Analisi per la sifilide ELISA - decodifica dell'analisi. Norma e deviazioni

In connessione con lo sviluppo delle tecnologie cellulari, della biologia molecolare, della genetica, della fisica, della chimica e di una serie di altre discipline high-tech, vengono introdotti nella pratica quotidiana nuovi metodi ad alta precisione e high-tech. Queste tendenze interdisciplinari interessano sia il campo delle conoscenze mediche che le aree correlate dei problemi biologici e biochimici. Negli ultimi dieci anni, un metodo di diagnostica clinica di laboratorio chiamato saggio immunoenzimatico si è diffuso e introdotto nella pratica di massa.

In generale, le tecnologie delle reazioni enzimatiche e radiologiche immunologiche sono state ampiamente utilizzate nella tipizzazione di cellule, colture cellulari e vari tessuti dall'inizio degli anni '80. Tuttavia, questi metodi erano molto laboriosi, non unificati, non standardizzati, il che ne precludeva l'uso per scopi medici e diagnostici su larga scala. Solo laboratori ristretti, ad alta intensità di conoscenza e altamente specializzati hanno utilizzato tali metodi.

Tuttavia, con lo sviluppo della tecnologia, della microtecnologia e della produzione di vari materiali biopolimerici, è diventato possibile produrre kit di immunodosaggi enzimatici già pronti che possono essere utilizzati dai laboratori delle istituzioni mediche generali. L'ELISA è ampiamente utilizzato per diagnosticare tutti i tipi di infezioni (clamidia, sifilide, citomegalovirus, toxoplasmosi, herpes, ecc.), sia acute che croniche, nonché forme latenti che si manifestano senza sintomi clinici.Questo metodo viene utilizzato anche per controllare le malattie croniche . Proviamo a capire che tipo di metodo è, e quali principi lo sottendono?

Componenti del test immunoenzimatico - Reazione immunitaria e reazione enzimatica

Il test immunoenzimatico, come suggerisce il nome, è costituito da due diversi componenti: una risposta immunitaria e una reazione enzimatica. La reazione immunitaria produce il legame di molecole biologiche, elementi della cellula o del microrganismo, che stanno effettivamente cercando di rilevare, e la reazione enzimatica consente di vedere e misurare il risultato della reazione immunologica. Cioè, la risposta immunitaria fa parte di una tecnica complessa che rileva effettivamente il microbo desiderato. E la reazione enzimatica è quella parte di una tecnica complessa che consente di tradurre il risultato di una reazione immunitaria in una forma visibile all'occhio e accessibile per la misurazione con metodi chimici di routine. Sulla base di questa struttura del metodo immunoenzimatico, analizzeremo entrambe le parti separatamente.

Reazione immunitaria, che cos'è? Che cos'è un anticorpo o un antigene?

Che cos'è una risposta immunitaria? Cos'è un antigene?
Prima di tutto, diamo un'occhiata a quali sono le reazioni immunitarie. reazioni immunitarie- Queste sono reazioni specifiche di legame di un antigene a un anticorpo con la formazione di un immunocomplesso. Cosa significa? Sulla superficie di ogni cellula di qualsiasi organismo ci sono strutture speciali chiamate antigeni. Gli antigeni in generale sono molecole che trasportano informazioni su una cellula (simili alle informazioni sul badge di una persona, che indica i dati di base di questa persona).

Antigeni individuali e di specie: che cos'è? Perché sono necessari questi antigeni?

A disposizione antigeni individuali, cioè inerente solo a questo particolare organismo. Questi antigeni individuali sono diversi per tutte le persone, alcuni sono simili tra loro, ma comunque diversi. In natura non esistono due copie identiche di antigeni individuali!

Il secondo tipo principale di antigeni è antigeni di specie, cioè inerente a qualsiasi specie particolare di esseri viventi. Ad esempio, gli esseri umani hanno il proprio antigene di specie comune a tutti gli esseri umani, i topi hanno il proprio antigene di specie di topo e così via. Sulla superficie di ogni cellula è necessariamente presente un antigene specifico e individuale.

L'antigene della specie viene utilizzato dalle cellule del sistema immunitario per identificare "amico o nemico".

Come avviene il riconoscimento dell'antigene?

Una cellula immunitaria si lega a una cellula sospetta ed effettua l'identificazione precisamente da parte di un singolo antigene. Nella memoria della cellula immunitaria, viene "registrato" l'aspetto del "suo antigene". Pertanto, se l'antigene di una cellula sospetta corrisponde alla descrizione "proprio antigene", questa cellula del proprio corpo non rappresenta un pericolo. Quindi la cellula immunitaria "si scioglie" e se ne va. E se l'antigene non corrisponde alla descrizione di "proprio", allora la cellula immunitaria identifica questa cellula come "estranea", e quindi potenzialmente pericolosa per l'intero organismo. In questo caso, la cellula immunitaria non si "sbarazza" ma inizia a distruggere l'oggetto pericoloso. L'accuratezza di tale riconoscimento immunologico è sorprendente: 99,97%. Non ci sono quasi errori!

Che cos'è un anticorpo, immunocomplesso?
Cos'è un anticorpo?

Un anticorpo è una molecola speciale situata sulla superficie di una cellula immunitaria. È l'anticorpo che si lega agli antigeni della cellula sospetta. Inoltre, l'anticorpo trasmette informazioni all'interno della cellula, dove avviene l'identificazione, e riceve un segnale di ritorno di due tipi, "auto" o "alieno". Al segnale "proprio", l'anticorpo distrugge il legame con l'antigene e rilascia la cellula.

Cos'è un immunocomplesso?
Con il segnale “alieno”, la situazione si svolge diversamente. L'anticorpo non interrompe la connessione con l'antigene, ma al contrario, inviando segnali specifici, provoca il "rinforzo". Biologicamente, ciò significa che altri anticorpi situati in un'altra parte della cellula iniziano a spostarsi nell'area da cui proviene il segnale di pericolo e formano anche un legame tra loro e l'antigene catturato. Alla fine, l'antigene risulta essere circondato su tutti i lati e saldamente attaccato e viene chiamato un tale complesso antigene + anticorpo immunocomplesso. Da questo momento inizia l'utilizzo dell'antigene. Ma ora non siamo interessati ai dettagli del processo di neutralizzazione dell'antigene.

Tipi di anticorpi (IgA, IgM, IgG, IG D, IgE)
Gli anticorpi sono strutture proteiche che, di conseguenza, hanno un nome chimico, che è usato come sinonimo della parola anticorpo. Così, anticorpi = immunoglobuline.

Esistono 5 tipi di immunoglobuline (Ig), che si legano a diversi tipi di antigeni in diversi punti del corpo umano (ad esempio sulla pelle, sulle mucose, nel sangue, ecc.). Cioè, gli anticorpi hanno una divisione del lavoro. Queste immunoglobuline sono chiamate lettere dell'alfabeto latino - A, M, G, D, E e sono designate come segue: IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Nella diagnostica viene utilizzato un solo tipo di anticorpo, il più specifico per il microbo da determinare. Cioè, si verifica sempre il legame di questo tipo di anticorpo all'antigene da determinare. I più comunemente usati sono IgG e IgM.

È questo principio della risposta immunitaria (l'accuratezza unica e la specificità del riconoscimento dell'oggetto biologico da determinare) che sta alla base del test immunoenzimatico Grazie all'elevata precisione degli anticorpi nel riconoscimento degli antigeni, l'accuratezza dell'intero metodo immunoenzimatico è anche il più alto.

reazione enzimatica

Cos'è una reazione enzimatica? Che cos'è l'affinità, il substrato e il prodotto di reazione?
Passiamo alla considerazione della reazione enzimatica nel lavoro del metodo immunoenzimatico.

Cos'è una reazione enzimatica?

Una reazione enzimatica è una reazione chimica in cui una sostanza viene convertita in un'altra dall'azione di un enzima. Viene chiamata la sostanza su cui agisce un enzima substrato. Viene chiamata una sostanza che si ottiene a seguito dell'azione di un enzima prodotto di reazione. Inoltre, la particolarità della reazione enzimatica è tale che un certo enzima agisce solo su un determinato substrato. Viene chiamata questa proprietà di un enzima di riconoscere il proprio substrato affinità.

Pertanto, ogni enzima esegue solo una reazione specifica ad esso. Ci sono moltissimi enzimi nel mondo biologico, così come reazioni enzimatiche. Nel test immunoenzimatico vengono utilizzate solo poche reazioni enzimatiche, non più di 10. In questo caso sono state scelte tali reazioni enzimatiche, i cui prodotti sono sostanze colorate. Perché i prodotti di una reazione enzimatica dovrebbero essere colorati? Poiché esiste un metodo chimico semplice per calcolare la concentrazione di una sostanza da una soluzione colorata - colorimetria.

Metodo di colorimetria - essenza e principio

Colorimetria utilizza la misurazione della densità del colore della soluzione e la concentrazione della sostanza viene calcolata dalla densità del colore In questo caso, un dispositivo speciale: un colorimetro misura la densità del colore della soluzione. Nella colorimetria sono possibili due varianti della dipendenza della densità del colore dalla concentrazione di una sostanza: questa è una dipendenza direttamente proporzionale o una dipendenza inversamente proporzionale. Con una relazione direttamente proporzionale, maggiore è la concentrazione della sostanza, più intensa è la densità del colore della soluzione. In una relazione inversamente proporzionale, maggiore è la concentrazione di una sostanza, minore è la densità del colore della soluzione. Tecnicamente, questo accade in questo modo: vengono prese diverse soluzioni con una concentrazione nota di una sostanza, viene misurata la densità di queste soluzioni e viene tracciato un grafico della dipendenza della concentrazione dalla densità del colore ( grafico di calibrazione).

Successivamente, viene misurata la densità di colore della soluzione, la cui concentrazione viene determinata e, in base al grafico di calibrazione, viene trovato il valore di concentrazione corrispondente al livello della densità di colore misurata della soluzione, avviene automaticamente.

Nel test immunoenzimatico, vengono spesso utilizzati i seguenti enzimi: perossidasi, fosfatasi alcalina, avidina.

Come vengono combinate le reazioni immunologiche ed enzimatiche nel test immunoenzimatico? Passiamo ora alla considerazione del test immunoenzimatico stesso. Quali passaggi include e cosa succede durante queste reazioni? Il test immunoenzimatico è diretto e indiretto.

Saggio immunoenzimatico diretto - fasi di attuazione

In un test immunoenzimatico diretto, vengono utilizzati anticorpi contro l'antigene rilevato, combinati con un'etichetta specifica. Questa etichetta specifica è il substrato della reazione enzimatica.

Attaccamento degli antigeni alla superficie del pozzetto e legame dell'antigene all'anticorpo

Come viene eseguito un test immunoenzimatico diretto? Il materiale biologico viene prelevato (sangue, raschiamenti dalle mucose, strisci) e collocato in pozzetti speciali. Il materiale biologico viene lasciato nei pozzetti per 15-30 minuti in modo che gli antigeni possano aderire alla superficie dei pozzetti. Inoltre, a questi pozzetti vengono aggiunti anticorpi contro l'antigene rilevato. Ciò significa che quando si rilevano antigeni, ad esempio la sifilide, vengono aggiunti anticorpi contro gli antigeni della sifilide. Questi anticorpi vengono prodotti industrialmente ei laboratori acquistano kit già pronti.Questa miscela di materiale di prova e anticorpi viene lasciata per qualche tempo (da 30 minuti a 4-5 ore) in modo che gli anticorpi possano trovare e legarsi al "loro" antigene. campioni di antigeni, più anticorpi si legheranno ad essi.

Rimozione degli anticorpi "extra".

Come indicato, gli anticorpi sono anche associati a un'etichetta specifica.Poiché gli anticorpi vengono aggiunti in eccesso, non tutti si legheranno agli antigeni e se non è presente alcun antigene nel campione, di conseguenza, nessun singolo anticorpo si legherà all'antigene desiderato. Per rimuovere gli anticorpi "extra", il contenuto dei pozzetti viene semplicemente versato. Di conseguenza, tutti gli anticorpi "extra" vengono rimossi e quelli che hanno contattato gli antigeni rimangono, poiché gli antigeni sono "incollati" alla superficie dei pozzetti. I pozzetti vengono risciacquati più volte con una soluzione speciale che consente di lavare via tutti gli anticorpi "extra".

Quindi inizia la seconda fase: la reazione enzimatica. La soluzione con l'enzima viene aggiunta ai pozzetti lavati e lasciata per 30-60 minuti. Questo enzima ha un'affinità per la sostanza (etichetta specifica) a cui sono legati gli anticorpi. L'enzima effettua una reazione, a seguito della quale questa specifica etichetta (substrato) viene convertita in una sostanza colorata (prodotto). Quindi la concentrazione di questa sostanza colorata si trova mediante colorimetria. Poiché questa etichetta specifica è associata agli anticorpi, significa che la concentrazione del prodotto di reazione colorato è uguale alla concentrazione degli anticorpi. E la concentrazione di anticorpi è uguale alla concentrazione di antigeni. Pertanto, come risultato dell'analisi, otteniamo la risposta, qual è la concentrazione del microbo o dell'ormone rilevato.

Ecco come funziona il test immunoenzimatico diretto. Tuttavia, il test immunoenzimatico indiretto è più comunemente usato oggi perché la sensibilità e l'accuratezza dell'indiretto è superiore a quella del diretto. Quindi, passiamo al test immunoenzimatico indiretto.

Saggio immunoenzimatico indiretto - fasi

Ci sono due fasi nel test immunoenzimatico indiretto. Durante la prima fase vengono utilizzati anticorpi non etichettati per gli antigeni rilevati e nella seconda fase vengono utilizzati anticorpi marcati contro i primi anticorpi non etichettati. Cioè, risulta non un legame diretto dell'anticorpo all'antigene, ma un doppio controllo: il legame degli anticorpi all'antigene, dopo di che il legame del secondo anticorpo al complesso anticorpo + antigene. Di norma, gli anticorpi per il primo stadio sono il topo e per il secondo stadio la capra.

Fissazione degli antigeni sulla superficie del pozzetto e legame dell'antigene con l'anticorpo non marcato
Oltre al test immunoenzimatico diretto, viene prelevato materiale biologico: sangue, raschiamenti, strisci. Il materiale biologico studiato viene introdotto nei pozzetti e lasciato per 15-30 minuti affinché gli antigeni aderiscano alla superficie dei pozzetti. Quindi, gli anticorpi non etichettati contro gli antigeni vengono aggiunti ai pozzetti e lasciati per un periodo di tempo (1-5 ore) in modo che gli anticorpi si leghino ai "loro" antigeni e formino un complesso immunitario ( primo stadio). Successivamente, gli anticorpi "extra", non legati vengono rimossi versando il contenuto dei pozzetti. Il lavaggio viene effettuato con una soluzione speciale per rimuovere completamente tutti gli anticorpi non legati.

Legame dell'anticorpo marcato all'antigene + complesso anticorpale non marcato
Successivamente, vengono prelevati i secondi anticorpi - etichettati, aggiunti ai pozzetti e nuovamente lasciati per un po' - 15-30 minuti ( seconda fase). Durante questo periodo, gli anticorpi marcati si legano al primo - non marcato e formano un complesso - anticorpo + anticorpo + antigene. Tuttavia, ai pozzetti vengono aggiunti in eccesso anticorpi sia marcati che non marcati. Pertanto, è necessario rimuovere nuovamente gli anticorpi "extra", già marcati che non si legavano agli anticorpi non marcati. Per fare ciò, ripetere la procedura per versare il contenuto dei pozzetti e lavare con una soluzione speciale.

Reazione enzimatica: la formazione di un composto colorato
Successivamente viene introdotto un enzima che effettua la reazione di conversione dell'"etichetta" in una sostanza colorata. Il colore si sviluppa entro 5-30 minuti. Quindi viene eseguita la colorimetria e viene calcolata la concentrazione della sostanza colorata. Poiché la concentrazione della sostanza colorata è uguale alla concentrazione degli anticorpi marcati e la concentrazione degli anticorpi marcati è uguale alla concentrazione degli anticorpi non marcati, che, a sua volta, è uguale alla concentrazione dell'antigene. Pertanto, otteniamo la concentrazione dell'antigene rilevato.
Tale doppio controllo sotto forma dell'uso di due tipi di anticorpi ha permesso di aumentare la sensibilità e la specificità del metodo di dosaggio immunoenzimatico. Nonostante l'allungamento del tempo di analisi e l'inclusione di fasi aggiuntive, queste perdite sono compensate dall'accuratezza del risultato. Questo è il motivo per cui attualmente la stragrande maggioranza dei metodi di dosaggio enzimatico sono immunodosaggi enzimatici indiretti.

Quali malattie vengono rilevate dal test immunoenzimatico?

Passiamo a considerare quali malattie e quali sostanze biologicamente attive vengono rilevate dal test immunoenzimatico. Le sostanze rilevate mediante test immunoenzimatico sono presentate nella tabella.

Ormoni e marker di malattie della tiroide	tiroperossidasi (TPO)
	tireoglobulina (TG)
	Ormone stimolante la tiroide (TSH)
	tiroxina (T4)
	Triiodotironina (T3)
	Tiroxina libera (T4)
	Triiodotironina libera (T3)
Diagnostica della funzione riproduttiva	ormone luteinizzante (LH)
	Ormone follicolo-stimolante (FSH)
	Prolattina
	Progesterone
	estradiolo
	Testosterone
	cortisolo
	Globulina legante gli steroidi (SHB)
	Alfafetoproteina (AFP)
marcatori tumorali	Gonadotropina corionica (CG)
	Antigene prostatico specifico (PSA)
	SA - 125
	SA - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15.3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1(M–20)
	Alveomucina
	K - catena
	L - catena
	Fattore di necrosi tumorale (TNFα)
	γ - interferone
	Antigene cancro-embrione (CEA)
Diagnosi delle malattie infettive

L'ELISA è un moderno studio di laboratorio, durante il quale vengono ricercati specifici anticorpi (o antigeni) nel sangue per malattie specifiche al fine di identificare non solo l'eziologia, ma anche lo stadio della malattia.

1. ricerca di anticorpi specifici per qualsiasi malattia infettiva;
2. ricerca di antigeni di eventuali malattie infettive;
3. studio dello stato ormonale del paziente;
4. esame per la presenza di malattie autoimmuni.

Come con qualsiasi metodo di diagnostica di laboratorio, ELISA ha i suoi vantaggi e svantaggi. I vantaggi del metodo includono:

1. elevata specificità e sensibilità del metodo (oltre il 90%);
2. la capacità di determinare la malattia e tracciare la dinamica del processo, ovvero confrontare la quantità di anticorpi in diversi intervalli di tempo;
3. la disponibilità e la rapidità di questo studio;
4. il metodo non invasivo di campionamento dei materiali non è uno studio;

Lo svantaggio del metodo è il fatto che durante l'analisi è possibile identificare non l'agente eziologico della malattia, ma solo la risposta immunitaria ad essa (anticorpi).

L'essenza del metodo ELISA

Esistono diversi tipi di ELISA: diretto, indiretto, metodo di blocco, competitivo. Tuttavia, in pratica, è più comunemente usato il test immunologico eterogeneo in fase solida o ELISA.

La base del test di immunoassorbimento enzimatico è la reazione immunitaria di un antigene e di un anticorpo con la formazione di un complesso immunitario, con conseguente cambiamento nell'attività enzimatica di etichette specifiche sulla superficie degli anticorpi.

In effetti, questo processo può essere suddiviso in più fasi:

1. sulla superficie dei pozzetti del sistema di analisi è presente un antigene purificato di un determinato agente patogeno. Quando viene aggiunto il siero del sangue dell'animale, si verifica una reazione specifica tra questo antigene e l'anticorpo desiderato;
2. inoltre, al pozzetto viene aggiunto uno speciale cromogeno (coniugato marcato con perossidasi). Si verifica una reazione enzimatica, che porta alla formazione di una sostanza colorata nel pozzetto della compressa. L'intensità del suo colore dipende dalla quantità di immunoglobuline (anticorpi) contenute nel siero dell'animale;
3. Segue la valutazione del risultato. Con l'aiuto di uno spettrofotometro multicanale, la densità ottica del materiale di prova viene confrontata con la densità ottica dei campioni di controllo ei risultati vengono elaborati matematicamente. La quantità di anticorpi in un paziente dipende direttamente dall'altezza della densità ottica di un dato pozzo.

Va ricordato: per ogni sistema di test vengono sviluppati indicatori individuali per tenere conto dei risultati, indicatori della norma e patologia ("valori di riferimento"). Questo dovrebbe essere preso in considerazione quando si valutano i risultati di ogni studio specifico.

Non è corretto interpretare i risultati di un laboratorio dai "valori di riferimento" di un altro laboratorio. Non è inoltre corretto confrontare tra loro i risultati di diversi laboratori.

Quando si valutano i risultati per infezioni specifiche, la classe degli anticorpi rilevati e il loro numero sono importanti. Non solo la questione dell'eziologia dell'infezione dipende da questo, ma anche lo stadio atteso della malattia (acuto, cronico), nonché la presenza di un'infezione attiva (acuta o esacerbazione di cronica) al momento dell'esame .

Qual è il momento approssimativo della comparsa degli anticorpi?

I primi anticorpi sono IgM. Possono essere rilevati 1-3 settimane dopo una possibile infezione, che caratterizza la fase acuta del processo infettivo. La seconda situazione della comparsa degli anticorpi IgM è un'esacerbazione di un processo cronico. Le IgM circolano in media per circa 3 mesi, poi il loro numero scompare gradualmente. Tuttavia, in alcuni pazienti, tracce di IgM possono essere rilevate entro 1-2 anni dall'infezione.

Dalla 4a settimana dopo l'infezione, iniziano a comparire gli anticorpi IgG. Nella maggior parte delle infezioni, il loro titolo aumenta gradualmente con un massimo in momenti diversi (in media, dopo 1,5-2 mesi), quindi il titolo rimane a un livello basso e indica l'immunità. In alcune malattie, il livello di IgG non è elevato.

Opzioni di rilevamento degli anticorpi

• Il rilevamento isolato di anticorpi IgM suggerisce un'infezione primaria.
• Il rilevamento simultaneo di IgM e IgG nel sangue è tipico per l'infezione primaria nei 2-3 mesi precedenti, nonché durante un'esacerbazione di una malattia cronica.
• Il rilevamento di IgG in isolamento può indicare sia l'immunità alla malattia che l'infezione cronica. Nella seconda situazione, contano sia la quantità di anticorpi (titolo) che la variazione di questo titolo nel tempo. Tipicamente, gli studi vengono effettuati a intervalli di 2-4-6 settimane.

L'analisi ELISA è una moderna tecnica per la diagnosi di laboratorio di un numero significativo di varie malattie. L'abbreviazione sta per test immunoenzimatico. L'essenza della tecnica è determinare il titolo (attività) degli anticorpi.

La tecnica ELISA sta guadagnando una notevole popolarità oggi. Viene utilizzato in medicina clinica per la diagnosi di varie patologie, nonché in studi sperimentali che richiedono un'accurata determinazione della concentrazione di vari composti nei mezzi studiati.

Il principio della tecnica ELISA

L'ELISA è una reazione immunologica. Si basa sull'aggiunta di anticorpi specifici
o antigeni nel mezzo di prova (il più delle volte il sangue di prova) con successiva determinazione enzimatica della concentrazione dei complessi antigene-anticorpo risultanti. Dalla concentrazione del complesso, si può giudicare il livello o l'attività dell'analita nel mezzo di prova.

La determinazione della concentrazione dei complessi antigene-anticorpo viene solitamente eseguita utilizzando apparecchiature speciali con il metodo cromatografico.

Indicazioni per l'esecuzione

L'analisi ELISA viene effettuata per diverse indicazioni, le principali in medicina clinica sono:

• Diagnosi di patologia infettiva con trasmissione prevalentemente sessuale (STI), che comprende clamidia, micoplasmosi, ureaplasmosi, tricomoniasi, mentre vengono rilevati anticorpi specifici contro l'agente infettivo.
• Diagnosi di malattie infettive di varia localizzazione per determinare lo stadio del processo patologico, principalmente nel processo di diagnosi dell'epatite virale parenterale e dell'HIV.
• Determinazione della concentrazione di ormoni per la diagnosi di varie patologie degli organi del sistema endocrino (ghiandole endocrine).
• Determinazione di vari composti per diagnosticare la causa dell'intossicazione del corpo in caso di avvelenamento, morsi di insetti o serpenti.

Con queste indicazioni mediche, viene eseguito un esame del sangue ELISA. Inoltre, questa tecnica viene utilizzata attivamente nella medicina sperimentale durante vari studi clinici durante lo sviluppo di nuovi farmaci, vaccini per l'immunoprofilassi.

Come si fa lo studio

Un esame del sangue ELISA viene effettuato in un laboratorio specializzato. In precedenza, per la sua attuazione, viene prelevato sangue venoso, solitamente dalla vena cubitale in un volume di 5-10 ml, che viene poi inviato al laboratorio. In media, il risultato dell'analisi può essere ottenuto il giorno successivo, che è un punto importante per la pronta nomina del trattamento dopo che è stata stabilita la diagnosi della malattia.

Come prepararsi per ELISA

Per ottenere risultati affidabili dello studio mediante dosaggio immunoenzimatico, è necessario seguire alcune semplici raccomandazioni preparatorie, che includono:

• Il giorno prima del test, dovresti smettere di mangiare cibi grassi (carne, carni affumicate) e alcol.
• Il materiale per la ricerca deve essere preso al mattino a stomaco vuoto.
• Il giorno dello studio è auspicabile evitare lo stress fisico e psico-emotivo.
• Prima dello studio, devi cercare di non fumare.

La maggior parte dei risultati falsi positivi ottenuti dal test immunoenzimatico sono dovuti all'attuazione impropria delle raccomandazioni preparatorie. Questo è nella maggior parte dei casi associato al consumo di cibi grassi, che portano ad un aumento della concentrazione di trigliceridi (grassi) nel plasma sanguigno, che riducono la specificità dell'ELISA.

Decifrare i risultati

L'analisi del sangue per gli anticorpi mediante ELISA ha 2 modifiche: determinazione qualitativa e quantitativa. In
determinazione qualitativa degli anticorpi, il risultato può essere positivo (vengono rilevati anticorpi, che indica la possibile presenza di un processo patologico causato dall'agente infettivo) o negativo (nessun anticorpi, che indica l'assenza di un processo infettivo).

L'assenza di anticorpi non è sempre un indicatore del 100% dell'assenza di un processo infettivo. Ciò è dovuto al fatto che dopo l'infezione, gli anticorpi non si formano immediatamente, ma per un certo periodo di tempo (almeno circa 2 settimane). Pertanto, per confermare l'assenza di infezione, l'ELISA può essere ripetuto dopo un po'.

Con l'ELISA quantitativo, viene determinato il titolo (attività) degli anticorpi, nonché le loro classi. Nella maggior parte dei casi, per la diagnosi di malattie infettive, vengono determinati gli anticorpi della classe IgG (immunoglobuline G) e IgM (immunoglobuline M), che si formano nel corpo a vari intervalli dopo l'infezione, quindi la decodifica del risultato dell'analisi può avere diversi significati:

• Un aumento dell'attività delle IgM e l'assenza di IgG sono la prova di un'infezione recente e di un decorso acuto del processo infettivo.
• Un aumento dell'attività di IgM e IgG è un'esacerbazione del processo infettivo nel suo decorso cronico e nell'infezione a lungo termine.
• L'elevata attività IgG e l'assenza di IgM è un decorso cronico del processo infettivo sullo sfondo di un'infezione di lunga data, dopo di che sono trascorsi più di sei mesi (il tempo necessario per la formazione di anticorpi di classe IgG).

In generale, l'interpretazione dei risultati dell'ELISA per ciascun processo infettivo ha determinate caratteristiche. Una determinazione più accurata della presenza di una malattia infettiva, così come lo stadio del suo decorso, viene effettuata da un medico.

L'ELISA è attualmente il metodo di scelta per la diagnosi della maggior parte delle malattie infettive. Sulla base dei risultati di tale studio, il medico ha l'opportunità di stabilire una diagnosi accurata e determinare lo stadio del corso del processo patologico per la nomina di un successivo trattamento adeguato ed efficace.

I moderni metodi diagnostici consentono in laboratorio di identificare una particolare malattia con l'aiuto di test speciali. Uno di questi dovrebbe includere il test immunoenzimatico, attraverso il quale è possibile confermare una diagnosi preliminare.

L'ELISA è uno dei metodi più efficaci e moderni per rilevare i disturbi associati a insufficienze immunitarie e ormonali, nonché i processi oncologici. Durante l'analisi nel sangue, possono essere rilevati anticorpi che vengono prodotti quando c'è un'infezione nel corpo. Data questa sfumatura, è possibile rilevare la malattia anche nella primissima fase del suo sviluppo.

Qual è la base della metodologia

I risultati dell'analisi ELISA si basano sulla ricezione di reazioni chimiche agli enzimi che fungono da segni di identificazione speciali per il riconoscimento degli anticorpi. Pertanto, durante le reazioni immunochimiche, gli anticorpi iniziano a interagire con alcuni antigeni. Tutto ciò dà motivo di affermare che i risultati falsi nella donazione di sangue per l'ELISA sono minimi.

Lo studio consente di determinare il numero di cellule immunitarie, le loro proprietà e la presenza degli anticorpi necessari

Un risultato positivo viene considerato quando viene rilevato il colore della soluzione. Il colore indica che gli antigeni interagiscono con l'anticorpo. Nel caso in cui non accada nulla di simile, il risultato è negativo.

Il test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) viene eseguito per una valutazione completa delle funzioni protettive del corpo. Durante lo studio vengono determinati il ​​numero e le proprietà delle cellule immunitarie, la presenza degli anticorpi necessari. L'analisi del sangue ELISA viene eseguita per diagnosticare malattie infettive, ematologiche, autoimmuni, immunodeficienze primarie e secondarie. Considera cos'è un esame del sangue mediante ELISA e quali indicazioni esistono per questo studio.

Cos'è

Un esame del sangue ELISA è un metodo di laboratorio che rileva anticorpi o antigeni in un campione di sangue. Questo studio viene utilizzato per rilevare il livello di immunoglobuline, complessi immunologici, ormoni.

Indicazioni per l'analisi

Per la nomina di un esame del sangue ELISA, ci sono le seguenti indicazioni:

• diagnosi di infezioni a trasmissione sessuale - ureaplasma, micoplasma, clamidia, trichomonas, sifilide;
• diagnosi di malattie virali - citomegalovirus, herpes, epatite, virus di Epstein-Barr;
• determinare il livello degli ormoni;
• diagnosi di malattie oncologiche;
• determinazione dell'immunodeficienza;
• diagnosi di allergie;
• esame completo preoperatorio prima del trapianto d'organo;
• valutazione dell'efficacia della terapia.

Principio del metodo

Il principio di funzionamento del metodo di dosaggio immunoenzimatico si basa sulla determinazione di specifici anticorpi proteici nel sangue: le immunoglobuline. Le immunoglobuline sono prodotte dal sistema immunitario umano quando gli antigeni (microrganismi estranei) entrano nel corpo. Queste molecole immunitarie si legano a una varietà di agenti infettivi nel corpo e li neutralizzano.

Le immunoglobuline hanno una caratteristica importante: la specificità. A causa di ciò, possono legarsi a un antigene specifico, formando un complesso antigene-anticorpo. Durante un esame del sangue ELISA, è questo complesso che viene determinato qualitativamente e quantitativamente.

Esistono cinque classi di immunoglobuline. Ma di solito vengono definite tre classi: immunoglobuline A, M, G. Questi anticorpi si accumulano nel corpo in momenti diversi dal momento dell'infezione.

• Immunoglobuline classe M (IgM) compaiono nel sangue per la prima volta il quinto giorno dal momento dell'infezione. Sono nel corpo per 5-6 settimane, quindi scompaiono dal flusso sanguigno. Gli anticorpi IgM indicano un periodo acuto della malattia o un'esacerbazione della malattia nel suo decorso cronico.
• Circa 3-4 settimane dopo l'infezione, le immunoglobuline compaiono nel sangue classe G (IgG). Possono esistere nel sangue umano per diversi mesi o addirittura anni. Secondo la decodifica dell'analisi del sangue ELISA, se in due campioni di sangue prelevati consecutivamente due settimane dopo, la quantità di immunoglobuline IgG aumenta, si parla di un'infezione o reinfezione in corso - reinfezione con la stessa infezione.
• Immunoglobuline classe A (IgA) può essere rilevato con questo metodo di ricerca 2-4 settimane dopo l'infezione o l'esacerbazione di una malattia infettiva. Di questi, solo il 20% circola nel sangue, il resto è secreto dalle mucose. Gli anticorpi IgA scompaiono dal flusso sanguigno 2-8 settimane dopo la distruzione degli agenti infettivi. La scomparsa di queste immunoglobuline significa una cura per l'infezione. Se, dopo la fine della malattia, viene determinata la presenza di anticorpi IgA nel sangue, la malattia è passata allo stadio cronico.

Preparazione per l'analisi

Il sangue umano viene spesso utilizzato per condurre un esame del sangue ELISA. Ma puoi anche esaminare il contenuto del corpo vitreo, il liquido cerebrospinale, il liquido amniotico.

Un campione di sangue per la ricerca viene prelevato dal paziente dalla vena cubitale. Si consiglia di donare il sangue a stomaco vuoto (devono trascorrere almeno 12 ore dal momento dell'ultimo pasto). È necessario informare il medico se il paziente sta assumendo farmaci, poiché alcuni di essi possono modificare il risultato dell'analisi. L'affidabilità dei risultati dello studio è influenzata dall'uso di alcol e droghe.

Decrittazione

Il modulo dei risultati di questa analisi indica un risultato positivo (+) o negativo (-) per ciascuna classe di immunoglobuline.

Considerare l'interpretazione di una possibile decodifica dell'analisi del sangue ELISA.

• Risultato negativo di IgM, IgG, IgA - mancanza di immunità alle infezioni.
• Risultato negativo IgM, IgA e IgG positivo - immunità post-infezione o post-vaccinazione.
• IgG, IgA e IgM positivi negativi o positivi sono un'infezione acuta.
• Un risultato positivo di IgM, IgG, IgA è un'esacerbazione di una malattia infettiva cronica.
• Un risultato IgM negativo e un risultato IgG, IgA negativo o positivo è un'infezione cronica.
• Risultato IgM negativo e nessuna IgG, IgA - recupero.

Vantaggi del metodo

Un esame del sangue ELISA ha molti vantaggi. I principali si possono distinguere:

• accuratezza relativamente alta (sensibilità);
• la possibilità di una diagnosi precoce;
• la capacità di tracciare la dinamica del processo infettivo;
• un alto livello di unificazione, che consente indagini di massa;
• un breve periodo di tempo necessario per ottenere il risultato dell'analisi;
• comodità nel lavoro;
• automazione di tutte le fasi di analisi;
• costo relativamente basso.

Screpolatura

Lo svantaggio del metodo ELISA è che a volte fornisce risultati falsi negativi o falsi positivi. Oltre agli errori tecnici durante lo studio, la causa di falsi risultati può essere il fattore reumatoide nel paziente, la presenza di malattie croniche (in cui vengono prodotti gli anticorpi), i disturbi metabolici e l'assunzione di determinati farmaci.

• ascariasi;
• trichinosi: l'analisi viene eseguita più volte, il livello massimo di anticorpi viene determinato a 4-12 settimane dall'infezione;
• cisticercosi;
• teniasi;
• fascioliasi: gli anticorpi sono determinati nella fase acuta della malattia;
• opisthorchiasis: eseguire la diagnosi differenziale tra le forme croniche e acute della malattia;
• giardiasi;
• leishmaniosi viscerale e cutanea;
• amebiasi;
• toxoplasmosi.

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