A szifilisz elemzése ELISA - az elemzés értelmezése. Norma és eltérések

A sejttechnológiák, a molekuláris biológia, a genetika, a fizika, a kémia és számos más high-tech tudományág fejlődése kapcsán új, nagy pontosságú és high-tech módszerek kerülnek be a mindennapi gyakorlatba. Ezek az interdiszciplináris irányzatok mind az orvosi ismeretek területét, mind a biológiai és biokémiai problémák kapcsolódó területeit érintik. Az elmúlt tíz évben széles körben elterjedt és tömeges gyakorlatba is bevezették az enzimimmunoassay nevű klinikai laboratóriumi diagnosztikai módszert.

Általánosságban elmondható, hogy az immunológiai enzimatikus és radiológiai reakciók technológiáit a 20. század 80-as éveinek eleje óta széles körben alkalmazzák sejtek, sejttenyészetek és különféle szövetek tipizálására. Ezek a módszerek azonban nagyon munkaigényesek, nem egységesek, nem szabványosítottak, ami kizárta tömeges diagnosztikai és kezelési célú alkalmazásukat. Ilyen módszereket csak szűk, tudásintenzív és magasan szakosodott laboratóriumok alkalmaztak.

A technológia, a mikrotechnológia fejlődésével, a különféle biopolimer anyagok gyártásával azonban lehetővé vált olyan kész enzimkapcsolt immunszorbens diagnosztikai készletek előállítása, amelyeket általános egészségügyi intézmények laboratóriumai is használhatnak. Az ELISA-t széles körben alkalmazzák mindenféle fertőzés (chlamydia, szifilisz, citomegalovírus, toxoplazmózis, herpesz stb.), akut és krónikus, valamint a klinikai tünetek nélkül jelentkező látens formák diagnosztizálására. . Próbáljuk meg kitalálni, hogy ez milyen módszer, és milyen elvek támasztják alá?

Az enzim immunoassay összetevői - immunreakció és enzimatikus reakció

Az enzim immunoassay, ahogy a neve is sugallja, két különböző komponensből áll - egy immunreakcióból és egy enzimreakcióból. Az immunreakció biológiai molekulák, sejt vagy mikroorganizmus elemeinek megkötését állítja elő, amelyeket valójában megpróbálnak kimutatni, az enzimreakció pedig lehetővé teszi az immunológiai reakció eredményének megtekintését és mérését. Vagyis az immunreakció egy komplex technika része, amely ténylegesen kimutatja a kívánt mikrobát. Az enzimreakció pedig egy olyan komplex technika része, amely lehetővé teszi, hogy az immunreakció eredményét olyan formába alakítsa át, amely a szem számára látható és a rutin kémiai technikák segítségével mérhetővé válik. Az enzim immunoassay módszer ezen szerkezete alapján mindkét részét külön-külön elemezzük.

Immunreakció, mi ez? Mi az antitest vagy antigén?

Mi az immunválasz? Mi az antigén?
Először is nézzük meg, mik az immunreakciók. Immunreakciók– ezek egy antigén antitesthez való kötődésének specifikus reakciói immunkomplex kialakulásával. Mit jelent? Bármely szervezet minden sejtjének felszínén speciális struktúrák találhatók, az úgynevezett antigének. Az antigének általában olyan molekulák, amelyek információt hordoznak egy sejtről (hasonlóan a személy jelvényén lévő információhoz, amely az adott személy alapvető adatait jelzi).

Egyedi és faji antigének – mik ezek? Miért van szükség ezekre az antigénekre?

Elérhető egyedi antigének, vagyis csak ennek a szervezetnek a sajátja. Ezek az egyedi antigének minden embernél különböznek; vannak olyanok, amelyek hasonlóak egymáshoz, de mégis különböznek egymástól. A természetben nincs két egyforma másolata az egyes antigéneknek!

Az antigén második fő típusa az faj antigének, vagyis az élőlények bármely meghatározott típusában benne rejlik. Például az embernek megvan a saját antigénje, amely minden embernél közös, az egereknek saját egérfajú antigénje van stb. Minden sejt felületén szükségszerűen jelen van egy specifikus és egyedi antigén.

A faj antigénjét az immunrendszer sejtjei a „barát vagy ellenség” felismerésére használják.

Hogyan történik az antigén felismerés?

Az immunsejt kapcsolatba lép a gyanús sejttel, és azonosítást végez az egyedi antigén alapján. Az immunsejt memóriájában „rögzül”, hogyan néz ki az „antigénje”. Így, ha egy gyanús sejt antigénje megegyezik a „saját antigén” leírással, akkor a test saját sejtje nem jelent veszélyt. Aztán az immunsejt "leoldódik" és távozik. És ha az antigén nem egyezik az „én” leírásával, akkor az immunsejt „idegen”-ként azonosítja ezt a sejtet, és ezért potenciálisan veszélyes az egész szervezetre. Ilyenkor az immunsejt nem „elszabadul”, hanem elkezdi elpusztítani a veszélyes tárgyat. Az ilyen immunológiai felismerés pontossága elképesztő - 99,97%. Szinte nincs hiba!

Mi az antitest, immunkomplex?
Mi az antitest?

Az antitest egy speciális molekula, amely az immunsejt felszínén található. Ez az antitest, amely a gyanús sejt antigénjéhez kötődik. Ezután az antitest információt továbbít a sejt belsejében, ahol a felismerés megtörténik, és kétféle visszatérési jelet kap, „saját” vagy „idegen”. Amikor egy „saját” jelet kap, az antitest megszakítja az antigénnel való kötést, és felszabadítja a sejtet.

Mi az immunkomplex?
Ha a jel „idegen”, a helyzet másképp alakul. Az antitest nem szakítja meg az antigénnel való kapcsolatot, hanem éppen ellenkezőleg, specifikus jelek küldésével „megerősítést” okoz. Biológiailag ez azt jelenti, hogy a sejt másik részében található más antitestek elkezdenek mozogni arra a helyre, ahonnan a veszélyjelzés érkezik, és kötést is kialakítanak maguk és a befogott antigén között. A végén kiderül, hogy az antigén minden oldalról körül van véve és szilárdan rögzítve van.Ezt az antigén + antitest komplexet ún. immunkomplex. Ettől a pillanattól kezdve megkezdődik az antigén hasznosítása. De most nem érdekelnek minket az antigénsemlegesítési folyamat részletei.

Az antitestek típusai (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Az antitestek olyan fehérjeszerkezetek, amelyek ennek megfelelően kémiai elnevezéssel rendelkeznek, amelyet az antitest szó szinonimájaként használnak. Így, antitestek = immunglobulinok.

5 típusú immunglobulin (Ig) létezik, amelyek az emberi test különböző helyein (például a bőrön, a nyálkahártyákon, a vérben stb.) különböző típusú antigénekhez kötődnek. Vagyis az antitesteknek munkamegosztásuk van. Ezeket az immunglobulinokat a latin ábécé betűivel - A, M, G, D, E - nevezik, és a következőképpen jelölik - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

A diagnózis során csak egyfajta antitestet használnak, amely a legspecifikusabb a kimutatott mikrobára. Vagyis az ilyen típusú antitest kötődése a kimutatott antigénhez mindig megtörténik. A leggyakrabban használt IgG és IgM.

Az immunreakció ezen elve (a meghatározandó biológiai objektum felismerésének egyedi pontossága és specifitása) az enzim immunoassay alapja.Az antitestek nagy pontossága miatt az antigének felismerésében a teljes enzim immunoassay módszer pontossága is a legmagasabb.

Enzimatikus reakció

Melyik reakció enzimatikus? Mi az affinitás, a szubsztrát és a reakció terméke?
Térjünk át az enzimreakcióra az enzim immunoassay módszer munkájában.

Mi az enzimes reakció?

Az enzimatikus reakció olyan kémiai reakció, amelyben az egyik anyag egy másik enzim hatására átalakul. Az anyagot, amelyre az enzim hat, nevezzük szubsztrát. Az enzim hatásának eredményeként kapott anyagot pedig ún reakciótermék. Ezenkívül az enzimreakció sajátossága, hogy egy bizonyos enzim csak egy bizonyos szubsztrátra hat. Az enzimnek azt a tulajdonságát, hogy felismeri „szubsztrátját”, nevezzük affinitás.

Így minden enzim csak egy sajátos reakciót hajt végre. A biológiai világban nagyon sok enzim ismert, valamint enzimreakciók is. Az enzimkapcsolt immunszorbens diagnosztikában csak néhány enzimes reakciót alkalmaznak - legfeljebb 10-et. Ugyanakkor olyan enzimreakciókat választottak, amelyek terméke színes anyagok. Miért kell az enzimreakció termékeit színezni? Mert egy anyag koncentrációjának színes oldatból történő kiszámításához van egy egyszerű kémiai módszer - kolorimetria.

Kolorimetriás módszer - lényeg és elv

Kolorimetria oldat színsűrűségének mérését használja, és a színsűrűségből számítja ki az anyag koncentrációját.Ebben az esetben egy speciális készülék - egy koloriméter - méri az oldat színsűrűségét. A kolorimetriában két lehetőség van a színsűrűségnek az anyag koncentrációjától való függésére - egyenesen arányos függőség vagy fordítottan arányos függőség. Egyenesen arányos összefüggés esetén minél nagyobb az anyag koncentrációja, annál intenzívebb az oldat színsűrűsége. Fordított arányú összefüggés esetén minél nagyobb az anyag koncentrációja, annál kisebb az oldat színsűrűsége. Technikailag ez így történik: több, ismert koncentrációjú anyag oldatot veszünk, ezeknek az oldatoknak a sűrűségét megmérjük, és grafikont készítünk a koncentráció színsűrűségtől való függéséről ( kalibrációs diagram).

Ezt követően megmérjük az oldat színsűrűségét, amelynek koncentrációját meghatározzuk, majd a kalibrációs grafikonról megtaláljuk az oldat mért színsűrűségének szintjének megfelelő koncentrációértéket A modern automata koloriméterekben a kalibráció csak egyszer végezzük el, akkor a készülék maga készít egy kalibrációs görbét, amely a készülék memóriájában marad, és a mérés automatikusan megtörténik.

Az enzim immunoassay során leggyakrabban a következő enzimeket használják: peroxidáz, alkalikus foszfatáz, avidin.

Hogyan kombinálják az immunológiai és enzimatikus reakciókat az enzim immunoassay során? Most áttérünk magára az enzim immunoassay vizsgálatára. Milyen szakaszokat foglal magában, és mi történik e reakciók során? Enzim immunoassay lehet közvetlen és közvetett.

Közvetlen enzim immunoassay - a végrehajtás szakaszai

A közvetlen enzimes immunoassay során a kimutatott antigén elleni antitesteket specifikus jelöléssel kombinálva alkalmazzák. Ez a specifikus címke az enzimatikus reakció szubsztrátja.

Antigének rögzítése a lyuk felületéhez és antigén és antitest kombinációja

Hogyan történik a közvetlen enzimes immunoassay? Biológiai anyagot vesznek (vér, nyálkahártya-kaparék, kenetek) és speciális lyukakba helyezik. A biológiai anyagot 15-30 percig a lyukakban hagyjuk, hogy az antigének a lyukak felületéhez tapadhassanak. Ezután a detektált antigén elleni antitesteket hozzáadjuk ezekhez a mérőhelyekhez. Ez azt jelenti, hogy antigének, például szifilisz kimutatásakor a szifilisz antigének elleni antitesteket adják hozzá. Ezeket az antitesteket iparilag állítják elő, a laboratóriumok kész készleteket vásárolnak, amelyeket a tesztanyagból és az antitestekből álló keveréket hagyják egy ideig (30 perctől 4-5 óráig), hogy az antitestek megtalálják „antigénjüket” és kapcsolatba léphessenek vele. Minél több van az antigének biológiai mintájában, annál több antitest kötődik hozzájuk.

Az „extra” antitestek eltávolítása

Amint jeleztük, az antitestek egy specifikus jelöléshez is kapcsolódnak, mivel az antitestek feleslegben kerülnek hozzáadásra, így nem mindegyik kötődik az antigénekhez, és ha nincs antigén a mintában, akkor ennek megfelelően egyetlen antitest sem kötődik a mintához. kívánt antigén. Az „extra” antitestek eltávolítása érdekében a lyukak tartalmát egyszerűen kiöntik. Ennek eredményeként minden „extra” antitest eltávolítódik, az antigénekhez kötődők pedig megmaradnak, mivel az antigének a lyukak felületére „ragasztva” kerülnek. A lyukakat többször öblítik speciális oldattal, amely lehetővé teszi az összes „extra” antitest kimosását.

Ezután kezdődik a második szakasz - az enzimatikus reakció. A mosott üregekbe enzimes oldatot adunk, és 30-60 percig állni hagyjuk. Ez az enzim affinitással rendelkezik ahhoz az anyaghoz (specifikus jelölés), amelyhez az antitestek kötődnek. Az enzim olyan reakciót hajt végre, amely ezt a specifikus jelet (szubsztrátot) színes anyaggá (termékké) alakítja. Ezután kolorimetria segítségével meghatározzuk ennek a színes anyagnak a koncentrációját. Mivel ez a specifikus jelölés antitestekhez kapcsolódik, ez azt jelenti, hogy a színes reakciótermék koncentrációja megegyezik az antitestek koncentrációjával. És az antitestek koncentrációja megegyezik az antigének koncentrációjával. Így az elemzés eredményeként választ kapunk a kimutatott mikroba vagy hormon koncentrációjára.

Pontosan így működik a közvetlen enzimes immunoassay. Ma azonban gyakrabban alkalmazzák az indirekt enzimes immunoassayt, mivel az indirekt érzékenysége és pontossága nagyobb, mint a közvetlen. Tehát térjünk át az indirekt enzim immunoassay-re.

Indirekt enzim immunoassay - a végrehajtás szakaszai

Az indirekt enzim immunoassay két szakaszból áll. Az első szakaszban a kimutatott antigének jelöletlen antitesteit, a második szakaszban pedig az első jelöletlen antitestek jelölt antitesteit használják fel. Vagyis ez nem egy antitest közvetlen kötődése egy antigénhez, hanem kettős kontroll: az antitestek kötődése egy antigénhez, majd a második antitest kötődése az antitest + antigén komplexhez. Az első szakaszban az antitestek általában egér, a második szakaszban pedig a kecske.

Antigének rögzítése a lyuk felületén és az antigén kötődése egy jelöletlen antitesthez
Csakúgy, mint a közvetlen enzimes immunoassay esetében, biológiai anyagokat is gyűjtenek - vért, kaparékot, kenetet. A vizsgált biológiai anyagot bevisszük a lyukakba, és 15-30 percig hagyjuk állni, hogy az antigének a lyukak felületéhez tapadjanak. Ezután az antigénekkel szembeni jelöletlen antitesteket a lyukakba adják, és egy ideig (1-5 órán keresztül) hagyják állni, hogy az antitestek „a saját” antigénjeikhez kötődjenek, és immunkomplexet képezzenek ( Első lépés). Ezt követően az „extra” kötetlen antitesteket a lyukak tartalmának kiöntésével távolítják el. Mossa le speciális oldattal, hogy teljesen eltávolítsa az összes meg nem kötött antitestet.

Jelzett antitest kötődése antigénhez + jelöletlen antitest komplex
Ezután veszik a második jelölt antitesteket, hozzáadják a lyukakba, és ismét hagyják egy ideig - 15-30 percig ( második fázis). Ez idő alatt a jelölt antitestek az első - jelöletlenekhez - kötődnek, és komplexet képeznek - antitest + antitest + antigén. Azonban mind a jelölt, mind a jelöletlen antitesteket feleslegben adagoljuk a lyukakba. Ezért ismételten el kell távolítani a már jelölt „extra” antitesteket, amelyek nem kötődtek jelöletlen antitestekhez. Ehhez ismételje meg a lyukak tartalmának kiöntését és speciális oldattal történő mosását.

Enzimatikus reakció - színes vegyület képződése
Ezt követően egy enzimet adnak hozzá, amely végrehajtja azt a reakciót, hogy a „címkét” színes anyaggá alakítja. A szín 5-30 percen belül kialakul. Ezután kolorimetriát végzünk, és kiszámítjuk a színezett anyag koncentrációját. Mivel a színes anyag koncentrációja megegyezik a jelölt antitestek koncentrációjával, és a jelölt antitestek koncentrációja megegyezik a jelöletlen antitestek koncentrációjával, ami viszont megegyezik az antigén koncentrációjával. Így megkapjuk a kimutatott antigén koncentrációját.
Ez a kettős kontroll kétféle antitest felhasználásával lehetővé tette az enzim immunoassay módszer érzékenységének és specificitásának növelését. Az elemzési idő meghosszabbítása és további szakaszok beiktatása ellenére ezeket a veszteségeket az eredmény pontossága kompenzálja. Éppen ezért jelenleg az enzimes immunoassay módszerek túlnyomó többsége indirekt enzim-immunoassay.

Milyen betegségeket mutat ki az enzim immunoassay?

Térjünk át arra, hogy milyen betegségeket és milyen biológiailag aktív anyagokat mutat ki az enzim immunoassay. Az enzim immunoassay-vel kimutatott anyagokat a táblázat tartalmazza.

Hormonok és a pajzsmirigybetegség markerei	Pajzsmirigy-peroxidáz (TPO)
	Tireoglobulin (TG)
	Pajzsmirigy-stimuláló hormon (TSH)
	Tiroxin (T4)
	Trijódtironin (T3)
	szabad tiroxin (T4)
	szabad trijódtironin (T3)
A reproduktív funkció diagnózisa	Luteinizáló hormon (LH)
	Follikulus stimuláló hormon (FSH)
	prolaktin
	Progeszteron
	Ösztradiol
	Tesztoszteron
	Kortizol
	Szteroidkötő globulin (SBG)
	Alfafetoprotein (AFP)
Tumor markerek	Korion gonadotropin (CG)
	Prosztata-specifikus antigén (PSA)
	SA – 125
	SA – 19.9
	CYFRA-21-1
	M – 12 (SA – 15,3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M–20)
	Alveomucin
	K – lánc
	L – lánc
	Tumor nekrózis faktor (TNFα)
	γ – interferon
	Karcinoembrionális antigén (CEA)
Fertőző betegségek diagnosztizálása

Az ELISA egy modern laboratóriumi vizsgálat, amely specifikus antitesteket (vagy antigéneket) keres a vérben bizonyos betegségek ellen, annak érdekében, hogy ne csak az etiológiát, hanem a betegség stádiumát is azonosítsa.

1. specifikus antitestek keresése bármely fertőző betegség ellen;
2. bármely fertőző betegség antigénjének keresése;
3. a beteg hormonális állapotának tanulmányozása;
4. autoimmun betegségek jelenlétének vizsgálata.

Mint minden laboratóriumi diagnosztikai módszernek, az ELISA-nak is megvannak a maga előnyei és hátrányai. A módszer előnyei a következők:

1. a módszer magas specifitása és érzékenysége (több mint 90%);
2. a betegség meghatározásának és a folyamat dinamikájának nyomon követésének képessége, vagyis az antitestek számának összehasonlítása különböző időszakokban;
3. a tanulmány elérhetősége és gyorsasága;
4. az anyagmintavétel non-invazív módszere nem tanulmány;

A módszer hátránya, hogy az elemzés során nem magát a betegséget okozó ágenst, hanem csak az arra adott immunválaszt (antitesteket) lehet azonosítani.

Az ELISA módszer lényege

Az ELISA többféle típusa létezik: direkt, indirekt, blokkoló módszer, kompetitív. A gyakorlatban azonban leggyakrabban a heterogén enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot, azaz ELISA-t alkalmazzák.

Az enzim immunoassay alapja egy antigén és egy antitest immunreakciója immunkomplex kialakulásával, amelynek eredményeként megváltozik az antitestek felületén lévő specifikus jelek enzimaktivitása.

Ez a folyamat lényegében több szakaszra osztható:

1. a tesztrendszer tabletta üregeinek felületén egy adott kórokozó tisztított antigénje található. Amikor állati vérszérumot adunk hozzá, specifikus reakció megy végbe ezen antigén és a kívánt antitest között;
2. Ezután egy speciális kromogént (peroxidázzal jelölt konjugátumot) adunk a lyukba. Enzimatikus reakció játszódik le, melynek eredményeként a lemez üregében színes anyag képződik. Színének intenzitása az állat szérumában található immunglobulinok (antitestek) mennyiségétől függ;
3. Ezután az eredményt értékelik. Többcsatornás spektrofotométer segítségével a vizsgált anyag optikai sűrűségét összehasonlítják a kontrollminták optikai sűrűségével, és az eredményeket matematikailag feldolgozzák. A páciensben lévő antitestek mennyisége közvetlenül függ az adott lyuk optikai sűrűségének magasságától.

Emlékeztetni kell arra, hogy minden tesztrendszerhez egyedi mutatókat dolgoznak ki az eredmények, a normalitás és a patológia mutatóinak rögzítésére („referenciaértékek”). Ezt figyelembe kell venni az egyes konkrét vizsgálatok eredményeinek értékelésekor.

Helytelen egy laboratórium eredményeit egy másik laboratórium „referenciaértékei” alapján értelmezni. Ugyancsak helytelen a különböző laboratóriumok eredményeinek összehasonlítása egymással.

Az egyes fertőzések eredményeinek értékelésekor fontos a kimutatott antitestek osztálya és mennyisége. Nemcsak a fertőzés etiológiájának kérdése függ ettől, hanem a betegség várható stádiuma (akut, krónikus), valamint aktív fertőzés (akut vagy krónikus exacerbáció) jelenléte a vizsgálat időpontjában.

Mi az antitestek megjelenésének hozzávetőleges időtartama?

A legkorábbi antitestek az IgM. Az esetleges fertőzés után 1-3 héttel kimutathatók, ami a fertőzéses folyamat akut fázisát jellemzi. Az IgM antitestek megjelenésének második helyzete egy krónikus folyamat súlyosbodása. Az IgM átlagosan körülbelül 3 hónapig kering, majd mennyiségük fokozatosan eltűnik. Egyes betegeknél azonban a fertőzést követő 1-2 éven belül nyomokban IgM kimutatható.

A fertőzést követő 4. héttől kezdenek megjelenni az IgG antitestek. A legtöbb fertőzésnél a titerük fokozatosan emelkedik maximummal különböző időpontokban (átlagosan 1,5-2 hónap után), majd a titer alacsony szinten marad és immunitást jelez. Egyes betegségekben az IgG szintje nem magas.

Antitest kimutatási lehetőségek

• Az IgM antitestek izolált kimutatása primer fertőzés jelenlétére utal.
• Az IgM és az IgG egyidejű kimutatása a vérben jellemző az előző 2-3 hónapos primer fertőzésre, valamint egy krónikus betegség súlyosbodásakor.
• Az izolált IgG kimutatása mind a betegséggel szembeni immunitást, mind a krónikus fertőzést jelezheti. A második helyzetben mind az antitestek mennyisége (titer), mind ennek a titernek az időbeli változása fontos. A vizsgálatokat általában 2-4-6 hetes időközönként végzik.

Az ELISA analízis egy modern laboratóriumi diagnosztikai technika számos különböző betegség esetében. A rövidítés az enzim immunoassay rövidítése. A technika lényege az antitestek titerének (aktivitásának) meghatározása.

Az ELISA technika jelenleg egyre nagyobb népszerűségnek örvend. A klinikai gyógyászatban különféle patológiák diagnosztizálására, valamint olyan kísérleti vizsgálatokra használják, amelyek a vizsgált táptalajban a különböző vegyületek koncentrációjának pontos meghatározását igénylik.

Az ELISA módszer elve

Az enzimes immunoassay egy immunológiai reakció. Ez specifikus antitestek hozzáadásán alapul
vagy antigéneket a tesztközegbe (leggyakrabban a vizsgált vérbe), majd a keletkező antigén-antitest komplexek koncentrációjának enzimatikus meghatározása következik. A komplex koncentrációja alapján meg lehet ítélni a vizsgálandó vegyület szintjét vagy aktivitását a tesztközegben.

Az antigén-antitest komplexek koncentrációjának meghatározását általában speciális berendezéssel, kromatográfiás módszerrel végzik.

Használati javallatok

Az ELISA elemzést különféle indikációkra végzik, a klinikai gyógyászatban a főbbek a következők:

• A túlnyomórészt szexuális úton terjedő fertőző patológia (STI) diagnosztizálása, amely magában foglalja a chlamydia, mycoplasmosis, ureaplasmosis, trichomoniasis, valamint a fertőző ágens elleni specifikus antitestek azonosítását.
• Különböző lokalizációjú fertőző betegségek diagnosztizálása a kóros folyamat stádiumának meghatározására, elsősorban a parenterális vírusos hepatitis és a HIV diagnosztizálásának folyamatában.
• Hormonkoncentrációk meghatározása az endokrin rendszer szerveinek (endokrin mirigyek) különböző patológiáinak diagnosztizálására.
• Különféle vegyületek meghatározása a szervezet mérgezésének okának diagnosztizálására mérgezés, rovar- vagy kígyócsípés esetén.

Ezen orvosi indikációk esetén ELISA vérvizsgálatot végeznek. Ezt a technikát a kísérleti gyógyászatban is aktívan alkalmazzák különböző klinikai vizsgálatok során, az immunprofilaxis új gyógyszerek és vakcinák kifejlesztése során.

Hogyan történik a kutatás

Az ELISA-val végzett vérvizsgálatot speciális laboratóriumban végzik. Ennek végrehajtásához először vénás vért vesznek, általában a cubitalis vénából 5-10 ml térfogatban, amelyet azután a laboratóriumba küldenek. Átlagosan a vizsgálat eredményét már másnap meg lehet kapni, ami fontos pont a betegség diagnosztizálását követő azonnali kezelés felírásához.

Hogyan készüljünk fel az ELISA-ra

Ahhoz, hogy megbízható kutatási eredményeket kapjon az enzim immunoassay segítségével, kövesse néhány egyszerű előkészítő ajánlást, amelyek magukban foglalják:

• A vizsgálat előtti napon abba kell hagynia a zsíros ételek (hús, füstölt hús) és az alkoholfogyasztást.
• A vizsgálathoz szükséges anyagot reggel, éhgyomorra kell benyújtani.
• A vizsgálat napján tanácsos kerülni a fizikai és pszicho-érzelmi stresszt.
• A vizsgálat előtt meg kell próbálnia nem dohányozni.

Az enzimhez kötött immunszorbens teszt hamis pozitív eredményének többsége az előkészítő ajánlások nem megfelelő végrehajtásából adódik. Ez a legtöbb esetben zsíros ételek fogyasztásával jár, ami a trigliceridek (zsírok) koncentrációjának növekedéséhez vezet a vérplazmában, ami csökkenti az ELISA specifitását.

Az eredmények dekódolása

Az ELISA-val végzett antitestek vérvizsgálatának 2 módosítása van - minőségi és mennyiségi meghatározás. Nál nél
Az antitestek kvalitatív meghatározásánál az eredmény lehet pozitív (antitesteket észlel, jelezve a fertőző ágens által okozott kóros folyamat esetleges jelenlétét) vagy negatív (nincs antitest, ami fertőző folyamat hiányát jelzi).

Az antitestek hiánya nem mindig 100%-ban jelzi a fertőző folyamat hiányát. Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a fertőzés után az antitestek nem azonnal, hanem egy bizonyos ideig (legalább körülbelül 2 hétig) képződnek. Ezért a fertőzés hiányának megerősítésére az ELISA-t egy idő után meg lehet ismételni.

A kvantitatív ELISA-t az antitestek titerének (aktivitásának), valamint osztályainak meghatározására használják. A legtöbb esetben a fertőző betegségek diagnosztizálásához IgG (immunglobulin G) és IgM (immunglobulin M) osztályú antitesteket határoznak meg, amelyek a fertőzés után különböző időközönként képződnek a szervezetben, így a vizsgálati eredmény megfejtésének több jelentése is lehet:

• Az IgM aktivitás növekedése és az IgG hiánya a közelmúltban történt fertőzés és a fertőző folyamat akut lefolyásának bizonyítéka.
• Az IgM és IgG aktivitásának növekedése a fertőző folyamat súlyosbodása annak krónikus lefolyása és hosszan tartó fertőzése során.
• A magas IgG aktivitás és az IgM hiánya a fertőző folyamat krónikus lefolyása egy régóta fennálló fertőzés hátterében, amely után több mint hat hónap telt el (az IgG osztályú antitestek képződéséhez szükséges idő).

Általánosságban elmondható, hogy az egyes fertőző folyamatok ELISA-eredményeinek megfejtése bizonyos jellemzőkkel rendelkezik. A fertőző betegség jelenlétének pontosabb meghatározását, valamint lefolyásának szakaszát orvos végzi el.

Az ELISA jelenleg a választott módszer a legtöbb fertőző betegség diagnosztizálására. Az ilyen vizsgálat eredményei alapján az orvosnak lehetősége van pontos diagnózis felállítására és a kóros folyamat stádiumának meghatározására a későbbi megfelelő és hatékony kezelés előírása érdekében.

A modern diagnosztikai módszerek lehetővé teszik egy adott betegség laboratóriumi azonosítását speciális tesztek segítségével. Ezek egyikének tartalmaznia kell az enzim immunoassay-t, amelyen keresztül megerősítheti az előzetes diagnózist.

Az enzimes immunoassay ELISA az egyik leghatékonyabb és legmodernebb módszer az immun- és hormonális egyensúlyhiányhoz, valamint az onkológiai folyamatokhoz kapcsolódó rendellenességek azonosítására. A vizsgálat során kimutathatóak a vérben a szervezetben fertőzés esetén termelődő antitestek. Ezt az árnyalatot figyelembe véve a betegség már a fejlődés legkorábbi szakaszában is kimutatható.

Mi a technika alapja?

Az ELISA analízis eredményei az enzimekre adott kémiai reakciókon alapulnak, amelyek speciális azonosító jelekként szolgálnak az antitestek felismeréséhez. Következésképpen az immunkémiai reakciók során az antitestek kölcsönhatásba lépnek bizonyos antigénekkel. Mindez alapot ad annak állítására, hogy az ELISA-val végzett véradás során a hamis eredmények minimálisak.

A vizsgálat lehetővé teszi az immunsejtek számának, tulajdonságaik, valamint a szükséges antitestek jelenlétének meghatározását.

Az eredmény akkor tekinthető pozitívnak, ha az oldat elszíneződését észlelik. A szín azt jelzi, hogy az antigének kölcsönhatásba lépnek az antitesttel. Ha semmi ilyesmi nem történik, az eredmény negatív.

A szervezet védekező funkcióinak átfogó felmérésére enzimhez kötött immunszorbens tesztet (ELISA) végeznek. A vizsgálat során meghatározzák az immunsejtek számát és tulajdonságait, valamint a szükséges antitestek jelenlétét. ELISA vérvizsgálatot végeznek fertőző, hematológiai, autoimmun betegségek, primer és másodlagos immunhiányos betegségek diagnosztizálására. Nézzük meg, mi az ELISA vérvizsgálat, és milyen jelzések léteznek a vizsgálat elvégzésére.

Ami

Az ELISA módszerrel végzett vérvizsgálat olyan laboratóriumi módszer, amellyel antitesteket vagy antigéneket határoznak meg a vérmintában. Ez a vizsgálat az immunglobulinok, az immunológiai komplexek és a hormonok szintjének meghatározására szolgál.

Az elemzés indikációi

A következő indikációk léteznek az ELISA vérvizsgálat előírására:

• szexuális úton terjedő fertőzések diagnosztizálása - ureaplasma, mycoplasma, chlamydia, trichomonas, szifilisz;
• vírusos betegségek diagnosztizálása - citomegalovírus, herpesz, hepatitis, Epstein-Barr vírus;
• a hormonszint meghatározása;
• onkológiai betegségek diagnosztizálása;
• az immunhiány meghatározása;
• allergiák diagnosztizálása;
• műtét előtti átfogó vizsgálat szervátültetés előtt;
• a terápia hatékonyságának értékelése.

A módszer elve

Az enzim immunoassay módszer működési elve a vérben lévő specifikus antitestfehérjék - immunglobulinok - meghatározásán alapul. Az immunglobulinokat az emberi immunrendszer termeli, amikor az antigének (idegen mikroorganizmusok) belépnek a szervezetbe. Az ilyen immunmolekulák a szervezetben számos fertőző kórokozóhoz kötődnek, és semlegesítik azokat.

Az immunglobulinoknak van egy fontos tulajdonságuk – a specifitás. Ennek köszönhetően kötődni tudnak egy specifikus antigénhez, antigén-antitest komplexet képezve. Az ELISA vérvizsgálat során ezt a komplexet határozzák meg minőségileg és mennyiségileg.

Az immunglobulinoknak öt osztálya van. De általában három osztályt határoznak meg - immunglobulinok A, M, G. Ezek az antitestek a fertőzés pillanatától különböző időpontokban halmozódnak fel a szervezetben.

• Immunglobulinok M osztály (IgM) a fertőzés pillanatától számított ötödik napon jelennek meg a vérben. 5-6 hétig maradnak a szervezetben, majd eltűnnek a véráramból. Az IgM antitestek a betegség akut időszakát vagy a betegség súlyosbodását jelzik a krónikus lefolyása során.
• Körülbelül 3-4 héttel a fertőzés után immunglobulinok jelennek meg a vérben G osztály (IgG). Az emberi vérben több hónapig vagy akár évekig is létezhetnek. Az ELISA vérvizsgálat értelmezése szerint, ha két hét elteltével egymás után vett két vérmintában megemelkedik az IgG immunglobulinok mennyisége, akkor aktuális fertőzésről vagy újrafertőződésről beszélnek - ugyanazzal a fertőzéssel történő újrafertőződésről.
• Immunglobulinok A osztály (IgA) fertőzést vagy fertőző betegség súlyosbodását követően 2-4 héttel kimutatható ezzel a kutatási módszerrel. Ezeknek mindössze 20%-a kering a vérben, a többi a nyálkahártya váladékában van. Az IgA antitestek a fertőző ágensek elpusztulása után 2-8 héttel eltűnnek a véráramból. Ezen immunglobulinok eltűnése a fertőzés gyógyulását jelenti. Ha a betegség vége után meghatározzák az IgA antitestek jelenlétét a vérben, ez azt jelenti, hogy a betegség krónikus stádiumba került.

Felkészülés az elemzésre

Az ELISA módszerrel végzett vérvizsgálathoz leggyakrabban emberi vért használnak. De megvizsgálhatja az üvegtest tartalmát, a cerebrospinális folyadékot és a magzatvizet is.

A vizsgálathoz vérmintát vesznek a páciens antecubitalis vénájából. Javasoljuk, hogy éhgyomorra adjon vért (legalább 12 órának kell eltelnie az utolsó étkezés óta). Szükséges az orvos tájékoztatása, ha a beteg gyógyszert szed, mert ezek egy része megváltoztathatja a vizsgálat eredményét. A vizsgálati eredmények megbízhatóságát az alkohol- és drogfogyasztás befolyásolja.

Dekódolás

Ennek a tesztnek az eredménye az egyes immunglobulinosztályok meghatározásának pozitív (+) vagy negatív (-) eredményét jelzi.

Tekintsük az ELISA vérvizsgálat egy lehetséges értelmezésének értelmezését.

• Az IgM, IgG, IgA negatív eredménye a fertőzésekkel szembeni immunitás hiányát jelenti.
• Az IgM, IgA negatív és az IgG pozitív eredménye a fertőzés utáni vagy az oltás utáni immunitás.
• Az IgG, IgA negatív vagy pozitív eredménye és az IgM pozitív eredménye – akut fertőzés.
• Az IgM, IgG, IgA pozitív eredménye egy krónikus fertőző betegség súlyosbodása.
• Negatív IgM eredmény és negatív vagy pozitív IgG eredmény, IgA – krónikus fertőzés.
• Negatív IgM eredmény és IgG, IgA nem észlelhető - gyógyulás.

A módszer előnyei

Az ELISA vérvizsgálatnak számos előnye van. A főbbek azonosíthatók:

• viszonylag nagy pontosság (érzékenység);
• a korai diagnózis lehetősége;
• a fertőző folyamat dinamikájának nyomon követésének képessége;
• magas szintű egységesítés, amely lehetővé teszi a tömeges vizsgálatokat;
• az elemzés eredményének megszerzéséhez szükséges rövid idő;
• egyszerű használat;
• az elemzés minden szakaszának automatizálása;
• viszonylag alacsony költséggel.

Hibák

Az ELISA módszer hátránya, hogy néha álnegatív vagy álpozitív eredményeket ad. A vizsgálat során előforduló technikai hibákon kívül a hamis eredmények oka lehet a páciens reumás faktora, krónikus betegségek jelenléte (amelyben antitestek termelődnek), anyagcserezavarok vagy bizonyos gyógyszerek alkalmazása.

• ascariasis;
• trichinosis - az elemzést többször elvégzik, az antitestek maximális szintjét a fertőzés után 4-12 héttel határozzák meg;
• cysticercosis;
• taeniasis;
• fascioliasis – a betegség akut szakaszában antitesteket észlelnek;
• opisthorchiasis – differenciáldiagnózist végeznek a betegség krónikus és akut formái között;
• giardiasis;
• zsigeri és bőr leishmaniasis;
• amőbiasis;
• toxoplazmózis.

4.2 4,20 az 5-ből (5 szavazat)