A gombás fertőzés szerepe az emberi patológiában. A mikózisok diagnosztizálása

Az Orosz Föderáció Járványügyi Felügyeleti Állami Bizottságának SP 1.2.036-95 utasítása szerint, Moszkva, 1996 „Eljárás az I-IV patogenitási csoportba tartozó mikroorganizmusok nyilvántartására, tárolására, szállítására és szállítására” a járványügyi veszély szerint, élesztő és a penészgombák, valamint a dermatofiták a fertőző betegségek kórokozóinak III-IV csoportjába tartoznak, ezért a velük való munka során be kell tartani a speciális biztonsági szabályokat, az ipari higiéniát, a járványellenes rendszert és a személyes higiéniát, amelyek célja a személyes higiénia. valamint a fertőzések, allergiák és a fertőzés terjedésének nyilvános megelőzése.

A III-IV. patogenitási csoportba tartozó mikroorganizmusokkal foglalkozó laboratórium könnyen fertőtleníthető bútorokkal van felszerelve, beleértve a tiszta laboratóriumi üvegedények, reagensek, táptalajok, megfelelő felszerelések és eszközök tárolására szolgáló szekrényeket. A munkához alkohollámpákra vagy gázégőkre, mikrobiológiai hurokra, mikológiai spatulára, spatulára, epiláló és anatómiai csipeszre, körömvágó ollóra, szikére, ollóra, Volkmann kanalakra, pipettákra, Pasteur pipettákra, boncolótűkre, üvegrudakra, fecskendőkre, alacsony fordulatszámú centrifugákra van szüksége , rázókészülék , Petri-csészék, kémcsövek, üvegáru, Wood's ultraibolya lámpa szűrővel, mikroszkópok, megvilágítók, termosztátok, autoklávok, hűtőszekrények, száraz hőkemencék, baktériumölő lámpák.

Anyagfelvétel kutatáshoz

A mikózisok mikroszkópos diagnózisa magában foglalja a micélium és a spórák kimutatását a vizsgált bioanyagban. Az epidermális pikkelyeket, a hajat és a körmöket a vizsgált bioanyagnak tekintik. A vizsgálat elvégzése előtt elengedhetetlen követelmény a helyi kezelés legalább tíz napig tartó és a szisztémás kezelés hiánya egy hónapig. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a páciens tisztítószerek (különösen az antiszeptikumokat tartalmazó) használata befolyásolhatja a vizsgálati eredmények megbízhatóságát, ezért a vizsgálat előtt 3-4 nappal a mosás tilos.

A bioanyag felvételéhez és a gyógyszer elkészítéséhez szükséges eszközöket az ábra mutatja be:

Fénykép. Műszerek a bioanyag felvételéhez és a gyógyszer elkészítéséhez.

Ha gyanítható a sima bőr mikózisa, a kéz és a láb mikózisa a körömlemezek károsodása nélkül, megvizsgálják a lézió felszínéről származó epidermális pikkelyeket. A sima bőr mikózisa esetén célszerű az epidermiszt a lézió marginális zónájából vizsgálni, mivel a kóros folyamat gyakran a központi zónában megszűnik. Ugyanakkor nem szabad megfeledkezni a vellus haj károsodásának lehetőségéről, amely meghatározza a további kezelési taktika megválasztását. A szőrszálakat epiláló csipesszel távolítják el. A körömlemezek károsodása nélküli kezek és lábak mycosisára a harmadik és negyedik interdigitális redőkből, valamint a tenyérből és a lábboltozatból származó epidermális pikkelyeket vizsgálják.

Ha fennáll a hosszú haj (fejbőr, szakáll, bajusz és szemérem), valamint a vellusszőr gombás fertőzésének gyanúja, mikroszkópos vizsgálatot végzünk. A fejbőr trichophytosisával a haj a szőrtüsző szája felett 1-2 mm-rel letörik, csonkokhoz és pöttyökhöz hasonlítva. Ha a szőrszálat epiláló csipesszel nem lehet megfogni, akkor szike hegyes végével vagy boncolótűvel próbálják eltávolítani.

A fejbőr mikrospóriájával a haj 5-6 mm magasságban leszakad, „kaszált réthez” hasonlítva. Ezeket a törött szőrszálakat vizsgálják mikroszkóppal. A szőrszálakat csipesszel távolítják el az elváltozásokról.

A favusszal a scutula felszíne feletti ritkuló szőrszálakat vizsgáljuk.

Ha gyanítható az onychomycosis, megvizsgálják a subungualis hyperkeratosis területéről származó könnyen zúzott anyagot, valamint magukat a megváltozott körömlemezeket.

Meg kell érteni, hogy a pácienstől származó bármely vizsgálati anyag potenciálisan fertőző, ezért a begyűjtést olyan helyiségben kell végezni, ahol a napi nedves tisztítást fertőtlenítőszerekkel (5% klóramin oldat, 5% tisztított fehérítő) és levegővel kell elvégezni. ultraibolya besugárzókkal sterilizálják (ezek magukban foglalják 1-1,5 órát, és a kikapcsolás után 20 perccel lépnek be a helyiségbe). A termosztátokat hetente töröljük le 0,5%-os klóramin oldattal, a falakat havonta egyszer fertőtlenítjük. Munkavégzés közben az orvost maszkban, védőszemüvegben, köpenyben és kesztyűben kell védeni. A bioanyag felvételére szolgáló eszközöket, kesztyűket, tárgylemezeket és fedőlemezeket, eldobható kendőket és szalvétákat használat után fertőtlenítjük úgy, hogy 30 percre 1,5%-os clindesin-extra (5%-os fenolos vagy 5%-os lizololdat) oldatba merítik. A fennmaradó kóros anyagot (haj-, bőr- és körömpikkelyeket) 2 atm nyomáson autoklávozzuk. és 132°C-on 20 percig (kontroll - karbamid) vagy 1,5 atm nyomáson. és 126˚ C-on 30 percig (kontroll - benzoesav), vagy forraljuk 1 órán át vízben vagy 30 percig 1%-os szappan-szóda oldatban.

A kóros anyagot speciális tartályban vagy fémdobozban szállítják a laboratóriumba, védve a közvetlen napfénytől. A kísérő dokumentum tartalmazza a beteg vezetéknevét, utónevét, családnevét, nemét, életkorát és címét, a várható klinikai diagnózist, a vizsgált anyag nevét, gyűjtésének idejét, az elváltozás helyét, a kórtörténetet. szám, az orvos és az anyagot küldő intézmény neve.

A gyógyszer elkészítése

A lézióból hámpelyhek kinyerése után készítményt készítenek a mikroszkópos vizsgálathoz. A tárgylemezre helyezett vizsgálandó anyagra 1-2 csepp 20%-os KOH-t csepegtetünk, majd a tárgylemezt égő lángja felett addig hevítjük, amíg a kerülete körül fehéres kristályos lúgperem jelenik meg. Ezt követően a mintát fedőlemezzel letakarják (melyet bonctűvel nyomnak le), és mikroszkóp alatt megvizsgálják. A vizsgálatot legkésőbb a gyógyszer elkészítése után 2 órával el kell végezni a lúgos kristályosodás lehetősége miatt.

A gombás fertőzés gyanúja esetén a hajkészítmény elkészítésének módja megegyezik az előzőekben leírtakkal, azzal a különbséggel, hogy a fedőüveget nem boncolótűvel nyomják le (a haj összezúzásának elkerülése érdekében).

Fénykép. Kikristályosodott lúg peremének megjelenése.

A gyógyszer elkészítéséhez a levágott körömlemezek darabjait 20%-os KOH-os kémcsőbe merítjük, és termosztátban 1 órán át exponáljuk (t≈37˚C), majd a kapott zselészerű masszát egy tárgylemezre visszük. , fedőlemezzel letakarva és mikroszkóp alatt vizsgálva.

A körömlemezekkel ellentétben a subungualis hyperkeratosis zónájából könnyen zúzott anyagból készült mintákat üveglemezre helyezzük, 1-2 csepp 20%-os KOH-t csepegtetünk rájuk, majd a tárgylemezt égőláng felett fehéres pereméig hevítjük. kristályos lúg jelenik meg a periféria mentén (65. ábra). Ezután a mintát fedőlemezzel fedjük le, amelyet finoman megnyomunk egy boncolótűvel, és mikroszkóp alatt megvizsgáljuk.

A készítmény mikroszkópos vizsgálata

A mikroszkópos vizsgálathoz laboratóriumi mikroszkópot használnak merítés nélkül. Az epidermális pikkelyek, a bőr alatti hyperkeratosis területéről származó pikkelyek, valamint az oldott körömlemezek mikroszkópos vizsgálata először kis nagyítással (100-as), majd micéliumszálak észlelésekor a „folyók térképére” (vasutak) emlékeztet. , az objektív nagyobb nagyításra kapcsol (×400) . Közepes nagyításnál a micélium bizarr alakú üvegrudakra hasonlít, amelyek megváltoztatják a fénytörés mértékét, amikor mikroszkóp mikrocsavarral dolgozunk.

A hajminta mikroszkópos vizsgálatát azonnal elvégezzük közepes nagyítás mellett (×200 vagy ×400). Trichophytosis esetén a nagy, sorokba rendezett spórák a haj belsejében találhatók, míg a microsporia esetén sok kis mozaik spóra található a haj belsejében (innen ered a „microsporia” kifejezés). Néha megfigyelhető a burok jelenléte a haj külső oldalán - ez jellemző mind a trichophytosisra (az ectothrix egy változata, a spórák nagyok), mind a mikrospóriákra (ebben az esetben a hüvely kis spórákból áll). Az érintett haj favusszal történő mikroszkópos vizsgálatakor a haj belsejében kerek vagy sokszögű spóracsoportok mellett légbuborékok és micéliumszálak is találhatók.

A készítményeket az elkészítéstől számított 2 órán belül meg kell tekinteni a lúgos kristályosodás lehetősége miatt. A diagnózis megbízhatóságának növelése érdekében egy elváltozásból több (legalább kettő) készítményt kell készíteni. A mikózisok mikroszkópos diagnosztizálásának lehetséges hibái összefüggésbe hozhatók a készítmények rossz minőségű előkészítésével (az égő lángja feletti túlmelegedés, ami a lúg idő előtti kikristályosodásával jár együtt), valamint a kutató elégtelen tapasztalatával (amikor a rostok a készítményben véletlenül talált szöveteket gyakran összetévesztik a micéliumfonalakkal).

A MYCOSES LABORATÓRIUMI DIAGNOSZTIKÁJA

Anyagfelvétel a gomba laboratóriumi vizsgálatához.

1.OST 42-21-2-854: 2000. június 27-i 222/80 számú megrendelés
2. Felszerelés: csipesz, üveglap, olló, Volkmann kanál.
4.Javallatok: gombás betegségek.
5. Komplikációk: nincs.

A kezelőszoba előkészítése:

Változó megoldások.

Készít:
-1%-os klóramin oldat rongyokhoz
-3%-os klóramin oldat – kötszerek és csipeszek fertőtlenítésére
- mosóoldat (156 ml hidrogén-peroxid + 5 g mosópor + 839 ml desztillált víz) - csipeszek feldolgozásához
- 6%-os hidrogén-peroxid oldat – kesztyűk kezelésére.

A manipuláció végrehajtásának algoritmusa.

Fognod kell csipeszt, tárgylemezt, Volkmann kanalat és ollót;
- hívja be a beteget az öltözőbe;
- a beteg széken vagy kanapén ül;
- m/s áll.

Technika:

Csipesszel távolítsa el a bőrpelyheket és a hajat az elváltozásról;
- a kivett anyagot tárgylemezre helyezzük és egy másik tárgylemezzel lefedjük.
- mosson kezet szappannal;
- a felvett anyagot laboratóriumba küldeni.

ANYAGGYŰJTÉS

Köröm vétel vizsgálatra.

Vegyünk ollót és üveglapokat;
- ollóval vágjon le egy darabot a köröm szabad széléről;
- fedjük le a felvett anyagot egy másik tárgylemezzel;

Áztassa az ollót és a csipeszt 3%-os formaldehid oldatba.

Az érintett körmökről a megfelelő anyaggyűjtés a sikeres mikrobiológiai kutatás kulcsa. Az anyag felvételekor nem mindig ragadják meg a köröm életképes gombákat tartalmazó területeit. Természetes, hogy az életképtelen gombák nem nőnek a tenyészetben, és fajuk sem határozható meg.

A bevenni kívánt köröm területét az onychomycosis formája határozza meg.

Tehát az onychomycosis felületes formájával kaparásokat kell készíteni a körömlemez felületéről.

A leggyakoribb distalis subungualis formában a legéletképesebb gombák a körömlemez alatt helyezkednek el. A vizsgálatra küldött anyag ne csak a körömlemez levágását tartalmazza, hanem a körömágyból, a lemez alól lehúzott kaparékot is.

Ezenkívül a változatlan köröm területeit is meg kell ragadni, mivel a legaktívabb gombák közöttük és a köröm érintett területeinek határán találhatók.

A proximális subungualis formánál nehéz átvenni az anyagot. Ezekben az esetekben néha, különösen ha szövettani vizsgálatot vagy differenciáldiagnózist végeznek, körömbiopsziát, esetenként fúrót is végeznek.

Paronychia esetén a proximális gerincről és az alól kaparást készítenek.

A bakteriális szennyeződés elkerülése érdekében a körömet minden esetben etil-alkohollal kell kezelni a mintavétel előtt.

MIKROSZKÓPOS VIZSGÁLAT

A gombák patológiás anyagának mikroszkópos vizsgálatát natív és festett készítményekben végezzük.

A festetlen készítmények elkészítéséhez a kapott anyagot szikével vagy boncolótűvel összetörik, és egy tárgylemez közepére helyezik. A gomba elemeinek pontosabb azonosítása érdekében az anyagot tisztítják (macerálják). Ebből a célból különféle anyagok, leggyakrabban maró lúgok (KOH, NaOH) segítségét veszik igénybe, amelyek feloldják a hámréteget, nyálkát, gennyet, halványítják a haj pigmentjét, és ezáltal a gombákat kutatásra bocsátják.

Cseppentsünk 1-3 csepp 20-30%-os KOH (NaOH) oldatot a megpuhult bőrre vagy körömpelyhekre, amelyeket egy tárgylemez közepére helyezünk. A vizsgált anyagot lúgcseppekben óvatosan hevítik alkohollámpa lángja fölött, amíg a csepp peremén alkálikristályok finom fehér pereme meg nem jelenik. Ne melegítse forráspontig. Melegítés után a cseppet fedőüveggel fedjük le, elkerülve a légbuborékok bejutását.

R. A. Arabian és G. I. Gorshkova (1995) azt javasolja, hogy a bőrpikkelyekből és hajból készült készítményeket 5-10 percig tisztítsák és fedőüveggel, a körömlemezeket pedig 30-40 percig hagyják a mikroszkópos vizsgálat előtt.

A készítmények tisztítása melegítés nélkül is elvégezhető, ehhez 30-60 percig 20%-os KOH-oldatban hagyjuk őket, vagy más módszert alkalmazunk a kóros anyag eltávolítására: klorallaktofenol Aman szerint; laktofenol; 15% dimetil-szulfoxidot és KOH-t tartalmazó vizes oldat. Jó eredményeket kapunk a körömlemezek tisztítása után, 24 órán át 5%-os KOH-oldatba helyezve, ebben az esetben nincs szükség melegítésre.

A mikroszkópos vizsgálatot hagyományos laboratóriumi mikroszkóppal, merítés nélkül végezzük.

A mikroszkóp kondenzátorát le kell engedni, és a nyílást szűkíteni kell. Eleinte a kábítószert kis (40-szeres) nagyítással találják az üvegen, majd a későbbi kutatásokat nagyobb nagyítással (100x) végzik;

A gyógyszert 400-szoros nagyítással részletesen tanulmányozzák. Számos gyógyszer tanulmányozása szükséges az elemzés megbízhatóságának növelése és a hamis pozitív eredmények elkerülése érdekében.

A gombák mikroszkópos diagnózisának hibái mind a gyógyszer elkészítésének hibái, mind a laboratóriumi asszisztens elégtelen tapasztalata miatt fordulhatnak elő.

A gyártási hibák elsősorban a következőkhöz kapcsolódnak:
a gyógyszer túlmelegedésével, ami az alkálikristályok elvesztéséhez, a haj pusztulásához és a kóros anyagban a finomszemcsés bomlás megjelenéséhez vezethet.

A megnyúlt, sima alkálikristályok lineáris elrendezése nagyon emlékeztet a szeptummicélium fonalára, még tiszta üvegen is, kóros anyag nélkül.

A differenciáldiagnosztikai jellemzők a kristályok kivételes egységessége, üvegszerű átlátszósága, sokoldalú élei, valamint az egyik elem és a másik közötti elválaszthatatlan kapcsolat hiánya. Kétes esetekben ajánlatos enyhén melegített desztillált vizet cseppenni a készítményhez, amely gyorsan feloldja az alkálikristályokat.

A következőket összetéveszthetjük gombaelemekkel:

- zsírcseppek,
- légbuborékok,
- pamut ruhaszálak
- és az úgynevezett „mozaikgomba”.

A bőrlipidek, a zsírsejtek lebomlása és a keratohyalin szemcsék, különösen a szabályos alakúak, hasonlíthatnak az egyes gombaspórákra. Ám a formák és legfőképpen a méretek változatossága, a képződmények (vakuólumok, kagylók) belső szerkezetének hiánya ezeknek az elemeknek a gombás természete ellen szól. A nem megfelelően tisztított elváltozás kóros anyagának felvételekor lipidek is bekerülhetnek a készítménybe.

A légbuborékok hasonlíthatnak élesztőszerű sejtek spóráira, de ez utóbbiakkal ellentétben sűrű, sötét membrán veszi körül őket, és a legkisebb légbuborékok is mindig nagyobbak, mint a gombasejtek.

A zokni, ruházat stb. szövetéből származó szálak általában külön fekszenek a kóros anyagtól, mindig nagyobbak, mint a hifák, durvábbak és nem szeptikusak.

A "mozaikgomba" egy olyan műtermék, amely a kristályosodási folyamat során keletkezik (valószínűleg a koleszterin lebomlása miatt). Úgy néz ki, mint egy háló vagy hurkok, amelyek körvonalai megfelelnek a kérges pikkelyek határainak; a micéliumszálakkal ellentétben soha nem lépi át az epidermális sejtek falát.

Egyes laboratóriumokban a mikroszkópos vizsgálatra szánt készítményeket 15-30%-os KOH-oldattal derítik, amelyhez 5-10% Parker kereskedelemben kapható sötétkék tintát (Parker's Superchrome Blue-Black Ink) adnak.

Ezzel a színezéssel a hifák és a spórák kékre színeződnek.

A mikroszkópos vizsgálat fonalas gombahifákat vagy bimbózó sejteket tár fel (1. ábra).

Így a mikroszkópos vizsgálat csak a fertőzés gombás természetére ad következtetést, az azt okozó gomba típusára azonban nem.

Természetesen a mikroszkópos vizsgálat eredményessége függ a laboratóriumi dolgozó képzettségétől.

Rizs. 1. T. rubrum által érintett körmök kaparékának mikroszkópos vizsgálata. Gombahifák láthatók.

KULTURÁLIS KUTATÁS

Az anyagot szabványos Sabouraud táptalajra oltják be, gyakran hozzáadott antibiotikumokkal. A dermatofita fertőzések diagnosztizálása során a Sabouraud-féle táptalajhoz cikloheximidet szokás adni, amely gátolja a levegőből érkező szennyező gombák szaporodását. Kész kereskedelmi táptalajok kaphatók hozzáadott antibiotikumokkal és cikloheximiddel. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy sok nem dermatofita penészgomba és néhány Candida faj nem növekszik cikloheximidet tartalmazó táptalajon, ezért javasolt a cikloheximidet tartalmazó Sabouraud-táptalajra, illetve az anélküli táptalajra oltani. A fajok azonosítását általában a kifejlett tenyészet mikroszkópos vizsgálatával vagy szelektív táptalajon történő szubkultúrával végezzük (2-15. ábra).

Rizs. 2. Az érintett körmökből izolált T. rubrum gomba tenyésztése. Sabouraud táptalajon (balra) és kukorica-agaron (jobbra) nyertük.

Rizs. 3. A T. mentagrophytes var. érintett körmökből izolált interdigitale. Sabouraud médiumon szerezték be.

Rizs. 4. A Candida albicans gomba tenyésztése. Sabouraud médiumon szerezték be.

Rizs. 5. Az érintett körmökről izolált Torulopsis glabrata gomba tenyésztése. Sabouraud médiumon szerezték be.

Rizs. 6. Az érintett körmökből izolált Ulocladium sp. gomba tenyészete.

Rizs. 7. Az érintett körmökből izolált Acremonium sp. mikromorfológiája.

Rizs. 8. Az érintett körmökből izolált Fusarium sp. mikromorfológiája.

Rizs. 9. Az érintett körmökből izolált Scopulariopsis sp. mikromorfológiája.

Rizs. 10. Az érintett körmökből izolált Candida albicans mikromorfológiája.

Rizs. 11. Az érintett körmökből izolált Altemaria sp. mikromorfológiája.

Rizs. 12. Az érintett körmökből izolált Aspergillus sp. mikromorfológiája.

Rizs. 13. Az érintett körmökből izolált Ulocladium sp mikromorfológiája.

Rizs. 14. Az érintett körmökből izolált Chaetomium sp. mikromorfológiája.

15. ábra: Táplálkozási vegyületek panel a dermatofiták azonosítására (bal oldalon - T rubrum kultúra, jobb oldalon - T mentagrophytes var. mterdigitale).

Balról jobbra: Sabouraud táptalaj, Baxter táptalaj, Christensen táptalaj, kukorica agar

Meg kell jegyezni, hogy egyes penészgombák, köztük a dermatofiták, lassan, 2-3 héten belül növekednek a tenyészetben.

Még ha az anyaggyűjtésre vonatkozó összes szabályt be is tartják, a laboratórium jó felszerelése és a magasan képzett személyzet mellett a kulturális kutatások pozitív eredményeinek száma nagyon kicsi.

A külföldi szakirodalom szerint a pozitív vizsgálatok százaléka nem haladja meg az 50-et.
A legjobb hazai laboratóriumokban a pozitív eredmények aránya alig éri el a 30-at.

Így az onychomycosis minden harmadik esetéből 2-ben nem állapítható meg etiológiája.

LUMISZCENCIA TANULMÁNY

1925-ben Margaret és Deveze felfedezte, hogy bizonyos dermatofitákkal fertőzött haj jellegzetes fényt ad a Deveze-szűrőn áthaladó ultraibolya sugarakban. A Wuda üveg bárium-szulfátból áll, körülbelül 9% nikkel-oxidot tartalmaz; 365 nm hosszúságú sugarakat enged át. Különféle eszközök használhatók ultraibolya sugárzás forrásaként. A ragyogás természetét nem állapították meg pontosan. A haj továbbra is ragyog, miután a gomba elpusztult, és miután megpróbálták kivonni a fluoreszkáló anyagot forró vízzel vagy hideg nátrium-bromid oldattal. A ragyogás intenzitása és jellege az oldat pH-jától függ. Úgy gondolják, hogy a fluoreszkáló anyag a gomba és a növekvő haj kölcsönhatása során jelenik meg.

A Faszűrőn átengedett ultraibolya sugarak fénye csak a Microsporum nemzetséghez tartozó gombák (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, esetenként M. gypseum és M. nanum) által érintett hajra jellemző. mint Trichophyton schonleinii . A mikrospórák, különösen a M. canis és a M. audouinii által fertőzött haj adja a legfényesebb fényt; a T. schonleinii által érintett haj tompa zöldes fluoreszcenciával rendelkezik.

A ragyogás csak a gomba által teljesen érintett hajon figyelhető meg. Lehetséges, hogy friss elváltozásokban nincs jelen. Ezekben az esetekben a szőrszálakat a szélső, legaktívabb zónából kell epilálni, és a fény a haj gyökér részében észlelhető.

A lumineszcens módszer mind diagnosztizálásra, mind a kezelés hatékonyságának nyomon követésére használható egyéni betegeknél és epidemiológiai gócokban. A kompakt mobil egységek kényelmesek a kapcsolattartók vizsgálatára iskolákban, óvodákban stb.

A lumineszcens vizsgálatot elsötétített helyiségben kell elvégezni, az elváltozásokat először meg kell tisztítani a kéregtől, kenőcsmaradványoktól stb. A lumineszcens módszerrel a pityriasis versicolor diagnosztizálható, különösen akkor, ha az elváltozások a fejbőrön helyezkednek el. Ebben a betegségben az elváltozások vöröses-sárga vagy barna fényűek. Ez a ragyogás azonban nem szigorúan specifikus, mivel megfigyelhető korpásodás esetén a fejbőrön, sőt egészséges embereknél is megfigyelhető az arcon és a felsőtesten lévő szőrtüszők szája táján. A lumineszcens módszerrel kimutatott érintett hajszálakat mikroszkópos vizsgálatnak kell alávetni.

IMMUNOLÓGIAI ÉS BIOLÓGIAI KUTATÁSOK

Immunológiai kutatási módszereket alkalmaznak a szervezetben bekövetkező specifikus változások azonosítására és a gombás betegségek szerológiai diagnosztizálására. A szérummintákban lévő specifikus antitestek kimutatására a következő szerológiai reakciókat hajtják végre: agglutináció, precipitáció, komplementkötés, immunfluoreszcencia a megfelelő antigénekkel.

A páciens testének allergiás állapotát allergiás bőrtesztekkel állapítják meg. Az allergéneket Pirquet szerint a bőrbe dörzsölve, a Mantoux szerint intradermálisan, vagy a bőrbe injekciózva alkalmazzák. A tesztek segítségével azonnali és késleltetett típusú allergiás reakciókat is kimutatnak, ami lehetővé teszi a humorális és celluláris immunitás állapotának felmérését.

A limfociták specifikus szenzitizációjának azonosítására a bazofil degranuláció, agglomeráció és elváltozás reakcióit, blast transzformációs tesztet, makrofág migráció gátlását stb. alkalmazzák.

A szerológiai és allergiás reakciók eredményeinek összehasonlítása hasznosnak bizonyul mind a mikózisok diagnosztizálására, mind a mikózisok lefolyásának előrejelzésére.

Biológiai módszer. Mély és különösen veszélyes mikózisok laboratóriumi diagnosztikájára használják. Az állatok betegtől származó patológiás anyaggal vagy a vizsgált gomba tenyészetével való fertőzésén alapul. Speciális laboratóriumokban végzik.

SZÖVETSÉGI TANULMÁNY

A dermatofiták által okozott bőrmikózisok szövettana

Az elváltozások patomorfológiai elváltozásait az epidermisz stratum corneumába, a hajba és a körmökbe gombák bejutása, valamint a bőr gyulladásos reakciója okozza, amely lehet akut, szubakut vagy krónikus. A diagnózis csak akkor tekinthető megalapozottnak, ha gombás elemeket találunk a szövettani készítményekben. Ehhez különféle szövettani festéseket használnak, a leginformatívabb a periodikus savreakció (PAS), amely lehetővé teszi a legtöbb dermatofita sejtfalának cellulózában és kitinében található poliszacharidok azonosítását (Shifu festés és módosításai). Használhat szulfatációs reakciókat és a szövettani metszetek ezüsttel való impregnálását is [Khmelnitsky O.K., 1973; Lewer W. F. és Schaumburg-Lewerl., 1983].

Az epidermisz stratum corneumában lévő gombák még speciális foltok használata esetén is kis mennyiségben kimutathatók micéliumszálak és spórák formájában. Ritka esetekben, amikor sok gomba van a léziókban, hemotoxilin-eozinnal festett metszetekben, a stratum corneumban finom bazofil struktúrák formájában mutathatók ki.

Az epidermisz gyulladásos elváltozásai változatosak lehetnek: a tüskés sejtek kisebb intra- és extracelluláris ödémájától a súlyos spongiosisig. A spongiosis általában a láb és a kéz mikózisának dyshidrotikus változataival alakul ki, klinikailag ezekben az esetekben vezikulák figyelhetők meg. Ezt a reakciót általában a T. mentagrophytes var. interdigitale. Néha kifejezett hyperkeratosis figyelhető meg az epidermiszben, amelyet leggyakrabban a T. rubrum által okozott mycosis esetén figyelnek meg.

A dermisz szövettani változásai nem specifikusak, és megfelelnek akut, szubakut és krónikus gyulladásnak.

A T. rubrum által okozott sima bőr mycosisában időnként gombákat mutatnak ki a vellus hajban és a szőrtüszőkben. A tüszők körül gyulladásos reakció alakul ki, amely a dermiszbe kerülő gombák miatt granulomatózussá válhat. Az infiltrátum központi része ezekben az esetekben suppurációnak és elhalásnak van kitéve, a perifériás része pedig limfocitákból, hisztocitákból, epithelioid és többmagvú óriássejtekből állhat, amelyek belsejében időnként gombaspórák találhatók. A spórák mérete itt eléri a 6 mikron átmérőt, a szőrben általában nem haladja meg a 2 mikront.

A fejbőr mikózisainak infiltratív-gennyes formájában, valamint a szakáll és a bajusz növekedési területén a gombás elemek a szőrtüszőben, a haj belsejében és környékén találhatók. A hajban közvetlenül a keratinizáció kezdeti zónája felett észlelhetők (körülbelül 30 mikron szinten). Különböző intenzitású gyulladásos reakció figyelhető meg a dermiszben, a legkifejezettebb a kerion Celsii-vel. Akut gennyes reakció esetén nagyszámú neutrofil leukocita figyelhető meg az infiltrátumban, a gombás elemek ebben az esetben teljesen eltűnhetnek. A folyamat krónikus lefolyása során az infiltrátum granulomatikus jelleget kaphat, többmagvú óriássejtek jelennek meg benne. A diagnózis megerősítésére, ha az infiltrátumban nincs gomba, immunfluoreszcens festési módszerek alkalmazhatók. Erre a célra fluoreszceinnel jelölt T. mentagrophytes antiszérumot használnak, amely lehetővé teszi a gomba antigének kimutatását a hajban és a perifollikuláris infiltrátumban.

A M. canis, T. tonsurans és T. verrucosum gombák által okozott infiltratív-gennyes bőrreakció kialakulása a fejbőr mikózisa (kerion Celsii), valamint a szakáll- és bajusznövekedés során az immunológiai reakció megnyilvánulása. . Ezt bizonyítja:

1. Az elváltozások spontán feloldódási tendenciája.

2. Gombás elemek hiánya, nagyon kifejezett gyulladásos reakcióval a bőr részéről T. verrucosum (faviforme) és T. tonsurans által okozott mycosis során.

3. Állandó pozitív reakció a trichophytin intradermális adagolására a zoofil trichophytinek (például T. tonsurans) által okozott mycosis infiltratív-gennyes formáiban, és negatív reakció ugyanazon T. tonsurans által okozott felületes mycosisok esetén.

A favus esetében nagyszámú micéliumszál és egyetlen gombaspóra található az epidermisz stratum corneumában. A scutulát a váladék, az epidermisz parakeratotikus sejtjei, a gyulladásos infiltrátum sejtjei, valamint a micéliumszálak és gombaspórák képviselik, amelyek főként a scutula perifériás zónájában helyezkednek el. A betegség aktív stádiumában a degeneratív szőrtüszők körüli dermiszben többmagvú óriás- és plazmasejteket tartalmazó, kifejezett gyulladásos infiltrátum figyelhető meg. A régi elváltozásokban a haj és a faggyúmirigyek hiányoznak, és fibrózis jelei vannak.

A bőr és a nyálkahártyák mikózisainak szövettana, amelyet élesztőszerű gombák okoznak

A bőr és a nyálkahártyák candidiasisa esetén a Candida nemzetség gombái az epidermisz stratum corneumában vagy a nyálkahártya epitéliumának felületes rétegeiben találhatók. A gombás elemek általában kevés számban vannak jelen, és jól megfestődnek a PAS-reakcióval vagy a Gram-festéssel; 2-4 µm átmérőjű septate elágazó micélium fonalak vagy 3-5 µm átmérőjű tojásdad spórák formájában jelennek meg. A gomba micélium formájának kimutatása diagnosztikus jelentőségű.

A bőr és a nyálkahártyák krónikus granulomatosus candidiasisának szövettani vizsgálata során a gomba elemei is túlnyomórészt az epidermisz stratum corneumában vagy a nyálkahártya hám legfelső részein találhatók, de esetenként a stratum spinosumban, belül is. a hajban és a dermisben. Súlyos hyperkeratosis és papillomatosis is megfigyelhető; a dermiszben vastag gyulladásos infiltrátum található, amely limfoid sejtekből, neutrofilekből, plazmasejtekből és többmagvú óriássejtekből áll. Az infiltrátum átterjedhet a bőr alatti zsírszövetbe.

A pityriasis versicolor esetén az epidermisz stratum corneumában nagyszámú gombás elem található finom bazofil struktúrák formájában, amelyek jól láthatóak még a készítmények hemotoxilin-eozinnal történő festésekor is. A gombákat fonalak és spórák egyaránt képviselik.

A pityriasis versicolor follikuláris formájában a szőrtüszők kitágult nyílásaiban kanos tömegek és gyulladásos infiltrátumsejtek halmozódnak fel. Gyulladásos infiltrátum is megfigyelhető a tüszők körül. A PAS-reakció hatására a szőrtüszők szájában, esetenként a perifollikuláris infiltrátumban 2-4 μm átmérőjű, gömb alakú vagy ovális gombaspórák találhatók. A micéliumot soha nem észlelik.

A pityriasis versicolor-ban szenvedő betegek bőrpigmentációjának károsodását a Pityrosporum gomba azon képessége okozza, hogy olyan anyagot termel, amely gátolja a pigmentképződés folyamatát az epidermiszben. A hipopigmentált területekről vett bőrbiopsziák elektronmikroszkópos vizsgálata azt mutatta, hogy a melanocitákban nagyon kicsi melanoszómák képződnek, amelyek nem képesek áthatolni a keratinocitákon. A bőr hiperpigmentált területein éppen ellenkezőleg, a melanoszómák nagyok és nagy mennyiségű melanint tartalmaznak.

A statisztikák szerint hazánk lakosságának körülbelül 20% -a szenved valamilyen fokú mycosisban. De nem mindegyik fordul szakemberhez. Ennek egyik oka az, hogy az emberek egyszerűen nem ismerik a betegség összes tünetét és megnyilvánulását.

A mycosis tünetei

Mindenekelőtt érdemes megjegyezni, hogy ez nem egy specifikus betegség, hanem a bőr és a függelékek különböző gombás fertőzéseinek csoportja. Ezért a tünetek meglehetősen változatosak lehetnek, de a leggyakoribbak a következők:

• Pettyes foltok megjelenése a bőrön. Leggyakrabban a lábujjak között, a láb bőrén jelennek meg. Gyakran viszketést, irritációt és egyéb kellemetlen érzéseket okoznak.
• A körmök színének és szerkezetének megváltozása. Sárgássá, törékennyé, morzsolódóvá, pelyhessé válnak, felületük göröngyös, egyenetlen lehet.
• Repedések a bőrön. Gyakran előfordul, hogy a lábbőr gombás fertőzéseinél durva lesz, és erősen repedezni kezd.
• Kellemetlen szag. Sok beteg panaszkodik az érintett bőr kellemetlen szagára, különösen a láb mycosisára.

Ha ilyen jelek jelennek meg, a lehető leghamarabb fel kell keresni egy bőrgyógyászt, és teljes körű diagnózist kell végezni annak meghatározására, hogy milyen típusú mycosis érintette a bőrt.

A mikózisok diagnosztizálásának módszerei

Amikor a betegek bőrgyógyászhoz fordulnak a gombás bőrelváltozások jellegzetes jeleivel, leggyakrabban egy elsődleges külső vizsgálat elegendő a diagnózis felállításához. A kérdés csak az, hogy milyen típusú mycosis érintette a bőrt.

Ez az információ szükséges a további kezelési stratégia meghatározásához. A mycosis diagnosztizálására a következő módszerek használhatók:

• Wood's lámpa vizsgálata. Az ultraibolya fény speciális spektruma lehetővé teszi a gombás fertőzések jelenlétének meghatározását. Ez a módszer nagyon egyszerű és hozzáférhető, segítségével nemcsak diagnózist készíthet, hanem figyelemmel kísérheti a kezelés előrehaladását is. De ez nem teszi lehetővé a mycosis típusának meghatározását.
• Mikroszkópia. A mycosis diagnosztizálásának egyik legegyszerűbb és legelterjedtebb módszere a gomba által érintett szövetek kaparásának mikroszkóp alatti vizsgálata. Ehhez üveglemezre kell helyezni. A kaparási vizsgálatnak két típusa van: festőszerek és fényesítő szerek alkalmazása.
• Bakteriológiai kultúra. Az egyik legpontosabb diagnosztikai módszer a tartályba oltás tápközeggel. A gomba kifejlett telepeinek megjelenése és jellemzői alapján az orvos meghatározhatja a kórokozó típusát. Ennek a módszernek a hátránya az idő hosszúsága, egy telep felnevelése 2-3 hétig is eltarthat. Ráadásul csak az esetek felében lehet eredményt elérni.
• PCR diagnosztika. Ez az egyik legpontosabb és legmodernebb diagnosztikai módszer, de a mycosis típusának meghatározása több vizsgálatot is igényelhet, ami bizonyos költségeket igényel.

Érdemes megjegyezni, hogy a mycosis diagnosztizálása szükséges a betegség kezelésének leghatékonyabb módszerének meghatározásához. Ha pedig nem lehetséges azonnal szakorvoshoz fordulni, igénybe veheti rendelőnk szolgáltatását és

Első találkozó

A találkozón a mikológus vizsgálatot végez, és átfogó vizsgálatot is előír.

Laboratóriumi diagnosztika

A bőrmikózisok diagnosztizálásának leghatékonyabb módszerei a különféle laboratóriumi vizsgálatok, amelyek azonosítják a kórokozót, és segítenek a kezelési rend kiválasztásában. A mycosis kórokozójának azonosítására a következő laboratóriumi vizsgálatokat írják elő:

• szövettani elemzés;
• bakteriológiai tenyészet;
• immunológiai kutatások;
• PCR diagnosztika;
• kulturális vizsgálat;
• mikrobiológiai kutatás.

A mikrobiológiai diagnosztika segít a gomba kimutatásában, nemzetségének és fajának meghatározásában.

A mikrobiológiai diagnózis a leggyakoribb és legegyszerűbb módszer a mycosis kimutatására a vérben és a bőrben. A pontos diagnózis megállapításához tudnia kell, hogyan kell helyesen összegyűjteni a vizsgálathoz szükséges anyagot. Az érintett hajat csipesszel kell összegyűjteni. Ha a bőr fertőzött, a bőrt a sérült területről le kell kaparni mikroszkópos vizsgálat céljából. Az összes összegyűjtött anyagot 30%-os kálium-hidroxid-oldatba, majd egy tárgylemezre helyezzük. A mikrobiológiai diagnosztikával pontosan feltárható a gomba lokalizációja (a szőrben, bőrön belül vagy kívül) és annak mérete.

A mycosis téves diagnózisának megelőzése érdekében az anyagot helyesen és hozzáértően kell összegyűjteni a mikrobiológiai vizsgálathoz.

Az orvostudományban a következő mikrobiológiai diagnosztikai módszerek vannak:

• Mikroszkópia natív vagy festetlen készítményekkel. Ehhez az anyagot 10-30% -os kálium- vagy nátrium-hidroxid-oldattal tisztítják. Ezután a feldolgozott anyagot laboratóriumi üvegre helyezzük, amelybe előzőleg kevés glicerint csepegtetünk. A tetejét üveglappal borítják, és elemzést végeznek.
• A festett készítmények mikroszkópos vizsgálatát többféle módon végzik el, amelyek segítségével azonosítják a baktériumokat, megkülönböztetik a különböző baktériumokat és azonosítják a különböző gombákat.

Bakteriológiai kultúra

A bakteriológiai tenyésztés az egyik leghatékonyabb diagnosztikai módszer.

A bakteriológiai tenyészet táptalajon történő gyűjtése pontos módja a mycosis diagnosztizálásának. Figyelembe véve a kifejlett gombatelep megjelenését és jellemzőit, a bőrgyógyász meghatározza a mikózist okozó kórokozó típusát. A felmérés egyetlen hátránya, hogy hosszú ideig tart egy kolónia növekedése. Átlagosan körülbelül 3 hétig tart a kórokozó törzs kiderítése. Egyes esetekben a módszer nem hozza meg a várt eredményeket.

PCR diagnosztika

A PCR diagnosztikai módszer magában foglalja a mycosis kórokozójának azonosítását polimeráz láncreakció segítségével. A vizsgálat során megnő a hibridizáció érzékenysége, ami növeli a vizsgált anyag vírus DNS-tartalmát. Ez a vizsgálati módszer új, és számos vizsgálatot igényel a pácienstől. Úgy gondolják, hogy ez a fajta diagnózis meglehetősen drága, de pontos eredményeket ad.

Kultúra vizsgálat

Kulturális diagnosztikai intézkedések javasoltak a diagnózis végső szakaszában. A módszer a gomba tenyészetének beszerzéséből áll, amelyet azután mikroszkópos vizsgálatra küldenek. A kapott anyagot mesterségesen létrehozott táptalajra helyezik, és azonosítják a kórokozó típusát, megjelenését és méretét. Ezt követően speciális kezelést írnak elő, amely egy adott típusú mycosis kórokozójának leküzdésére irányul.

A mikózisok diagnosztizálására mikroszkópos, mikológiai (kulturális), allergiás, szerológiai, biológiai és szövettani kutatási módszerek alkalmazhatók. A patogenezistől függően a kutatás anyaga lehet genny, köpet, érintett haj, köröm, bőrpelyhek, csontvelő, nyirokcsomók, belső szervek szúrása, vér, epe, széklet, szövetbiopszia stb.

A mikroszkópos vizsgálat magában foglalja a natív (festetlen) és a festett kenetek mikroszkópos vizsgálatát. A natív készítmények elkészítéséhez a hajat, bőrkaparékot és körmöket 10,30%-os KOH vagy NaOH oldatban tisztítják. A lúggal kezelt anyagot egy csepp glicerinben lévő tárgylemezre helyezzük, fedőlemezzel lefedjük és mikroszkóppal (fáziskontraszt mikroszkóppal is használható), ami lehetővé teszi a gomba szerkezetének és a spórák elhelyezkedésének tanulmányozását. , de végső következtetést a gomba fajáról csak tenyésztési vizsgálatok után lehet levonni.

A kenetek festésére leggyakrabban a Gram, Ziehl, Nielsen és Romanovsky-Giemsa módszereket alkalmazzák. A dermatofiták festésére Sabouraud, Adamson és mások módszereit is használják.

Kulturális (mikológiai) kutatásokat végeznek a gomba tiszta kultúrájának izolálására és azonosítására. Használjon szilárd és folyékony tápközeget (Sabouraud, wor agar, Chapek stb.). A termosztátban (22,28ºС) való inkubálás hosszú (3,4 hét). A gomba tiszta tenyészetét jellemzők összessége azonosítja: a telepek alakja, színe, állaga, mikroszkópos képe (a micélium jellege, spórák elhelyezkedése, konidiofórok) és egyéb jellemzők Szerológiai reakciók a diagnózishoz gombabetegségek vizsgálatát gomba antigénekkel végezzük az általánosan elfogadott módszerek szerint, valamint egyéb fertőző betegségek (RA, RP, RSK, RNGA, RIF stb.) diagnosztizálására.

Az allergiatesztek általánosan elfogadott módszerekkel végezhetők megfelelő allergének intradermális injekciójával (sejtekből vagy sejtmembránokból származó poliszacharid- és fehérjefrakciók, elölt gombák sejtszuszpenziója, tenyészet szűrletei). A GNT azonosítására a szöveti és szérumbazofilek degranulációs tesztjét, a GNT kimutatására pedig a fagociták migrációját és a limfociták blast transzformációját gátló reakciót használhatja.

A biológiai kutatásokat laboratóriumi modelleken (egerek, patkányok, tengerimalacok, nyulak, kutyák, macskák) végzik. A mycosis biológiai modelljét a kórokozó patogenitásának azonosítására, tiszta tenyészet izolálására és új antimikotikumok tanulmányozására használják. A szövettani vizsgálat lehetővé teszi a gomba szövetekben történő kimutatását, morfológiájának és a szervezetben általa okozott kóros folyamat jellemzőinek tanulmányozását.