Bacillus cereus ip 5832 kulturális és morfológiai tulajdonságai. Bactisubtil
Bacillus cereus
A bacilusok megkülönböztető jellemzői: nagy, egyenes rudak képviselik őket, amelyek Gram-re pozitívan festenek, aerob körülmények között képesek spórákat képezni, az ember számára egyetlen patogén faj a Bacillus anthracis (antrax bacillus), néhány opportunista faj is képes ételmérgezést és kórházi fertőzéseket okozva. A bacillusokat a talajból, édes- és tengervízből, valamint növényekből izolálják. 5 és 75 °C közötti hőmérsékleten képesek szaporodni, túlélésüket extrém körülmények között a spórásodás segíti elő. A kórházi elváltozásokat (tüdőgyulladás, vérmérgezés, endocarditis, agyhártyagyulladás stb.) a B. subtilis, B. cereus és B. megaterium okozza (4. ábra, lásd színbetét), B. alvei, B. laterosporus, B. pumilus, B thuringiensis és B. sphaericus. Viszonylag ritkán jegyeznek fel elváltozásokat, emberben kialakulásukat elősegíti a baktériumok széles körben elterjedt elterjedése, spóráiknak a különféle hatásokkal szembeni nagy ellenálló képessége.
A Bacillus cereus egy mindenütt jelenlévő, Gram-pozitív, spóraképző, mozgékony rúd.
A mikroorganizmus szisztematikus helyzete.
|
Család |
Gombák impcrfecti Eubacteriales Bacillaceae Bacilus subtilis |
Embereknél gyomorbetegségeket (hasmenést stb.), vérmérgezést, szívbelhártya-gyulladást, központi idegrendszeri károsodást okoznak. A betegség általában rövid életű, és kezelés nélkül elmúlik, de izolált haláleseteket is jelentettek. A Bacillus cereus ételmérgezésről nem számolnak be, mivel viszonylag alacsony az általa okozott megbetegedések száma (a teljes eset legfeljebb 1%-a). A betegség előfordulási gyakorisága földrajzilag változó. Így egyes országokban az összes ételmérgezés kevesebb mint 1% -át teszik ki, míg másokban több mint 30%. A Bacillus cereust viszonylag gyakran izolálják a termékekből, ami az élelmiszeripar jelentős indikátor tesztszervezetévé teszi ezt a fajta baktériumot. A leginkább veszélyeztetett élelmiszerek a hús- és tejtermékek, a zöldségek, a levesek, a fűszerek és különösen a bébiételek. A Bacillus cereus szinte minden törzse toxinokat termel. A Bacillus cereus izolátumok csaknem 95%-a citotoxikus enterotoxinokat termel. Ezek közül a nem hemolitikus enterotoxint (NHE) a törzsek több mint 90%-a, a hemolizin BL-t (HBL) pedig a vizsgált törzsek mintegy 55%-a termeli. Úgy gondolják, hogy a HBL és az NHE a beteg beleiben képződik vegetatív sejtekkel vagy Bacillus cereus spórákkal szennyezett ételek elfogyasztása után. E két toxin mellett a Bacillus cereus egyes törzsei hőstabil hánytató enterotoxint (ETE) termelnek. Úgy gondolják, hogy az ETE enterotoxin kezdetben az élelmiszerekben halmozódik fel, leggyakrabban keményítőtartalmú élelmiszerekben, például rizsben és tésztákban. Emiatt egyre fontosabbá válik ezen termékek enterotoxin-tartalmának ellenőrzése megbízható gyorsított vizsgálati módszerekkel.
Patogenitás, a betegség mértéke
|
Bacillus cereus - Dextróz kazein-pepton agar |
A Bacillus cereus egy opportunista mikroorganizmus, amely szórványos ételmérgezést okoz az emberekben. A Bacillus cereus mindenütt jelen van a természetben.A Bacillus cereus etiológiai szerepét az ételmérgezésben eredetileg Hauge tanulmányozta és írta le 1950-ben.A Bacillus cereus okozta ételmérgezés forrásának először a burgonyakeményítőt tartalmazó konyhai termékeket tekintették. Ezután hasonló, növényi, hús-, hal- és egyéb élelmiszeripari termékek által okozott mérgezések kitöréseit írták le. A Bacillus cereus zúzott termékekben (darált hús, szelet, kolbász, krémek) szaporodik leggyorsabban. A nyersanyagokban legfeljebb 100 sejt/g megengedett, a Bacillus cereus jelenléte a konzervekben nem megengedett. Sterilizált húskonzervekben, meghatározott technológiai feltételek mellett, ennek a baktériumnak nincsenek sejtjei. Ha a tartósított termékben életképes spórák maradnak, a kórokozó elszaporodhat 20 o C-os konzerv tárolási körülmények között. Ezzel egyidejűleg szürke bevonat jelenik meg a termék felületén, megváltozik az illata és az állaga. A Bacillus cereus hasmenéses szindrómát is okozhat állatokban, madarakban és rovarokban 6-18 órával a szennyezett élelmiszer elfogyasztása után. Ennek oka elsősorban a szennyezett élelmiszerekben található többféle toxin (NHE, HBL, bc-D-ENT), majd ezt követően a baktériumok elszaporodása a belekben. Ez a Bacillus cereus toxinok komplexe citotoxikus hatást és folyadékszekréciót okoz a bélben. Amikor biológiai vizsgálatot végeznek egereken, az állatok bőrelhalást tapasztalnak az injekció beadásának helyén, majd elpusztulnak.
Jelenleg az orvosi gyakorlatban széles körben használják a hivatalosan bejegyzett biológiai gyógyszereket, amelyek a normál bélmikroflóra legyengült törzsein alapulnak.
1. Olyan készítmények, mint a bactisubtil. A Bacillus IP 5832 törzs tiszta tenyészetét tartalmazó készítmények legalább 1 milliárd mennyiségben vegetatív spórákkal Normalizálják a bél mikroflóra fiziológiai egyensúlyát. A készítményekben található baktériumspórák ellenállnak a gyomornedv hatásának, és a belekben vegetatív formákká csíráznak. A baktériumok vegetatív formái olyan enzimeket termelnek, amelyek lebontják a szénhidrátokat, zsírokat és fehérjéket, így savas környezet alakul ki, amely megakadályozza a bomlási folyamatokat. A gyógyszerek elősegítik a B- és P-vitaminok normál szintézisét a belekben. Kapszulákban kapható.
2. A flonivin BS típusú készítmények az 1P5832 (109) bacillustörzs tiszta tenyészetét tartalmazzák vegetatív spórákkal. A Bacillus IP5832 törzsek genetikailag immunisak minden típusú szulfonamiddal, nystatinnal és a legtöbb széles spektrumú antibiotikummal szemben. Kapszulákban kapható.
3. A biosporin típusú készítmények Bacillus subtilist, Bacillus lichineformist tartalmaznak. Kapszulákban kapható.
4. A bifidumbacterin típusú készítmények élő bifidobaktériumok tenyészközegben liofilizált mikrobiális tömege. Ők a legfontosabb emberi szimbionták, uralják a gyermekek és felnőttek egészséges bélmikroflóráját. Egy adag legalább 108 élő bifidobaktériumot tartalmaz. Kapható tablettákban, kapszulákban, tasakban és palackokban.
A folyékony bifidobakterinok hatékonyságát jelenleg vizsgálják. Orosz tudósok kutatása bebizonyította, hogy ezeknek a gyógyszereknek a dysbacteriosis elleni hatékonysága meghaladja a száraz bifidobakterinok hatékonyságát. Ugyanakkor a folyékony bifidobakterinokkal végzett terápia során a terápiás hatás 1-2 hónap után alakult ki, míg a száraz bifidobakterinok alkalmazása csak 3-6 hónap után vezetett a klinikai és laboratóriumi tünetek javulásához. Ennek oka az a tény, hogy a folyékony biológiai termékek egyrészt nagyobb számú mikrobatestet tartalmaznak (1 ml térfogatban 1011-1015, szemben a száraz készítmények 108-cal), másrészt nem tartalmaznak idegen mikroflórát, harmadrészt pedig A folyékony készítmények mikroorganizmusainak életképessége szignifikánsan magasabbnak bizonyult. Vagyis az élő bifidobaktériumok teljesen megőrzik élettani tulajdonságaikat, aminek következtében rövid időn belül terápiás hatást fejtenek ki. Élő bifidobaktériumok alapján készültek olyan készítmények is, mint a bifiliz dry és a bifiform. Az olyan gyógyszerek összetétele, mint a bifiliz, lizozimot tartalmaz, amelynek köszönhetően gyulladáscsökkentő hatással rendelkezik, emellett serkenti az anyagcsere folyamatokat és az eritropoézist. Egyébként a farmakológiai tulajdonságok és a használati javallatok tekintetében ezek a gyógyszerek hasonlóak a bifidumbacterin típusú gyógyszerekhez.
5. Olyan készítmények, mint a mentőcsomag probiotikumok - Bifidobacterium bifidumot tartalmaznak (5x107 mikrobatest 1 kapszulában).
6. A Bificol típusú készítmények az emberi bél élő bakteriális anaerob és aerob mikroflórájából, bifidobaktériumok (Bifidobacterium bifidum I) és Escherichia coli (Escherichia coli M-17) törzseiből származó száraz komplex kétkomponensű biológiai készítmények. Ezek a meghatározott törzsekhez tartozó baktériumok liofilizált tenyészetei. A gyógyszer 1 adagja legalább 107 élő bifidobaktériumot és legalább 107 Escherichia coli M-17-et tartalmaz. Palackban kapható.
7. Az olyan készítmények, mint a colibacterin, az Escherichia coli M-17 antagonista hatású törzs élő baktériumainak liofilizátuma, antagonista hatást fejtenek ki a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok széles skálájával szemben, ezáltal normalizálják a bél mikroflóra fiziológiai egyensúlyát. Kapható ampullákban és tablettákban.
8. A Lactobacterin típusú készítmények élő laktobacillusok liofilizátumai. A laktobacillusok a normál mikroflóra részei. A lactobacillusok által létrehozott savas környezet elősegíti a bélben a bifid flóra és más normál mikroflóra kialakulását, mivel optimális ezeknek a baktériumoknak, és ezáltal fenntartja és szabályozza a bélmikroflóra élettani egyensúlyát. Kapható ampullákban, tablettákban és kúpokban.
9. Az olyan készítmények, mint az acipol, élő lactobacilli acidophilus és melegített kefirszemek keveréke. A gyógyszerek magas biokémiai savképző és antagonista aktivitással rendelkeznek. A melegített kefirszemek immunmodulátorok, amelyek serkentik a szervezet védekezőképességét. Palackokban és tablettákban kapható.
10. Az acilakt típusú készítmények élő acidofil laktobacillusok liofilizátumai. Palackban kapható.
11. A Tipalinex készítmények az egyik legkiegyensúlyozottabb eubiotikum, mely élő liofilizált baktériumokat tartalmaz: Lactobacillus acidophilus, Bifidumbakterium infantis v.liberorum, Streptococcus faecium. Ezek a baktériumok a normál bélmikroflóra képviselői, és rezisztensek az antibiotikumokkal és kemoterápiás szerekkel szemben. A szerves savakat (tejsav, ecetsav, propilén) termelő tejsavbaktériumok savas környezetet hoznak létre a bélben, ami kedvezőtlen a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok fejlődéséhez. Ennek eredményeként a bél mikroflóra élettani egyensúlya normalizálódik. Ezenkívül a tejsavbaktériumok stabilizálják a bélhámsejtek membránját, részt vesznek a monoszacharidok feldolgozásában és szabályozzák a bél elektrolit-egyensúlyát. A gyógyszerben található mikroorganizmusok kombinációja az eubiotikus hatás mellett baktericid és hasmenés elleni hatást is biztosít. Kapszulákban kapható.
12. A Nutrolin B típusú készítmények sporogén laktobacillusokat és B, B2, B6, PP vitaminokat tartalmaznak. Kapszula, tabletta és szirup formájában kapható.
13. A Travis típusú készítmények Lactobacillus Acidophilus, Lactobacillus Bulgaricus, Bacillus Bifidum, Streptococcus thermophilus fajokat tartalmaznak. Kapszulákban kapható.
14. A hilak típusú készítmények orális adagolásra szánt cseppek formájában lévő készítmény, amely tejsav képzésére szolgáló anyagok metabolikus termékeinek steril koncentrátumát tartalmazza a bél mikroflóra Gram-pozitív és Gram-negatív szimbiontáinak anyagcseretermékeivel, valamint aminosavak, rövid szénláncú illékony zsírsavak, bioszintetikus tejsav, tej-sóoldat puffer, laktóz. A gyógyszerek segítenek fenntartani a belek savasságát a fiziológiai normán belül, ami a szaprofita bélflóra normalizálódásához vezet, és kedvezőtlen feltételeket teremt a kórokozó mikroorganizmusok életéhez. A gyógyszerek hatására a B- és K-vitamin természetes szintézise normalizálódik.A gyógyszerekben található rövid szénláncú illózsírsavak biztosítják a gyomor-bél traktus fertőző betegségeiben a károsodott bélmikroflóra helyreállítását, fokozzák a bélrendszer regenerációs képességét. a bélfal integumentáris szövetének sejtjeit, és helyreállítsa a megbomlott víz-elektrolit egyensúlyt a bél lumenében.
15. Az Enterol típusú készítmények liofilizált Saccharomyces boulardii-t (gyógyélesztőt) tartalmaznak. Antimikrobiális hatásuk van, a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok antagonistái: clostridia, staphylococcus, candida és lamblia. Növelje a helyi immunvédelmet a megnövekedett immunglobulinok következtében. Antitoxikus hatásúak és javítják a bélnyálkahártya trofizmusát. Por formájában, tasakban és kapszulákban kapható.
Az "Anthrax kórokozója. A lépfene fertőzés klinikai megnyilvánulásai. Bacillus cereus." témakör tartalomjegyzéke:Bacillus cereus. A bacillus cereus morfológiája. A bacillus cereus kulturális tulajdonságai. Bacillus cereus mérgezés klinikája. A bacillus cereus mikrobiológiai diagnosztikájának alapelvei. A bacillus cereus azonosítása.
Bacillus cereus- a természetben elterjedt talajszaprofita baktérium. A baktériumok gyakran szennyezik az élelmiszereket, ételmérgezést okozva. A mérgezés jelenségét az enterotoxin közvetíti. Olyan baktériumok alkotják, amelyek spórákból nőnek ki, amelyek ellenállnak az élelmiszerek (általában zöldségek) bizonyos hőfeldolgozási körülményeinek. A baktériumok csak in vivo, a spórák csírázása során termelnek toxinokat. Az elmúlt években szórványosan B. cereus okozta kórházi fertőzéseket is észleltek - bakterémiát, endocarditist és agyhártyagyulladást műszervekkel, katéterekkel, hemodinamikai rendellenességben szenvedő betegeknél, valamint azoknál, akik citosztatikumokat és immunszuppresszánsokat kaptak. hosszú idő. A sérülések súlyosak és gyakran végzetesek.
A bacillus cereus morfológiája és kulturális tulajdonságai
Morfológiailag Bacillus cereus lépfene bacilusra hasonlít; a fő különbségek a mobilitás és a hemolitikus aktivitás. A kenetekben a baktériumok kerítésmintázatban helyezkednek el. A növekedés optimális hőmérséklete 30 °C; optimális pH 7-9,5. Az agaron a kórokozó szaggatott szélű, „kiterített” telepeket képez; a CA-n a telepeket széles hemolízis zóna veszi körül (lásd a 4. ábrát). Idővel a telepek jellegzetes viaszos megjelenést kapnak [a lat. most viasz, gyertya]. Folyékony közegben finom filmréteget képeznek a felületen, fehér pelyhes üledéket és a húsleves zavarosságát. A baktériumok magas proteolitikus aktivitást mutatnak, és 1-4 nap alatt cseppfolyósítják a zselatint; minden törzs lecitinázt és acetoint termel. Glükózt és maltózt tartalmazó közegben savat képeznek.
A bacillus cereus mérgezés klinikai megnyilvánulásai
Bacillus cereus kétféle ételmérgezést (gastroenteritist) okoz.
Bacillus cereus mérgezés az első típust lerövidített lappangási idő (kb. 4-5 óra) jellemzi; Gyengítő hasmenés és hányás jellemzi. A betegség nagyszámú mikroorganizmussal szennyezett étel elfogyasztásakor alakul ki.
Bacillus cereus mérgezés A második típusú mérgezés lappangási ideje hosszabb (körülbelül 17 óra). A betegek görcsös hasi fájdalomra és hasmenésre panaszkodnak. Ezt a tünetegyüttest gyakran összetévesztik a clostridia által okozott ételmérgezéssel.
A bacillus cereus mikrobiológiai diagnosztikájának alapelvei
A bacillus cereus diagnosztikai jele fontolja meg, ha gyanús élelmiszerekben több mint 10 5 baktériumot mutat ki 1 g/ml termékben vagy 10 2 -10 3 baktériumot 1 g/ml székletben és hányás vagy mosóvízben. A fő különbségek a B. cereus és a B. anthracis között a hemolitikus aktivitás, a mozgékonyság, a penicillinnel szembeni rezisztencia, a zselatin gyors cseppfolyósodása és a fehér egerek nem patogenitása.
A találmány az orvostudomány területére, nevezetesen a mikrobiológiára vonatkozik, és bakteriológiai laboratóriumokban alkalmazható a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitásának kimutatására. Az együttinkubálást a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) izolált törzsének fiziológiás oldatában végezzük tiszta tenyészetben és egy opportunista patogén mikroorganizmus (OPM) izolált tiszta tenyészetében a páciens székletéből. A kapott keveréket Gold segítségével penicillinnel vagy anélkül 0,01 U/ml koncentrációjú tápagarra vetjük, és ha a penicillint tartalmazó táptalaj UPM mennyiségének csökkenése észlelhető az anélküli táptalaj UPM mennyiségéhez képest. , meghatározzák a Bacillus cereus IP 5832 törzs antagonista aktivitásának jelenlétét (ATCC 14893) az UPM törzzsel szemben, míg az eubiotikumot a betegből izolált UPM törzzsel szemben hatékonynak értékelik a bél dysbiosis vizsgálata során. A találmány a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs elnyomását biztosítja anélkül, hogy veszélyeztetné az UPM teszttenyészetek csírázását. 3 asztal
A találmány az orvostudomány területére, nevezetesen a mikrobiológiára vonatkozik, és bakteriológiai laboratóriumokban alkalmazható a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitásának azonosítására, a fő hatóanyag, az eubiotikumok hatékonyságának egyéni értékelése céljából. amelynek alapelve a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, a betegből izolált opportunista mikroorganizmusokkal kapcsolatban a bél dysbiosis vizsgálata során. A találmány a gasztroenterológiában is alkalmazható eubiotikumok egyéni kiválasztására, amelyek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, a bélrendszeri dysbiosis kezelésében.
A megváltozott bélmikrobiocenózis korrigálására szolgáló gyógyszerek között fontos helyet foglalnak el az eubiotikumok, amelyek a patogén és opportunista mikroorganizmusok elnyomására szolgálnak. Leggyakrabban az eubiotikumok közé tartoznak a Bacillus nemzetség képviselői, amelyek nem képviselik a normál bélmikroflórát, röviddel a kivonás után eliminálódnak, és a lizozim, proteolitikus enzimek és bakteriocinok termelése miatt erős antagonistái a nem rokon mikroorganizmusoknak. Ismeretes, hogy a bacilusok elnyomják a leghatékonyabban a patogén enterobaktériumokat és néhány opportunista mikroorganizmust, amelyek megtelepednek a bélbiotópban: S. aureus, Candida spp., E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae és más opportunista enterobaktériumok.
Számos országban az egyik legszélesebb körben használt eubiotikus gyógyszer a „Baktisubtil” (Franciaország), amelynek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs. Ismert az eubiotikus „Flonivin” is, melynek fő hatóanyaga szintén a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, BS Gyártó: Galenika, A.D., Szerbia.
A Bacillus nemzetség ipari törzsei nem képeznek biofilmet, mivel a bélhámsejtekhez való tapadásuk gyenge. Abból a tényből kiindulva, hogy a Bacillus cereus törzs aktivitása a bél lumenében jelentkezik, és elsősorban ennek a törzsnek a nagy antagonista aktivitásával függ össze, nem pedig a nyálkahártyához való kötődési helyekre vonatkozó kompetitív kapcsolatokkal, akkor az eubiotikumok hatékonysága, a amelynek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, a béldysbiosis diagnosztizálása során a páciensből izolált opportunista mikroorganizmusok kapcsán a Bacillus cereus IP törzs antagonista aktivitásának megléte vagy hiánya alapján ítélhető meg. 5832 (ATCC 14893).
A bakteriocinokat vagy bakteriocinszerű anyagokat a bacilusok főként extracellulárisan termelik, és a tápközegben képesek felhalmozódni. Ennek köszönhetően elméletileg a bacilusok antagonista aktivitása kimutatható a hagyományosan csak a probiotikus lakto- és bifidobaktériumok antagonizmusának kimutatására használt direkt vagy késleltetett antagonizmus módszereinek különféle módosításaival: a csíkos módszerrel, a Frederick-késleltetett antagonizmus módszerrel a sejtek köztes elpusztításával. a termelő törzs kloroformmal, a kétrétegű agar módszerrel.
A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitásának azonosítására a fenti módszereket alkalmaztuk.
A bacilusok antagonista aktivitásának közvetlen antagonizmus módszerrel történő értékeléséhez a B. cereus napi tenyészet szuszpenzióját egy Petri-csésze átmérőjére csíkoztuk be tápagarral 1×10 9 koncentrációban a GISC optikai zavarossági szabvány szerint. valaki után elnevezve. L. A. Tarasevics. A bél dysbiosis diagnosztizálása során izolált opportunista mikroorganizmusok tenyészeteit merőlegesen vetettük el. 37 °C-on 24 órán át inkubáltuk. Az antagonista aktivitás jelenlétét a vizsgálati törzsekben a növekedési retardáció jelenlétével vettük figyelembe.
A bacilusok antagonista aktivitásának a késleltetett antagonizmus módszerével történő értékelése során az opportunista mikroorganizmusok teszttenyészeteit 24 és 48 órával a bacilusok beoltása után oltottuk be.
A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonizmusának felmérésére vonatkozó mérlegelt lehetőségeknél saját adataink szerint a törzs nem mutatott antagonista aktivitást opportunista mikroorganizmusok teszttenyészeteivel szemben (80 törzs). Az opportunista mikroorganizmusok néhány aktívan mozgó törzse (P. aeruginosa, E. coli) baciláris telepek felszínén nőtt.
Úgy gondolják, hogy a bacillus metabolitok erősebb antagonista hatást fejtenek ki, mint az élő kultúrák. Ezért a késleltetett antagonizmus módszerét is alkalmaztuk a termelő törzs köztes megölésével kloroformmal. A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzset megszilárdult 1,5%-os tápanyag-agarba oltottuk, Petri-csészékbe öntöttük, és 48 órán át 37 °C-on növesztettük. Inkubálás után a kapott tenyészetet kloroformgőzzel elpusztítottuk, és az opportunista mikroorganizmus teszttenyészetének szuszpenzióját rétegeztük. Ehhez 0,1 ml tenyészetet 10 8 sejtes végkoncentrációban az optikai zavarossági standardnak megfelelően keverjünk össze 2,5-3 ml 0,7%-os félfolyékony agarral, amelyet megolvasztott és 46-48°C-ra hűtöttünk. Ha van lehetőség bakteriocinok termelésére, a teszttörzs növekedését gátló zónát kell megfigyelni a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs telepe körül. A bacilusok antagonista aktivitását nem észlelték, mert UPM „gyep” teszttenyészeteinek növekedését észlelték a feltételezett bakteriocinokat tartalmazó táptalaj felületén.
Hasonló adatokat kaptunk módosított kétrétegű agar módszerrel, bacillusok gyepbe oltásával, majd az UPM teszttenyészet leölésével és rétegzésével.
Az igényelt módszerhez technikai lényegét tekintve legközelebb áll az inverz agar módszer, amelyet Bacillus subtilist és Escherichia colit tartalmazó probiotikumok opportunista élesztőgombákkal szembeni antagonista hatásának azonosítására írnak le. Ehhez a Bacillus subtilis és Escherichia coli törzseket szilárd táptalajra vetjük, 2 nap múlva az agart megfordítjuk, és a hátoldalára előtitrált élesztőmag adagot vetünk. Inkubáljuk 24 órán át aerob körülmények között 37°C-on. Az antagonizmus jelenlétét kvantitatívan az élesztőszaporodás gátlásával mutatjuk ki, összehasonlítva egy hasonló, probiotikus törzsek nélküli oltással.
Az invertált agar módszert leírták és tesztelték a Bacillus subtilist és Escherichia colit tartalmazó probiotikumok gombaellenes hatásának értékelésére. De a többi opportunista mikroorganizmusra (nem az opportunista élesztőre) gyakorolt antagonista hatást nem értékelték. Ezen túlmenően, az eredeti módszer magában foglalja az élesztő olyan magdózisának kiválasztását, amelynél legfeljebb 70 telep nőne az agaron. Ez titrálást és további kutatást igényel az egyes törzsek tesztelésekor. Ennek a módszernek a tesztelése az eubiotikus termelő Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzzsel és a bélrendszeri dysbiosis diagnosztizálása során izolált opportunista mikroorganizmusok 80 teszttenyészetével nem tette lehetővé a Bacillus cereus IP 5832 törzs antagonista aktivitásának egyetlen esetét sem. ATCC 14893).
A lakto- és bifido-tartalmú probiotikumok antagonista hatásának felmérésére a folyékony táptalajban történő együtttenyésztési módszereket is leírják, különféle közvetett értékelési módszerekkel, amelyek nem igényelnek utólagos oltást szilárd táptalajra a szuppresszált UPM-ek számának meghatározásához.
Így a szerzők szerint a probiotikus lakto- és bifidobaktériumok antagonista aktivitásának kimutatására szolgáló ismert módszerek egyike sem tette lehetővé a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitásának kimutatását a páciensből a vizsgálat során izolált opportunista mikroorganizmusokkal szemben. egy tanulmány a bél dysbiosisáról.
A szakirodalomban nem találtunk módot arra sem, hogy egyénileg értékeljük a Baktisubtil gyógyszer vagy más eubiotikus gyógyszerek hatékonyságát, amelyek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, az egyből izolált opportunista mikroorganizmusokkal szemben. adott betegnél a belek diszbakteriózisának vizsgálata során.
A találmány célja a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitásának azonosítása egy adott páciensből izolált opportunista mikroorganizmusokkal szemben egy bél dysbiosis vizsgálata során.
A találmány technikai eredménye az eubiotikus Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs elnyomása a teszttenyészetek csírázásának veszélyeztetése nélkül.
A technikai eredményt úgy érik el, hogy az alany székletéből opportunista mikroorganizmusok tiszta tenyészetét izolálják, majd a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzset tiszta tenyészetben izolálják, majd a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzset társítják. - az opportunista mikroorganizmusok mindegyik törzsével fiziológiás oldatban inkubáltuk, majd tápanyag-agarra oltottuk, 0,01 U/ml koncentrációjú penicillinnel és anélkül, és ha az opportunista mikroorganizmusok számának csökkenése kimutatható táptalajon a penicillint a penicillin nélküli táptalajon lévő opportunista mikroorganizmusok számához viszonyítva meghatározzák a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitását egy opportunista mikroorganizmus törzzsel szemben, míg az eubiotikumot a adott betegből izolált opportunista mikroorganizmus törzse egy bél dysbiosis vizsgálatában.
A módszert a következőképpen hajtják végre:
Standard módszerekkel opportunista mikroorganizmusok tiszta tenyészetét izolálják a páciens székletéből és a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzsből tiszta tenyészetben, amely az eubiotikum fő hatóanyaga. A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs tiszta tenyészetét izoláltuk a „Baktisubtil” eubiotikusból. Opportunista mikroorganizmus teszttenyészetének fiziológiás oldatban készült szuszpenziójának 1 ml-ét 10 9 sejt végső koncentrációban az optikai zavarossági standard szerint összekeverjük 1 ml azonos koncentrációjú Bacillus cereus szuszpenzióval. Az elegyet 48 órán át 37 °C-on inkubáljuk. Ezután a vetést Gold szerint végezzük. Ehhez kvantitatív oltást végeznek 3 mm átmérőjű és 2 μl kapacitású mérőhurokkal 0,01 U/ml koncentrációjú penicillint tartalmazó tápagarra a bacilusok elnyomására és antibiotikum nélküli táptalajra a bacilusok szabályozására. mindkét típusú kultúra növekedése. Az UPM és a bacillusok növekedését gátló egyéb lehetséges tényezők (tápanyagbázis hiánya) kizárása érdekében a monokultúrák kontroll vetését párhuzamosan végezzük hasonló körülmények között történő inkubáció után. A kifejlett mikroorganizmusok számát az 1. táblázat szerint számítjuk ki – Számítási táblázat a baktériumok számának meghatározásához 1 ml folyadékban. Ha a páciens ürülékéből egynél több UPM-et észlelnek, a leírt eljárást mindegyik UPM-mel végrehajtják. Ha a penicillint tartalmazó táptalajon az opportunista mikroorganizmusok számának csökkenést mutatnak ki a kontroll oltáshoz képest, akkor a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitásának jelenlétét határozzák meg a tenyészetből izolált opportunista mikroorganizmus törzzsel szemben. beteg a bél dysbiosis vizsgálata során. A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitásának megléte vagy hiánya egy értékelési kritérium az eubiotikumok hatékonyságának meghatározásához, amelyek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, egy törzs ellen. egy adott betegből izolált opportunista mikroorganizmus a bél dysbiosis vizsgálata során. A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitása esetén az eubiotikum hatásosnak bizonyult az ettől a pácienstől izolált opportunista mikroorganizmus törzsével szemben a bél dysbiosis vizsgálata során.
A javasolt módszer lényeges megkülönböztető jellemzői a következők:
Opportunista mikroorganizmusok tiszta tenyészetének izolálása az alany székletéből;
A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs tiszta tenyészetét izolálják, amely az eubiotikum fő hatóanyaga;
Ezután a Bacillus cereus IP 5832 törzset (ATCC 14893) együtt inkubáljuk az opportunista mikroorganizmusok mindegyik törzsével fiziológiás oldatban;
A keverék utólagos vetése táptalajra Gold szerint;
A vetést 0,01 U/ml koncentrációjú penicillint tartalmazó és penicillin nélküli tápagarra végezzük;
Ha a penicillint tartalmazó táptalajon az opportunista mikroorganizmusok számának csökkenését észlelik a penicillint nem tartalmazó táptalajon lévő opportunista mikroorganizmusok számához képest, akkor a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitása az opportunista mikroorganizmusok törzseivel szemben. eldöntött;
A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs opportunista mikroorganizmusok törzseivel szembeni antagonista aktivitása esetén az eubiotikum hatásosnak bizonyult egy adott betegből izolált opportunista mikroorganizmus törzzsel szemben a bélrendszeri dysbiosis vizsgálata során.
Az ok-okozati összefüggés a lényeges megkülönböztető jegyek és az elért eredmény között:
A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs opportunista mikroorganizmusokkal szembeni antagonista aktivitásának azonosításának egyénisége, valamint az eubiotikumok hatékonyságának értékelésének egyénisége, amelyek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC) törzs. 14893) opportunista mikroorganizmusok ellen A bélrendszeri dysbiosis vizsgálata során a páciensből izolált mikroorganizmusokat az opportunista mikroorganizmusok tiszta tenyészetben történő izolálásával biztosítják az alany ürülékéből, és a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs tiszta tenyészetét, majd közös inkubálás sóoldatban és Gold szerint táptalajra szélesztés.
Az elnyomott UPM-ek számának meghatározásához Gold szerinti vetés táptalajra szükséges.
A 0,01 U/ml koncentrációjú penicillint tartalmazó tápagar lehetővé teszi a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) eubiotikus törzsének elnyomását anélkül, hogy veszélyeztetné a teszttenyészetek csírázását, ami lehetővé teszi a B. cereus antagonista aktivitásának kimutatását opportunista mikroorganizmusok ellen.
Teszttenyészetként bélrendszeri diszbiózisban szenvedő betegekből izolált opportunista mikroorganizmusok törzseit tanulmányoztuk - 20-20 izolátumot: S. aureus, S. epidermidis, Klebsiella spp., E. coli jellegzetes tulajdonságokkal, E. coli megváltozott enzimaktivitással, Enterobacter spp. ., Citrobacter spp., P. aeruginosa.
1 ml UPM teszttenyészetek fiziológiás oldatban készült szuszpenzióját 10 9 sejt végkoncentrációban az optikai zavarossági standard szerint összekevertük 1 ml Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs szuszpenziójával, azonos koncentrációban. A bacilusok vagy az opportunista baktériumok elszaporodásának elkerülése érdekében a folyékony táptalaj használatát az ízületi inkubációhoz nem tartották megfelelőnek. Az elegyet 48 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Feltételezték, hogy ez idő alatt az UPM kihalt a bacillus metabolitok hatására. A kvantitatív vetés Gold szerint 3 mm átmérőjű és 2 μl űrtartalmú mérőhurokkal történt. A bacillusok elnyomása érdekében antibiotikus tápanyag-agarra vetettük őket, illetve antibiotikum nélküli táptalajra mindkét tenyészettípus növekedésének szabályozására. Az UPM és a bacilusok növekedését gátló egyéb lehetséges tényezők (tápanyagbázis hiánya) kizárására a monokultúrák kontroll vetését párhuzamosan végeztük hasonló körülmények között végzett inkubáció után. A kifejlett mikroorganizmusok számát az 1. táblázat szerint számítottuk ki – Számítási táblázat a baktériumok számának meghatározásához 1 ml folyadékban 1.
A bacilusok növekedésének visszaszorítására a vetési táptalajon korábban szelektív adalékanyagot választottak ki - egy olyan koncentrációjú antibiotikumot, amely elnyomja a bacillusokat, de nem gátolja a mikroorganizmusok növekedését, a penicillin és sztreptomicin elleni széles körben elterjedt rezisztenciára vonatkozó adatok alapján. tesztelt opportunista baktériumok (különösen enterobaktériumok). Különböző koncentrációjú antibiotikumokat adtunk a megolvasztott és 46-48 °C-ra hűtött tápagarhoz. A sztreptomicinnel végzett tápközeg tesztelésekor a hatóanyagot 1,0 U/ml, 0,5 U/ml, 0,25 U/ml tápközeg koncentrációban adtuk hozzá. UPM és Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs 25 tenyészetét 10 9 sejt/ml koncentrációban oltottuk be, antibiotikumokkal és antibiotikum nélküli táptalajon. A bacillusok növekedését azonban nem sikerült teljesen elnyomni – 10 9-10 4 sejt/ml-ről 1,0 U/ml tápközeg maximális sztreptomicin-koncentráció mellett. Ugyanakkor a dysbiosis diagnosztizálása során izolált UPM tenyészeteket (Klebsiella spp., Enterobacter spp., atipikus E. coli, Citrobacter spp., S. aureus) sztreptomicin 74 (96%) tesztben különböző mértékben szuppresszálta ( 2. táblázat - Szelekciós antibiotikum a Bacillus cereus IP 5832 törzs (ATCC 14893) és az opportunista mikroorganizmusok egyidejű szaporodásának elnyomására.
A penicillint tartalmazó tápközeg tesztelésekor a hatóanyagot 0,001 U/ml, 0,01 U/ml, 0,1 U/ml, 1,0 U/ml tápközeg koncentrációban adtuk hozzá. Hasonlóan történt a vetés és az eredmények rögzítése is. Az opportunista enterobaktériumokat még az 1,0 U/ml táptalaj maximális penicillinkoncentrációja sem tudta elnyomni. A S. aureus intenzívebb szuppresszióját figyelték meg. Az opportunista baktériumok, köztük a S. aureus csírázásának elfogadható szintjét figyelték meg a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs egyidejű teljes elnyomásával 0,01 U/ml tápközeg penicillinkoncentrációnál (2. táblázat – Az antibiotikum kiválasztása a Bacillus cereus IP 5832 törzs (ATCC 14893) elnyomására és az opportunista mikroorganizmusok egyidejű szaporodására).
A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs opportunista mikroorganizmusokkal szembeni antagonista aktivitása esetén az eubiotikum hatásosnak tekinthető egy adott betegből izolált opportunista mikroorganizmus törzsével szemben a bélrendszeri dysbiosis vizsgálata során.
A Bacillus cereus IP 5832 törzs antagonista aktivitását választottuk ki az eubiotikumok hatékonyságának egyéni értékeléséhez, amelynek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, egy opportunista mikroorganizmus törzzsel kapcsolatban. izolált ettől a betegtől egy bélrendszeri dysbiosis vizsgálata során (ATCC 14893). Ez azzal magyarázható, hogy a Bacillus cereus törzs aktivitása a bél lumenében jelentkezik, és elsősorban ennek a törzsnek a nagy antagonista aktivitásához kapcsolódik, és nem a nyálkahártyához való kapcsolódási helyekre vonatkozó kompetitív kapcsolatokkal.
A javasolt módszer lényeges megkülönböztető jegyeinek összessége új, és lehetővé teszi az eubiotikus Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs elnyomását anélkül, hogy veszélyeztetné a teszttenyészetek csírázását, ami viszont biztosítja a baktériumok antagonista aktivitásának azonosítását. a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) eubiotikus törzs a bélrendszeri dysbiosis vizsgálata során izolált opportunista mikroorganizmusokkal kapcsolatban, amely felhasználható az eubiotikumok hatékonyságának egyéni értékelésére, amelyek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, a betegből izolált opportunista mikroorganizmusokkal kapcsolatban, amikor bélrendszeri diszbiózist vizsgáltak.
Példák konkrét megvalósításra:
A széklet bakteriológiai vizsgálata bélrendszeri dysbiosis miatt (247. sz.) 5×10 6 CFU/g mennyiségben mutatott ki Citrobacter freundii-t.
A páciens ürülékéből izolált Citrobacter freundii tiszta tenyészetének 1 ml-ét fiziológiás oldatban 10 sejt végső koncentrációban az optikai zavarossági standardnak megfelelően összekevertük 1 ml Bacillus cereus tiszta tenyészet szuszpenziójával. IP 5832 (ATCC 14893) törzs, amelyet az eubiotikus „Bactistatin”-ból izoláltak, azonos koncentrációban. Az elegyet 48 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Ezután egy 3 mm átmérőjű és 2 μl űrtartalmú Gold in mérőhurokkal kvantitatív oltást végeztünk 0,01 U/ml koncentrációjú penicillint tartalmazó tápagarra a bacilusok visszaszorítása érdekében és antibiotikum nélküli táptalajra a növekedés szabályozására. mindkét típusú kultúra. A kifejlett mikroorganizmusok számát az 1. táblázat szerint számítottuk ki – Számítási táblázat a baktériumok számának meghatározásához 1 ml folyadékban.
A kontroll változatban a Citrobacter freundii koncentrációja 10 8 CFU/g, a kísérleti változatban 5 × 10 CFU/g volt. Feltárták a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitását a Citrobacter freundii törzzsel (247. sz.) szemben. A "Baktisubtil" gyógyszerről megállapították, hogy hatékony a Citrobacter freundii törzs ellen, amelyet egy páciensből izoláltak a bélrendszeri dysbiosis vizsgálata során.
A széklet bakteriológiai vizsgálata béldysbiosisra (512. sz.) 10 6 CFU/g mennyiségben mutatta ki a S aureust.
A páciens ürülékéből izolált tiszta S aureus tenyészet 1 ml-ét fiziológiás oldatban 10 9 sejt/ml végső koncentrációban az optikai zavarossági standard szerint összekevertük 1 ml Bacillus tiszta tenyészet szuszpenziójával. cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, amelyet a „Baktisubtil” eubiotikumból izoláltak, azonos koncentrációban. Az elegyet 48 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Ezután egy 3 mm átmérőjű és 2 μl űrtartalmú Gold in mérőhurokkal kvantitatív oltást végeztünk 0,01 U/ml koncentrációjú penicillint tartalmazó tápagarra a bacilusok visszaszorítása érdekében és antibiotikum nélküli táptalajra a növekedés szabályozására. mindkét típusú kultúra. A kifejlett mikroorganizmusok számát az 1. táblázat szerint számítottuk ki – Számítási táblázat a baktériumok számának meghatározásához 1 ml folyadékban.
A kontroll változatban a S aureus koncentrációja 5×10 6 CFU/g, a kísérleti változatban - 10 6 CFU/g volt. A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitását a S aureus törzzsel szemben (512. sz.) nem mutatták ki. A "Baktisubtil" gyógyszer hatástalannak bizonyult a betegből izolált S aureus törzzsel szemben a bél dysbiosis vizsgálata során.
A széklet bakteriológiai vizsgálata béldysbiosis kimutatására (429. sz.) Klebsiella pneumoniae 10 4 CFU/g, Enterobacter agglomerans 10 6 CFU/g, Citrobacter freundii 10 6 CFU/g mennyiségben, Staphylococcus aureus 10 4 CFU/g mennyiségben G.
A páciensből izolált opportunista mikroorganizmusok mindegyik törzsének tiszta tenyészetének 1 ml-ét fiziológiás oldatban, az optikai zavarossági standard szerint 10 9 sejt végkoncentrációban, összekevertük 1 ml szuszpenzióval. a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs tiszta tenyészete, amelyet egy eubiotikus "Baktisubtil"-ból izoláltak azonos koncentrációban. Így opportunista mikroorganizmusok és bacilusok törzseinek 4 keverékét kaptuk. Az elegyeket 48 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Ezután kvantitatív oltást végeztünk 3 mm átmérőjű és 2 μl űrtartalmú Gold in mérőhurokkal 0,01 U/ml koncentrációjú penicillint tartalmazó tápagarra a bacilusok elnyomására, valamint antibiotikum nélküli táptalajra a bacilusok szabályozására. mindegyik izolált kultúra növekedése. A kifejlett mikroorganizmusok számát az 1. táblázat szerint számítottuk ki – Számítási táblázat a baktériumok számának meghatározásához 1 ml folyadékban.
A kontroll változatban a Klebsiella pneumoniae koncentrációja 10 8 CFU/g, a kísérleti változatban 10 6 CFU/g volt. A kontroll változatban az Enterobacter agglomerans koncentrációja 10 7 CFU/g, a kísérleti változatban 10 5 CFU/g volt. A kontroll változatban a Staphylococcus aureus koncentrációja 10 8 CFU/g, a kísérleti változatban 5×10 6 CFU/g volt. A kontroll változatban a Citrobacter freundii koncentrációja 10 7 CFU/g, a kísérleti változatban 10 6 CFU/g volt.
Feltárták a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitását a Klebsiella pneumoniae, Enterobacter agglomerans, Staphylococcus aureus, Citrobacter freundii törzsekkel szemben. A "Baktisubtil" gyógyszer hatásosnak bizonyult ezekkel a törzsekkel szemben, amelyeket egy adott betegből izoláltak a dysbacteriosis vizsgálata során.
A széklet bakteriológiai vizsgálata bélrendszeri dysbiosis kimutatására (449. sz.) Enterobacter agglomeranst 10 6 CFU/g, Klebsiella pneumoniae 5×10 4 CFU/g mennyiségben, Citrobacter freundii 10 6 CFU/ mennyiségben mutatott ki. g.
Az opportunista mikroorganizmusok izolált törzseinek tiszta tenyészetének 1 ml-ét fiziológiás oldatban 10 9 sejt végső koncentrációban az optikai zavarossági standard szerint összekevertük 1 ml Bacillus cereus tiszta tenyészet szuszpenziójával. IP 5832 (ATCC 14893) törzs, amelyet a "Baktisubtil" eubiotikusból izoláltak, azonos koncentrációban. Így opportunista mikroorganizmusok és bacilusok törzseinek 3 keverékét kaptuk. Az elegyeket 48 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Ezután egy 3 mm átmérőjű és 2 μl űrtartalmú Gold in mérőhurokkal kvantitatív oltást végeztünk 0,01 U/ml koncentrációjú penicillint tartalmazó tápagarra a bacilusok visszaszorítása érdekében és antibiotikum nélküli táptalajra a növekedés szabályozására. mindegyik izolált kultúrából. A kifejlett mikroorganizmusok számát az 1. táblázat szerint számítottuk ki – Számítási táblázat a baktériumok számának meghatározásához 1 ml folyadékban.
A kontroll változatban az Enterobacter agglomerans koncentrációja 10 8 CFU/g, a kísérleti változatban 5×10 7 CFU/g volt. A kontroll változatban a Klebsiella pneumoniae koncentrációja 10 7 CFU/g, a kísérleti változatban 5×10 6 CFU/g volt. A kontroll változatban a Citrobacter freundii koncentrációja 10 7 CFU/g, a kísérleti változatban 5×10 5 CFU/g volt.
Feltárták a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitását a Citrobacter freundii törzzsel szemben, a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitását az Enterobacter agglomerans és a Klebsiellas nem mutatta ki. A "Baktisubtil" gyógyszerről megállapították, hogy hatásos a Citrobacter freundii törzs ellen, és hatástalan az Enterobacter agglomerans és Klebsiella pneumoniae törzsekkel szemben, amelyeket ebből a betegből izoláltak a diszbakteriózis vizsgálata során.
A széklet bakteriológiai vizsgálata bélrendszeri dysbiosis kimutatására (461. sz.) 10 6 CFU/g mennyiségben Klebsiella pneumoniae-t és 10 6 CFU/g Citrobacter freundii-t mutatott ki.
Az opportunista mikroorganizmusok izolált törzseinek tiszta tenyészetének 1 ml-ét fiziológiás oldatban 10 9 sejt végső koncentrációban az optikai zavarossági standard szerint összekevertük 1 ml Bacillus cereus tiszta tenyészet szuszpenziójával. IP 5832 (ATCC 14893) törzs, amelyet a "Baktisubtil" eubiotikusból izoláltak, azonos koncentrációban. Így opportunista mikroorganizmusok és bacilusok törzseinek 2 keverékét kaptuk. Az elegyeket 48 órán át 37 °C-on inkubáltuk. Ezután kvantitatív oltást végeztünk 3 mm átmérőjű és 2 μl űrtartalmú Gold in mérőhurokkal 0,01 U/ml koncentrációjú penicillint tartalmazó tápagarra a bacilusok elnyomására, valamint antibiotikum nélküli táptalajra a bacilusok szabályozására. az összes izolált kultúra növekedése. A kifejlett mikroorganizmusok számát az 1. táblázat szerint számítottuk ki – Számítási táblázat a baktériumok számának meghatározásához 1 ml folyadékban.
A kontroll változatban a Klebsiella pneumoniae koncentrációja 10 7 CFU/g, a kísérleti változatban 5×10 5 CFU/g volt. A kontroll változatban a Citrobacter freundii koncentrációja 10 8 CFU/g, a kísérleti változatban 5×10 7 CFU/g volt.
Feltárták a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs antagonista aktivitását a Klebsiella pneumoniae törzzsel szemben, a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzsnek a Citrobacter freundii törzzsel szembeni antagonista aktivitását nem mutatták ki. A "Baktisubtil" gyógyszerről megállapították, hogy hatásos a Klebsiella pneumoniae törzzsel szemben, és hatástalan a Citrobacter freundii törzzsel szemben, amelyet ebből a betegből izoláltak egy diszbakteriózis vizsgálata során.
A kifejlesztett táptalaj 0,01 U/ml koncentrációjú penicillinnel a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs és 96 UPM tenyészet antagonizmusát vizsgáltuk a vizsgálat során jelentős mennyiségben izolált béldysbiosis miatt: Citrobacter spp. (16 törzs), Klebsiella spp. (17), S. aureus (18), Enterobacter spp. (15), tipikus E. coli (15), atipikus tulajdonságokkal rendelkező E. coli (15). Az eubiotikum antagonista aktivitását az általa szuppresszált vizsgált mikroorganizmusok számával (%-ban) értékeltük (3. táblázat – A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs és az opportunista mikroorganizmusok antagonizmusa).
A vizsgálatok kimutatták, hogy a vizsgált Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs a vizsgált UPM törzsek 17,7%-át (17 izolátum) elnyomja.
Az opportunista mikroorganizmusok számának csökkenése azonban jelentéktelen volt - 0,5-2 lg-mal. A vizsgált törzsek 79,0%-a (81 izolátum) rezisztensnek bizonyult, sőt eubiotikum jelenlétében is szaporodásra képes.
A találmány szerinti eljárás lehetővé teszi a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) eubiotikus törzs elnyomását anélkül, hogy veszélyeztetné a teszttenyészetek csírázását, ami viszont biztosítja a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC) eubiotikus törzs antagonista aktivitásának azonosítását. 14893) egy opportunista mikroorganizmus törzs ellen, amelyet a beteg bélrendszeri dysbiosisának diagnosztizálása során izoláltak, és amely felhasználható az eubiotikumok hatékonyságának egyéni értékelésére, amelynek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, a betegből izolált opportunista mikroorganizmusok ellen a bél dysbiosis vizsgálata során.
| Asztal 1 | |||||||
| Számítási táblázat a baktériumok számának meghatározásához 1 ml folyadékban | |||||||
| A | én | II | III | Mennyiség 1 ml-ben | |||
| 1-6 | - | - | <1000 | ||||
| 8-20 | - | - | - | 3000 | |||
| 20-30 | - | - | - | 5000 | |||
| 30-60 | - | - | - | 10000 | |||
| 70-80 | - | - | - | 50000 | |||
| 100-150 | 5-10 | - | - | 100000 | |||
| nem számítva | 20-30 | - | - | 500000 | |||
| -"- | 40-60 | - | - | 1 millió | |||
| -"- | 100-150 | 10-20 | - | 5 millió | |||
| -"- | nem számítva | 30-40 | - | 10 millió | |||
| -"- | -"- | 60-80 | Egyedülálló kolóniák | 100 millió | |||
| 2. táblázat | |||||||
| Antibiotikum kiválasztása a Bacillus cereus IP 5832 törzs (ATCC 14893) és az opportunista mikroorganizmusok egyidejű szaporodásának elnyomására | |||||||
| Az UMR növekedése adott antibiotikum koncentrációnál, CFU/ml | Adott antibiotikum-koncentráció mellett termesztett UPM törzsek száma, abs (%) | ||||||
| Streptomicin, egység/ml táptalaj | Penicillin, egység/ml táptalaj | ||||||
| 1,0 | 0,5 | 0,25 | 1,0 | 0,01 | 0,01 | 0,001 | |
| 10 8 (azonos a kontrollal) | 1 (4) | 8 (32) | 10 (40) | 16 (64) | 19 (76) | 22 (88) | 23 (92) |
| 10 6 | 4 (16) | 2 (8) | 0 | 4 (16) | 3 (12) | 3 (12) | 2 (8) |
| 10 5 | 15 (60) | 12 (48) | 15 (60) | 5 (20) | 3 (12) | 0 | 0 |
| 10 4 | 3 (12) | 3(12) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| <10 4 | 2 (8) | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| Bacillus cereus növekedése adott antibiotikum koncentrációnál, CFU/ml | 10 4 | 10 4 | 10 4 | Ots. | Ots. | Ots. | 10 4 |
| 3. táblázat | |||||
| A Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs és az opportunista mikroorganizmusok antagonizmusa | |||||
| Teszttenyészetek UPM | A törzsek száma | Érzékeny törzsek abs (%) | Ellenálló nyúlás abs (%)* | ||
| 1 lg-os csökkentés | Csökkentse 2 lg-al | Teljesen rezisztens törzsek | Ezek közül eubiotikus jelenlétében képesek növekedni** | ||
| Klebsiella spp. | 17 | 1 (5,9) | 0 | 16(94,1) | 1 (6.25) |
| Enterobacter spp. | 15 | 4 (26,7) | 1 (6,6) | 10 (66,7) | 1(10) |
| Citrobacter spp. | 16 | 5(31,3) | 0 | 11 (68,7) | 1 (9,1) |
| tipikus E. coli | 15 | 1 (6,7) | 0 | 14 (93,3) | 0 |
| atipikus E. coli | 15 | 2(13,3) | 0 | 13 (86,7) | 1 (7,7) |
| S. aureus | 20 | 3 (15,0) | 0 | 17 (85,0) | 6 (35,3) |
| * - az UPM száma nem változott a kontrollhoz képest, vagy legfeljebb 0,5 lg-mal változott ** - az UPM-ek száma nőtt a kontrollhoz képest |
Információs források
1. Osipova I.G., Mikhailova R.A., Sorokulova I.B., Vasilyeva E.A., Gaiderov A.A. Spóraprobiotikumok // Mikrobiológiai, virológiai és immunológiai folyóirat. - 2003. - 3. sz. - P.113-119.
2. Blinkova L.P., Semenova S.A., Butova L.G. és mások A Bacillus nemzetséghez tartozó frissen izolált baktériumtörzsek antagonisztikus aktivitása // Journal of Microbiology, Virology and Immunology. - 1994. - 5. sz. - P.71-75.
3. A Bacillus subtilis és Bacillus licheniformis baktériumtörzsek, amelyeket vírusos és bakteriális fertőzések elleni gyógyszer összetevőiként használnak, valamint ezeken a törzseken alapuló gyógyszer. / Patent RU 2142287, publ. 12/10/99. - Bika. N20.
4. A Bacillus subtilis baktériumtörzs széles spektrumú antagonista aktivitással. / Patent RU N2182172, publ. 05/10/02.
5. Gataullin A.G., Mikhailova N.A., Blinkova L.P., Romanenko E.E., Elkina S.I., Gaiderov A.A., Kalina N.G. Az izolált Bacillus subtilis törzsek tulajdonságai és hatásuk a kísérleti egerek bélmikroflórájára // Journal of Microbiology, Virology and Immunology. - 2004. - 2. szám - P.91-94.
6. Davydov D.S., Mefed K.M., Osipova I.G., Vasilyeva E.A. A spóraprobiotikumok világszerte történő használata az egészségügyi gyakorlatban // Klinikai táplálkozás. - 2007. - 1-2. - S.A36.
7. Sorokulova I.B. A bacilusokból származó probiotikumok hatása a makrofágok funkcionális aktivitására // Antibiotikumok és kemoterápia. - 1998. - 2. szám - P.20-23.
8. Blinkova L.P. Bakteriocinek: kritériumok, osztályozás, tulajdonságok, kimutatási módszerek // Journal of Microbiology, Virology and Immunology. - 2003. - 3. sz. - P.109-113.
9. Postnikova E.A., Efimov B.A., Volodin N.N., Kafarskaya L.I. Ígéretes bifidobaktériumok és laktobacillustörzsek keresése új biológiai termékek kifejlesztéséhez // Journal of Microbiology, epidemiology and Immunology. - 2004. - No. 2. P.64-69.
10. Gratia A., Fredericq P. Deversite des souches antibiotiques de Escherichia coli et étendue varibile de leur champ d'action Uo: 1031-1033.
11. Fredericq P. Actions antibiotiques reciproques chez les Enterobacteriaceae. FORDULAT. Belge Pathol. Med. Exp. 1948, 19 (4. melléklet): 1-107.
12. Ermolenko E.I., Isakov V.A., Zhdan-Pushkina S.Kh., Tets V.V. A lactobacillusok antagonista aktivitásának kvantitatív értékelése // Journal of Microbiology, Virology and Immunology. - 2004. - 5. sz. - P.94-98.
13. Ushakova N.A., Chernukha B.A. A hőmérsékleti sokk hatása a probiotikus Bacillus subtilis 8130 biológiai hatékonyságára // Klinikai táplálkozás. - 2007. - 1-2. - S.A70.
14. Arzumanjan V.G., Mikhailova N.A., Gaiderov A.A., Basnakyan I.A., Osipova I.G. Kvantitatív módszer probiotikus kultúrák opportunista élesztőgombákkal szembeni késleltetett antagonizmusának értékelésére // Klinikai laboratóriumi diagnosztika. - 2005. - 5. szám P.53-54.
15. Módszer probiotikumok antagonista hatásának meghatározására. / RU Patent No. 2187801, publ. 2002.08.20.
16. Zykova N.A., Molokeeva N.V. Új probiotikus gyógyszer „Trilact” // Klinikai táplálkozás. - 2007. - 1-2. - S.A42.
17. Útmutató az egységes mikrobiológiai (bakteriológiai) kutatási módszerek klinikai diagnosztikai laboratóriumokban történő alkalmazásához: 1. függelék a Szovjetunió Egészségügyi Minisztériumának 535. - 1986. számú rendeletéhez.
18. Sanford Jay P., Gilbert David N., Moeliering Robert C. Jr., Sande Merle A. Huszonkilencedik kiadás, The Sanford Guide to antimicrobial therapy, 1999.
KÖVETELÉS
Módszer az eubiotikumok hatékonyságának egyéni értékelésére, amelynek fő hatóanyaga a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzs, a páciensből izolált opportunista mikroorganizmusok ellen a bél dysbiosis vizsgálata során, amely az opportunista mikroorganizmusok tiszta izolálásából áll. az alany ürülékéből származó tenyészetet, majd a Bacillus cereus IP 5832 TÖRZET (ATCC 14893) tiszta tenyészetben izoláljuk, majd a Bacillus cereus IP 5832 (ATCC 14893) törzset együtt inkubáljuk az opportunista mikroorganizmusok mindegyik törzsével fiziológiás körülmények között. oldatot, majd Gold szerint vetés penicillinnel és anélkül 0,01 U/ml koncentrációjú tápagarra, és ha a penicillint tartalmazó táptalajon az opportunista mikroorganizmusok számának csökkenése észlelhető az opportunista mikroorganizmusok számához képest penicillin nélküli tápközegben meghatározzák a Bacillus cereus IP 5832 törzs antagonista aktivitását (ATCC 14893) egy opportunista mikroorganizmus törzzsel szemben, ahol az eubiotikumot egy adott betegből izolált opportunista mikroorganizmus törzsével szemben hatékonynak értékelik, ha bél dysbiosis vizsgálata.
Kéziratként
Gataullin Airat Gafuanovics
ÚJ PROBIOTIKUMOK LÉTREHOZÁSÁT ÍGÉRETŐ BACILLUS SUBTILIS TÖRZSEK BIOLÓGIAI TULAJDONSÁGAI
értekezés a biológia tudományok kandidátusi fokozatáért
Moszkva - 2005
A munkát az Állami Intézmény Oltóanyag- és Szérumtudományi Kutatóintézetében végezték. AI. Mechnikov RAMS, Moszkva.
Tudományos témavezetők: az orvostudományok doktora,
Mikhailova professzor N.A. A biológiai tudományok doktora Blinkova L.P.
Hivatalos ellenfelek: az orvostudományok doktora,
Baturo professzor A.P. Az orvostudományok doktora, Likhoded professzor V.G.
Vezető szervezet: Fogyasztói Jogok Védelmét és Emberi Jólétét Felügyelő Szövetségi Szolgálat Nemzeti ellenőrző szerv A GosNII Szövetségi Állami Tudományos Intézet az Orvosi Biológiai Készítmények Szabványosításával és Ellenőrzésével. L.A. Tarasevics
A védésre ¿3" és 2005-ben 14 órakor kerül sor a disszertációs tanács D 001.035.01 számú ülésén az I. I. Mechnikov RAMS Állami Oltóanyag- és Szérumkutató Intézetben a következő címen: 105064, Moszkva, Maly Kazenny sáv, 5a.
A disszertáció az Állami Oltóanyag- és Szérumkutató Intézet I. I. nevét viselő könyvtárában található. Mechnikov RAMS.
tudományos titkár
szakdolgozati tanács
A biológiai tudományok kandidátusa
A MUNKA ÁLTALÁNOS LEÍRÁSA
A probléma relevanciája
Az orvosi mikrobiológiában olyan adatok halmozódtak fel, amelyek indokolják a szaprofita mikroflóra alkalmazását a diszbiotikus rendellenességek korrekciójára, amelyek mikroorganizmusai létfontosságú tevékenységük során biológiailag aktív anyagokat (BAS) termelnek, amelyek elnyomják a patogén mikroorganizmusok növekedését [Mikhailova N.A. et al., 1993; Mazankova L.N. et al., 1997; Osipova I.G. et al., 2003].
Az élő, nem patogén mikrobákon alapuló terápiás és profilaktikus gyógyszerek, amelyek természetes adagolási móddal képesek a gazdaszervezet fiziológiai és biokémiai funkcióira a mikrobiológiai állapot optimalizálása révén jótékony hatást gyakorolni, probiotikus gyógyszerek közé tartoznak [Shenderov B.A. , 1997].
A gyomor-bél traktus betegségeinek megelőzésére és kezelésére széles körben alkalmazzák a spóraképző baktériumok élő mikrobiális tenyészetén alapuló biológiai termékeket [Slabospitskaya A.T. et al., 1990; Nikitenko V. I., 1991; Nikitenko L.I., Nikitenko V.I., 1992; Szmirnov V.V. et al., 1995; Shenderov B.A. et al., 1997; Pobery IA. et al., 1998].
A Bacillus nemzetség ősidők óta felkeltette a kutatók figyelmét. A baktériumok mikrobiológiájával, biokémiájával, fiziológiájával és genetikájával kapcsolatos információk a Bacillus előnyeit jelzik biológiailag aktív anyagok termelőjeként: enzimek, antibiotikumok, rovarölő szerek [Smirnov V. V. et al., 1982; Parshina S.N. et al, 1990; Harwood K., 1992; Blinkova L.P. et al., 1994].
Az anyagcsere-folyamatok sokfélesége, a genetikai és biokémiai változatosság, valamint a lítikus és emésztőenzimekkel szembeni rezisztencia indokként szolgált a bacilusok felhasználására az orvostudomány különböző területein. Az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatósága a B. subtilis GRAS (általában biztonságosnak tekinthető) státuszát rendelte el, ami előfeltétele a gyógyszerek előállításában való felhasználásuknak [Harwood K., 1992; Nikitenko L.I., 1992; Kandybin N.V. et al., 1995; Ivanovsky A. A., 1996, 1997; Boyko N. V. és munkatársai, 1997; Payne J. M., 1992; Kubo K, 1994; Tsuge K. és munkatársai, 1995; Rychen G. et al., 1995, Donovan W.P. et al., 1995].
A Bacillus nemzetség számos képviselőjének aktivitása kifejezett és megnyilvánul a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok széles skálájával szemben.A különböző enzimek és egyéb anyagok szintézisének köszönhetően szabályozzák és serkentik az emésztést, antiallergén és antitoxikus hatásúak. A bacilusok használata jelentősen növeli a makroorganizmus nem specifikus rezisztenciáját, ráadásul ezek a mikroorganizmusok technológiailag fejlett termelésűek, stabilak a tárolás során, és ami fontos, környezetbarátak [Soroku Yu-va IB, 1996]
A biotechnológia szempontjából leginkább a B sub lilts faj érdekelt, ehhez készült a molekuláris genetikai adatbank, a SubtiList, amelybe a baktériumgenomra vonatkozó minden információ bekerül.
A B subtilis baktériumokat széles körben használják számos bakteriális és enzimkészítmény előállításának technológiájában [Shablinskas AI, 1990, Gulko MA, 1994, Gastro GR, 1992, Dercova K et al, 1992, Kudrya VA, 1994, Lin S-C et al. , 1994, Cromwick AM et al, 1996, Buchell M E et al, 1997, Oh M K et al, 1995]
Ezek alapján készítményeket hoztak létre - probiotikumokat, amelyeket széles körű terápiás és profilaktikus hatások, valamint környezeti biztonság jellemez [Nakhabin IM, Perelygin VV, 1996]. A spóraprobiotikumokat hatékonyan alkalmazzák emberek és haszonállatok gyomor-bélrendszeri betegségeinek kezelésére. [MPTopchiy, 1997, VGuida, 1978, Kharchenko, 1980, Nikitenko V I, 1992]
Jelenleg a legismertebb gyógyszerek a következő gyógyszerek: bactisu btil, sporobacterin, biosporin, baktisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin és mások [Smirnov VV et al. 1988, 1992, 1995, 1997, Nikitenko V I, 1991, 1989, 1992, Gracheva N M et al, 1996, Vinnik Yu Si et al, 1998, Sorokulova I B, 1996, 1997, St gard H, 1989, Maruta K, 1996, Su Li et al, 1996, Adami A et al, 1997]
A spóraprobiotikumok terápiás hatékonyságát az előállításukhoz felhasznált törzsek biológiai tulajdonságai biztosítják, meghatározó jelentőségű a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusokkal szembeni antagonista hatás spektruma, amelyek az eltérések egyik oka.
A mikroökológia fejlődése az emberi vagy állati test különböző biotópjaiban, emellett nem szabad figyelmen kívül hagyni a bacilusok azon képességét, hogy különféle biológiailag aktív anyagokat, például polipeptid antibiotikumokat, enzimeket, bakteriocinokat, stb., valamint antibiotikum-rezisztenciájukat állítsák elő.
A munka célja:
Az izolált B.subtilis törzsek biológiai tulajdonságainak tanulmányozása és felhasználásuk lehetőségének értékelése eredeti spóraprobiotikum kifejlesztésére
Kutatási célok:
Tudományos újdonság.
Az izolált törzsek morfológiai, fiziológiai-biokémiai, genetikai és egyéb biológiai tulajdonságainak vizsgálata alapján egy plazmidmentes B. subtilis 1719 törzset választottunk ki, amely antagonizmust mutat különböző taxonómiai csoportok opportunista és patogén mikroorganizmusaival szemben, alacsony tapadóképességű. aktivitású, és rezisztens gentamicinre, polimixinre és eritromicinre.
Kísérletileg alátámasztották a termelési technológia megalkotásának megközelítéseit, beleértve a B.subilhs 1719 törzs növekedési tulajdonságainak tanulmányozását eredeti táptalajokon, életképességének stabilizálásának feltételeit és antagonista aktivitását, mint egy új probiotikus gyógyszer előállításának lépéseit.
Találmányi kérelmet nyújtottak be (2005. április 19-i szám: 2005111301): „A Bacillus subtllll.4 1719 baktériumtörzs a patogén mikroorganizmusok elleni antagonista hatású biomassza, valamint proteolitikus, amilolitikus és lipolitikus enzimek termelője.”
Gyakorlati jelentősége.
Az izolált és azonosított B.SllbtlllS 1719 törzset a GISC State Collection of Cultures-ben helyezték letétbe. L.A. Tarasevich 277. szám alatt, és ajánlható egy eredeti bioterápiás probiotikus gyógyszer előállítására szolgáló ipari technológia fejlesztéséhez.
1. Az azonosított három baktériumtenyészet törzs morfológiai, fiziológiai, biokémiai és egyéb tulajdonságait tekintve megfelel a B. suhlllts fajnak. Nem tartalmaznak plazmidokat, antagonista hatásúak a különböző taxonómiai csoportokhoz tartozó opportunista és patogén baktériumokkal szemben, alacsony vagy közepes adhéziós szinttel rendelkeznek.
2. A B.subtlhs 1719 törzs probiotikus tulajdonságokkal rendelkezik, amely az opportunista és patogén mikroorganizmusok eliminációjában nyilvánul meg, a normál mikroflóra mennyiségi és minőségi összetételének helyreállításával kísérleti dysbiosisban, valamint immunmoduláló hatással van a makroorganizmusra.
A munka jóváhagyása
A „Funkcionális táplálkozás, élelmiszer-biztonság és emberi egészség a metropoliszban” konferencián bemutatott anyagok (Moszkva, 2003); elnevezésű Állami Intézménykutató Intézet fiatal tudósok versenyén. I.I. Mecsnyikov (Moszkva, 2004); a társadalomról
VOEMP (Moszkva, 2004); a 8. Nemzetközi Putyin Iskola Fiatal Tudósok Konferenciáján „Biológia – a 21. század tudománya” (Puschino, 2004); a Gasztroenterológusok Tudományos Társaságának V. Kongresszusán (Moszkva 2005).
A disszertáció jóváhagyására az NIIWS mikrobiológiai osztályának elnevezett tudományos konferenciáján került sor. I.I. Mechnikov RAMS (Moszkva, 2005. május).
A szakdolgozati munka terjedelme és felépítése
A dolgozat 131 oldalon jelenik meg. Bevezetésből, irodalmi áttekintésből (2 fejezet), saját eredményekből (5 fejezet), következtetésekből és következtetésekből áll. A hivatkozások listája: 236 forrás (169 hazai és 67 külföldi). A mű 10 ábrát és 19 táblázatot tartalmaz.
A kutatás tárgyai
Törzsek: különböző környezeti forrásokból izolált Bacillus subtilis.
Kísérleti dysbiosisban szenvedő egerekből izolált mikroorganizmusok tenyészetei.
Teszt – antagonista aktivitás meghatározására használt tenyészetek, a róla elnevezett GISK gyűjteményéből. L.A. Tarasevics
Tápláló táptalajok:
Meat Pepton Agar (MPA), Meat Pepton Broth (MPB), módosított Gause táptalaj No. 2, tápanyag agar 7% NaCl hozzáadásával - a tenyészetek termesztéséhez, 5% véragar a hemolitikus tulajdonságok meghatározásához, tojásleves a lecitináz aktivitás vizsgálatához , kazein és burgonya agar az enzimatikus tulajdonságok meghatározására, AGV - az antibiotikum rezisztencia felmérésére.
A bacilusok biokémiai tulajdonságait Omelyansky táptalajon határoztuk meg brómtimol kék indikátorral és szénhidrátokkal - glükóz, xilóz, mannit, laktóz, szacharóz, maltóz, szalicin és eszkulin. A spóramentes tenyészetekhez szénhidrát tartalmú Hiss táptalajt és aminosavakat tartalmazó táptalajt használtunk.
A citrát és a propionát hasznosulását Coser-féle táptalajon, a nitrátredukciós képességet pedig nitráttartalmú táptalajon tesztelték. Acetoin meghatározása közegben
(Voges-Proskauer reakció) Clark-féle táptalajon hajtottuk végre. Kligler-féle táptalajon vizsgálták a hidrogén-szulfid előállításának képességét; kataláz aktivitást mutattunk ki H2O2-val való reakcióban, a tenyészetek indoltermelő képességét indikátorpapírral ellátott táplevesben mutattuk ki; ureáz enzim - Christensen-féle karbamid táptalajon.
Ezen kívül az egerek mikroflórájának szerkezetének vizsgálatához hideg tejsavólevest és Hanks oldatot, differenciáldiagnosztikai táptalajokat használtunk: Endo, CI-agar, Ploskireva, staphylococcus és enterococcus agar, 88-agar, Mac-Sopkay táptalaj, cetrimid agar, Blaurock táptalaj, tioglikolát Wednesday, Wilson Blair Wednesday és mások.
A növekedési tulajdonságok értékeléséhez a következő táptalajokat használtuk:
Félszintetikus tápközeg burgonya-glicerin-hidrolizátum hozzáadásával [Mikhailova N.A. 1995].
5. számú táptalaj (g/l): kálium-foszfáttal diszubsztituált 3-víz - 0,3; diszubsztituált ammónium-szulfát - 2; nátrium-citrát 5,5-vizes - 2; réz-szulfát 5-víz - 0,005; cink-szulfát 7-víz - 0,004; vas(II)-szulfát 7-víz - 0,0005; kalcium-klorid - 0,165; mangán (II)-szulfát 5-víz - 0,05; magnézium-szulfát 7-víz - 0,3; száraz enzimes pepton bakteriológiai célokra - 5.
9. számú táptalaj (g/l): vas(II)-szulfát 7-víz - 0,01; magnézium-szulfát 7-víz - 0,1; kalcium-klorid - 0,08; száraz enzimes pepton bakteriológiai célokra - 5,0; glükóz - 10,0, élesztőkivonat - 3.
Közeg VK-2 (g/l): mangán-klorid - 0,01; kalcium-klorid - 0,05; nátrium-klorid - 5,0; nátrium-foszfáttal diszubsztituált 12-víz - 2,0; kálium-foszfáttal diszubsztituált 3-víz - 2,0; glükóz - 10,0, száraz enzimes pepton bakteriológiai célokra - 10,0.
SPAS-2 táptalaj (g/l): kálium-foszfáttal diszubsztituált 3-víz - 2,5; nátrium-klorid - 5,0; keményítő - 2,5; Módosított szójabab hidrolizátum - 10,0; száraz enzimes pepton bakteriológiai célokra - 10.0.
SPAS-4 táptalaj (g/l): nátrium-klorid - 5,0, Módosított szójabab hidrolizátum - 10,0; takarmányélesztő kivonat - 1,0; kazeinsav hidrolizátum - 5,0.
SPAS-6 táptalaj (g/l), diszubsztituált 3-víz kálium-foszfát - 2,5; nátrium-klorid - 5,0, kazaminosavak 5,0; módosítatlan szójabab hidrolizátum - 10,0, keményítő - 2,5.
Kutatási módszerek
A mikroorganizmus törzsek izolálását és azonosítását Petri-csészékbe vagy kémcsövekbe történő differenciáldiagnosztikai táptalajra szélesztéssel végeztük. A tenyészeteket 37 °C-os termosztátba helyeztük 18-24 órára, majd a termések megszámlálását követően keneteket készítettünk, Grammel megfestettük, mikroszkóppal megvizsgáltuk, és spóraképző baktériumtenyészeteket választottunk ki [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999 ]
Baktériumtelepek morfológiájának vizsgálata.
A mikrobiális populációban lévő telepek morfológiájának tanulmányozásához az eredeti tenyészet 10-szeres hígítását készítettük el 0,9%-os fiziológiás oldatban, és MPA táptalajra vetettük [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999].
Biomassza koncentráció vizsgálata.
A mikrobiális sejtek koncentrációját a tenyészfolyadékban a GISC ipari standard zavarossági mintával határoztuk meg. L.A. Tarasevics 10 egységért.
A törzs antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározása
A törzsek antibiotikumokkal szembeni érzékenységét korongdiffúziós módszerrel, AGV tápközegben, antibiotikumokkal impregnált standard korongok alkalmazásával vizsgálták [Birger M.O., 1982; Reshedko G.K., 2003; MUK 4.2.1980-04, 2004]
A fiziológiai és biokémiai tulajdonságokat a különféle szénhidrátok: glükóz, xilóz, mannit, szacharóz, maltóz és eszkulin, laktóz és szalicin hasznosítási képességével vizsgálták; gáz képződésével a glükóz lebontása során; 7%-os NaCl jelenlétében tenyészthető táptalajon, redukálja a nitrátokat, indolt, hidrogén-szulfidot termel, enzimeket szintetizál: ureázt, proteázt, amilázt és lipázt. A törzsek mozgékonyságát is értékeltük.
Az izolált törzsek toxicitását, toxicitását és virulenciáját 14-16 g tömegű fehér tenyésztett egereken határoztuk meg az ajánlott módszerekkel [Smirnov V.V., 1983, Murray P.R., 1999].
A B. sub tills törzsek adhéziós aktivitását Brilis B módszerrel határoztuk meg. a mikroorganizmusok adhéziós indexének (MAI) értékelésekor az adhéziót alacsonynak tekintették, ha MAI 1,00-2,49, közepesnek, ha IAM 2,5-3,99, magasnak, ha IAM > 4,0 [Brilis V I., 1982, 1990]
Az antagonista aktivitást a késleltetett antagonizmus módszerével teszteltük a GISC gyűjteményéből nyert hatásokhoz képest. L.A. Tarasevich teszt - a probiotikus készítmények minőségi mutatóinak értékelésére használt törzsek [Boiko N.V., 1989; Blinkova L.P. 1994].
Citotoxikus teszt a TNF-a koncentrációjának meghatározására A TNF-a koncentrációját az egérszérum L929 vonal célsejtekre gyakorolt citotoxikus hatása alapján határoztuk meg.
A neutrofilek fagocitáló aktivitását a nitroblue tetrazólium redukciójára szolgáló citokémiai teszttel (NBT teszt) vizsgálták egér fagocitákkal és luminol-függő kemilumineszcenciával [Zinkin V.Yu., 2004]
A citokinek (IL-1P, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-I2, IFN-γ) szintjét állati szérumokban enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA) határozták meg tesztrendszerek segítségével. a Biosource-tól » (Belgium)
Kísérleti diszbiózist 14-16 g tömegű, fehér tenyésztett egereken modelleztek, amelyekben a normál mikroflóra dekontaminációját doxiciklin-hidroklorid (JSC Belmedpreparaty) antibiotikummal, vagy a vastagbél feltételesen patogén parietális mikroflórájának szelektív dekontaminációját fluoroquinolonacin (Trokinofranacin) segítségével végezték. , Reddy's Lab., India).
A luminális és a parietális mikroflóra vizsgálatát egerekből aszeptikusan vett széklet és vastagbélmetszetek elemzésével végezték [Zudenkov A.E., 2001; Vorobjov A. A., 2001, 2003].
Az enterociták adhéziós aktivitásának meghatározására a „kesztyűs” módszer módosítását alkalmazták, és kiszámították az átlagos adhéziós indexet (AIA) [Gorskaya N.M., 1994, Brilis V.I., 1982, 1990].
A plazmid DNS analízist a plazmid DNS lúgos lízissel történő tisztítására tervezett standard eljárással végeztük [Osterman LD, 1981; Maniatis T. és munkatársai, 1984].
A táptalaj növekedési tulajdonságainak felmérése a tenyésztés során a "Mikrob-Avtomat" mikrobiológus és kemoterapeuta automatizált munkaállomásán, a "Multiskan-Ascent" tabletta fotométeren (Termo-Labsystems, Finnország) alapult, termosztáttal. és rázógép Statisztikai módszerek
Az eredmények statisztikai feldolgozása az általánosan elfogadott módszerek szerint történt (Ashmarin I P, Vorobyov A.A., 1962) Az eredményeket megbízhatónak tekintettük p.<0,05. Достоверность различий между средними значениями (X) экспериментальных данных оценивали по критерию Стьюдента
KUTATÁSI EREDMÉNYEK A munka kezdeti szakaszában 15 baktériumtenyészetet izoláltak. Kiderült, hogy mindössze 3 törzs nem rendelkezik hemolitikus és lecitináz aktivitással (patogenitási faktor), így azokat választottuk ki további vizsgálatra.
A kenetek mikroszkópos vizsgálata kimutatta, hogy a törzsek gram-pozitívak, az endospórák paracentrális és centrális elhelyezkedése jellemzi.
A 2. számú agar-módosított Gause táptalajon végzett tenyészetek tanulmányozásakor a telepek három változata jellemző a
Valamennyi törzs rendelkezett a baktériumok képviselőire jellemző morfológiai és fiziológiai-biokémiai tulajdonságokkal, mozgékonyak, 7%-os NaCl jelenlétében tenyésztettek, és különböző szubsztrátokat lebontó enzimek halmaza jellemezte őket, mint a glükóz, szacharóz. , maltóz, xilóz, eszkulin, zselatin, keményítő, kazein, redukált nitrátok, nem képez hidrogén-szulfidot
Ismeretes, hogy a B subtilis tenyészetek kifejezett antagonista tulajdonságokkal rendelkeznek a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok széles körében. Munkánk során ezt a tulajdonságot a késleltetett antagonizmus módszerével, a GISC elnevezett gyűjteményéből származó teszttenyészet törzsek felhasználásával értékeltük. L.A. Tarasevics (1. táblázat).
1. táblázat: Bacillus subtilis törzsek antagonista aktivitása
A teszttörzsek növekedésgátlási zónái (mm) _iX±m)___
A vizsgált B.subtilis o g- yi g-fi f) C ^ aureus FDA 209Р S aureus 29213 f, sch Tf GCh £ a o a 0 in s s 1 S I X. aureus "Filliov" a gch 1 G "s törzsei<3 о чО "о ГЧ Г4 О С (N 00 оо гц Гч| M1 "nJ
Mr. O<Л _ VI m IT) (N о п ГЧ гч +1 fl
1719 sz. N + g- G4 f, +1 f! +i in O VI O f o oo _ o o O № 1594 <Ч| CJ +1 +1 «-I С сч; п! O O O O o 00 ft 00 o No. 1318 Ni g", +1" +1 o! с> !Nj еч fl +1 О fj +1 fi + m + i + о + Г> f + о ГЧ + О CN ГЧ* +1 О + Гч ГЧ f. +1 (N A kapott adatok azt mutatták, hogy a törzsek antagonista aktivitásának szintje az alkalmazott teszttörzstől függően eltérő volt. Mindhárom törzs kifejezett antagonista aktivitást mutatott a Shigella két fajával (Sflexncri 337 és s.sonnei 170), S.aureus FDA 209P, S. aureus "Nikiforov", P.mirabilis 24a, P.vulgans 177, C.albicans 690, E.coli 1882, P.aeruginosa 9022 és E.coh 212 (O157:H7), a legnagyobb arányban a B.subtilis 1719 törzsben mutatták ki, amely szintén antagonizmust mutatott a S.aureus 29213, S.aureus 25423 ellen. Külön meg kell jegyezni, hogy a vizsgált törzsek meglehetősen kifejezett antagonizmust mutattak a Shiga-szerű toxin (cytovertoxin) szintetizálására képes enteropatogén E. coli 212 (0157:H7) törzzsel szemben, és a B. subtilis No. törzs volt a legnagyobb aktivitású. (30 + 2,0) mm 1719. Három eredeti B subtilis törzset vizsgáltak adhéziós képességükre, ami a probiotikus tenyészetek egyik legfontosabb tulajdonsága (2. táblázat). 2. táblázat: Bacillus subtilis törzsek tapadó aktivitása. A törzsek ragasztóaktivitást vizsgáltak Mikroorganizmus adhéziós indexe (MAI) (X±w) Tapadási szint B. subtilis 1719 1,53+0,08 Alacsony B. subtilis 1594 2,84±0,47 Átlag B. subtilis 1318 3,08±0,33 Átlag Kiderült, hogy a B.subtilis 1719-es törzs alacsony, a B.subtilis 1594-es és 1318-as törzse átlagos tapadóaktivitást mutatott. A probiotikus gyógyszerekre jelölt törzs antibiotikum-rezisztenciája szintén fontos tulajdonság, amely meghatározza az antibakteriális gyógyszerekkel együtt történő alkalmazásának lehetőségét. Ezzel kapcsolatban a B. subtilis törzsek antibiotikum-rezisztenciáját vizsgálták a klinikán leggyakrabban használt 14 antibiotikummal szemben. A B. subtilis 1719 törzs rezisztens volt gentamicinre, polimixinre és eritromicinre, míg a B. subtilis 1594 és B. subtilis 1318 törzs csak gentamicinre volt rezisztens. Érdekes volt kideríteni, hogy az antibiotikum-rezisztencia összefüggésben áll-e e tulajdonság genetikai meghatározójának kromoszómális lokalizációjával, vagy a plazma id jelenlétével. A B. subtilis törzsek plazmidhordozásának elemzése információkat szolgáltathat az antibiotikum-rezisztencia természetéről. Egy 0,9%-os agarózgélben elektroforézis után számos elemzett DNS-mintában (2., 4. és 6. sáv) a plazmid DNS méretének megfelelő frakciót azonosítottak (1. ábra). Azonban ezen márkák eloszlási mintája az agaróz gélben eltér a kontroll plazmid DNS-étől. Annak érdekében, hogy végül meghatározzuk, hogy a kapott DNS plazmid-e vagy kromoszómális fragmensek-e, az izolált anyagot a második típusú kisméretű endonukleázokkal (Pst I restrikciós enzim) kezeltük. A restrikciós termékek agarózgélben történő elemzésekor (1. ábra) a DNS kis molekulatömegű frakcióját izoláltuk. a vizsgált törzsekből extrahált, tiszta fragmentumok képződése nélkül szétesett, ami a plazmid DNS molekulák hiányára utalt a mintákban Rizs. 1. Törzsekből izolált DNS preparátumok elektroforézis adatai Az elnevezés magyarázata Nyilvánvalóan az azonosított antibiotikum-rezisztencia természetes rezisztenciára utal, és valószínűleg a kromoszómán lokalizált gének szabályozzák. In vivo kísérletekben a B subtilis 1719 törzs nem toxikusnak, nem toxikusnak és avirulensnek bizonyult. A doxiciklin-hidroklorid antibiotikum 5 mg-os dózisának beadása egereknek (14-16 g tömegű) lehetővé tette a dysbiosis olyan modelljének létrehozását, amelyben az állatok belei feltételesen patogén és patogén mikroflórával szennyezettek. A B subtilis 1719 tenyészet bejuttatása 0,5x10% 1,0x109 m/egér dózisban 7 napon keresztül hozzájárult a luminális ill. №1 №2 №3 №4 №5 №6 №7 №8 №9 № 10 №11 folyamatjelző A B törzs natív DNS-e sullish 1719 hasított DNS-e B-törzs sullish 1719-es törzs natív DNS-e sullish 1594-törzs hasított DNS-e B-törzs syllish 1594-B-törzs natív DNS-e sullish 1318-törzs hasított DNS-e B-törzs 1318-as NHL 534 hasított DNS-törzs B 8db 534 natív plazmid hasított pPETpB^et plazmid éjszakai mikroflóra, valamint az opportunista mikroorganizmusok eliminálása (3. táblázat). 3. táblázat Mikroflóra kísérleti dysbiosisban szenvedő egerekben és B. mutilum (Bs) 1719 tenyészetével korrekció után különböző dózisokban D Indikátor CFU/ml Ig-szám egerekben (1 g széklet LII 11 1 cm bél) (X±t) Kontroll (ép) Beadás után Bs adaggal végzett kezelés után (mikrobiális sejtek) doxiciklin 0,5x10" 1,0x109 Mikroorganizmusok i a A bél parietális rétege i a o i A bél parietális rétege h i "X A bél parietális rétege I * s s = S c 5 H e e e & S « ! s g a 3 C E. coli: 7+0,42 7+0,7 7,3+0,64 6,5+1,4 710,7 6,5+0,48 811,4 5+0,43 1ac\ % 94 100 64 84 100 100 100 hónap lac, % b 0 36 16 * 0 0 0 0 hemolizálás 0 0 0 0 0 0 0 0 1 R. vulgaris 0 0 710.26* 0 0 0 * 0 0 P. mirabilis * (1 0 6±0,42* 4,3І.7* 0* * 0 0 0 S. freundii 610.42* 0 0 0 0 0 0 0 Enterococcus spp. 7±<).21 7+0.64 6±0,59 5.5Ю.84 7±0,42 5.5+0.84 710.48 510.47 S. epidermidis o 0 0 0 0 0 0 0 S. aureus 5±0,21 0 4±1,2* 4+0,21* * 0 0 * 0 "II Staphylococcus spp. 4+0,43* * 0 0 410,48* 0 0 0 « Candida spp. 6i0,64 0 4,5±0,21 6+0,92* * 0 * 0 1 0* 0 Lactobacillus spp. ¡9510,42 7610,43 1 5510,4* 1 4+0,23* 910,44 7+0,34 1 910,21 7,5+0,84 1 Bifidobacterium spp. 2±0,1 2±0,1 1 2+0,1 2+0,1 1 2+0,1 2+0,1 2Yu.1 I 210,1 Clostridium spp. 5±0,22 3,1±0,21 1 510,21 4,5+0,24 1 5+0,59 1 4510,73 1 5M,21 1 4,65+0,24 Megjegyzés: *p<0,05 Hasonló eredményeket kaptunk kültenyésztett egerek vastagbélének feltételesen patogén parietális mikroflórájának szelektív dekontaminációja során a ciprofloxacin fluorokinolon gyógyszerrel, amely megőrzi a bifidobaktériumok és laktobacillusok számát. B. subnhs kultúrája 1719, hasonló dózisban adva a staphylococcusok számának szignifikáns (8,3-szoros) csökkenését eredményezte a probiotikus tenyészetet nem kapott kontrollcsoporthoz képest. staphylococcusok: baktériumok, és a tenyészet bevezetése \ 1719 megváltoztatta ezt az arányt az ép egerek szintjére A következő szakaszban a B ublin 1719 tenyészet hatását vizsgáltuk a bélhámsejtek (enterociták) tapadóképességére a doxiciklin-hidroklorid antibiotikum beadásával kiváltott kísérleti dysbiosis során. Egércsoportok kijelölése: Egércsoportok A Clean inről a kísérlet elején O Doxiciklin Ш Doxiciklin kiegyenlítés nélkül B Doxiciklin + B cYi 0,5 0 Doxiciklin h-BvcYi 1,0 □ Tiszta + VbYk 0,5 ■ Clean + V. eiYiL 0,5X109mk V diYiSi 1,0 x ] O"m k Rizs. 2. ábra: A 8.xy1oek 25 teszttörzs átlagos adhéziós indexe (AIA) az enterocitákon a kísérleti dysbiosis modelljében, és ha azt a B. subtilis 1719 tenyésztésével korrigálták. Amikor a diszbiózist korrigáltuk a B 8uNSh 1719 tenyészettel különböző dózisokban, az enterociták adhéziós képességének csökkenését figyelték meg (2. ábra). A B törzs hatásának tanulmányozására irányuló kísérletsorozatban. 1719 ezen bacilusok azon képességét, hogy megbízhatóan megváltoztatja a neutroftok metabolikus aktivitását az NBT teszt szerint (3. ábra) Állatcsoportok Rizs. 3. A B SllbtlllS 1719 tenyészet hatása a neutrofilek aktivitására (NST teszt) kísérleti dysbiosisban A luminol-függő kemilumineszcencia módszerével hasonló eredményeket kaptunk a neutrofilek funkcionális aktivitására vonatkozóan Legnagyobb szintemelkedése a doxiciklin beadása által kiváltott diszbiózis maximális manifesztációjának időszakában következett be. Az 1719. szubilla K)LT)ra hatása alatt a termelés csökkenése következik be IFNF-a A tenyészet ép állatokba történő bejuttatása nem befolyásolta a termelés szintjét Doxiciklin Egércsoportok Rizs. 4. A B. nukleinsav 1719 tenyészetének a tumornekrózis faktor a (TNF-a) termelésének szintjére gyakorolt hatásának vizsgálata kísérleti dysbiosis során A citokin felhalmozódás meghatározása (1L-1P, 1L-2, 1L-4, 1L-6, [L-10, 1H2, 1PL-y) Az egerek vérszérumának dinamikája a B^tsynHu 1719 tenyészet egyetlen injekciója után a következő mintákat tárta fel. A baktériumtenyészet bevezetését követő első 12 órában az Ib-1(5) kivételével a citokinek szintjében nem történt változás, a többi vizsgált citokin tartalom az ép állatokhoz képest csak 24 órával nőtt szignifikánsan. : I-1P (13,7-szer) és I-4 (14,6-szer), 1b-2 (5,2-szer), 1b-6 (7-szer), 1N0 (1,5-szer), 1N2 (5,2-szer), 1RI-y (9,7-szer) alkalommal). A probiotikus készítmények előállítása során fontos technológiai mutató a mikroorganizmusok termesztése során a biomassza hozama. Ez a mutató közvetlenül függ az alkalmazott tápközeg növekedési tulajdonságaitól. Minket Vizsgálták a Bisquid 1719 termesztési folyamatainak főbb jellemzőit hét különböző összetételű táptalajon. A kapott adatokat a 4. táblázat tartalmazza. Az 5-ös táptalaj, a SPAS-6 és a burgonya-glicerines tápközeg optikai sűrűségindexszel biztosította a törzs növekedését (OP), egyenlő sorrendben 0,24±0,01 (u=0,03 h"1), 0,22+0,01 (iKKOZZch1) és 0,3+0,01 (u=0,025 h"1). SPAS-2, SPAS-4, No. 9 adathordozókon a maximális OP érték 0,42+0,03 (u=0,067 h"1), 0,38+0,02 (u=0,05h"") és 0,58+0,03 (u) volt =0,037 h"1), a VK-2 táptalajon pedig 0,85±0,6 (u=0,068 h""). Ideje elérni a maximális biomassza koncentráció ezeken a táptalajokon től változott 9±0,7 óra (SPAS-2) és 18±1,3 óra (KGG). 4. táblázat: A B. nibiHn 1719 törzsek biomasszájának felhalmozódása különböző összetételű táptalajokon 20 órás tenyésztés közben (X±t) Közepes A ^-fázis átlagos ideje (h) Az exponenciális fázis időtartama (h) A biomassza-koncentráció elérésének ideje (h) Maximális biomassza hozam (optikai sűrűség) Növekedési sebesség (i) 5. sz. 2 8+0,67 13±1,05 0,24+0,01 0,03 9. sz. 2 11 ±0,8 13+0,99 0,5810,03 0,037 KGG 2 2±0,12 18+1,3 0,3+0,01 0,025 SPAS-2 2 4+0,36 9±0,7 0,42+0,03 0,067 SPAS-4 2 4±0,34 11+1,1 0,38±0,02 0,05 SPAS-6 1,5 3+0,23 18+1,6 0,22±0,01 0,033 VK-2 1,5 8±0,72 14±1,0 0,85+0,6 0,068 A maximális biomassza hozamot (BY) a VK-2 táptalajon mutatták ki növekedési sebesség mellett, és a legalacsonyabbat a SPAS-6 táptalajon növekedési sebesség mellett. Ismeretes, hogy a glükózt, a malátát, a szacharózt és a laktózt leggyakrabban szénhidrátforrásként használják a táptalajokban. Kísérleteink során magas biomassza hozamot kaptunk VK-2 táptalajon glükóz vagy szacharóz hozzáadásával, az OD indikátorok a Malátacukor használatakor a legmagasabb OP értéket a 9. számú táptalaj 0,695 ± 0,025 (u = 0,058 h "), azonban alacsonyabbnak bizonyult a VK-2 táptalajnál kapott értékeknél, ahol a laktóz, szacharóz és glükóz szénhidrátforrásként szerepelt. Megállapítottam, hogy a táptalaj összetétele nem befolyásolta a törzs antagonista tulajdonságait. A következő lépésben a B. lumbago 1719 törzs életképességének és antagonista tulajdonságainak stabilizálásának feltételeit értékelték liofilizált és folyékony állapotban, 5±3 °C hőmérsékleten (5. táblázat). Szacharózsárga stabilizátorral liofilizált állapotban a Lybly 1719 tenyészete legalább 4 évig (megfigyelési időszak) megőrizte életképességét és antagonista tulajdonságait. táblázatban Az 5. ábra bemutatja a 3 évig folyékony formában tárolt termények tulajdonságainak vizsgálatának eredményeit is, különféle stabilizátorok hozzáadásával. 5. táblázat: A B. mlinth 1719 törzs sejtjeinek életképessége különböző stabilizátorok jelenlétében tárolva Az 5. táblázat adataiból az következik, hogy az optimális folyadékstabilizátor egy 7%-os NaCl-oldat, amely lehetővé teszi az 1719-es törzs életképességének 2 évig tartó megőrzését A tenyészet tulajdonságainak 1 évig tartó megőrzése érdekében lehetőség van arra is, hogy használjon desztillált vizet és 10%-os glicerines oldatot Különféle stabilizátorok jelenlétében tárolva nem volt statisztikailag szignifikáns változás a B szubtihs 1719 törzs antagonista tulajdonságaiban. Az 1719-es törzs összehasonlító elemzése antagonista és adhezív hatás szempontjából tulajdonságai a kereskedelemben kapható probiotikus készítményekkel Sporobak- terin, Oroszország (B subtihs 534), Cereobiogen, Kína (B cereus DM423), Subtil, Vietnam (Biemis var vietnamí), Baktisubtil, Franciaország (B cereus IP5832), Nutrolin, India (B toagulans) (6. táblázat), engedélyezett a következő eredményeket kapja A B subi/lis 1719 legmagasabb szintű antagonista aktivitása az S flex neri 337 (30±3,0), S aureus „Nikiforov” (30+2,5), P uilgam 177 (30±2,0) P aeruginosa 9022 (27) törzsekkel szemben mutatkozott meg. ±1,5) és E coli 212 (0157 H7) (30±1,5) Ennél a törzsnél valamivel gyengébb antagonizmust mutattunk ki az Ecoh 1882 (26±1,2), Saw eus 25423 (21± 1,5), S szonett 170 (20±1,5) teszttenyészetekkel. 2.0), 5 aureus „Phillipov” (20±1.5), Kevésbé szignifikáns növekedési retardációt észleltünk a Saurem FDA 209P (15±1,5), S aureus 29213 (15±3,0), P mirabilis 24a (12±1,2) teszttenyészeteknél. A vizsgált probiotikus tenyészetek közül a legközelebbi, de az 1719-es törzshöz képest gyengébb antagonista hatású törzs volt. Az 534 "indiai*" törzs B koaguláns gyenge antagonistának bizonyult, ebből a szempontból gyengébb a kísérletben használt összes törzsnél. Az adhéziós tulajdonságok összehasonlítása azt mutatta, hogy általában a kereskedelmi forgalomban kapható készítmények törzseinek átlagos tapadási szintje volt, az IAM 3,08 és 3,8 között volt, kivéve az „indiai” törzset (IAM = 5,36 ± 0,56 a B szubtllis 1719 törzsnél, ez a mutató megfordult a legalacsonyabb (IAM = 1,53 ± 0,08) 6. táblázat: A B. mlinth 1719 törzs antagonista aktivitásának összehasonlító jellemzői és a kereskedelmi forgalomban lévő probiotikus készítmények tenyészetei a kísérletben A teszttörzsek növekedésgátlási zónái (mm) (X+t) A vizsgált Bacillus o G-- vi Pi s, 3 s n yi s törzsek. o sch< с bu S ГЛ (Ч О сч 5 Vi S.aureus 25423 Л", aureus «Никифоров» S 0 5 <=; s 1 ÍÜ 5 1". пи rabil is 24а 0 г-- ¡с 1 о W4 о 3 о сч (Ч о ^ 5 § ^ сч ОС оо "с го ^ г» ■П" о сч Ñ V. subtihs No. 1719 Г-(cm "+1 N о с +1 о ГЛ ж +i t (Ч +i n 1П (N +1 о f, in +i С СЧ СЧ +¡ tehát + Pó о, сч) " +1 in сч in +i Г-- (N +Í vo p körülbelül Сч" + о с. B.subtihs 534 Sporobacterin (Oroszország) (-; SCh +1 CS o +1 o SCh O GL +1 O g +1 g o. +1 00 +i SCh (Ch) B. cereus DM423 Cereobiogen (Kína) SP +i h- (N o o<4 О +1 о СЧ +1 <4 in +1 О о (Чг +1 о о о о о с +1 B. cereus var. vietnamí Subtil (Vietnam) 1P + O o<4 + СЧ О о + (N о" +1 СЧ О, +i О о о + CI + о о О о о V. cereus IP 5832 Baktisubtil (Franciaország) Ш оо + in о О g- + о +1 (N in +i in о CN + g"- ■h- + t o + g" o o o o + g ■p +¡ o B. coagulans Nutrolin (India) s o O o + SCH "Í. O +1 p SCh o" -H (N O + o o o o o o Így az általunk izolált B. bubik 1719 törzs a vizsgált tulajdonságok tekintetében minőségi előnyökkel rendelkezik a kereskedelmi forgalomban kapható készítmények többi vizsgált tenyészetével szemben, ami lehetővé teszi, hogy ígéretesnek tartsuk egy új probiotikus készítmény kifejlesztésében való felhasználását. 1. Morfológiai és élettani-biokémiai tulajdonságok alapján az izolált törzseket B Raulym néven azonosítottuk. A B.mth/bx törzsek DNS-készítményeiben nem találtunk plazmidokat, ami nyilvánvalóan az antibiotikum-rezisztencia kromoszómális kontrolljára utal. 2. Fehér egerek diszbiózisának modelljét alkalmazva kimutattuk a B. thylish 1719 törzs probiotikus aktivitását, amely az opportunista és patogén mikroorganizmusok eliminációjában nyilvánult meg a normál mikroflóra minőségi és mennyiségi összetételének helyreállításával. 3. Optimális táptalaj a biomassza felhalmozásához törzstermesztés során Az 1719 egy BK-2 táptalaj, szénhidrátforrásként glükóz vagy szacharóz hozzáadásával. 4. Megállapítást nyert, hogy a B. lialisia 1719 törzs liofilizált állapotban szacharóz-zselatin stabilizátorral legalább 4 évig (megfigyelési időszak) megőrzi életképességét és antagonista aktivitását, 01. számú 7%-os oldattal stabilizált folyékony formában. - 2 év, és 1 év desztillált víz vagy 10%-os glicerin oldat jelenlétében. 5. A probiotikus és immunmoduláló aktivitással rendelkező, antagonisztikusan aktív, alacsony tapadású, plazmidmentes, nem toxikus B. naylisha 1719 törzs a GISC Állami Kultúragyűjteményben van letétbe helyezve. L.A. Tarasevics. 6. A V.zyysh 1719 (277) törzs biológiai tulajdonságai és alapvető technológiai jellemzői miatt ígéretesen alkalmazható új probiotikus készítmények kifejlesztésében. 1 Gataullin A G, Gaiderov A A Mihailova N A, Osipova I G, Romanen-ko E E E A BaaNi sub tills törzsek különböző eredetű biológiai tulajdonságai Co „A vakcina-szérum fejlesztés aktuális kérdései a 21. században” Perm 2003, 329-331. 2 Gataullin A G, Mikhaitova N A, Btinkova L P, Elkina S I, Gorobets OB, Gaiderov A A, Kalina NG Egerek béltraktusának parietális mikroflórájának vizsgálata differenciáldiagnosztikai táptalaj felhasználásával Gyűjtemény "Mikrobiológiai tápközegek és tesztrendszerek fejlesztése és szabványosítása" Makhachkala , 2003 48. o 3 Gataullin A G, Btinkova L P, Mikhaitova N A, Elkina S I, Gaiderov A A, Kalina N G, Gorobets O B A parietális mikroflóra összetételének változásai kísérleti dysbiosis során, mint a terápiás gyógyszerek makroorganizmusra gyakorolt hatásának indikátora Anapi Mechniivsky Institute Kharyv, 2003 , 4-5. szám, 123-124 4 Mikhailova N A, Blinkova L P, Elkina S I, Gataullin A G, Gorobets O B, Gaiderov A A, Kalina N G A dysbiosis mint a gyógyszerek mellékhatásainak szerves indikátora 1. üzenet Jelentésgyűjtemény „Funkcionális táplálkozás, élelmiszerbiztonság és emberek egészsége metropolis körülmények között M, 2003, 38-39 5 Mikhailova N A, Blinkova L P, Elkina S I, Gataullin A G, Gorobets O B, Gaiderov A A, Kalina N G A diszbiózis mint a gyógyszerek mellékhatásainak szerves indikátora 2. üzenet A II. Moszkvai Nemzetközi Kongresszus anyagai „Biotechnológiai állapot és fejlődési kilátások” Moszkva , 2003, 162. o 6 Gataullin AG, Blinkova LP, Mikhailova NA, Elkina SI, Gaiderov A A, Kalina N G, Gorobets O B A parietális mikroflóra összetételének változása, mint a gyógyszerkészítmények kísérleti dysbiosisban történő alkalmazásának hatékonyságának mutatója Analy Mechniyvsky Institute Kharyv, 2004 , 6. szám, 10-13 7 Gaiderov A A, Gataullin A G, Vasilyeva E A, Mikhailova N A, Osipova I G Probiotikus készítmények hatásának vizsgálata a nem specifikus immunitás makrofág kapcsolatára A „Probiogics, prebiotics, synbiotics andfunctional foods. Current state and prospects. Current state and prospects” című nemzetközi konferencia anyaggyűjteménye ” M, 2004, 21-22 8 Blinkova L P, Mikhailova N A, Elkina S I, Gataullin A G, Kalina N G, Tokarskaya M M A „Milife” és spóraprobiotikummal való kombinációinak hatása a fehér egerek rezisztenciájára kísérleti fertőzések során A „Probiotikumok, Prebiotikumok”, szinbiotikumok és funkcionális élelmiszerek Jelenlegi állapot és kilátások” M, 2004, 4041. 9 Blinkova L P, Mikhailova N A, Shmygaleva T P, Gataullin A G, Novikov V Yu, Shmygalev P A Sejtek és spórák tapadó tulajdonságai In subtilis A „Probiotikumok, prebiotikumok, szinbiotikumok és funkcionális élelmiszerek” nemzetközi konferencia anyaggyűjteménye Jelenlegi állapot és kilátások M, 2004, 41-42 M , 2004, 204-205 11 Gataullin A G, Mikhailova N A, Blinkova L P, Romanenko E E, Elkina S I, Gaiderov A A, Kalina N G Properties of izolált Bacillus subtilis törzsek és hatásuk a kísérleti állatok bélmikroflórájára Zh mik-robiol, 2004, No. 2, from 91 -94 12 Gataullin AG, Zinkin YuV, Vetoshkin AI, Godkov MA, Gaiderov A A, Kharitonova A V A B subtilis gyógyszer hatásának vizsgálata dysbiosisban kemilumineszcens elemzéssel A „8th International Putin School-Conference of Young Scientists” nemzetközi konferencia anyaggyűjteménye Pushchino, 2004, s 256 13 Blinkova L P, Mikhailova N A, Gorobets O B, Elkina S I, Gataullin A G Kalina N G, Gaiderov A A Biológiailag aktív gyógyszerek hatásának kísérleti vizsgálata a C albicans-on Advances in medical mycology, 2004, III. kötet, 48-49. 14 Gataullin A G, Mikhailova N A, Khvatov V B, Blinkova L P, Zinkin Yu V, Kharitonova A V A kemilumineszcens elemzés alkalmazása az anti- a B subtil gyógyszer bakteriális és gombaellenes hatása. Előrelépések az orvosi mikológiában, 2004, III. kötet. p.50-51. 15. Mikhailova N., Blinkova L. P.. Gataullin A.G. Bacillus subtihs probiotikus törzsek tenyésztési paramétereinek vizsgálata különböző táptalajokon. A III. Moszkvai Nemzetközi Kongresszus „Biotechnológia: állapot és fejlődési kilátások” anyagai. Moszkva, 2005, 124. o. 16. Gataullin A.G., Blinkova L.P., Mikhailova N.A. B. subtihs probiotikus törzsek biomasszájának felhalmozódása különböző összetételű tápközegekben. Ült. nemzetközi részvételű Összoroszországi tudományos konferencia anyagai: „Orvosi immunbiológiai készítmények a 21. században: fejlesztés, gyártás és alkalmazás” Ufa. 2005, 1.e. rész 134-136 Közzétéve: 2005. május 19. Nyomtatási kötet 1 p.l. Rendelési szám 615. Példányszám 100 példány. Nyomtatta: Sprint-Print LLC, Moszkva, st. Krasnobogatyrskaya, 92 tel.: 963-41-11, 964-31-39 -»« g.i» j» "-" Ж J IRODALMI ÁTTEKINTÉS 1. fejezet Mikrobiális antagonizmus – a diszbiotikus állapotok korrekciójára szolgáló bioterápiás gyógyszerek létrehozásának alapja 2. fejezet Spóraprobiotikumok és hatásaik a makroorganizmusra 2.1. A Bacillus nemzetségbe tartozó baktériumokból származó készítmények 2.2. Modern ötletek a Bacillus nemzetségbe tartozó baktériumokból származó probiotikumok terápiás és profilaktikus hatásának mechanizmusairól 2.3. Aerob spóraképző baktériumok által termelt biológiailag aktív anyagok 2.4. A Bacillus nemzetségbe tartozó baktériumok patogén tényezői 34 SAJÁT KUTATÁSOK 3. fejezet Tárgyak és kutatási módszerek 3.1. A kutatás tárgyai 3.2. Kutatási módszerek 43 3.2.1. Berendezések és technikák 4. fejezet Izolált törzsek jellemzői 4.1. A törzsek morfológiai és élettani-biokémiai tulajdonságainak vizsgálata 4.2. B. subtilis törzsek antagonista és adhéziós aktivitása in vitro kísérletekben 4.3. A B. subtilis törzsek antibiotikum rezisztenciájának és plazmid profiljának meghatározása 5. fejezet A B.subtilis 1719 törzs hatása a makroorganizmusra 5.1. A B. subtilis 1719 törzs toxicitásának, toxicitásának, virulenciájának és probiotikus aktivitásának vizsgálata in vivo kísérletekben 5.2. A B. subtilis 1719 törzs immunitási paraméterekre gyakorolt hatásának vizsgálata kísérleti diszbiózissal végzett in vivo kísérletekben 6. fejezet A B.subtilis 1719 törzs technológiai jellemzői, mint egy probiotikus készítmény alapja 6.1. Növekedési tulajdonságok értékelése különböző folyékony táptalajokon 6.2. A B. subtilis 1719 törzs életképességének és antagonista aktivitásának vizsgálata a tárolás során 7. fejezet A B.subtilis\l\9 törzs és néhány kereskedelmi forgalomban lévő probiotikus készítmény alapját képező törzsek tulajdonságainak összehasonlító jellemzői. KÖVETKEZTETÉS A probléma relevanciája Az orvosi mikrobiológia jelenlegi szakaszában új adatok jelentek meg, amelyek alátámasztják a szaprofita mikroflóra alkalmazását, amely életfolyamatai során biológiailag aktív anyagokat (BAS) képes termelni, amelyek elnyomják a kórokozó mikroorganizmusok szaporodását, a rosszindulatú daganatokat és normalizálják a különböző kóros, ill. biokémiai folyamatok az emberi szervezetben. Az elmúlt évtizedben a spóraképző baktériumok élő mikrobiális tenyészetén alapuló biológiai termékeket széles körben alkalmazták a gyomor-bél traktus betegségeinek megelőzésére és kezelésére. A Bacillus nemzetséghez tartozó baktériumok, a mikroorganizmusok egyik legváltozatosabb és legelterjedtebb csoportja, az emberi és állati exogén flóra fontos alkotóelemei. A Bacillus nemzetség ősidők óta felkeltette a kutatók figyelmét. A mikrobiológia, fiziológia, biokémia és bakteriális genetika területén felhalmozott ismeretek jelzik a Bacillus előnyeit, mint biológiailag aktív anyagok termelője: enzimek, antibiotikumok, rovarölő szerek. A különféle életkörülményekhez való magas alkalmazkodóképesség (oxigén jelenléte vagy hiánya, növekedés és fejlődés széles hőmérséklet-tartományban, különféle szerves vagy szervetlen vegyületek táplálékforrásként történő felhasználása stb.) hozzájárul a bacilusok terjedéséhez a talajban, vízben, levegőben, élelmiszerekben és a külső környezet egyéb tárgyaiban, valamint az emberek és állatok testében. Az anyagcsere-folyamatok sokfélesége, a genetikai és biokémiai variabilitás, a lítikus és emésztőenzimekkel szembeni rezisztencia indokként szolgált a bacilusok felhasználására az orvostudomány különböző területein. Az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszerügyi Hatósága a Bacillus subtilis-t a GRAS (általában biztonságosnak tekintett) státusszal jelölte meg – teljesen biztonságos organizmusként, ami előfeltétele e baktériumok gyógyszergyártásban való felhasználásának. A bacilusok aktivitása a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok széles körével szemben nyilvánul meg. Különféle enzimek és egyéb anyagok szintézisének köszönhetően szabályozzák és serkentik az emésztést, antiallergén és antitoxikus hatásúak. Bacillusok alkalmazásakor a makroorganizmus nem specifikus rezisztenciája jelentősen megnő. Ezek a mikroorganizmusok könnyen gyárthatók, eltarthatóak és ami a legfontosabb, környezetbarátak. Jelenleg a probiotikus gyógyszerek közé sorolják azokat a terápiás és profilaktikus, élő, nem patogén mikrobák alapú gyógyszereket, amelyek természetes adagolási móddal képesek a gazdaszervezet fiziológiai és biokémiai funkcióira kedvező hatást gyakorolni a mikrobiológiai állapot optimalizálása révén. A bacilusok közül a B. subtilis törzsei a legnagyobb érdeklődésre számot tartóak. A genetikai és élettani tulajdonságok ismeretében a második helyet foglalják el az E. coli után. A B. subtilis biotechnológiában rejlő nagy lehetőségét bizonyítja a törzs molekuláris genetikájával foglalkozó adatbank – SubtiList – létrehozása, amelybe a baktériumgenomra vonatkozó minden információ bekerül. A Bacillus nemzetséghez tartozó élő baktériumok alapján olyan probiotikus készítményeket hoztak létre, amelyek ártalmatlanok a makroorganizmusra, számos terápiás és profilaktikus hatást fejtenek ki, és környezetbarátak. A Bacillus nemzetséghez tartozó élő mikrobakultúrák emberi és haszonállatok gyomor-bélrendszeri betegségeinek kezelésére való felhasználásával kapcsolatos eredmények tudományos és gyakorlati jelentőséggel bírnak. Jelenleg a jól ismert probiotikus gyógyszereket széles körben alkalmazzák a gyakorlati egészségügyben: baktisubtil, sporobacterin, biosporin, baktisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin és mások. Ezeknek a gyógyszereknek a terápiás alkalmazási indikációit és terápiás hatékonyságát az előállításukhoz használt törzsek tulajdonságai korlátozzák. Meghatározó jelentőségű az antagonista hatás spektruma a patogén és opportunista mikroorganizmusokkal szemben, amelyek mikroökológiai zavarokat okoznak az emberi vagy állati szervezet különböző biotópjain. Emellett nem lehet figyelmen kívül hagyni a bacilusok biológiailag aktív anyagok (polipeptid antibiotikumok, enzimek stb.) termelésére való képességét és antibiotikum-rezisztenciáját. Egyrészt a diszbiotikus rendellenességek kialakulásában szerepet játszó mikroorganizmusok sokfélesége és kialakuló antibiotikum-rezisztenciája, másrészt a különböző B. subtilis törzsek bioszintetikus képességeinek variabilitása indokolttá teszi a megcélzott törzsek folyamatos monitorozását. probiotikus aktivitással és/vagy különféle biológiailag aktív anyagok termelői. A munka célja: Izolált B. subtilis törzsek biológiai tulajdonságainak tanulmányozása, valamint felhasználásuk lehetőségének értékelése eredeti spóraprobiotikum kifejlesztésére. Kutatási célok: 1. Tanulmányozza az izolált B. subtilis tenyészetek morfológiai, fiziológiai-biokémiai, antagonista, tapadó és egyéb tulajdonságait in vitro kísérletekben, és válassza ki a legígéretesebb törzset további kutatásokhoz. 2. In vivo kísérletekben értékelje a kiválasztott B. subtilis törzs probiotikus aktivitását. 3. Válassza ki a vizsgált B.subtilis törzs biomassza felhalmozására optimális táptalajt. 4. Határozza meg a kiválasztott B.subtilis törzs életképességét és antagonista aktivitását a tárolás során. 5. Hasonlítsa össze az eredeti B. subtilis törzs tulajdonságait a kereskedelmi forgalomban kapható probiotikus készítmények előállításához használt tenyészetekkel! Tudományos újdonság. Az izolált törzsek morfológiai, fiziológiai-biokémiai, genetikai és egyéb biológiai tulajdonságainak vizsgálata alapján egy plazmidmentes B. subtilis 1719 törzset választottunk ki, amely antagonizmust mutat különböző taxonómiai csoportok opportunista és patogén mikroorganizmusaival szemben, alacsony tapadóképességű. aktivitású, rezisztens a gentamicinnel, polimixinnel és eritromicinnel szemben. Kísérletileg alátámasztották a termelési technológia megalkotásának megközelítéseit, beleértve a B. subtilis 1719 törzs növekedési tulajdonságainak tanulmányozását eredeti táptalajokon, életképességének stabilizálásának feltételeit és antagonista aktivitását, mint egy új probiotikus gyógyszer előállításának állomásait. Találmányi kérelmet nyújtottak be (2005. április 19-i szám: 2005111301): „A Bacillus subtilis 1719 baktériumtörzs a kórokozó mikroorganizmusok elleni antagonista hatású biomassza, valamint proteolitikus, amilolitikus és lipolitikus enzimek termelője.” Gyakorlati jelentősége. Az izolált és azonosított B. subtilis 1719 törzset a GISC Állami Kultúrák Gyűjteményében helyeztük letétbe. J.I.A. Tarasevich 277. szám alatt, és ajánlható egy eredeti bioterápiás probiotikus gyógyszer előállítására szolgáló ipari technológia fejlesztéséhez. A védekezésre benyújtott főbb rendelkezések: 1. Az azonosított három baktériumtenyészet törzs morfológiai, fiziológiai, biokémiai és egyéb tulajdonságaiban megfelel a B. subtilis fajnak. Nem tartalmaznak plazmidokat, antagonista hatásúak a különböző taxonómiai csoportokhoz tartozó opportunista és patogén baktériumokkal szemben, alacsony vagy közepes adhéziós szinttel rendelkeznek. 2. A B.subtilis 1719 törzs probiotikus tulajdonságokkal rendelkezik, amely az opportunista és patogén mikroorganizmusok eliminációjában nyilvánul meg, a normál mikroflóra mennyiségi és minőségi összetételének helyreállításával kísérleti dysbiosisban, valamint immunmoduláló hatással van a makroorganizmusra. 3. Technológiai jellemzői alapján a B.subtilis 1719 törzs jelöltként ajánlható egy eredeti probiotikus gyógyszer előállítására. IRODALMI ÁTTEKINTÉS 1. Morfológiai és fiziológiai-biokémiai tulajdonságok alapján az izolált törzseket B. subtilisként azonosítottuk. A B. subtilis törzsek DNS-készítményeiben nem találtunk plazmidokat, ami nyilvánvalóan az antibiotikum-rezisztencia kromoszómális kontrolljára utal. 2. Fehér egerek diszbiózisának modelljével kimutattuk a B.subtilis 1719 törzs probiotikus aktivitását, amely az opportunista és patogén mikroorganizmusok eliminációjában nyilvánult meg a normál mikroflóra minőségi és mennyiségi összetételének helyreállításával. 3. A B. subtilis 1719 törzs tenyésztésekor a biomassza felhalmozására optimális táptalaj a VK-2 táptalaj, szénhidrátforrásként glükóz vagy szacharóz hozzáadásával. 4. Megállapítást nyert, hogy a B.subtilis 1719 törzs liofilizált állapotban szacharóz-zselatin stabilizátorral legalább 4 évig (megfigyelési időszak), 7%-os NaCl oldattal stabilizált folyékony formában megőrzi életképességét és antagonista aktivitását - 2 év, és 1 év desztillált víz vagy 10%-os glicerin oldat jelenlétében. 5. A probiotikus és immunmoduláló aktivitással rendelkező, antagonisztikusan aktív, alacsony tapadású, plazmidmentes, nem toxikus B.subtilis 1719 törzs a GISC Állami Kultúragyűjteményben van letétbe helyezve. J1.A. Tarasevics. 6. A B.subtilis 1719 (277) törzs biológiai tulajdonságai és alapvető technológiai jellemzői alapján ígéretes az új probiotikus készítmények fejlesztésében. KÖVETKEZTETÉS A modern biológia és orvostudomány felfedezései és eredményei lehetővé tették új biológiai termékek - probiotikumok - kifejlesztését és gyakorlatba ültetését. Ezek a gyógyszerek élő mikrobakultúrákon alapulnak. Ezeknek a gyógyszereknek a terápiás hatása a patogén és feltételesen patogén törzsek - kórokozók - elleni kifejezett mikrobiális antagonizmuson alapul. A kezelési folyamatban nem kevésbé fontos a probiotikumok immunmoduláló aktivitása. Az élő baktériumokból előállított gyógyszerek vitathatatlan előnyei a kémiai úton szintetizált gyógyszerekkel szemben az ártalmatlanságuk, az emberi szervezetre gyakorolt fiziológiai tulajdonságaik és az allergiás reakciók hiánya. A probiotikumok már most is vezető pozíciót foglalnak el a gyomor-bélrendszeri mikroflóra, az anyagcserezavarok korrekciójában, az antibakteriális, kemoterápia, hormon- és sugárterápia következményeinek kezelésében. A bakteriális transzlokáció jelenségének vizsgálata kimutatta, hogy a probiotikumok sikeresen helyettesíthetik az antibiotikumokat és a proteolitikus enzimeket a különféle sebészeti fertőzések megelőzésében és kezelésében. Az elmúlt évtizedben a spóraképző baktériumok élő mikrobiális tenyészetén alapuló biológiai termékeket széles körben alkalmazták a gyomor-bél traktus betegségeinek megelőzésére és kezelésére. Az anyagcsere-folyamatok sokfélesége, a genetikai és biokémiai variabilitás, a lítikus és emésztőenzimekkel szembeni rezisztencia indokként szolgált a bacilusok felhasználására az orvostudomány különböző területein. Ezek a mikroorganizmusok könnyen gyárthatók, stabilak a tárolás során, és ami a legfontosabb, környezetbarátak. A törzsek nagy aktivitása a teszttenyészetek egyik csoportjával szemben nem garantálja annak aktivitását másokkal szemben. Ebben a tekintetben a spóraprobiotikumok használata meghatározott terápiás célokra korlátozódik. A gennyes-szeptikus betegségek nozológiai formáinak változatossága és a diszbiotikus rendellenességek kialakulásához etiológiailag jelentős mikroorganizmusok sokfélesége meghatározza az alkalmazott biológiai termékkel szemben támasztott követelményeket. Ez arra ösztönzi a kutatókat, hogy folyamatosan szűrjék a kívánt tulajdonságokkal rendelkező antagonista törzseket. Az általunk vizsgált törzsek a B. subtilis képviselőire jellemző morfológiai és fiziológiai-biokémiai tulajdonságokkal rendelkeztek, és a különböző szubsztrátokat lebontó enzimek halmaza jellemezte őket. A szakirodalom szerint a B.subtilis kifejezett antagonista tulajdonságokkal rendelkezik a kórokozó mikroorganizmusok széles körével szemben, és magas enzimaktivitással rendelkezik, aminek köszönhetően normalizálják az emésztési folyamatokat, valamint antitoxikus és antiallergiás hatást fejtenek ki. A vizsgált B. subtilis törzsek antagonista aktivitásának széles skálája volt, alacsony (B. subtilis No. 1719) vagy közepes (B. subtilis No. 1594, B. subtilis No. 1318) adhéziós szinttel. Így az általunk vizsgált törzseket magas probiotikus aktivitás jellemezte. A biokémiai tulajdonságok vizsgálata azonban azt mutatta, hogy a B. subtilis 1719 törzs nagyobb enzimaktivitást mutat (proteáz, amiláz, lipáz), amely a vizsgált szubsztrátok legnagyobb hidrolízis zónájában expresszálódott. Ezenkívül a B. subtilis 1719 törzs alacsony szintű adhéziós aktivitása és nyilvánvalóan természetes antibiotikum-rezisztenciája, amelyet a kromoszóma szabályoz, arra enged következtetni, hogy ennek a tenyészetnek a további vizsgálata ígéretes. Véleményünk szerint a Bacillus nemzetségen alapuló gyógyszerek ipari előállításának bővítésének kilátásai nagyon jók. A bacilusok számos enzimet képesek kiválasztani a tápfolyadékba. Fontos ipari telephelyként szolgálnak az élelmiszerek, detergensek és orvosbiológiai anyagok előállításához használt proteolitikus és amilolitikus enzimek előállításához. Az elmúlt évtizedben részvételükkel számos új antibiotikum, bakteriális rovarirtó és egyéb biológiailag aktív anyag került elő. Annak ellenére, hogy a B. subtilis GRAS státuszú, az irodalomban izolált jelentések vannak patogenitási faktorok jelenlétéről egyes B. subtilis törzsekben. Jelezzük, hogy ez nem állandó jel, mivel az újravetés során eltűnik. Feltételezik, hogy a baktériumok patogén tulajdonságai a plazmidok jelenlétével függnek össze. Például Le N. és Anagnostopoulos S. 83 vizsgált alany 8 B. subtilis törzséből izolált plazmidokat. A plazmid DNS-t csak a B. subtilis toxigén törzseinek sejtjeiben határozták meg, és nem találták meg ugyanazon fajhoz tartozó más törzsek sejtjeiben, amelyek nem toxikusak. A toxigén törzsek plazmidjainak eliminációja elimináló szerek hatására a tenyészet szűrleteinek toxigén tulajdonságainak megszűnéséhez vezetett. A plazmidok genetikai szerepét azonban nem vizsgálták kellőképpen. Vizsgálataink során a három vizsgált B. subtilis törzs izolált DNS-preparátumában nem találtunk plazmidot. A bacilusok melegvérű állatok szervezetére gyakorolt hatását vizsgáló szerzők arra a következtetésre jutottak, hogy a B. subtilis törzsek teljesen ártalmatlanok az emberre és az állatokra. A makroorganizmusra való ártalmatlanság bizonyítéka az a kísérleti adat, hogy a parenterális beadást követően néhány napon belül a B.subtilis kiürül a szervezetből. Ezen növények terápiás hatásának mechanizmusait állatokon tanulmányozták. Jelenleg úgy gondolják, hogy a spóraprobiotikumok terápiás hatását számos tényező határozza meg, beleértve: a B. subtilis kultúrák által termelt bakteriocinokat, amelyek elnyomják a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusok növekedését; nagy aktivitású enzimek szintézise: proteázok, ribonukleázok, transzaminázok stb.; olyan anyagok előállítása, amelyek semlegesítik a bakteriális toxinokat. A kiválasztott törzs tulajdonságainak egereken végzett vizsgálata kimutatta, hogy avirulens, és nincs toxicitása vagy toxikus hatása. A probiotikumok makroorganizmusra gyakorolt pozitív hatásának tényezői a mikrobiális szintézis különféle termékei: aminosavak, polipeptid antibiotikumok, hidrolitikus enzimek és számos más, kisebb jelentőségű biológiailag aktív anyag. Ezért sürgős szükség van a Bacillus nemzetségbe tartozó mikroorganizmusok által termelt védőanyagok tanulmányozására, izolálására, valamint az ezeken alapuló orvosbiológiai gyógyszerek létrehozására. A gyomor-bél traktusban a bacilusok közvetlen antagonista hatása nyilvánul meg, amely túlnyomórészt szelektív a patogén és feltételesen patogén mikroorganizmusokkal szemben. Ugyanakkor a normál mikroflóra képviselőivel szembeni antagonizmus hiánya jellemzi őket. Vizsgálataink során a doxiciklin antibiotikum adásával kiváltott kísérleti dysbiosis korrekciója során a B. subtilis 1719 tenyésztése hozzájárult a bél mikroflóra összetételének és számának normalizálásához, valamint a feltételesen patogén mikroorganizmusok eliminációjához a bélrendszerben. parietális és luminális mikroflóra. Az irodalomból az következik, hogy a Bacillus nemzetség ipari törzsei alacsony adhéziós aktivitást mutatnak az eritrocitákhoz, és gyenge vagy mérsékelt adhéziós képességgel rendelkeznek a bélhámsejtekhez. A B. subtilis 534 és ZN törzsek több adhezint az enterocita receptorokhoz, a B. licheniformis törzs a kolonocitákhoz, azaz a bélsejtekhez. Úgy tűnik, hogy a különböző törzsek különböző bélsejtek receptoraihoz tapadnak. Tevékenységük a bél lumenében jelentkezik, és a kórokozó mikroorganizmusok ellen irányul anélkül, hogy antagonista hatást gyakorolna a normál mikroflóra képviselőire. Spóraprobiotikumok szedése során megvalósul az autoflóra helyreállításának lehetősége a különböző béllókuszokban, és 3-5 nap múlva megnő a laktobacillusok, bifidobaktériumok, E. coli stb. száma, majd visszaáll a normál szintre. A mikroorganizmusok enterocitákon való adhéziójával kapcsolatos vizsgálataink eredményei valószínűsítik azt az állítást, hogy a bélsejtek adhéziós képessége a normál mikroflóra mennyiségi és minőségi összetételétől függ. Disbiotikus körülmények között az enterociták felületén felnyílnak a receptorok, amelyekhez feltételesen patogén és patogén mikroorganizmusok kapcsolódnak, majd a dysbiosis korrigálása során a bélben a normál mikroflóra és a felületéhez tapadni képes enterocita receptorok száma kolonizálódik. az őshonos mikroorganizmusok száma csökken. Ismeretes, hogy a normál mikroflóra fontos kiváltó szerepet játszik az immunitás és a specifikus védőreakciók kialakulásának mechanizmusában a makroorganizmus posztnatális fejlődésében. A mikroflóra szerepe az immunválasz kialakulásában univerzális immunmoduláló tulajdonságainak köszönhető, amelyek közé tartozik az immunstimuláció és az immunszuppresszió. Megállapítást nyert, hogy a bakteriális lipopoliszacharidok (LPS) immunszabályozó hatást fejtenek ki az Ig A immunválaszra, és adjuvánsként játszanak szerepet. A mikroflóra biztosítja a nem specifikus és specifikus immunológiai reakciók komplexének kialakulását, adaptációs és védőmechanizmusokat képezve. Bármilyen magas is egy gyógyszer antimikrobiális aktivitása, meghatározó szerepe van a fertőző patológiás állapot megszüntetésében. Fontos feladatnak tűnik olyan gyógyszerek létrehozása, amelyek hatékonyak az antimikrobiális tulajdonságokban és serkentik az immunválaszt. Ezért számos tanulmány célja a probiotikus gyógyszerek hatásának tanulmányozása az emberek és állatok immunrendszerének különböző részein. Aerob bacillusok élő tenyészeteinek beadása jelentősen serkenti a szérum interferon és a Newcastle-betegség vírusa által in vitro in vitro indukált interferon in vivo termelését. Számos tanulmány kimutatta, hogy a probiotikus gyógyszerek immunmoduláló hatásúak, helyreállítják a patológia által károsodott immunállapotot, növelik az endogén interferon termelését, fokozzák a makrofág sejtek funkcionális aktivitását, növelik a vér leukociták - monociták és neutrofilek - fagocita aktivitását. Vizsgálataink kimutatták, hogy a B. subtilis 1719 tenyésztése a dysbiosis korrekciója során jelentősen megváltoztatta a neutrofilek metabolikus aktivitását, és nem okozott változást a neutrofilek funkcionális aktivitásában az őshonos mikroflóra normál állapotában. Ezenkívül azt találták, hogy a dysbiosis a TNF-a szintjének növekedésével járt, ami a makrofágok, limfociták, valamint a vékonybél endoteliális és epiteliális sejtjeinek kifejezett fagocita, citotoxikus, tapadó aktivitását jelezte. A proinflammatorikus citokin fokozott szekréciója dysbiosisban szenvedő egerekben valószínűleg az immunkompetens sejtek (T-limfociták, monociták/makrofágok) aktiválódását tükrözi. A B.subtilis 1719* tenyészet hatására a TNF-a termelés csökkenése volt megfigyelhető. A tenyészet ép állatokba való bejuttatása nem okozott változást a TNF-a termelés szintjében. Tekintettel arra, hogy a TNF-a a gyulladásos reakciók markere, arra a következtetésre jutottak, hogy a probiotikum fontos szerepet játszik az immunkompetens sejtek gyulladásgátló aktivitásának növelésében állatokban. A B. subtilis 1719 törzs hatására a citokintermelés dinamikájának tanulmányozására végzett vizsgálatok azt mutatták, hogy a tenyészetnek nincs hatása a citokinek termelésére a beadást követő első órákban, kivéve az IL-lp-t, amelynek mennyisége fokozatosan halmozódott fel. . A többi vizsgált citokinek (IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IFN-y) szintje szignifikánsan emelkedett a 12-24 órás intervallumban. Így az immunrendszer sejtjeinek modulálása és a citokinpotenciál változása lehet az egyik olyan mechanizmus, amelyen keresztül a B. subtilis 1719 tenyésztése hozzájárul a dysbiosis korrekciójához. A hazánkban és külföldön végzett tudományos kutatások eredményeinek elemzése azt mutatja, hogy a Bacillus nemzetséghez tartozó baktériumokat milyen mértékben használják fel a bakteriális biomasszából vagy metabolitjaikból származó termékek előállítására. A Bacillus nemzetséghez tartozó baktériumok ismert tenyésztési módszerei képezik az alapját számos baktérium- és enzimkészítmény előállításának technológiájának. . A B. subtilis 1719 tenyészet különböző folyékony táptalajokon végzett növekedési tulajdonságainak vizsgálatakor megállapították, hogy a biomassza maximális felhalmozódása érdekében a törzs tenyésztéséhez a legmegfelelőbb szubsztrátnak a BK-2 táptalaj tekinthető glükóz, ill. szacharóz Jelenleg a mikroorganizmusok termelőtenyészeteinek kiválasztásakor és jellemzésekor elsősorban a biológiai jellemzők alábbi mutatóit veszik figyelembe: az antagonista aktivitás spektruma és szintje, gyárthatóság, i.e. bio* tömeg gyors felhalmozódása, fagyasztva szárítással szembeni ellenállás, életképesség a tárolás során. Különös figyelmet fordítanak az emberi egészségre használt mikroorganizmusok biztonsági fokára vonatkozó kritériumokra. A B.subtilis 1719 mikrobiális sejtjeinek folyékony stabilizátorok jelenlétében tárolt életképességének felmérésére végzett vizsgálatok során kiderült, hogy az optimális stabilizátor a 7%-os NaCl-oldat volt, amely lehetővé tette a törzs életképességének és antagonista tulajdonságainak fenntartását. 2 év. A tenyészet tulajdonságainak 1,5 éves megőrzésére 10%-os glicerines oldatot, 1 év desztillált vizet lehet használni, és megállapították, hogy ezek a töltőanyagok nem gyakoroltak statisztikailag szignifikáns hatást a B antagonista tulajdonságaira. subtilis 1719 törzs. Meg kell jegyezni, hogy fontos tény a B. subtilis 1719 törzs azon képessége, hogy folyékony stabilizátorokban hosszú, 36 hónapos időtartamon át antagonista hatást képes fenntartani S.sonnei és S.aureus ellen. (megfigyelési időszak). A szacharóz-zselatin stabilizátorral végzett fagyasztva szárítás megőrizte a B. subtilis 1719 törzs életképességét és antagonista aktivitását 4 évig (megfigyelési időszak). Jelenleg a jól ismert probiotikus gyógyszereket széles körben használják a gyakorlati egészségügyben: baktisubtil, sporobacterin, biosporin, baktisporin, subalin, cereobiogen, enterogermin és mások. A B. subtilis 1719 törzs összehasonlító vizsgálata antagonista és adhezív aktivitásra a következő probiotikus készítmények kereskedelmi tenyészeteivel: Sporobacterin, Oroszország (B. subtilis 534), Cereobiogen, Kína (B. cereus DM423), Subtil, Vietnam (B. cereus var vietnami), Baktisubtil, Franciaország (B. cereus IP5832), Nutrolin, India (B.coagulans) kimutatták, hogy az izolált törzs eredeti, és egy új probiotikus gyógyszer beszerzésekor termelési törzsként ajánlható. Így fiziológiai és biokémiai tulajdonságait tekintve a B. subtilis 1719 törzs egyértelműen megkülönböztethető egyéni jellemzőkkel rendelkezik, amelyek a GISC elnevezett tenyészetgyűjteményében letétbe helyezve szerepelnek a tenyészútlevélben. J.I.A. Tarasevics. Ezen túlmenően, az izolált B. subtilis 1719 törzs domináns helyzete az antagonista aktivitás tekintetében azt jelzi, hogy ennek a tenyészetnek a lehetőségét lehet felhasználni egy azon alapuló probiotikus készítmény kifejlesztésére. 1. Ashmarin I.P., Vorobjov A.A. Statisztikai módszerek a mikrobiológiai kutatásban. Medizd, 1962, 180 p. 2. Baibakov V.I., Karikh T.L., Borukaeva L.A. és mások: JCR egerek bélmikroflórájának és általános állapotának normalizálása bifidobaktérium-koncentrátum hatására.//Antibiotikumok és kemoterápia. 1997. - T. 42., 3. sz. - P. 20-24. 3. Baida G.E., Budarina Zh.I. A Bacillus cereus hemolizin II génjének elsődleges szerkezete és elemzése // 2 Rev. hegyek tudományos konf. azt mondják Scientists, Pushchino, április 23-25. 1997: Absztrakt. jelentés Pushchino. - 1997 - 45-46. 4. Baida G.E., Kuzmin N.P. Az Escherichia coliba klónozott Bacillus cereus HLY-III génje egy új pórusképző hemolizint kódol. konf. dedikált akadémikus emlékére A.A. Baeva: Jelentéskivonatok, Moszkva, 1996. május 20-22. M. - 1996. - P. 108, 291. 5. Baranovsky A.Yu., Kondrashina E.A. Diszbakteriózis és bélrendszeri dysbiosis // Szentpétervár. "Péter". -2000. -209 p. 6. Bakhanova E.M., Nikolaev S.M., Nikolaeva I.G. és társai, Rast. erőforrások. 2001. T. 37. sz. 1. 70-76. A Pentaphylloides fruticosa hajtásokból származó kivonat hatása a szulfadimetoxin és izoniazid által okozott kísérleti bélrendszeri diszbiózis lefolyására 7. Beljavszkaja V.A., Sorokulova I.B., Iljicsev A.A. Rekombináns bacillusokon alapuló immunpreparátumok tervezésének kilátásai // A biotechnológia új irányai: Proc. doc. YI Conf. RF, 1994. május 24-26. Pushchino. -1994.-S. 68. 8. Belyavskaya V.A., Sorokulova I.B., Masycheva V.A. Rekombináns probiotikumok: az orvostudományban és az állatgyógyászatban való felhasználás problémái és kilátásai // Diszbakteriózis és eubiotikumok: az All-Russian Scientific and Practical Conf. M. - 1996. - 7. o. 9. Belyavskaya V.A., Cherdyntseva N.V., Bondarenko V.M. és munkatársai A Subalin probiotikus gyógyszer rekombináns baktériumai által termelt interferon biológiai hatásai. Folyóirat mikrobiol., 2003, 2. szám, p. 102-109. 10. Belyaev E.I. A bél mikroflóráját normalizáló gyógyszerek javításának módjai / Rep. tudományos közlemények gyűjteménye: „Emberi autoflóra normál és kóros állapotokban. Keserű. - 1988. - P. 74-78. 11. Bilibin A.F. // Ter. boltív. -1967. 11. szám - 21-28. 12. Bilibin A.F. // Klin. Gyógyszer. 1970. - 2. sz. - P. 7-12. 13. Birger M.O. Mikrobiológiai és virológiai vizsgálati módszerek kézikönyve. A mikroorganizmusok antibiotikumokkal szembeni érzékenységének meghatározása. M.: Orvostudomány, 1982. - 180. o. 14. Blinkova L.P., Semenov S.A., Butova L.G. és mások: A Bacillus nemzetséghez tartozó frissen izolált baktériumtörzsek antagonisztikus aktivitása // JMEI. 1994. -N5.-S. 71-72. 15. Boyko N.V., Turyanitsa A.I., Popovich E.P., Vyunitskaya V.A. A Bacillus subtilis kultúrák antagonista hatása a Klebsiella / Microbiol nemzetséghez tartozó baktériumokra. és. 1989. - T. 51, N 1. - P. 87-91. 16. Boyko N.V., Lisetska M.V. Rozrobka probutiyuv vib1rkovostn: Protiskle-romna efektivshst dyakikh törzsek V. subtilis // Nauk. Vyun. Ungvár. un-tu. Ser. Bika. 1997. - N 4. - P. 194-198. 17. Bondarenko V.M., Petrovskaya V.G. A fertőző folyamat fejlődésének korai szakaszai és a normál mikroflóra kettős szerepe // Az Orosz Orvostudományi Akadémia közleménye. -M.- 1997.-N3.-C. 7-10. 18. Bondarenko V.M., Chuprinina R.P., Aladysheva Zh.I., Matsulevich T.V. Probiotikumok és terápiás hatásuk mechanizmusai // Kísérlet. és ék, gastroenterol. 2004. 3. szám P. 83-87. 19. Bochkareva N.G., Belogortsev Yu.A., Udalova E.V. és mások A Bacillus subtilis baktériumtörzs b-glükanázzal dúsított hidrolitikus enzimek komplexét termeli // Pat. N 2046141 Oroszország, C12 N 9/42, Publ. 10.20.95. - Bika. N 29. 20. Brilis V.I. A laktobacillusok tapadó tulajdonságai // Absztrakt. dis. Ph.D. édesem. Sci. Tartu. -1990. - 25 s. 21. Brilis V.I., Briline T.A., Lenzner H.P., Lenzner A.A. A laktobacillusok tapadó és hemagglutináló tulajdonságai. Folyóirat Microbiol., 9, 7578 (1982)]. 22. Vasziljeva V.L., Tatskaya V.N., Reznik S.R. Növényi és mikrobiális adjuvánsok alkalmazásával kapcsolatos tapasztalatok az immun ascites folyadékok előállításában laboratóriumi állatokban // Mzhrobyul. magazin 1974. T. 36., N 3. - P. 358-360. 23. Vershigora A.E. Az immunológia alapjai // Kijev: Vishcha iskola. 1975. - 319 p. 24. Vinnik Yu.S., Peryanova O.P., Yakimov S.V. et al., Gennyes sebek kezelésének módszere antagonistákkal / International Journal on immunorehabilitation. 1998. - N 4., 143. o. 25. Vinogradov E.Ya., Shichkina V.P. A B. mucilaginosus baktériumtörzs a nem specifikus immunitás biostimulátoraként borjakban // A.S. 1210452, Szovjetunió -1/00. Publ. 04/27/96. - Bika. N 12. 26. Vladimirov Yu.A., Sherstnev M.P. A tudomány és a technológia eredményei: Biophysics 1989; 24:172. 27. Vorobjov A.A., Abramov N.A., Bondarenko V.M., Shenderov B.A. A diszbakteriózis sürgős probléma az orvostudományban // Az Orvostudományi Akadémia közleménye. -1997. - No. 3. -P.3-9. 28. Vorobyov A.A., Nesvizhsky Yu.V., Zudenkova A.E., Budanova E.V. A vastagbél parietális és luminális mikroflórájának összehasonlító vizsgálata egereken végzett kísérletekben. Folyóirat mikrobiol., 1, 62-67 (2001). 29. Vorobjov A.A., Nesvizhsky Yu.V., Lipnitsky E.M. és mások Az emberi bél parietális mikroflórájának vizsgálata. Folyóirat mikrobiol., 2003, 1: 6063. 30. Vyunitskaya V.A., Boyko N.V., Spivak N.Ya., Ganova L.A./ Az új mikrobiotikumok néhány hatásmechanizmusa // A növénytermesztés és takarmánytermelés intenzifikációjának mikrobiológiai és biotechnológiai alapjai: Absztraktgyűjtemény Alma-Ata, 1990. - P 17. 31. Galaev Yu.V. Baktériumok patogén enzimei // M.: Orvostudomány. 1968. - 115 p. 32. Goncharova G.I., Semenova A.P., Lyannaya A.M. és munkatársai: A bélben lévő bifid flóra mennyiségi szintje és korrelatív kapcsolata az emberi egészséggel. // Antibiotikumok és emberek és állatok mikroökológiája. -1988.-P.118-123 33. Gorskaya E.M. A bél mikroökológiai rendellenességeinek kialakulásának mechanizmusai és korrekciójuk új megközelítései.//Értekezés tudományos formában 34. Gracheva N.M., Goncharova G.I. és mások Bakteriális biológiai készítmények alkalmazása a bélfertőzésben szenvedő betegek kezelésének gyakorlatában. A bélrendszeri dysbiosis diagnosztizálása és kezelése. Irányelvek. 1986, 23. o 35. Gracseva N.M., Gavrilov A.F., Avakov A.A. stb. - Új gyógyszerek. 1994, 1. szám, 3-12 36. Gracseva N.M., Gavrilov A.F., Szolovjova A.I. és mások Az új biosporin bakteriális gyógyszer hatékonysága az akut bélfertőzések kezelésében // Journal. mikrobiol. 1996. - N 1. - P. 75-77. 37. Grebneva A.J1., Myagkova L.P. Bél diszbakteriózis // Útmutató a gasztroenterológiához 3 kötetben M., 1996. -T.Z. -P.324-334 38. Grigorjeva T.M., Kuznyecova N.I., Shagov E.M. Bacillus thuringiensis 4KN törzs, amely a Colorado burgonyabogár ellen specifikus aktivitással rendelkező exotoxint szintetizál // Biotechnológia. 1994. - N 9-10. - P. 7-10. 39. Gulko M.A., Kazarinova JI.A., Pozdnyakova T.M. Módszer inozin előállítására // Pat. N 175583, C12P 19/32. Publ. 08/30/94. - Bika. N 16. 40. Demyanov A.V., Kotov A.Yu., Simbirtsev A.S., A citokinszintek tanulmányozásának diagnosztikai értéke a klinikai gyakorlatban. Journal of Cytokines and Inflammation, 2003, 2. évf., 3. szám, p. 20-35 41. Egorov N.S., Zarubina A.P., Vybornykh S.N., Landau N.S. Szintetikus * tápközeg a Bacillus nemzetséghez tartozó baktériumok szaporodásához // A Moszkvai Állami Egyetem közleménye. 1989. N 4.1. 52. o. 42. Ermakova L.M., Smirnova T.A., Alikhanyan S.I. et al., Crystal inclusions in a Bacillus subtilis mutáns megváltozott proteináz spektrummal // Dokl. A Szovjetunió Tudományos Akadémia. 1977. - T. 236., N 4. - P. 1001-1003. 43. Zsirkov I. N., Bratukhin I. I. A probiotikus RAS alkalmazása borjak diszbakteriózisának korrekciójára // Állatorvoslás. 1999. N 4. - 40-42. 44. Zgonnik V.V., Furtat I.M., Vasilevskaya I.A. és mások A lizintermelés folyamatát szennyező spóraképző baktériumok antagonisztikus tulajdonságai // Microbiol. és. 1993. -T.55, N4. - 53-58. 45. Zinkin V.Yu. Fotometriás NBT vizsgálat humán vér neutrofilekkel és klinikai és immunológiai jelentősége mozgásszervi traumán átesett betegeknél. A szerző absztraktja. dis. Ph.D. édesem. Tudományok - Moszkva, 2004. 46. Zudenkov A.E. A vastagbél parietális mucin immunkompetens sejtjeinek mikroflórája és összetétele normál és egyes kóros állapotokban. A szerző absztraktja. dis. Ph.D. édesem. Tudományok, Moszkva, 2001. 47. Ivanovsky A.A., Új probiotikus baktocellolaktin az állatok különféle patológiáihoz // Állatorvoslás. 1996 - N11. - 34-35. 48. Ivanovsky A.A., Vepreva N.S., Zimireva V.V., Lagunova O.P. Módszer probiotikumok előállítására állatgyógyászati célokra / RU Patent N 2084233, publ. 07.20.97. Bika. N 20. 49. Kandybin N.V., Ermolova V.P., Smirnov O.V. A bakterokulicid alkalmazásának eredményei és kilátásai // Sovrem. teljesítmény biotechnol.: Mater. 1 Konf. Észak-Kaukázus régió, Sztavropol, szept. 1995. Sztavropol. - 1995. - 14-15.o. 50. Kashirskaya N.Yu. A probiotikumok és prebiotikumok jelentősége a bél mikroflóra szabályozásában.//Russian Medical Journal. 2000. - T. 8., 13-14. - 572-575. 51. Kovalchuk L.V., Gankovskaya L.V., Rubakova E.I. Citokin rendszer. M., 2000. 52. Kozachko I.A., Vyunitskaya V.A., Berezhnizkaya T.G. és mások A 4. Bacillus nemzetséghez tartozó baktériumok ígéretes növények a növények betegségektől való megvédésére szolgáló biológiai eszközök létrehozására. // Mshrobyul. és. - 1995.- T.57, N 5. - P. 69-78. 53. Krasnogolovets V.N. Bél dysbiosis. M., 1979. -198 p. 54. Kudrjavcev V.A., Safronova J.I.A., Osadchaya A.I. és mások A Bacillus subtilis élő tenyészeteinek hatása a szervezet nem specifikus rezisztenciájára // Microbiol. és. 1996 - T.58, N 2. - P. 46-53. 55. Kuznetsova N.I., Smirnova T.A., Shamshina T.N. és mások Bacillus thuringiensis törzse, mérgező a házilegyekre // Biotechnológia. 1995. -N3-4.-S. 11-14. 56. Lapchinskaya A.V., Shenderov B.A. A cefalexin és egyes immunmodulátorok által okozott dysbacteriosis korrekciója.//A mikrobiális ökológia orvosi vonatkozásai. M., 1991. -70-79 57. Lenzner A.A., Lenzner H.T., Michelsaar M.E. et al. Laktoflóra és kolonizációs rezisztencia.//Antibiotikumok és méz. biotechnológia. -1987. -32. -3. -VAL VEL. 173-180. 58. Lescsenko V.M. Visceralis candidiasis klinikája, diagnosztizálása és kezelése. Irányelvek. M., 19871. 59. Lisetska M.V. A Bacillus subtilis1b törzs és a Klebsiella rhinoscleromatis antagonista aktivitásának kísérleti vizsgálata // Nauk. Vyun. Ungvár. un-tu. Ser. Bika. 1997. - N 4. - P. 207-212 60. Lopatina T.K. et al. Az eubiotikus gyógyszerek immunmoduláló hatása* // Az Orosz Orvostudományi Akadémia közleménye. M., „Orvostudomány”. -1997. 3. sz. -P.30-34 61. Lukin A.A. Antibiotikumképződés és sporuláció plazmid- és plazmidmentes mikroorganizmusokban // Pushchino. 1978. - 25-28. 62. Mazankova JI.H., Mikhailova N.A., Kurokhtina I.S. és mások.A baktisporin egy új probiotikum a gyermekek akut bélfertőzésének kezelésére // Man and Medicine: Proc. jelentés V. Orosz Nemzeti Kongresszus, Moszkva, 1997. április 8-12. - M. - 199. o. 63. Mazankova L.N., Vaulina O.V. Új gyógyszerek a diszbiotikus rendellenességek korrekciójára.//Gyermekorvos. 2000. 3. sz. - P. 51-53. 64. Maniatis T., French E., Sambrook J. A génsebészet módszerei. Molekuláris klónozás, 1984. 65. Markov I. I., Zsdanov I. P., Markov A. I. Bacillus subtilis MZh-6 törzs Mycobacterium tuberculosis antagonista // Pat. N 2120992, C 12N 1/20. - Publ. 10.27.98.-Bul.N30. 68. Mikshis N.I., Shevchenko O.V., Eremin S.A. et al., Population heterogeneity of Bacillus anthracis strains II Dep. a VINITI-nél 98.06.04. Szaratov. -1998.-7 p. 69. Mitrokhin S.D. // Antibiotikumok és kemoterápia. 1991. - 8. sz. - P.46 - 50. 70. Mitrokhin S.D. A normál humán mikroflóra metabolitjai a vastagbél dysbiosis expressz diagnosztikájában és kezelésében: Téziskivonat. Dr. med. Sciences, M., 1998. 37 p. 71. Mitrokhin S.D., Ardatskaya M.D., Nikushkin E.V., Ivanikov I.O. és mások - M., 1997. 45 p. A bélrendszeri diszbakteriózis (dysbiosis) átfogó diagnosztikája, kezelése és megelőzése a belső betegségek klinikájában (Irányelvek). 72. Mitrokhin S.D., Shenderov B.A. A patkányok vastagbelének mikrobiális ökológiájában bekövetkezett változások mikrobiológiai és biokémiai mutatói a rifampicin hatására. Antibiotikumok és kemoterápia - 1999, T. 34 No. 6 (482-4). 73. Molchanov O.JL, Poznyak A.JI. A biosporin alkalmazása a bakteriális vaginosis komplex terápiájában // Proc. Dokl: Modern technológiák a fertőző betegségek diagnosztizálására és terápiájára. St. P. - 1999, 187. o. 74. Muzychenko JI.A., Senatorova V.N., Alkhovskaya JI.JI. és mások Mikroorganizmusok fejlődésének morfometriai elemzése / Biotechnológia. 1990. - N 3. - P. 3-6. 75. Müller G., Litz P., Munch G. Növényi eredetű élelmiszerek mikrobiológiája// M.: B.I..- 1977.- P.343 347 76. Nikitenko V.I. Bakteriális gyógyszer gyulladás megelőzésére és kezelésére. égési folyamatok és allergiás betegségek // Nemzetközi alkalmazás. N 89/09607, WO, publ. 1989.10.19. 77. Nikitenko V.I. Gyógyszerek helyett baktériumok // Tudomány a Szovjetunióban. - 1991. - N 4. -S. 116-121. 78. Nikitenko V.I. Bacillus subtilis baktériumtörzs, amelyet diathesis, dysbacteriosis és bakteriális fertőzések kezelésére szánt tejtermékek előállítására használnak // A.S. N 1648975, S.U. közzétéve: 05.15. 91. 79. Nikitenko V.I., Nikitenko I.K. Bacillus pulvifaciens baktériumtörzs, amelyet állatok bakteriális fertőzései elleni terápiás és profilaktikus gyógyszer előállítására használnak // A.S. N 1723117, S.U. publ. 12. 1992. 80. Nikitenko V.I., Nikitenko I.K. Gyulladáscsökkentő folyamatok és allergiás betegségek megelőzésére és kezelésére szolgáló gyógyszer előállítására használt Bacillus subtilis baktériumtörzs // A.S. N 1723116, S.U. publ. 12. 1992. 81. Nikitenko L.I., Nikitenko V.I. Bacillus sp. baktériumtörzs. a diszbakteriózis és allergia elleni terápiás és profilaktikus gyógyszer összetevője // A.S. N 1710575, S.U. - publik. 5. 1992. 82. Nyikitenko V.I., Gorbunova N.N., Zhigailov A.V. A Sporobacterin egy új gyógyszer a diszbakteriózis és a gennyes-gyulladásos folyamatok kezelésére // Diszbakteriózis és eubiotikumok: Jelentések absztraktjai All-Russian. tudományos-gyakorlati konf. -M.- 1996.-S. 26. 83. Nikolicheva T.A., Tarakanov B.V., Golinkevich E.K., Komkova E.E. Változások a malacok emésztőrendszerének biocenózisában, ha a Bacillus micilaginosis szerepel az étrendben // Bulletin. Összoroszországi Fizikai Kutatóintézet, Haszonállatok Biokémiája és Táplálkozása. 1989.-N 2. - P. 31-35. 84. Obukhova O.V., Soboleva N.N. Az eloszlási faktor jelenlétéről szaprofita spórabaktériumok tenyészeteiben // Journal. mikrobiol. 1950. - N 12. P. 482-485. 85. Mikroorganizmusok antibakteriális gyógyszerekkel szembeni érzékenységének meghatározása. Módszertani ajánlások MUK 4.2.1980-04, 2004. 86. Osadchaya A.I., Kudryavtsev V.A., Safronova JI.A. A közepes savasság és a hőmérséklet hatása a Bacillus subtilis poliszacharidjainak növekedésére és kiválasztására süllyesztett tenyésztés során // Misrobyul. magazin 1998. - T. 60., N 4. - P. 25-32. 87. Osipova I.G. A colibacterin és a spóraeubiotikumok védő hatásának mechanizmusának néhány aspektusa és az ellenük való védekezés új módszerei. // Szerzői absztrakt. PhD disszertáció biológiából - M., 1997. - 25 p. 88. Osipova I.G., Sorokulova I.B., Tereshkina N.V., Grigorieva JI.B. Tanulmány a Bacillus nemzetséghez tartozó baktériumok biztonságosságáról, amelyek egyes probiotikumok alapját képezik // Journal. mikrobiol. 1998. - N 6. - P. 68-70. 89. Osipova I.G., Mikhailova N.A., Sorokulova I.G., Vasilyeva E.A., Gaiderov A.A. Spóra probiotikumok. Folyóirat mikrobiol. - 2003. 3. sz. Val vel. 113-119. 90. Osterman L.D. Fehérjék és nukleinsavak vizsgálati módszerei. 1981. 91. Panin A.N., Serykh N.I., Malik E.V. és mások A probiotikus terápia hatékonyságának növelése malacoknál / Állatgyógyászat, 1996. - N 3. - 17. o. 92. Panchishina M.V., Oleinik S.F. Bél dysbiosis. Kijev, 1983 93. Parshina S.N., Imshenetsky A.A., Nesterova N.G. és mások. A Bacillus segesh baktériumtörzs trombolitikus hatású proteolitikus enzimeket termel // A. C. N 1615177, C 12N 1/20. Megjelent: 90. 12. 23. - Bulletin N 4. 1988. 94. Perth S. D. A mikroorganizmusok és sejtek tenyésztésének alapjai. M. Mir, 1978, 332 pp. 95. Petrov L.N., Verbitskaya N.B., Vakhitov T.Ya. A dysbiosis kezelésére és megelőzésére szolgáló gyógyszerek tervezése az emberi endo-ökológiával kapcsolatos elképzelések alapján // Rus. és. HIV/AIDS és kapcsolódó probléma 1997.- T. 1, N 1. P. 161-162. 96. Petrovskaya V.G., Marko O.P. Az emberi mikroflóra normál és kóros állapotokban. M.: Orvostudomány. -1976. -217 C. 97. Poberiy I.A., Kharechko A.T., Sadovoy N.V., Litusov N.V. Új komplex eubiotikus „bioszporin” gyermekeknek és felnőtteknek / Bashkortostan Healthcare. 1998. -N 1. - P. 97-99. 98. Pogosyan G.P., Nadirova A.B., Kaliev A.B., Karabaev M.K. A pCLl plazmid és a Bacillus sp. 62 II Molekuláris genetika, mikrobiol. és virológia. 1999. - N 1. - P. 37-38. 99. Podberezny V.V., Parikov V.A. Tápközeg szimbionta baktériumok Bacillus pulvifaciens vagy Bacillus subtilis tenyésztéséhez - probiotikum termelő // RU Patent No. 2100029, publ. 12/27/97. Közlöny 36. sz. 100. Podberezny V.V., Polyantsev N.I., Ropaeva L.V. A Bacillus subtilis termelő törzseinek termesztése sajtsavóban // Állatorvoslás - 1996.-N 1.-S. 21-29. 101. Podoprigora G.I. A kolonizációs rezisztencia immun- és nem specifikus mechanizmusai//Antibiotikumok és kolonizációs rezisztencia/Az Összoroszországi Antibiotikumkutató Intézet kupacai - M. -1990. - X1X kiadás. -VAL VEL. 15-25. 102. Polkhovsky V.A., Bulanov P.A. A Bacillus cereus aminosav-dekarboxilázairól //Mikrobiológia. 1968. - T. 37., N 4. - P. 600-604. 103. Pospelova V.V., Gracheva N.M., Antonova L.V. et al. Biológiai mikrobiális készítmények, adagolási formáik és alkalmazási területeik // Új gyógyszerek: Express information. -1990. -Vol. 5. - 1-8.o. 104. Pospelova V.V., Rakhimova N.G., Khaleneva M.P. és mások A mikrobiális biológiai termékek új alkalmazási területei az emberi szervezet bakteriocenózisának korrekciójára.//Immunobiol. gyógyszerek. M. -1989. -VAL VEL. 142-152. 105. Reznik S.R. Módszer állatok vírusos és bakteriális betegségeinek kezelésére és megelőzésére // SU, A.s. N 1311243, publ. 1982. 106. Reznik S.R., Sorokulova I.B., Vyunitskaya V.A. és mások Megelőző biológiai termék sporolact // Patent N 2035186. RU. - A 61 K 35/66, publ. 95/05/20, közlöny. N 14. 107. Reznik S.R., Shust I.I. Borjak hematológiai és citokémiai paraméterei, amikor a Bacteria-SL gyógyszert kapják // Mezőgazdasági állatok biokémiája és élelmiszerprogram: Proc. jelentés Összszövetségi szimpózium -Kijev, 1989. 25. o. 108. Reshedko G.K., Stetsyuk O.U. A mikroorganizmusok érzékenységének meghatározásának jellemzői korong-diffúziós módszerrel. A klinikai mikrobiológia modern módszerei, 1. szám Szmolenszk, 2003. 109. Ryapis JI.A., Lipnitsky A.V. A bakteriális patogenitás mikrobiológiai és populációgenetikai vonatkozásai // Journal. mikrobiol. 1998. - N 6. P. 109-112. 110. Savitskaya K.I. A gyomor-bél traktus mikroökológiájának zavarai és krónikus bélbetegségek // Terra medica. - 1998. N 2. - 13-15. 111. Svechnikova E.B., Maksyutova L.F., Khunafin S.N. et al., A bactisporin alkalmazásának tapasztalatai termikus sérülésben szenvedő gyermekek komplex kezelésében // Proc. Dokl: Modern technológiák a fertőző betegségek diagnosztizálására és terápiájára. St. P. - 1999 - 268. o. 112. Sinev M.A., Budarina Zh.I., Gavrilenko I.V. et al., A Bacillus cereus hemolizin II létezésének bizonyítása: a hemolizin II genetikai determinánsának klónozása // Molek. biol. 1993. - T. 27., N 6. - P. 1218-1229. 113. Slabospitskaya A.T., Krymovskaya S.S., Reznik S.R. A biológiai termékekbe való beépítésre ígéretes bacillusok enzimaktivitása // Microbiol. és. 1990. - N2. - P. 9-14. 114. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vasilevskaya I.A. A spóraképző aerob baktériumok biológiailag aktív anyagok termelői. - Kijev, 1982 - 280 p. 116. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vasilevskaya I.A. Spóraképző aerob baktériumok - biológiailag aktív anyagok termelői // Kijev. Naukova Duma.- 1983.- 278 p. 117. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. és mások A tünetmentes bakterémia előfordulásának egyes mechanizmusairól // Microbiol. magazin 1988 -T. 50, N6.-S. 56-59. 118. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. és mások Gennyes-szeptikus szülés utáni betegségek kezelésének módszere élő tenyészetek szuszpenziójával // A. p. N 1398868 S.U. - A 61 K 35/74. - publik. 88.05.30., közlöny. N 20. 119. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. és mások Biosporin gyógyszer humán gyomor-bélrendszeri betegségek megelőzésére és kezelésére // A. o. N 1722502. S.U. - A 61 K. 39/02, publ. 03/30/92. 120. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B., Vyunitskaya V.A. A melegvérű állatok mikroflórájának korrekciójára szolgáló bakteriális készítmények létrehozásának és felhasználásának ellentmondásos kérdései // Microbiol. magazin 1992. - T.54, N 6.- P. 82-92. 121. Smirnov V.V., Reznik S.R., Vyunitskaya V.A. és munkatársai Modern ötletek a Bacillus II Microbiol nemzetségbe tartozó baktériumokból származó probiotikumok terápiás és profilaktikus hatásának mechanizmusairól. folyóirat - 1993. - 55, - 4. sz. P. 92-112 122. Smirnov V.V., Osadchaya A.I., Kudrjavcev V.A., Safronova JI.A. A Bacillus subtilis növekedése és sporulációja különböző levegőztetési körülmények között // Microbiol. magazin 1993. - T. 55., N 3. - P. 38-44. 123. Smirnov V.V., Reznik S.R., Sorokulova I.B. és mások Megelőző biológiai termék szubalin // Patent N 2035185, RU. A 61 K 35/66, publ. 95/05/20, közlöny. N 14. 124. Smirnov V.V., Sorokulova I.B., Osipova I.G. Biológiai termék szubtikol fertőző betegségek megelőzésére és kezelésére // Patent N 2129432. -A. 61 K 35/74. - Bika. N 12, publ. 04/27/99. 125. Szmirnov V.V., Reva O.N., Vyunitskaya V.A. A bacillusok antagonista hatásának matematikai modelljének létrehozása és gyakorlati alkalmazása probiotikumok tervezésében // Mshrobyulopchnyi zhurn. 1995. -T. 64, N 5. -S. 661-667. 126. Smirnov V.V., Kosyuk I.V. A Bacillus nemzetséghez tartozó baktériumok tapadó tulajdonságai - drobiotikus összetevők // Mshrobyulopchnyi zhurnal. 1997. - T. 69., N 6. - P. 36-43. 127. Sorokulova I.B. A Bacillus nemzetséghez tartozó baktériumok felhasználásának kilátásai új biológiai termékek tervezésére // Antibiotikumok és kemoterápia. -1996. T.41, N 10. - 13-15. 128. Sorokulova I.B. A bio-sporin és más bacillusokon alapuló kereskedelmi készítmények biológiai tulajdonságainak összehasonlító vizsgálata // Mshrobyu-lopchny folyóirat. 1997. - T. 69., N 6. - P. 43-49. 129. Sorokulova I.B. A bacilusokból származó probiotikumok hatása a makrofágok funkcionális aktivitására / Antibiotikumok és kemoterápia. 1998. - T. 43., N 2. - P. 20-23. 130. Storozhuk P.G., Bykov I.M., Storozhuk A.P. A fehérjetáplálkozás és az enzimpótló terápia patogenetikai orientációja a test immunhiányos állapotaiban // International Journal on immunorehabilitation. 1998. - N 10., 110-115. 131. Tabolin V.A., Belmer S.V., Gasilina T.V. és mások A bélrendszeri diszbiózis racionális terápiája gyermekeknél. Irányelvek. M., 1998. -11 p. 132. Topchy M.P. A Bacillus subtilis élő kultúráiból származó gyógyszerek alkalmazása borjak diszbakteriózisára: Tézis kivonata. dis. Ph.D. biol. Sci. Minszk, 1997. -21 p. 133. Trishina N.V. A bél dysbiosis kialakulása és az antiendotoxin immunitás állapota közötti kapcsolat. A szerző absztraktja. dis. Ph.D. édesem. Sci. -Moszkva, 2003., 24 p. 134. Tanár I.Ya. Makrofágok az immunrendszerben. M 1978; 175.). 135. Fazylova A.A. Klinikai és immunológiai indoklás a sporobacterin és a bactisporin alkalmazására kisgyermekek bélrendszeri dysbiosisában // Szerző. tud. dis. Ufa. - 1998. - 24 p. 136. Harwood K. Bacillus. Genetika és biotechnológia. M., 1992. - 52. o. 137. Kharchenko S.N., Reznik S.R., Litvin V.P. Módszer a takarmánypenész elleni küzdelemre // A.S. N 751382, Szovjetunió, publ. in B.I., 1980, 28. sz. 138. Khmel I.A., Chernin L.S., Levanova N.B. és mások Bacillus pumilus baktériumtörzs fitopatogén mikroorganizmusok elleni gyógyszer előállítására // Patents 1817875 Russia F01N 63/00, C12N 1/20. publ. 05.20.95. - Bika. N 14. 139. Chernyakova V.I., Bereza N.M., Selezneva S.I. A biosporin gyógyszer bakteriológiai és immunológiai hatékonysága nem specifikus fekélyes vastagbélgyulladásban // Mikrobiol.zh. 1993. - T. 55., N 3. - P. 63-67. 140. Chkhaidze I.G., V.G. Likhoded et al. Antitestek korrekciós hatása kísérleti dysbacteriosisban // Journal. Microbiol. 1998, 4. sz., 12-14. 141. Sharp R., Skaven M., Atkinson T. Bacillus: Genetika és biotechnológia. -M. 1992. - 398 p. 142. Sheveleva S.A. Probiotikumok, prebiotikumok és probiotikus termékek. A probléma jelenlegi állása // Táplálkozási kérdések. -1999. -T.68. -2. -32. o 143. Shenderov B. A. Orvosi mikrobiális ökológia és funkcionális táplálkozás. - M., 1998, T. I, P. 287. 144. Shenderov B.A. Kolonizációs rezisztencia és kemoterápiás és antibakteriális gyógyszerek. // Antibiotikumok és kolonizációs rezisztencia: Proceedings of the All-Russia Research Institute of Antibiotics. M. -1990. - X1X kiadás. -P.5-16. 145. Shenderov B.A., Manvelova M.A., Stepanchuk Yu.B., Skiba N.E. Probiotikumok és funkcionális táplálkozás // Antibiotikumok és kemoterápia. 1997. - T. 42., N 7. - P. 30-34. 146. Shenderov B.A. Orvosi mikrobiális ökológia és funkcionális táplálkozás. - M., 1998, T. II, P. 413 147. Yampolskaya T.A., Velikzhanina G.A., Zhdanova N.I. stb. L-fenilalanint termelő Bacillus subtilis baktériumtörzs: A.s. N 1693056, C 12 R 13/22, publ. 23.11.91. Bika. N 43. 148. Adami A., Sandrucci A., Cavazzoni V. Születésüktől fogva a probiotikus Bacillus coagulans adalékanyaggal táplált malacok: Állattenyésztéstechnikai és mikrobiológiai vonatkozások // Ann. mikrobiol. ed enzimol. 1997. - V. 47, N 1. - P. 139-149. 149. Azuma I., Sugimura C., Iton S. Bakteriális glikolipidek adjuváns aktivitása // Jap. J. Microbiol. 1977. - V. 20., N 5. - P. 465-468. 150. Benedettini J. et al. Immunmoduláció Bacillus subtilis spórákkal // Boll. 1., Sierote Milan. 1983.-V. 62.,N6.-P. 509-516. 151. Berkel H., Hadlok R. Lecithinase-und Toxinbildung durch Stamme der Gat-tung Bacillus // Lebensmittelhygiene. 1976. - V. 27., N 2. - p. 63-65. 152. Bernheimer A., Avigad L. A Bacillus subtilis által termelt citolitikus szer természete és tulajdonságai // J. Gen. Microb. - 1970. V. 61, N 2. - P. 361-369. 153. Blaznic J, Kumel I.M., Salamum B. et al. Sdravljenje kronicne granulomotozne bolezni z acidofilnem mlecom // Zdrav.Vesth. 1976. N 45. - P. 77-79. 154. Boer A.S., Priest F., Diderichsen B. A Bacillus licheniformis ipari felhasználásáról: Áttekintés // Appl. Microbiol és Biotechnol. 1994. - V. 40, N 5. - P. 595-598. 155. Buchell M.E., Smith J., Lynch H.C. Fiziológiai modell az eritromicin-termelés szabályozására szakaszos és ciklikus adagolású szakaszos tenyészetben // Mikrobiológia. -1997. V. 143, N 2. - P. 475-480. 156. Cipradi G. et al. A Bacillus subtilis-szal végzett kiegészítő kezelés hatásai az élelmiszer-allergiára // Chemioterapia. -1986. 5, N6. -P.408-410 157. Cromwick A.M., Birrer G.A., Gross R.A. A pH és a levegőztetés hatása a Bacillus licheniformis által okozott y-poli (glutaminsav) képződésre szabályozott szakaszos fermentor kultúrákban // Biotechnol. és Bioeng. 1996. - V. 50, N 2. - P. 222-227. 158. Danchin A., Glasser P., Kunst F. et al. Bacillus subtilis devoile ses genes // Biofutur. 1998. - N 174. - P. 14-17. 159. Devin K.M. A Bacillus subtilis genomprojekt: Célok és haladás // Trends Biotechnol. 1995. - V. 13., N 6. - P. 210-216. 160. Donovan W.P., Rupar M.J., Slanei A.C. Bacillus thuringiensis crytic, fehérje toxikus a szárnyasfélékre // Patent N 5378625 USA A61K 31/00. Publ. 01/03/95. 161. Dubos R. A mosodai termékekben használt enzimek toxikus faktorai // Tudomány. 1971. - N 3993. - P. 259-260. 162. Edlund C., Nord C.E. A kinolonok hatása a bélökológiára. Drugs, 1998, 58(2): 65-70. 163. Flindt M. Pulmonare betegség a Bacillus subtilis proteolitikus enzimet tartalmazó származékainak belélegzése miatt // Lancet. - 1969. V. 1, N 7607. - P. 1177-1181. 164. Fox M. A prokarióták törzsfejlődése // Tudomány. -1980. V. 209, N 4455. P. 457-463. 165. Fuller R. J. Appl Bacteriol 1989; 66:5:365-378. 166. Gastro G.R., Ferrero M.A., Abate C.M. et al. Alfa- és béta-amilázok egyidejű előállítása a Bacillus subtilis Mir-5 által szakaszos és folyamatos tenyészetben // Biotechnol. Lett. 1992. - V. 14., N 1. - P. 49-54. 167. Glatz B.A., Spira W.M., Goepfert J.M. A vaszkuláris permeabilitás megváltoztatása nyulakban a Bacillus cereus és rokon fajok tenyészet szűrletével // Infect, and Immunol. 1974. V. 10., N 2. - P. 299-303. 168. Guida V., Guida R. Importansia dos Bacillos esporulados aerobios em gastroenterologia e nutricao // Rev. Brasil. med. 1978. - V. 35., N 12. - P. 702707. 169. Haenel H., Bending J. Bélflóra az egészségben és a betegségekben // Progr. Élelmiszer és Táplálkozás sci.- 1975.-V. 21, N l.-P. 64. 170. Himanen J.-P., Pyhala L., Olander R.-M. et al. A Bacillus subtilis 168 lipo-teikoinsav és peptidoglikán-teikoinsav biológiai aktivitásai // J. Gen. Microbiol. - 1993.-V. 139,N 11.-P. 2659-2665. 171. Hirano Y., Matsudo M., Kameyama T. A Bacillus subtilis 168 korai csírázása során szintetizált fehérjék kétdimenziós poliakrilamid gélelektroforézise aktinomicin D jelenlétében // J. Basic Microbiol. 1991. - V. 31., N 6. - P. 429-436. 172. Humbert Florence Les probiotigues: un sujet d" aktualite // Bull. inf. Stat. exp. auicult. Ploufragan. 1988. - V. 28, No. 3. - P. 128-130. 173. Inouye S., Kondo S. Amicoumacin és SF-2370, mikrobiol eredetű farmakológiailag aktív szerek // Novel Microbial Prod. Med. és Agr. Amszterdam. -1989.-P. 179-193. 174. Johnson S. E. A Bacillus cereus halálos toxinja 1. A toxin, a hemolizin és a foszfolipáz kapcsolatai és természete // J. Bacterid. 1967. V. 94, N 2. - 306316. o. 175. Kakinuma A., Hori M., Isono M. Zsírsav meghatározása surfactinban és a surfactin teljes szerkezetének tisztázása // Agric. és Biol. Chem. 1969. - V. 33. - P. 973-976. 176. Kaneko J., Matsushima H. Kristályszerű szerkezet a Bacillus subtilis 168 sporulációs sejtjeiben // J. Electron. Microsc. - 1973. V. 22, N 2. - P. 217-219. 177. Kaneko J., Matsushima H. Kristályos zárványok sporuláló Bacillus subtilis sejtekben // In: Spores YI. Válassza ki. Pép. 6. Int. Spore Conf. Washington. - 1975. -P. 580-585. 178. Kitazawa H., Nomura M., Itoh T. J. Dairy Sci 1991; 74:7:2082 2088. 179. Kubo Kazuhiro. A Bacillus subtilis FERM BP-3418 tiszta tenyészete // Pat. N 5364738. USA. MKI A01N 25//00. - publik. 11/15/94. 180. Kudrja V.A., Simonenko L.A. Lúgos szerin proteináz és lektin izolálása a Bacillus subtilis tenyészfolyadékából // Appl. Microbiol és Biotechnol. -1994.-V. 41,N5.-P. 505-509. 181. Le H., Anagnostopoulos C. Természetben előforduló plazmidok kimutatása és jellemzése // Molec. Gen. Közönséges petymeg. 1977. - V. 157. - P. 167-174. 182. Legakis N.J., Papavassilion J. Vékonyréteg-kromatográfiás technika bakteriális foszfolipázok gyors kimutatására // J. Clin. Microbiol. - 1975. V.2, N 5. - P. 373-376. 183. Leviveld H.L.M., Bachmayer H., Boon B. et al. Biztonságos biotechnológia. 6. rész. Biztonsági értékelés a biotechnológiában használt mikroorganizmusok emberi egészségére vonatkozóan // Appl. Microbiol és Biotechnol. 1995. V. 43, N 3. - P. 389-393. 184. Lin S.-C., Carswell K.S., Sharma M.M., Georgiou G. A Bacillus licheniformis JF-2 lipopeptid biosurfactant folyamatos gyártása // Appl. Microbiol és Biotechnol. 1994. - V. 41., N 3. - P. 281-285. 185. Lovett P., Bramucci M. Plasmid DNA in bacillus // In: Microbiology-Washington. 1976. - P. 388-393. 186. Markham R., Wilkie B. A mosószer hatása az aeroszolos allergiás szenzibilizációra az Ön enzimeivel. subtilis // Int. Boltív. Allergia és Appl. Immunol. 1976.-V. 51, N 5. - P. 529-543. 187. Maruta Kiyoshi A bélpahogének kizárása a Bacillus subtilis C-3102-vel való folyamatos etetéssel és hatása a bélmikroflórára brojlerekben // Anim. Sci. és Technol. 1996. - V. 67., N 3. - P. 273-280. 188. Moszer I., Glaser P., Danchin A. SubtiList: A relációs adatbázis a Bacillus subtilis genomhoz // Mikrobiológia. 1995. - V. 141., N 2. - P. 261-268. 189. Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Jolken R.H., Manual of Clinical Microbiology, 7. kiadás, Washington D.C., ASM Press, 1999 190. Nozari-Renard J. Induction d 5, OInterferon par Bacillus subtilis // Ann. Microbiol. 1978. - V. 129a. - N 4. - P. 525-542. 191. Oh M.K., Kim B.G., Park S.H. A spóramutánsok jelentősége a Bacillus subtilis adagolt és folyamatos fermentációjában // Biotechnol. és Bioeng. 1995.-V. 47, N 6. - P. 696-702. 192. Payne Jewel M. A Bacillus thuringiensis Hist izolátumai aktív ayanista fonálférgek / Patent N 5151363, C12 N 1/20, A 01 N 63/00, appl. 90/07/27, közl. 09.29.92. 193. Pepys J., Hargreave F., Longbotton Y. A tüdő allergiás reakciói a Bacillus subtilis enzimekre // Lancet. 1969. - V. 1, N 44 - 7607. - P. 1181-1184. 194. Peterson W.L., Mackrowiak Ph.A., Barnett C.C. et al. Az emberi gyomor baktericid gátja: Hatásmechanizmusok, relatív antibakteriális aktivitás és étrendi hatások.//J. fertőzés Betegségek. -1989. -159 No. 5. -p.978-985. 195. Prasad S.S.V., Shethna G.J. A Bacillus thuringiensis fehérjeszerű kristályának biokémia biológiai aktivitásai // J. Sci. és Ind. Res. 1976. - V. 35., N 10. - P. 626-632. 196. Rocchietta I. A Bacillus subtilis alkalmazása a betegségek kezelésében/Minerva Med. -1969. -60. N3/4. -P. 117-123. 197. Rosenthal G.J., Corsini E. // Methods Immunotoxicol. 1995. V 1, P 327-343 198. Rychen G., Simoes Nunes C. Effets des flores lactigues des produits laitiers fermentes: Une base scientifigue pour l "etude des probiotiques microbiens dans l"espece porcine // Prod. anim. 1995. - V. 8., N 2. - P. 97-104. 199. Salminen Seppo A probiotikumok klinikai vonatkozásai //Ecol. egészség és Betegség.-1999.- 11.-N4.-P. 251-252 200. Shore N., Greene R., Kezeni H. Tüdődiffukció Bacillus subtilisnek kitett worcers-ben // Environm. Res. 1971. - V. 4., N 6. - P. 512-519. 201. Slein M., Logan G., Az Ön foszfolipázainak jellemzése. cereus és hatásaik a vörösvértestekre, csont- és vesesejtekre // J. Bacteriol. 1965. - V. 90, Nl.-P. 69-81. 202. Somerville H.J. A Bacillus thuringiensis inszekticid endotoxinja // In: Sem. etűd téma Prod, natur. et prot. növény. 1977. - P. 253-268. 203. Spira W., Goepfert J. A Bacillus cereus által termelt enterotoxin biológiai jellemzői // Can. J. Microbiol. 1975. - V. 21., N 8. - P. 1236-1246. 204. Stgard Henri Microbielle v kstfremmer til svin. Teori og prasksis/ Dan veterinaertidsskr. 1989. - V. 72., N 15. - P. 855-864. 205. Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi, Wang Xiaomin Wuhan daxue xuebao. Ziran kexue ban // J. Wuhan Univ. Natur. Sci. Szerk. 1996. - V. 42., N 4. - C. 516518. 206. Sumi H. A natto fiziológiai funkciója // J. Brew. Soc. Jap. 1990. - V. 85, N 8.-P. 518-524. 207. Tihole F. Fizioloski pomer backteriemije z geiunalo microflora // Zdravstv vestn 1982. - V. 51, N 1. P. 3-5. 208. Towalski Z., Rothman H. Enzyme technology //in: The Biotechnological Challenge. Cambridge University Press. Cambridge, 1986 - 37-76. 209. Tsuge Kenji, Ano Takashi, Shoda Makoto. A Bacillus subtilis YB8, a surfactin és a plipastatin B1 lipopeptidek társtermelőjének jellemzése //J. Gen. és Appl. Microbiol. 1995.- 41, N 6. P. 541-545. 210. Van der Waaij D. Az emésztőrendszer kolonizációs rezisztenciája: mechanizmus és klinikai következmények.//Nahrung. -1987. -31 5. sz. -507-524. 211. Vollaard E.J., Clasener H.A.L., Janssen J.H.M. Az Escherichia coli hozzájárulása a mikrobiális kolonizációs rezisztenciához.//.!, az Antimikrobiális kemoterápia. -1990.- 26. -411-418.oBevezetés Biológiai értekezés "Új probiotikumok létrehozására ígéretes Bacillus subtilis törzsek biológiai tulajdonságai" témában.
Következtetés Értekezés a "Mikrobiológia" témában, Gataullin, Airat Gafuanovics
Bibliográfia Biológiai disszertáció, a biológiai tudományok kandidátusa, Gataullin, Airat Gafuanovics, Moszkva
