escherichia coli enteroinvazivă capabil să pătrundă și să se înmulțească în celulele epiteliului intestinal. Ele provoacă diaree abundentă cu un amestec de sânge și un număr mare de leucocite (un indicator al unui proces invaziv) în scaun. Clinic seamănă cu dizenteria. Tulpinile au unele asemănări cu Shigella (nemotile, nu fermentează lactoza, au proprietăți enteroinvazive ridicate).

E.coli enteropatogen- principalii agenți cauzali ai diareei la copii. În centrul leziunilor se află aderența bacteriilor la epiteliul intestinal cu afectarea microvilozităților. Caracterizat prin diaree apoasă și deshidratare severă.

Escherichia coli enterohemoragică provoacă diaree în amestec cu sânge (colită hemoragică), sindrom hemolitic-uremic (anemie hemolitică în combinație cu insuficiență renală). Cel mai frecvent serotip de Escherichia coli enterohemoragic este O157:H7.

E.coli enteroadeziv nu formează citotoxine, sunt slab studiate.

Diagnosticul de laborator. Abordarea principală este izolarea unei culturi pure pe medii de diagnostic diferențial și identificarea acesteia prin proprietăți antigenice. Au pus RA cu un set de seruri polivalente OK (la antigenele O și K).

Printre streptococii patogeni, S.pneumoniae (pneumococul) ocupă un loc aparte. Joacă un rol foarte important în patologia infecțioasă umană. Această specie este unul dintre principalii agenți cauzali ai pneumoniei lobare. Conform datelor departe de a fi complete, în lume există peste 500.000 de cazuri de pneumonie în fiecare an cauzate de pneumococi, în special la copii și vârstnici. Pe lângă inflamația plămânilor, acest microb provoacă meningită, endocardită, peritonită, otită medie, rinită, sinuzită, sepsis, ulcer corneean târâtor și o serie de alte boli. Pentru diagnosticul de laborator se folosesc metode bacterioscopice, bacteriologice și biologice. Material pentru studiul sputei, puroiului, sângelui, lichidului cefalorahidian, mucusului din orofaringe și nazofaringe, secreții din sinusul maxilar, ochi și urechi. Este important să trimiteți imediat materialul la laborator și să îl analizați foarte repede, deoarece pneumococii sunt susceptibili la autoliză.

Examen bacterioscopic

Examinarea bacterioscopică a materialului (cu excepția sângelui) se reduce la fabricarea a două frotiuri. Unul dintre ele este colorat de Gram, al doilea - de Burri-Gins, ceea ce face posibilă identificarea capsulei. Pneumococii sunt localizați sub formă de diplococi lanceolați, înconjurați de o capsulă comună. Dacă în câmpul vizual sunt detectați 10 sau mai mulți diplococi tipici, este foarte probabil ca S.pneumoniae să fie prezent. Cu toate acestea, microscopia primară nu dă dreptul de a face un diagnostic final, deoarece frotiurile pot conține diplococi capsulari nepatogeni - reprezentanți ai microflorei normale. Prin urmare, este necesar să se efectueze însămânțarea materialului clinic și să izolați o cultură pură.

Cercetări bacteriologice

În caz de sepsis, 10 ml de sânge se inoculează la patul pacientului într-un flacon care conține 100 ml de ser sau bulion de zahăr, se incuba timp de 18-20 de ore la 37 ° C, apoi se seamănă pe agar-sânge, se face o cultură pură. izolate si identificate. În cazul meningitei, lichidul cefalorahidian este centrifugat și sedimentul este cultivat pe agar cu sânge. Pe ea, pneumococii cresc sub formă de mici colonii rotunde, înconjurate de o zonă verde; o depresiune caracteristică este vizibilă în centrul coloniei. Nu se recomandă însămânțarea sputei sau puroiului pe medii nutritive, deoarece prezența microflorei saprofite inhibă creșterea S.pneumoniae. Este mai bine să introduceți materialul de testat în cavitatea abdominală a șoarecilor albi. Biotestul este o metodă rapidă, fiabilă și precisă pentru izolarea unei culturi de pneumococ pur. Șoarecii albi sunt foarte sensibili la aceste bacterii și în 10-12 ore de la infecție, pneumococii pătrund în sânge și în organele parenchimoase, provocând sepsis. Cultura de sânge din inimă sau bucăți de organe interne în timpul autopsiei animalelor vă permite să izolați o cultură pură a agentului patogen. Pentru identificarea pneumococilor se folosesc proprietățile lor. Spre deosebire de alte tipuri de streptococi, S.pneumoniae nu crește pe un mediu cu optochină, inulina este fermentată și este foarte sensibilă la acțiunea bilei (testul dezoxicolat). Liza rapidă a pneumococilor sub acțiunea bilei poate fi detectată dacă la 1 ml de cultură în bulion se adaugă 0,5 ml bilă. După 15-20 de minute de ședere în termostat, are loc liza completă a celulelor bacteriene. Pentru a determina serovarele de pneumococi (acum sunt 85 dintre ele), se utilizează o reacție de aglutinare pe sticlă cu seruri tipice sau fenomenul de „umflare a capsulei”. În prezența serului omolog, capsula pneumococică se umflă puternic. Și mai bine, serotiparea se face cu aglutinarea din latex din comerț sau reactivi de coaglutinare care prezintă antigene capsulare. Dintre streptococi, este important și genul Enterococcus, dintre care cele mai semnificative specii sunt E.faecalis, E.faecium și E.durans. Sunt destul de răspândite în natură. Principala lor nișă ecologică este intestinele oamenilor și animalelor, dar se găsesc și în microflora normală a pielii perineului, organelor genito-urinale, orofaringe și nazofaringe. Ele pot provoca supurația rănilor, bacteriemie, leziuni ale sistemului urogenital, în special la pacienții cu catetere funcțional pe termen lung, intoxicații alimentare, disbacterioză intestinală, mai rar endocardită. În frotiurile din materialul de testat, enterococii sunt aranjați în perechi, în lanțuri scurte sau sub formă de ciorchini, gram-pozitivi. Diagnosticul bacteriologic al infecțiilor enterococice se realizează fără dificultăți, deoarece aceste bacterii cresc bine pe medii simple. Agar dif-3 este selectiv pentru ei (până la 600 ml de 3% MPA adăugați 400 ml de bilă 40%). După 24 de ore de incubație, coloniile care au crescut au o dimensiune de 0,4-1,0 mm de culoare cenușie. Pe agar-sânge, în jurul coloniilor are loc hemoliza incompletă sau completă. Spre deosebire de streptococii viridescenți, enterococii pot crește pe MPA cu 6,5% NaCl, reducând laptele cu albastru de metilen la 37°C după 4-6 ore. Identificarea culturilor izolate se realizează în funcție de caracteristicile morfologice, culturale și biochimice.

Pagina 40 din 91

Agentul cauzal al pneumoniei lobare (pneumonia) este pneumococul - Diplococcus pneumoniae, descoperit pentru prima dată de Pasteur în saliva unui bărbat care a murit de rabie (1881).
Morfologie și proprietăți tinctoriale. Pneumococii (Fig. 67 și 68 pe insert) sunt coci perechi care au o formă alungită ca o lancetă. Prin urmare, ei sunt numiți altfel diplococi lanceolați. Formând lanțuri scurte, pneumococii devin similari cu streptococii și, prin urmare, II. F. Gamaleya le-a numit Streptococcus lanceolatus. Dimensiunea celulei variază de la 0,5X0,75 la 1X1,5 microni. Nu au spori sau flageli. O trăsătură distinctivă a pneumococului este formarea unei capsule, care este bine exprimată în materiale patologice (sputa, sânge etc.). Când este cultivată pe medii nutritive, capsula se pierde. Pneumococii percep cu ușurință coloranții de anilină și colorează pozitiv conform Gram.
Proprietăți culturale și biochimice.

Orez. 68. Pneumococi în frotiu de spută.

Pneumococii sunt aerobi și anaerobi facultativi. Temperatura optimă este de aproximativ 37°. Cultivați pe medii care conțin proteine animale (agar din sânge sau ser, ascitagar).
La suprafața agarului, după 24 de ore, se formează colonii mici, asemănătoare streptococilor, dar mai mici și mai transparente.
Pe agar oblic, cu inoculare abundentă, se obține o acoperire transparentă foarte delicată, formată din cele mai mici colonii neconfluente, pe bulion - o ușoară turbiditate și un mic precipitat fulminant.
Tulpinile proaspăt izolate nu cresc pe gelatină. Tulpinile vechi de pneumococi de laborator pot produce mici colonii albicioase deja la 18-22°C. Gelatina nu este lichefiată.
Ele cresc bine pe lapte, coagulându-l cu formarea de acid.
Pe agar-sânge, în jurul coloniilor se formează o zonă de hemoliză incompletă cu o colorare maro-verzuie a mediului.

Orez. 67. Pneumococi în cultură pură din bulion.

Pneumococii descompun zaharoza, rafinoza și lactoza. Cea mai importantă caracteristică este descompunerea inulinei. Majoritatea streptococilor nu au această proprietate. Pneumococii virulenți sunt solubili în bilă.
Structura antigenică și tipurile serologice de pneumococi. Citoplasma pneumococilor conține un antigen proteic comun tuturor pneumococilor. Acest antigen determină specificitatea lor de specie. Capsula conține antigene polizaharide specifice (haptenă), care diferă în compoziția lor chimică în diferite pneumococi (antigene tipice). Pe baza acestor antigene tipice, toți pneumococii sunt împărțiți în trei grupuri principale (I, II, III) și un al patrulea grup combinat (grup X) folosind reacția de aglutinare și precipitare. Grupul X include mai mult de 70 de tipuri.
rezistenţă. Pe medii nutritive artificiale, pneumococii mor rapid (4-7 zile). Sub un strat de ulei de vaselină în mediu lichid și semi-lichid care conțin proteine, acestea rămân viabile timp de 3-12 luni.
Pneumococii tolerează bine uscarea: în spută uscată în lumină difuză, persistă până la 2 luni. Când sunt încălzite la 52-55 °, mor în 10 minute, la 60 ° - chiar mai repede. Într-o soluție de acid carbolic (3%), pneumococii mor în 1-2 minute.
Pneumococii sunt deosebit de sensibili la optochin. Sub influența acestora din urmă, ei mor la o concentrație de 1: 1.000.000.
Formarea toxinelor și patogenitatea pentru animale. Veninul pneumococic este o endotoxină. Dintre animalele de laborator, șoarecii albi și iepurii sunt mai sensibili la pneumococ. Administrarea parenterală a pneumococilor virulenți după 24-48 de ore determină moartea animalelor cu sepsis. La autopsie la locul injectării, se detectează exudat fibrinos, splina este mărită și hiperemică.
Patogenie și boli la om. Poarta de intrare a infecției este de obicei membrana mucoasă a faringelui. Introducerea pneumococilor în organism și pătrunderea lor în țesutul pulmonar poate avea loc, aparent, atât prin sistemul limfatic și circulator, cât și direct prin ramificarea bronhiilor. Cea mai frecventă boală este pneumonia croupoasă, care se caracterizează printr-un debut brusc, febră mare, uneori cu frisoane, dureri laterale la respirație, cefalee, uneori pierderea conștienței, delir, excitare puternică. În viitor, există o tuse cu o spută caracteristică roșie ruginită. În plămâni, există un proces care captează mai des unul, mai rar - doi sau trei lobi.
Sursele de infecție sunt o persoană bolnavă și un purtător de bacterii. Infecția din exterior are loc atât aerogen - prin picături de la purtător, cât și prin infecția cu praf. Pneumococii pot persista în spută uscată timp îndelungat (aproximativ 2 luni) și pot intra în aer cu praf.
La examinarea persoanelor sănătoase, pneumococii patogeni se găsesc adesea în nazofaringe, deci nu este exclusă posibilitatea de autoinfecție, iar factorii care slăbesc rezistența organismului, cum ar fi hipotermia, joacă un rol semnificativ.
Pe lângă pneumonia lobară, pneumococii provoacă inflamarea urechii medii, meninge (meningită), precum și a membranei mucoase a nasului și a căilor respiratorii, amigdalita, ulcer târâtor al corneei și inflamația sacului lacrimal.
Imunitate. Pneumonia transferată nu conferă imunitate. Boala poate recidiva de mai multe ori. Acest lucru se datorează prezenței multor tipuri de pneumococi și faptului că pneumonia trecută crește sensibilitatea organismului la pneumococi.
Serul pacientilor recuperati contine anticorpi (aglutinine etc.).
Până în momentul crizei pneumoniei, concentrația de anticorpi în sânge atinge un titru semnificativ, iar fagocitoza crește dramatic (I. Ya. Chistovici). Pe baza acestor date, imunitatea în pneumonie ar trebui considerată în primul rând ca fiind fagocitară, în care anticorpii (bacteriotropinele) joacă un rol important.
Diagnosticul microbiologic. Materialele pentru cercetarea bolilor pneumococice sunt spută, sânge și puroi prelevate din diverse leziuni, mai rar lichidul cefalorahidian.
Materialul patologic (excluzând sângele) este examinat bacterioscopic, bacteriologic și prin infectarea șoarecilor albi. Trebuie recursă la această din urmă metodă deoarece materialul sursă, în special sputa, conține de obicei microfloră străină abundentă, care, atunci când materialul este inoculat direct pe medii nutritive, face dificilă izolarea pneumococului.
Frotiurile din spută, puroi etc. sunt colorate cu Gram. La microscop se găsesc diplococi lanceolați, colorați Gram, înconjurați pozitiv de o capsulă.
Culturile sunt izolate pe agar-sang sau pe agar-agar. După 24-48 de ore de creștere la 37°, apar colonii caracteristice dacă este prezent pneumococul. Coloniile sunt placate pe ser oblic sau agar ascitic și cultura izolată este verificată pentru solubilitatea în bilă și pentru capacitatea de a degrada inulina.
Infecția unui șoarece alb este cea mai sigură modalitate de a izola o cultură de pneumococ. Materialul de la un pacient sau un cadavru (sputa, puroi, o bucata de organ etc.) se pune intr-o cana sterila, apoi se macina intr-un mortar steril, cu 1-2 ml bulion steril si se pune 0,5 ml din aceasta suspensie. injectat intraperitoneal unui şoarece alb. După moartea șoarecelui, care are loc în decurs de 12-48 de ore, din inimă se prelevează hemoculturi și în aproape toate cazurile se obține o cultură pură de pneumococ.
Dacă se suspectează sepsis, se inoculează 10-20 ml de sânge în bulion de ascitic sau ser. După îmbogățirea din bulion, se fac inoculări pe agar-sânge, iar cultura pură izolată se identifică după caracteristicile morfologice și biochimice.
terapie specifică și chimioterapie. În prezent, preparatele sulfanilamide și antibioticele (penicilină, biomicină, tetraciclină etc.) sunt utilizate cu mare succes pentru tratamentul pneumoniei lobare.

Genul Streptococcus include: Streptococcus pyogenes (hemolitic) și Streptococcus pneumoniae (pneumococ). Streptococii au fost descoperiți pentru prima dată de Billroth (1874), L. Pasteur (1879). Ele au fost studiate de E. Rosenbach (1884).

Streptococcus pyogenes (hemolitic)

Morfologie. Streptococii sunt coci care au o formă sferică. Diametrul fiecărui coc este în medie de 0,6-1 μm, cu toate acestea, se caracterizează prin polimorfism: există coci mici și mari, strict sferici și ovali. Streptococii sunt aranjați într-un lanț, care este rezultatul divizării lor în același plan. Lungimea lanțului variază. Pe un mediu nutritiv dens, lanțurile sunt de obicei scurte; pe cele lichide, sunt lungi. Streptococii sunt imobili, nu au spori (vezi Fig. 4) Culturile proaspăt izolate formează uneori o capsulă. Pe secțiunile ultrasubțiri, este vizibilă o microcapsulă, sub ea există un perete celular cu trei straturi și o membrană citoplasmatică cu trei straturi. Gram-pozitiv.

cultivare. Streptococii sunt anaerobi facultativi. Crește la o temperatură de 37 ° C și pH 7,6-7,8. Mediile optime pentru cultivarea lor sunt mediile care conțin sânge sau ser sanguin. Pe medii nutritive dense, coloniile de streptococi sunt mici, plate, tulburi, de culoare cenușie. Pe agar-sânge, unele soiuri de streptococi formează hemoliză. Streptococii β-hemolitici formează o zonă clară de hemoliză, streptococii α-hemolitici formează o mică zonă verzuie (rezultatul trecerii hemoglobinei la methemoglobină). Există streptococi care nu dau hemoliză.

Pe bulionul de zahăr, streptococii cresc cu formarea de sedimente cu granulație fină parietal și aproape de fund, în timp ce bulionul rămâne transparent.

Proprietăți enzimatice. Streptococii au proprietăți zaharolitice. Ele descompun glucoza, lactoza, zaharoza, manitolul (nu întotdeauna) și maltoza pentru a forma acid. Proprietățile lor proteolitice sunt slab exprimate. Ele coagulează laptele, gelatina nu se lichefiază.

formarea de toxine. Streptococii formează o serie de exotoxine: 1) streptolizinele - distrug globulele roșii (O-streptolizina are efect cardiotoxic); 2) leucocidina - distruge leucocitele (formate din tulpini foarte virulente); 3) toxina eritrogenă (scarlatină) - provoacă tabloul clinic al scarlatinei - intoxicație, reacții vasculare, erupții cutanate, etc. Sinteza toxinei eritrogene este determinată de profag; 4) citotoxine – au capacitatea de a provoca glomerulonefrită.

Streptococii au diferite antigene. Citoplasma celulei conține un antigen de natură nucleoproteică specifică - același pentru toți streptococii. Antigenele de tip proteine sunt localizate pe suprafața peretelui celular. Un antigen de grup polizaharidic a fost găsit în peretele celular al streptococilor.

Conform compoziției fracției de antigen specific grupului de polizaharide, toți streptococii sunt împărțiți în grupuri, notați cu litere latine majuscule A, B, C, D etc. până la S. Pe lângă grupuri, streptococii sunt împărțiți în tipuri serologice , care sunt indicate prin cifre arabe.

Grupa A include 70 de tipuri. Acest grup include majoritatea streptococilor care provoacă diferite boli la oameni. Grupa B include în principal streptococi umani oportuniști. Grupa C include streptococii patogeni pentru oameni și animale. Grupa D este formată din streptococi care nu sunt patogeni pentru oameni, dar acest grup include enterococii, care sunt locuitori ai tractului intestinal al oamenilor și animalelor. Intrând în alte organe, provoacă procese inflamatorii: colecistită, pielită etc. Astfel, ele pot fi atribuite microbilor condiționat patogeni.

Apartenența culturilor izolate la una dintre grupele serologice se determină folosind o reacție de precipitare cu seruri de grup. Pentru determinarea tipurilor serologice se folosește o reacție de aglutinare cu seruri specifice tipului.

Streptococii sunt destul de stabili în mediu. La o temperatură de 60 ° C, ei mor după 30 de minute.

În puroi uscat și spută, acestea persistă luni de zile. Concentrațiile obișnuite de dezinfectanți le distrug în 15-20 de minute. Enterococii sunt mult mai rezistenți, soluțiile dezinfectante îi omoară abia după 50-60 de minute.

Susceptibilitatea animalelor. Vitele, caii, câinii și păsările sunt susceptibile la streptococi patogeni. De la animalele de laborator, iepurii și șoarecii albi sunt sensibili. Cu toate acestea, streptococii patogeni pentru oameni nu sunt întotdeauna patogeni pentru animalele de experiment.

Surse de infecție. Oameni (bolnavi și purtători), mai rar animale sau produse infectate.

Căi de transmisie. Praful din aer și din aer, uneori alimente, contact-gospodărie este posibil.

Bolile pot apărea ca urmare a infecției exogene, precum și endogen - cu activarea streptococilor oportuniști care trăiesc pe membranele mucoase ale faringelui, nazofaringelui și vaginului. O scădere a rezistenței organismului (răcire, înfometare, surmenaj etc.) poate duce la autoinfecții.

De mare importanță în patogeneza infecțiilor streptococice este sensibilizarea preliminară - ca urmare a unei boli transferate anterior de etiologie streptococică.

Când pătrund în sânge, streptococii provoacă un proces septic sever.

Boli la oameni provoacă mai des streptococi β-hemolitici din grupa serologică A. Ei produc enzime de patogenitate: hialuronidază, fibrinolizină (streptokinaza), dezoxiribonuclează etc. În plus, o capsulă, proteina M, care are proprietăți antifagocitare, se găsește în streptococi.

Streptococii provoacă diferite infecții acute și cronice la om, atât cu formare de puroi, cât și nesupurative, care diferă ca tablou clinic și patogeneză. Supurativ - flegmon, abcese, infecții ale plăgilor, non-supurative - infecții acute ale tractului respirator superior, erizipel, scarlatina, reumatism etc.

Streptococii provoacă adesea infecții secundare în gripă, rujeolă, tuse convulsivă și alte boli și complică adesea infecțiile rănilor.

Imunitate. Prin natura sa, imunitatea este antitoxica si antibacteriana. Imunitatea antimicrobiană postinfecțioasă este slabă. Acest lucru se datorează imunogenității slabe a streptococilor și unui număr mare de serovari care nu dau imunitate încrucișată. În plus, la bolile streptococice se observă o alergizare a organismului, ceea ce explică tendința de recidivă.

Prevenirea. Se reduce la măsuri sanitare și igienice, întărind rezistența generală a organismului. Profilaxia specifică nu a fost dezvoltată.

Tratament. Aplicați antibiotice. Mai des, se folosește penicilina, la care streptococii nu au dobândit rezistență, precum și eritromicina și tetraciclina.

Valoarea streptococului în etiologia bolilor de inimă reumatismale. Patogenia bolilor de inimă reumatismală nu este bine înțeleasă. Dar o serie de fapte vorbesc în favoarea rolului streptococului în dezvoltarea acestei boli:

1. La pacienții cu boală reumatică a inimii se seamănă streptococul B-hemolitic din faringe.

2. Reumatismul apare deseori dupa ce suferiti o durere in gat, amigdalita, faringita, sensibilizand organismul.

3. Antistreptolizină, antistreptohialuronidază - anticorpi la enzimele streptococice, toxine se găsesc în serul sanguin al pacienților.

4. Confirmarea indirectă a rolului streptococului este tratamentul de succes cu penicilină.

Recent, formelor L de streptococ li sa acordat importanță în apariția formelor cronice de boli cardiace reumatice.

Prevenirea exacerbărilor bolii reumatismale de inimă se reduce la prevenirea bolilor streptococice (de exemplu, primăvara și toamna, se efectuează un curs profilactic de administrare a penicilinei). Tratamentul se reduce la utilizarea medicamentelor antibacteriene - penicilina.

Valoarea streptococului în etiologia scarlatinei. G. N. Gabrichevsky (1902) a fost primul care a sugerat că streptococul hemolitic este agentul cauzator al scarlatinei. Dar, deoarece streptococii izolați în alte boli nu diferă de agenții cauzatori ai scarlatinei, această opinie nu a fost împărtășită de toată lumea. S-a stabilit acum că scarlatina este cauzată de streptococii de grup A care produc toxină eritrogenă.

La cei care au fost bolnavi, apare imunitatea - persistentă, antitoxică. Tensiunea sa este determinată prin setarea reacției Dick - injectare intradermică de toxină eritrogenă. La cei care nu sunt bolnavi în jurul locului de injectare, apar hiperemie și edem, care se caracterizează ca o reacție pozitivă (lipsa de antitoxină în serul sanguin). La cei care au fost bolnavi, o astfel de reacție este absentă, deoarece antitoxina formată în ei neutralizează toxina eritrogenă.

Prevenirea. Izolare, spitalizare. De contact, copiilor slăbiți li se administrează gamma globulină. Profilaxia specifică nu a fost dezvoltată.

Tratament. Utilizați penicilină, tetraciclină. În cazurile severe se administrează ser antitoxic.

Scopul studiului: detectarea streptococului și determinarea serovarului acestuia.

Material de cercetare

1. Mucus din gat (amigdalita, scarlatina).

2. Răzuire din zona afectată a pielii (erisipel, streptodermie).

3. Pus (abces).

4. Urina (nefrita).

5. Sânge (suspiciune de sepsis; endocardită).

Metode de cercetare de bază

1. Bacteriologic.

2. Microscopic.

Progresul cercetării

A doua zi de cercetare

Scoateți paharele din termostat și verificați. În prezența coloniilor suspecte, se fac frotiuri dintr-o parte din ele, colorate după Gram și microscopic. Dacă în frotiu se găsesc streptococi, o parte din colonia rămasă este subcultivată în eprubete pe agar cu ser pentru a izola o cultură pură și pe bulion cu sânge în eprubete. Până la sfârșitul zilei, o cultură de 5-6 ore din bulion sau agar este subcultivată pe bulion de jder cu 0,25% glucoză pentru a determina grupa serologică în reacția de precipitare Lensfield. Eprubetele și flacoanele se pun într-un termostat și se lasă până a doua zi.

A treia zi de cercetare

Culturile se scot din cuptor, se verifică puritatea culturii pe agar-agar, se fac frotiuri, se colorează Gram și se microscopează. În prezența unei culturi pure de streptococ, acestea sunt semănate pe medii Hiss (lactoză, glucoză, maltoză, zaharoză și manitol), lapte, gelatină, bilă 40% și introduse într-un termostat.

Uită-te prin bulionul lui Martin. În prezența creșterii specifice, se efectuează un test de precipitare Lensfield pentru a determina grupa serologică.

Stabilirea reacției de precipitare conform Lensfield. Cultura zilnică crescută pe bulion Martin este turnată în mai multe tuburi de centrifugă, centrifugate timp de 10-15 minute (3000 rpm).

Supernatantul este turnat într-un borcan cu o soluție dezinfectantă, iar precipitatul este turnat într-o soluție sterilă izotonică de clorură de sodiu și centrifugat din nou. La precipitatul colectat din toate tuburile de centrifugă, se adaugă 0,4 ml de acid clorhidric 0,2%. Apoi tubul se pune într-o baie de apă și se fierbe timp de 15 minute, agitând ocazional. După fierbere, suspensia rezultată este din nou centrifugă. Antigenul este apoi extras în supernatant, care este turnat într-un tub curat și neutralizat cu soluție de hidroxid de sodiu 0,2% la pH 7,0-7,2. Se adaugă ca indicator albastru de bromotimol (0,01 ml dintr-o soluție de 0,04%). Cu această reacție, culoarea se schimbă de la galben pai la albastru.

Apoi, 0,5 ml de ser de grup antistreptococic, care sunt preparate prin imunizarea iepurilor, se toarnă în 5 tuburi de precipitare (vezi capitolul 19). Serul A se introduce în primul tub, serul B în al 2-lea, serul C în al 3-lea, serul D în al 4-lea, soluția izotonică de clorură de sodiu (martor) în al 5-lea. După aceea, cu o pipetă Pasteur, extractul rezultat (antigenul) este stratificat cu grijă de-a lungul peretelui în toate eprubetele.

Cu o reacție pozitivă într-o eprubetă cu ser omolog, la marginea extractului cu ser se formează un inel subțire alb-lăptos (Fig. 38).

A patra zi de cercetare

Rezultatele sunt înregistrate (Tabelul 25).

În prezent, se determină dezoxiribonucleaza, precum și antistreptohialuronidază, antistreptolizin-O.

întrebări de testare

1. Care sunt principalele metode de cercetare de laborator pentru depistarea streptococilor cunoașteți?

2. Pentru ce este reacția de precipitare Lensfield?

3. De ce ar trebui să fie antigenul transparent în timpul acestei reacții? Descrieți tehnica de stadializare a acestei reacții.

Obțineți ser antistreptococic A, B, C, D și soluție izotonică de clorură de sodiu de la profesor. Setează reacția de precipitare, arată rezultatele profesorului și desenează.

Medii nutritive

agar cu sânge(vezi capitolul 7).

Agar seric(vezi capitolul 7).

Şuierat media(uscat).

Gelatina cu peptonă din carne (MPG). La 100 ml de MPB se adauga 10-15 g de gelatina tocata marunt. Gelatina trebuie să se umfle când este încălzită lent într-o baie de apă (la o temperatură de 40-50 ° C). O soluție 10% de carbonat de sodiu (bicarbonat de sodiu) este adăugată la gelatina topită și pH-ul este ajustat la 7,0. Apoi este filtrat imediat printr-un filtru plisat. Filtrarea este lentă. Pentru a accelera procesul, filtrarea se poate face într-o autoclavă fierbinte. Mediul filtrat se toarnă în eprubete de 6-8 ml și se sterilizează. Sterilizarea se efectuează fie fracționat la o temperatură de 100 ° C timp de 3 zile la rând, fie simultan la 110 ° C timp de 20 de minute într-o autoclavă. Răcirea mediului se realizează în eprubete amplasate vertical.

Prepararea laptelui. Laptele proaspăt se aduce la fierbere, se pune într-un loc răcoros timp de o zi, eliberat de smântână, fiert din nou. Lăsați o zi și îndepărtați stratul superior. Laptele degresat se filtrează printr-un strat de vată, apoi se alcalinizează cu soluție de carbonat de sodiu 10% la pH 7,2 și se toarnă în eprubete de 5-6 ml.

Bouillon Martin. În apa din carne se adaugă o cantitate egală de jder peptonă (carne tocată din stomacul de porc expus la acid clorhidric). Amestecul rezultat este fiert timp de 10 minute, alcalinizat cu soluție de hidroxid de sodiu 10% la pH 8,0, se adaugă 0,5 acetat de sodiu, fiert din nou și turnat în vase sterile. Se adaugă 0,25% glucoză în bulionul Martin.

Miercuri Kitt - Tarozzi(vezi capitolul 34).

Streptococcus pneumoniae (pneumococ)

Pneumococii au fost descriși pentru prima dată de R. Koch (1871).

Morfologie. Pneumococii sunt diplococi în care laturile celulelor aflate în față sunt turtite, iar părțile opuse sunt alungite, deci au o formă lanceolada care seamănă cu o flacără de lumânare (vezi Fig. 4). Dimensiunea pneumococilor este de 0,75-0,5 × 0,5-1 μm, sunt aranjați în perechi. În mediile nutritive lichide, ele formează adesea lanțuri scurte, asemănătoare cu streptococii. Prevmococii sunt imobili, nu au spori, formează o capsulă în corp care înconjoară ambii coci. Capsula conține o substanță rezistentă la căldură antifagină (care protejează pneumococul de fagocitoză și acțiunea anticorpilor). Când cresc pe medii nutritive artificiale, pneumococii își pierd capsula. Pneumococii sunt gram pozitivi. Bacteriile Gram negative se găsesc în culturile vechi.

cultivare. Pneumococii sunt anaerobi facultativi. Crește la o temperatură de 36-37 ° C și un pH de 7,2-7,4. Sunt pretențioși pe medii, deoarece nu pot sintetiza mulți aminoacizi, prin urmare cresc numai pe medii cu adaos de proteine native (sânge sau ser). Pe agar cu ser se formează colonii mici, delicate, destul de transparente. Pe agar cu sânge cresc colonii umede gri verzui, înconjurate de o zonă verde, care este rezultatul conversiei hemoglobinei în methemoglobină. Pneumococii cresc bine în bulion cu adaos de glucoză 0,2% și în bulion cu zer. Creșterea în medii lichide se caracterizează prin turbiditate difuză și sedimente prăfuite la fund.

Proprietăți enzimatice. Pneumococii au o activitate zaharolitică destul de pronunțată. Ele descompun: lactoza, glucoza, zaharoza, maltoza, inulina cu formarea de acid. Nu fermentați manitolul. Proprietățile lor proteolitice sunt slab exprimate: coagulează laptele, nu lichefiază gelatina și nu formează indol. Pneumococii se dizolvă în bilă. Scindarea inulinei și dizolvarea în bilă este o caracteristică importantă de diagnostic care distinge Streptococcus pneumoniae de Streptococcus pyogenes.

factori de patogenitate. Pneumococii produc hialuronidază, fibrinolizină etc.

formarea de toxine. Pneumococii produc endotoxină, hemolizină, leucocidină. Virulența pneumococilor este, de asemenea, asociată cu prezența antifaginei în capsulă.

Structura și clasificarea antigenică. În citoplasma pneumococilor există un antigen proteic comun întregului grup, iar în capsulă există un antigen polizaharidic. Conform antigenului polizaharidic, toți pneumococii sunt împărțiți în 84 de serovari. Serovarii I, II, III sunt cei mai frecventi agenți patogeni la om.

Rezistenta mediului. Pneumococii aparțin grupului de microorganisme instabile. O temperatură de 60 ° C le distruge în 3-5 minute. Sunt destul de rezistente la temperaturi scăzute și uscare. În sputa uscată, acestea rămân viabile până la 2 luni. Pe un mediu nutritiv, ele rămân nu mai mult de 5-6 zile. Prin urmare, la cultivare, este necesar să se facă reînsămânțare la fiecare 2-3 zile. Solutii conventionale de dezinfectanti: 3% fenol, sublimati la o dilutie de 1:1000 le distrug in cateva minute.

Pneumococii sunt deosebit de sensibili la optochin, care îi omoară la o diluție de 1:100.000.

Susceptibilitatea animalelor. Oamenii sunt gazda naturală a pneumococilor. Cu toate acestea, pneumococii pot provoca boli la viței, miei, purcei, câini și maimuțe. Dintre animalele experimentale, șoarecii albi sunt foarte sensibili la pneumococ.

Surse de infecție. O persoană bolnavă și un purtător de bacterii.

Căi de transmisie. În aer, poate fi în aer.

poartă de intrare. Membrana mucoasă a tractului respirator superior, a ochilor și a urechii.

Boli la oameni. Pneumococii pot provoca boli purulent-inflamatorii de diferite localizari. Specific pneumococilor sunt:

1) pneumonie lobară;

2) ulcer târâtor al corneei;

Cea mai frecventă boală este pneumonia croupoasă, care afectează unul, mai rar doi sau trei lobi ai plămânului. Boala este acută, însoțită de febră mare, tuse. De obicei se termină critic.

Imunitate. După boală, rămâne imunitatea instabilă, deoarece pneumonia se caracterizează prin recidive.

Prevenirea. Se reduce la măsuri sanitare și preventive. Profilaxia specifică nu a fost dezvoltată.

Tratament. Se folosesc antibiotice - penicilina, tetraciclina etc.

întrebări de testare

1. Morfologia pneumococilor. Cultivare și proprietăți enzimatice.

2. Ce factori determină patogenitatea pneumococilor și ce protejează pneumococii de fagocitoză?

3. Care sunt principalele porți ale infecției pneumococice. Ce boli sunt cauzate de pneumococi?

Cercetare microbiologică

Scopul studiului: detectarea pneumococului.

Material de cercetare

1. Flegmă (pneumonie).

2. Mucus din faringe (amigdalita).

3. Secreție din ulcer (ulcer târâtor al corneei).

4. Secreții din ureche (otita medie).

5. Pus (abces).

6. punctat pleural (pleurezie).

7. Sânge (suspect de sepsis).

1 (Este mai bine să luați spută de dimineață (cu pneumonie specifică, sputa are o culoare ruginită).)

Metode de cercetare de bază

1. Microscopic.

2. Microbiologic.

3. Biologic.

Progresul cercetării

proba biologica. Se emulsionează puțin (3-5 ml spută) într-un bulion steril, 0,5 ml din acest amestec se injectează intraperitoneal unui șoarece alb. După 6-8 ore, șoarecii prezintă semne ale bolii. În acest moment, pneumococul poate fi deja detectat în exudatul cavității abdominale. Exudatul se ia cu o seringă sterilă. Din el se fac frotiuri, colorate conform Gram și microscopate. Pentru a izola o cultură pură, exudatul este inoculat pe agar cu ser. Dacă șoarecele moare sau se îmbolnăvește, sângele este cultivat din inimă pe agar seric pentru a izola o cultură pură. Culturile sunt plasate într-un termostat.

O metodă accelerată pentru determinarea tipului de pneumococ(reacție de microaglutinare). 4 picături de exsudat din cavitatea abdominală a unui șoarece infectat sunt aplicate pe o lamă de sticlă. Ser aglutinant de tip I se adaugă la prima picătură, ser de tip II la a doua, tip III la a treia, soluție izotonică de clorură de sodiu (martor) la a patra.

Serurile de tip I și II sunt prediluate într-un raport de 1:10, iar serul de tip III - 1:5. Toate picăturile sunt agitate, uscate, fixate și colorate cu magenta diluată. Cu un rezultat pozitiv la una dintre picături, se observă agregarea microbiană (aglutinare).

A doua zi de cercetare

Culturile sunt îndepărtate din termostat, examinate, iar frotiurile sunt făcute din colonii suspecte. În prezența diplococilor lanceolați gram-pozitivi în frotiuri, se izolează 2-3 colonii pe o pantă de agar cu ser pentru a obține o cultură pură. Culturile sunt plasate într-un termostat. Frotiurile sunt făcute din bulion, colorate cu Gram și microscopate.

A treia zi de cercetare

Culturile sunt îndepărtate din termostat. Verificați puritatea culturii - faceți frotiuri, colorație Gram și microscop. Dacă în cultura izolată sunt prezenți diplococi lanceolați Gram-pozitivi, cultura izolată este identificată prin inoculare:

1) pe mediul Hiss (lactoză, glucoză, zaharoză, maltoză), însămânțarea se efectuează în mod obișnuit - prin injectare în mediu;

2) pe mediu cu inulină;

3) pe mediu cu optochin;

4) puneți o probă cu bilă.

Testul la inulină. Cultura studiată este însămânțată pe un mediu nutritiv care conține inulină și tinctură de turnesol și plasată într-un termostat. După 18-24 de ore, recoltele sunt îndepărtate din termostat. În prezența pneumococilor, mediul devine roșu (streptococii nu schimbă consistența și culoarea mediului).

Determinarea sensibilității la optochin. Cultura izolată este însămânțată pe agar sânge 10% care conține optochină 1:50.000. Pneumococii, spre deosebire de streptococi, nu cresc pe medii care conțin optochină.

Test biliar. 1 ml din cultura de bulion studiată se toarnă în tuburi de aglutinare. La unul dintre ele se adaugă o picătură de bilă de iepure, a doua eprubetă servește drept control. Ambele eprubete sunt plasate într-un termostat. După 18-24 de ore, apare liza pneumococilor, care se exprimă în curățarea unui bulion tulbure. În control, suspensia rămâne tulbure.

O probă cu bilă poate fi plasată pe un mediu nutritiv dens. Pentru a face acest lucru, se aplică un grăunte de bilă uscată pe o colonie de pneumococi cultivați în agar și plăci de ser - colonia se dizolvă - dispare.

A patra zi de cercetare

Rezultatele sunt înregistrate (Tabelul 26).

Notă. la - descompunerea carbohidraților cu formarea acidului.

În prezent, metodele de cercetare serologică (RSK și RIGA) sunt utilizate pe scară largă pentru determinarea anticorpilor streptococici. Determinarea grupului și a serovarului culturii izolate se realizează folosind anticorpi fluorescenți.

Determinarea virulenței pneumococice. Cultura zilnică în bulion de pneumococ este diluată cu 1% apă peptonă de la 10-2 la 10-8, 0,5 ml din fiecare diluție se administrează la doi șoareci albi. Cultura care a provocat moartea șoarecilor la o diluție de 10 -7 este apreciată ca virulentă, la o diluție de 10 -4 -10 -6 este considerată moderat virulentă. Cultura care nu a provocat moartea șoarecilor este avirulentă.

întrebări de testare

1. Ce metode de izolare a unei culturi pure de pneumococi cunoașteți?

2. Care animal este cel mai susceptibil la pneumococ?

3. Ce reacții se pun cu exudatul unui șoarece infectat și în ce scop?

4. Din ce reprezentanți ai cocilor piogeni ar trebui diferențiat pneumococul și prin ce test?

5. Cum se determină virulența pneumococilor?

Exercițiu

Întocmește o schemă de examinare a sputei, indicând etapele acesteia pe zi.

Medii nutritive

Agar seric(vezi capitolul 7).

bulion de zer(vezi capitolul 7).

agar cu sânge(vezi capitolul 7).

Şuierat media(uscat).

Mediu de testare inulină. La 200 ml apă distilată se adaugă 10 ml ser bovin inactivat, 18 ml tinctură de turnesol și 3 g inulină. Sterilizați cu abur curgător la 100°C timp de 3 zile consecutive. Bulion de bilă (vezi capitolul 7).

CATEGORII

Screening

Ecografia extremităților

Tipuri de ultrasunete

ecografie abdominală

ecografie toracică

ARTICOLE POPULARE

	Cât timp durează până când dexametazona începe să acționeze?
	Mexidol comprimate cum să luați înainte sau după masă
	Postinor - instrucțiuni de utilizare
	Puțin sânge în organism - cauze, simptome, tratament Încetiniți absorbția fierului
	Pont du Gard: cel mai înalt apeduct roman antic din lume Monumentul de arhitectură și istorie a Franței®

2022 "kingad.ru" - examinarea cu ultrasunete a organelor umane