Helmintološke metode. Osnovne metode istraživanja protozoa

Najjednostavniji su podijeljeni u 4 klase:

Kada se encizira, mikroorganizam dobiva zaobljeni oblik i postaje prekriven zaštitnom ljuskom. U obliku ciste, protozoe postaju manje osjetljive na nepovoljne čimbenike okoliša.

Istraživanje može uključivati:

Bilješka:Postoji mnogo varijanti dijagnostike, razmotrit ćemo one vrste koje su najčešće u kliničkoj laboratorijskoj praksi.

Privatne vrste dijagnostike

U svakom konkretnom slučaju, laboratorijski pomoćnik ima zadatak pronaći određeni patogen, ponekad se drugi nalaze zajedno s glavnim.

Postoji 6 vrsta ovog mikroorganizma koji može živjeti u ljudskom crijevu. Klinički je značajna samo dizenterijska ameba koja se javlja u vegetativnom obliku iu obliku cista.

Dodatno se koriste imunološke metode:

• neizravna imunofluorescencija;
• neizravna aglutinacija (PHA);
• radijalna imunodifuzija.

Bilješka: serološke metode su neinformativne i koriste se samo kao dodatak glavnim u dvojbenim slučajevima.

Dijagnoza cilijarnog (cilijata)

Patogeni oblik mikroorganizama ovog roda je balantidija. Ovo je mikrob koji uzrokuje balantidijazu - bolest popraćenu ulceroznim procesom debelog crijeva. Uzročnik se nalazi u nativnom brisu u obliku vegetativne forme i ciste. Materijal za bris (izmet i sluz) uzima se sigmoidoskopskim pregledom i sije na posebne podloge.

Dijagnostika bičaša (lajšmanija, giardija, tripanosoma, trihomonada)

Leishmania, trypanosoma, giardia, trichomonads opasni su za ljude.

Lišmanija- mikrobi koji uzrokuju lišmaniozu ispituju se u razmazima krvi, materijalima koštane srži, strugotinama kožnih infiltrata. U nekim slučajevima, u dijagnozi Leishmanije, koristi se sjetva na hranjivim medijima.

Tripanosomi- Uzročnici bolesti spavanja (američka/afrička tripanosomijaza ili Chagasova bolest).

Afrička varijanta određena je u početnom razdoblju u proučavanju periferne krvi. Patološki mikrobi tijekom progresije bolesti nalaze se u materijalu punkcija limfnih čvorova, u naprednim stadijima - u cerebrospinalnoj tekućini.

Za dijagnosticiranje tripanosoma u slučaju sumnje na Chagasovu bolest, ispitni materijal se ispituje pod mikroskopom pri malom povećanju. U ovom slučaju, mrlje i debela kap su prethodno obojeni.

Trichomonas(crijevne, oralne,) otkrivaju se mikroskopijom materijala uzetih sa zahvaćene sluznice.

Identifikacija sporozoa (malarični plazmodij, uzročnik kokcidoze i dr.)

Najčešća i opasna vrsta za ljude je malarijski plazmodij, koji ima 4 glavne vrste patogena: uzročnik trodnevne malarije, četverodnevne malarije, tropske malarije i ovalne malarije.

Spolni razvoj plazmodija (sporogonija) odvija se kod komaraca Anopheles. Aseksualna (tkivna i eritrocitna shizogonija) – u tkivu jetre i ljudskim eritrocitima. Ove značajke životnog ciklusa moraju se uzeti u obzir prilikom dijagnosticiranja malaričnog plazmodija.

Dakle, u krvi novooboljelog pacijenta mogu se naći zametne stanice ciklusa sporogonija. Ali na vrhuncu napada malarije, shizonti se pojavljuju u velikom broju u krvi.

Štoviše, u različitim fazama malarične groznice pojavljuju se različiti oblici plazmodija:

• tijekom razdoblja hladnoće, krv je ispunjena merozoitima, vrstom shizonta;
• na visini temperature u eritrocitima se nakupljaju prstenasti trofozoiti;
• smanjenje temperature karakterizira prevlast ameboidnih trofozoita;
• tijekom razdoblja normalnog stanja, krv sadrži odrasle oblike šizonata.

Proučavanje uzročnika malarije (malarijski plazmodij) provodi se u razmazu i debeloj kapi.

Bilješka:dijagnoza malarije u proučavanju razmaza i debelih kapi krvi ponekad je pogrešna. Krvne pločice u nekim slučajevima mogu se pogrešno klasificirati kao uzročnici malarije. Također, fragmenti leukocita i drugih stanica ponekad simuliraju plazmodij.

Osnovne metode istraživanja protozoa

Pogledajmo ukratko najčešće metode istraživanja prisutnosti protozoa.

Dijagnostika protozoa pomoću nativnog brisa i brisa obojenog Lugolovom otopinom (u fecesu)

Lijek se priprema iz emulzije izmeta u izotoničnoj otopini. Dvije kapi natrijeva klorida i Lugolovu otopinu nanesu na predmetno staklo. Ispitni materijal se dodaje u obje kompozicije pomoću drvenog štapića i, nakon što se prekrije staklom, promatra se u različitim rezolucijama mikroskopa.

Prema određenim znakovima registriraju se pronađene praživotinje. Za točnost se iz jednog materijala pripremaju 2-3 preparata. U sumnjivim slučajevima, analiza se ponavlja nekoliko puta tijekom 2-3 tjedna.

Metoda može otkriti vegetativne i cistične oblike:

• lamblia;
• balantidija;
• dizenterijska ameba.

Zajedno s patogenim oblicima utvrđuju se i nepatogene protozoe. Zdravi nosioci također imaju luminalne i cistične oblike.

Važno:istraživanje treba ponavljati kako bi se izbjegle netočnosti i pogreške.

Rezultat dijagnostike protozoa metodom nativnog i obojenog razmaza treba sadržavati opis oblika uzročnika (proziran, cista, tkivo).

Zahtjevi istraživanja:

• materijal uzet za analizu (tekući izmet) ispituje se najkasnije 30 minuta nakon defekacije;
• formirani izmet mora se dijagnosticirati unutar 2 sata nakon defekacije;
• materijal ne smije sadržavati nečistoće (dezinficijensi, voda, urin);
• za rad s materijalom koriste se samo drveni štapići, stakleni nisu prikladni zbog klizanja sluzi;
• Štapići se moraju spaliti odmah nakon upotrebe.

Konzervativna metoda (pregled izmeta) u dijagnostici protozoa

Studija se provodi fiksiranjem protozoa konzervansom. Razlika između ove metode i prethodne je u tome što vam konzervansi omogućuju dugotrajno čuvanje lijeka.

Korišteni konzervansi:

• Barrow. Sadrži sastojke konzervansa: 0,7 ml natrijevog klorida, 5 ml formalina, 12,5 ml 96% alkohola, 2 g fenola i 100 ml destilirane vode. Sastav za bojanje: 0,01% otopina tionina (azur).
• Safarlijevo rješenje. Sastav: 1,65 g cink sulfata, 10 ml formalina, 2,5 g kristalnog fenola, 5 ml octene kiseline, 0,2 g metilen modrila, 100 ml vode. Ovaj konzervans se koristi u slučajevima kada se materijal mora čuvati više od mjesec dana.

Prazne boce se pune konzervansom, u njih se pretače materijal, u omjeru 3:1, zatim se po potrebi dodaje boja. Procjena rezultata provodi se u ispitivanju 2-3 lijeka.

Metoda obogaćivanja formalin-eterom (analiza na prisutnost protozoa u fecesu)

Ova dijagnostička metoda omogućuje vam odvajanje i koncentriranje cista protozoa. Za analizu su potrebni sljedeći sastojci: formalin (10 ml), 0,85 g izotonične otopine, destilirana voda, sumporni eter, Lugolova otopina.

Mješavina biomaterijala s navedenim tekućinama se miješa i centrifugira. Dobiveni talog na dnu epruvete boji se Lugolovom otopinom i ispituje se na prisutnost cista i vegetativnih oblika.

Metoda otkrivanja leishmanije (bris koštane srži)

Za dijagnozu lišmanijaze koriste se reagensi: mješavina Nikiforova (sumporni eter i etilni alkohol), fosfatni pufer, Azur-eozin prema Romanovskom.

Supstanca koštane srži se nakon posebne pripreme vrlo pažljivo stavlja na predmetno staklo. Koristi se mikroskop s imerzijskim sustavom.

U akutnom razdoblju bolesti u punktatu se nalazi veliki broj lišmanija.

Bilješka:ponekad krvne stanice mogu nalikovati liječenoj lišmaniji, stoga je vrlo važno da laboratorijski tehničar bude pažljiv i ima dovoljno iskustva za samostalno proučavanje.

Metoda otkrivanja lišmanije u razmazu kožnog infiltrata

Potrebni reagensi slični su prethodnom testu.

Ispitni materijal se uzima iz postojećeg tuberkuloznog ili ulceroznog sadržaja. Struganje kod sumnje na lišmaniozu vrši se vrlo pažljivo skalpelom, bez krvi. Zatim se preparat priprema na staklu. Za točnost dobivenih rezultata istovremeno se ispituje nekoliko preparata.

U prisutnosti bolesti, među makrofazima, fibroblastima i limfoidnim stanicama prisutnim u ispitivanom materijalu, također se određuje Leishmania.

Metoda izolacije čiste kulture lišmanije dobivene struganjem patoloških tkiva

Ovom metodom dijagnosticiranja najjednostavnije strugotine tkiva stavljaju se u poseban hranjivi medij u kojem se Leishmania aktivno razmnožava.

Prije uzimanja struganja, koža se pažljivo tretira alkoholom, zatim se u tuberkulozi napravi rez s čijeg se dna ukloni sadržaj i stavi u epruvetu s medijem. Materijal se uzima nekoliko puta, nakon čega se stavlja u različite epruvete. Zatim se u termostatu na temperaturi od 22-24 stupnja odvija uzgoj. Rezultati se procjenjuju pod mikroskopom. Ova metoda se koristi kada su druge, jeftinije i brže metode dijagnosticiranja protozoa neučinkovite.

Kako se testovi na prisutnost protozoa u praksi dešifriraju kapljicom krvi možete vidjeti gledajući video pregled:

Lotin Alexander, medicinski kolumnist

Stolica se ispituje na dva načina:

1. Makroskopski - pronaći helminte, njihove glave, segmente, ostatke strobila. Mali dijelovi izmeta pomiješaju se s vodom u ravnoj kupki ili Petrijevoj zdjelici i gledaju se pri dobrom svjetlu na tamnoj pozadini, koristeći povećalo ako je potrebno. Sve sumnjive tvorbe se pincetom prenose u drugu šalicu vode ili na predmetno staklo u kapi razrijeđenog glicerina.

Uz metodu podržavajući istraženi dio izmeta se pomiješa s vodom u staklenom cilindru, nakon taloženja, gornji sloj vode se isuši. To se ponavlja nekoliko puta. Kada tekućina postane prozirna, ocijedi se, a talog se pogleda u Petrijevoj zdjelici.

2. Mikroskopski - za otkrivanje jaja i ličinki helminta. Postoje mnoge metode istraživanja.

jedan). nativni bris - najčešća i tehnički dostupna metoda istraživanja. Možete pronaći jaja i ličinke svih helminta. Međutim, s malim brojem jaja, oni se ne nalaze uvijek. Stoga se koristi metoda obogaćivanja.

jedan). Fülleborg metoda - Ovo je metoda obogaćivanja koja se temelji na pojavljivanju jaja helmintija u zasićenoj otopini NaCl (1,2 - gustoća; 400 g NaCl na 1 litru vode; 40% otopina NaCl). Metoda je učinkovitija od nativnog brisa. 2-5 g fecesa stavi se u staklene posude i napuni otopinom NaCl, promiješa, te se nakon 45 minuta metalnom omčom ukloni nastali film, kap glicerina stavi na predmetno staklo. Pregledajte pod mikroskopom. Nedostatak metode je odgođeno pojavljivanje jaja raznih helminta, patuljaste trakavice - nakon 15-20 minuta, valjkastih glista - 1,5 sati, bičaša - 2-3 sata.

2) Kalantaryan metoda - također metoda obogaćivanja, ali se koristi zasićena otopina NaNO 3 (gustoća 1,38). Većina jaja pluta, nije potrebno ispitivanje sedimenta. Nedostatak je što se jaja dugo drže u otopini, što dovodi do toga da neka jaja počnu bubriti i taložiti se na dno, nestajući s površinskog filma.

3. Gorjačevljeva metoda - na principu odlaganja jaja, otkrivanje malih jaja trematoda. Kao otopina koristi se zasićena otopina NaCl, a na vrh se pažljivo nanosi 3-4 ml otopine fecesa. Nakon 15-20 sati jaja trematoda talože se na dno. Tekućina se ocijedi, talog na stakalcu i pod mikroskopom.

4. Shulmanova metoda uvijanja – za otkrivanje ličinki helminta u izmetu. Pregledajte samo svježe izolirani izmet. 2-3 g se stavi u staklenu teglu i doda 5 puta više vode, brzo se promiješa štapićem, ne dodirujući stijenke tegle - 20-30 minuta, zatim se štapić brzo izvadi i kap tekućina se na kraju prenese na stakalce i mikroskopira.

5. Bermanova metoda - temelji se na sposobnosti ličinki helminta da migriraju prema toplini, a služi za njihovu identifikaciju u izmetu.

6. Metoda Harade i Morija (metoda uzgoja ličinki) i preporučuje se za testiranje na ankilostomijazu. Metoda se temelji na činjenici da se na toplini i na vlažnom filtriranom papiru jajašca ankilostomatozoida razviju u filariformne ličinke koje se lako otkrivaju. Na sredinu trake filtriranog papira nanese se 15 g izmeta, papir s izmetom se stavi u staklenku, tako da se donji kraj uroni u vodu, a gornji učvrsti čepom. Staklenka se drži u termostatu na 28 0 C 5-6 dana. Za to vrijeme razvijaju se filariformne ličinke i spuštaju se u vodu. Tekućina se ispituje pod povećalom. Ako je teško otkriti, tekućina se centrifugira, nakon što se ličinke ubiju zagrijavanjem na 60 0. Laboratorijski tehničar mora nositi rukavice.

7. Metode za enterobiasis – identifikacija jajašaca pinworma i goveđe trakavice.

a) struganje s perianalnih nabora - pamučnim štapićem čvrsto namotanim na drveni štapić i navlaženim 50% otopinom glicerina. U laboratoriju se bris ispere s 1-2 kapi 50% vodene otopine glicerina.

b) metoda ljepljivih grinja (Graham metoda)

Ljepljiva traka se nalijepi na perianalne nabore, zatim ljepljivim slojem na predmetno staklo i mikroskopira se.

C) struganje štapićima za oči (Rabinovicheva metoda). Za perianalno struganje koriste se stakleni štapići za oči, čiji je najširi dio prekriven posebnim ljepilom, koje omogućuje držanje jajašca pinworma.

Pregled krvi, žuči, sputuma i mišića

Mikroskopija krvi - otkrivaju se ličinke filarije.

Pregled sputuma - jajašca paraganima, larve valjkastih crva, nekator, strongiloid, elementi ehinokoknog mjehura.

Pregled mišića - ako se sumnja na trihinelozu, pregledavaju se mišići bolesnika ili leša, kao i meso koje je navodno izazvalo zarazu osobe. Za potrebe trihineloskopije mišić se reže na male komadiće i stavlja u kompresore, to su dva široka debela stakla koja gnječe mišiće i nalaze se ličinke trihinele u obliku kapsula - metodom kompresije.

Metoda probave - mišići se prelijevaju umjetnim želučanim sokom (otopina klorovodične kiseline i pepsin). Mišići se probavljaju i ličinke se lako identificiraju. Određivanje intenziteta invazije: broj ličinki do 200 na 1 g mišićnog tkiva - umjeren intenzitet invazije; do 500 - intenzivno; preko 500 - superintenzivna invazija.

Serološke metode

Helmintološke metode istraživanja. Metode dijagnosticiranja helmintija dijele se na izravne, koje se temelje na izravnoj detekciji samih helminta ili njihovih fragmenata, kao i ličinki i jajašca helminta (metode ispitivanja izmeta, urina, žuči i duodenalnog sadržaja, sputuma, krvi i tkiva, materijal dobiven struganjem iz perianalnog područja i subunguvalnih prostora), i neizravni, uz pomoć kojih se otkrivaju sekundarne promjene koje se javljaju u ljudskom tijelu kao posljedica aktivnosti helminta (istraživanja morfološkog sastava krvi, imunološki metode za dijagnosticiranje helmintijaza, rendgenske studije itd.). Od izravnih metoda najčešće su koprološke koje se dijele na makro- i mikrohelmintoskopiju. U nekim slučajevima koriste se posebne metode.

Makrogelmitoskopske metode istraživanja usmjeren na traženje helminta ili njihovih fragmenata (skoleks, segmenti, dijelovi strobila cestoda). Koriste se za dijagnosticiranje onih helmintijaza u kojima se jajašca ne izlučuju s pacijentovim izmetom ili se izlučuju u malim količinama i ne uvijek (na primjer, kod enterobiaze, pinworms se nalaze u izmetu, kod teniidoza, segmenti se nalaze).

Da bi se otkrile pinworms ili segmenti cestoda u izmetu, izmet se gleda golim okom. Za diferencijalnu dijagnozu teniidoza, preporuča se pregledati izmet razrijeđen vodom u zasebnim malim obrocima u crnim fotografskim kivetama ili u Petrijevim zdjelicama na tamnoj pozadini. Velike formacije sumnjive na fragmente helminta ispituju se pod povećalom između dva stakalca. Ako se prema kliničkim indikacijama nakon tretmana sugerira otkrivanje malih helminta ili glavica cestoda, tada se sumnjive čestice ispituju pod povećalom u kapi glicerola, a po potrebi i pod mikroskopom.

Mikrohelmintoskopske metode istraživanja(kvalitativni) usmjereni su na identifikaciju jaja i ličinki helminta. Nanesite metodu debelog razmaza s pokrovnom pločom od celofana prema Katu. Kato mješavina se sastoji od 6 ml 3% vodena otopina malahitnog zelenila, 500 ml glicerin i 500 ml 6% otopina fenola. Kato ploče (hidrofilni celofan izrezan na komade 20´ 40 mm) su uronjeni na 24 h u smjesu Kato tako da budu jedna uz drugu (3-5 ml Katova otopina za 100 ploča). 100 mg izmet se nanese na predmetno stakalce, pokrije celofanskom pokrovnom pločom prema Katu i pritisne tako da se izmet razmaže po stakalcu unutar celofanske ploče. Bris se ostavi na sobnoj temperaturi radi bistrenja 40-50 min, a zatim se gleda pod mikroskopom. U vrućoj sezoni, kako bi se spriječilo isušivanje pripravka, na ploču pripremljenog pripravka stavlja se vlažna spužva.

Za potpunu detekciju svih vrsta helminta potrebno je koristiti metodu debelog razmaza Kato celofanske pokrovne ploče zajedno s jednom od metoda obogaćivanja. Najčešće od njih su Kalantaryan metoda i Fülleborn metoda.

Kalantaryan metoda: u tikvicama sa širokim grlom od 100 ml dobro promiješajte staklenim štapićem 5 G izmet, postupnim dodavanjem zasićene otopine natrijeva nitrata (1 kg natrijev nitrat po 1 l voda kad ključa) do ruba čaše. Velike čestice koje su isplivale na površinu uklanjaju se papirnatom lopaticom. Staklo se nanosi na površinu fiziološke otopine (fiziološka otopina se dodaje sve dok smjesa ne dođe u potpuni dodir s predmetnim stakalcem). Nakon 20-30 min Predmetno staklo se ukloni i film se pogleda pod mikroskopom. U nedostatku ove soli, možete koristiti zasićenu otopinu kuhinjske soli prema Fhollebornu (400 G sol u 1 l kipuće vode).

S obzirom na to da jaja velike specifične težine (neoplođena jaja askarida, jaja trematoda i velikih cestoda) ne plutaju, uz ispitivanje površinskog sloja tekućine, pri Füllebornovoj metodi potrebno je pregledati 2-4 preparata iz sedimenta pod mikroskopom.

Posebne laboratorijske metode istraživanja različitih helmintijaza.

Da bi se otkrili fragmenti helminta, izmet se gleda gol, zatim se miješa s vodom i ispituje u malim obrocima u Petrijevoj zdjelici na tamnoj pozadini. Sve sumnjive čestice stavljaju se na predmetno staklo u kap vode i ispituju pod povećalom. Dnevnu porciju možete staviti u cilindar uz dodatak 5-10 puta veće količine vode. Posuda se nakon miješanja ostavi do potpunog taloženja suspendiranih čestica. Površinski sloj tekućine se ocijedi i ulije čista voda. Isprani talog promatra se u malim obrocima golim okom ili pod povećalom. Za otkrivanje jajašca koriste se mikroskopske metode ispitivanja.

Metoda nativnog razmaza. Mala količina izmeta s različitih mjesta ispitnog dijela triturira se na stakalcu u kapi 50% otopine glicerola, izotonične otopine natrijevog klorida ili vode. Smjesa se pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod mikroskopom.

Füllebornova plutajuća metoda. Jedan dio izmeta pomiješa se s 20 dijelova zasićene otopine natrijeva klorida (specifične težine 1,18), dodanih u malim obrocima. Velike čestice koje su isplivale na površinu odmah se uklanjaju, a smjesa se ostavlja 45 minuta. Tijekom tog vremena, jajašca helminta, koja imaju nižu specifičnu težinu od otopine natrijevog klorida, plutaju na površini. Površinski film se ukloni žičanom omčom promjera oko 1 cm i prenese na predmetno stakalce za ispitivanje pod mikroskopom.

Kalantaryan metoda. Učinkovitost plutajuće metode povećava se zamjenom natrijevog klorida zasićenom otopinom natrijevog nitrata. U tom slučaju smjesa se drži 10-15 minuta.

Površinski film nastao nakon taloženja mješavine izmeta s otopinom natrijevog klorida ili natrijevog nitrata također se može ukloniti predmetnim staklom. U tu svrhu se staklenka do vrha napunjena mješavinom izmeta s otopinom soli prekrije predmetnim staklom tako da njegova donja površina bude u dodiru s tekućinom. Nakon taloženja, staklo se uklanja i, brzo okrećući površinu na kojoj se film nalazi, gleda se pod mikroskopom.

Struganje sperianalnih nabora (za identifikaciju jajašca pinworma i onkosfere goveđe trakavice) obavlja se ujutro prije toalete. Drvenom lopaticom umočenom u vodu ili 50% otopinu glicerina struže se oko anusa. Dobiveni materijal se prenese na predmetno staklo u kapi vode ili 50% otopine glicerola i pregleda pod mikroskopom. Lopatica se može zamijeniti vlažnom vatom, kojom se briše perianalno područje, a potom dobro ispere u vodi. Voda se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom.

Bermannova metoda (za otkrivanje ličinki). Na stakleni lijevak umetnut u stalak učvrsti se metalna mrežica obložena s 5-6 g fecesa. Na donji kraj lijevka stavlja se gumena cijev sa stezaljkom. Lijevak se napuni vodom zagrijanom na t°50°, tako da donji dio mrežice s izmetom dođe u dodir s vodom. Larve se aktivno kreću u vodu i nakupljaju u donjem dijelu gumene cijevi. Nakon 4 sata, tekućina se spusti u epruvete za centrifugiranje, centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom.

Analiza sputuma, nazalne sluzi i vaginalnog iscjetka za otkrivanje jaja plućnog trematoda paragonimusa, ličinki askarisa i ankilostoma, jaja pinworma, fragmenata ehinokoknog mjehura. Ispitivani dio sluzi (sekreta) se namaže na staklo i pregleda makroskopski na crno-bijeloj podlozi, a zatim pod mikroskopom. U ispitni materijal možete dodati 25% otopinu antiformina, dobro protresti i držati 1-1,5 sati da se sluz otopi. Smjesa se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom.

Analiza duodenalnog i želučanog soka za otkrivanje jaja jetrenog metilja, ankilostoma, ličinki Strongyloides. Sva tri dijela duodenalnog sadržaja dobivenog s centrifugiraju se i sediment se pregleda pod mikroskopom. Također istražite i.

Studija tkiva. Da bi se identificirale ličinke trihinele, komadići biopsiranog mišića pažljivo se razdvoje u vlakna, stisnu između kompresorskih stakala (debela stakla s vijcima) i pregledaju pod mikroskopom sa zasjenjenim svjetlom. Za identifikaciju cisticerka mišići se stratificiraju iglama za seciranje, izolirana vezikula se očisti od okolnog tkiva, stisne između dva stakalca i pregleda pod povećalom.

Test krvi (za otkrivanje ličinki filariae). Viseća kap ispituje se na pokrovnom stakalcu obrubljenom vazelinom. Možete pomiješati 0,3 ml krvi s 10 puta većom količinom 3% otopine. Smjesa se centrifugira, a talog se pregleda pod mikroskopom. Za obogaćivanje pripravaka dodaje se 3 ml 2% otopine formalina ili 5 puta veća količina tekućine koja se sastoji od 95 ml 5% otopine formalina, 5 ml octene kiseline i 2 ml koncentrirane alkoholne otopine hematoksilina. na 1 ml venske krvi. Smjesa se centrifugira, talog se ispere destiliranom vodom i pregleda pod mikroskopom. Da bi se razlikovale različite vrste filarija, ispituju se razmazi obojeni prema Giemsa-Romanovsky metodi.

Metode imunološke dijagnostike. Primijenite (aglutinaciju, fiksaciju komplementa) i alergijske dijagnostičke testove (vidi) s odgovarajućom vrstom helminta.

Helmintološke metode istraživanja. Riža. Jaja helminta. 1-10 - jaja okruglih crva (nematoda): 1 - 3 - okrugli crvi (1 - oplođeno jaje, 2 - oplođeno jaje bez proteinske ljuske, 3 - neoplođeno jaje); 4 - mačji okrugli crv; 5 - okrugli crvi mesojedi; 5 - pinworms; 7 - trzaj; 8 - tominx; 9 - ankilostoma; 10 - tricho-strongylid. 11-15 - jaja trakavice (cestode): 11 - goveđa trakavica; 12 - patuljasta trakavica; 13 - štakorska trakavica; 14 - tikvina trakavica; 15 - široka vrpca. 16 - 24 - jaja metilja (trematoda): 16 - trematoda (šistosoma) japanska; 17 - trematode (shistosomi) urin - spolni; 18 - trematode (shistosomi) Munson; 19 - trematode (parogonymus) plućne; 20 - trematode (opisthorchis) Sibirski (mačji); 21 - trematode (clonorchis) kineski; 22 - crijevne trematode (metagonimus); 23 - trematode (fasciole) jetre; 24 - trematode (dicrocelium) lancetaste.

Učinkovita i prikladna metoda helmintološkog istraživanja je studija debelog razmaza po Katou, čija je suština otkrivanje jaja helminta u debelom razmazu izmeta, pročišćenom glicerinom i obojenom malahitno zelenom bojom. Sastav Kato mješavine je 6 ml 3% vodene otopine malahit zelene, 500 ml glicerina, 500 ml 6% otopine fenola. Otopina je stabilna i može se čuvati na sobnoj temperaturi. Za pripremu pripravaka, komadići izmeta veličine zrna graška nanose se na predmetno staklo, prekrivaju filmom od hidrofilnog celofana odležanog u smjesi Kato 24 sata i pritišću na staklo kako bi se materijal ravnomjerno rasporedio. Mikroskopski se pregledaju razmazi pročišćeni 40-60 minuta. Otkrivena jajašca helminta se broje i morfološkim značajkama utvrđuje njihova vrsta. Metoda omogućuje otkrivanje jaja askarisa, bičaša, cestoda, trematoda, u manjoj mjeri - ankilostoma i male trakavice.

Također naširoko korišten metode obogaćivanja. Princip flotacijskih metoda je suspendiranje fekalija u slanoj otopini, koja ima veću relativnu gustoću od jaja helminta, zbog čega ona isplivaju na površinu. Sadržaj površinskog filma ispituje se pod mikroskopom. Kao obogaćujuće smjese koriste se otopine: kuhinjska sol - 400 g u 1 litri vode (relativna gustoća po Füllebornu -1,18); natrijev nitrat - 1 kg u 1 litri vode (relativna gustoća prema Kalantaryanu-1,38); natrijev nitrat - 900 g i kalijev nitrat - 400 g u 1 litri vode (relativna gustoća prema Brudastovu i Krasnonosu-1,48). otopine su prokuhano i ohlađeno.
Za istraživanje se 5-10 g izmeta doda u čašu ili staklo od fajanse, doda se 100-200 ml fiziološke otopine i temeljito promiješa. Potom se drvenom lopaticom ili lopaticom od papira ili kartona uklone krupne čestice koje su isplivale i odmah se na površinski film nanese široko stakalce tako da fiziološka otopina i staklo budu u potpunom kontaktu. Nakon 30-40 minuta od taloženja smjese, predmetno staklo se izvadi, stavi pod mikroskop s filmom prema gore i pažljivo se pregleda cijela površina. Kako biste izbjegli isušivanje, možete dodati 2-3 kapi 50% otopine glicerina. Površinski film također se može ukloniti žičanom omčom. Učinkovitost metoda flotacije raste s povećanjem relativne gustoće otopina soli. Ovim metodama moguće je otkriti jaja nematoda, cestoda i trematoda.

Za otkrivanje jaja u fecesu koristi se metoda sedimentacije po Krasilnikovu.. Izmet se miješa s 1% otopinom deterdženta (Lotos prašak za pranje i sl.) u omjeru 1:10 do stvaranja suspenzije. Pod utjecajem deterdženta otapaju se različite komponente izmeta (proteini, masti, elementi tkiva). Nakon 30 minuta sadržaj epruvete se mućka 1-2 minute, nakon čega se centrifugira 5 minuta. Preparati se pripremaju iz sedimenta i promatraju pod mikroskopom.
U terenskim uvjetima, kao i tijekom masovnih istraživanja stanovništva za infestaciju helmintima, prikladno je koristiti Kato metodu debelog razmaza. U stacionarnim uvjetima, pri pregledu pacijenata, poželjno je koristiti najučinkovitije metode flotacije. Kod korištenja ovih metoda tijekom mikroskopiranja, preporučljivo je prebrojati jajašca koja se nalaze u preparatu. Ovisno o standardnoj težini ili volumenu uzetom za proučavanje izmeta (na primjer, 1 žličica ili žlica) i stalnom jednom volumenu slanih otopina, može se grubo procijeniti intenzitet invazija. Ovaj kvantitativni zapis može biti koristan u potkrijepljenju propisanog liječenja i procjeni učinkovitosti dehelmintizacije. Osim toga, za utvrđivanje intenziteta infekcije mogu se koristiti i druge preciznije kvantitativne metode, posebice Stollova metoda.

Za dijagnozu teniarhinhoze i enterobiaze primijeniti metodu istraživanja perianalno-rektalnih strugotina. Drvenom lopaticom namočenom u 50% otopinu glicerola sastružu se perianalni nabori ujutro prije defekacije oko anusa i donjeg rektuma. Dobiveni materijal, očišćen spatulom uz rub pokrovnog stakalca, stavi se na predmetno stakalce u kap 50%-tne otopine glicerola, pokrije pokrovnim stakalcem i pregleda pod mikroskopom. Također možete pregledati traku celulozne trake koja se najprije ljepljivom stranom pritisne na pernanalne nabore, zatim se stavi na predmetno staklo i mikroskopira.

Detekcija ličinki nematoda u izmetu Bermanovom metodom. Metoda se temelji na termotropnom svojstvu ličinki. Za istraživanje se uzima 1 žlica izmeta, stavlja se u metalnu mrežicu ili mrežicu od nekoliko slojeva gaze na žičanom okviru. Rešetka je ugrađena u lijevak pričvršćen u tronožac. Na lijevak se nadovezuje gumena cijev sa stezaljkom. Podižući mrežicu, lijevak se puni vodom (temperatura +40°...+50°C) tako da je donji dio mrežice uronjen u vodu. Ličinke iz fecesa aktivno migriraju u toplu vodu i, taložeći se, nakupljaju se u donjem dijelu lijevka. Nakon 2-4 sata stezaljka se otvori, voda se spusti u epruvetu za centrifugu i centrifugira 2-3 minute. Zatim se supernatant iscijedi, precipitat se prenese na predmetno staklo i pregleda pod mikroskopom, gdje se nalaze pokretne ličinke uzročnika strongiloidijaze.

Harad metoda i Mori omogućuje razlikovanje ličinki ankilostoma i nekatora. Ličinke ankilostoma se uzgajaju na filtar papiru. U tu svrhu se 0,5 g svježeg fecesa uzetog od bolesnika najkasnije 1 sat nakon defekacije nanese na filtar papirne trake veličine 12X1,5 cm, s tim da oba kraja trake budu čista. Traka se jednim krajem uroni u epruvetu čiji se četvrti dio napuni vodom, a drugi se stegne plutenim čepom. Cijevi se stavljaju u termostat na temperaturu od +26 ... + 28°C. Ličinke koje su se razvile iz jajašaca spuštaju se duž filter papira i talože na dno epruvete. Nakon 5-6 dana trakica papira se izvadi, a zaostala tekućina u epruveti ispita se pod povećalom ili centrifugira. Talog nastao centrifugiranjem ispituje se pod svjetlosnim mikroskopom. Kada se umjesto epruveta koriste tetraedarske staklene posude (veličine 15XYX7 cm), na čije su stijenke pričvršćene 4 papirne trake, povećava se učinkovitost analiza (GM Maruashvili i sur., 1966).

Metode istraživanja shistosomijaze . Pregled fecesa - dio fecesa se pomiješa sa 250 ml vode, filtrira kroz 3 sloja gaze u konusnu posudu, koja se do vrha napuni vodom. Nakon 30 minuta tekući sloj se iscijedi, a talogu se doda svježi dio vode. Talog se ispire dok se ne dobije bistri supernatant i mikroskopski pregleda.

Metoda larvoskopije - 20-25 g fecesa stavi se u Erlenmeyerovu tikvicu s bočno zalemljenom staklenom cjevčicom i ispere vodom iz slavine. Zatim se tikvica prekrije tamnim papirom, ostavljajući zalemljenu staklenu cijev na svjetlu na temperaturi od +25...+30°C. Izleženi miracidije koncentriraju se na meniskusu u lateralnoj cijevi, gdje se mogu vidjeti povećalom ili golim okom. Pregled urina - 100 ml urina sakupljenog od 10 do 14 sati ili se dnevni dio taloži, a potom centrifugira na 1500 okretaja u minuti. Dobiveni talog se nanese* na stakalce i mikroskopira. WHO preporučuje metodu za filtriranje cijele porcije urina. Nakon filtracije, filtri se tretiraju formalinom ili zagrijavaju (kako bi se ubila jajašca), a zatim se navlaže vodenom otopinom ninhidrina. U osušenim pripravcima zameci jaja dobivaju ljubičastu boju.

Korištenje imunoloških metode istraživanja za dijagnosticiranje shistosomijaze su teške, budući da odrasli shistosomi i njihova jajašca sadrže veliki broj antigena koji uzrokuju imunološke reakcije koje nisu specifične za vrstu (D. Bradley, 1979.).

U našoj zemlji, za formuliranje imunoloških reakcija kod helmintijaze, proizvodi se niz standardnih dijagnostikuma. Kožni alergijski test na ehinokokozu i alveokokozu, RLA s antigenom ehinokokoze, RSK na hladnom, precipitacijska reakcija na hladnom u raznim modifikacijama (prstenasta precipitacija, precipitacija u epruvetama ili kapilarama, u koje se stavljaju antigeni trihineloze, cisticerkoze i migroaskarijaze) imaju praktičnu primjenu. primjena. Standardne dijagnostikume za postavljanje navedenih seroloških reakcija izrađuju poduzeća koja proizvode bakterijske pripravke. Proizvođač prilaže detaljne upute o pravilima čuvanja, rokovima valjanosti lijeka i uputama o uporabi odgovarajućih antigena s tehnikom postavljanja reakcije na proizvedene dijagnostikume.

Posljednjih godina značajno se proširio popis seroloških testova koji se koriste za dijagnosticiranje helmintijaze. U tu svrhu koriste se sljedeće reakcije: RIGA, neizravna imunofluorescencija (RIF), gel imunodifuzija (RID), kontra imunoelektroforeza (VIEF), REAMA. Ove reakcije mogu se koristiti za ascariasis, toxocariasis, trichinosis, ankilostomasis infekcije, filariasis, ehinokokozu i alveokokozu, opisthorchiasis, shistosomiasis, i paragonimiasis. Međutim, za ove reakcije u našoj zemlji se ne izdaju standardni dijagnostikumi niti je regulirana tehnika njihovog postavljanja. Zasebni laboratoriji, uglavnom znanstveni, pripremaju vlastite specifične antigene i koriste ih u različitim modifikacijama. Opis ovih metoda široko je predstavljen u literaturi i nije striktno unificiran. Tumačenje podataka imunotestova treba se temeljiti na proučavanju dinamike imunološkog odgovora, uzimajući u obzir razinu specifičnosti i osjetljivosti svakog primijenjenog serološkog testa. Stoga je prilikom postavljanja dijagnoze, kao i tijekom seroepidemioloških istraživanja stanovništva, preporučljivo koristiti nekoliko najosjetljivijih reakcija. S ovih pozicija, VIEF i REMA reakcije, koje se razlikuju po visokoj osjetljivosti i prilično visokoj specifičnosti, dobro su se pokazale (P. Ambroise-Thomas, 1978; I. E. Ballad, 1979; G. M. Negryanu, 1980; A. M. Ponomareva, 1981; A Ya. Lysenko, 1978, itd.). Djelotvornost REAMA je ispitana kod amebijaze, lišmanijaze, tripanosomijaze i toksoplazmoze (GA Ermolin, 1980).