Tipi di laboratori secondo il loro scopo funzionale. Analisi di laboratorio: tipologie, condotta, obiettivi

La diagnostica di laboratorio è una delle aree più importanti della medicina, senza la quale è impossibile immaginare il lavoro dei medici. I dati ottenuti dopo gli esami consentono di diagnosticare in modo affidabile, nonché di valutare le condizioni generali del paziente e vedere l'efficacia del trattamento selezionato. Le analisi vengono eseguite da specialisti - medici di diagnostica di laboratorio.

Tipi di analisi

Per chiarire la diagnosi, il medico deve avere un quadro clinico completo. Comprende non solo la raccolta dei reclami, l'esame iniziale e la raccolta dell'anamnesi, ma anche la nomina di esami di tipo laboratoriale e strumentale. Questi ultimi includono:

1. analisi cliniche generali. Questo è un gruppo enorme, che include un esame del sangue, l'urina, le feci. La diagnostica di laboratorio è l'acquisizione di dati sulle condizioni del paziente in pochi minuti. Il modo più veloce per scoprire quali cambiamenti stanno avvenendo nel corpo è fare un esame di base. Questo sarà sufficiente per determinare la presenza di perdita di sangue, infiammazione, infezione e altri possibili disturbi. Dopo circa un'ora, il medico riceve i dati sulle condizioni del paziente.
2. Coagulogramma. Questa diagnosi di laboratorio, in cui viene analizzato il grado di coagulazione del sangue. Il solito sistema di test include una valutazione della coagulazione patologica del sangue. Questo tipo di diagnosi viene effettuata durante la gravidanza, con vene varicose, prima e dopo l'intervento chirurgico. La diagnostica di laboratorio è un metodo abbastanza informativo che consente di controllare il trattamento con un anticoagulante indiretto e non solo.
3. Biochimica del sangue. Questo gruppo di studi viene condotto su diversi parametri, tra cui la determinazione della creatinina, del glucosio, dell'acido urico, del colesterolo e di altre sostanze.
4. Marcatori tumorali. Per il trattamento del cancro, è importante fare una diagnosi in tempo, determinando il tipo di malattia e il suo stadio. Uno dei metodi di esame è la diagnostica clinica di laboratorio sotto forma di marcatori oncologici. Il loro uso consente di determinare la fase iniziale della malattia e di controllare il trattamento.
5. Esame ormonale. Questi metodi di diagnostica di laboratorio consentono di determinare la riproduzione di una varietà di ghiandole, comprese le ghiandole surrenali, la ghiandola tiroidea, il pancreas, ecc.
6. esami infettivi. Questo gruppo include test per una varietà di malattie infettive, tra cui epatite, HIV, herpes, rosolia e altro ancora. Ogni esame è di grande importanza per la medicina.

Tipi speciali di esami di laboratorio

Questo dovrebbe includere tutti gli studi che non sono generali o infettivi, ma hanno tecniche di esecuzione speciali. Questo:

• Test allergologici. Con frequenti patologie respiratorie e infettive, immunità indebolita, presenza di una malattia cronica, vengono eseguiti test immunologici. Se il paziente ha frequenti allergie, è necessario condurre test allergici. Ti permetteranno di determinare quali sostanze si verificano una reazione patologica.
• Tossico. Questo gruppo include test per il contenuto di alcol, droghe, tossine.
• Citologia. Questa diagnostica di laboratorio consente di determinare lo stato delle cellule, ovvero di valutarne la struttura, la composizione, la presenza di liquidi nel corpo per determinare le deviazioni dalla norma, nonché ai fini della prevenzione.

Analisi specifiche

Un altro metodo diagnostico specifico sono le colture batteriologiche. Vengono eseguiti per rilevare agenti infettivi nelle urine, strisci, su particelle di tessuto.

Attività di uno specialista di laboratorio

Il medico del laboratorio clinico conduce una serie di test. Gli operatori sanitari utilizzano la conoscenza delle basi del lavoro di laboratorio, applicano in pratica le più moderne tecnologie per lo studio del materiale ottenuto. Inoltre, i laboratori preparano soluzioni, reagenti per eseguire campioni e ricerca qualitativa del materiale.

Un dottore in diagnostica clinica di laboratorio deve conoscere ed essere in grado di condurre vari tipi di analisi, test, campioni e valutarne i risultati.

Vantaggi dei test di laboratorio

Ogni tipo di diagnosi ha molti vantaggi. Tra i più istruttivi, vale la pena evidenziare l'esame di laboratorio. Ti consente di diagnosticare in modo affidabile, avendo ricevuto le massime informazioni. Le analisi possono essere eseguite molto rapidamente, il che è particolarmente importante nei casi di emergenza quando è necessario determinare con precisione la causa della malattia.

La conduzione della diagnostica di laboratorio ha una gamma abbastanza ampia di studi che consentono a qualsiasi tipo di disturbo di identificare cosa ha causato esattamente la patologia e quali cambiamenti ha causato nel corpo. Inoltre, queste analisi aiutano a determinare il metodo di trattamento.

Conclusione

L'importanza dei metodi di esame di laboratorio è difficile da sottovalutare. Aiutano a determinare le tattiche del trattamento, per molti aspetti ne influenzano i risultati. Utilizzando vari metodi di conduzione dei test, i medici sono in grado di identificare con precisione la vera causa dello sviluppo della malattia e prevedere l'esito della malattia, nonché determinare se è possibile curare completamente il paziente o se è possibile raggiungere una remissione stabile.

Ogni anno vengono sviluppati nuovi metodi di esame, con l'aiuto dei quali viene accelerato il processo di valutazione delle condizioni del paziente e della qualità del trattamento. Molti tipi di disturbi sono determinati in pochi minuti. Nei centri di laboratorio si lavora costantemente per migliorare i luoghi di lavoro, vengono introdotti nuovi dispositivi e test per il lavoro degli assistenti di laboratorio. Tutto ciò accelera e semplifica il lavoro dei professionisti e aumenta l'accuratezza dei risultati.

Metodi di ricerca di laboratorio - lo studio del materiale biologico ( biosubstrati). Biomateriali - sangue e suoi componenti (plasma, eritrociti), urina, feci, succo gastrico, bile, espettorato, fluidi di versamento, tessuti di organi parenchimali ottenuti da biopsia.

Lo scopo della ricerca di laboratorio:

• determinazione dell'eziologia della malattia (le sue cause); a volte questo è l'unico criterio per valutare la situazione clinica, ad esempio malattie infettive;
• prescrizione del trattamento;
• monitorare l'efficacia del trattamento in dinamica.

I test di laboratorio sono ordinati e valutati da un medico. Il personale di laboratorio è responsabile della fase di laboratorio. Nella fase preanalitica, l'infermiere svolge un ruolo importante:

• prepara il paziente allo studio, gli fornisce la vetreria da laboratorio, redige un'impegnativa per lo studio;
• conduce il campionamento del biomateriale, garantisce una corretta conservazione;
• trasporta il materiale al laboratorio.

L'affidabilità della ricerca dipende da quanto correttamente passa questa fase.

Tipi di laboratori, loro scopo

Diagnostica clinica

Determinazione delle proprietà fisico-chimiche di substrati biologici e microscopia. Ad esempio, un'analisi generale (sangue, urina, espettorato, feci), esami delle urine secondo Zimnitsky e Nechiporenko, feci per sangue occulto, feci per uova di elminti, un'analisi generale di succo gastrico e bile, essudati e trasudati, liquido cerebrospinale, eccetera. Per trasportare i biomateriali al laboratorio vengono utilizzati vetreria pulita e asciutta o speciali contenitori monouso.

Biochimico

Determinazione delle proprietà chimiche di substrati biologici. Ad esempio, esami del sangue del fegato (test delle proteine ​​totali, della bilirubina, del timolo e del sublimato), sangue per i test reumatici (proteina C-reattiva, test del formolo), studio del metabolismo dei lipidi (beta-lipoproteine, colesterolo totale), enzimi (ALAT, ASAT, LDH e così via), studio del metabolismo dei carboidrati (glicemia), analisi del sangue per il ferro, contenuto di elettroliti, studio biochimico della bile e delle urine, ecc.

Batteriologico (laboratorio di microbiologia clinica)

Identificazione della composizione microbica e identificazione della microflora (sangue per sterilità, urine per biocoltura, feci per gruppo intestinale e disbatteriosi, tampone faringeo e nasale per sospetta difterite e infezione meningococcica, esami sierologici del sangue, ecc.). Per prelevare il materiale è necessario munirsi di vetreria da laboratorio sterile. Il materiale deve essere raccolto prima di iniziare la terapia antibiotica.

In base al grado di rischio di radiazioni, il lavoro con sostanze radioattive aperte è suddiviso in tre classi a seconda dell'attività sul posto di lavoro, del gruppo di radiotossicità dell'isotopo radioattivo e della natura del lavoro svolto.

La classificazione del lavoro svolto con sostanze radioattive aperte nelle operazioni chimiche convenzionali è riportata nella tabella. 13.

TABELLA 13. Classificazione dei lavori eseguiti con sostanze radioattive aperte

Per stabilire la classe di lavoro con altri tipi di operazioni chimiche quando si utilizzano isotopi di questo gruppo di tossicità (vedi p. 328), il valore corrispondente riportato in Tabella. 13, moltiplicare per il fattore correttivo, i cui valori sono di seguito riportati:

Correttivo

coefficiente di processo naturale

A seconda della classe di lavoro, i laboratori devono disporre dell'attrezzatura adeguata e sono anch'essi divisi in tre classi.

Durante il lavoro della terza classe non ci sono requisiti particolari per la disposizione dei laboratori, ma è meglio svolgerli in stanze separate. Le apparecchiature di laboratorio devono soddisfare i requisiti dei laboratori chimici convenzionali. Operazioni di classe III semplici e di routine possono essere eseguite su banchi di laboratorio, mentre operazioni più complesse possono essere eseguite in cappe chimiche convenzionali con opportune precauzioni.

Il lavoro di seconda classe viene svolto in stanze separate e appositamente attrezzate. Tale laboratorio dovrebbe avere uno speciale deposito di isotopi, stanze separate per l'imballaggio, per il lavoro chimico, per le misurazioni, un bagno con doccia, un punto di controllo dosimetrico e una stanza per ricevere e conservare il cibo. Nei laboratori sono installati un ricambio d'aria aumentato (5 - 10 volte), armadi speciali, scatole e camere protettive. Requisiti speciali sono imposti al rivestimento di pareti, pavimenti, attrezzature.

Lo stoccaggio di sostanze radioattive dovrebbe essere situato in una stanza separata e dotato di casseforti per lo stoccaggio di sostanze radioattive, mezzi per spostare pesanti contenitori protettivi, un luogo per il pretrattamento di sostanze con apparecchiature remote.

Le sostanze radioattive sono collocate in casseforti in contenitori.

Il laboratorio deve disporre di schermi protettivi (fissi o pieghevoli), mezzi di lavoro a distanza (manipolatori manuali e meccanici, pinze, ecc.).

Tutto il lavoro di seconda classe viene svolto in cappe aspiranti o scatole.

La descrizione dei laboratori per il lavoro di prima classe non è inclusa nel nostro compito, poiché tale lavoro viene svolto solo con analisi di attivazione, utilizzando un reattore nucleare.

Laboratori medici

istituzioni del sistema sanitario o unità strutturali di istituzioni mediche e preventive o sanitarie destinate a varie ricerche mediche. Questo gruppo non comprende i laboratori di ricerca. Uno dei principali tipi di L.m. è diagnostica clinica (CDL). La superficie del CDL, compresi i locali di servizio, deve essere almeno di 20 m2 per 1 dipendente, l'area dei locali del laboratorio effettivo - almeno 10 m2 per 1 dipendente che esegue i test. Le attività di CDL e il loro modello sono regolate da documenti ufficiali. La più ampia gamma di test di laboratorio viene eseguita nel KDL degli ospedali urbani repubblicani, regionali, regionali e clinici.

Il laboratorio citologico esegue studi citologici (esame citologico) del materiale ottenuto dalla biopsia. Fa parte del CDL o, nella forma di laboratorio citologico centralizzato, fa parte di un dispensario oncologico, un grande ospedale multidisciplinare.

Il laboratorio forense ha principalmente lo scopo di ottenere dati oggettivi nello studio di cadaveri, prove di materiale biologico e nell'esame di persone viventi, per stabilire la vitalità e la prescrizione delle ferite, l'ora della morte, ecc. Produce un complesso di studi di laboratorio (morfologici, biochimici, immunologici, sierologici), spettrali, esami a raggi X (vedi. Studi di laboratorio forense) .

Laboratorio anatomico patologico - una suddivisione del dipartimento patologico di un istituto medico, in cui vengono eseguiti esami macro e microscopici di materiale sezionale e bioptico (vedi Servizio anatomico patologico) . I compiti principali di L.m. - stabilire le cause e i meccanismi di morte del paziente, condurre punture diagnostiche e biopsie di aspirazione di organi e tessuti.

Laboratorio sanitario e igienico - una suddivisione del SES che conduce gli studi strumentali e hardware necessari per l'attuazione della vigilanza sanitaria preventiva e attuale (Vigilanza Sanitaria) . Nel laboratorio vengono effettuati studi strumentali (hardware) sull'ambiente di strutture industriali, comunali e di altro tipo situate nel territorio servito dal SES. La ricerca viene svolta secondo il piano delle unità del dipartimento di igiene del SES (igiene del lavoro, igiene comunitaria, igiene alimentare, igiene dei bambini e degli adolescenti, ecc.).

Il laboratorio di radioisotopi (laboratorio di diagnostica dei radioisotopi) è una suddivisione strutturale di un istituto medico (se l'istituto ha un reparto radiologico, viene creato come parte di esso). È organizzato come parte di un ospedale regionale (regionale, repubblicano), cittadino, centro diagnostico, dispensario oncologico, altre istituzioni o istituti medici e fornisce studi diagnostici (vedi Diagnostica dei radionuclidi) , e con l'apposita autorizzazione del servizio sanitario-epidemiologico - e con l'ausilio di radiofarmaci (Radiofarmaci) . Lm è dotato di apparecchiature diagnostiche, protettive e di controllo-dosimetriche per condurre una serie di studi necessari per questa istituzione. Un permesso di lavoro (per lavorare con fonti di radiazioni ionizzanti) è rilasciato dal SES.

La gestione organizzativa e metodologica è curata dai principali liberi professionisti del servizio laboratori delle ASL.

Un ruolo speciale appartiene a L.m. ospedali repubblicani, regionali, regionali e SES, che dovrebbero fornire il massimo livello di ricerca di laboratorio; sono centri organizzativi, metodologici, scientifici, tecnici e didattici dei rispettivi territori amministrativi. Le loro responsabilità includono lo studio e l'analisi del lavoro dei laboratori nella regione, la diffusione delle migliori pratiche, il miglioramento delle competenze dei medici e degli assistenti di laboratorio, la consulenza, l'introduzione di metodi unificati, il monitoraggio della qualità della ricerca, ecc.

I principali indicatori di performance della L.m. sono il carico di lavoro medio giornaliero di un dipendente, determinato per unità di conto, nonché il numero di test per 1 paziente in ospedale, per 100 visite ambulatoriali, per 1 medico responsabile, per 1000 abitanti. Per la presenza in L.m. apparecchiature elettriche, apparecchi, reagenti chimici e sostanze tossiche, materiale infetto, ecc. grande enfasi è posta sulla sicurezza.

In condizioni di campo militare, L.m. organizzato come parte di istituzioni mediche sul campo militare o in modo indipendente. Sono destinati alla diagnostica di laboratorio della patologia da combattimento, all'identificazione e all'esame di oggetti contaminati a seguito dell'uso di armi di distruzione di massa. Tale L.m. eseguire studi clinico-ematologici, igienico-sanitari, batteriologici, patoanatomici, forensi e altri. opere di L.M. dipende dalla situazione di combattimento, dall'intensità del flusso di feriti e malati, dalla natura della patologia da combattimento. L. m. sono dotati di attrezzatura completa.

1. Piccola enciclopedia medica. - M.: Enciclopedia medica. 1991-96 2. Primo soccorso. - M .: Grande enciclopedia russa. 1994 3. Dizionario enciclopedico dei termini medici. - M.: Enciclopedia sovietica. - 1982-1984.

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Libri

• Tecnologie di laboratorio medico. Guida alla diagnostica clinica di laboratorio. Volume 1 , Anatoly Ivanovich Karpishchenko, N. P. Mikhaleva, G. I. Maslova Vengono presentate le basi dell'analisi di laboratorio, del controllo di qualità della ricerca, delle attrezzature di laboratorio e delle attrezzature tecniche. Metodi di ricerca unificati sono evidenziati...

Tutti gli studi microbiologici, biochimici e biologici molecolari dei microrganismi vengono effettuati in laboratori speciali, la cui struttura e attrezzatura dipendono dagli oggetti di studio (batteri, virus, funghi, protozoi), nonché dal loro orientamento al bersaglio (ricerca scientifica, diagnosi delle malattie). Lo studio della risposta immunitaria e della sierodiagnosi delle malattie umane e animali viene effettuato in laboratori immunologici e sierologici (siero - siero del sangue).

Fanno parte delle stazioni sanitarie ed epidemiologiche (SES), dei centri diagnostici e dei grandi ospedali i laboratori batteriologici, virologici, micologici e sierologici (immunologici). I laboratori SES eseguono analisi batteriologiche, virologiche e sierologiche di materiali ottenuti da pazienti e persone a contatto con essi, esaminano i portatori di batteri e conducono studi sanitari e microbiologici su acqua, aria, suolo, alimenti, ecc.

Nei laboratori batteriologici e sierologici di ospedali e centri diagnostici si effettuano ricerche per diagnosticare malattie intestinali, purulente, respiratorie e altre malattie infettive, si effettua il controllo microbiologico della sterilizzazione e della disinfezione.

La diagnosi di infezioni particolarmente pericolose (peste, tularemia, antrace, ecc.) Viene effettuata in laboratori a regime speciale, la cui organizzazione e funzionamento sono rigorosamente regolamentati.

I laboratori virologici diagnosticano malattie causate da virus (influenza, epatite, poliomielite, ecc.), alcuni batteri - clamidia(ornitosi, ecc.) e rickettsie(tifo, febbre Q, ecc.). Nell'organizzare e attrezzare i laboratori virologici, tengono conto delle specificità del lavoro con virus, colture cellulari ed embrioni di pollo, che richiedono l'asepsi più rigorosa.

I laboratori micologici eseguono la diagnostica delle malattie causate da funghi patogeni, agenti causali delle micosi.

I laboratori si trovano solitamente in più stanze, la cui area è determinata dall'ambito del lavoro e dallo scopo.

Ogni laboratorio dispone di:

a) scatole per lavorare con singoli gruppi di agenti patogeni;

b) locali per ricerche sierologiche;

c) locali per lavare e sterilizzare le stoviglie, cucinare
leniya mezzi nutritivi;

d) vivaio con box per animali sani e da esperimento
nuovo;

e) anagrafe per il ricevimento e il rilascio dei test.

Insieme a queste stanze, i laboratori virologici dispongono di scatole per l'elaborazione speciale del materiale di prova e lavorano con colture cellulari.

Attrezzature per laboratori microbiologici

I laboratori sono dotati di una serie di strumenti e apparecchiature obbligatorie.

1. Strumenti per la microscopia: microscopio biologico ad immersione con dispositivi aggiuntivi (illuminatore, contrasto di fase, condensatore di campo oscuro, ecc.), microscopio a luminescenza.

2. Termostati e frigoriferi.

3. Dispositivi per la preparazione di mezzi nutritivi, soluzioni, ecc.: apparecchi per ottenere acqua distillata (distillatore), bilance tecniche e analitiche, misuratori di pH, apparecchiature di filtraggio, bagni d'acqua, centrifughe.

4. Una serie di strumenti per la manipolazione con i microbi: anse batteriologiche, spatole, aghi, pinzette, ecc.

5. Vetreria da laboratorio: provette, beute, capsule Petri, materassini, fiale, fiale, pipette Pasteur e graduate, ecc., apparecchi per la realizzazione di tubi in garza di cotone.

I grandi complessi diagnostici dispongono di analizzatori automatici e di un sistema computerizzato per la valutazione delle informazioni ricevute.

Il laboratorio dispone di un locale per la colorazione dei preparati microscopici, dove sono presenti soluzioni di coloranti speciali, alcool, acidi, carta da filtro, ecc. Ogni postazione è dotata di un bruciatore a gas o lampada a spirito e di un contenitore con una soluzione disinfettante. Per il lavoro quotidiano, il laboratorio deve disporre dei necessari mezzi nutritivi, reagenti chimici, preparati diagnostici e altri materiali.

I grandi laboratori hanno camere termostatiche per la coltivazione di massa di microrganismi, impostazione di reazioni sierologiche. Per la coltivazione, la conservazione delle colture, la sterilizzazione della vetreria da laboratorio e altri scopi, viene utilizzata la seguente attrezzatura.

1. Termostato. Un apparecchio in cui viene mantenuta una temperatura costante. La temperatura ottimale per la riproduzione della maggior parte dei microrganismi patogeni è di 37 "C. I termostati sono aria e acqua.

2. Microanaerostato. Apparecchiatura per la coltivazione di microrganismi in condizioni anaerobiche.

3. C0 2 - incubatore. Un apparato per creare una temperatura e un'atmosfera costanti di una certa composizione di gas. Progettato per la coltivazione di microrganismi che richiedono la composizione del gas dell'atmosfera.

4. Frigoriferi. Utilizzato nei laboratori microbiologici per la conservazione di colture di microrganismi, terreni nutritivi, sangue, vaccini, sieri e altri preparati biologicamente attivi a una temperatura di circa 4 °C. Per conservare i farmaci a temperature inferiori a 0°C si utilizzano frigoriferi a bassa temperatura, nei quali la temperatura è mantenuta a -20°C o -75°C.

5. Centrifughe. Viene utilizzato per la sedimentazione di microrganismi, eritrociti e altre cellule, per la separazione di liquidi disomogenei (emulsioni, sospensioni). Nei laboratori vengono utilizzate centrifughe con diverse modalità operative.

6. Cabina di asciugatura e sterilizzazione(forno Pasteur). Progettato per la sterilizzazione ad aria secca di vetreria da laboratorio in vetro e altri materiali resistenti al calore.

7. Sterilizzatore a vapore (autoclave). Progettato per la sterilizzazione con vapore surriscaldato (sotto pressione). Nei laboratori microbiologici vengono utilizzate autoclavi di vari modelli (verticali, orizzontali, fisse, portatili).

LABORATORI BATTERIOLOGICI, VIROLOGICI, MICOLOGICI, IMMUNOLOGICI E LORO ATTREZZATURE. DISPOSITIVO DI MICROSCOPI MODERNI. METODI DI MICROSCOPIA. METODI PER LO STUDIO DELLA MORFOLOGIA DEI MICRORGANISMI

Programma

1. Regole di lavoro e organizzazione dei laboratori microbiologici (batteriologici, virologici, micologici).

2. Strumenti e attrezzature di base del laboratorio microbiologico.

3. Microscopi e apparecchiature microscopiche. Regole per lavorare con un microscopio ad immersione (obiettivi).

Dimostrazione

1. Predisposizione ed applicazione delle principali strumentazioni ed attrezzature utilizzate nei laboratori microbiologici: termostato, centrifughe, autoclave, essiccatoio, strumenti ed utensili.

2. Il dispositivo di un microscopio biologico. Vari metodi di microscopia: campo oscuro, contrasto di fase, luminescente, elettronico.

3. Preparazioni di microbi (lieviti e batteri) con vari metodi di microscopia.

Assegnazione agli studenti

1. Preparazioni microscopiche e abbozzate di funghi simili a lieviti del genere Candida utilizzando diversi tipi di microscopia.

Linee guida

Regole per lavorare nei laboratori microbiologici.

Il lavoro nel laboratorio microbiologico di un istituto medico viene svolto con agenti patogeni di malattie infettive - microrganismi patogeni.

Pertanto, al fine di proteggersi dal contagio, il personale deve osservare rigorosamente i regolamenti interni:

1. Tutti i dipendenti devono lavorare con camici, cuffie e scarpe rimovibili. È severamente vietato l'ingresso al laboratorio senza accappatoio. Nei casi necessari, i lavoratori indossano una maschera di garza sul viso. Il lavoro con microbi particolarmente pericolosi è regolato da istruzioni speciali e viene svolto in laboratori sicuri.

2. È vietato fumare e consumare alimenti in laboratorio.

3. Il posto di lavoro deve essere tenuto in ordine esemplare. Gli effetti personali dei dipendenti devono essere conservati in un luogo appositamente designato.

4. In caso di contatto accidentale con un materiale infetto su un tavolo, pavimento e altre superfici, questo luogo deve essere trattato con cura con una soluzione disinfettante.

5. Lo stoccaggio, il monitoraggio delle colture microbiche e la loro distruzione devono essere effettuati secondo istruzioni speciali. Le colture di microbi patogeni sono registrate in una rivista speciale.

6. Alla fine del lavoro, le mani devono essere accuratamente lavate e, se necessario, trattate con una soluzione disinfettante.

Microscopi e metodi di microscopia

Riso. 1.1. Microscopi.

a — vista generale del microscopio Biolam; b - microscopio MBR-1: 1 - base del microscopio; 2 - tabella tematica; 3 - viti per spostare il tavolo degli oggetti; 4 - terminali che premono il farmaco; 5 - condensatore; 6 - staffa del condensatore; 7 - avvitare, rinforzando il condensatore nel manicotto; 8 - maniglia per spostare il condensatore; 9 - maniglia del diaframma a iride del condensatore; 10 - specchio; 11 - portatubi; 12 - manico macrometrico a vite; 13 - maniglia della vite micrometrica; 14 - revolver di obiettivi; 15 - lenti; 16 - tubo inclinato; 17 - vite per il fissaggio del tubo; 18 - oculare.

Per gli studi microbiologici vengono utilizzati diversi tipi di microscopi (biologici, luminescenti, elettronici) e speciali metodi di microscopia (contrasto di fase, campo oscuro).

Nella pratica microbiologica vengono utilizzati microscopi di marchi nazionali: MBR-1, MBI-2, MBI-3, MBI-6, "Bio-lam" R-1, ecc. (Fig. 1.1). Sono progettati per studiare la forma, la struttura, le dimensioni e altre caratteristiche di vari microbi, la cui dimensione non è inferiore a 0,2-0,3 micron.

Microscopia ad immersione

Utilizzato per aumentare la risoluzione del metodo microscopia ottica. Il potere risolutivo di un sistema di microscopia ottico-ottica è determinato dalla lunghezza d'onda della luce visibile e dall'apertura numerica del sistema. L'apertura numerica indica l'angolo del massimo cono di luce che entra nell'obiettivo e dipende dalle proprietà ottiche (potere di rifrazione) del mezzo tra l'oggetto e la lente dell'obiettivo. Immergendo la lente in un mezzo (olio minerale, acqua) che ha un alto indice di rifrazione vicino a quello del vetro si impedisce alla luce di disperdersi dall'oggetto.

Riso. 1.2. Il corso dei raggi nel sistema di immersione, n è l'indice di rifrazione.

Riso. 1.3. Il percorso dei raggi nei condensatori di campo oscuro, a è un condensatore paraboloide; b — condensatore cardioide; 1 - obiettivo; 2 - olio per immersione; 3 - preparazione; 4 - superficie a specchio; 5 - diaframma.

Pertanto, si ottiene un aumento dell'apertura numerica e, di conseguenza, della risoluzione. Per la microscopia ad immersione vengono utilizzate speciali lenti ad immersione, dotate di etichetta (MI - immersione in olio, VI - immersione in acqua). La risoluzione limite di un microscopio ad immersione non supera 0,2 µm. L'andamento dei raggi nel sistema di immersione è mostrato in Fig. 1.2.

L'ingrandimento totale di un microscopio è determinato dal prodotto dell'ingrandimento dell'obiettivo e dell'ingrandimento dell'oculare. Ad esempio, l'ingrandimento di un microscopio con un obiettivo ad immersione di 90 e un oculare di 10 è: 90 x 10 = 900.

Microscopia in luce trasmessa (microscopia in campo chiaro) utilizzato per studiare oggetti colorati in preparazioni fisse.

Microscopia in campo oscuro. Viene utilizzato per lo studio in vivo dei microbi nelle preparazioni native non colorate. La microscopia in campo oscuro si basa sul fenomeno della diffrazione della luce sotto illuminazione laterale di particelle sospese in un liquido ( Effetto Tyndall). L'effetto si ottiene utilizzando un condensatore paraboloide o cardioide, che sostituisce un condensatore convenzionale in un microscopio biologico (Fig. 1.3). Con questo metodo di illuminazione, solo i raggi riflessi dalla superficie dell'oggetto entrano nell'obiettivo. Di conseguenza, le particelle luminose sono visibili su uno sfondo scuro (campo visivo non illuminato). La preparazione in questo caso ha la forma mostrata in Fig. 1.4, b (sull'inserto).

Microscopia a contrasto di fase. Progettato per lo studio di farmaci nativi. Il dispositivo di contrasto di fase consente di vedere oggetti trasparenti in un microscopio. La luce attraversa varie strutture biologiche a velocità diverse, che dipendono dalla densità ottica dell'oggetto. Di conseguenza, si verifica un cambiamento nella fase dell'onda luminosa, che non viene percepito dall'occhio. Il dispositivo di fase, che include un condensatore e una lente speciali, converte i cambiamenti nella fase di un'onda luminosa in cambiamenti visibili nell'ampiezza. Pertanto, si ottiene un miglioramento della differenza nella densità ottica degli oggetti. Acquisiscono un contrasto elevato, che può essere positivo o negativo. Il contrasto di fase positivo è chiamato un'immagine scura di un oggetto in un campo visivo luminoso, negativo - un'immagine chiara di un oggetto su uno sfondo scuro (vedi Fig. 1.4; sull'inserto).

Per la microscopia a contrasto di fase vengono utilizzati un microscopio convenzionale e un ulteriore dispositivo a contrasto di fase KF-1 o KF-4 (Fig. 1.5), nonché speciali illuminatori.

Microscopia luminescente (o fluorescente). Basato sul fenomeno della fotoluminescenza.

Luminescenza- il bagliore delle sostanze che si verifica sotto l'influenza della radiazione esterna: luce, ultravioletto, ionizzante, ecc. Fotoluminescenza - la luminescenza di un oggetto sotto l'influenza della luce. Se illumini un oggetto luminescente con luce blu, emette raggi di rosso, arancione, giallo o verde. Il risultato è un'immagine a colori dell'oggetto.

Riso. 1.5. Dispositivo a contrasto di fase, obiettivi a fase; b - microscopio ausiliario; c - condensatore di fase.

La lunghezza d'onda della luce emessa (colore della luminescenza) dipende dalla struttura fisico-chimica della sostanza luminescente.

Primario luminescenza di oggetti biologici (Proprio, o bioluminescenza) si osserva senza colorazione preliminare a causa della presenza delle proprie sostanze luminescenti, secondario (indotto) - si verifica a seguito di preparazioni coloranti con speciali coloranti luminescenti - fluorocromi(arancio di acridina, auromina, corifosfina, ecc.). La microscopia luminescente presenta una serie di vantaggi rispetto ai metodi convenzionali: la capacità di esaminare i microbi viventi e rilevarli nel materiale di prova in piccole concentrazioni a causa dell'elevato grado di contrasto.

Nella pratica di laboratorio, la microscopia a fluorescenza è ampiamente utilizzata per identificare e studiare molti microbi.

Microscopio elettronico. Consente di osservare oggetti le cui dimensioni vanno oltre la risoluzione di un microscopio ottico (0,2 micron). Un microscopio elettronico viene utilizzato per studiare i virus, la struttura fine di vari microrganismi, le strutture macromolecolari e altri oggetti submicroscopici. I raggi luminosi in tali microscopi sono sostituiti da un flusso di elettroni che, a determinate accelerazioni, ha una lunghezza d'onda di circa 0,005 nm, cioè quasi 100.000 volte più piccola della lunghezza d'onda della luce visibile. L'alta risoluzione del microscopio elettronico, che raggiunge 0,1-0,2 nm, consente di ottenere un incremento utile totale fino a 1.000.000.

Insieme ai dispositivi del tipo "traslucido", usano microscopi elettronici a scansione, fornendo un'immagine in rilievo della superficie dell'oggetto. Il potere risolutivo di questi dispositivi è molto inferiore a quello dei microscopi elettronici di tipo "a trasmissione".

Regole per lavorare con un microscopio

Lavorare con qualsiasi microscopio ottico include l'impostazione della corretta illuminazione del campo visivo e la preparazione e la sua microscopia con vari obiettivi. L'illuminazione può essere naturale (luce diurna) o artificiale, per la quale vengono utilizzate speciali sorgenti luminose: illuminatori di marche diverse.

Quando si esegue la microscopia di preparazioni con una lente ad immersione, è necessario attenersi rigorosamente a un certo ordine:

1) mettere una goccia di olio per immersione sullo striscio preparato e macchiato sul vetrino e posizionarlo sul piano vetrini, fissandolo con i morsetti;

2) ruotare il revolver verso il segno dell'obiettivo di immersione 90x o 100x;

3) abbassare con cautela il tubo del microscopio fino a quando la lente è immersa in una goccia d'olio;

4) impostare il fuoco approssimativo tramite la vite macrometrica;

5) eseguire la messa a fuoco finale della preparazione con una vite micrometrica ruotandola all'interno un solo giro. Non permettere che la lente entri in contatto con il
paratomia, in quanto ciò può portare alla rottura del vetro di copertura o della lente frontale dell'obiettivo (la distanza libera dell'obiettivo di immersione è di 0,1–1 mm).

Alla fine del microscopio, rimuovere l'olio dalla lente di immersione e sposta il revolver su un piccolo obiettivo 8x.

Per la microscopia in campo oscuro ea contrasto di fase si utilizzano preparazioni native (goccia "schiacciata", ecc., vedi argomento 2.1); al microscopio con un obiettivo 40x o uno speciale obiettivo ad immersione con diaframma a iride che consente di regolare l'apertura numerica da 1,25 a 0,85. Lo spessore delle diapositive non deve superare 1-1,5 mm, vetrini coprioggetto - 0,15-0,2 mm.