Metody helmintologiczne. Podstawowe metody badań pierwotniaków

Najprostsze dzielą się na 4 klasy:

Po otorbieniu drobnoustrój przybiera zaokrąglony kształt i zostaje pokryty powłoką ochronną. W postaci torbieli pierwotniaki stają się mniej podatne na niekorzystne czynniki środowiskowe.

Badania mogą obejmować:

Notatka:Istnieje wiele odmian diagnostyki, rozważymy te typy, które są najczęstsze w klinicznej praktyce laboratoryjnej.

Prywatne rodzaje diagnostyki

W każdym konkretnym przypadku asystent laboratoryjny ma za zadanie znaleźć określony patogen, czasem obok głównego można znaleźć inne.

Istnieje 6 gatunków tego drobnoustroju, które mogą żyć w jelicie człowieka. Znaczenie kliniczne ma jedynie ameba czerwonkowa występująca w postaci wegetatywnej oraz w postaci torbieli.

Dodatkowo stosowane są metody immunologiczne:

• pośrednia immunofluorescencja;
• aglutynacja pośrednia (PHA);
• promieniowa immunodyfuzja.

Notatka: metody serologiczne nie mają charakteru informacyjnego i są stosowane jedynie jako dodatek do głównych w przypadkach wątpliwych.

Diagnoza rzęsek (rzęsek)

Patogeniczną formą drobnoustrojów tego rodzaju są balantidia. Jest to drobnoustrój wywołujący balantidozę – chorobę, której towarzyszy wrzodziejący proces jelita grubego. Czynnik sprawczy znajduje się w rodzimym rozmazie w postaci postaci wegetatywnej i torbieli. Materiał do wymazu (kał i śluz) pobierany jest podczas badania sigmoidoskopowego i wysiewany na specjalne podłoża.

Diagnostyka wiciowców (leiszmania, giardia, trypanosomy, trichomonady)

Leiszmania, trypanosoma, giardia, trichomonady są niebezpieczne dla ludzi.

Leiszmania- drobnoustroje wywołujące leiszmaniozę badane są w rozmazach krwi, materiałach szpiku kostnego, zeskrobinach z nacieków skórnych. W niektórych przypadkach w diagnostyce Leishmania stosuje się wysiew na pożywce.

Trypanosomy- Czynniki wywołujące śpiączkę (trypanosomatoza amerykańska / afrykańska lub choroba Chagasa).

Wariant afrykański jest określany w początkowym okresie w badaniu krwi obwodowej. Drobnoustroje patologiczne w czasie progresji choroby znajdują się w materiale nakłuć węzłów chłonnych, w zaawansowanych stadiach - w płynie mózgowo-rdzeniowym.

Aby zdiagnozować trypanosomy w przypadku podejrzenia choroby Chagasa, materiał testowy jest badany pod mikroskopem w małym powiększeniu. W takim przypadku rozmazy i gruba kropla są wstępnie zabarwione.

Trichomonas(jelitowe, doustne) są wykrywane przez mikroskopię materiałów pobranych z dotkniętych błon śluzowych.

Identyfikacja sporozoanów (zarodźce malarii, czynnik wywołujący kokcydozę itp.)

Najczęstszym i najbardziej niebezpiecznym gatunkiem dla ludzi jest plasmodium malarii, które ma 4 główne odmiany patogenu: czynnik wywołujący malarię trzydniową, malarię czterodniową, malarię tropikalną i malarię owalną.

Rozwój płciowy Plasmodium (sporogonia) ma miejsce u komarów Anopheles. Bezpłciowy (schizogonia tkankowa i erytrocytowa) - w tkance wątroby i ludzkich erytrocytach. Te cechy cyklu życiowego należy wziąć pod uwagę podczas diagnozowania malarii plazmodium.

Tak więc we krwi nowo chorego pacjenta można znaleźć komórki zarodkowe cyklu sporogoni. Ale u szczytu ataków malarii schizonty pojawiają się we krwi w dużych ilościach.

Ponadto w różnych fazach gorączki malarii pojawiają się różne formy zarodźca:

• w okresie chłodu krew jest wypełniona merozoitami, rodzajem schizontów;
• na wysokości temperatury trofozoity w kształcie pierścienia gromadzą się w erytrocytach;
• spadek temperatury charakteryzuje się przewagą trofozoitów ameboidalnych;
• w okresach normalnego stanu krew zawiera dorosłe postacie schizontów.

Badanie czynnika wywołującego malarię (malaryczne plasmodium) przeprowadza się w rozmazie i grubej kropli.

Notatka:diagnoza malarii w badaniu rozmazów i gęstych kropli krwi jest czasami błędna. Płytki krwi w niektórych przypadkach mogą być błędnie zaklasyfikowane jako patogen malarii. Również fragmenty leukocytów i innych komórek czasami symulują plazmodium.

Podstawowe metody badań pierwotniaków

Przyjrzyjmy się pokrótce najczęstszym metodom badawczym obecności pierwotniaków.

Diagnostyka pierwotniaków na podstawie wymazu natywnego i wymazu barwionego płynem Lugola (w kale)

Lek jest przygotowywany z emulsji kału w roztworze izotonicznym. Na szkiełko nanosi się dwie krople chlorku sodu i płyn Lugola. Badany materiał dodaje się do obu kompozycji drewnianym patyczkiem i po przykryciu szkłem ogląda się pod mikroskopem w różnych rozdzielczościach.

Według niektórych znaków znalezione pierwotniaki są rejestrowane. Dla dokładności przygotowuje się 2-3 preparaty z jednego materiału. W przypadkach wątpliwych analizę powtarza się kilka razy w ciągu 2-3 tygodni.

Metoda może wykryć formy wegetatywne i torbielowate:

• lamblia;
• balantidia;
• ameba czerwonkowa.

Wraz z formami patogennymi określa się również niepatogenne pierwotniaki. Zdrowi nosiciele mają również formy luminalne i torbielowate.

Ważny:badania w celu uniknięcia nieścisłości i błędów należy przeprowadzać wielokrotnie.

Wynik diagnozy pierwotniaków metodą natywnego i barwionego rozmazu powinien zawierać opis postaci patogenu (przezroczysty, torbiel, tkanka).

Wymagania badawcze:

• materiał pobrany do analizy (płynny kał) jest badany nie później niż 30 minut po wypróżnieniu;
• uformowany kał należy zdiagnozować w ciągu 2 godzin po wypróżnieniu;
• materiał nie powinien zawierać zanieczyszczeń (środki dezynfekujące, woda, mocz);
• do pracy z materiałem używane są wyłącznie patyczki drewniane, szklane nie nadają się ze względu na ślizganie się śluzu;
• Patyczki należy spalić natychmiast po użyciu.

Metoda konserwatorska (badanie kału) w diagnostyce pierwotniaków

Badanie przeprowadza się poprzez utrwalenie pierwotniaków środkiem konserwującym. Różnica między tą metodą a poprzednią polega na tym, że konserwanty pozwalają zachować lek przez długi czas.

Używane konserwanty:

• Kurhan. Zawiera składniki konserwujące: 0,7 ml chlorku sodu, 5 ml formaliny, 12,5 ml 96% alkoholu, 2 g fenolu i 100 ml wody destylowanej. Skład barwiący: 0,01% roztwór tioniny (lazurowy).
• Rozwiązanie Safarliewa. Skład: 1,65 g siarczanu cynku, 10 ml formaliny, 2,5 g krystalicznego fenolu, 5 ml kwasu octowego, 0,2 g błękitu metylenowego, 100 ml wody. Ten konserwant stosuje się w przypadkach, gdy materiał musi być przechowywany dłużej niż miesiąc.

Puste butelki napełnia się konserwantem, przenosi się do nich materiał w proporcjach 3:1, a następnie w razie potrzeby dodaje się barwnik. Ocenę wyników przeprowadza się w badaniu 2-3 leków.

Metoda wzbogacania formaliną w eter (analiza na obecność pierwotniaków w kale)

Ta metoda diagnostyczna pozwala oddzielić i skoncentrować cysty pierwotniaków. Do analizy potrzebne są następujące składniki: formalina (10 ml), 0,85 g roztworu izotonicznego, woda destylowana, eter siarkowy, płyn Lugola.

Mieszanina biomateriału z wymienionymi cieczami jest mieszana i odwirowywana. Osad uzyskany na dnie probówki jest barwiony roztworem Lugola i badany na obecność cyst i form wegetatywnych.

Metoda wykrywania leiszmanii (rozmaz szpiku kostnego)

Do diagnozy leiszmaniozy stosuje się odczynniki: mieszaninę Nikiforowa (eter siarkowy i alkohol etylowy), bufor fosforanowy, Azur-eozynę według Romanowskiego.

Substancję szpiku kostnego po specjalnym przygotowaniu umieszcza się bardzo ostrożnie na szkiełku. Stosowany jest mikroskop z systemem zanurzeniowym.

W ostrym okresie choroby duża liczba leiszmanii znajduje się w punkcie.

Notatka:czasami komórki krwi mogą przypominać leczoną leiszmanię, dlatego bardzo ważne jest, aby technik laboratoryjny był uważny i miał wystarczające doświadczenie, aby samodzielnie badać.

Metoda wykrywania leiszmanii w rozmazie z nacieku skórnego

Wymagane odczynniki są podobne do poprzedniego testu.

Materiał do badań uzyskuje się z istniejącej zawartości guzka lub owrzodzenia. Skrobanie z podejrzeniem leiszmaniozy odbywa się bardzo ostrożnie skalpelem, bez krwi. Następnie preparat przygotowuje się na szkle. Dla dokładności uzyskanych wyników bada się jednocześnie kilka preparatów.

W przypadku obecności choroby, wśród makrofagów, fibroblastów i komórek limfoidalnych obecnych w badanym materiale, określa się również Leishmania.

Metoda izolacji czystej kultury Leishmania uzyskanej przez zeskrobywanie tkanek patologicznych

Dzięki tej metodzie diagnozowania najprostsze zeskrobiny tkanek umieszcza się w specjalnej pożywce, w której Leishmania aktywnie się rozmnaża.

Przed wykonaniem skrobania skórę ostrożnie traktuje się alkoholem, następnie w guzku wykonuje się nacięcie, z którego dna usuwa się zawartość i umieszcza w probówce z pożywką. Materiał pobierany jest kilka razy, po czym umieszczany jest w różnych probówkach. Następnie w termostacie w temperaturze 22-24 stopni odbywa się uprawa. Wyniki są oceniane pod mikroskopem. Metodę tę stosuje się, gdy inne, tańsze i szybsze metody diagnozowania pierwotniaków są nieskuteczne.

Możesz zobaczyć, jak testy na obecność pierwotniaków są w praktyce rozszyfrowywane przez kroplę krwi, oglądając recenzję wideo:

Lotin Alexander, felietonista medyczny

Stolce są badane na dwa sposoby:

1. Makroskopowy - znajdź robaki, ich głowy, segmenty, skrawki strobili. Małe porcje kału miesza się z wodą w płaskiej wannie lub na szalce Petriego i ogląda w dobrym świetle na ciemnym tle, używając w razie potrzeby szkła powiększającego. Wszystkie podejrzane formacje przenosi się pęsetą do innego kubka wody lub na szkiełko w kropli rozcieńczonej gliceryny.

Metodą podtrzymywanie Badaną porcję kału miesza się z wodą w szklanym cylindrze, po osadzeniu odsącza się górną warstwę wody. Powtarza się to kilka razy. Gdy ciecz staje się przezroczysta, jest ona odprowadzana, a osad oglądany na szalce Petriego.

2. Mikroskopowe - wykrywanie jaj i larw robaków. Istnieje wiele metod badawczych.

jeden). rozmaz natywny - najbardziej powszechna i dostępna technicznie metoda badawcza. Możesz znaleźć jaja i larwy wszystkich robaków. Jednak przy niewielkiej liczbie jaj nie zawsze można je znaleźć. Dlatego stosuje się metodę wzbogacania.

jeden). Metoda Fülleborga - Jest to metoda wzbogacania, polegająca na pojawieniu się jaj robaczycy w nasyconym roztworze NaCl (1,2 - gęstość; 400 g NaCl na 1 litr wody; 40% roztwór NaCl). Metoda jest bardziej skuteczna niż rozmaz natywny. 2-5 g kału umieszcza się w szklanych słojach i napełnia roztworem NaCl, miesza i po 45 minutach uformowany film usuwa się metalową pętlą, kroplę gliceryny umieszcza się na szklanym szkiełku. Zbadaj pod mikroskopem. Wadą metody jest opóźnione pojawianie się jaj różnych robaków, tasiemiec karłowaty - po 15-20 minutach, glista - 1,5 godziny, włosogłówka - 2-3 godziny.

2) Metoda Kalantarya - również metoda wzbogacania, ale stosuje się nasycony roztwór NaNO 3 (gęstość 1,38). Większość jaj unosi się na wodzie, nie jest wymagane badanie osadu. Wadą jest to, że jaja są długo przechowywane w roztworze, co prowadzi do tego, że niektóre jaja zaczynają pęcznieć i osadzać się na dnie, znikając z folii powierzchniowej.

3. Metoda Goryacheva - w oparciu o zasadę odkładania jaj, wykrywanie małych jaj przywr. Nasycony roztwór NaCl stosuje się jako roztwór i 3-4 ml roztworu kału ostrożnie nakłada się na wierzch. Po 15-20 godzinach jaja przywry opadają na dno. Ciecz jest spuszczana, sedymentowana na szkiełku podstawowym i pod mikroskopem.

4. Metoda skręcania Shulmana – do wykrywania larw robaków w kale. Zbadaj tylko świeżo wyizolowany kał. 2-3 g umieszcza się w szklanym słoiku i dodaje 5-krotną ilość wody, szybko miesza patyczkiem, nie dotykając ścianek słoika - 20-30 minut, następnie patyczek jest szybko usuwany i kropla płyn na końcu przenosi się na szkiełko i pod mikroskopem.

5. Metoda Bermana - opiera się na zdolności larw robaków do migracji w kierunku ciepła i służy do ich identyfikacji w kale.

6. Metoda Harady i Mori (metoda namnażania larw) i jest zalecany do badań w kierunku ankilostomozy. Metoda opiera się na fakcie, że jaja tęgoryjców pod wpływem ciepła i na wilgotnym filtrowanym papierze rozwijają się w larwy w kształcie nitkowaty, które można łatwo wykryć. Na środek paska przefiltrowanego papieru nakłada się 15 g kału, papier z kałem umieszcza się w słoiku, tak aby dolny koniec był zanurzony w wodzie, a górny koniec korkiem. Słoik trzyma się w termostacie w 28°C przez 5-6 dni. W tym czasie rozwijają się larwy nitkowate i schodzą do wody. Płyn bada się pod lupą. Jeśli jest to trudne do wykrycia, ciecz jest odwirowywana po zabiciu larw przez podgrzanie do 60 0. Technik laboratoryjny musi nosić rękawiczki.

7. Metody na enterobiazę – identyfikacja jaj owsików i bydlęcego tasiemca.

a) zdrapywanie z fałdów okołoodbytowych - za pomocą bawełnianego wacika ciasno nawiniętego na drewniany patyk i zwilżonego 50% roztworem gliceryny. W laboratorium wacik zmywa się 1-2 kroplami 50% wodnego roztworu glicerolu.

b) metoda lepkich roztoczy (metoda Grahama)

Taśmę klejącą nakłada się na fałdy okołoodbytowe, a następnie lepką warstwę na szkiełko podstawowe i pod mikroskopem.

C) skrobanie za pomocą patyczków do oczu (metoda Rabinovicha). Do zeskrobań z odbytu stosuje się szklane sztyfty do oczu, których najszersza część pokryta jest specjalnym klejem, który umożliwia przechowywanie jaj owsików.

Badanie krwi, żółci, plwociny i mięśni

Mikroskopia krwi - wykrywane są larwy filariae.

Badanie plwociny - jaja paraganim, larwy glisty, nekator, węgorek, elementy pęcherza echinokokowego.

Badanie mięśni - w przypadku podejrzenia włośnicy badane są mięśnie pacjenta lub zwłok, a także mięso, które rzekomo spowodowało zakażenie osoby. Na potrzeby trichinoskopii mięsień jest cięty na drobne kawałki i umieszczany w kompresorach, czyli dwóch szerokich, grubych szklankach, które miażdżą mięśnie, a larwy Trichinella występują w formie kapsułek – metoda kompresyjna.

Metoda trawienia - mięśnie przelewa się sztucznym sokiem żołądkowym (roztwór kwasu solnego i pepsyna). Mięśnie są trawione, a larwy są łatwo wykrywalne. Określanie intensywności inwazji: liczba larw do 200 na 1 g tkanki mięśniowej - umiarkowana intensywność inwazji; do 500 - intensywny; ponad 500 - inwazja superintensywna.

Metody serologiczne

Helmintologiczne metody badawcze. Metody diagnozowania robaczyc dzielą się na bezpośrednie, oparte na bezpośrednim wykrywaniu samych robaków lub ich fragmentów, a także larw i jaj robaków (metody badania kału, moczu, żółci i dwunastnicy, plwociny, krwi i tkanek, materiał uzyskany przez zeskrobanie z okolicy odbytu i przestrzeni podpaznokciowych) oraz pośredni, za pomocą którego wykrywane są wtórne zmiany zachodzące w organizmie ludzkim w wyniku działania robaków (badania składu morfologicznego krwi, immunologiczne metody diagnozowania robaczycy, badania rentgenowskie itp.). Spośród metod bezpośrednich najczęstsze są koprologiczne, które dzielą się na makro- i mikrohelmintoskopię. W niektórych przypadkach stosowane są specjalne metody.

Metody badawcze makrogelmitoskopii mające na celu poszukiwanie robaków lub ich fragmentów (skoleksów, segmentów, części strobil tasiemców). Służą do diagnozowania tych robaczycy, w których jaja nie są wydalane z ekskrementami pacjenta lub są wydalane w małych ilościach i nie zawsze (na przykład w przypadku enterobiazy, owsiki znajdują się w kale, przy teniidozie znajdują się segmenty).

Aby wykryć owsiki lub segmenty tasiemców w kale, kał jest oglądany gołym okiem. W diagnostyce różnicowej teniidoz zaleca się oglądanie kału rozcieńczonego wodą w oddzielnych małych porcjach w czarnych kuwetach fotograficznych lub na płytkach Petriego na ciemnym tle. Duże formacje podejrzane o fragmenty robaków są badane pod lupą pomiędzy dwoma szkiełkami. Jeżeli zgodnie ze wskazaniami klinicznymi sugeruje się wykrycie po leczeniu małych robaków lub głów tasiemców, wówczas podejrzane cząstki bada się pod lupą w kropli glicerolu i w razie potrzeby pod mikroskopem.

Metody badawcze mikrohelmintoskopii(jakościowe) mają na celu identyfikację jaj i larw robaków. Zastosuj metodę gęstego rozmazu z nakładką celofanową według Kato. Mieszanka Kato składa się z 6 ml 3% wodny roztwór zieleni malachitowej, 500 ml gliceryna i 500 ml 6% roztwór fenolu. Płyty Kato (hydrofilowy celofan pocięty na kawałki 20´ 40 mm) są zanurzone na 24 h do mieszanki Kato tak, aby przylegały do ​​siebie (3-5 ml Rozwiązanie Kato na 100 talerzy). 100 mg kał nakłada się na szkiełko, przykryte celofanową płytką nakrywkową według Kato i dociska tak, aby kał był rozmazany na szklanym szkiełku w celofanowej płytce. Rozmaz pozostawia się w temperaturze pokojowej do klarowania przez 40-50 min, a następnie oglądane pod mikroskopem. W sezonie gorącym, aby zapobiec wysychaniu preparatu, na talerz przygotowanego preparatu umieszcza się wilgotną gąbkę.

W celu pełnego wykrycia wszystkich rodzajów robaków, należy zastosować metodę Kato z celofanową płytką nakrywkową z grubym rozmazem w połączeniu z jedną z metod wzbogacania. Najczęstsze z nich to metoda Kalantaryan i metoda Fülleborna.

Metoda Kalantaryan: w kolbach z szeroką szyjką 100 ml dokładnie wymieszać szklanym prętem 5 G kałem, stopniowo dodając nasycony roztwór azotanu sodu (1 kg azotan sodu na 1 ja woda podczas gotowania) do krawędzi szklanki. Duże cząstki, które wypłynęły na powierzchnię, usuwa się za pomocą papierowej miarki. Szkiełko nanosi się na powierzchnię roztworu soli fizjologicznej (roztwór soli dodaje się, aż mieszanina w pełni zetknie się ze szkiełkiem). Po 20-30 min Szkiełko usuwa się i film ogląda pod mikroskopem. W przypadku braku tej soli można użyć nasyconego roztworu soli kuchennej wg Fholleborna (400 G sól w 1 ja wrzątek).

Ze względu na to, że jaja o dużym ciężarze właściwym (niezapłodnione jaja ascaridów, jaja przywr i duże tasiemce) nie unoszą się na wodzie, oprócz zbadania powierzchniowej warstwy cieczy, przy zastosowaniu metody Fülleborna konieczne jest obejrzenie 2-4 preparaty z osadu pod mikroskopem.

Specjalne laboratoryjne metody badawcze dla różnych robaczyc.

Aby wykryć fragmenty robaków, kał ogląda się nago, następnie miesza z wodą i bada w małych porcjach na szalce Petriego na ciemnym tle. Wszystkie podejrzane cząstki umieszcza się na szkiełku w kropli wody i bada pod lupą. Dzienną porcję można umieścić w cylindrze z dodatkiem 5-10-krotnej ilości wody. Po wymieszaniu naczynie pozostawia się do całkowitej sedymentacji zawieszonych cząstek. Warstwę powierzchniową cieczy spuszcza się i wlewa czystą wodę. Przemyty osad ogląda się w małych porcjach gołym okiem lub pod lupą. Do wykrywania jaj stosuje się metody badań mikroskopowych.

Metoda rozmazu natywnego. Niewielką ilość kału z różnych miejsc badanej porcji rozciera się na szkiełku w kropli 50% roztworu glicerolu, izotonicznego roztworu chlorku sodu lub wody. Mieszanina jest przykryta szkiełkiem nakrywkowym i oglądana pod mikroskopem.

Metoda pływania Fülleborna. Jedną część kału miesza się z 20 częściami nasyconego roztworu chlorku sodu (ciężar właściwy 1,18), dodawanych małymi porcjami. Duże cząstki, które wypłynęły na powierzchnię, są natychmiast usuwane, a mieszaninę pozostawia się na 45 minut. W tym czasie na powierzchnię wypływają jaja robaków, które mają niższy ciężar właściwy niż roztwór chlorku sodu. Warstewkę powierzchniową usuwa się za pomocą drucianej pętli o średnicy około 1 cm i przenosi na szkiełko w celu zbadania pod mikroskopem.

Metoda Kalantarya. Efektywność metody flotacyjnej zwiększa się poprzez zastąpienie chlorku sodu nasyconym roztworem azotanu sodu. W takim przypadku mieszaninę utrzymuje się przez 10-15 minut.

Warstwę powierzchniową utworzoną po osadzeniu mieszaniny kału roztworem chlorku sodu lub azotanu sodu można również usunąć za pomocą szkiełka szklanego. W tym celu słoik wypełniony po brzegi mieszaniną kału z roztworem soli przykrywa się szkiełkiem tak, aby jego dolna powierzchnia stykała się z płynem. Po osadzeniu szkło jest usuwane i szybko obracając powierzchnię, na której znajduje się film, ogląda się pod mikroskopem.

Skrobanie fałdów wkręgosłupów (w celu identyfikacji jaj owsików i onkosfery bydlęcego tasiemca) odbywa się rano przed zrobieniem toalety. Do zeskrobywania okolic odbytu używa się drewnianej szpatułki zanurzonej w wodzie lub 50% roztworze gliceryny. Otrzymany materiał przenosi się na szkiełko w kropli wody lub 50% roztworu glicerolu i ogląda pod mikroskopem. Łopatkę można zastąpić wilgotnym wacikiem, którym przeciera się okolice odbytu, a następnie dobrze spłukać wodą. Wodę odwirowuje się, a osad bada się pod mikroskopem.

Metoda Bermanna (do wykrywania larw). Metalową siatkę pokrytą 5-6 g kału mocuje się na szklanym lejku włożonym do stojaka. Na dolny koniec lejka zakładana jest gumowa rurka z zaciskiem. Lejek jest wypełniony wodą podgrzaną do temperatury t ° 50 °, tak aby dolna część siatki z kałem miała kontakt z wodą. Larwy aktywnie przemieszczają się do wody i gromadzą w dolnej części gumowej rurki. Po 4 godzinach ciecz zanurza się w probówkach wirówkowych, odwirowuje, a osad bada się pod mikroskopem.

Analiza plwociny, śluzu z nosa i wydzieliny z pochwy w celu wykrycia jaj przywr paragonimus płuc, larw ascaris i tęgoryjców, jaj owsików, fragmentów pęcherza bąblowicy. Badany fragment śluzu (wydzieliny) rozmazuje się na szkle i ogląda makroskopowo na czarno-białym tle, a następnie pod mikroskopem. Do badanego materiału można dodać 25% roztwór antyforminy, dokładnie wstrząsnąć i przytrzymać przez 1-1,5 godziny, aby rozpuścić śluz. Mieszaninę odwirowuje się, a osad bada się pod mikroskopem.

Analiza soku dwunastniczego i żołądkowego w celu wykrycia jaj przywry wątrobowej, tęgoryjców, larw Strongyloides. Wszystkie trzy porcje treści dwunastnicy otrzymane z odwirowuje się, a osad bada się pod mikroskopem. Zbadaj także i.

Badanie tkanek. W celu identyfikacji larw Trichinella, fragmenty biopsji mięśnia są ostrożnie dzielone na włókna, ściskane między szkłami kompresora (grube szkła ze śrubami) i badane pod mikroskopem z zacienionym światłem. W celu identyfikacji cysticerci mięśnie rozwarstwia się za pomocą preparujących igieł, wyizolowany pęcherzyk oczyszcza się z otaczającej tkanki, ściska między dwoma szkiełkami i bada pod lupą.

Badanie krwi (w celu wykrycia larw filariae). Wisząca kropla jest badana na szkiełku nakrywkowym obszytym wazeliną. Możesz zmieszać 0,3 ml krwi z 10-krotną ilością 3% roztworu. Mieszaninę odwirowuje się, a osad bada się pod mikroskopem. W celu wzbogacenia preparatów dodaje się 3 ml 2% roztworu formaliny lub 5-krotną ilość płynu składającego się z 95 ml 5% roztworu formaliny, 5 ml kwasu octowego i 2 ml stężonego alkoholowego roztworu hematoksyliny do 1 ml krwi żylnej. Mieszaninę odwirowuje się, osad przemywa wodą destylowaną i bada pod mikroskopem. Aby rozróżnić różne typy filarii, badane są rozmazy barwione metodą Giemsy-Romanovsky'ego.

Metody diagnostyki immunologicznej. Zastosuj (aglutynację, wiązanie dopełniacza) i testy diagnostyczne alergiczne (patrz) z odpowiednim typem robaka.

Helmintologiczne metody badawcze. Ryż. Jaja robaków. 1-10 - jaja glisty (nicienie): 1 - 3 - glisty (1 - jajo zapłodnione, 2 - jajo zapłodnione bez płaszcza białkowego, 3 - jajo niezapłodnione); 4 - kocia glista; 5 - mięsożerne glisty; 5 - owsiki; 7 - bicz biczowy; 8 - tominks; 9 - tęgoryjca; 10 - trichostrongylid. 11-15 - jaja tasiemców (cestodów): 11 - tasiemiec bydlęcy; 12 - karzeł tasiemca; 13 - szczur tasiemiec; 14 - tasiemiec tykwy; 15 - szeroka wstążka. 16 - 24 - jaja przywr (przywry): 16 - przywry (przywry) japońskie; 17 - mocz przywr (przywr) - seksualny; 18 - przywry (schistosomy) Munson; 19 - przywry (parogonimus) płuc; 20 - przywry (opishorchis) syberyjski (koci); 21 - przywry (clonorchis) chińskie; 22 - przywry jelitowe (metagonimus); 23 - przywry (fasciolas) wątroby; 24 - lancetowate przywry (dikrocelium).

Skuteczną i wygodną metodą badań helmintologicznych jest badanie grubego rozmazu według Kato, którego istotą jest wykrycie jaj robaków w gęstej rozmazie kału, sklarowanej gliceryną i zabarwionej zielenią malachitową. Skład mieszaniny Kato to 6 ml 3% wodnego roztworu zieleni malachitowej, 500 ml gliceryny, 500 ml 6% roztworu fenolu. Roztwór jest stabilny i można go przechowywać w temperaturze pokojowej. W celu przygotowania preparatów na szkiełko, pokryte warstwą hydrofilowego celofanu starzonego w mieszaninie Kato przez 24 godziny, nanosi się kawałki kału wielkości grochu i dociska do szkła w celu równomiernego rozprowadzenia materiału. Rozmazy klarowane przez 40-60 minut są badane mikroskopowo. Wykryte jaja robaków są liczone, a ich przynależność gatunkową określają cechy morfologiczne. Metoda pozwala ujawnić jaja ascaris, włosogłówki, tasiemców, przywr, w mniejszym stopniu - tęgoryjca i tasiemca karłowatego.

Również szeroko stosowany metody wzbogacania. Zasadą metod flotacji jest zawieszenie kału w roztworze soli, który ma większą gęstość względną w porównaniu z jajami robaków, w wyniku czego unoszą się one na powierzchnię. Zawartość folii powierzchniowej bada się pod mikroskopem. Jako mieszaniny wzbogacające stosuje się roztwory: sól kuchenna - 400 g w 1 litrze wody (gęstość względna wg Fülleborn -1,18); azotan sodu - 1 kg na 1 litr wody (gęstość względna według Kalantaryana-1,38), azotan sodu - 900 gi azotan potasu - 400 g na 1 litr wody (gęstość względna według Brudastova i Krasnonosa-1,48). gotowane i chłodzone.
Do badań do szklanki lub szkła fajansowego dodaje się 5-10 g kału, dodaje się do niego 100-200 ml roztworu soli i dokładnie miesza. Następnie duże cząstki, które wypłynęły na powierzchnię, są usuwane drewnianą szpatułką lub szufelką wykonaną z papieru lub tektury, a szeroki szklany preparat jest natychmiast nakładany na folię powierzchniową, tak aby roztwór soli fizjologicznej i szklany preparat były całkowicie w kontakcie. Po 30-40 minutach sedymentacji mieszaniny, szkiełko wyjmuje się, umieszcza pod mikroskopem filmem do góry i dokładnie bada całą powierzchnię. Aby uniknąć wysychania, możesz dodać 2-3 krople 50% roztworu gliceryny. Folię powierzchniową można również usunąć za pomocą drucianej pętli. Wydajność metod flotacji wzrasta wraz ze wzrostem gęstości względnej roztworów soli. Za pomocą tych metod można wykryć jaja nicieni, tasiemców i przywr.

Do wykrywania jaj w kale stosuje się metodę sedymentacji Krasilnikowa.. Kał miesza się z 1% roztworem detergentu (proszek do prania Lotos itp.) w stosunku 1:10, aż powstanie zawiesina. Pod wpływem detergentu rozpuszczają się różne składniki kału (białka, tłuszcze, elementy tkankowe). Po 30 minutach zawartość probówki wytrząsa się przez 1-2 minuty, po czym odwirowuje przez 5 minut. Preparaty są przygotowywane z osadu i oglądane pod mikroskopem.
W warunkach polowych, a także podczas masowych badań populacji pod kątem inwazji robaków, wygodnie jest stosować metodę gęstego rozmazu Kato. W warunkach stacjonarnych podczas badania pacjentów preferowane jest stosowanie najskuteczniejszych metod flotacji. Stosując te metody podczas mikroskopii, wskazane jest liczenie znalezionych w preparacie jajeczek. Z zastrzeżeniem standardowej wagi lub objętości przyjętej do badania kału (na przykład 1 łyżeczka lub łyżka stołowa) i stałej pojedynczej objętości roztworów soli, można z grubsza ocenić intensywność inwazji. Ten zapis ilościowy może być przydatny w uzasadnieniu przepisanego leczenia i ocenie skuteczności odrobaczania. Ponadto do ustalenia intensywności infekcji można zastosować inne dokładniejsze metody ilościowe, w szczególności metodę Stolla.

Do diagnozy teniarhynchosis i enterobiasis zastosować metodę badania zeskrobin okołoodbytniczo-odbytniczych. Drewniana szpatułka nasączona 50% roztworem glicerolu służy do zeskrobania fałdów okołoodbytniczych rano przed wypróżnieniem wokół odbytu i dolnej części odbytnicy. Otrzymany materiał, oczyszczony szpatułką przy krawędzi szkiełka nakrywkowego, umieszcza się na szkiełku w kropli 50% roztworu glicerolu, przykrywa szkiełkiem nakrywkowym i bada pod mikroskopem. Można również zbadać pasek taśmy celulozowej, który najpierw dociska się stroną samoprzylepną do fałd odbytowych, a następnie umieszcza na szkiełku podstawowym i pod mikroskopem.

Wykrywanie larw nicieni w kale metodą Bermana. Metoda opiera się na właściwościach termotropowych larw. Do badań pobiera się 1 łyżkę stołową kału, umieszczaną w metalowej siatce lub siatce z kilku warstw gazy na drucianej ramie. Siatka montowana jest w lejku zamocowanym na statywie. Do lejka dołącza gumowa rurka z zaciskiem. Podnosząc oczko, lejek napełnia się wodą (temperatura +40°...+50°C) tak, aby dolna część oczka była zanurzona w wodzie. Larwy z kału aktywnie migrują do ciepłej wody i osadzając się gromadzą się w dolnej części lejka. Po 2-4 godzinach zacisk otwiera się, wodę umieszcza się w probówce wirówkowej i wiruje przez 2-3 minuty. Następnie supernatant odsącza się, osad przenosi się na szkiełko i ogląda pod mikroskopem, gdzie znajdują się ruchome larwy patogenu węgorzycy.

Metoda Harada i Mori pozwala na różnicowanie larw tęgoryjców i nekatorów. Larwy tęgoryjców hoduje się na bibule filtracyjnej. W tym celu 0,5 g świeżego kału pobranego od pacjenta nie później niż 1 godzinę po wypróżnieniu nakłada się na paski bibuły filtracyjnej o wymiarach 12X1,5 cm, pozostawiając oba końce paska czyste. Jeden koniec paska zanurza się w probówce, której czwarta część jest wypełniona wodą, a drugi jest zaciśnięty korkiem. Rurki umieszcza się w termostacie w temperaturze +26...+28°C. Larwy, które rozwinęły się z jaj, opadają wzdłuż bibuły filtracyjnej i osiadają na dnie probówki. Po 5-6 dniach pasek papieru usuwa się, a płyn pozostający w probówce bada się pod lupą lub odwirowuje. Osad powstały podczas wirowania bada się pod mikroskopem świetlnym. Zastosowanie zamiast probówek szklanych słoików czworościennych (rozmiar 15XYX7 cm), do których ścianek przymocowane są 4 paski papieru, zwiększa się wydajność analiz (GM Maruashvili i in., 1966).

Metody badań schistosomatozy . Badanie kału - porcję kału miesza się z 250 ml wody, przesącza przez 3 warstwy gazy do stożkowego naczynia wypełnionego do góry wodą. Po 30 minutach warstwę ciekłą odsącza się, do osadu dodaje się świeżą porcję wody. Osad przemywa się do uzyskania klarownego supernatantu i bada mikroskopowo.

Metoda larwoskopii - 20-25 g kału umieszcza się w kolbie Erlenmeyera ze szklaną rurką lutowaną z boku i mytą wodą z kranu. Następnie kolbę przykrywa się ciemnym papierem, pozostawiając lutowaną szklaną rurkę na świetle w temperaturze +25...+30°C. Wyklułe miracidia są skoncentrowane w menisku w bocznej rurce, gdzie można je zobaczyć przez szkło powiększające lub gołym okiem. Badanie moczu - 100 ml moczu zebranego między godziną 10 a 14 lub ustaloną porcję dobową, a następnie odwirowaną przy 1500 obr./min. Powstały osad nanosi się* na szkiełko i pod mikroskopem. WHO zaleca metodę filtrowania całej porcji moczu. Po filtracji filtry są traktowane formaliną lub podgrzewane (w celu zabicia jaj), a następnie zwilżane wodnym roztworem ninhydryny. W suszonych preparatach zarodki jaj nabierają fioletowego koloru.

Zastosowanie immunologiczne metody badawcze do diagnozowania schistosomatozy są trudne, ponieważ dorosłe schistosomy i ich jajeczka zawierają dużą liczbę antygenów, które wywołują odpowiedzi immunologiczne, które nie są specyficzne dla gatunku (D. Bradley, 1979).

W naszym kraju do formułowania reakcji immunologicznych w robaczycy wytwarza się szereg standardowych diagnostyki. Alergiczny test skórny na bąblowicę i alweokokozę, RLA z antygenem bąblowicy, RSK na zimno, reakcja wytrącania na zimno w różnych modyfikacjach (precypitacja pierścieniowa, precypitacja w probówkach lub naczyniach włosowatych, które są umieszczone z antygenami włośnicy, wągrzycy i migroascariasis) mają praktyczne zastosowanie aplikacja. Standardową diagnostykę do ustalenia powyższych reakcji serologicznych wykonują przedsiębiorstwa produkujące preparaty bakteryjne. Producent załącza szczegółowe instrukcje dotyczące zasad przechowywania, dat ważności leku oraz instrukcje stosowania odpowiednich antygenów wraz z techniką reakcji do produkowanych diagnostyk.

W ostatnich latach znacznie rozszerzyła się lista testów serologicznych stosowanych w diagnostyce robaczycy. W tym celu stosuje się następujące reakcje: RIGA, immunofluorescencja pośrednia (RIF), immunodyfuzja żelowa (RID), kontrimmunoelektroforeza (VIEF), REAMA. Reakcje te można stosować w przypadku glistnicy, toksokarozy, włośnicy, infekcji tęgoryjcami, filariozy, bąblowicy i alweokokozy, przywr, schistosomatozy, paragonimozy. Jednak dla tych reakcji w naszym kraju nie wydaje się standardowych badań diagnostycznych, a technika ich ustawiania nie jest uregulowana. Osobne laboratoria, głównie naukowe, przygotowują własne specyficzne antygeny i wykorzystują je w różnych modyfikacjach. Opis tych metod jest szeroko prezentowany w literaturze i nie jest ściśle ujednolicony. Interpretacja danych z testów immunologicznych powinna opierać się na badaniu dynamiki odpowiedzi immunologicznej, z uwzględnieniem poziomu swoistości i czułości każdego zastosowanego testu serologicznego. Dlatego przy diagnozie, a także podczas badań seroepidemiologicznych populacji, wskazane jest zastosowanie kilku najbardziej wrażliwych reakcji. Z tych pozycji dobrze sprawdziły się reakcje VIEF i REMA, które wyróżniają się wysoką czułością i dość wysoką specyficznością (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negryanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A. Ya Łysenko, 1978 itd.). Skuteczność REAMA została przetestowana w amebiazie, leiszmaniozie, trypanosomatozie i toksoplazmozie (GA Ermolin, 1980).