Razlozi povećanja i smanjenja T-limfocita-pomagača (CD4). Zašto su limfociti u krvi sniženi, što to znači? Cd3 cd8 povećao citotoksične limfocite

Glavna zadaća T-limfocita je prepoznavanje stranih ili izmijenjenih vlastitih antigena kao dijela kompleksa s MHC molekulama. Ako se na površini njihovih stanica nalaze strane ili promijenjene molekule, T-limfocit započinje njihovo uništavanje.

Za razliku od B limfocita, T limfociti ne proizvode topive oblike molekula za prepoznavanje antigena. Štoviše, većina T-limfocita nije u stanju prepoznati i vezati topljive antigene.

Kako bi T-limfocit "usmjerio svoju pozornost na antigen", druge stanice moraju nekako "provući" antigen kroz sebe i izložiti ga na svojoj membrani u kombinaciji s MHC-I ili MHC-II. Ovo je fenomen prezentacije antigena T-limfocitu. Prepoznavanje takvog kompleksa od strane T-limfocita je dvostruko prepoznavanje, odnosno MHC restrikcija T-limfocita.

RECEPTOR T-LIMFOCITA KOJI PREPOZNAJE ANTIGEN

Receptori T-stanica koji prepoznaju antigene - TCR sastoje se od lanaca koji pripadaju superobitelji imunoglobulina (vidi sliku 5-1). Mjesto za prepoznavanje antigena TCR-a koje strši iznad površine stanice je heterodimer, tj. sastoji se od dva različita polipeptidna lanca. Poznate su dvije varijante TCR-a, koje se nazivaju αβTCR i γδTCR. Ove se varijante razlikuju po sastavu polipeptidnih lanaca mjesta za prepoznavanje antigena. Svaki T-limfocit izražava samo 1 varijantu receptora. αβT stanice otkrivene su ranije i detaljnije proučavane od γδT limfocita. S tim u vezi, strukturu receptora T-limfocita koji prepoznaje antigen prikladnije je opisati na primjeru αβTCR. Transmembranski locirani TCR kompleks sastoji se od 8 polipeptida

Riža. 6-1. Dijagram receptora T-stanica i srodnih molekula

lanaca (heterodimer α- i β-lanaca samog TCR-a, dva pomoćna ζ lanca, kao i jedan heterodimer ε/δ- i ε/γ-lanaca molekule CD3) (sl. 6-1).

. Transmembranski lanciα i β TCR. To su 2 polipeptidna lanca približno iste veličine -α (molekulska težina 40-60 kDa, kiseli glikoprotein) iβ (molekulska težina 40-50 kDa, neutralni ili bazični glikoprotein). Svaki od ovih lanaca sadrži 2 glikozilirane domene u izvanstaničnom dijelu receptora, hidrofobni (pozitivno nabijen zbog ostataka lizina i arginina) transmembranski dio i kratku (od 5-12 aminokiselinskih ostataka) citoplazmatsku regiju. Izvanstanični dijelovi obaju lanaca povezani su jednom disulfidnom vezom.

- V-regija. Vanjske ekstracelularne (distalne) domene obaju lanaca imaju varijabilan sastav aminokiselina. Oni su homologni V regiji molekula imunoglobulina i čine V regiju TCR. Na MHC-peptidni kompleks vežu se V-regije α- i β-lanca.

-C-područje. Proksimalne domene obaju lanaca homologne su konstantnim regijama imunoglobulina; to su C-regije TCR-a.

Kratka citoplazmatska regija (i α- i β-lanac) ne može samostalno osigurati prijenos signala u stanicu. Za to služi dodatnih 6 polipeptidnih lanaca: γ, δ, 2ε i 2ζ.

.CD3 kompleks. lanciγ, δ, ε međusobno tvore heterodimere.γε i δε (zajedničkim nazivom CD3 kompleks). Ovaj kompleks je potreban za izražavanjeα- i β-lanci, njihova stabilizacija i prijenos signala u stanicu. Ovaj kompleks sastoji se od izvanstaničnog, transmembranskog (negativno nabijenog i stoga elektrostatski povezanog s transmembranskim regijamaα- i β-lanci) i citoplazmatski dijelovi. Važno je ne brkati lance CD3 kompleksa sγ δ-lanci TCR dimera.

.ζ -Lanci međusobno povezani disulfidnim mostom. Većina ovih lanaca nalazi se u citoplazmi. ζ-lanci provode signal unutar stanice.

.ITAM sekvence. Citoplazmatske regije polipeptidnih lanacaγ, δ, ε i ζ sadrži 10 ITAM sekvenci (1 sekvenca u svakojγ-, ε- i δ-lanci i 3 - u svakom ζ-lancu), u interakciji s Fyn - citosolnom tirozin kinazom, čija aktivacija inicira početak biokemijskih reakcija za provođenje signala (vidi sliku 6-1).

Vezanje antigena uključuje ionske, vodikove, van der Waalsove i hidrofobne sile; konformacija receptora u ovom slučaju značajno se mijenja. Teoretski, svaki TCR može vezati oko 10 5 različitih antigena, ne samo srodnih po strukturi (križna reakcija), već i nehomolognih po strukturi. Međutim, u stvarnosti je polispecifičnost TCR-a ograničena na prepoznavanje samo nekoliko strukturno sličnih antigenih peptida. Strukturna osnova ovog fenomena je značajka istovremenog TCR prepoznavanja MHC-peptidnog kompleksa.

Koreceptorske molekule CD4 i CD8

Osim samog TCR-a, svaki zreli T-limfocit izražava jednu od takozvanih ko-receptorskih molekula, CD4 ili CD8, koje također stupaju u interakciju s MHC molekulama na APC-ima ili ciljnim stanicama. Svaki od njih ima povezanu citoplazmatsku regiju

s tirozin kinazom Lck, i vjerojatno doprinosi prijenosu signala u stanicu tijekom prepoznavanja antigena.

.CD4(β2-domena) molekule MHC-II (pripada superobitelji imunoglobulina, vidi sl. 5-1, b). CD4 ima molekularnu težinu od 55 kDa i 4 domene u izvanstaničnom dijelu. Kada se T-limfocit aktivira, jednu TCR molekulu "opslužuju" 2 CD4 molekule: vjerojatno dolazi do dimerizacije CD4 molekula.

.CD8 povezan s nepromjenljivim dijelom(α3-domena) molekule MHC-I (pripada superobitelji imunoglobulina, vidi sl. 5-1, a). CD8 - lančani heterodimerα i β, povezani disulfidnom vezom. U nekim slučajevima pronađen je dvolančani α-lanac homodimer koji također može djelovati s MHC-I. U izvanstaničnom dijelu svaki od lanaca ima jednu domenu sličnu imunoglobulinu.

T stanični receptorski geni

Geni α-, β-, γ- i δ-lanci (Sl. 6-2, također vidi Sl. 5-4) homologni su imunoglobulinskim genima i podliježu rekombinaciji DNA tijekom diferencijacije T-limfocita, što teoretski osigurava stvaranje oko 10 16 -10 18 varijanti receptora za vezanje antigena (u stvarnosti je ta raznolikost ograničena brojem limfocita u tijelu na 109).

.Geni α-lanca imaju ~54 V-segmenta, 61 J-segment i 1 C-segment.

.Geni β-lanca sadrže ~65 V-segmenata, 2 D-segmenta, 13 J-segmenata i 2 C-segmenta.

.δ-lanac gena. Između V- i J-segmenata α-lanca nalaze se geni za D-(3), J-(4) i C-(1) segmente δ-lancaγ δTCR. V segmenti δ lanca su "umiješani" među V segmente α lanca.

.γ-lanac gena γ δTCR imaju 2 C segmenta, 3 J segmenta prije prvog C segmenta i 2 J segmenta prije drugog C segmenta, 15 V segmenata.

Preuređenje gena

.Rekombinacija DNA događa se kada se spoje V-, D- i J-segmenti i katalizira je isti kompleks rekombinaza kao tijekom diferencijacije B-limfocita.

.Nakon preraspodjele VJ u genima α-lanca i VDJ u genima β-lanca, kao i nakon dodavanja nekodiranih N- i P-nukleotida u DNA

Riža. 6-2. Geni α- i β-lanaca receptora za prepoznavanje antigena ljudskih T-limfocita

RNA se transkribira. Povezivanje s C-segmentom i uklanjanje dodatnih (neiskorištenih) J-segmenata događa se tijekom spajanja primarnog prijepisa.

.Geni α-lanca mogu se opetovano preuređivati ​​kada su geni β-lanca već ispravno preuređeni i izraženi. Zato postoji neka mogućnost da jedna stanica nosi više od jedne TCR varijante.

.TCR geni ne podliježu somatskoj hipermutagenezi.

PRIJENOS SIGNALA OD RECEPTORA ZA PREPOZNAVANJE ANTIGENA LIMFOCITA

TCR i BCR imaju niz zajedničkih obrazaca registracije i prijenosa aktivacijskih signala u stanicu (vidi sliku 5-11).

. Grupiranje receptora. Za aktivaciju limfocita potrebno je grupiranje receptora za prepoznavanje antigena i koreceptora, tj. “unakrsno povezivanje” više receptora s jednim antigenom.

. Tirozin kinaze. Procesi fosforilacije/defosforilacije proteina na tirozinskom ostatku pod djelovanjem tirozin kinaza i tirozin fosfataza imaju značajnu ulogu u prijenosu signala,

što dovodi do aktivacije ili inaktivacije ovih proteina. Ti su procesi lako reverzibilni i "prikladni" za brze i fleksibilne stanične odgovore na vanjske signale.

. Src kinaze. ITAM-sekvence bogate tirozinom citoplazmatskih regija imunoreceptora fosforiliraju se pod djelovanjem nereceptorskih (citoplazmatskih) tirozin kinaza iz obitelji Src (Fyn, Blk, Lyn u B-limfocitima, Lck i Fyn u T-limfocitima).

. ZAP-70 kinaze(u T-limfocitima) ili Syk(u B-limfocitima), vežući se za fosforilirane ITAM sekvence, oni se aktiviraju i počinju fosforilirati adaptorske proteine: LAT (Linker za aktivaciju T stanica)(ZAP-70 kinaza), SLP-76 (ZAP-70 kinaza) ili SLP-65 (Syk kinaza).

. Adapterski proteini se regrutiraju fosfoinozitid-3-kinaza(PI3K). Ova kinaza zauzvrat aktivira serin/treonin protein kinazu Akt, uzrokujući povećanje biosinteze proteina, što potiče ubrzani rast stanica.

. Fosfolipaza Cγ (vidi sliku 4-8). Kinaze iz porodice Tec (Btk - u B-limfocitima, Itk - u T-limfocitima) vežu adaptorske proteine ​​i aktiviraju fosfolipazu Cγ (PLCγ ).

PLCγ cijepa fosfatidilinozitol difosfat (PIP 2) stanične membrane u inozitol-1,4,5-trifosfat (IP 3) i diacilglicerol

(DAG).

DAG ostaje u membrani i aktivira protein kinazu C (PKC), serin/treonin kinazu koja aktivira evolucijski "drevni" faktor transkripcije NFκB.

IP 3 veže se na svoj receptor u endoplazmatskom retikulumu i otpušta ione kalcija iz depoa u citosol.

Slobodni kalcij aktivira proteine ​​koji vežu kalcij - kalmodulin, koji regulira aktivnost niza drugih proteina, i kalcineurin, koji defosforilira i time aktivira nuklearni faktor aktiviranih T-limfocita NFAT (Nuklearni faktor aktiviranih T stanica).

. Ras i drugi mali G proteini u neaktivnom stanju, oni su povezani s GDP-om, ali adaptorski proteini zamjenjuju potonji s GTP-om, koji prevodi Ras u aktivno stanje.

Ras ima vlastitu aktivnost GTPaze i brzo odcjepljuje treći fosfat, čime se vraća u neaktivno stanje (samoinaktivacija).

U stanju kratkotrajne aktivacije Ras ima vremena aktivirati sljedeću kaskadu kinaza nazvanu MAPK (mitogenom aktivirana protein kinaza), koji u konačnici aktiviraju transkripcijski faktor AP-1 u staničnoj jezgri. Na sl. Slike 6-3 shematski predstavljaju glavne signalne putove s TCR-om. Aktivacijski signal se uključuje kada se TCR veže na ligand (MHC-peptidni kompleks) uz sudjelovanje ko-receptora (CD4 ili CD8) i kostimulatorne CD28 molekule. To dovodi do aktivacije Fyn i Lck kinaza. ITAM regije u citoplazmatskim dijelovima CD3 polipeptidnih lanaca označene su crvenom bojom. Prikazana je uloga Src-kinaza povezanih s receptorom u fosforilaciji proteina, kako receptora tako i signala. Pozornost privlači iznimno širok raspon učinaka Lck kinaze povezanih s koreceptorima; uloga Fyn kinaze je utvrđena s manje sigurnosti (odraženo u diskontinuiranom karakteru linija).

Riža. 6-3. Izvori i smjer pokretanja aktivacijskih signala tijekom stimulacije T-limfocita. Oznake: ZAP-70 (ζ -povezana protein kinaza, oni kažu masa 70 kDa) - p70 protein kinaza povezana sa ζ lancem; PLCγ (fosfolipaza Cγ ) - fosfolipaza C, izoforma γ; PI3K (fosfatidil inozitol 3-kinaza)- fosfatidilinozitol 3-kinaza; Lck, Fyn -tirozin kinaze; LAT, Grb, SLP, GADD, Vav - adaptorski proteini

Tirozin kinaza ZAP-70 igra ključnu ulogu u posredovanju između receptorskih kinaza i adaptorskih molekula i enzima. Aktivira (putem fosforilacije) adaptorske molekule SLP-76 i LAT, a potonji prenosi aktivacijski signal drugim adaptorskim proteinima GADD, GRB i aktivira γ-izoformu fosfolipaze C (PLCy). Do ove faze samo su čimbenici povezani sa staničnom membranom uključeni u prijenos signala. Važan doprinos aktivaciji signalnih putova daje kostimulacijska molekula CD28 koja svoje djelovanje ostvaruje preko pridružene lipidne kinaze PI3K. (fosfatidil inozitol 3-kinaza). Glavna meta PI3K kinaze je Vav faktor povezan s citoskeletom.

Kao rezultat stvaranja signala i njegovog prijenosa od T-staničnog receptora do jezgre, nastaju 3 transkripcijska faktora - NFAT, AP-1 i NF-kB, koji induciraju ekspresiju gena koji kontroliraju proces aktivacije T-limfocita. (Slika 6-4). Stvaranje NFAT-a dovodi do signalnog puta koji je neovisan o kostimulaciji, a koji se uključuje zbog aktivacije fosfolipaze C i ostvaruje se uz sudjelovanje iona

Riža. 6-4. Shema signalnih putova tijekom aktivacije T-stanica. NFAT (nuklearni faktor aktiviranih T stanica), AP-1 (aktivacijski protein-1), NF-κB (Nuklearni faktor oddo -gen B stanica)- transkripcijski faktori

Ca 2+. Ovaj put uzrokuje aktivaciju kalcineurina, koji, imajući aktivnost fosfataze, defosforilira citosolni faktor NFAT-P. Zbog toga NFAT-P stječe sposobnost migriranja u jezgru i vezanja za promotore aktivacijskih gena. Faktor AP-1 nastaje kao heterodimer iz proteina c-Fos i c-Jun, čije je stvaranje inducirano aktivacijom odgovarajućih gena pod utjecajem čimbenika koji nastaju implementacijom tri komponente MAP-a. kaskada. Ove putove uključuju kratki GTP-vezujući proteini Ras i Rac. Značajan doprinos provedbi MAP kaskade daju signali koji ovise o kostimulaciji putem molekule CD28. Poznato je da je treći transkripcijski faktor, NF-kB, glavni transkripcijski faktor urođenih imunoloških stanica. Aktivira se cijepanjem blokirajuće IkB podjedinice pomoću IKK kinaze, koja se aktivira u T stanicama tijekom transdukcije signala ovisne o izoformi protein kinaze C (PKC9). Glavni doprinos aktivaciji ovog signalnog puta daju kostimulacijski signali iz CD28. Formirani transkripcijski faktori, nakon što su došli u kontakt s promotorskim regijama gena, induciraju njihovu ekspresiju. Ekspresija gena posebno je važna za početne faze odgovora T stanica na stimulaciju. IL2 i IL2R, koji uzrokuje proizvodnju faktora rasta T-stanica IL-2 i ekspresiju njegovog receptora visokog afiniteta na T-limfocitima. Kao rezultat toga, IL-2 djeluje kao autokrini faktor rasta, koji određuje proliferativnu ekspanziju klonova T-stanica uključenih u reakciju na antigen.

DIFERENCIJACIJA T-LIMFOCITA

Identifikacija stadija u razvoju T-limfocita temelji se na stanju receptorskih V-gena i ekspresije TCR, kao i koreceptora i drugih membranskih molekula. Shema diferencijacije T-limfocita (slika 6-5) slična je gornjoj shemi za razvoj B-limfocita (vidi sliku 5-13). Prikazane su ključne karakteristike fenotipa i faktora rasta T stanica u razvoju. Prihvaćene oznake faza razvoja T-stanica određene su ekspresijom ko-receptora: DN (od dvostruko negativan, CD4CD8) - dvostruki negativ, DP (od dvostruko pozitivan, CD4 + CD8 +) - dvostruko pozitivno, SP (od jednostruko pozitivno, CD4 + CD8 - i CD4CD8 +) - jedan pozitivan. Podjela DNtimocita na stupnjeve DN1, DN2, DN3 i DN4 temelji se na prirodi

Riža. 6-5. Razvoj T-limfocita

ekspresiju molekula CD44 i CD25. Ostali simboli: SCF (od Faktor matičnih stanica- faktor matične stanice, lo (low; index mark) - niska razina ekspresije. Faze preuređivanja: D-J - preliminarna faza, veza segmenata D i J (samo u genima TCR β- i δ-lanca, vidi sl. 6-2), V-DJ - završna faza, veza V-gena zametne linije s kombiniranim DJ segmentom .

.Timociti se razlikuju od zajedničke stanice preteče koja, izvan timusa, eksprimira takve membranske markere kao što su CD7, CD2, CD34 i citoplazmatski oblik CD3.

.Progenitorske stanice predane diferencijaciji u T-limfocite migriraju iz koštane srži u subkapsularnu zonu korteksa timusa, gdje polako proliferiraju otprilike tjedan dana. Na timocitima se pojavljuju nove membranske molekule CD44 i CD25.

.Zatim se stanice pomaknu duboko u korteks timusa, molekule CD44 i CD25 nestaju s njihove membrane. U ovoj fazi dolazi do preuređivanja gena β-, γ- i δ-lanci TCR. Ako geniγ- i δ-lanci su produktivni, tj. bez pomaka okvira, preuređuju ranije od gena β-lanca, tada se limfocit dalje diferencira kaoγ δT. Inače, β-lanac se eksprimira na membrani u kompleksu s pTα (nepromjenjivi surogat lanac koji zamjenjuje pravi α-lanac u ovoj fazi) i CD3. Služi

signal za zaustavljanje preraspodjele gena γ- i δ-lanca. Stanice počinju proliferirati i izražavaju i CD4 i CD8 - dvostruki pozitivan timociti. Istodobno se nakuplja masa stanica s već pripremljenim β-lancem, ali s još nepreuređenim genima α-lanca, što doprinosi raznolikosti αβ-heterodimera.

.U sljedećoj fazi stanice se prestaju dijeliti i počinju preuređivati ​​Vα gene nekoliko puta unutar 3-4 dana. Preuređivanje gena α-lanca dovodi do ireverzibilne delecije δ-lokusa smještenog između segmenata gena α-lanca.

.TCR se izražava sa svakom novom verzijom α-lanca i odabirom (selekcijom) timocita prema snazi ​​vezanja na MHC-peptidni kompleks na membranama epitelnih stanica timusa.

Pozitivna selekcija: timociti koji ne vežu nijedan od dostupnih MHC-peptidnih kompleksa umiru. Kao rezultat pozitivne selekcije, oko 90% timocita umire u timusu.

Negativna selekcija eliminira klonove timocita koji vežu MHC-peptidne komplekse s previsokim afinitetom. Negativna selekcija eliminira 10 do 70% pozitivno odabranih stanica.

Timociti koji su vezali bilo koji od MHC-peptidnih kompleksa s ispravnim, tj. srednje jakosti, afiniteta, primaju signal za preživljavanje i nastavljaju diferencijaciju.

.Na kratko vrijeme obje molekule koreceptora nestaju s membrane timocita, a zatim dolazi do ekspresije jedne od njih: timociti koji prepoznaju peptid u kompleksu s MHC-I eksprimiraju koreceptor CD8, a s MHC-II CD4 koreceptor. Sukladno tome, dvije vrste T-limfocita ulaze na periferiju (u omjeru oko 2:1): CD8 + i CD4 +, čije su funkcije u nadolazećim imunološkim odgovorima različite.

-CD8+ T stanice igraju ulogu citotoksičnih T-limfocita (CTL) - oni prepoznaju i izravno ubijaju stanice modificirane virusom, tumorom i drugim "promijenjenim" stanicama (slika 6-6).

-CD4 + T stanice. Funkcionalna specijalizacija CD4 + T-limfocita je raznolikija. Značajan dio CD4 + T-limfocita tijekom razvoja imunološkog odgovora postaje T-pomoćnik (pomagač), u interakciji s B-limfocitima, T-limfocitima i drugim stanicama tijekom

Riža. 6-6. Mehanizam djelovanja citotoksičnog T-limfocita na ciljnu stanicu. U T-killeru, kao odgovor na porast koncentracije Ca 2+, granule s perforinom (ljubičasti ovali) i granzimi (žuti kružići) stapaju se sa staničnom membranom. Oslobođeni perforin ugrađuje se u membranu ciljne stanice, nakon čega se stvaraju pore propusne za granzime, vodu i ione. Kao rezultat, ciljna stanica se lizira

izravnim kontaktom ili putem topivih faktora (citokina). U određenim slučajevima mogu razviti CD4 + CTL: posebno se takvi T-limfociti nalaze u značajnim količinama u koži pacijenata s Lyellovim sindromom.

Subpopulacije T-pomagača

Od kraja 80-ih godina XX. stoljeća uobičajeno je izolirati 2 subpopulacije T-pomagača (ovisno o tome koji skup citokina proizvode) - Th1 i Th2. Posljednjih godina, spektar subpopulacija CD4+ T stanica nastavio se širiti. Pronađene su subpopulacije kao što su Th17, T-regulator, Tr1, Th3, Tfh itd.

Glavne subpopulacije CD4+ T stanica:

. Th0- CD4 + T-limfociti u ranim fazama razvoja imunološkog odgovora, oni proizvode samo IL-2 (mitogen za sve limfocite).

.Th1- diferencirana subpopulacija CD4 + T-limfocita, specijalizirana za proizvodnju IFN-aγ, TNF β i IL-2. Ova subpopulacija regulira mnoge stanične imunološke odgovore, uključujući odgođenu preosjetljivost (DTH) i CTL aktivaciju. Osim toga, Th1 stimulira proizvodnju opsonizirajućih IgG protutijela od strane B-limfocita, koji pokreću kaskadu aktivacije komplementa. Razvoj prekomjerne upale s naknadnim oštećenjem tkiva izravno je povezan s aktivnošću subpopulacije Th1.

.Th2- diferencirana subpopulacija CD4 + T-limfocita, specijalizirana za proizvodnju IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 i IL-13. Ova subpopulacija sudjeluje u aktivaciji B-limfocita i doprinosi lučenju velike količine antitijela različitih klasa, posebice IgE. Osim toga, Th2 subpopulacija je uključena u aktivaciju eozinofila i razvoj alergijskih reakcija.

.Th17- subpopulacija CD4 + T-limfocita, specijalizirana za stvaranje IL-17. Ove stanice provode antifungalnu i antimikrobnu zaštitu epitelnih i mukoznih barijera, a imaju i ključnu ulogu u patologiji autoimunih bolesti.

.T-regulatorima- CD4 + T-limfociti koji potiskuju aktivnost drugih stanica imunološkog sustava lučenjem imunosupresivnih citokina - IL-10 (inhibitor aktivnosti makrofaga i Th1-stanica) i TGFβ - inhibitor proliferacije limfocita. Inhibicijski učinak može se postići i izravnom međustaničnom interakcijom, budući da membrana nekih T-regulatora eksprimira induktore apoptoze aktiviranih i "iscrpljenih" limfocita - FasL (Fas-ligand). Postoji nekoliko populacija CD4 + regulatornih T-limfocita: prirodne (Treg), sazrijevaju u timusu (CD4 + CD25 +, izražavaju transkripcijski faktor Foxp3) i inducirane - lokalizirane uglavnom u sluznicama probavnog trakta i prebačene u stvaranje TGFβ (Th3) ili IL-10 (Tr1). Normalno funkcioniranje T-regulatora neophodno je za održavanje homeostaze imunološkog sustava i sprječavanje razvoja autoimunih bolesti.

.Dodatne pomoćne populacije. Nedavno je opisana uvijek nova populacija CD4 + T-limfocita, klase

klasificirani prema vrsti citokina koji pretežno proizvode. Dakle, kako se pokazalo, jedna od najvažnijih populacija su Tfh (od engleskog. folikularni pomagač- folikularni pomagač). Ova populacija CD4+ T-limfocita pretežno je smještena u limfoidnim folikulima i djeluje kao pomagač B-limfocitima kroz proizvodnju IL-21, uzrokujući njihovo sazrijevanje i terminalnu diferencijaciju u plazma stanice. Osim IL-21, Tfh također može proizvesti IL-6 i IL-10, koji su neophodni za diferencijaciju B-limfocita. Kršenje funkcija ove populacije dovodi do razvoja autoimunih bolesti ili imunodeficijencije. Druga "nova" populacija je Th9 - proizvođači IL-9. Čini se da su to Th2 koji su se prebacili na izlučivanje IL-9, koji je sposoban izazvati proliferaciju T-pomoćnih stanica u odsutnosti antigene stimulacije, kao i pojačati izlučivanje IgM, IgG i IgE od strane B -limfociti.

Glavne subpopulacije T-pomagača prikazane su na sl. 6-7. Slika sažima trenutno razumijevanje adaptivnih subpopulacija CD4+ T stanica, tj. stvaranje subpopulacija-

Riža. 6-7. Adaptivne subpopulacije CD4+ T stanica (citokini, faktori diferencijacije, kemokinski receptori)

tijekom imunološkog odgovora, a ne tijekom prirodnog razvoja stanica. Za sve varijante T-helpera naznačeni su citokini induktori (na strelicama koje vode do krugova koji simboliziraju stanice), faktori transkripcije (unutar krugova), receptori kemokina koji usmjeravaju migraciju (blizu linija koje se protežu od "površine stanice"), i proizvodi citokine (u pravokutnicima na koje pokazuju strelice koje izlaze iz krugova).

Proširenje obitelji adaptivnih subpopulacija CD4 + T stanica zahtijevalo je rješenje pitanja prirode stanica s kojima te subpopulacije stupaju u interakciju (kome pružaju “pomoć” u skladu sa svojom funkcijom pomagača). Ovi prikazi prikazani su na sl. 6-8. Također daje profinjen pogled na funkcije ovih subpopulacija (sudjelovanje u obrani od određenih skupina patogena), kao i na patološke posljedice neuravnoteženog povećanja aktivnosti ovih stanica.

Riža. 6-8. Adaptivne subpopulacije T stanica (stanice partneri, fiziološki i patološki učinci)

γ δT-limfociti

Velika većina (99%) T-limfocita koji prolaze kroz limfopoezu u timusu su αβT stanice; manje od 1% - γδT stanice. Potonji se uglavnom diferenciraju izvan timusa, prvenstveno u sluznicama probavnog trakta. U koži, plućima, probavnom i reproduktivnom traktu oni su dominantna subpopulacija intraepitelnih limfocita. Među svim T-limfocitima u tijelu, γδT stanice čine od 10 do 50%. U embriogenezi se γδT stanice pojavljuju prije αβT stanica.

.γδ T stanice ne izražavaju CD4. Molekula CD8 eksprimira se na dijelu γδT stanica, ali ne kao ap heterodimer, kao na CD8 + apT stanicama, već kao homodimer od dva a lanca.

.Svojstva prepoznavanja antigena:γδTCR su sličniji imunoglobulinima nego αβTCR; sposobne su vezati nativne antigene neovisno o klasičnim MHC molekulama – za γδT stanice nije potrebna ili uopće nije potrebna prethodna obrada APC antigena.

.Raznolikostγδ TCR manje od αβTCR ili imunoglobulina, iako općenito γδT stanice mogu prepoznati širok raspon antigena (uglavnom fosfolipidne antigene mikobakterija, ugljikohidrate, proteine ​​toplinskog šoka).

.Funkcijeγδ T stanice još nisu u potpunosti shvaćeni, iako prevladava mišljenje da služe kao jedna od poveznica između urođene i stečene imunosti. γδT stanice su jedna od prvih prepreka patogenima. Osim toga, te stanice, izlučujući citokine, imaju važnu imunoregulacijsku ulogu i sposobne su se diferencirati u CTL.

NKT limfociti

T-stanice prirodne ubojice (NKT-stanice) predstavljaju posebnu subpopulaciju limfocita, zauzimajući srednji položaj između stanica urođene i adaptivne imunosti. Ove stanice imaju značajke i NK i T limfocita. NKT stanice izražavaju αβTCR i NK1.1 receptor karakterističan za NK stanice, koji pripada superobitelji glikoproteina lektina tipa C. Međutim, TCR receptor NKT stanica značajno se razlikuje od TCR receptora normalnih stanica. Kod miševa, većina NKT stanica izražava invarijantnu V domenu α-lanca koja se sastoji od

segmenti Vα14-Jα18, koji se ponekad nazivaju Jα281. U ljudi se V domena α lanca sastoji od Vα24-JαQ segmenata. Kod miševa, α-lanac nepromjenjivog TCR-a pretežno je kompleksiran s Vβ8.2, a kod ljudi s Vβ11. Zbog strukturnih značajki TCR lanaca, NKT stanice se nazivaju nepromjenjive - iTCR. Razvoj NKT stanica ovisi o molekuli CD1d, koja je slična molekulama MHC-I. Za razliku od klasičnih MHC-I molekula koje prezentiraju peptide T stanicama, CD1d predstavlja samo glikolipide T stanicama. Iako se smatra da je jetra mjesto razvoja NKT stanica, postoje snažni dokazi o ulozi timusa u njihovom razvoju. NKT stanice imaju važnu ulogu u regulaciji imuniteta. Kod miševa i ljudi s različitim autoimunim procesima funkcionalna aktivnost NKT stanica je ozbiljno narušena. Ne postoji potpuna slika o značaju takvih poremećaja u patogenezi autoimunih procesa. U nekim autoimunim procesima NKT stanice mogu igrati ulogu supresora.

Osim kontrole autoimunih i alergijskih reakcija, NKT stanice su uključene u imunološki nadzor, uzrokujući odbacivanje tumora uz povećanje funkcionalne aktivnosti. Njihova je uloga u antimikrobnoj zaštiti velika, osobito u ranim fazama razvoja infektivnog procesa. NKT stanice sudjeluju u raznim upalnim infektivnim procesima, posebice u virusnim lezijama jetre. Općenito, NKT stanice su multifunkcionalna populacija limfocita koja još uvijek krije mnoge znanstvene misterije.

Na sl. 6-9 sažimaju podatke o diferencijaciji T-limfocita u funkcionalne subpopulacije. Predstavljeno je nekoliko razina bifurkacije: γ δT/ αβT, zatim za αβT stanice - NKT/ ostali T-limfociti, za potonje - CD4 + /CD8 + , za CD4 + T-stanice - Th/Treg, za CD8 + T- limfociti - CD8αβ/CD8αα. Također su prikazani diferencijacijski transkripcijski faktori odgovorni za sve linije razvoja.

Riža. 6-9 (prikaz, stručni). Prirodne subpopulacije T-limfocita i njihovi čimbenici diferencijacije

Ukupan broj T-limfocita u krvi odraslih je normalan - 58-76%, apsolutni broj je 1,1-1,7-10 "/l.

Zreli T-limfociti "odgovorni" su za reakcije stanične imunosti i provode imunološki nadzor antigenske homeostaze u tijelu. Nastaju u koštanoj srži, a diferenciraju se u timusu, gdje se dijele na efektorske (T-limfociti ubojice, T-limfociti odgođene preosjetljivosti) i regulatorne (T-limfociti-pomagači, T-limfociti-supresori). ) Stanice. Sukladno tome, T-limfociti u organizmu obavljaju dvije važne funkcije: efektorsku i regulatornu. Efektorska funkcija T-limfocita je specifična citotoksičnost prema stranim stanicama. Regulacijska funkcija (sustav T-pomagača - T-supresora) je kontrola intenziteta razvoja specifične reakcije imunološkog sustava na strane antigene. Smanjenje apsolutnog broja T-limfocita u krvi ukazuje na nedostatak stanične imunosti, povećanje ukazuje na preaktivan imunološki sustav i prisutnost imunoproliferativnih bolesti.

Razvoj bilo kojeg upalnog procesa popraćen je smanjenjem sadržaja T-limfocita gotovo cijelom dužinom. To se opaža kod upala raznih etiologija: raznih infekcija, nespecifičnih upalnih procesa, razaranja oštećenih tkiva i stanica nakon kirurških zahvata, trauma, opeklina, srčanog udara, razaranja stanica malignih tumora, trofičke destrukcije itd. Smanjenje broja T-limfocita određeno je intenzitetom upalnog procesa, ali se ovaj obrazac ne promatra uvijek. T-limfociti najbrže od svih imunokompetentnih stanica reagiraju na pojavu upalnog procesa. Ova reakcija se očituje i prije razvoja kliničke slike bolesti. Povećanje broja T-limfocita tijekom upalnog procesa je povoljan znak, a visoka razina T-limfocita s izraženim kliničkim manifestacijama takvog procesa, naprotiv, nepovoljan je znak koji ukazuje na spor tijek upale. proces s tendencijom kroničnosti. Potpuni završetak upalnog procesa prati normalizacija broja T-limfocita. Povećanje relativnog broja T-limfocita nije od velike važnosti za kliniku. Međutim, povećanje apsolutnog broja T-limfocita u krvi vrlo je važno za dijagnozu leukemije. Bolesti i stanja koja dovode do promjene broja T-limfocita u krvi prikazana su u tablici. 7.19.

Tablica 7.19. Bolesti i stanja koja dovode do promjene broja

T-limfociti (CD3) u krvi

Nastavak tablice 7.19

T-limfociti-pomagači (CD4) u krvi

Broj T-limfocita-pomoćnika u krvi kod odraslih je normalan - 36-55%, apsolutni

Količina - 0,4-1,110"/l-

T-limfociti su pomagači (induktori) imunološkog odgovora, stanice koje reguliraju snagu imunološkog odgovora organizma na strani antigen, kontroliraju postojanost unutarnje okoline organizma (antigensku homeostazu) i uzrokuju pojačano stvaranje protutijela. Povećanje broja T-limfocita-pomagača ukazuje na preaktivan imunološki sustav, smanjenje ukazuje na imunološki nedostatak.

Omjer T-pomagača i T-supresora u perifernoj krvi ima vodeću ulogu u procjeni stanja imunološkog sustava, jer o tome ovisi intenzitet imunološkog odgovora. Normalno, citotoksične stanice i antitijela trebaju se proizvoditi onoliko koliko je potrebno za uklanjanje jednog ili drugog antigena. Nedovoljna aktivnost T-supresora dovodi do prevlasti utjecaja T-helpera, što pridonosi jačem imunološkom odgovoru (izražena proizvodnja protutijela i/ili produljena aktivacija T-efektora). Prekomjerna aktivnost T-supresora, naprotiv, dovodi do brzog supresije i neuspješnog tijeka imunološkog odgovora, pa čak i fenomena imunološke tolerancije (imunološki odgovor na antigen se ne razvija). S jakim imunološkim odgovorom moguć je razvoj autoimunih i alergijskih procesa. Visoka funkcionalna aktivnost T-supresora u takvom odgovoru ne dopušta razvoj odgovarajućeg imunološkog odgovora, pa u kliničkoj slici imunodeficijencije prevladavaju infekcije i sklonost malignom rastu. Indeks CD4/CD8 1,5-2,5 odgovara normalnom stanju, više od 2,5 - hiperaktivnost, manje od 1,0 - imunodeficijencija. U teškom tijeku upalnog procesa, omjer CD4/CD8 može biti manji od 1. Ovaj omjer je od temeljne važnosti u procjeni imunološkog sustava u bolesnika s AIDS-om. U ovoj bolesti virus humane imunodeficijencije selektivno inficira i uništava CO4 limfocite, što rezultira smanjenjem omjera CD4/CD8. prije vrijednosti mnogo manje od 1.

Povećanje omjera CD4/CD8 (do 3) često se primjećuje u akutnoj fazi raznih upalnih bolesti zbog povećanja razine T-pomagača i smanjenja T-supresora. Usred upalne bolesti dolazi do polaganog smanjenja T-pomagača i povećanja T-supresora. Kada se upalni proces smiri, ti se pokazatelji i njihov omjer normaliziraju. Povećanje omjera CD4/CD8 karakteristično je za gotovo sve autoimune bolesti: hemolitičku anemiju, imunološku trombocitopeniju, Hashimotov tiroiditis, pernicioznu anemiju, Goodpastureov sindrom, sistemski eritematozni lupus, reumatoidni artritis. Povećanje omjera CD4/CD8 zbog smanjenja razine CD8 u ovim bolestima obično se otkriva na vrhuncu egzacerbacije s visokom aktivnošću procesa. Smanjenje omjera CD4/CD8 zbog porasta razine CD8 karakteristično je za niz tumora, posebice Kaposijev sarkom. Bolesti i stanja koja dovode do promjene broja CD4 u krvi prikazana su u tablici. 7.20.

Tablica 7.20. Bolesti i stanja koja dovode do promjene broja CD4 u krvi

Nastavak tablice. 7.20

Limfociti su leukocitne krvne stanice koje obavljaju niz važnih funkcija. Smanjenje ili povećanje razine ovih stanica može ukazivati ​​na razvoj patološkog procesa u tijelu.

Proces nastanka i rad limfocita

Limfociti nastaju u koštanoj srži, nakon čega migriraju u timusnu žlijezdu, gdje se pod utjecajem hormona i epitelnih stanica mijenjaju i diferenciraju u podskupine s različitim funkcijama. U ljudskom tijelu postoje i sekundarni limfoidni organi, oni uključuju limfne čvorove, slezenu. Slezena je također mjesto smrti limfocita.

Razlikovati T i B limfocite. 10-15% svih limfocita u limfnim čvorovima transformira se u B-limfocite. Zahvaljujući tim stanicama, ljudsko tijelo stječe doživotnu imunost na prošle bolesti - pri prvom kontaktu sa stranim agensom (virus, bakterija, kemijski spoj), B-limfociti proizvode antitijela na njega, pamte patogeni element i, nakon ponovljene interakcije, mobilizirati imunitet da ga uništi. Također, zbog prisutnosti B-limfocita u krvnoj plazmi postiže se učinak cijepljenja.

U timusu se oko 80% limfocita pretvara u T-limfocite (CD3 je uobičajeni stanični marker). T stanični receptori otkrivaju i vežu antigene. T-stanice su pak podijeljene u tri podvrste: T-ubojice, T-pomagači, T-supresori. Svaka od vrsta T-limfocita izravno je uključena u eliminaciju stranog agensa.

T-ubojice uništavaju i razgrađuju stanice zahvaćene bakterijama i virusima, stanice raka. T-ubice su glavni element antivirusnog imuniteta. Funkcija T-pomagača je pojačati adaptivni imunološki odgovor, takve T-stanice luče posebne tvari koje aktiviraju odgovor T-ubojica.

T-ubojice i T-pomagači su efektorski T-limfociti, čija je funkcija pružiti imunološki odgovor. Postoje i T-supresori – regulatorni T-limfociti koji reguliraju aktivnost efektorskih T-stanica. Kontrolom intenziteta imunološkog odgovora regulatorni T-limfociti sprječavaju uništavanje zdravih tjelesnih stanica i sprječavaju nastanak autoimunih procesa.

Normalan broj limfocita

Normalne vrijednosti limfocita različite su za svaku dob - to je zbog osobitosti razvoja imunološkog sustava.

S godinama se smanjuje volumen timusa, u kojem sazrijeva glavnina limfocita. Do dobi od 6 godina limfociti prevladavaju u krvi, kako osoba stari, neutrofili postaju vodeći.

• novorođenčad - 12-36% ukupnog broja leukocita;
• 1 mjesec života - 40-76%;
• u 6 mjeseci - 42-74%;
• u 12 mjeseci - 38-72%;
• do 6 godina - 26-60%;
• do 12 godina - 24-54%;
• 13-15 godina - 22-50%;
• odrasli - 19-37%.

Za određivanje broja limfocita provodi se opći (klinički) test krvi. Uz pomoć takve studije možete odrediti ukupni broj limfocita u krvi (ovaj pokazatelj obično se izražava kao postotak). Da bi se dobile apsolutne vrijednosti, izračun mora uzeti u obzir ukupni sadržaj leukocita.

Detaljno određivanje koncentracije limfocita provodi se tijekom provedbe imunološke studije. Imunogram odražava pokazatelje B i T limfocita. Norma T-limfocita je 50-70%, (50,4 ± 3,14) * 0,6-2,5 000. Normalna stopa B-limfocita je 6-20%, 0,1-0,9 000. Između T-pomagača i T-supresora je normalno 1,5-2,0.

Povećanje i smanjenje razine T-limfocita

Povećanje T-limfocita u imunogramu ukazuje na pretjeranu aktivnost imunološkog sustava i prisutnost imunoproliferativnih poremećaja. Smanjenje razine T-limfocita ukazuje na nedostatak stanične imunosti.

Uz bilo koji upalni proces, razina T-limfocita se smanjuje. Na stupanj smanjenja koncentracije T-stanica utječe intenzitet upale, međutim, ovaj se obrazac ne opaža u svim slučajevima. Ako su T-limfociti povišeni u dinamici upalnog procesa, to je povoljan znak. Međutim, povišena razina T stanica na pozadini teških kliničkih simptoma, naprotiv, nepovoljan je znak koji ukazuje na prijelaz bolesti u kronični oblik. Nakon potpunog uklanjanja upale, razina T-limfocita doseže normalne vrijednosti.

Uzrok povećanja razine T-limfocita mogu biti takvi poremećaji kao što su:

• limfocitna leukemija (akutna, kronična);
• Cesarijev sindrom;
• imunološka hiperaktivnost.

T-limfociti se mogu smanjiti u sljedećim patologijama:

• kronične zarazne bolesti (HIV, tuberkuloza, gnojni procesi);
• smanjena proizvodnja limfocita;
• genetski poremećaji koji uzrokuju imunodeficijenciju;
• tumori limfoidnog tkiva (limfosarkom, limfogranulomatoza);
• zatajenje bubrega i srca posljednje faze;
• uništavanje limfocita pod utjecajem određenih lijekova (kortikosteroidi, citostatici) ili terapije zračenjem;
• T-stanični limfom.

Razina T-limfocita mora se procijeniti u kombinaciji s drugim krvnim elementima, uzimajući u obzir simptome i pritužbe pacijenta. Stoga samo kvalificirani stručnjak treba tumačiti rezultate krvnog testa.

Stanice koje eksprimiraju antigen CD8 predstavljene su s dvije glavne subpopulacije - citotoksičnim T-stanicama i T-limfocitima sa supresorskom aktivnošću.

S vremenom je postalo poznato da CD8 eksprimiraju ne samo te subpopulacije limfocita, već i pojedinačni klonovi drugih stanica: makrofagi, prirodne ubojice (NK), mastociti, dendritične stanice (DC); glavni CD8 ligandi - a2- i a3-domene antigena klase I glavni histokompatibilni kompleks (MHC).

Slijedi da je CD8 nespecifični marker citotoksični limfociti (CTL) i T-supresorskih limfocita, ali se smatra jednim od glavnih fenotipskih obilježja ovih stanica.

Zato je, kada se objektivno procjenjuje stupanj supresije T-limfocita, potrebno proučavati supresorsku aktivnost stanica koje eksprimiraju CD8 metodom razvijenom za tu svrhu, budući da samo određivanje CD8 ne daje temelja govoriti ni o jednom od njih. citotoksična ili supresivna aktivnost T-limfocita koji imaju zajednički marker CD8.

Općenite ideje o CD8 + CD28-T-limfocitima

Opća ideja o supresorskim T-limfocitima počela se formirati već 70-ih godina prošlog stoljeća, a do sredine 80-ih postalo je poznato da su te stanice predstavljene različitim klonovima koji se razlikuju u uvjetima nastanka, kinetici formiranja , značajke djelovanja, raznolikost svojstava, izlučeni medijatori i drugi

Ipak, već tada B.D. Brondz je formulirao da imaju zajedničke značajke koje se sastoje u sposobnosti blokiranja diferencijacije i aktivnosti drugih limfoidnih stanica, što ih bitno razlikuje od CTL-a. Razlike između T-supresora i ostalih T-limfocita također treba uključiti njihovu nestabilnost, visoku osjetljivost na različite utjecaje, kratak životni vijek itd.

Zahvaljujući studijama mnogih poznatih imunologa tog vremena, identificirani su neki površinski markeri ovih stanica (koristeći metodološke mogućnosti tog razdoblja), utvrđene su njihove razlike u odnosu na druge stanice, te neki stupnjevi i mehanizmi aktivacije T-supresora. su identificirani.

Na temelju toga zaključeno je da su T-supresori i njihovi različiti klonovi regulatorne stanice koje kontroliraju odnos stanične i humoralne imunosti te uvelike određuju intenzitet odgovora na tumore, transplantacije i viruse. Ovome treba dodati da navedena reprezentacija do danas nije pretrpjela temeljne promjene.

S vremenom je proučavanje CD8+T-limfocita omogućilo da se utvrdi da CD8+T-limfocite sa supresorskom aktivnošću karakterizira odsutnost ekspresije CD28 molekula, pa je njihov fenotip određen kao CD8+CD28-.

Kada su te stanice proučavane u različitim sustavima (osobito se često koristila mješovita kultura limfocita), pokazalo se da imaju mnoge inhibitorne učinke: inhibiciju proliferacije CD4 + T limfocita stimuliranu alogenim stanicama, inhibiciju receptora povezanih uglavnom s aktivacija stanica (IL-2 receptori) i transferin), supresija ekspresije kostimulirajućih molekula od strane antigen-prezentirajućih stanica, što sprječava njihovu optimalnu interakciju s CD4 + T-limfocitima, nemogućnost održavanja lučenja citokina itd.

Potvrđeno je da CD8 + CD28-T-limfociti pri ostvarivanju svojih inhibicijskih učinaka prepoznaju kompleks MHC antigena klase I - peptida uz sudjelovanje TCR-a ovih stanica. Također je utvrđeno da su CD8+CD28-T-limfociti heterogena subpopulacija.

U općoj karakterizaciji stanica ovog tipa, važno je da ih karakterizira smanjenje proliferacije kao odgovor na podražaje, inhibiraju citotoksičnost, karakterizirane su visokom razinom ekspresije CD11b, CD29, CD57, CD94 na niskoj razini. CD25 u usporedbi s CD8+CD28+T-limfocitima; CD8+CD28-T-limfociti periferne krvi imaju značajno smanjenu fosforilaciju TCR-zeta lanca i visoku razinu inhibitora ciklin-ovisne kinaze p16.

Dobivanje monoklonskih protutijela koja striktno komuniciraju s CD8+CD28-T-limfocitima omogućilo je potvrdu da oni predstavljaju neovisni stanični klon koji se razlikuje od citotoksičnih limfocita; korištenje ovih antitijela prekinulo je inhibitorne učinke CD8+CD28-T-limfocita i in vivo i in vitro, ali nije utjecalo na funkcije CTL.

Korištenjem monoklonskih antitijela u tim stanicama identificiran je jedan od epitopa gangliozida, CD75s, koji nije detektiran na drugim stanicama, što je poslužilo kao osnova za proširenje fenotipske karakteristike, koja je definirana kao CD8+CD28-CD75s+.

Sa stajališta razumijevanja općeg biološkog značaja CD8+CD28-T-limfocita, važna je njihova sposobnost interakcije s epitelnim stanicama sluznice. CD8+CD28-T stanice s ovom sposobnošću izražavaju CD101 i CD103, komuniciraju s epitelnim stanicama putem proteina p180 i obavljaju regulatorne funkcije.

Autori opravdano zaključuju da se u sluznici nalaze CD8+CD28-CD101+CD103+T-limfociti koji vrše lokalnu imunološku kontrolu. Iz ovih podataka proizlazi da regulacijski učinci CD8+CB28-T-limfocita nisu ograničeni na Th1-limfocite i imaju širi spektar djelovanja.

Interakcija CD8+CD28-T-limfocita s epitelnim stanicama prikazana je na sl. 58.

Riža. 58. Interakcija supresorskih T-limfocita i epitelnih stanica:
CD101 - glikoprotein uključen u kostimulaciju; CD103 - antigen limfocita sluznice

Ove opće ideje o CD8+CD28-T-limfocitima nedavno su dopunjene novim podacima koji otkrivaju kako njihove dosad nepoznate inhibitorne učinke, tako i neke od načina i mehanizama njihove provedbe. Takvi su podaci dobiveni kako u eksperimentalnim studijama, tako iu proučavanju supresorskih T-limfocita u perifernoj krvi zdravih osoba, kao iu nekim patologijama.

Od velikog je interesa podatak da gore spomenuta činjenica heterogenosti ovog staničnog klona dobiva novo svjetlo. U istraživanju CD8 + CD28-T-limfocita ljudske periferne krvi identificirana su tri njihova tipa, kombinirana sposobnošću inhibicije antigen-specifičnog odgovora T-limfocita.

Prvi tip karakterizira sposobnost oštećenja ekspresije kostimulacijskih molekula na DC, učinak koji zahtijeva izravnu međustaničnu interakciju. Drugi ima izraženu sposobnost inhibicije izlučivanja takvih citokina kao što su IFNy i IL-6, što se događa bez obveznog međustaničnog kontakta. Treći posreduje svoje učinke lučenjem IL-10.

Važni podaci dobiveni su proučavanjem T-limfocita s ekspresijom i bez ekspresije CD28 u perifernoj krvi ljudi različitih dobnih skupina. Prvo, pokazalo se da s godinama opada broj CD8 + CD28-T-limfocita, a drugo, stimulacija fitohemaglutinin(FGA) povećava omjer ovih staničnih klonova u svim dobnim skupinama i pojačava proliferaciju ne samo CD8 + CD28 + -, već i CD8 + CD28-T stanica s višom razinom proliferacije potonjih u starijih osoba.

Konačno, otkriveno je da je tretman limfocita s PHA rezultirao apoptozom svih CD8+T limfocita i da je broj mrtvih stanica bio isti u oba klona - dokaz da je sposobnost apoptoze bila neovisna o dobi. Ovome treba dodati podatak da povećanje broja CD8 + CD28-T-limfocita u starijih osoba bez identificirane patologije može objasniti smanjenje proliferacije, praćeno povećanjem aktivnosti ciklin-ovisne protein kinaze p16.

Sasvim je razumno vjerovati da bi ovi novi podaci u daljnjem proučavanju promjena vezanih uz dob u T-supresorskim limfocitima mogli biti bitni za razjašnjenje njihove uloge u značajkama regulacije imunološke homeostaze vezanim uz dob.

Do danas su poznati glavni stupnjevi inhibicijskog djelovanja CD8 + CD28-T-limfocita, čija se aktivacija može dogoditi pod utjecajem alogenih, ksenogenih i također heterogenih stanica koje predstavljaju antigene napunjenih antigenima. Glavni sudionici u provedbi inhibitornog učinka supresorskih T-limfocita su: CD8 + CD28 + T-limfociti, stanice koje prezentiraju antigen i CD4 + T-pomagači.

U isto vrijeme, stanice koje predstavljaju antigen djeluju kao svojevrsni most između T-supresora i CD4 + T-limfocita. Opći mehanizam inhibicijskog djelovanja supresorskih T-limfocita može se prikazati na sljedeći način: aktivacija humanih CD8 + CD28-T-limfocita kao rezultat njihovog prepoznavanja kompleksnih antigena glavnog histokompatibilnog kompleksa - peptida (proces se odvija s sudjelovanje TCR supresorskih stanica) na stanicama koje prezentiraju antigen, što ih lišava sposobnosti ekspresije kostimulirajućih molekula i stoga, nakon prepoznavanja od strane T-pomoćnih limfocita kompleksnih antigena klase II MHC - peptida, one ne primaju potrebnog kostimulirajućeg signala, postaju energični i nesposobni za aktivaciju i proliferaciju. Ovaj proces shematski je prikazan na sl. 59.

Riža. 59. Faze inhibicijskog djelovanja CD8+CD28~T-limfocita na CD4+T-limfocite (pomagače): APC - antigen-prezentirajuća stanica

Za razumijevanje mehanizma djelovanja supresorskih T-limfocita, također je važno da oni ne zahtijevaju ni proliferaciju ni sintezu proteina da izvrše svoje inhibitorno djelovanje. Kada se inhibicijski signali T-supresorskih limfocita ostvare u stanicama koje prezentiraju antigen, aktivnost NF-kappaB je inhibirana, što igra glavnu ulogu u njihovoj nesposobnosti slanja kostimulacijskih signala Th-limfocitima.

Kao što je već navedeno, značajna pozornost posvećena je pitanju je li njihov izravan kontakt sa stanicama koje predstavljaju antigen nužan za provedbu inhibitornog učinka CD8+CD28-T-limfocita. Trenutno je većina autora sklona vjerovati da je takav međustanični kontakt neophodan.

Mnoge činjenice koje omogućuju proširenje razumijevanja regulatornih mogućnosti CD8+CD28-T-limfocita dobivene su tijekom njihovog proučavanja u uvjetima transplantacije tkiva, kao i autoimune patologije. Prema dobivenim podacima, prisutnost CD8+CD28-T-limfocita uvelike određuje sudbinu transplantata.

Usporedna studija ovih perifernih krvnih stanica zdravih osoba i osoba s transplantiranim srcem pokazala je njihovu znatno izraženiju aktivaciju u bolesnika nego u zdravih osoba s paralelnom aktivnom ekspresijom CD38, DR leukocitarnog antigena i većim udjelom perforin pozitivnih stanica.

Uočeno je da je ekspresija CD27 izraženija na CD8+CD28- stanicama pacijenata koji nisu imali odbacivanje presatka u usporedbi s pacijentima koji su imali znakove odbacivanja. U vezi s ovim podacima utvrđuje se još jedan aspekt važnosti T-supresorskih stanica: postoji klon CD8+CD28-CD27+ regulatornih stanica koje imaju ulogu u zaštiti presatka.

Također je utvrđeno da ove stanice izolirane iz transplantata ne pokazuju citotoksičnu aktivnost prema donorskim stanicama i imaju višu razinu ekspresije KIR94 - činjenice koje ukazuju na fenotipske promjene u T-supresorskim limfocitima tijekom transplantacije.

S obzirom da se nakon transplantacije u krvi nalaze T-supresorski limfociti, kao i njihova sposobnost supresije ekspresije kostimulacijskih molekula (CD80, CD86) na donorskim stanicama koje prezentiraju antigen, uputno je tijekom transplantacije provoditi odgovarajući nadzor.

Kao što je već spomenuto, proučavanje CD8+CD28-T-limfocita u autoimunoj patologiji također daje informacije o svojstvima ovih stanica. Konkretno, utvrđeno je da u bolesnika sa sistemskim eritemskim lupusom u aktivnoj fazi CD8 + CD28-T-limfociti nisu imali inhibitornu aktivnost, što je bilo u kombinaciji s neravnotežom između inhibitornih učinaka IL-6 i stimulativnih učinaka IL-6. IL-12.

Sposobnost T-supresorskih limfocita da suzbiju proliferaciju antigen-specifičnih CD4 + T-limfocita povezana je s pojavom remisije u bolesnika s autoimunom patologijom. U sustavima in vitro bilo je moguće karakterizirati prekursore CD8+CD28-T limfocita i pokazati da monociti koji izlučuju IL-10 nakon stimulacije GM-CSF igraju ključnu ulogu u njihovom stvaranju (u tim slučajevima izravni međustanični kontakt ne igraju značajnu ulogu).

Prekursori imaju fenotip CD8+CD45RA-CD27-CCR-IL10Ra-. Također je pokazano da T-supresorski limfociti potiskuju aktivnost antigen-specifičnih citotoksičnih limfocita, smanjujući ekspresiju antigena klase I glavnog histokompatibilnog kompleksa.

Prikazani podaci ne ostavljaju nikakvu sumnju da CD8+CD28-T-limfociti imaju važnu ulogu u održavanju imunološke homeostaze zajedno s CD4+-regulacijskim T-limfocitima.

Postoji dovoljno razloga vjerovati da je jedna od glavnih funkcija ovih stanica regulacija specifičnog odgovora T-stanica. Aktivacija supresorskih T-limfocita kroz specifično prepoznavanje u fiziološkim uvjetima štiti Th-limfocite od pretjerane aktivacije i, posljedično, od pretjeranog imunološkog odgovora pod određenim uvjetima, posebice s povećanjem broja reaktivnih T-pomagača.

Dostupni podaci pokazuju da su inhibitorni učinci T-supresorskih limfocita jedan od važnih sudionika u indukciji periferne tolerancije, a disregulacija kontrole koju te stanice provode nad autoreaktivnim klonovima drugih T-limfocita može biti uzrokom razvoja autoimuna patologija.

Uz to se ne može a da se ne složi da razumijevanje fiziološkog značaja uloge CD8+CD28-T-limfocita zahtijeva daljnja istraživanja, koja će pružiti nove podatke o mehanizmima njihovog djelovanja u tumorskoj i autoimunoj patologiji.

Općenite ideje o CD8 + CD28-T-limfocitima daje sl. 60.

Riža. 60. Fenotipske i funkcionalne značajke CD8+CD28-T-limfocita

Regulatorne funkcije supresorskih T-limfocita

Rezultati istraživanja supresorskih CD8+CD28-T-limfocita ne ostavljaju nikakvu sumnju da oni obavljaju važne regulatorne funkcije, koje su prilično jasno definirane u normalnim uvjetima.

Također je sasvim opravdano ustvrditi da su i supresorski T-limfociti (CD8+CD28-) i regulatorni CD4+CD25+T-limfociti (Th3/Trl) zajednički sudionici u regulaciji imunološke homeostaze u svim fazama njezinog formiranja.

Uz to, također je očito da ako je uloga supresorskih T-limfocita u normalnim uvjetima sasvim jasna, onda ulogu ovih stanica u malignom rastu tek treba razjasniti u budućnosti. S tim u vezi, pitanje od posebnog interesa je: pod kojim uvjetima CD8+CD28-T-čempresori stječu sposobnost citotoksičnog učinka, činjenica koja je uočena tek kada su kultivirani s tumorskim stanicama.

Detaljizirajući ovo pitanje (da li je u svim slučajevima moguća sposobnost citotoksičnosti, u kojoj mjeri je to posljedica bioloških karakteristika tumorskih stanica, koliki je udio tih stanica u provedbi citotoksičnosti i koji je mehanizam učinka) tumorskih stanica na CD8 + CD28-T-limfocitima), nedvojbeno će omogućiti novo razumijevanje uloge T-supresorskih limfocita u tumorskom procesu.

Ne manje važno je daljnje proučavanje značajki interakcije T-supresorskih limfocita s endotelnim stanicama tijekom rasta tumora. Zanimanje za razjašnjavanje ovog pitanja je razumljivo zbog činjenice da interakcija CD8 + CD28-T-limfocita s endotelnim stanicama dovodi do izraženih manifestacija aktivnosti potonjih, što može utjecati na proces maligne transformacije.

Rezimirajući prezentirane materijale, možemo izvući sljedeće zaključke:

Prvi

T-supresorski limfociti - CD8+CD28- predstavljaju zaseban klon T-limfocita koji izražavaju CD8, imaju izražene inhibitorne učinke protiv CD4+T-limfocita, sposobni su za interakciju s endotelnim stanicama; igraju važnu ulogu u održavanju imunološke homeostaze u normalnim i patološkim uvjetima.

Drugi

Inhibicijski učinci supresorskih T-limfocita posljedica su međustaničnih interakcija u kojima uz CD8+CD28-T-limfocite sudjeluju dendritične stanice i CD4+T-limfociti.

Treći

U većini slučajeva, s različitim onkološkim bolestima, povećava se broj CD8 + CD28-T-limfocita u krvi, što se često kombinira s lošom prognozom; tumorski infiltrirani limfociti također sadrže značajnu količinu ovih stanica.

Četvrta

Zajedničkim uzgojem T-supresorskih limfocita s autolognim tumorskim stanicama nastaju CD8+CD28-T-limfociti sposobni za citotoksični učinak.

Peti

Određivanje broja CD8 + CD28-T-limfocita može se koristiti kao kontrola utjecaja

Za ometanje aktivacije T-limfociti karakterizira prisutnost normalnog ili povećanog broja T-stanica u krvi. Te stanice zadržavaju normalan fenotip, ali je u njima poremećen prijenos signala s receptora u stanicu. Stoga, oni ne proliferiraju niti proizvode citokine kada su stimulirani mitogenima, antigenima ili drugim signalima iz TCR-a.

Prema kliničkim manifestacijama, takvi nedostaci su slični drugim vrstama insuficijencije iu nekim slučajevima se ne razlikuju od teške kombinirane imunodeficijencije.

CD8 limfopenija zbog mutacije gena proteina 70 povezanog zeta

U bolesnika s oštećenjem Aktivacija T stanica teške, rekurentne i često smrtonosne infekcije razvijaju se u djetinjstvu. Većina slučajeva pronađena je među menonitima. Broj B-limfocita u krvi je normalan ili povećan; koncentracija imunoglobulina u serumu je promjenjiva. Ekspresija površinskih antigena CD3 i CD4 na T-limfocitima je očuvana, ali su CD8 stanice gotovo potpuno odsutne.

Ne reagiraju na mitogene ili alogene stanice in vitro i ne stvaraju citotoksične T-limfocite. Aktivnost NK stanica je očuvana. Timus jedne od pacijenata bio je normalne strukture, a sadržavao je stanice s oba površinska markera - CD4 i CD8. Međutim, CD8 stanice su bile odsutne. Ovo stanje je uzrokovano mutacijama u genu koji kodira protein 70 povezan sa zeta (ZAP-70), tirozin kinazu koja ne pripada obitelji Src i igra važnu ulogu u prijenosu signala u T-limfocite.

ZAP-70 gen nalazi se na dugom kraku kromosoma 2 (regija ql2). Normalan broj T-limfocita s oba markera (CD4 i CD8) objašnjava se mogućnošću korištenja druge tirozin kinaze, Syk, za pozitivnu selekciju. Razina Syk u timocitima je 4 puta veća od njegovog sadržaja u perifernim T-limfocitima, što očito određuje odsutnost normalne reakcije CD4 krvnih stanica.

p56-Isk nedostatak. U dvomjesečnog dječaka koji boluje od bakterijskih, virusnih i gljivičnih infekcija utvrđena je limfopenija i hipogamaglobulinemija. B- i NK-stanice bile su prisutne u krvi, ali je broj CD4 T-limfocita bio nizak. Reakcije na mitogene bile su nedosljedne. TCR stimulacija nije rezultirala ekspresijom CD69. Međutim, nakon stimulacije forbol miristatacetatom i kalcijevim ionoforom CD69 (koji je marker aktivacije), pojavio se na T-limfocitima, što ukazuje na defekt u proksimalnim dijelovima puta signala u stanice.

Molekularni istraživanje identificirali su alternativno spajanje transkripta što rezultira odsutnošću kinazne domene u p56-lck.