सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं। शीघ्र प्रतिक्रिया
यह लेख वर्षा प्रतिक्रिया की घटना के लिए समर्पित होगा। यहां हम इस घटना के निर्माण की विशेषताओं, प्रसार की घटना, सामान्य विशेषताओं, मानव जीवन में भूमिका और बहुत कुछ पर विचार करेंगे।
घटना के साथ परिचित
वर्षा सीरोलॉजिकल प्रकार की एक घटना है, जिसके दौरान घुलनशील एंटीजन एंटीबॉडी के साथ बातचीत करते हैं और परिणामस्वरूप, वर्षा देखी जाती है - अवक्षेप।
वर्षा प्रतिक्रिया की सामान्य विशेषता प्रतिजन और एंटीबॉडी के समन्वित प्रभाव का एक रूप है। इस प्रकार की बातचीत ज्ञात एंटीबॉडी और एंटीजन को जोड़कर परीक्षण पदार्थ में अज्ञात एंटीजन की उपस्थिति का निर्धारण करना संभव बनाती है। लवण की उपस्थिति के बिना वर्षा की प्रक्रिया बदतर होती जाएगी, और सबसे अच्छा इष्टतम 7.0-7.4 पीएच की सीमा के भीतर होता है।
एक प्रतिक्रिया के घटक
वर्षा प्रतिक्रिया के घटकों में तीन मुख्य तत्व हैं:
- आणविक प्रकृति वाला एक एंटीजन। यह ठीक प्रकार की अवस्था में है, दूसरे शब्दों में, यह घुलनशील है। इसके अलावा, ऐसे एंटीजन को प्रीसिपिटोजेन कहा जाता है, जो एक लाइसेट या ऊतक निकालने आदि है। एक प्रीसिपिटोजेन में एग्लूटीनोजेन से एक विशिष्ट अंतर होता है, जो कि कणों के आकार में निहित होता है। Agglutinogen में एक अंतर्निहित कोशिका आकार होता है, और अवक्षेपण अणु के आकार के अनुरूप होते हैं। प्रतिजन समाधान पारदर्शिता की विशेषता है।
- मानव रक्त सीरम में और साथ ही प्रतिरक्षा निदान सीरम में पाया जाने वाला एक एंटीबॉडी, जिसमें अध्ययन किए गए एंटीबॉडी होते हैं।
- इलेक्ट्रोलाइट्स सोडियम क्लोराइड का एक घोल है, जो एक आइसोटोनिक अवस्था की विशेषता है।
प्रीसिपिटोजेन तैयारी
एक अवक्षेपण प्रतिक्रिया की स्थापना एक अवक्षेपण के बिना असंभव है, जो सामग्री को पीसने और उनसे प्रोटीन प्रतिजन निकालने से प्राप्त होती है। निष्कर्षण उबालने या अन्य तरीकों से होता है।
प्रीसिपिटोजेन्स का एक उल्लेखनीय उदाहरण लाइसेट्स, साथ ही ऊतक और अंग के अर्क, रक्त सीरम, माइक्रोबियल शोरबा संस्कृतियों के आधार पर विभिन्न प्रकार के छानने के साथ-साथ सूक्ष्मजीवों और ऑटोलिसेट पदार्थों के नमक के अर्क हैं।
वर्षा का मंचन
अब अवक्षेपण की अभिक्रिया निर्धारित करने की विधि पर विचार करें।
एक वलय-वर्षा प्रतिक्रिया की जाती है, जो विशेष रूप से तैयार टेस्ट ट्यूब में होती है। सीरम को व्यंजन की गुहा में पेश किया जाता है, इसे पिपेट टोंटी की मदद से दीवार पर डाला जाता है। इसके बाद, उचित मात्रा में अवक्षेपक को शीर्ष पर सावधानीपूर्वक स्तरित किया जाता है, और फिर ट्यूब को क्षैतिज से लंबवत स्थिति में लाया जाता है। वर्षा की प्रतिक्रिया को स्थापित करना और ध्यान में रखना एक बहुत ही सावधानीपूर्वक ऑपरेशन है। परिणाम प्रतिजन और एंटीबॉडी के बीच की सीमा पर एक सफेद अंगूठी की उपस्थिति के बाद दर्ज किया जाता है। यदि प्रतिक्रिया के प्रतिक्रियाशील तत्व एक दूसरे से मेल खाते हैं, तो वे जुड़े हुए हैं, लेकिन यह उनकी बातचीत के लंबे समय के बाद ध्यान देने योग्य हो जाता है।
वर्षा की प्रतिक्रिया पेट्री डिश या कांच की स्लाइड पर भी की जाती है, जहां अगर जेल को स्थानांतरित किया जाता है, तो इसे एक छोटी परत में लगाया जाता है। जेल में इसके सख्त होने के बाद, कम संख्या में कुओं को काट दिया जाता है जिसमें एंटीजन और एंटीबॉडी रखे जाएंगे। इस क्रिया को करने के दो तरीके हैं: रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन की विधि और डबल इम्यूनोडिफ्यूजन।
सामान्य जानकारी
वर्षा के संचालन की यांत्रिकी एग्लूटिनेशन डिवाइस के समान है। प्रतिरक्षा-प्रकार के सीरम के प्रभाव में, प्रतिजन जो पहले से ही प्रतिक्रिया कर चुका है, स्वयं को कम कर देता है। एक महत्वपूर्ण शर्त सीरम और प्रतिजन दोनों की पारदर्शिता है।
यदि प्रतिजनों को प्रतिरक्षी पर आरोपित कर दिया जाए तो अभिक्रिया के पंजीकरण में सुधार संभव है। नतीजतन, एक अंगूठी के रूप में अवक्षेप की उपस्थिति देखी जा सकती है। इस घटना को रिंग वर्षा कहा जाता है और 2.5 से 3.5 मिमी व्यास वाले विशेष ट्यूबों में किया जाता है। वर्षा प्रतिक्रिया के सबसे व्यापक उदाहरणों में से एक एंथ्रेक्स का निदान है।
वर्षा आगर में डिप्थीरिया संस्कृति की विषाक्तता के स्तर को निर्धारित करना संभव बनाती है।
विचाराधीन प्रतिक्रिया के दौरान, एंटीजेनिक कॉम्प्लेक्स और एंटीबॉडी अवक्षेपित होते हैं। वर्षा एक प्रतिरक्षाविज्ञानी घटना है जो आपको एक बीमार या टीकाकृत व्यक्ति और जानवरों के रक्त सीरा में एंटीबॉडी की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति देती है।
अनुमापन परिणाम
यह जानना महत्वपूर्ण है कि उपरोक्त विधि के अनुमापन द्वारा प्राप्त डेटा मात्रात्मक नहीं है। एंटीबॉडी की निहित संख्या के मात्रात्मक मूल्यांकन को बनाने और विश्लेषण करने के लिए, एम। हीडलबर्गर और ई। कबाट द्वारा एक विशेष प्रतिक्रिया तकनीक विकसित की गई थी, जो तुल्यता क्षेत्र की खोज और पहचान पर आधारित है। एंटीसेरम की निरंतर मात्रा के साथ एंटीजन की आयु संख्या को मिलाने से शुरू में बनने वाले अवक्षेप में वृद्धि होती है, और फिर एंटीजन परिसरों को भंग करने की क्षमता में वृद्धि के कारण फिर से घट जाती है। प्रत्येक ट्यूब में निहित सतह पर तैरनेवाला में एंटीबॉडी की मात्रा का निर्धारण करके, आप पा सकते हैं कि एंटीबॉडी वाले व्यंजनों की एक निश्चित संख्या में तरल गायब होगा। यहां अन्य परखनलियों की तुलना में सबसे बड़ा अवक्षेप बनेगा। इसके कारण और प्रोटीन के कुल मूल्य से एंटीजेनिक प्रोटीन अवक्षेप के घटाव के कारण, विशेष रूप से अध्ययन किए गए सीरम की मात्रा में निहित एंटीबॉडी का सटीक मूल्य प्राप्त करना संभव है। इसके अलावा, अवक्षेप के प्रोटीन अणुओं की मात्रा नाइट्रोजन की मात्रा या वर्णमिति विधियों द्वारा निर्धारित की जाती है।
मूल्यों का अनुमान
नैदानिक पद्धति में वर्षा मूल्यों का आकलन एक एंटीबॉडी के प्रतिरक्षा सीरम में उपस्थिति की संभावना को ध्यान में रखना चाहिए जिसमें प्रीसिपिटिन की संपत्ति नहीं होती है, जिससे यह निम्नानुसार है कि अवक्षेप स्वयं के साथ प्रतिक्रिया करने के बाद नहीं बन सकता है प्रतिजन। ऐसे अणुओं की सूची में अधूरे एंटीबॉडी और गामा-ए ग्लोब्युलिन के समूह की कुछ प्रजातियां शामिल हैं।
प्रयोगशाला स्थितियों में अवक्षेपण प्रतिक्रिया विभिन्न प्रकार के संशोधनों में अपना आवेदन पाती है। उदाहरण के लिए, थर्मोप्रेजर्वेशन प्रतिक्रिया का उपयोग बोटुलिज़्म, एंथ्रेक्स आदि के जीवाणु प्रतिजनों का पता लगाने के लिए किया जाता है, जो थर्मल विकृतीकरण से नहीं गुजरते हैं। वलय वर्षा के विपरीत, इस प्रकार की प्रतिक्रिया उबली हुई अवस्था में सामग्री के छानने का उपयोग करती है।
एक जटिल मिश्रण में वर्षा किसी को मिश्रण के अलग-अलग तत्वों के गुणों को चिह्नित करने की अनुमति नहीं देती है। ऐसे मामलों में, एक व्यक्ति अगर में वर्षा की विधि का सहारा लेता है, और इम्यूनोइलेक्ट्रोफेरेसिस का भी उपयोग करता है।
फैलाना वर्षा
अनुसंधान के इस क्षेत्र में, एक फैलाना वर्षा प्रतिक्रिया (आरपीडी) की अवधारणा है। यह एंटीबॉडी और घुलनशील एंटीजन के जेल में फैलने की क्षमता पर आधारित है। प्रसार एक निश्चित पदार्थ के अणु की दूसरे के अणुओं में प्रवेश करने की क्षमता है, जो थर्मल गति के कारण होता है।
जेल एक छितरी हुई प्रणाली है जिसमें ठोस चरण में तरल चरण समान रूप से वितरित किया जाता है। इस तरह की प्रतिक्रिया के लिए सबसे अधिक बार अगर जेल का उपयोग किया जाता है।
पैरामीटर देने के बाद, जिसके तहत अणु एक दूसरे के संबंध में फैल सकते हैं, उनकी बैठक एक एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन के साथ होगी। ऐसा नियोप्लाज्म जेल में ही फैलने में सक्षम है, और यह एक पट्टी का रूप लेते हुए अवक्षेपित हो जाएगा, जिसे नग्न आंखों से पता लगाया जा सकता है। यदि प्रतिजन और प्रतिरक्षी समजात हैं, तो कोई बैंड नहीं बनेगा।
उन परिस्थितियों का निर्माण करना जिनके तहत अगर परत में विसरण होगा, इसमें घटकों को भरना शामिल है, लेकिन कुओं की कुल संख्या और उनकी सापेक्ष स्थिति उस समस्या के प्रकार से निर्धारित होती है जिसे हल करने की आवश्यकता होती है। आरपीडी एक व्यक्ति को एक ज्ञात एंटीबॉडी सीरा का उपयोग करके परीक्षण करके अज्ञात पृथक वायरस का पता लगाने और पहचानने की अनुमति देता है।
आवेदन पत्र
वर्षा का व्यापक रूप से न केवल रोगों के निदान में उपयोग किया जाता है, बल्कि फोरेंसिक चिकित्सा परीक्षा में भी इसका उपयोग पाया जाता है। ऐसे विश्लेषण की कल्पना करना मुश्किल है जिसमें रक्त की प्रजाति, एक अंग या ऊतक का एक हिस्सा जो अपराध के हथियार पर पाया जाता है, जो वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग नहीं करता है, का निर्धारण करना संभव है। इस प्रक्रिया के दौरान, अवक्षेपण सीरा का उपयोग किया जाता है, जो विभिन्न जानवरों और पक्षियों का टीकाकरण करके प्राप्त किया जाता है। यह महत्वपूर्ण है कि सीरम टिटर का स्तर 1:10000 से कम न हो, और इसकी पर्याप्त विशिष्टता भी होनी चाहिए। रक्त या उसकी पपड़ी के ज्ञात स्थान से, भौतिक के लिए एक अर्क बनाया जाता है। समाधान, जो आगे अवक्षेपण सीरम के संपर्क में आएगा। इस प्रतिक्रिया के अनुसार, मनुष्यों और जानवरों दोनों के ऊतक और अंग प्रोटीन के प्रकार स्थापित करना संभव है। बादलों के अर्क प्राप्त करने से व्यक्ति को अगर पर वर्षा का सहारा लेना पड़ता है।
निष्कर्ष
पढ़ी गई जानकारी का विश्लेषण करते हुए, हम यह निष्कर्ष निकाल सकते हैं कि किसी व्यक्ति के लिए वर्षा की प्रतिक्रियाएं अत्यंत महत्वपूर्ण हैं, क्योंकि वे एंटीबॉडी की मदद से विभिन्न एंटीजन का निदान करने की अनुमति देते हैं, इस घटना का व्यापक रूप से फोरेंसिक चिकित्सा परीक्षा में उपयोग किया जाता है और आपको रक्त के प्रकार की पहचान करने की अनुमति देता है, किसी विशेष विषय के संबंध में ऊतक या अंग। वर्षा के कई प्रकार और तरीके हैं, जिनका उपयोग समस्या के समाधान की उभरती जरूरतों के अनुसार किया जाता है।
एक वर्षा प्रतिक्रिया (आरपी) एक घुलनशील आणविक प्रतिजन के एक परिसर का गठन और वर्षा है जिसमें एंटीबॉडी के साथ एक बादल के रूप में एक अवक्षेप कहा जाता है। यह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाकर बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा परिसर के गठन के स्तर को कम कर देती है।
RP को टेस्ट ट्यूब (रिंग रेनेशन रिएक्शन), जैल, न्यूट्रिएंट मीडिया आदि में रखा जाता है। सेमी-लिक्विड अगर या agarose जेल में RP की किस्मों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है: Ouchterlony डबल इम्यूनोडिफ्यूजन, रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस, आदि।
तंत्र। यह पैथोलॉजिकल सामग्री, पर्यावरणीय वस्तुओं या शुद्ध जीवाणु संस्कृतियों से निकाले गए पारदर्शी कोलाइडल घुलनशील एंटीजन के साथ किया जाता है। प्रतिक्रिया उच्च एंटीबॉडी टाइटर्स के साथ पारदर्शी नैदानिक अवक्षेपण सीरा का उपयोग करती है। अवक्षेपण सीरम के अनुमापांक को प्रतिजन का उच्चतम तनुकरण माना जाता है, जो प्रतिरक्षा सीरम के साथ परस्पर क्रिया करते समय एक दृश्य अवक्षेप - मैलापन का कारण बनता है।
वलय वर्षा प्रतिक्रिया को संकीर्ण टेस्ट ट्यूब (व्यास 0.5 सेमी) में रखा जाता है, जिसमें 0.2-0.3 मिलीलीटर अवक्षेपण सीरम मिलाया जाता है। फिर, एक पाश्चर पिपेट के साथ, प्रतिजन समाधान के 0.1-0.2 मिलीलीटर को धीरे-धीरे स्तरित किया जाता है। ट्यूबों को सावधानीपूर्वक "ऊर्ध्वाधर स्थिति में स्थानांतरित किया जाता है। प्रतिक्रिया 1-2 मिनट के बाद दर्ज की जाती है। सकारात्मक प्रतिक्रिया के मामले में, सीरम और एंटीजन के बीच की सीमा पर एक सफेद अंगूठी के रूप में एक अवक्षेप दिखाई देता है। नियंत्रण ट्यूबों में कोई अवक्षेप नहीं बनता है।
15. पूरक में शामिल प्रतिक्रिया: हेमोलिसिस प्रतिक्रिया, पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया। तंत्र, घटक, अनुप्रयोग।
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (आरसीसी) यह है कि, जब एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे के अनुरूप होते हैं, तो वे एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं, जिससे पूरक (सी) एंटीबॉडी के एफसी टुकड़े के माध्यम से जुड़ा होता है, यानी एंटीजन-एंटीबॉडी द्वारा पूरक बंधन होता है। जटिल। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है।
एजी और एटी की विशिष्ट बातचीत पूरक के सोखना (बाध्यकारी) के साथ है। चूंकि पूरक निर्धारण की प्रक्रिया नेत्रहीन प्रकट नहीं होती है, जे। बोर्डेट और ओ। झांगू ने एक संकेतक के रूप में हेमोलिटिक सिस्टम (भेड़ एरिथ्रोसाइट्स + हेमोलिटिक सीरम) का उपयोग करने का प्रस्ताव रखा, जो दर्शाता है कि पूरक तय है या नहीं
एजी-एटी कॉम्प्लेक्स। यदि एजी और एटी एक दूसरे के अनुरूप हैं, अर्थात, एक प्रतिरक्षा परिसर का गठन किया गया है, तो पूरक इस परिसर को बांधता है और हेमोलिसिस नहीं होता है। यदि एटी एजी के अनुरूप नहीं है, तो कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक, शेष मुक्त, दूसरी प्रणाली से जुड़ता है और हेमोलिसिस का कारण बनता है।
अवयव। पूरक निर्धारण परीक्षण (आरसीसी) एक जटिल सीरोलॉजिकल परीक्षण है। इसके कार्यान्वयन के लिए, 5 अवयवों की आवश्यकता होती है, अर्थात्: एजी, एटी और पूरक (पहली प्रणाली), भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम (दूसरी प्रणाली)।
सीएससी के लिए एंटीजन विभिन्न मारे गए सूक्ष्मजीवों, उनके लाइसेट्स, बैक्टीरिया के घटकों, पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित और सामान्य अंगों, ऊतक लिपिड, वायरस और वायरस युक्त सामग्री की संस्कृतियां हो सकती हैं।
पूरक के रूप में, ताजा या सूखा गिनी पिग सीरम का उपयोग किया जाता है।
तंत्र। आरएसके दो चरणों में किया जाता है: पहला चरण - एंटीजन + एंटीबॉडी + पूरक के तीन घटकों वाले मिश्रण का ऊष्मायन; दूसरा चरण (संकेतक) - मिश्रण में मुक्त पूरक का पता लगाने के लिए इसमें एक हेमोलिटिक प्रणाली शामिल होती है जिसमें राम एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम होता है जिसमें एंटीबॉडी होते हैं। प्रतिक्रिया के पहले चरण में, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के निर्माण के दौरान, पूरक बंधन होता है, और फिर दूसरे चरण में, एंटीबॉडी द्वारा संवेदी एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होगा; प्रतिक्रिया सकारात्मक है। यदि एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे से मेल नहीं खाते हैं (परीक्षण नमूने में कोई एंटीजन या एंटीबॉडी नहीं है), तो पूरक मुक्त रहता है और दूसरे चरण में एरिथ्रोसाइट-एंटीएरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स में शामिल हो जाएगा, जिससे हेमोलिसिस होता है; प्रतिक्रिया नकारात्मक है। आवेदन। आरएसके का उपयोग कई संक्रामक रोगों के निदान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से उपदंश (वास्समैन प्रतिक्रिया) में
इम्यूनोडायग्नोस्टिक प्रतिक्रियाएं। एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रियाएं और लेबल वाले घटकों के साथ प्रतिक्रियाएं। सूक्ष्मजीवों की पहचान और संक्रामक रोगों के निदान के लिए उपयोग करें।
प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का उपयोग बीमार और स्वस्थ लोगों में नैदानिक और प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययनों में किया जाता है। इस उद्देश्य के लिए आवेदन करें सीरोलॉजिकल तरीके(अक्षांश से। सीरम - सीरम और लोगो - सिद्धांत), यानी, रक्त सीरम और अन्य तरल पदार्थों के साथ-साथ शरीर के ऊतकों में निर्धारित एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रियाओं का उपयोग करके एंटीबॉडी और एंटीजन का अध्ययन करने के तरीके।
रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ों के प्रतिजनों के खिलाफ एंटीबॉडी का पता लगाने से रोग का निदान करना संभव हो जाता है। सीरोलॉजिकल अध्ययन का उपयोग माइक्रोबियल एंटीजन, विभिन्न जैविक रूप से सक्रिय पदार्थों, रक्त समूहों, ऊतक और ट्यूमर एंटीजन, प्रतिरक्षा परिसरों, सेल रिसेप्टर्स आदि की पहचान के लिए भी किया जाता है।
जब एक रोगी से एक सूक्ष्म जीव को अलग किया जाता है, तो रोगज़नक़ की पहचान उसके प्रतिजैविक गुणों का अध्ययन करके प्रतिरक्षा निदान सीरा का उपयोग करके की जाती है, अर्थात विशिष्ट एंटीबॉडी वाले हाइपरइम्यूनाइज़्ड जानवरों से रक्त सीरा। यह तथाकथित सीरोलॉजिकल पहचानसूक्ष्मजीव।
माइक्रोबायोलॉजी और इम्यूनोलॉजी में, एग्लूटीनेशन, वर्षा, न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन, पूरक से जुड़ी प्रतिक्रियाएं, लेबल एंटीबॉडी और एंटीजन (रेडियोइम्यूनोलॉजिकल, एंजाइम इम्यूनोएसे, इम्यूनोफ्लोरेसेंस विधियों) का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। सूचीबद्ध प्रतिक्रियाएं पंजीकृत प्रभाव और सेटिंग की तकनीक में भिन्न हैं, हालांकि, वे सभी बुनियादी हैं। एक एंटीबॉडी के साथ एक एंटीजन की बातचीत की प्रतिक्रिया पर वैन और एंटीबॉडी और एंटीजन दोनों का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता की विशेषता है।
मुख्य इम्यूनोडायग्नोस्टिक प्रतिक्रियाओं के सिद्धांत और योजनाएं नीचे दी गई हैं। प्रतिक्रियाओं को स्थापित करने की एक विस्तृत तकनीक में दी गई है। इम्यूनोडायग्नोस्टिक्स के लिए व्यावहारिक दिशानिर्देश।
एग्लूटिनेशन रिएक्शन - आरए(अक्षांश से। एग्लूटी- राष्ट्रीय या बहुराष्ट्रीय- बॉन्डिंग) - एक साधारण प्रतिक्रिया जिसमें एंटीबॉडी कॉर्पसकुलर एंटीजन (बैक्टीरिया, एरिथ्रोसाइट्स या अन्य कोशिकाओं, उन पर adsorbed एंटीजन के साथ अघुलनशील कण, साथ ही मैक्रोमोलेक्यूलर समुच्चय) को बांधते हैं। यह इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में होता है, उदाहरण के लिए, जब एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान जोड़ा जाता है।
एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के विभिन्न रूपों का उपयोग किया जाता है: विस्तारित, अनुमानित, अप्रत्यक्ष, आदि। एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया फ्लेक्स या तलछट के गठन से प्रकट होती है।
आरए के लिए प्रयोग किया जाता है:
रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण, उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस (राइट, हेडेलसन प्रतिक्रियाएं), टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया) और अन्य संक्रामक रोगों के साथ;
रोगी से पृथक रोगज़नक़ का निर्धारण;
एरिथ्रोसाइट एलोजेन्स के खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का उपयोग करके रक्त समूहों का निर्धारण।
रोगी के एंटीबॉडी का निर्धारण करने के लिए रखनाविस्तारित एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया:रोगी के रक्त सीरम के कमजोर पड़ने में जोड़ें निदान(मारे गए रोगाणुओं का निलंबन) और 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के कई घंटों के बाद, उच्चतम सीरम कमजोर पड़ने (सीरम टिटर) का उल्लेख किया जाता है, जिस पर एग्लूटिनेशन हुआ, यानी एक अवक्षेप बनता है।
एग्लूटीनेशन की प्रकृति और दर एंटीजन और एंटीबॉडी के प्रकार पर निर्भर करती है। एक उदाहरण विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ डायग्नोस्टिकम (ओ- और आर-एंटीजन) की बातचीत है। एग्लूटिनेशन रिएक्शन के साथ ओ-डायग्नोस्टिकम(गर्मी से मारे गए बैक्टीरिया, थर्मोस्टेबल बनाए रखना हे प्रतिजन)महीन दाने वाले एग्लूटिनेशन के रूप में होता है। एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मेलिन द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, हीट-लैबाइल फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया मोटे दाने वाली होती है और तेजी से आगे बढ़ती है।
यदि रोगी से पृथक रोगज़नक़ का निर्धारण करना आवश्यक है, तो डाल दें ओरिएंटिंग एग्लूटिनेशन रिएक्शन,डायग्नोस्टिक एंटीबॉडी (एग्लूटीनेटिंग सीरम) का उपयोग करके, यानी, रोगज़नक़ का सीरोटाइपिंग किया जाता है। एक कांच की स्लाइड पर एक अनुमानित प्रतिक्रिया की जाती है। 1:10 या 1:20 के तनुकरण में डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरम की एक बूंद में रोगी से अलग किए गए रोगज़नक़ की एक शुद्ध संस्कृति जोड़ें। एक नियंत्रण पास में रखा गया है: सीरम के बजाय, सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद लागू की जाती है। जब सीरम और रोगाणुओं के साथ एक बूंद में एक फ्लोकुलेंट तलछट दिखाई देती है, तो वे डालते हैं व्यापक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियापरीक्षण ट्यूबों में एग्लूटीनेटिंग सीरम के बढ़ते तनुकरण के साथ, जिसमें रोगज़नक़ निलंबन की 2-3 बूंदें डाली जाती हैं। एग्लूटिनेशन को तलछट की मात्रा और तरल के स्पष्टीकरण की डिग्री द्वारा ध्यान में रखा जाता है। यदि नैदानिक सीरम के अनुमापांक के निकट तनुकरण में एग्लूटिनेशन नोट किया जाता है तो प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है। उसी समय, नियंत्रणों को ध्यान में रखा जाता है: आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से पतला सीरम पारदर्शी होना चाहिए, एक ही समाधान में रोगाणुओं का निलंबन समान रूप से बादल रहित होना चाहिए, बिना तलछट के।
विभिन्न संबंधित जीवाणुओं को एक ही नैदानिक एग्लूटीनेटिंग सीरम द्वारा एकत्र किया जा सकता है, जिससे उनकी पहचान मुश्किल हो जाती है। इसलिए, आनंद लें अधिशोषित एग्लूटीनेटिंग सीरा,जिसमें से क्रॉस-रिएक्टिव एंटीबॉडी को उनके संबंधित बैक्टीरिया द्वारा सोखना द्वारा हटा दिया गया है। ऐसे सीरा में केवल इस जीवाणु के लिए विशिष्ट प्रतिरक्षी रहते हैं। इस तरह से मोनोरिसेप्टर डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सेरा तैयार करने का प्रस्ताव ए. कास्टेलानी (1902) ने दिया था।
अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया (आरएनएचए, आरपीजीए) सतह पर सोखने वाले एंटीजन या एंटीबॉडी के साथ एरिथ्रोसाइट्स के उपयोग पर आधारित है, जिसकी गेंद के रक्त सीरम के संबंधित एंटीबॉडी या एंटीजन के साथ बातचीत से एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपक जाते हैं और नीचे गिर जाते हैं। टेस्ट ट्यूब या सेल मेंएक स्कैलप्ड तलछट का रूप (चित्र। 13.2)। एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एरिथ्रोसाइट्स एक "बटन" के रूप में बस जाते हैं। आमतौर पर, आरएनएएच में एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम का उपयोग करके एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स होता है जिसमें सोखना होता है परउन्हें एंटीजन। कभी-कभी हम एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिक्स का उपयोग करते हैं, जिस पर एंटीबॉडी का विज्ञापन किया जाता है। उदाहरण के लिए, इसमें एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी बोटुलिनम डायग्नोस्टिकम जोड़कर बोटुलिनम विष का पता लगाया जा सकता है (इस प्रतिक्रिया को कहा जाता है) रिवर्स अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया- रोंगा)। RNHA का उपयोग संक्रामक रोगों के निदान, गोनैडोट्रोपिक हार्मोन का निर्धारण करने के लिए किया जाता है मेंगर्भावस्था स्थापित होने पर मूत्र, दवाओं, हार्मोन और कुछ अन्य मामलों में अतिसंवेदनशीलता का पता लगाने के लिए।
जमावट प्रतिक्रिया . रोगजनक कोशिकाओं को स्टेफिलोकोसी का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है, प्रतिरक्षा निदान सीरम के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है। प्रोटीन युक्त स्टेफिलोकोसी लेकिन,के लिए एक आत्मीयता होनाएफसी इम्युनोग्लोबुलिन के टुकड़े, गैर-विशेष रूप से सोखने वाले रोगाणुरोधी एंटीबॉडी, जो तब रोगियों से अलग किए गए संबंधित रोगाणुओं के साथ सक्रिय केंद्रों के साथ बातचीत करते हैं। जमावट के परिणामस्वरूप, गुच्छे बनते हैं, जिसमें स्टेफिलोकोसी, नैदानिक सीरम एंटीबॉडी और सूक्ष्म जीव निर्धारित होते हैं।
रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (आरटीजीए) नाकाबंदी पर आधारित है, प्रतिरक्षा सीरम के एंटीबॉडी द्वारा वायरस के एंटीजन का दमन, जिसके परिणामस्वरूप वायरस लाल रक्त कोशिकाओं (छवि 13.3) को एग्लूटीनेट करने की अपनी क्षमता खो देते हैं। आरटीएचए का उपयोग कई वायरल रोगों के निदान के लिए किया जाता है, जिसके प्रेरक कारक (इन्फ्लूएंजा, खसरा, रूबेला, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस, आदि) विभिन्न जानवरों के एरिथ्रोसाइट्स को बढ़ा सकते हैं।
रक्त समूहों के निर्धारण के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया रक्त समूह ए (II), बी (III) के एंटीजन के खिलाफ प्रतिरक्षा सीरम के एंटीबॉडी के साथ एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटीनेशन का उपयोग करके एबीओ सिस्टम (खंड 10.1.4.1 देखें) स्थापित करने के लिए उपयोग किया जाता है। नियंत्रण हैं: एंटीबॉडी मुक्त सीरम, यानी सीरम एबी (जीयू)रक्त समूह; समूह ए (II), बी (III) के एरिथ्रोसाइट्स में निहित एंटीजन। नकारात्मक नियंत्रण में कोई एंटीजन नहीं होता है, अर्थात समूह 0 (I) एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है।
पर आरएच कारक निर्धारित करने के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं(खंड 10.1.4.1 देखें) एंटी-आरएच सेरा (कम से कम दो अलग-अलग श्रृंखला) का उपयोग करें। अध्ययन किए गए एरिथ्रोसाइट्स की झिल्ली पर आरएच एंटीजन की उपस्थिति में, इन कोशिकाओं का समूहन होता है। सभी रक्त समूहों के मानक आरएच-पॉजिटिव और आरएच-नकारात्मक एरिथ्रोसाइट्स नियंत्रण के रूप में कार्य करते हैं।
एंटी-रीसस एंटीबॉडी के निर्धारण के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (अप्रत्यक्ष Coombs प्रतिक्रिया)इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस वाले रोगियों में उपयोग किया जाता है। इनमें से कुछ रोगियों में एंटी-रीसस एंटीबॉडी पाए जाते हैं, जो अधूरे, मोनोवैलेंट होते हैं। वे विशेष रूप से आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स के साथ बातचीत करते हैं, लेकिन उनके एग्लूटीनेशन का कारण नहीं बनते हैं। ऐसे अधूरे एंटीबॉडी की उपस्थिति अप्रत्यक्ष Coombs प्रतिक्रिया में निर्धारित होती है। ऐसा करने के लिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम (मानव इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एंटीबॉडी) को एंटी-आरएच एंटीबॉडी + आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स की प्रणाली में जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटीनेशन का कारण बनता है (चित्र। 13.4)। कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग करते हुए, प्रतिरक्षा मूल के एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर लसीका से जुड़ी रोग संबंधी स्थितियों का निदान किया जाता है, उदाहरण के लिए, नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग: आरएच-पॉजिटिव भ्रूण के एरिथ्रोसाइट्स रक्त में परिसंचारी आरएच कारक के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी के साथ संयोजन करते हैं, जो पार हो गया एक आरएच-नकारात्मक मां से प्लेसेंटा।
वर्षा प्रतिक्रियाएं
शीघ्र प्रतिक्रिया - आरपी (सेअव्य. प्रीसी-पिटो- अवक्षेप,) एक घुलनशील आणविक प्रतिजन के एक परिसर का निर्माण और अवक्षेपण है, जिसमें मैलापन के रूप में एंटीबॉडी होते हैं, जिसे कहा जाता है अवक्षेपण।यह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाकर बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा परिसर के गठन के स्तर को कम कर देती है।
वर्षा की प्रतिक्रियाएं टेस्ट ट्यूब में डाली जाती हैं (रिंग वर्षा प्रतिक्रिया),जैल, पोषक तत्व मीडिया, आदि में। agar या agarose के अर्ध-तरल जेल में वर्षा प्रतिक्रिया की किस्मों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है: औचर्लोनी के अनुसार डबल इम्यूनोडिफ्यूजन। रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिसऔर आदि।
रिंग वर्षा प्रतिक्रिया . प्रतिक्रिया प्रतिरक्षा सीरम के साथ संकीर्ण अवक्षेपण ट्यूबों में की जाती है, जिस पर एक घुलनशील एंटीजन स्तरित होता है। प्रतिजन और प्रतिरक्षी के इष्टतम अनुपात के साथ, इन दो विलयनों की सीमा पर एक अपारदर्शी अवक्षेप वलय बनता है (चित्र 13.5)। तरल सीमा में अभिकर्मकों के क्रमिक प्रसार के कारण प्रतिजन की अधिकता रिंग वर्षा प्रतिक्रिया के परिणाम को प्रभावित नहीं करती है। यदि वलय अवक्षेपण अभिक्रिया में अंगों या ऊतकों के उबले और छनने वाले जलीय अर्क को एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है, तो ऐसी प्रतिक्रिया कहलाती है थर्मोप्रेजर्वेशन रिएक्शन-iii (एस्कोली रिएक्शन,एंथ्रेक्स के साथ /
औखटेरुनी डबल इम्यूनोडिफ्यूजन रिएक्शन . प्रतिक्रिया सेट करने के लिए, पिघला हुआ अगर जेल एक पतली परत में कांच की प्लेट पर डाला जाता है, और इसके सख्त होने के बाद, इसमें 2-3 मिमी आकार के छेद काट दिए जाते हैं। इन कुओं में प्रतिजन और प्रतिरक्षी सीरा अलग-अलग रखे जाते हैं, जो एक दूसरे की ओर फैलते हैं। मिलन बिंदु पर समान अनुपात में, वे एक सफेद पट्टी के रूप में एक अवक्षेप बनाते हैं। मल्टीकंपोनेंट सिस्टम में, विभिन्न एंटीजन और सीरम एंटीबॉडी वाले कुओं के बीच अवक्षेप की कई लाइनें दिखाई देती हैं; समान प्रतिजनों के लिए, अवक्षेप रेखाएं विलीन हो जाती हैं; गैर-समान लोगों के लिए, वे प्रतिच्छेद करते हैं (चित्र 13.6)।
रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया . पिघला हुआ अगर जेल के साथ प्रतिरक्षा सीरम समान रूप से कांच पर डाला जाता है। जेल में जमने के बाद कुएं बनाए जाते हैं जिनमें एंटीजन को विभिन्न तनुकरणों में रखा जाता है। एंटीजन, जेल में फैलता है, एंटीबॉडी के साथ कुओं के चारों ओर रिंग वर्षा क्षेत्र बनाता है (चित्र 13.7)। अवक्षेपण वलय का व्यास प्रतिजन सांद्रता के समानुपाती होता है। प्रतिक्रिया का उपयोग विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन के रक्त स्तर, पूरक प्रणाली के घटकों आदि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस- वैद्युतकणसंचलन और इम्युनोप्रेरीगेशन की विधि का एक संयोजन: एंटीजन के मिश्रण को जेल के कुओं में पेश किया जाता है और वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके जेल में अलग किया जाता है। फिर, वैद्युतकणसंचलन क्षेत्रों के समानांतर, एक प्रतिरक्षा सीरम को खांचे में पेश किया जाता है, जिसके एंटीबॉडी, जेल में फैलते हुए, वर्षा रेखा के प्रतिजन के साथ बैठक बिंदु पर बनते हैं।
फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया(रेमन के अनुसार) (अक्षांश से। फ्लोकस-ऊन के गुच्छे) - एक टॉक्सिन-एंटीटॉक्सिन या एनाटॉक्सिन-एंटीटॉक्सिन प्रतिक्रिया के दौरान टेस्ट ट्यूब में ओपेलेसेंस या फ्लोकुलेंट मास (इम्युनोप्रेजर्वेशन) की उपस्थिति। इसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या टॉक्सोइड की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
इम्यून इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी- रोगाणुओं की इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, अधिक बार वायरस, उपयुक्त एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है। प्रतिरक्षा सीरम के साथ इलाज किए गए वायरस प्रतिरक्षा समुच्चय (माइक्रोप्रिसिपिटेट्स) बनाते हैं। विषाणुओं के चारों ओर एंटीबॉडी का एक "कोरोला" बनता है, जो फॉस्फोटुंगस्टिक एसिड या अन्य इलेक्ट्रॉन-ऑप्टिकल घने तैयारी के विपरीत होता है।
पूरक शामिल प्रतिक्रियाएं
पूरक शामिल प्रतिक्रियाएंएक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स (पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया, रेडियल हेमोलिसिस, आदि) द्वारा पूरक की सक्रियता के आधार पर।
पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (आरएसके) इस तथ्य में निहित है कि, जब एक दूसरे के अनुरूप होते हैं, तो एंटीजन और एंटीबॉडी एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं, जिसके माध्यम सेएफसी -एंटीबॉडी का टुकड़ा पूरक (सी) से जुड़ता है, यानी, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के साथ पूरक बंधन होता है। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है (चित्र 13.8)। आरएसके दो चरणों में किया जाता है: पहला चरण - एंटीजन + एंटीबॉडी + पूरक के तीन घटकों वाले मिश्रण का ऊष्मायन; दूसरा चरण (संकेतक) - मिश्रण में मुक्त पूरक का पता लगाने के लिए इसमें एक हेमोलिटिक प्रणाली शामिल होती है जिसमें राम एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम होता है जिसमें एंटीबॉडी होते हैं। प्रतिक्रिया के पहले चरण में, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के निर्माण के दौरान, पूरक बंधन होता है, और फिर दूसरे चरण में, एंटीबॉडी द्वारा संवेदी एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होगा; प्रतिक्रिया सकारात्मक है। यदि एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे के अनुरूप नहीं हैं (परीक्षण नमूने में कोई एंटीजन या एंटीबॉडी नहीं है), तो पूरक मुक्त रहता है और दूसरे चरण में एरिथ्रोसाइट-एंटीएरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स में शामिल हो जाएगा, जिससे हेमोलिसिस होता है; प्रतिक्रिया नकारात्मक है।
आरएसके का उपयोग कई संक्रामक रोगों के निदान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से सिफलिस (वासरमैन प्रतिक्रिया) में।
रेडियल हेमोलिसिस (RRH .) की प्रतिक्रिया ) राम एरिथ्रोसाइट्स और पूरक युक्त अगर जेल के कुओं में रखा गया है। जेल के कुओं में हेमोलिटिक सीरम (रैम एरिथ्रोसाइट्स के खिलाफ एंटीबॉडी) जोड़ने के बाद, उनके चारों ओर एक हेमोलिसिस ज़ोन बनता है (एंटीबॉडी के रेडियल प्रसार के परिणामस्वरूप)। इस प्रकार, पूरक और हेमोलिटिक सीरम की गतिविधि, साथ ही इन्फ्लूएंजा, रूबेला, टिक-जनित एन्सेफलाइटिस वाले रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी निर्धारित करना संभव है। ऐसा करने के लिए, वायरस के संबंधित एंटीजन को एरिथ्रोसाइट्स पर सोख लिया जाता है, और रोगी के रक्त सीरम को इन एरिथ्रोसाइट्स वाले जेल के कुओं में जोड़ा जाता है। एंटीवायरल एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट्स पर adsorbed वायरल एंटीजन के साथ बातचीत करते हैं
पूरक घटक इस परिसर से जुड़ते हैं, जिससे हेमोलिसिस होता है।
प्रतिरक्षा आसंजन प्रतिक्रिया (RIP .) ) प्रतिरक्षा सीरम के साथ इलाज किए गए कॉर्पसकुलर एंटीजन (बैक्टीरिया, वायरस) द्वारा पूरक प्रणाली की सक्रियता पर आधारित है। नतीजतन, एक सक्रिय तीसरा पूरक घटक (C3b) बनता है, जो प्रतिरक्षा परिसर के हिस्से के रूप में कॉर्पसकुलर एंटीजन से जुड़ जाता है। एरिथ्रोसाइट्स, प्लेटलेट्स, मैक्रोफेज पर सी 3 बी के लिए रिसेप्टर्स होते हैं, जिसके कारण, जब इन कोशिकाओं को सी 3 बी वाले प्रतिरक्षा परिसरों के साथ मिलाया जाता है, तो वे गठबंधन और एग्लूटीनेट होते हैं।
निराकरण प्रतिक्रिया
प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी संवेदनशील कोशिकाओं और ऊतकों पर रोगाणुओं या उनके विषाक्त पदार्थों के हानिकारक प्रभाव को बेअसर करने में सक्षम हैं, जो एंटीबॉडी द्वारा माइक्रोबियल एंटीजन की नाकाबंदी के साथ जुड़ा हुआ है, अर्थात, उनके निष्प्रभावीकरण। निराकरण प्रतिक्रिया(आरएन) जानवरों में या संवेदनशील परीक्षण वस्तुओं (सेल संस्कृति, भ्रूण) में एंटीजन-एंटीबॉडी मिश्रण पेश करके किया जाता है। सूक्ष्मजीवों या उनके एंटीजन, जानवरों और परीक्षण वस्तुओं में विषाक्त पदार्थों के हानिकारक प्रभाव की अनुपस्थिति में, वे प्रतिरक्षा सीरम के बेअसर प्रभाव की बात करते हैं और इसलिए, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की बातचीत की विशिष्टता (चित्र। 13.9)।
इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया - आरआईएफ (कून्स विधि)
विधि की तीन मुख्य किस्में हैं: प्रत्यक्ष, अप्रत्यक्ष (चित्र। 13.10), एक पूरक के साथ। कून्स प्रतिक्रिया माइक्रोबियल एंटीजन का पता लगाने या एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक तेजी से निदान पद्धति है।
प्रत्यक्ष आरआईएफ विधि यह इस तथ्य पर आधारित है कि फ्लोरोक्रोमेस के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षा सीरा के साथ इलाज किए गए ऊतक प्रतिजन या रोगाणु एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप की यूवी किरणों में चमकने में सक्षम हैं।
इस तरह के एक ल्यूमिनसेंट सीरम के साथ इलाज किए गए स्मीयर में बैक्टीरिया, हरे रंग की सीमा के रूप में कोशिका की परिधि के साथ चमकते हैं।
अप्रत्यक्ष आरआईएफ विधि फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन (एंटी-एंटीबॉडी) सीरम का उपयोग करके एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की पहचान करना है। ऐसा करने के लिए, रोगाणुओं के निलंबन से स्मीयरों को रोगाणुरोधी खरगोश नैदानिक सीरम के एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है। फिर एंटीबॉडी जो माइक्रोबियल एंटीजन से बंधे नहीं होते हैं, उन्हें धोया जाता है, और रोगाणुओं पर शेष एंटीबॉडी का पता फ़्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन (एंटी-खरगोश) सीरम के साथ स्मीयर का इलाज करके लगाया जाता है। नतीजतन, एक जटिल सूक्ष्म जीव + रोगाणुरोधी खरगोश एंटीबॉडी + फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए एंटी-खरगोश एंटीबॉडी का निर्माण होता है। यह परिसर एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप में देखा जाता है, जैसा कि प्रत्यक्ष विधि में होता है।
एलिसा विधि, या विश्लेषण (एलिसा)
एलिसा -एक लेबल एंजाइम (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज, बीटा-गैलेक्टोसिडेज या क्षारीय फॉस्फेट) के साथ संयुग्मित उनके संबंधित एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन का पता लगाना। एंटीजन को एंजाइम-लेबल प्रतिरक्षा सीरा के साथ मिलाने के बाद, सब्सट्रेट/क्रोमोजेन को मिश्रण में जोड़ा जाता है। सब्सट्रेट को एंजाइम द्वारा साफ किया जाता है, और प्रतिक्रिया उत्पाद का रंग बदल जाता है - रंग की तीव्रता बाध्य एंटीजन और एंटीबॉडी अणुओं की संख्या के सीधे आनुपातिक होती है।
ठोस चरण एलिसा - प्रतिरक्षाविज्ञानी परीक्षण का सबसे आम प्रकार, जब प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया (एंटीजन या एंटीबॉडी) के घटकों में से एक को ठोस वाहक पर डाला जाता है, उदाहरण के लिए, पॉलीस्टाइनिन प्लेटों के कुओं में
एंटीबॉडी का निर्धारण करते समय, रोगी के रक्त सीरम, एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन सीरम और एंजाइम के लिए सब्सट्रेट (क्रोमोजेन) को क्रमिक रूप से adsorbed एंटीजन के साथ प्लेटों के कुओं में जोड़ा जाता है।
हर बार अगले घटक को जोड़ने के बाद, अनबाउंड अभिकर्मकों को पूरी तरह से धोकर कुओं से हटा दिया जाता है। सकारात्मक परिणाम के साथ, क्रोमोजेन समाधान का रंग बदल जाता है। एक ठोस-चरण वाहक को न केवल एक प्रतिजन के साथ, बल्कि एंटीबॉडी के साथ भी संवेदनशील बनाया जा सकता है। फिर, वांछित एंटीजन को सोखने वाले एंटीबॉडी के साथ कुओं में पेश किया जाता है, एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीजन के खिलाफ प्रतिरक्षा सीरम जोड़ा जाता है, और फिर एंजाइम के लिए सब्सट्रेट जोड़ा जाता है।
प्रतिस्पर्धी एलिसा . लक्ष्य प्रतिजन और एंजाइम-लेबल प्रतिजन एक सीमित मात्रा में प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी के बंधन के लिए एक दूसरे के साथ प्रतिस्पर्धा करते हैं। एक और परीक्षण वह एंटीबॉडी है जिसकी आप तलाश कर रहे हैं
और लेबल वाले एंटीबॉडी एंटीजन के लिए एक दूसरे के साथ प्रतिस्पर्धा करते हैं।
रेडियोइम्यूनोलॉजिकल विधि, या विश्लेषण (आरआईए)
एक रेडियोन्यूक्लाइड (125 J, 14 C, 3 H, 51 Cr, आदि) के साथ लेबल किए गए एंटीजन या एंटीबॉडी का उपयोग करके एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया पर आधारित एक अत्यधिक संवेदनशील विधि। उनकी बातचीत के बाद, परिणामी रेडियोधर्मी प्रतिरक्षा परिसर अलग हो जाता है और इसकी रेडियोधर्मिता उपयुक्त काउंटर (बीटा या गामा विकिरण) में निर्धारित होती है:
विकिरण की तीव्रता बाध्य प्रतिजन और एंटीबॉडी अणुओं की संख्या के सीधे आनुपातिक है।
पर आरआईए का ठोस-चरण संस्करण प्रतिक्रिया घटकों में से एक (एंटीजन या एंटीबॉडी) एक ठोस वाहक पर adsorbed है, उदाहरण के लिए, पॉलीस्टाइनिन माइक्रोएरे के कुओं में। विधि का दूसरा संस्करण है प्रतिस्पर्धी आरआईए।लक्ष्य प्रतिजन और रेडियोन्यूक्लाइड-लेबल प्रतिजन एक सीमित मात्रा में प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी को बाध्य करने के लिए एक दूसरे के साथ प्रतिस्पर्धा करते हैं। इस विकल्प का उपयोग परीक्षण सामग्री में एंटीजन की मात्रा निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
आरआईए का उपयोग माइक्रोबियल एंटीजन का पता लगाने के लिए किया जाता है, हार्मोन, एंजाइम, औषधीय पदार्थ और इम्युनोग्लोबुलिन का निर्धारण करने के साथ-साथ मामूली सांद्रता में परीक्षण सामग्री में निहित अन्य पदार्थ - 10 ~ | 0 -I0 ~ 12 ग्राम / एल। विधि एक निश्चित पर्यावरणीय खतरा प्रस्तुत करती है।
immunoblotting
इम्युनोब्लॉटिंग (आईबी)- वैद्युतकणसंचलन और एलिसा या आरआईए के संयोजन पर आधारित एक अत्यधिक संवेदनशील विधि।
एंटीजन को पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके अलग किया जाता है, फिर इसे स्थानांतरित किया जाता है (धब्बा - अंग्रेजी से। दाग, स्पॉट) जेल से सक्रिय कागज या नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली पर और एलिसा द्वारा विकसित। फर्म "ब्लॉट्स" के साथ ऐसी स्ट्रिप्स का उत्पादन करती हैं
प्रतिजन। इन पट्टियों पर रोगी का सीरम लगाया जाता है। फिर, ऊष्मायन के बाद, रोगी को रोगी के अनबाउंड एंटीबॉडी से धोया जाता है और एक एंजाइम के साथ लेबल किए गए मानव इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ सीरम लगाया जाता है। रोगी के जटिल प्रतिजन + एंटीबॉडी + पट्टी पर बने मानव Ig के प्रति एंटीबॉडी का पता एक सब्सट्रेट / क्रोमोजेन जोड़कर लगाया जाता है जो एंजाइम की क्रिया के तहत रंग बदलता है (चित्र 13.12)।
आईबी का उपयोग एचआईवी संक्रमण आदि के लिए निदान पद्धति के रूप में किया जाता है।
13.1. एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रियाएं और उनके अनुप्रयोग
जब एक एंटीजन इंजेक्ट किया जाता है, तो शरीर में एंटीबॉडी का निर्माण होता है। एंटीबॉडी एंटीजन के पूरक हैं जो उनके संश्लेषण का कारण बनते हैं, और इसे बांधने में सक्षम होते हैं। प्रतिजनों का प्रतिपिंडों से बंधन दो चरणों में होता है। पहला चरण विशिष्ट है, जिसमें एंटीबॉडी के फैब टुकड़े के सक्रिय केंद्र के लिए एंटीजेनिक निर्धारक का तेजी से बंधन होता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि बंधन वैन डेर वाल्स बलों, हाइड्रोजन और हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन के कारण है। बांड की ताकत एंटीबॉडी की सक्रिय साइट और एंटीजन के एपिटोप के बीच स्थानिक पत्राचार की डिग्री से निर्धारित होती है। विशिष्ट चरण के बाद, एक धीमा शुरू होता है - निरर्थक, जो एक दृश्य भौतिक घटना से प्रकट होता है (उदाहरण के लिए, एग्लूटीनेशन के दौरान गुच्छे का निर्माण, आदि)।
प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं एंटीबॉडी और एंटीजन के बीच बातचीत होती हैं, और ये प्रतिक्रियाएं विशिष्ट और अत्यधिक संवेदनशील होती हैं। वे चिकित्सा पद्धति में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की मदद से, निम्नलिखित कार्यों को हल किया जा सकता है:
ज्ञात एंटीजन (एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम) द्वारा अज्ञात एंटीबॉडी का निर्धारण। ऐसा कार्य तब होता है जब रोगी के रक्त सीरम (सेरोडायग्नोसिस) में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी का निर्धारण करना आवश्यक होता है। एंटीबॉडी ढूँढना आपको निदान की पुष्टि करने की अनुमति देता है;
ज्ञात एंटीबॉडी (नैदानिक सीरम) द्वारा अज्ञात प्रतिजनों का निर्धारण। यह अध्ययन रोगी की सामग्री (सीरोटाइपिंग) से पृथक रोगज़नक़ की संस्कृति की पहचान करने के साथ-साथ पता लगाने पर किया जाता है
रक्त और अन्य जैविक तरल पदार्थों में रोगाणुओं और उनके विषाक्त पदार्थों के प्रतिजन। कई प्रकार की प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं होती हैं जो सेटिंग की तकनीक और रिकॉर्ड किए गए प्रभाव में भिन्न होती हैं। ये एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं (आरए), वर्षा (आरपी), पूरक (आरसीसी) से जुड़ी प्रतिक्रियाएं, लेबल वाले घटकों (आरआईएफ, एलिसा, आरआईए) का उपयोग करने वाली प्रतिक्रियाएं हैं।
13.2. एग्लूटिनेशन रिएक्शन
एग्लूटीनेशन रिएक्शन (आरए) इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीबॉडी के साथ एक एंटीजन की बातचीत की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, और एंटीजन एक कॉर्पस्क्यूलर अवस्था में है (एरिथ्रोसाइट्स, बैक्टीरिया, adsorbed एंटीजन के साथ लेटेक्स कण)। एग्लूटीनेशन के दौरान, कॉर्पसकुलर एंटीजन एंटीबॉडी द्वारा एक साथ चिपके रहते हैं, जो एक फ्लोकुलेंट अवक्षेप के गठन से प्रकट होता है। गुच्छे का निर्माण इस तथ्य के कारण होता है कि एंटीबॉडी के दो सक्रिय केंद्र होते हैं, और एंटीजन पॉलीवलेंट होते हैं, अर्थात। कई एंटीजेनिक निर्धारक हैं। आरए का उपयोग रोगी की सामग्री से पृथक रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए किया जाता है, साथ ही रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए (उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस में राइट और हडलसन प्रतिक्रियाएं, टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार में विडाल प्रतिक्रिया) )
आरए को स्थापित करने का सबसे आसान तरीका कांच पर प्रतिक्रिया है, यह एक अनुमानित आरए है, जिसका उपयोग रोगी से पृथक रोगज़नक़ को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। कांच की स्लाइड पर प्रतिक्रिया सेट करते समय, एक डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरम लगाया जाता है (1:10 या 1:20 के कमजोर पड़ने पर), फिर रोगी से एक संस्कृति पेश की जाती है। यदि बूंद में एक फ्लोकुलेंट अवक्षेप दिखाई देता है तो प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है। एक नियंत्रण पास में रखा गया है: सीरम के बजाय, सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद लागू की जाती है। यदि डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरम गैर-सोखना 1 है, तो इसे पतला किया जाता है (टिटर के लिए - कमजोर पड़ने से एग्लूटिनेशन होना चाहिए), यानी। बढ़े हुए आरए को टेस्ट ट्यूब में वृद्धि के साथ डालें
1 गैर-सोखने वाला एग्लूटीनेटिंग सीरम संबंधित जीवाणुओं को एकत्रित कर सकता है जिनमें सामान्य (क्रॉस-रिएक्टिंग) एंटीजन होते हैं। इसलिए, आनंद लेंअधिशोषित एग्लूटीनेटिंग सीरा, जिसमें से क्रॉस-रिएक्टिव एंटीबॉडी को उनके संबंधित बैक्टीरिया द्वारा सोखना द्वारा हटा दिया गया है। ऐसे सीरा में केवल इस जीवाणु के लिए विशिष्ट प्रतिरक्षी रहते हैं।
एग्लूटीनेटिंग सीरम का पतलापन, जिसमें रोगी से पृथक रोगज़नक़ के निलंबन की 2-3 बूंदें डाली जाती हैं। एग्लूटिनेशन को टेस्ट ट्यूब में तलछट की मात्रा और तरल के स्पष्टीकरण की डिग्री द्वारा ध्यान में रखा जाता है। यदि नैदानिक सीरम के अनुमापांक के निकट तनुकरण में एग्लूटिनेशन नोट किया जाता है तो प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है। प्रतिक्रिया नियंत्रण के साथ होती है: सीरम, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से पतला, पारदर्शी होना चाहिए, एक ही समाधान में रोगाणुओं का निलंबन तलछट के बिना समान रूप से अशांत होना चाहिए।
रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी का निर्धारण करने के लिए, एक विस्तारित आरए का उपयोग किया जाता है। जब इसे टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है, तो रोगी के रक्त सीरम को पतला कर दिया जाता है और टेस्ट ट्यूब में डायग्नोस्टिकम सस्पेंशन (मारे गए रोगाणुओं का निलंबन) की समान मात्रा जोड़ दी जाती है। ऊष्मायन के बाद, उच्चतम सीरम कमजोर पड़ने पर एग्लूटिनेशन निर्धारित किया जाता है, अर्थात। एक अवक्षेप का गठन (सीरम अनुमापांक)। इस मामले में, ओ-डायग्नोस्टिकम (गर्म करने से मारे गए बैक्टीरिया, एक थर्मोस्टेबल ओ-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया महीन दाने वाले एग्लूटिनेशन के रूप में होती है। एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मेलिन द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, हीट-लैबाइल फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया मोटे दाने वाली होती है और तेजी से आगे बढ़ती है।
अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया(आरएनजीए या आरपीजीए) आरए का एक प्रकार है। यह तरीका बेहद संवेदनशील है। आरएनजीए की मदद से, दो कार्यों को हल किया जा सकता है: रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण करने के लिए, जिसमें एक एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स होता है जिस पर ज्ञात एंटीजन का विज्ञापन होता है; परीक्षण सामग्री में एंटीजन की उपस्थिति का निर्धारण। इस मामले में, प्रतिक्रिया को कभी-कभी रिवर्स इनडायरेक्ट हेमग्लूटीनेशन रिएक्शन (रोंगा) कहा जाता है। मंचन करते समय, एक एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (उनकी सतह पर सोखने वाले एंटीबॉडी वाले एरिथ्रोसाइट्स) को परीक्षण सामग्री में जोड़ा जाता है। इस प्रतिक्रिया में एरिथ्रोसाइट्स वाहक के रूप में कार्य करते हैं और निष्क्रिय रूप से प्रतिरक्षा समुच्चय के निर्माण में शामिल होते हैं। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, निष्क्रिय रूप से चिपके हुए एरिथ्रोसाइट्स कुएं के तल को स्कैलप्ड किनारों ("छाता") के साथ एक समान परत के साथ कवर करते हैं; एग्लूटीनेशन की अनुपस्थिति में, एरिथ्रोसाइट्स छेद के केंद्रीय अवकाश में जमा हो जाते हैं, जिससे तेजी से परिभाषित किनारों के साथ एक कॉम्पैक्ट "बटन" बनता है।
जमावट प्रतिक्रियापर अधिशोषित एंटीबॉडी का उपयोग करके रोगज़नक़ कोशिकाओं (एंटीजन) का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है स्टेफिलोकोकस ऑरियस,प्रोटीन ए युक्त। प्रोटीन ए में इम्युनोग्लोबुलिन के एफसी टुकड़े के लिए एक समानता है। इसके कारण, एंटीबॉडी अप्रत्यक्ष रूप से एफसी टुकड़े के माध्यम से स्टेफिलोकोकस से जुड़ते हैं, और फैब टुकड़े बाहर की ओर उन्मुख होते हैं और रोगियों से अलग किए गए संबंधित रोगाणुओं के साथ बातचीत करने में सक्षम होते हैं। इस मामले में, गुच्छे बनते हैं।
रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (HITA)वायरल संक्रमण के निदान में उपयोग किया जाता है, और केवल हेमाग्लगुटिनेटिंग वायरस के कारण संक्रमण होता है। इन विषाणुओं में उनकी सतह पर एक प्रोटीन - हेमाग्लगुटिनिन होता है, जो एरिथ्रोसाइट वायरस में जोड़े जाने पर हीमाग्लगुटिनेशन प्रतिक्रिया (आरएचए) के लिए जिम्मेदार होता है। आरटीजीए में एंटीबॉडी के साथ वायरल एंटीजन को अवरुद्ध करना शामिल है, जिसके परिणामस्वरूप वायरस लाल रक्त कोशिकाओं को एकत्रित करने की अपनी क्षमता खो देते हैं।
कॉम्ब्स प्रतिक्रिया -अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए आरए। कुछ संक्रामक रोगों में, जैसे कि ब्रुसेलोसिस, रोगज़नक़ के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी रोगी के रक्त सीरम में प्रसारित होते हैं। अपूर्ण एंटीबॉडी को ब्लॉकिंग कहा जाता है क्योंकि उनके पास एक एंटीजन-बाइंडिंग साइट होती है, न कि दो, पूर्ण एंटीबॉडी की तरह। इसलिए, जब एक एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, तो अपूर्ण एंटीबॉडी एंटीजन से बंधे होते हैं, लेकिन उन्हें एक साथ नहीं चिपकाते हैं। प्रतिक्रिया को प्रकट करने के लिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम (मानव इम्युनोग्लोबुलिन के लिए एंटीबॉडी) जोड़ा जाता है, जिससे प्रतिक्रिया के पहले चरण में गठित प्रतिरक्षा परिसरों (एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम + अपूर्ण एंटीबॉडी) का समूहन होगा।
अप्रत्यक्ष Coombs प्रतिक्रिया का उपयोग इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस वाले रोगियों में किया जाता है। इनमें से कुछ रोगियों में अपूर्ण मोनोवैलेंट एंटी-रीसस एंटीबॉडी पाए जाते हैं। वे विशेष रूप से आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स के साथ बातचीत करते हैं, लेकिन उनके एग्लूटीनेशन का कारण नहीं बनते हैं। इसलिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम को एंटी-आरएच एंटीबॉडी + आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स की प्रणाली में जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटीनेशन का कारण बनता है। कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग करते हुए, प्रतिरक्षा मूल के एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर लसीस से जुड़ी रोग संबंधी स्थितियों का निदान किया जाता है, उदाहरण के लिए, रीसस संघर्ष के कारण नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग।
रक्त समूहों के निर्धारण के लिए आरएरक्त समूह ए (II), बी (III) के एंटीजन के लिए प्रतिरक्षा सीरम के एंटीबॉडी द्वारा एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटीनेशन पर आधारित है। नियंत्रण सीरम है जिसमें एंटीबॉडी नहीं होते हैं, अर्थात। सीरम एबी (चतुर्थ) रक्त समूह, और समूह ए (पी) और बी (III) के एरिथ्रोसाइट्स के एंटीजन। समूह 0 (I) एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जाता है क्योंकि उनमें एंटीजन नहीं होते हैं।
आरएच कारक निर्धारित करने के लिए, एंटी-आरएच सेरा का उपयोग किया जाता है (कम से कम दो अलग-अलग श्रृंखला)। अध्ययन किए गए एरिथ्रोसाइट्स की झिल्ली पर आरएच एंटीजन की उपस्थिति में, इन कोशिकाओं का समूहन होता है।
13.3. शीघ्र प्रतिक्रिया
आरपी इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की बातचीत की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, और एंटीजन घुलनशील अवस्था में है। वर्षा के दौरान, घुलनशील प्रतिजन एंटीबॉडी द्वारा अवक्षेपित होते हैं, जो वर्षा बैंड के रूप में मैलापन द्वारा प्रकट होते हैं। एक दृश्य अवक्षेप का निर्माण तब देखा जाता है जब दोनों अभिकर्मकों को समान अनुपात में मिलाया जाता है। उनमें से एक की अधिकता अवक्षेपित प्रतिरक्षा परिसरों की मात्रा को कम कर देती है। वर्षा प्रतिक्रिया को स्थापित करने के कई तरीके हैं।
रिंग वर्षा प्रतिक्रियाछोटे व्यास वर्षा ट्यूबों में रखा गया। प्रतिरक्षा सीरम को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है और घुलनशील एंटीजन को सावधानी से स्तरित किया जाता है। सकारात्मक परिणाम के साथ, दो समाधानों की सीमा पर एक दूधिया वलय बनता है। वलय वर्षा प्रतिक्रिया, जो अंगों और ऊतकों में एंटीजन की उपस्थिति को निर्धारित करती है, जिसके अर्क को उबाला और फ़िल्टर किया जाता है, थर्मोप्रेजर्वेशन रिएक्शन (थर्मोस्टेबल एंथ्रेक्स एंटीजन को निर्धारित करने के लिए एस्कोली प्रतिक्रिया) कहा जाता है।
ऑचटरलोनी डबल इम्यूनोडिफ्यूजन रिएक्शन।यह अभिक्रिया अग्र जेल पर की जाती है। कुओं को एक दूसरे से एक निश्चित दूरी पर एक समान मोटाई की जेल परत में काट दिया जाता है और क्रमशः एंटीजन और प्रतिरक्षा सीरम से भर दिया जाता है। उसके बाद, एंटीजन और एंटीबॉडी जेल में फैल जाते हैं, एक दूसरे से मिलते हैं और प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण करते हैं जो जेल में अवक्षेपित होते हैं और वर्षा की रेखाओं के रूप में दिखाई देते हैं।
पोषण। इस प्रतिक्रिया का उपयोग अज्ञात एंटीजन या एंटीबॉडी की पहचान करने के लिए किया जा सकता है, साथ ही विभिन्न एंटीजन के बीच समानता की जांच करने के लिए: यदि एंटीजन समान हैं, तो वर्षा रेखाएं विलीन हो जाती हैं; यदि एंटीजन समान नहीं हैं, तो वर्षा रेखाएं प्रतिच्छेद करती हैं; यदि एंटीजन हैं आंशिक रूप से समान, एक स्पर बनता है।
रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया।पिघला हुआ अगर जेल में एंटीबॉडी जोड़े जाते हैं और जेल को स्लाइड पर एक समान परत में लगाया जाता है। जेल में कुओं को काट दिया जाता है और विभिन्न सांद्रता के एंटीजन समाधानों की एक मानक मात्रा उनमें पेश की जाती है। ऊष्मायन के दौरान, एंटीजन कुएं से रेडियल रूप से फैलते हैं और एंटीबॉडी का सामना करने पर, वर्षा की अंगूठी बनाते हैं। जब तक कुएं में प्रतिजन की अधिकता होती है, वर्षा वलय के व्यास में क्रमिक वृद्धि होती है। इस पद्धति का उपयोग परीक्षण समाधान में एंटीजन या एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, रक्त सीरम में विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन की एकाग्रता का निर्धारण करने के लिए)।
इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस।एंटीजन के मिश्रण को प्रारंभिक रूप से वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया जाता है, फिर प्रोटीन आंदोलन की दिशा में चलने वाले खांचे में अवक्षेपित एंटीसेरम को पेश किया जाता है। एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे की ओर जेल में फैल जाते हैं; परस्पर क्रिया करते हुए, वे वर्षा की धनुषाकार रेखाएँ बनाते हैं।
फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया(रेमन के अनुसार) - एक प्रकार की वर्षा प्रतिक्रिया, जिसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या टॉक्सोइड की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। परीक्षण ट्यूबों में प्रतिक्रिया की जाती है। एक परखनली में जहां टॉक्सोइड और एंटीटॉक्सिन एक समान अनुपात में होते हैं, मैलापन देखा जाता है।
13.4. पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया
एंटीबॉडी, संबंधित प्रतिजन के साथ बातचीत करते हुए, अतिरिक्त पूरक (पहली प्रणाली) को बांधते हैं। पूरक निर्धारण का संकेतक हीमोलिटिक सीरम द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स है, अर्थात। एरिथ्रोसाइट्स (दूसरी प्रणाली) के लिए एंटीबॉडी। यदि पूरक पहली प्रणाली में तय नहीं है, अर्थात। एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया नहीं होती है, तो संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाएं पूरी तरह से लाइस (नकारात्मक प्रतिक्रिया) होती हैं। जब पूरक पहली प्रणाली के प्रतिरक्षा परिसरों द्वारा बाध्य होता है, संवेदी एरिथ्रोसाइट्स, हेमोलिसिस के अतिरिक्त के बाद
अनुपस्थित (सकारात्मक प्रतिक्रिया)। पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया का उपयोग संक्रामक रोगों (सूजाक, उपदंश, इन्फ्लूएंजा, आदि) के निदान के लिए किया जाता है।
13.5. निराकरण प्रतिक्रिया
रोगाणुओं और उनके विषाक्त पदार्थों का मानव शरीर के अंगों और ऊतकों पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है। एंटीबॉडी इन हानिकारक एजेंटों को बांधने और उन्हें अवरुद्ध करने में सक्षम हैं, अर्थात। निष्प्रभावी करना। डायग्नोस्टिक न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन एंटीबॉडी की इस विशेषता पर आधारित है। यह जानवरों में या संवेदनशील परीक्षण वस्तुओं (सेल संस्कृति, भ्रूण) में एंटीजन-एंटीबॉडी मिश्रण पेश करके किया जाता है। उदाहरण के लिए, रोगी की सामग्री में विषाक्त पदार्थों का पता लगाने के लिए, पहले समूह के जानवरों को रोगी की सामग्री के साथ इंजेक्शन लगाया जाता है। दूसरे समूह के जानवरों को एक समान सामग्री के साथ इंजेक्शन लगाया जाता है, उपयुक्त एंटीसेरम के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है। सामग्री में विष की उपस्थिति में पहले समूह के जानवर मर जाते हैं। जानवरों का दूसरा समूह जीवित रहता है, विष का हानिकारक प्रभाव प्रकट नहीं होता है, क्योंकि यह बेअसर हो जाता है।
13.6. लेबल किए गए एंटीबॉडी या एंटीजन का उपयोग करने वाली प्रतिक्रियाएं
13.6.1. इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ, कून्स विधि)
इस पद्धति का उपयोग एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के लिए किया जाता है। यह माइक्रोबियल एंटीजन और एंटीबॉडी दोनों का पता लगा सकता है।
प्रत्यक्ष आरआईएफ विधि- एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की बातचीत की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, और एंटीबॉडी को फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किया जाता है - एक पदार्थ जो एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश की चपेट में आने पर एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश क्वांटा को उत्सर्जित करने में सक्षम होता है। इस पद्धति को स्थापित करने की ख़ासियत गैर-विशिष्ट ल्यूमिनेसिसेंस का पता लगाने के लिए अप्राप्य घटकों को हटाने की आवश्यकता है। ऐसा करने के लिए, प्रतिक्रिया न किए गए एंटीबॉडी की लॉन्ड्रिंग करें। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके परिणामों का मूल्यांकन किया जाता है। इस तरह के एक ल्यूमिनसेंट सीरम के साथ इलाज किए गए स्मीयर में बैक्टीरिया कोशिका की परिधि के साथ एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर चमकते हैं।
अप्रत्यक्ष आरआईएफ विधिपिछले एक की तुलना में अधिक उपयोग किया जाता है। यह अभिक्रिया दो चरणों में संपन्न होती है। पहले चरण में, प्रतिजन परस्पर
प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण करते हुए, संबंधित एंटीबॉडी के साथ बातचीत करें। सभी घटक जिन्होंने प्रतिक्रिया नहीं की है (अर्थात प्रतिरक्षा परिसरों का हिस्सा नहीं) को धोने से हटा दिया जाना चाहिए। दूसरे चरण में, फ्लोरोक्रोम एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग करके गठित एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता लगाया जाता है। नतीजतन, एक जटिल सूक्ष्म जीव + रोगाणुरोधी खरगोश एंटीबॉडी + फ़्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए खरगोश इम्युनोग्लोबुलिन के प्रति एंटीबॉडी का गठन होता है। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके परिणामों का मूल्यांकन किया जाता है।
13.6.2. इम्यूनोसे या परख
एलिसा सबसे आम आधुनिक तरीका है जिसका उपयोग वायरल, बैक्टीरियल, प्रोटोजोअल संक्रमणों के निदान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से, एचआईवी संक्रमण, वायरल हेपेटाइटिस, आदि के निदान के लिए।
बहुत सारे एलिसा संशोधन हैं। ठोस-चरण गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। यह 96-अच्छी तरह से पॉलीस्टाइनिन प्लेटों (ठोस चरण) में किया जाता है। प्रतिक्रिया के दौरान, प्रत्येक चरण में अप्राप्य घटकों को धोना आवश्यक है। एंटीबॉडी का निर्धारण करते समय, जिन कुओं पर एंटीजन का सोखना होता है, उन्हें अध्ययन के तहत रक्त सीरम से भर दिया जाता है, फिर एंटीग्लोबुलिन सीरम को एंजाइम के साथ लेबल किया जाता है। एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़कर प्रतिक्रिया दिखाएं। एंजाइम की उपस्थिति में, सब्सट्रेट बदल जाता है, और एंजाइम-सब्सट्रेट कॉम्प्लेक्स का चयन इस तरह से किया जाता है कि प्रतिक्रिया में बनने वाला उत्पाद रंगीन हो जाता है। इस प्रकार, सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, समाधान के रंग में परिवर्तन देखा जाता है। प्रतिजनों को निर्धारित करने के लिए, एक ठोस-चरण वाहक को एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील बनाया जाता है, फिर परीक्षण सामग्री (एंटीजन) और एंजाइम-लेबल वाले एंटीजन सीरम को क्रमिक रूप से पेश किया जाता है। प्रतिक्रिया की अभिव्यक्ति के लिए, एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट पेश किया जाता है। समाधान के रंग में परिवर्तन सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ होता है।
13.6.3. immunoblotting
यह विधि वैद्युतकणसंचलन और एलिसा के संयोजन पर आधारित है। इम्युनोब्लॉटिंग का संचालन करते समय (अंग्रेजी से धब्बा। दाग- स्पॉट) एंटीजन के एक जटिल मिश्रण को पहले पॉलीएक्रिलामाइड जेल में वैद्युतकणसंचलन के अधीन किया जाता है। परिणामी भिन्नात्मक विरोधी-
जीन पेप्टाइड्स को नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली में स्थानांतरित कर दिया जाता है। ब्लॉट्स को तब विशिष्ट एंटीजन के लिए एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है, i। एलिसा ब्लॉट का संचालन करें। इम्यूनोब्लॉटिंग का उपयोग एचआईवी जैसे संक्रमणों के निदान में किया जाता है।
13.6.4. इम्यून इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी
इस विधि में वायरस (शायद ही कभी अन्य रोगाणुओं) के एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में माइक्रोस्कोपी होता है, जिसे पहले इलेक्ट्रॉन-ऑप्टिकल घने तैयारी के साथ लेबल किए गए उपयुक्त प्रतिरक्षा सीरम के साथ इलाज किया जाता है, उदाहरण के लिए, फेरिटिन, एक लौह युक्त प्रोटीन।
13.7. फ़्लो साइटॉमेट्री
रक्त कोशिकाओं को लेजर साइटोफ्लोरोमेट्री के आधार पर विभेदित किया जाता है। ऐसा करने के लिए, वांछित कोशिकाओं को सीडी एंटीजन के लिए फ्लोरोसेंट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ दाग दिया जाता है। लेबल किए गए एंटीबॉडी के साथ उपचार के बाद एक रक्त का नमूना एक पतली ट्यूब के माध्यम से पारित किया जाता है और इसके माध्यम से एक लेजर बीम पारित किया जाता है, जो फ्लोरोक्रोम की चमक को उत्तेजित करता है। प्रतिदीप्ति तीव्रता कोशिका की सतह पर प्रतिजनों के घनत्व के साथ सहसंबद्ध होती है और एक फोटोमल्टीप्लायर का उपयोग करके इसकी मात्रा निर्धारित की जा सकती है। प्राप्त परिणामों को हिस्टोग्राम में बदल दिया जाता है।
फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग प्रतिरक्षा स्थिति (लिम्फोसाइटों की मुख्य आबादी की सामग्री, इंट्रासेल्युलर और बाह्य साइटोकिन्स की सामग्री, एनके कोशिकाओं की कार्यात्मक गतिविधि, फागोसाइटोसिस की गतिविधि, आदि) को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
गंदलापन के रूप में, अवक्षेप कहलाता है। यह एंटीजन और एंटीबॉडी को समान मात्रा में मिलाकर बनता है; उनमें से एक की अधिकता प्रतिरक्षा परिसर के गठन के स्तर को कम कर देती है। वर्षा की प्रतिक्रिया टेस्ट ट्यूब (रिंग वर्षा प्रतिक्रिया), जैल, पोषक तत्व मीडिया, आदि में डाल दी जाती है। अगर या agarose के अर्ध-तरल जेल में वर्षा प्रतिक्रिया की किस्मों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है: ऑचटरलोनी डबल इम्यूनोडिफ्यूजन, रेडियल इम्यूनोडिफ्यूजन, इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस, आदि। .
रिंग वर्षा प्रतिक्रिया। प्रतिक्रिया संकीर्ण अवक्षेपण नलियों में की जाती है: एक घुलनशील प्रतिजन प्रतिरक्षा सीरम पर स्तरित होता है। प्रतिजन और प्रतिरक्षी के इष्टतम अनुपात के साथ, इन दो विलयनों की सीमा पर एक अपारदर्शी अवक्षेप वलय बनता है (चित्र 7.50)। यदि प्रतिक्रिया में उबले हुए और फ़िल्टर किए गए ऊतक के अर्क को एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है, तो ऐसी प्रतिक्रिया को थर्मोप्रेजर्वेशन रिएक्शन (एस्कोली रिएक्शन, जिसमें एंथ्रेक्स हैप्टेन का पता लगाया जाता है) कहा जाता है।
चावल। 7.50.
ऑचटरलोनी डबल इम्यूनोडिफ्यूजन रिएक्शन।
प्रतिक्रिया को सेट करने के लिए, पिघला हुआ अगर जेल एक कांच की प्लेट पर एक पतली परत में डाला जाता है, और जमने के बाद, इसमें छेद काट दिया जाता है। एंटीजन और इम्यून सीरा को जेल के कुओं में अलग-अलग रखा जाता है, जो एक दूसरे की ओर फैलते हैं। मिलन बिंदु पर समान अनुपात में, वे एक सफेद बैंड के रूप में एक अवक्षेप बनाते हैं (चित्र। 7.51)। मल्टीकंपोनेंट सिस्टम में, एंटीजन और एंटीबॉडी वाले कुओं के बीच अवक्षेप की कई लाइनें दिखाई देती हैं; समान प्रतिजनों में, अवक्षेप रेखाएं विलीन हो जाती हैं; गैर-समान प्रतिजनों में, वे प्रतिच्छेद करते हैं।
चावल। 7.51
पिघला हुआ अगर जेल के साथ प्रतिरक्षा सीरम समान रूप से कांच पर डाला जाता है। जेल में जमने के बाद कुएं बनाए जाते हैं जिनमें एंटीजन (एजी) को विभिन्न तनुकरणों में रखा जाता है। एंटीजन, जेल में फैलता है, एंटीबॉडी के साथ कुओं के चारों ओर कुंडलाकार वर्षा क्षेत्र बनाता है। अवक्षेपण वलय का व्यास प्रतिजन की सांद्रता के समानुपाती होता है (चित्र 7.52)। प्रतिक्रिया का उपयोग विभिन्न वर्गों के रक्त सीरम इम्युनोग्लोबुलिन, पूरक प्रणाली के घटकों आदि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
चावल। 7.52.
वैद्युतकणसंचलन और इम्युनोप्रेरीगेशन का एक संयोजन: एंटीजन का मिश्रण जेल के कुओं में पेश किया जाता है और वैद्युतकणसंचलन द्वारा जेल में अलग किया जाता है, फिर प्रतिरक्षा सीरम को वैद्युतकणसंचलन क्षेत्रों के समानांतर जेल नाली में पेश किया जाता है। प्रतिरक्षा सीरम के एंटीबॉडी जेल में फैल जाते हैं और एंटीजन के साथ "मीटिंग" साइट पर एक वर्षा रेखा बनाते हैं (चित्र। 7.53)।
चावल। 7.53.
फ्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया (रेमन के अनुसार) (अक्षांश से। फलोकस- ऊन के गुच्छे) - एक विष-एंटीटॉक्सिन या एनाटॉक्सिन-एंटीटॉक्सिन प्रतिक्रिया (चित्र। 7.54) के दौरान एक परखनली में ओपेलेसेंस या परतदार द्रव्यमान (इम्यूनोप्रेजर्वेशन) की उपस्थिति। इसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या टॉक्सोइड की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
चावल। 7.54.
डिप्थीरिया के प्रेरक एजेंट के उपभेद - सी। डिप्थीरिया टॉक्सिजेनिक (एक्सोटॉक्सिन का उत्पादन) और गैर-विषैले हो सकते हैं। एक्सोटॉक्सिन का निर्माण एक प्रोफ़ेज के बैक्टीरिया में उपस्थिति पर निर्भर करता है जो एक्सोटॉक्सिन के गठन को कूटने वाले टॉक्सिन जीन को ले जाता है। बीमारी के मामले में, सभी आइसोलेट्स को विषाक्तता के लिए परीक्षण किया जाता है - अगर में वर्षा प्रतिक्रिया का उपयोग करके डिप्थीरिया एक्सोटॉक्सिन का उत्पादन (चित्र। 7.55)।
चावल। 7.55
