Taksonomija, pneumokok, laboratorijske metode za influencu

MINISTARSTVO ZDRAVLJA RUSKE FEDERACIJE DRŽAVNO MEDICINSKO SVEUČILIŠTE KAZAN KATEDRA ZA MIKROBIOLOGIJU

PNEUMOKOK

Kazan 1999

UDK 576.851.21(07)

Objavljeno odlukom Središnjeg koordinacijskog i metodološkog vijeća Kazanskog državnog medicinskog sveučilišta.

Sastavio:

(Pročelnik Odjela za mikrobiologiju, doktor medicinskih znanosti, prof. O.K. Pozdeev, asistent Odsjeka za mikrobiologiju, dr. sc. E.R. Fedorova.

Recenzenti:

Voditelj Odsjeka za epidemiologiju Kazanskog državnog medicinskog sveučilišta, doktor medicinskih znanosti, izvanredni profesor M.Sh. Shafeev, voditelj Odjela za epidemiologiju Kazanske državne medicinske akademije, doktor medicinskih znanosti, profesor V.E. Grigoriev.

Pneumokok /O.K. Pozdeev, E.R. Fedorov-Kazan: KSMU, 1999. - 14 s.

Kopiranjem, distribucijom, objavljivanjem teksta ili njegovog dijela na svojim resursima preuzimate odgovornost u skladu s važećim zakonom.

Isključivo za korištenje djela u osobne svrhe (članak 18., članak 26. Zakona Ruske Federacije "O autorskom pravu i srodnim pravima"). Komercijalna reprodukcija je zabranjena.

Državno medicinsko sveučilište u Kazanu, 1999

Pneumokok (Streptococcus pneumoniae) prvi je identificirao Pasteur (1881.) radeći na cjepivu protiv bjesnoće i u početku ga smatrao uzročnikom bjesnoće. Etiološku ulogu mikroorganizama u razvoju upale pluća u ljudi dokazali su Frenkel i Weichselbaum (1884.). Bakterije koloniziraju ljudske i životinjske organizme i ubrajaju se u skupinu takozvanih "oralnih" streptokoka. Glavni su uzročnici upale pluća, a mogu izazvati i pleuritis, meningitis, puzajuće čireve na rožnici, gnojnu upalu srednjeg uha, septička stanja i druge bolesti. U IX izdanju Burgey Bacteria Key (1994.) pneumokoki su uvršteni u 17. skupinu "Gram-pozitivni koki".

Epidemiologija lezija. Pneumokok je jedan od glavnih uzročnika bakterijske pneumonije registrirane izvan bolnica (2-4 slučaja na 1000 ljudi); Godišnje se u svijetu bilježi najmanje 500.000 slučajeva pneumokokne upale pluća (stvarna vrijednost je mnogo veća). Djeca i starije osobe su najosjetljivije na infekciju. Rezervoar infekcije su bolesnici i kliconoše (20-50% djece predškolske dobi i 20-25% odraslih); glavni put prijenosa je kontakt; tijekom izbijanja i zrakom. Vrhunac incidencije javlja se u hladnoj sezoni. U velikoj većini slučajeva, klinički oblici infekcije razvijaju se kada je tjelesna otpornost oslabljena (uključujući i zbog hladnog stresa), kao i na pozadini drugih patologija (anemija srpastih stanica, Hodgkinova bolest, HIV infekcija, mijelom, dijabetes melitus , stanja nakon splenektomije itd.) ili s alkoholizmom. Varijante 1, 2 i 3 imaju najveće epidemiološko značenje u patologiji kod odraslih; kod djece - 1, 2, 3 i 14 opcija. Virulencija serovara u silaznom redoslijedu - 3, 1, 2, 5, 7 i 8 opcija. Na pneumokoke su osjetljivi bijeli miševi (kada su zaraženi uginu od septikemije unutar jednog dana), telad, janjad, prasad, psi i majmuni.

Morfologija. Pneumokoki su nepokretni, ne stvaraju spore, blago su izduženog oblika, nalik konturama plamena svijeće. U razmazima iz kliničkog materijala raspoređeni su u parove od kojih je svaki okružen debelom kapsulom. U razmazima iz medija kulture mogu se nalaziti u kratkim lancima i biti više zaobljeni. Na jednostavnim medijima tvore tanku kapsulu; njegov razvoj se potiče uvođenjem krvi, seruma ili ascitne tekućine. Stvaranje kapsule je najizraženije kod bakterija tipa III. Kada su raspoređene u lance, kapsula može biti uobičajena.

kulturnih dobara. Pneumokokni aerobi ili fakultativni anaerobi; tijekom uzgoja poželjni su kapnofilni uvjeti (5-10% CO2). Kemoorganografiju i dobro rastu na krvnom ili serumskom mediju, dopunjenom dodatkom 0,1% glukoze. Mogu rasti u temperaturnom rasponu od 28-42 °C, optimalna je 37 °C. Optimalni pH -7,6-7,8. Na gustim podlogama stvaraju nježne prozirne, dobro definirane kolonije promjera oko 1 mm. Ponekad mogu biti ravni sa središnjim udubljenjem; kao i drugi streptokoki, kolonije se nikada ne spajaju

između sebe. Na krvnom agaru stvaraju male prozirne kolonije zelenkastosive boje. Središte kolonija je tamnije, periferija svjetlija. Ispod kolonije i po njenoj periferiji vidljiva je zona a-hemolize u obliku zelenkasto obojene zone (zbog prijelaza hemoglobina u methemoglobin). Kolonije pneumokoka tipa III često imaju mukoznu konzistenciju, veličina im je do 2 mm. Nejasne su, mogu se stopiti jedna s drugom. Tvore S- i R-oblike kolonija. Tijekom prijelaza iz S- u R-oblik gube sposobnost sintetiziranja kapsule. Na tekućim podlogama sa serumom i 0,2% glukoze dati jednoliku mutnoću i mali flokulentni talog. Duljim uzgojem povećava se talog.

Održivost. Pneumokoki spadaju u skupinu nestabilnih mikroorganizama. U suhom ispljuvku, oni traju do dva mjeseca. Može se dugo čuvati na niskim temperaturama; na temperaturi od 60 ° C, umiru u roku od 3-5 minuta. 3% otopina karbolne kiseline ubija ih za 1-2 minute. Optohin (u koncentraciji 1:100 000) i žuč su štetni za pneumokoke, što se koristi za identifikaciju bakterija.

Pneumokok se od ostalih mikroorganizama razlikuje po nizu svojstava (Tablica 1).

Tablica 1 Biokemijska svojstva pneumokoka

Ispitni supstrat	Proizlaziti	Ispitni supstrat	Proizlaziti
Rast na 100°C
		rafinoza
Srednje sa 6,5% Nad
a-hemoliza
B-hemoliza		Trehaloza
		Fosfataza
hippurirati		β-galaktozidaza
Glicerol
Oznake: "+" - 90% ili više sojeva je pozitivno; (+) - 80-89% sojeva je pozitivno; d - 21-79% sojeva je pozitivno; (-) - 11-20% sojeva je pozitivno; “- - 90% ili više sojeva je negativno.

Antigenska struktura. U pneumokoku je pronađeno nekoliko vrsta antigena: polisaharid, 0-somatski antigen koji se nalazi u staničnoj stijenci; polisaharidni kapsularni K-antigeni i M-protein. Polisaharidni somatski antigen sličan je C-supstanci drugih streptokoka. Odnos određuje sličnost kemijske strukture ributeihoične kiseline povezane s kolin fosfatom. Kapsularni antigeni također imaju polisaharidnu prirodu, sastoje se od monosaharida koji se ponavljaju u različitim kombinacijama: D-glukoza, D-galaktoza i L-ramnoza. Prema građi kapsularnih antigena pneumokoke dijelimo na 84 serovara. Treba imati na umu da kapsularni antigeni unakrsno reagiraju s antiserumima na antigene streptokoka skupina A i B, kao i sa serumima na antigene Klebsiella i Escherichia. Tijekom prijelaza iz S u R-oblik gube se kapsularni antigeni. Za serotipizaciju pneumokoka proizvode se grupni serumi, označeni latiničnim slovima (A, B, C, D itd.) i serovarijanti, označeni rimskim brojevima. Aglutinirajući serum III nije uključen u mješavine seruma. Pušta se zasebno i ne može se uzgajati. Kod ljudi se najčešće izoliraju pneumokoki I, II i III serotipa. Oni su najvirulentniji za ljude, pa se reakcija aglutinacije inicijalno postavlja pomoću antiseruma za te varijante. Ako je rezultat negativan, postavlja se reakcija aglutinacije s mješavinom seruma A, B, C itd. (do dobivanja pozitivnog rezultata), a potom odvojenim antiserumima. Za bržu identifikaciju serovara koristi se Neufeldova reakcija (imuno bubrenje kapsule). Metoda se temelji na sposobnosti pneumokoknih kapsula da se povećaju u volumenu u prisutnosti homolognog antiseruma, što se bilježi svjetlosno-optičkom mikroskopijom. Kapsularni polisaharidi imaju senzibilizirajuća svojstva, koja se očituju u razvoju reakcije preosjetljivosti odgođenog tipa, otkrivene kožnim testovima.

faktori patogenosti. Glavni čimbenik je kapsula koja štiti bakterije od mikrobicidnog potencijala fagocita i odvodi ih od djelovanja opsonina. Neinkapsulirani sojevi su praktički avirulentni i rijetki. Većina skupine antipneumokoknih AT su kapsule AT do Ag. Važna funkcija kapsule i M-proteina također je osigurati prianjanje na sluznicu. Bitna je tvar-C, koja specifično djeluje s C-reaktivnim proteinom. Posljedica takvog odgovora je aktivacija komplementarne kaskade i oslobađanje medijatora akutne faze upale; njihovo nakupljanje u plućnom tkivu potiče migraciju polimorfonuklearnih fagocita. Stvaranje snažnih upalnih infiltrata popraćeno je kršenjem homeostaze plućnog tkiva i njegovom hepatizacijom. Pneumokoki proizvode endotoksin, a- i b-hemolizine (pneumolizine), leukocidin. a-pneumolizin je termolabilan protein sposoban neutralizirati 0-streptolizin,

eritrogena tvar, neuraminidaza. Pneumokoki također sintetiziraju brojne enzime koji pridonose patogenezi lezija - muramidazu, hijaluronidazu (promiče širenje mikroorganizama u tkivima), peptidazu (cijepa IgA).

Patogeneza lezija. Biotop pneumokoka je gornji dišni put. Patogeneza većine pneumonija uključuje aspiraciju sline koja sadrži S. pneumoniae i ulazak bakterija u donje dišne ​​putove. Povreda zaštitnih drenažnih mehanizama - šok kašlja i bitan je mukocilijarni klirens. U odraslih se češće opažaju lobarne lezije pluća, u djece i starijih osoba dominiraju peribronhijalne ili žarišne lezije. Stvaranje snažnih upalnih infiltrata popraćeno je kršenjem homeostaze plućnog tkiva i njegovom hepatizacijom. Infekcije s najvirulentnijim serovarom 3 mogu biti popraćene stvaranjem šupljina u plućnom parenhimu. Iz primarnog žarišta uzročnik može prodrijeti u pleuralnu šupljinu i perikard ili se diseminirati hematogeno i izazvati meningitis, endokarditis i lezije zglobova.

Kliničke manifestacije. Klasična pneumokokna pneumonija počinje iznenada; primijetite porast tjelesne temperature, produktivan kašalj i bol u prsima. U oslabljenih osoba i starijih osoba bolest se razvija sporo, s blagom temperaturom, poremećajem svijesti i znakovima zatajenja plućnog srca. Streptokokni meningitis bilježi se u svim dobnim skupinama; karakterizirani su burnim početkom s porastom tjelesne temperature, ukočenošću vratnih mišića, glavoboljom, mučninom i povraćanjem. Meningealne vaskularne lezije često su popraćene gubitkom svijesti; među djecom iu starijoj dobi smrtnost može doseći 80%. Hematogene pneumokokne lezije, kao i sinusitis, mastoiditis, otitis media, endokarditis i peritonitis, vrlo su česte u imunokompromitiranih osoba (npr. zaraženih HIV-om) ili pacijenata sa splenektomijom. Nakon bolesti razvija se nestabilna imunost koja je tipospecifične prirode i zbog pojave antitijela na tipični kapsularni polisaharid.

Liječenje. Osnova terapije pneumokokne infekcije su antibiotici - penicilin, tetraciklin, levomicetin, vankomicin, rifampicin, ceftriakson.

Prevencija. Nespecifična prevencija pneumokoknih infekcija usmjerena je na identifikaciju bolesnika i nositelja s njihovim naknadnim liječenjem. Za specifičnu prevenciju infekcije polivalentnim polisaharidnim cjepivom Pneumovex 23 cijepe se djeca starija od dvije godine, rizične odrasle osobe, kao i zdrave osobe tijekom izbijanja bolesti. Lijek sadrži 23 pneumokokna kapsularna polisaharidna antigena (1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 19A, 20, 22F, 23F, 33F). Antigeni

pneumokoki su dobiveni iz 90% sojeva izoliranih iz krvi pacijenata s invazivnom pneumokoknom infekcijom u SAD-u i odgovaraju sojevima koji se susreću u Rusiji. Imunizacija se provodi dva puta u razmaku od 5-8 godina.

Nakon cijepljenja stvara se umjetna, aktivna, tipospecifična imunost.

Laboratorijska dijagnostika. “Zlatni standard” je izolacija uzročnika. Treba imati na umu da se materijal mora brzo ispitati, jer. bakterije su sklone brzoj autolizi zbog aktivnosti unutarstaničnih enzima. Materijal za studiju je ispljuvak, pleuralni izljev i drugi eksudati, cerebrospinalna tekućina, krv, sluz iz nosa i grla, iscjedak iz očnih ulkusa, iscjedak iz uha, urin, komadići organa (u slučaju smrti pacijenta) . Signalni odgovor na pneumokoknu infekciju može se dati ako se u razmazima sputuma otkriju neutrofili i Gram-pozitivni lanceolatni diplokoki (najmanje 10 po vidnom polju). Inače, pribjegnite izolaciji patogena.

Prva faza studije. Patološki materijal se podvrgava preliminarnoj bakterioskopiji (osim krvi). Sputum se stavi u sterilnu Petrijevu zdjelicu, ispere, omčom se uhvati gnojno-sluzava kvržica, utrlja na predmetno staklo, osuši i oboji po Gramu. U razmazu se nalaze gram-pozitivne koke kopljastog ili ovalnog oblika okružene kapsulom (stvaranje kapsule se opaža samo kod pneumokoka izoliranih od bolesnih i zaraženih životinja). Identifikacija pneumokoknih kapsula može se provesti metodom Burri-Gins. Inokulacija patološkog materijala provodi se na 5-10% krvnog ili serumskog agara i podloge za obogaćivanje (8-10% serumskog bujona). Ako se sumnja na pneumokoknu sepsu, 5-10 ml krvi bolesnika inokulira se u 45-90 ml serumskog bujona. Cerebrospinalna tekućina, ako je bistra, centrifugira se i nekoliko kapi iz sedimenta inokulira na hranjive podloge. Kao medij za obogaćivanje koristi se polutekući serum agar. Kulture su inkubirane na 37°C 24 sata. Najbolja metoda za izolaciju čiste kulture pneumokoka je inficiranje bijelih miševa patološkim materijalom. Iskašljaj, ispran u Petrijevoj zdjelici sterilnom fiziološkom otopinom, melje se u sterilnom tarioniku sterilnim tučkom ili lomljenim staklom uz dodatak fiziološke otopine u omjeru 1:2-1:5. Suspenzija se taloži, supernatant u količini od 0,5-1 ml se daje bijelim miševima intraperitonealno. U prisutnosti pneumokoka u materijalu miševi uginu unutar 72 sata. U razmazima iz organa i krvi nalaze se tipični pneumokoki. Organi i krv također se uzgajaju na serumskom bujonu i na Petrijevim zdjelicama s krvlju ili serumskim agarom.

Druga faza studije. Proučite prirodu rasta na hranjivim medijima. Na krvnom agaru kolonije pneumokoka su male, okrugle, glatke

rubovi, nježni, okruženi zonom ozelenjavanja okoliša (što jako podsjeća na rast zelenih streptokoka). Na serumskom agaru kolonije su nježne, prozirne i prozirne. Bakterioskopijom razmaza obojenih po Gramu. naći Gram-pozitivne diplokoke bez kapsula. Nakon bakterioskopije, kolonije sumnjive na pneumokoke supkultiviraju se na kosi serum ili krvni agar ili serumski bujon. Mikroskopiranjem razmaza iz medija za obogaćivanje, uz različitu mikrofloru, mogu se otkriti gram-pozitivni koki raspoređeni u parovima ili kratkim lancima. Materijal iz medija za obogaćivanje prenosi se na čvrste hranjive medije. Usjevi se inkubiraju na 37°C 24 sata.

Treća faza studije. Na kosom krvnom agaru pneumokoki stvaraju nježnu, tanku, prozirnu prevlaku. Na juhi od sirutke pneumokoki uzrokuju zamućenje i svijetli talog. U razmazima iz čvrstih podloga za kulture, pneumokoki mogu imati različit izgled. Uz diplokoke izduženog oblika sa šiljastim vanjskim krajevima koji podsjećaju na plamen svijeće, nalaze se stanice pravilnog ovalnog i okruglog oblika. U bujonskoj kulturi pneumokoki su često raspoređeni u lance. Na temelju morfoloških i kulturalnih svojstava pneumokoke je teško razlikovati od viridescentnih streptokoka, stoga je predložen niz posebnih testova za njihovo razlikovanje:

Topljivost u žuči (test deoksiholata);

Sposobnost razgradnje inulina;

Osjetljivost na optohin;

Reakcija aglutinacije sa specifičnim anti-pneumokoknim serumima;

Sposobnost razgradnje glukoze, maltoze, saharoze, laktoze, manitola, sorbitola i salicina.

Najpristupačnije metode razlikovanja pneumokoka od ostalih streptokoka su test s optohinom (inhibira njihov rast); od zelenih streptokoka razlikuju se sposobnošću fermentacije inulina, kao i osjetljivošću na žuč.

Test deoksiholata. Nakon preliminarne bakterioskopije, 10 kapi izolirane čiste kulture (poželjno bujona) doda se u epruvetu s 5 kapi sterilne goveđe žuči. Kontrola je kultura unesena u epruvetu s 5 kapi fiziološke otopine. Nakon 30-60 minuta inkubacije na 37 °C uočena je potpuna liza kulture u obliku bistrenja u epruveti sa žuči, smjesa ostaje mutna u kontrolnoj epruveti. Treba imati na umu da su avirulentne kulture pneumokoka otporne na žuč.

Otpornost na žuč također se može ispitati inokulacijom u 10% žučnog bujona. Ispitni materijal se dodaje mediju, dok se juha zamuti. Nakon 24-satne inkubacije na 37°C, prisutnost pneumokoka bit će naznačena bistrenjem bujona kao rezultat bakterijske lize.

Također možete koristiti diskove natopljene 20% otopinom žuči. Diskovi se stavljaju na uzgojenu kulturu u zdjelici i inkubiraju 1-2 sata na 37°C. U prisutnosti pneumokoka, kolonije liziraju oko diska na udaljenosti od 1-2 mm.

Inulin test. Kultura pneumokoka se nasađuje na podlogu s inulinom. Da biste to učinili, 200 ml sterilne destilirane vode, 18 ml tinkture lakmusa i 3 g inulina doda se u 100 ml goveđeg seruma koji se zagrijava na 56 ° C 30 minuta, sterilizira se parom koja teče 30 minuta. Kulture su inkubirane na 37°C 24 sata. Pneumokok razgrađuje inulin, uzrokujući crvenu boju medija. Zeleni streptokok ne uzrokuje crvenilo medija.

Test s optochinom. Testirana pneumokokna kultura inokulira se u serumski bujon s optohinom u razrjeđenju 1:100 000 ili 1:200 000. Pneumokok ne raste na takvoj sredini. Također je moguće odrediti osjetljivost na optohin inokulacijom na 10% krvni agar koji sadrži optohin u razrjeđenju 1:50 000. Kontrola je kultura na krvni agar. Pneumokoki ne rastu na podlozi s Optochinom, rast pneumokoka uočava se na kontrolnoj podlozi. Mogu se koristiti diskovi impregnirani sa 6 μg optohina koji se nakon inokulacije nanose na površinu podloge. Kod pneumokoka se oko diska formira zona inhibicije rasta promjera najmanje 18 mm.

Test virulencije. Dnevna kultura pneumokoka uzgojenog na bujonu sirutke razrijedi se 1% sterilnom peptonskom vodom (pH - 7,6) ili blago alkalnom bujonom u omjeru 1:10. Razrijeđena kultura se daje intraperitonealno bijelim miševima težine 16-20 g u volumenu od 0,5 ml i promatra se 72 sata. Iz organa uginulog miša rade se inokulacije na hranjive podloge i mikroskopski pregledavaju razmazi-otisci. Visoko virulentne kulture uključuju pneumokoke koji uzrokuju smrt miševa nakon unošenja kulture u razrjeđenju 1:10. Avirulentne kulture ne uzrokuju smrt kod miševa.

Serotipizacija pneumokoka. 18-satna kultura testirana je Sabinovim mikroaglutinacijskim testom. 4 kapi kulture pneumokoka nanesu se na predmetno staklo. U 1 kap dodajte kap antipneumokoknog seruma tipa 1, u 2. - serum tipa II, u 3. - serum - 111, u 4. - kap normalnog seruma. Smjese na staklu miješaju se petljom i ispituju pod povećalom ili pod mikroskopom pri malom povećanju. U pozitivnom slučaju, aglutinacija se opaža u jednoj od prve tri kapi. Tip pneumokoka određuje se u reakciji aglutinacije sa specifičnim aglutinirajućim serumima prva tri fiksna tipa. Kulture koje ne aglutiniraju s ovim vrstama seruma svrstavaju se u X-skupinu. Reakcija je postavljena kako slijedi. Ulijte 18-satnu bujonsku kulturu u 0,5 ml u epruvete. Zatim dodajte jednaku količinu seruma, razrijeđenog fiziološkom otopinom u omjeru 1:5. Kontrole su 2 epruvete od kojih jedna sadrži ispitnu kulturu pomiješanu s

normalni zečji serum, a drugi - samo testna kultura. Sadržaj epruveta se dobro protrese i stavi na 2 sata u termostat na temperaturu od 37 °C, nakon čega se provodi preliminarno izračunavanje reakcije. Konačni rezultati bilježe se nakon dodatne inkubacije na sobnoj temperaturi od 20 sati. Aglutinacija se ocjenjuje s četiri plus ako je sadržaj epruveta potpuno bistar i ako je aglutinacijska kultura gusti film koji se ne lomi pri mućkanju; s tri plusa ako se, uz potpuno bistrenje sadržaja epruvete, aglutinirajuća kultura lako razbije na dijelove; dva plusa - ako ne dođe do prosvjetljenja, čestice aglutinirane kulture jasno su vidljive golim okom u mutnom sadržaju epruvete; aglutinacijom za jedan plus u epruveti se nalazi sitnozrnasta smjesa slijepljenih pneumokoka. S negativnom reakcijom vidljivom oku, aglutinacija se ne opaža;

sadržaj epruveta nakon mućkanja je jednolična mutnoća.

Tipizacija pneumokoka X-skupine provodi se pomoću skupine

serumi koji sadrže mješavinu uzetih tipičnih aglutinirajućih seruma

u jednakim volumenima. Sljedeći skupni serumi pripremljeni su od strane

miješanje jednakih volumena nerazrijeđene standardne dijagnostike

sera (Lund, 1960):

A -1, II, IV, V, XVIII serovari;

B - VI, VIII, XIX serovari;

C - VII, XX. XXIV, XXXI, XL serovari;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII serovari;

E - X, XXI. XXXIII, XXXIX serovari;

F-XII. XVII. XXII, XXXVII, XXXII, XLI serovari;

G - XIII, XXV. XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII serovari;

J-XLIII. XLIV, XLV, XLVI serovari.

Aglutinacijski serum tipa III koristi se per se (bez miješanja s drugim tipičnim serumima) zbog poteškoća u dobivanju dovoljno visokog titra. Tipizacija se provodi u dva koraka: najprije pomoću grupnih seruma, a potom pojedinačnih seruma skupine s kojima je dobivena pozitivna reakcija. Serotipizacija pneumokoka prvenstveno se koristi za epidemiološke studije rezultata specifične seroterapije i seroprofilakse.

Mikroaglutinacija pneumokoka Sabinovom metodom može se dobiti miješanjem antipneumokoknih seruma s eksudatom iz trbušne šupljine miša zaraženog sputumom bolesnika. Već četiri sata nakon infekcije u eksudatu se nalazi čista kultura pneumokoka koja daje pozitivnu Sabinovu aglutinaciju.

Ubrzane metode otkrivanja i tipizacije pneumokoka. 1. Neufeldova metoda ili fenomen bubrenja kapsule pneumokoka. Jedna grudica svježe izoliranog ispljuvka bolesnika se aplicira na tri

pokrovna stakalca, na svako dodati kap nerazrijeđenog specifičnog antipneumokoknog seruma (1, II, III tip) i kap Loefflerovog modrila. Kapi se temeljito promiješaju, prekriju predmetnim staklom s rupom po rubovima namazanim vazelinom. Nakon dvije minute viseće kapljice pregledaju se pod mikroskopom s imerzijskim sustavom. U pozitivnom slučaju vidi se naglo povećanje pneumokoknih kapsula. S negativnim rezultatom, kapsule se jedva njeguju. Reakcija bubrenja je specifična i ne daje pozitivan rezultat kod drugih kapsularnih bakterija. Ne koristim ga za proučavanje sputuma pacijenata liječenih sulfonamidima i antibioticima, tk. u tom slučaju mogu se izolirati kapsularni pneumokoki.

2. Metoda taloženja. 5-10 ml sputuma kuha se u vodenoj kupelji dok se ne dobije gusti ugrušak. Ugrušak se triturira i doda se mala količina fiziološke otopine, ponovno kuha nekoliko minuta kako bi se iz pneumokoka ekstrahirao specifični polisaharid. Suspenzija se centrifugira, s dobivenom bistrom tekućinom i specifičnim tipičnim serumima u epruvetama za taloženje provodi se reakcija prstenaste precipitacije. Pojava prstena na granici između tekućina ukazuje na pozitivan rezultat.

3. Određivanje pneumokoknih kapsula po Burriju. Kap ispitnog materijala i kap tinte nanese se na kraj predmetnog stakla. Smjesa se promiješa i napravi razmaz, suši na zraku i bez fiksiranja mikroskopira. Pozadina lijeka je tamno dimljena, mikrobna tijela i njihove kapsule nisu obojene. Preparat napravljen prema Burriju može se fiksirati Nikiforovljevom smjesom, isprati vodom, bojati Tsilya fuksinom, razrijeđenim 1:3 3-5 minuta. Na tamnoj pozadini razmaza ističu se neobojene kapsule unutar kojih se nalaze bakterije svijetle grimizne boje (Ginsova metoda).

šarlah uzročnici raznih serotipova beta-hemolitičkih streptokoka s M-antigenom koji proizvode eritrogenin (toksigeni streptokoki serogrupe A) - (Streptococcus pyogenes). U nedostatku antitoksičnog imuniteta javlja se šarlah, u prisutnosti angine.

Klinička slika

 Intoksikacija - groznica, opća slabost, glavobolje.

 Skarlatinasti osip - sitno točkast, umjerenim pritiskom staklenom lopaticom točkice su jasnije vidljive. Kad se jače pritisne, osip postaje zlatno-žućkasti ton kože. Pojavljuje se 1-3 dana bolesti i lokaliziran je uglavnom na obrazima, u preponama, na stranama tijela. Koža nazolabijalnog trokuta ostaje blijeda i bez osipa. Osip obično traje 3-7 dana, zatim nestaje, ne ostavljajući pigmentaciju. Karakterizira zadebljanje osipa na naborima udova - aksilarni, lakat, poplitealna područja.

 Grimizni jezik - 2-4. dana bolesti bolesnikov jezik postaje izraženo zrnast, svijetlo crven, takozvani "grmizni" jezik.

 Angina je stalni simptom šarlaha. Može biti ozbiljnije od uobičajene upale grla.

 Ljuštenje kože - javlja se nakon nestanka osipa (14 dana od početka bolesti): u predjelu dlanova i stopala je krupnolamelarno, počinje od vrhova prstiju; na trupu, vratu, ušnim školjkama ljuskavo ljuštenje.

Pneumokoki, taksonomija. Svojstva. Serološke skupine. Razlike od drugih streptokoka. Izazvane bolesti. Principi i metode laboratorijske dijagnostike.

Morfologija i biološka svojstva. Pneumokok (Streptococcus pneumoniae) je parni kok ovalnog, blago izduženog lancetastog oblika, nalik na plamen svijeće. Također se mogu nalaziti u kratkim lancima, nalik na streptokoke. Nepokretni su, ne stvaraju spore i gram-pozitivni su.
Uzgajaju se na podlozi s dodatkom proteina: krv, serum, ascitna tekućina. Na krvnom agaru pneumokokne kolonije su male, nalik kapljicama rose, prozirne u prolaznom svjetlu, s udubljenim središtem, okružene zonom nepotpune hemolize, zelenkaste nijanse, slične kolonijama viridescentnog streptokoka. Na tekućim medijima daju blago zamućenje, ponekad stvarajući talog. Biokemijski su prilično aktivni: razgrađuju glukozu, laktozu, maltozu, inulin i druge ugljikohidrate uz stvaranje kiseline, ne ukapljuju želatinu, ne stvaraju indol. Cijepanje inulina je diferencijalna dijagnostička značajka koja pomaže razlikovati pneumokoke od streptokoka, koji ne razgrađuju inulin. Važna značajka razlikovanja je sposobnost pneumokoka da se otopi u žuči, dok su streptokoki dobro očuvani u njemu.

Patogeneza i klinika. Pneumokoki su uzročnici lobarne pneumonije kod ljudi. Također mogu uzrokovati puzajuće čireve na rožnici, katare gornjih dišnih putova, meningitis, endokarditis, oštećenja zglobova i druge bolesti.

Imunitet nakon bolesti je slabo napet, kratkotrajan, tipospecifičan.
Mikrobiološka dijagnostika. Materijal za studiju je ispljuvak, krv, bris grla, cerebrospinalna tekućina. Zbog činjenice da pneumokok brzo umire, patološki materijal mora se što prije dostaviti u laboratorij radi istraživanja.

Meningokok. Taksonomija, svojstva. Antigenska struktura meningokoka, klasifikacija. Patogeneza meningokokne infekcije, kliničke manifestacije. Principi i metode mikrobiološke dijagnostike. Razlikovanje uzročnika meningokokne infekcije i drugih meningokoka. specifična profilaksa.

N. meningitidis (meningokok).

Meningokok je uzročnik meningokokne infekcije - teška antroponoza s prijenosom uzročnika kapljicama u zraku. Glavni izvor su nosači. Prirodni rezervoar je ljudski nazofarinks. Morfološka, ​​kulturalna i biokemijska svojstva slična su gonokoku. Razlike - fermentiraju ne samo glukozu, već i maltozu, proizvode hemolizin. Imaju kapsulu koja je veća i ima drugačiju strukturu od one kod gonokoka.

antigenski sastav. Imaju četiri glavna antigenska sustava.

1. Polisaharidni antigeni specifični za kapsularnu skupinu. Sojevi serogrupe A najčešće uzrokuju izbijanje epidemija.

2. Proteinski antigeni vanjske membrane. Prema tim antigenima meningokoke serogrupe B i C dijele se na klase i serotipove.

3. Antigeni specifični za rod i vrstu.

4. Lipopolisaharidni antigeni (8 vrsta). Imaju visoku toksičnost, uzrokuju pirogeni učinak.

faktori patogenosti.Čimbenici adhezije i kolonizacija - proteini pili i vanjske membrane. Čimbenici invazivnosti - hijaluronidaza i drugi proizvedeni enzimi (neuraminidaza, proteaze, fibrinolizin). Veliku važnost imaju kapsularni polisaharidni antigeni koji štite mikroorganizme od fagocitoze.

Imunitet otporan, antimikrobni.

Laboratorijska dijagnostika na temelju bakterioskopije, izolacije kulture i njezine biokemijske identifikacije, seroloških dijagnostičkih metoda. Inokulacija materijala provodi se na čvrste i polutekuće hranjive podloge koje sadrže krv, ascitnu tekućinu i krvni serum.

Smatra se da kulture pozitivne na oksidazu pripadaju rodu Neisseria. Meningokoke karakterizira fermentacija glukoze i maltoze. Pripadnost serogrupi utvrđuje se u testu aglutinacije (RA).

Gonokok. Taksonomija, svojstva. Patogeneza gonokokne infekcije, značajke imuniteta. Principi i metode laboratorijske dijagnostike akutne i kronične gonoreje, blennoreje. RSK Borde-Zhangu, svrha, mehanizam, računovodstvo odgovora. Prevencija blennoreje u novorođenčadi. Prevencija i liječenje gonoreje. specifična terapija.

N.gonorrheae (gonokok).

Gonokok je uzročnik gonoreje, spolno prenosive bolesti s upalnim manifestacijama u mokraćnom sustavu. Supstrat za kolonizaciju je epitel uretre, rektuma, spojnice oka, ždrijela, vrata maternice, jajovoda i jajnika.

Diplokoke se dobro boje metilenskim modrilom i drugim anilinskim bojama, pleomorfne (polimorfizam). Vrlo hirovit prema uvjetima uzgoja i hranjivim medijima. Od ugljikohidrata fermentira samo glukoza.

Antigenska struktura vrlo varijabilan – karakteriziran faznim varijacijama (nestankom antigenih determinanti) i antigenskim varijacijama (promjenama antigenih determinanti).

faktori patogenosti. Glavni faktori su popili, uz pomoć kojih gonokoki vrše adheziju i kolonizaciju epitelnih stanica sluznice mokraćnog sustava, te lipopolisaharid(endotoksin, koji se oslobađa tijekom uništavanja gonokoka). Gonokoki sintetiziraju IgAI, proteazu koja cijepa IgA.

Laboratorijska dijagnostika. Bakterioskopska dijagnostika uključuje bojenje po Gramu i metilensko modrilo. Tipični znakovi gonokoka su gram-negativno bojenje, diplokoki u obliku graha, intracelularna lokalizacija.

Sjetva se provodi na posebnim podlogama (KDS-MPA iz mesa kunića ili goveđeg srca sa serumom, ascites-agar, krvni agar).

Uzročnici plinovito anaerobne infekcije. Taksonomija. Svojstva. karakteristike toksina. Patogeneza, klinički oblici. Principi i metode laboratorijske dijagnostike, lijekovi za specifičnu prevenciju i liječenje.

Plinska gangrena je anaerobna poliklostridijalna (tj. uzrokovana raznim vrstama klostridija) rana (traumatska) infekcija. Od primarne važnosti je C.perfringens, rjeđe C.novyi, kao i druge vrste klostridija u postojanim međusobnim asocijacijama, aerobni piogeni koki i truležne anaerobne bakterije.

C.perfringens je normalan stanovnik crijeva ljudi i životinja, u tlo ulazi izmetom. Uzročnik je infekcije rane – uzrokuje bolest kada uzročnik uđe u ranu u anaerobnim uvjetima. Vrlo je invazivan i toksigen. Invazivnost je povezana s proizvodnjom hijaluronidaze i drugih enzima koji destruktivno djeluju na mišićno i vezivno tkivo. Glavni faktor patogenosti – egzotoksin, koji ima hemo-, nekro-, neuro-, leukotoksične i letalne učinke. Sukladno antigenskoj specifičnosti egzotoksina, oni se izoliraju serotipovi uzročnik bolesti. Uz plinsku gangrenu C. perfringens uzrokuje trovanje hranom (temelje se na djelovanju enterotoksina i nekrotoksina).

Značajke patogeneze. Za razliku od gnojnih bolesti uzrokovanih aerobima, kod anaerobne infekcije ne dominira upala, već nekroza, edem, stvaranje plinova u tkivima, trovanje toksinima i produktima raspadanja tkiva.

Imunitet- pretežno antitoksičan.

Laboratorijska dijagnostika uključuje mikroskopiranje iscjetka iz rane, izolaciju i identifikaciju patogena, detekciju i identifikaciju toksina u biološkim testovima pomoću reakcije neutralizacije sa specifičnim antitoksičnim antitijelima.

Prevencija i liječenje. Prevencija plinske gangrene temelji se na pravodobnoj i pravilnoj kirurškoj obradi rana. U slučaju teških rana, daju se antitoksični serumi protiv glavnih vrsta klostridija, po 10 tisuća IU, u medicinske svrhe - po 50 tisuća IU.

Clostridia tetanus. Taksonomija. Svojstva, karakteristike toksina. Patogeneza bolesti. Silazni tetanus. Klinika. Principi i metode laboratorijske dijagnostike. Svrha bakterioloških istraživanja, priprema za specifičnu prevenciju i liječenje.

Tetanus je akutna infekcija rane koju karakteriziraju lezije neurotoksin motornih stanica leđne moždine i mozga, što se očituje u vidu grčeva poprečno-prugaste muskulature. Obolijevaju ljudi i domaće životinje. Tlo, posebno onečišćeno ljudskim i životinjskim izmetom, stalni je izvor zaraze tetanusom.

Patogen - C.tetani - veliki gram-pozitivni bacil koji stvara spore. Spore su terminalno smještene (vrsta batka), pokretne zahvaljujući flagelama - peritrihousne. Obavezan anaerobni. Spore su vrlo otporne.

antigenska svojstva. Uzročnik ima O- i H- antigene.

faktori patogenosti. Glavni faktor je najjači egzotoksin. Razlikuju se njegove dvije glavne frakcije - tetanospazmin (neurotoksin) i tetanolizin (hemolizin). Neurotoksin u središnjem živčanom sustavu prodire u područje mioneuralnih sinapsi, prenosi se s neurona na neuron u području sinapsi, nakuplja se u motornim područjima kralježnice i mozga, blokira sinaptički prijenos. Smrt nastupa od paralize respiratornog centra, asfiksije (oštećenje mišića grkljana, dijafragme, međurebarnih mišića) ili paralize srca.

Laboratorijska dijagnostika. Mikrobiološka dijagnostika uključuje bakterioskopiju sirovina, kulturu za izolaciju uzročnika i njegovu identifikaciju, detekciju toksina tetanusa.

Izolacija uzročnika provodi se prema standardnoj shemi za anaerobe, koristeći različite guste i tekuće (Kitt-Tarozzi medij) medije, identifikacija se temelji na morfološkim, kulturalnim, biokemijskim i toksigenim svojstvima.

Najjednostavnija i najučinkovitija metoda mikrobiološke dijagnostike je biotest na bijelim miševima. Jedna skupina je zaražena ispitivanim materijalom, druga (kontrola) - nakon miješanja uzoraka s antitoksičnim tetanusnim serumom. U prisutnosti toksina tetanusa pokusna skupina miševa umire, dok kontrolna ostaje živa.

Liječenje i hitna prevencija. Koriste se donorski tetanusni imunoglobulin (antitoksin), antitoksični serum (350 IU/kg), antibiotici (penicilini, cefalosporini). Za stvaranje vakcinalnog imuniteta koristi se tetanus toksoid, češće u sklopu DTP cjepiva (tetanus toksoidi, difterija i hripavac).

Clostridia botulinum. Taksonomija. Svojstva. Obilježja toksina, razlika od egzotoksina uzročnika drugih infekcija koje se prenose hranom. Principi i metode laboratorijske dijagnostike. Lijekovi za specifičnu prevenciju i liječenje.

Botulizam je teško trovanje hranom povezano s uporabom proizvoda kontaminiranih s C.botulinum, a karakterizira ga specifična lezija središnjeg živčanog sustava. Ime je dobila od lat. botulus - kobasica.

Osobine ekscitera. Veliki polimorfni gram-pozitivni štapići, pokretni, imaju peritrihous flagella. Spore su ovalne, nalaze se subterminalno (teniski reket). Formira se osam tipova toksina koji se razlikuju po antigenskoj specifičnosti, te se prema tome izdvaja 8 tipova patogena. Među najvažnijim karakteristikama je prisutnost ili odsutnost proteolitičkih svojstava (hidroliza kazeina, proizvodnja sumporovodika).

Toksin ima neurotoksični učinak. Toksin ulazi u tijelo s hranom, iako se vjerojatno može akumulirati kada se patogen razmnožava u tkivima tijela. Toksin je termolabilan, iako je za potpunu inaktivaciju potrebno kuhanje do 20 minuta. Toksin se brzo apsorbira u gastrointestinalnom traktu, prodire u krv, selektivno djeluje na jezgre produžene moždine i ganglijske stanice leđne moždine. Razvijaju se neuroparalitički fenomeni - poremećaji gutanja, afonija, disfagija, oftalmoplegični sindrom (strabizam, dvoslike, spušteni kapci), paralize i pareze mišića ždrijela i grkljana, respiratorni i srčani zastoj.

Laboratorijska dijagnostika. Principi su zajednički za klostridije.

Liječenje i prevencija. Osnova je rana uporaba antitoksičnih seruma (polivalentnih ili, kada se utvrdi tip, homolognih). Prevencija se temelji na sanitarno-higijenskom režimu u preradi prehrambenih proizvoda. Posebno su opasni domaći konzervirani šampinjoni i drugi proizvodi koji se čuvaju u anaerobnim uvjetima.

11. Pseudomonas aeruginosa. Taksonomija. Svojstva. Izazvane bolesti.
Uloga u nozokomijalnim infekcijama. Principi i metode laboratorijske dijagnostike.

Rod pseudomonas, P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) jedan je od glavnih uzročnika lokalnih i sustavnih gnojno-upalnih procesa u medicinskim bolnicama.

Uzročnik je sveprisutan (voda, tlo, biljke, životinje), normalno se javlja u čovjeka (najčešće u crijevima, na koži i sluznicama). Morfologija- Gram-negativni ravni ili blago zakrivljeni štapići, pokretni, smješteni u razmazima pojedinačno, u parovima ili u kratkim lancima. Sintetizira sluz (kapsularnu tvar), osobito virulentnije mukoidne sojeve.

kulturnih dobara. To je aerob i ima skup enzima koji odgovaraju tipu disanja (citokromi, citokrom oksidaza, dehidraze). Na tekućim medijima stvara sivkasto-srebrni film. Na gustim medijima često se opaža fenomen iridescentne lize. kraj dana zbog sinteze pigmenta piocijanin pojavljuje se plavozelena boja kulture.

biokemijska svojstva. Pseudomonas aeruginosa karakterizira niska saharolitička aktivnost (oksidira samo glukozu), visoka proteolitička aktivnost i stvaranje zone beta-hemolize na krvnom agaru. Sintetizira trimetilamin, koji daje usjevima ugodan miris jasmina. Proizvodi proizvodnju bakteriocina - piocini.

Antigena i patogena svojstva. Glavni antigeni Pseudomonas aeruginosa su somatski O-antigen specifičan za skupinu i flagelarni H-antigen specifičan za tip. O-antigenski kompleks - agregat LPS s proteinima i lipidima stanične stijenke, ima svojstva endotoksina, jedan je od glavnih čimbenika patogenosti. Pseudomonas aeruginosa ima veliki skup čimbenika patogenosti - endotoksin (LPS, sličan drugim gram-negativnim bakterijama), niz egzotoksina - citotoksin, egzoenzim S, hemolizini, egzotoksin A (najvažniji, nalikuje egzotoksinu difterije), enzime (kolagenaza). , neuraminidaza, proteaze).

Laboratorijska dijagnostika. P.aeruginisa je dobila ime po plavkasto-zelenom obojenju rana i zavoja koji se mogu odvojiti. Glavna dijagnostička metoda je bakteriološka. Važna je detekcija pigmenta piocijanina. Liječenje i specifična prevencija. Ne postoji specifična prevencija. Kod trovanja hranom i crijevne disbakterioze uzrokovane Pseudomonas aeruginosa, učinkovit je složeni crijevni bakteriofag koji uključuje pseudomonas fag. Od antibakterijskih lijekova češće se koriste aminoglikozidi, cefalosporini i kinoloni.

Uvjetno patogene gram-negativne bakterije - uzročnici gnojno-upalnih procesa (Proteus, Klebsiella, čudotvorna šipka itd.), Taksonomija. Opće karakteristike enterobakterija. Principi i metode laboratorijske dijagnostike.

Rod Klebsiella.

Rod Klebsiella pripada obitelji Enterobacteriaceae. Značajka predstavnika roda je sposobnost formiranja kapsule. Glavna vrsta je K. Pneumoniae. Uzrokuju oportunističke lezije - bolničku pneumoniju, infekcije mokraćnog sustava, proljev u novorođenčadi. Klebsiella uzrokuje mastitis, septikemiju i upalu pluća kod životinja, stalno se nalazi na koži i sluznicama ljudi i životinja. Klebsiella - ravni, nepomični štapići različitih veličina. fakultativni anaerobi. Oksidaza – negativna, katalaza – pozitivna.

faktori patogenosti. To uključuje polisaharidnu kapsulu (K-antigen), endotoksin, fimbrije, sideroforni sustav (veže ione željeza i smanjuje njihov sadržaj u tkivima), termolabilne i termostabilne egzotoksine.

Kliničke manifestacije. K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) karakteriziraju bolnički bronhitis i bronhopneumonija, lobarna pneumonija, infekcije mokraćnog sustava, lezije moždanih ovojnica, zglobova, kralježnice, očiju, kao i bakterijemija i septikopiemija. Podvrsta ozaenae uzrokuje poseban oblik kroničnog atrofičnog rinitisa - jezero.

Laboratorijska dijagnostika. Glavna metoda je bakteriološka. Liječenje. Jedna od značajki Klebsiella je njihova otpornost na više lijekova i razvoj lezija na pozadini smanjenja otpornosti tijela. Antibiotici se koriste za generalizirane i trome kronične oblike Klebsiellesis, obično u kombinaciji s lijekovima koji stimuliraju imunološki sustav.

Rod Proteus.

Rod Proteus pripada obitelji Enterobacteriaceae. Rod je dobio ime u čast sina Posejdona Proteusa, koji je mogao promijeniti svoj izgled. Predstavnici roda mogu promijeniti vanjske manifestacije rasta na gustim hranjivim medijima, a odlikuju se i najvećim pleomorfizmom (varijabilnost morfologije) u usporedbi s drugim enterobakterijama.

Proteini razgrađuju tirozin, vraćaju nitrate, oksidaza je negativna, katalaza je pozitivna. Žive u crijevima mnogih vrsta kralježnjaka i beskralješnjaka, tlu, otpadnim vodama i raspadajućim organskim ostacima. Može uzrokovati infekcije mokraćnog sustava kod ljudi, kao i septičke lezije kod pacijenata s opeklinama i nakon operacija. Često uzrokuju i trovanje hranom. P.vulgaris i P.mirabilis imaju najčešću ulogu u patologiji.

kulturnih dobara. Proteji rastu na jednostavnom mediju u širokom rasponu temperatura. Optimalni pH je 7,2-7,4, temperatura je od +35 do 37 stupnjeva Celzijusa. Kolonije proteusa u O-formi su zaobljene, poluprozirne i konveksne, H-forme kontinuirano rastu. Rast proteja prati truli miris. Karakteristična je pojava rojenja, H-forme daju na MPA karakterističnu puzajuću izraslinu u obliku plavičasto-dimljastog nježnog vela. Kod sjetve prema Shushkevich metodi u kondenzacijskoj vlazi svježe izrezanog MPA, kultura se postupno diže u obliku vela na površinu agara. Na BCH-u se uočava difuzna zamućenost medija s gustim bijelim sedimentom na dnu.

faktori patogenosti. To uključuje LPS stanične stijenke, sposobnost "rojenja", fimbrije, proteaze i ureaze, hemolizine i hemaglutinine.

Laboratorijska dijagnostika. Glavna metoda je bakteriološka. Koriste se diferencijalno dijagnostički mediji (Ploskirev), mediji za obogaćivanje i MPA prema Shushkevich metodi. Liječenje. U slučaju crijevne disbakterioze povezane s proteinima (kolitis), moguće je koristiti proteus fag i pripravke koji ga sadrže (intestifag, koliproteus bakteriofag).

"Čudesni štap" (Serratia marcescens), vrsta bakterija među pigmentnim mikroorganizmima. Gram-negativne pokretne (peritrične) šipke koje ne nose spore. Po vrsti razmjene - fakultativni anaerob. Na površini agara stvara glatke ili zrnate tamno i svijetlo crvene kolonije s metalnim sjajem. Živi u tlu, vodi, hrani. Razvijajući se na kruhu (pri visokoj vlažnosti), u mlijeku, boji ih u crveno; takve proizvode nije dopušteno prodavati. Uvjetno patogen za životinje i ljude; može uzrokovati gnojenje.

13. Escherichia. Taksonomija. Bolesti uzrokovane Escherichiom coli. Patogene varijante dijarejačne Escherichije. Antigenska struktura, klasifikacija. Značajke mikrobiološke dijagnostike. Razlikovanje dijarejačne Escherichije od uvjetno patogene.

Escherichia je najčešća aerobna crijevna bakterija koja pod određenim uvjetima može uzrokovati široku skupinu bolesti čovjeka, kako intestinalne (proljev), tako i ekstraintestinalne (bakterijemija, infekcije mokraćnog sustava i dr.) lokalizacije. Glavna vrsta - E. coli (E. coli) - najčešći uzročnik zaraznih bolesti uzrokovanih enterobakterijama. Ovaj uzročnik je pokazatelj fekalne kontaminacije, posebice vode.

kulturnih dobara. Na tekućim podlogama E. coli daje difuzno zamućenje, na gustim podlogama stvara S- i R-oblike kolonija. Na Endo mediju za Escherichia, Escherichia coli koja fermentira laktozu stvara intenzivno crvene kolonije s metalnim sjajem, nefermentirajuće - blijedo ružičaste ili bezbojne kolonije s tamnijim središtem, na Ploskirevovom mediju - crvene sa žućkastom nijansom, na Levinovom mediju - tamne. plava s metalnim odsjajem .

biokemijska svojstva. Escherichia coli u većini slučajeva fermentira ugljikohidrate (glukozu, laktozu, manitol, arabinozu, galaktozu i dr.) uz stvaranje kiseline i plina, stvara indol, ali ne stvara sumporovodik i ne ukapljuje želatinu.

Glavni čimbenici patogenosti proljevaste E.coli.

1. Čimbenici adhezije, kolonizacije i invazije povezani s pilima, fimbrijalnim strukturama, proteinima vanjske membrane. Kodirani su plazmidnim genima i potiču kolonizaciju donjeg dijela tankog crijeva.

2. Egzotoksini: citotonini (potiču hipersekreciju tekućine stanicama crijeva, remete metabolizam vode i soli i doprinose razvoju proljeva) i enterocitotoksini (djeluju na stanice stijenke crijeva i endotel kapilara).

3. Endotoksin (lipopolisaharid).

Ovisno o prisutnosti različitih čimbenika patogenosti, dijarejačne Escherichia coli dijele se u pet glavnih tipova: enterotoksigene, enteroinvazivne, enteropatogene, enterohemoragične, enteroadhezivne.

4. Patogenu E. coli karakterizira stvaranje bakteriocina (kolicina).

Enterotoksigena E. coli imaju visokomolekularni termolabilni toksin, po djelovanju sličan koleri, uzrokuju proljev sličan koleri (gastroenteritis u male djece, putnički proljev i dr.).

Enteroinvazivna Escherichia coli sposobni prodrijeti i razmnožavati se u stanicama crijevnog epitela. Izazivaju obilne proljeve s primjesama krvi i velikim brojem leukocita (pokazatelj invazivnog procesa) u stolici. Klinički nalikuje dizenteriji. Sojevi imaju neke sličnosti sa Shigella (nepokretni, ne fermentiraju laktozu, imaju visoka enteroinvazivna svojstva).

Enteropatogena E.coli- glavni uzročnici proljeva u djece. U središtu lezija je adhezija bakterija na crijevni epitel s oštećenjem mikrovila. Karakterizira ga vodenasti proljev i teška dehidracija.

Enterohemoragijska Escherichia coli uzrokuju proljev pomiješan s krvlju (hemoragijski kolitis), hemolitičko-uremijski sindrom (hemolitička anemija u kombinaciji s zatajenjem bubrega). Najčešći serotip enterohemoragične Escherichie coli je O157:H7.

Enteroadhezivna E.coli ne stvaraju citotoksine, slabo su proučeni.

Laboratorijska dijagnostika. Glavni pristup je izolacija čiste kulture na diferencijalnoj dijagnostičkoj podlozi i njezina identifikacija prema antigenskim svojstvima. Stavili su RA sa setom polivalentnih OK (na O- i K-antigene) seruma.

Među patogenim streptokocima posebno mjesto zauzima S.pneumoniae (pneumokok). Ima vrlo važnu ulogu u ljudskoj infektivnoj patologiji. Ova vrsta je jedan od glavnih uzročnika lobarne pneumonije. Prema daleko nepotpunim podacima, svake godine u svijetu ima više od 500.000 slučajeva upale pluća uzrokovane pneumokokom, osobito u djece i starijih osoba. Osim upale pluća, ovaj mikrob uzrokuje meningitis, endokarditis, peritonitis, upalu srednjeg uha, rinitis, sinusitis, sepsu, puzajući čir na rožnici i niz drugih bolesti. Za laboratorijsku dijagnostiku koriste se bakterioskopske, bakteriološke i biološke metode. Materijal za proučavanje sputuma, gnoja, krvi, cerebrospinalne tekućine, sluzi iz orofarinksa i nazofarinksa, iscjedak iz maksilarnog sinusa, očiju i ušiju. Važno je odmah poslati materijal u laboratorij i vrlo brzo ga analizirati, jer su pneumokoki osjetljivi na autolizu.

Bakterioskopski pregled

Bakterioskopski pregled materijala (osim krvi) svodi se na izradu dva razmaza. Jedan od njih je obojen po Gramu, drugi - po Burri-Ginsu, što omogućuje identifikaciju kapsule. Pneumokoki se nalaze u obliku lancetastih diplokoka, okruženih zajedničkom čahurom. Ako se u vidnom polju otkrije 10 ili više tipičnih diplokoka, vrlo je vjerojatno da je prisutna S.pneumoniae. Međutim, primarna mikroskopija ne daje pravo postavljanja konačne dijagnoze, budući da razmazi mogu sadržavati kapsularne nepatogene diplokoke - predstavnike normalne mikroflore. Stoga je potrebno provesti sjetvu kliničkog materijala i izolirati čistu kulturu.

Bakteriološka istraživanja

U slučaju sepse, 10 ml krvi inokulira se uz bolesnikov krevet u bočicu koja sadrži 100 ml seruma ili šećernog bujona, inkubira se 18-20 sati na 37 °C, zatim se posije na krvni agar, čista kultura je izolirani i identificirani. Kod meningitisa cerebrospinalna tekućina se centrifugira, a sediment uzgaja na krvnom agaru. Na njoj pneumokoki rastu u obliku malih okruglih kolonija okruženih zelenom zonom, u središtu kolonije vidljivo je karakteristično udubljenje. Sijanje sputuma ili gnoja na hranjive podloge nije preporučljivo, jer prisutnost saprofitne mikroflore inhibira rast S.pneumoniae. Bolje je uvesti ispitni materijal u trbušnu šupljinu bijelih miševa. Biotest je brza, pouzdana i točna metoda za izolaciju čiste kulture pneumokoka. Bijeli miševi su vrlo osjetljivi na ove bakterije i unutar 10-12 sati nakon infekcije pneumokoki prodiru u krv i parenhimske organe, uzrokujući sepsu. Kultura krvi iz srca ili dijelova unutarnjih organa tijekom autopsije životinja omogućuje vam izolaciju čiste kulture patogena. Za identifikaciju pneumokoka koriste se njihova svojstva. Za razliku od drugih vrsta streptokoka, S.pneumoniae ne raste na podlozi s optohinom, inulin je fermentiran i vrlo je osjetljiv na djelovanje žuči (test deoksiholata). Brza liza pneumokoka pod djelovanjem žuči može se otkriti ako se u 1 ml bujonske kulture doda 0,5 ml žuči. Nakon 15-20 minuta boravka u termostatu dolazi do potpune lize bakterijskih stanica. Za određivanje serovara pneumokoka (sada ih ima 85) koristi se reakcija aglutinacije na staklu s tipičnim serumima ili fenomen "bubrenja kapsule". U prisutnosti homolognog seruma, pneumokokna kapsula snažno bubri. Još bolje, serotipizacija se provodi s komercijalnim lateks aglutinacijskim ili koaglutinacijskim reagensima koji prikazuju kapsularne antigene. Od streptokoka značajan je i rod Enterococcus od kojih su najznačajnije vrste E.faecalis, E.faecium i E.durans. U prirodi su prilično rasprostranjene. Njihova glavna ekološka niša su crijeva ljudi i životinja, ali se nalaze i u normalnoj mikroflori kože perineuma, urogenitalnih organa, orofarinksa i nazofarinksa. Mogu uzrokovati gnojenje rana, bakterijemiju, lezije urogenitalnog sustava, osobito u bolesnika s dugotrajnim funkcionalnim kateterima, trovanje hranom, crijevnu disbakteriozu, rjeđe endokarditis. U razmazima ispitivanog materijala enterokoki su raspoređeni u parovima, kratkim lancima ili u obliku nakupina, gram-pozitivni. Bakteriološka dijagnostika enterokoknih infekcija provodi se bez ikakvih poteškoća, budući da se te bakterije dobro razvijaju na jednostavnim medijima. Selektivan je za njih agar dif-3 (na 600 ml 3% MPA dodati 400 ml 40% žuči). Nakon 24 sata inkubacije, kolonije koje su narasle imaju veličinu od 0,4-1,0 mm sivkaste boje. Na krvnom agaru dolazi do nepotpune ili potpune hemolize oko kolonija. Za razliku od viridescentnih streptokoka, enterokoki mogu rasti na MPA sa 6,5% NaCl, reducirajući mlijeko metilenskim modrilom na 37°C nakon 4-6 sati. Identifikacija izoliranih kultura provodi se prema morfološkim, kulturalnim i biokemijskim karakteristikama.

Stranica 40 od ​​91

Uzročnik lobarne pneumonije (upale pluća) je pneumokok - Diplococcus pneumoniae, koji je prvi otkrio Pasteur u slini čovjeka umrlog od bjesnoće (1881.).
Morfologija i tinktorijalna svojstva. Pneumokoki (sl. 67 i 68 na ulošku) su parni koki izduženog oblika poput lancete. Stoga se inače nazivaju lancetasti diplokoki. Formirajući kratke lance, pneumokoki postaju slični streptokocima, te stoga II. F. Gamaleya ih je nazvao Streptococcus lanceolatus. Veličina ćelija kreće se od 0,5X0,75 do 1X1,5 mikrona. Nemaju spore ni flagele. Posebnost pneumokoka je stvaranje kapsule, koja je dobro izražena u patološkim materijalima (sputum, krv, itd.). Kada se uzgaja na hranjivim medijima, kapsula se gubi. Pneumokoki lako percipiraju anilinske boje i boje se pozitivno prema Gramu.
Kulturalna i biokemijska svojstva.

Riža. 68. Pneumokok u razmazu sputuma.

Pneumokoki su aerobi i fakultativni anaerobi. Temperaturni optimum je oko 37°. Uzgoj na podlogama koje sadrže životinjske bjelančevine (krvni ili serumski agar, ascitagar).
Na površini agara nakon 24 sata stvaraju se male kolonije koje podsjećaju na streptokokne, ali manje i prozirnije.
Na kosom agaru, s obilnom inokulacijom, dobiva se vrlo osjetljiva prozirna prevlaka koja se sastoji od najmanjih, nekonfluentnih kolonija, na bujonu - blago zamućenje i mali pahuljasti talog.
Svježe izolirani sojevi ne rastu na želatini. Stari laboratorijski sojevi pneumokoka mogu proizvesti male bjelkaste kolonije već na 18-22°C. Želatina nije ukapljena.
Dobro rastu na mlijeku, zgrušavajući ga stvaranjem kiseline.
Na krvnom agaru se oko kolonija formira zona nepotpune hemolize sa zelenkastosmeđim obojenjem podloge.

Riža. 67. Pneumokok u čistoj kulturi iz bujona.

Pneumokoki razgrađuju saharozu, rafinozu i laktozu. Najvažnija karakteristika je razgradnja inulina. Većina streptokoka nema ovo svojstvo. Virulentni pneumokok topiv je u žuči.
Antigenska struktura i serološki tipovi pneumokoka. Citoplazma pneumokoka sadrži proteinski antigen zajednički za sve pneumokoke. Ovaj antigen određuje njihovu specifičnost vrste. Kapsula sadrži specifične polisaharidne antigene (hapten), koji se razlikuju po kemijskom sastavu kod različitih pneumokoka (tipični antigeni). Na temelju ovih tipičnih antigena svi pneumokoki se pomoću reakcije aglutinacije i precipitacije dijele u tri glavne skupine (I, II, III) i četvrtu kombiniranu skupinu (X-skupina). X-skupina uključuje više od 70 vrsta.
otpornost. Na umjetnim hranjivim podlogama pneumokoki brzo umiru (4-7 dana). Pod slojem vazelinskog ulja u tekućim i polutekućim medijima koji sadrže proteine, oni ostaju sposobni za život 3-12 mjeseci.
Pneumokoki dobro podnose sušenje: u suhom ispljuvku na raspršenom svjetlu, oni traju do 2 mjeseca. Kada se zagriju na 52-55 °, umiru za 10 minuta, na 60 ° - čak i brže. U otopini karbolne kiseline (3%) pneumokok umire za 1-2 minute.
Pneumokoki su posebno osjetljivi na optohin. Pod utjecajem potonjeg, umiru u koncentraciji od 1: 1.000.000.
Stvaranje toksina i patogenost za životinje. Pneumokokni otrov je endotoksin. Od laboratorijskih životinja na pneumokok su osjetljiviji bijeli miševi i kunići. Parenteralna primjena virulentnih pneumokoka nakon 24-48 sati uzrokuje uginuće životinja sa sepsom. Pri obdukciji na mjestu injekcije nalazi se fibrinozni eksudat, slezena je povećana i hiperemična.
Patogeneza i bolesti u ljudi. Ulazna vrata infekcije obično su sluznica ždrijela. Unošenje pneumokoka u tijelo i njihovo prodiranje u tkivo pluća može se, čini se, dogoditi kroz limfni i cirkulacijski sustav, te izravno kroz grananje bronha. Najčešća bolest je krupozna upala pluća, koju karakterizira iznenadan početak, visoka temperatura, ponekad s zimicom, bol u boku pri disanju, glavobolja, ponekad gubitak svijesti, delirij, jaka uzbuđenost. U budućnosti se pojavljuje kašalj s karakterističnim hrđavo-crvenim ispljuvkom. U plućima postoji proces koji zahvaća češće jedan, rjeđe - dva ili tri režnja.
Izvori infekcije su bolesna osoba i bakterionosac. Infekcija izvana događa se i aerogeno - kapljicama s nosača i putem infekcije prašinom. Pneumokoki mogu dugo ostati u osušenom ispljuvku (oko 2 mjeseca) i ući u zrak s prašinom.
Pri pregledu zdravih ljudi često se u nazofarinksu nalaze patogeni pneumokoki, pa nije isključena mogućnost autoinfekcije, a značajnu ulogu imaju čimbenici koji slabe otpornost organizma, poput hipotermije.
Osim lobarne pneumonije, pneumokoki uzrokuju upalu srednjeg uha, moždanih ovojnica (meningitis), kao i sluznice nosa i dišnih putova, tonzilitis, puzajući ulkus rožnice i upalu suzne vrećice.
Imunitet. Prenesena upala pluća ne daje imunitet. Bolest se može ponoviti više puta. To je zbog prisutnosti mnogih vrsta pneumokoka i činjenice da preboljela upala pluća povećava osjetljivost organizma na pneumokoke.
Serum oporavljenih sadrži protutijela (aglutinine i dr.).
Do trenutka krize u pneumoniji, koncentracija antitijela u krvi doseže značajan titar, a fagocitoza dramatično raste (I. Ya. Chistovich). Na temelju ovih podataka imunitet kod upale pluća treba promatrati prvenstveno kao fagocitarni, u čemu važnu ulogu imaju protutijela (bakteriotropini).
Mikrobiološka dijagnostika. Materijali za istraživanje pneumokoknih bolesti su ispljuvak, krv i gnoj uzeti iz različitih lezija, rjeđe cerebrospinalna tekućina.
Patološki materijal (isključujući krv) pregledava se bakterioskopski, bakteriološki i inficiranjem bijelih miševa. Mora se pribjeći potonjoj metodi jer izvorni materijal, osobito ispljuvak, obično sadrži obilnu stranu mikrofloru, koja, kada se materijal izravno inokulira na hranjive medije, otežava izolaciju pneumokoka.
Razmazi sputuma, gnoja itd. boje se po Gramu. Pod mikroskopom se nalaze lancetasti diplokoki, pozitivno obojeni po Gramu, okruženi kapsulom.
Kulture se izoliraju na krvnom agaru ili ascig agaru. Nakon 24-48 sati rasta na 37° pojavljuju se karakteristične kolonije ako je prisutan pneumokok. Kolonije se nasaju na kosi serum ili ascites agar, a izolirana kultura se provjerava na topljivost u žuči i na sposobnost razgradnje inulina.
Infekcija bijelog miša najsigurniji je način izolacije kulture pneumokoka. Materijal s bolesnika ili leša (ispljuvak, gnoj, komadić organa i sl.) stavi se u sterilnu čašicu, zatim se usitne u sterilnom mužaru, doda 1-2 ml sterilnog bujona i 0,5 ml ove suspenzije. ubrizgan intraperitonealno bijelom mišu. Nakon uginuća miša, koje nastupa unutar 12-48 sati, uzimaju se hemokulture iz srca, a gotovo u svim slučajevima dobiva se čista kultura pneumokoka.
Ako se sumnja na sepsu, 10-20 ml krvi inokulira se u ascitični ili serumski bujon. Nakon obogaćivanja iz bujona vrše se cijepljenja na krvni agar, a izolirana čista kultura identificira se morfološkim i biokemijskim karakteristikama.
specifična terapija i kemoterapija. Trenutno se za liječenje lobarne pneumonije s velikim uspjehom koriste sulfanilamidni pripravci i antibiotici (penicilin, biomicin, tetraciklin i dr.).

U rod Streptococcus spadaju: Streptococcus pyogenes (hemolitički) i Streptococcus pneumoniae (pneumokok). Streptokoke su prvi otkrili Billroth (1874.), L. Pasteur (1879.). Proučavao ih je E. Rosenbach (1884).

Streptococcus pyogenes (hemolitički)

Morfologija. Streptokoki su koke koje imaju sferični oblik. Promjer svakog koka je u prosjeku 0,6-1 μm, međutim, karakterizira ih polimorfizam: postoje mali i veliki koki, strogo sferni i ovalni. Streptokoki su raspoređeni u lanac, što je rezultat njihove podjele u istoj ravnini. Duljine lanaca variraju. Na gustom hranjivom mediju lanci su obično kratki, na tekućim su dugi. Streptokoki su nepokretni, nemaju spore (vidi sliku 4.) Svježe izolirane kulture ponekad formiraju kapsulu. Na ultratankim rezovima vidljiva je mikrokapsula, ispod koje se nalazi troslojna stanična stijenka i troslojna citoplazmatska membrana. Gram-pozitivan.

uzgoj. Streptokoki su fakultativni anaerobi. Raste na temperaturi od 37°C i pH 7,6-7,8. Optimalne podloge za njihov uzgoj su podloge koje sadrže krv ili krvni serum. Na gustim hranjivim podlogama kolonije streptokoka su male, ravne, mutne, sivkaste boje. Na krvnom agaru neke vrste streptokoka stvaraju hemolizu. β-hemolitički streptokoki tvore jasnu zonu hemolize, α-hemolitički streptokoki tvore malu zelenkastu zonu (rezultat prijelaza hemoglobina u methemoglobin). Postoje streptokoki koji ne daju hemolizu.

Na šećernoj juhi streptokoki rastu uz stvaranje parijetalnog i pridno sitnozrnatog taloga, dok juha ostaje prozirna.

Enzimska svojstva. Streptokoki imaju saharolitička svojstva. Oni razgrađuju glukozu, laktozu, saharozu, manitol (ne uvijek) i maltozu u kiselinu. Njihova proteolitička svojstva su slabo izražena. Zgrušavaju mlijeko, želatina se ne ukapljuje.

stvaranje toksina. Streptokoki tvore brojne egzotoksine: 1) streptolizine - uništavaju crvena krvna zrnca (O-streptolizin ima kardiotoksični učinak); 2) leukocidin - uništava leukocite (nastaju od visoko virulentnih sojeva); 3) eritrogeni (šarlah) toksin - uzrokuje kliničku sliku šarlaha - intoksikacija, vaskularne reakcije, osip itd. Sintezu eritrogenog toksina određuje profage; 4) citotoksini – imaju sposobnost izazivanja glomerulonefritisa.

Streptokoki imaju različite antigene. Citoplazma stanice sadrži antigen specifične nukleoproteinske prirode - isti za sve streptokoke. Antigeni proteinskog tipa nalaze se na površini stanične stijenke. U staničnoj stijenci streptokoka pronađen je antigen polisaharidne skupine.

Prema sastavu frakcije antigena specifične za polisaharidnu skupinu, svi streptokoki se dijele u skupine, koje se označavaju velikim latiničnim slovima A, B, C, D itd. do S. Osim po skupinama, streptokoke dijelimo i na serološke tipove. , koji su označeni arapskim brojevima.

Grupa A uključuje 70 vrsta. U ovu skupinu spada većina streptokoka koji uzrokuju razne bolesti kod ljudi. Skupina B uključuje uglavnom oportunističke ljudske streptokoke. Skupina C uključuje streptokoke patogene za ljude i životinje. Grupu D čine streptokoki koji nisu patogeni za ljude, ali u ovu grupu spadaju enterokoki koji su stanovnici probavnog trakta ljudi i životinja. Uzimajući u druge organe, uzrokuju upalne procese: kolecistitis, pijelitis itd. Dakle, oni se mogu pripisati uvjetno patogenim mikrobima.

Pripadnost izoliranih kultura jednoj od seroloških skupina utvrđuje se reakcijom taloženja s grupnim serumima. Za određivanje seroloških tipova koristi se reakcija aglutinacije sa serumima specifičnim za tip.

Streptokoki su prilično stabilni u okolišu. Na temperaturi od 60 ° C umiru nakon 30 minuta.

U sasušenom gnoju i ispljuvku oni ostaju mjesecima. Uobičajene koncentracije dezinficijensa uništavaju ih za 15-20 minuta. Enterokoki su puno otporniji, dezinfekcijske otopine ih ubijaju tek nakon 50-60 minuta.

Osjetljivost životinja. Goveda, konji, psi i ptice su osjetljivi na patogene streptokoke. Od laboratorijskih životinja osjetljivi su kunići i bijeli miševi. Međutim, streptokoki patogeni za ljude nisu uvijek patogeni i za pokusne životinje.

Izvori infekcije. Ljudi (bolesnici i kliconoše), rjeđe životinje ili zaraženi proizvodi.

Putevi prijenosa. Moguća je prašina u zraku i zraku, ponekad hrana, kontakt-kućanstvo.

Bolesti mogu nastati kao posljedica egzogene infekcije, kao i endogeno - aktivacijom oportunističkih streptokoka koji žive na sluznici ždrijela, nazofarinksa i rodnice. Smanjenje otpornosti organizma (hlađenje, gladovanje, prekomjerni rad i dr.) može dovesti do autoinfekcija.

Od velike važnosti u patogenezi streptokoknih infekcija je preliminarna senzibilizacija - kao rezultat prethodno prenesene bolesti streptokokne etiologije.

Kada prodiru u krvotok, streptokoki uzrokuju teški septički proces.

Bolesti kod ljudičešće uzrokuju β-hemolitičke streptokoke serološke skupine A. Oni proizvode enzime patogenosti: hijaluronidazu, fibrinolizin (streptokinazu), deoksiribonukleazu itd. Osim toga, u streptokoku se nalazi kapsula, M-protein, koji imaju antifagocitna svojstva.

Streptokoki uzrokuju različite akutne i kronične infekcije u ljudi, gnojne i negnojne, različite kliničke slike i patogeneze. Gnojne - flegmone, apscesi, infekcije rana, negnojne - akutne infekcije gornjih dišnih putova, erizipel, šarlah, reumatizam i dr.

Streptokoki često uzrokuju sekundarne infekcije kod gripe, ospica, hripavca i drugih bolesti te često kompliciraju infekcije rana.

Imunitet. Po prirodi, imunitet je antitoksičan i antibakterijski. Postinfektivni antimikrobni imunitet je slab. To je zbog slabe imunogenosti streptokoka i velikog broja serovara koji ne daju križni imunitet. Osim toga, kod streptokoknih bolesti uočena je alergizacija tijela, što objašnjava sklonost recidivu.

Prevencija. Svodi se na sanitarno-higijenske mjere, jačanje ukupne otpornosti organizma. Specifična profilaksa nije razvijena.

Liječenje. Primijeniti antibiotike. Češće se koristi penicilin, na koji streptokoki nisu stekli otpornost, kao i eritromicin i tetraciklin.

Značaj streptokoka u etiologiji reumatskih bolesti srca. Patogeneza reumatske bolesti srca nije dobro razjašnjena. Ali brojne činjenice govore u prilog ulozi streptokoka u razvoju ove bolesti:

1. U bolesnika s reumatskom bolešću srca, B-hemolitički streptokok se sije iz ždrijela.

2. Reumatizam se često javlja nakon preležane upale grla, upale krajnika, faringitisa, senzibilizacije tijela.

3. Antistreptolizin, antistreptohijaluronidaza - antitijela na streptokokne enzime, toksine nalaze se u krvnom serumu bolesnika.

4. Neizravna potvrda uloge streptokoka je uspješno liječenje penicilinom.

U novije vrijeme L-formama streptokoka daje se značaj u nastanku kroničnih oblika reumatskih bolesti srca.

Prevencija egzacerbacija reumatske bolesti srca svodi se na prevenciju streptokoknih bolesti (na primjer, u proljeće i jesen provodi se profilaktički tijek primjene penicilina). Liječenje se smanjuje na korištenje antibakterijskih lijekova - penicilina.

Vrijednost streptokoka u etiologiji šarlaha. G. N. Gabrichevsky (1902) prvi je predložio da je hemolitički streptokok uzročnik šarlaha. Ali budući da se streptokoki izolirani u drugim bolestima nisu razlikovali od uzročnika šarlaha, ovo mišljenje nisu dijelili svi. Danas je utvrđeno da šarlah izazivaju streptokoki skupine A koji proizvode eritrogeni toksin.

Kod onih koji su bili bolesni nastaje imunitet - postojan, antitoksičan. Njegova napetost se određuje postavljanjem Dickove reakcije - intradermalne injekcije eritrogenog toksina. Kod osoba koje nisu bolesne pojavljuje se hiperemija i edem oko mjesta ubrizgavanja, što se karakterizira kao pozitivna reakcija (nedostatak antitoksina u krvnom serumu). U onih koji su bili bolesni, takva reakcija je odsutna, jer antitoksin koji nastaje kod njih neutralizira eritrogeni toksin.

Prevencija. Izolacija, hospitalizacija. Kontaktnoj, oslabljenoj djeci daje se gama globulin. Specifična profilaksa nije razvijena.

Liječenje. Koristite penicilin, tetraciklin. U teškim slučajevima primjenjuje se antitoksični serum.

Svrha studije: otkrivanje streptokoka i određivanje njegovog serovara.

Istraživački materijal

1. Sluz iz grla (tonzilitis, šarlah).

2. Struganje zahvaćenog područja kože (erizipela, streptoderma).

3. Gnoj (apsces).

4. Mokraća (nefritis).

5. Krv (sumnja na sepsu; endokarditis).

Osnovne metode istraživanja

1. Bakteriološki.

2. Mikroskopski.

Napredak istraživanja

Drugi dan istraživanja

Izvadite šalice iz termostata i pregledajte. U slučaju prisutnosti sumnjivih kolonija, od dijela istih rade se razmazi, boje po Gramu i mikroskopski. Ako se u razmazu nađu streptokoki, dio preostale kolonije se potkulturira u epruvete na agar sa serumom za izolaciju čiste kulture i na bujon s krvlju u epruvetama. Do kraja dana, 5-6-satna kultura iz bujona ili agara se potkulturira na Martenov bujon s 0,25% glukoze kako bi se odredila serološka skupina u Lensfieldovoj precipitacijskoj reakciji. Epruvete i bočice se stave u termostat i ostave do sljedećeg dana.

Treći dan istraživanja

Kulture se vade iz pećnice, čistoća kulture se provjerava na kosom agaru, rade se razmazi, boje po Gramu i mikroskopiraju. U prisustvu čiste kulture streptokoka, sije se na Hiss medije (laktoza, glukoza, maltoza, saharoza i manitol), mlijeko, želatina, 40% žuč i stavlja u termostat.

Pregledajte Martinovu juhu. U prisutnosti specifičnog rasta provodi se Lensfieldov precipitacijski test za određivanje serološke skupine.

Postavljanje reakcije taloženja prema Lensfieldu. Dnevna kultura uzgojena na Martinovoj juhi se izlije u nekoliko epruveta za centrifugiranje, centrifugira 10-15 minuta (3000 okretaja u minuti).

Supernatant se izlije u staklenku s otopinom za dezinfekciju, a talog se izlije u sterilnu izotoničnu otopinu natrijeva klorida i ponovno centrifugira. Talogu sakupljenom iz svih epruveta za centrifugiranje dodajte 0,4 ml 0,2% klorovodične kiseline. Zatim se epruveta stavi u vodenu kupelj i kuha 15 minuta uz povremeno mućkanje. Nakon vrenja, dobivena suspenzija se ponovno centrifugira. Antigen se zatim ekstrahira u supernatant, koji se izlije u čistu epruvetu i neutralizira 0,2% otopinom natrijevog hidroksida do pH 7,0-7,2. Kao indikator dodaje se bromtimol plavo (0,01 ml 0,04% otopine). Ovom reakcijom boja se mijenja iz slamnato žute u plavu.

Zatim se 0,5 ml seruma antistreptokokne skupine, koji su pripremljeni imunizacijom kunića, ulije u 5 epruveta za taloženje (vidi Poglavlje 19). U 1. epruvetu se unosi serum A, u 2. serum B, u 3. serum C, u 4. serum D, u 5. izotonična otopina natrijevog klorida (kontrola). Nakon toga se Pasterovom pipetom dobiveni ekstrakt (antigen) pažljivo slojevito razlaže uz stijenku u sve epruvete.

Pri pozitivnoj reakciji u epruveti s homolognim serumom na granici ekstrakta sa serumom stvara se tanki mliječnobijeli prsten (slika 38).

Četvrti dan istraživanja

Rezultati se bilježe (Tablica 25).

Trenutno se utvrđuje deoksiribonukleaza, antistreptohijaluronidaza, antistreptolizin-O.

ispitna pitanja

1. Koje glavne metode laboratorijskog istraživanja za otkrivanje streptokoka poznajete?

2. Čemu služi Lensfieldova taložna reakcija?

3. Zašto bi antigen trebao biti proziran tijekom ove reakcije? Opišite tehniku ​​postavljanja ove reakcije.

Uzmite od nastavnika antistreptokokni serum A, B, C, D i izotonsku otopinu natrijevog klorida. Postavite taložnu reakciju, pokažite rezultate učitelju i nacrtajte.

Hranjivi mediji

agar s krvlju(vidi poglavlje 7).

Serumski agar(vidi poglavlje 7).

Njegovi mediji(suho).

mesna peptonska želatina (MPG). U 100 ml MPB dodati 10-15 g sitno sjeckane želatine. Želatina bi trebala nabubriti kada se polagano zagrijava u vodenoj kupelji (na temperaturi od 40-50 ° C). U otopljenu želatinu doda se 10% otopina natrijevog karbonata (soda bikarbona) i pH se namjesti na 7,0. Zatim se odmah filtrira kroz nabrani filter. Filtriranje je sporo. Kako bi se ubrzao proces, filtracija se može obaviti u vrućem autoklavu. Filtrirani medij se ulije u epruvete od 6-8 ml i sterilizira. Sterilizacija se provodi ili frakcijski na temperaturi od 100 ° C 3 dana za redom, ili istovremeno na 110 ° C tijekom 20 minuta u autoklavu. Hlađenje medija provodi se u epruvetama postavljenim okomito.

Priprema mlijeka. Svježe mlijeko se dovede do vrenja, stavi na hladno mjesto na jedan dan, oslobodi od vrhnja, ponovno kuha. Ostavite jedan dan i uklonite gornji sloj. Obrano mlijeko se filtrira kroz sloj vate, zatim alkalizira 10% otopinom natrijeva karbonata do pH 7,2 i ulije u epruvete od 5-6 ml.

Bouillon Martin. U mesnu vodu dodaje se jednaka količina peptone Marten (mljeveno meso iz svinjskih želuca izloženo solnoj kiselini). Dobivena smjesa se kuha 10 minuta, alkalizira 10% otopinom natrijevog hidroksida do pH 8,0, doda se 0,5 natrijevog acetata, ponovno prokuha i izlije u sterilne posude. Martinovoj juhi dodaje se 0,25% glukoze.

Wednesday Kitt - Tarozzi(vidi poglavlje 34).

Streptococcus pneumoniae (pneumokok)

Pneumokoke je prvi opisao R. Koch (1871).

Morfologija. Pneumokoki su diplokoki kod kojih su stranice stanica okrenute jedna prema drugoj spljoštene, a suprotne produljene, pa imaju lancetasti oblik nalik plamenu svijeće (vidi sl. 4). Veličina pneumokoka je 0,75-0,5 × 0,5-1 μm, raspoređeni su u parovima. U tekućim hranjivim medijima često stvaraju kratke lance, nalik na streptokoke. Prevmokoki su nepokretni, nemaju spore, u tijelu tvore kapsulu koja okružuje oba koka. Kapsula sadrži tvar otpornu na toplinu antifagin (koja štiti pneumokok od fagocitoze i djelovanja antitijela). Kada rastu na umjetnim hranjivim podlogama, pneumokoki gube svoju kapsulu. Pneumokoki su gram pozitivni. Gram-negativne bakterije nalaze se u starim kulturama.

uzgoj. Pneumokoki su fakultativni anaerobi. Rastu na temperaturi od 36-37 °C i pH od 7,2-7,4. Zahtjevni su na podloge, jer ne mogu sintetizirati mnoge aminokiseline, stoga rastu samo na podlogama s dodatkom nativnih proteina (krv ili serum). Na agaru sa serumom stvaraju male, nježne, prilično prozirne kolonije. Na agaru s krvlju rastu vlažne zelenkastosive kolonije okružene zelenom zonom, koja je rezultat pretvorbe hemoglobina u methemoglobin. Pneumokoki dobro rastu u bujonu s dodatkom 0,2% glukoze i u bujonu sa sirutkom. Rast u tekućim medijima karakterizira difuzno zamućenje i prašnjavi sediment na dnu.

Enzimska svojstva. Pneumokoki imaju prilično izraženu saharolitičku aktivnost. Razgrađuju: laktozu, glukozu, saharozu, maltozu, inulin uz stvaranje kiseline. Nemojte fermentirati manitol. Njihova proteolitička svojstva su slabo izražena: zgrušavaju mlijeko, ne ukapljuju želatinu i ne stvaraju indol. Pneumokoki se otapaju u žuči. Cijepanje inulina i otapanje u žuči je važna dijagnostička karakteristika koja razlikuje Streptococcus pneumoniae od Streptococcus pyogenes.

faktori patogenosti. Pneumokoki proizvode hijaluronidazu, fibrinolizin itd.

stvaranje toksina. Pneumokoki proizvode endotoksin, hemolizin, leukocidin. Virulencija pneumokoka također je povezana s prisutnošću antifagina u kapsuli.

Antigenska struktura i klasifikacija. U citoplazmi pneumokoka nalazi se proteinski antigen zajednički cijeloj skupini, au kapsuli polisaharidni antigen. Prema polisaharidnom antigenu svi pneumokoki se dijele u 84 serovara. Serovari I, II, III su najčešći uzročnici za ljude.

Otpornost na okoliš. Pneumokoki spadaju u skupinu nestabilnih mikroorganizama. Temperatura od 60 °C uništava ih za 3-5 minuta. Dosta su otporne na niske temperature i sušenje. U osušenom ispljuvku ostaju održivi do 2 mjeseca. Na hranjivom mediju ostaju ne više od 5-6 dana. Stoga je kod uzgoja potrebno obaviti presjetvu svaka 2-3 dana. Konvencionalne otopine dezinfekcijskih sredstava: 3% fenol, sublimat u razrjeđenju 1:1000 uništavaju ih u nekoliko minuta.

Pneumokoki su posebno osjetljivi na optohin koji ih ubija u razrjeđenju 1:100 000.

Osjetljivost životinja. Ljudi su prirodni domaćini pneumokoka. Međutim, pneumokoki mogu izazvati bolest kod teladi, janjadi, prasadi, pasa i majmuna. Od pokusnih životinja na pneumokok su vrlo osjetljivi bijeli miševi.

Izvori infekcije. Bolesna osoba i bakterionosac.

Putevi prijenosa. U zraku, može biti u zraku.

ulazna kapija. Sluznica gornjih dišnih putova, očiju i uha.

Bolesti kod ljudi. Pneumokoki mogu izazvati gnojno-upalne bolesti različite lokalizacije. Specifični za pneumokoke su:

1) lobarna upala pluća;

2) puzajući ulkus rožnice;

Najčešća bolest je krupozna upala pluća, koja zahvaća jedan, rjeđe dva ili tri režnja pluća. Bolest je akutna, praćena visokom temperaturom, kašljem. Obično završi kritično.

Imunitet. Nakon bolesti ostaje nestabilan imunitet, budući da je upala pluća karakterizirana recidivima.

Prevencija. Svodi se na sanitarne i preventivne mjere. Specifična profilaksa nije razvijena.

Liječenje. Koriste se antibiotici - penicilin, tetraciklin itd.

ispitna pitanja

1. Morfologija pneumokoka. Uzgoj i enzimska svojstva.

2. Koji čimbenici određuju patogenost pneumokoka i što štiti pneumokoke od fagocitoze?

3. Koja su glavna vrata pneumokokne infekcije. Koje bolesti uzrokuju pneumokoki?

Mikrobiološka istraživanja

Svrha studije: otkrivanje pneumokoka.

Istraživački materijal

1. Sluz (upala pluća).

2. Sluz iz ždrijela (tonzilitis).

3. Iscjedak iz ulkusa (puzajući ulkus rožnice).

4. Iscjedak iz uha (otitis media).

5. Gnoj (apsces).

6. Pleuralni punktat (pleuritis).

7. Krv (sumnja na sepsu).

1 (Bolje je uzeti jutarnji sputum (s specifičnom upalom pluća, sputum ima hrđavu boju).)

Osnovne metode istraživanja

1. Mikroskopski.

2. Mikrobiološki.

3. Biološki.

Napredak istraživanja

biološki uzorak. Malo (3-5 ml sputuma) se emulgira u sterilnom bujonu, 0,5 ml ove smjese se ubrizgava intraperitonealno bijelom mišu. Nakon 6-8 sati miševi pokazuju znakove bolesti. U ovom trenutku pneumokok se već može otkriti u eksudatu trbušne šupljine. Eksudat se uzima sterilnom špricom. Od njega se rade razmazi, boje po Gramu i mikroskopiraju. Da bi se izolirala čista kultura, eksudat se inokulira na agar sa serumom. Ako miš ugine ili se razboli, krv se uzgaja iz srca na serumskom agaru kako bi se izolirala čista kultura. Usjevi se stavljaju u termostat.

Ubrzana metoda za određivanje vrste pneumokoka(reakcija mikroaglutinacije). Na stakalce se nanesu 4 kapi eksudata iz trbušne šupljine zaraženog miša. Prvoj kapi dodaje se aglutinirajući serum tipa I, drugoj kapi serum tipa II, trećoj kapi tipa III, a četvrtoj izotonična otopina natrijeva klorida (kontrola).

Serumi tipa I i II prethodno su razrijeđeni u omjeru 1:10, a serum tipa III - 1:5. Sve kapi se promiješaju, osuše, fiksiraju i boje razrijeđenom magentom. Uz pozitivan rezultat u jednoj od kapi, bilježi se agregacija mikroba (aglutinacija).

Drugi dan istraživanja

Kulture se izvade iz termostata, pregledaju i naprave se razmazi od sumnjivih kolonija. U prisutnosti gram-pozitivnih lanceolatnih diplokoka u razmazima, izoliraju se 2-3 kolonije na kosom agaru sa serumom kako bi se dobila čista kultura. Usjevi se stavljaju u termostat. Iz bujona se prave razmazi, boje po Gramu i mikroskopiraju.

Treći dan istraživanja

Usjevi se uklanjaju iz termostata. Provjerite čistoću kulture - napravite razmaze, bojenje po Gramu i mikroskopirajte. Ako su u izoliranoj kulturi prisutni gram-pozitivni lanceolatni diplokoki, izolirana se kultura identificira inokulacijom:

1) na Hiss mediju (laktoza, glukoza, saharoza, maltoza), sjetva se provodi na uobičajeni način - ubrizgavanjem u medij;

2) na podlozi s inulinom;

3) na mediju s optohinom;

4) staviti uzorak sa žuči.

Inulin test. Proučavana kultura se nasađuje na hranjivu podlogu koja sadrži inulin i lakmus tinkturu i stavlja u termostat. Nakon 18-24 sata, usjevi se uklanjaju iz termostata. U prisutnosti pneumokoka podloga pocrveni (streptokoki ne mijenjaju konzistenciju i boju podloge).

Određivanje osjetljivosti na optohin. Izolirana kultura se sije na 10% krvni agar koji sadrži optohin 1:50 000. Pneumokok, za razliku od streptokoka, ne raste na podlozi koja sadrži optohin.

Test žuči. 1 ml proučavane bujonske kulture ulije se u aglutinacijske epruvete. U jednu od njih doda se kap zečje žuči, druga epruveta služi kao kontrola. Obje epruvete se stave u termostat. Nakon 18-24 sata dolazi do lize pneumokoka, što se izražava u bistrenju mutne juhe. U kontroli, suspenzija ostaje mutna.

Uzorak sa žuči može se staviti na gustu hranjivu podlogu. Da biste to učinili, zrno suhe žuči nanese se na koloniju pneumokoka uzgojenu u agaru i serumskim pločama - kolonija se otapa - nestaje.

Četvrti dan istraživanja

Rezultati se bilježe (Tablica 26).

Bilješka. do - razgradnja ugljikohidrata uz stvaranje kiseline.

Trenutno se serološke metode istraživanja (RSK i RIGA) naširoko koriste za određivanje streptokoknih protutijela. Određivanje skupine i serovara izolirane kulture provodi se pomoću fluorescentnih protutijela.

Određivanje virulencije pneumokoka. Dnevna bujonska kultura pneumokoka razrijedi se s 1% peptonske vode od 10 -2 do 10 -8, 0,5 ml svakog razrjeđenja dano je dvama bijelim miševima. Kultura koja je uzrokovala smrt miševa u razrjeđenju od 10 -7 ocjenjuje se kao virulentna, u razrjeđenju od 10 -4 -10 -6 smatra se umjereno virulentnom. Kultura koja nije uzrokovala smrt miševa je avirulentna.

ispitna pitanja

1. Koje metode izolacije čiste kulture pneumokoka poznajete?

2. Koja je životinja najosjetljivija na pneumokok?

3. Koje se reakcije daju s eksudatom zaraženog miša i u koju svrhu?

4. Od kojih predstavnika piogenih koka treba razlikovati pneumokok i kojim testom?

5. Kako odrediti virulentnost pneumokoka?

Vježbajte

Napravite shemu pregleda sputuma, navodeći njegove faze po danu.

Hranjivi mediji

Serumski agar(vidi poglavlje 7).

Juha od sirutke(vidi poglavlje 7).

agar s krvlju(vidi poglavlje 7).

Njegovi mediji(suho).

Medij za testiranje inulina. U 200 ml destilirane vode dodati 10 ml inaktiviranog goveđeg seruma, 18 ml tinkture lakmusa i 3 g inulina. Sterilizirajte parom koja teče na 100°C 3 uzastopna dana. Juha od žuči (vidi poglavlje 7).