Ψευδώς αρνητικό τεστ έμμεση δοκιμή Coombs. Δοκιμή Coombs: άμεση και έμμεση

- μια δοκιμή αντισφαιρίνης που στοχεύει στην ανίχνευση στο Rh-αρνητικό αίμα ατελών αντι-ερυθροκυτταρικών αντισωμάτων στον παράγοντα Rh - μια ειδική πρωτεΐνη που βρίσκεται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων του Rh-θετικού αίματος. Υπάρχουν δύο τύποι αυτής της εξέτασης: άμεση - ανίχνευση αντισωμάτων στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, έμμεση - ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό του αίματος. Πραγματοποιείται άμεση δοκιμή στη διάγνωση και παρακολούθηση της θεραπείας ασθενειών του αίματος: αιμολυτική αναιμία, αιμολυτική νόσος του νεογνού και άλλα. Πραγματοποιείται έμμεση εξέταση για την αξιολόγηση της συμβατότητας του αίματος του δότη και του λήπτη κατά τη μετάγγιση, καθώς και για τον προσδιορισμό της παρουσίας και του κινδύνου σύγκρουσης Rh κατά τον σχεδιασμό και τη διαχείριση της εγκυμοσύνης. Το υλικό για τη δοκιμή Coombs είναι το φλεβικό αίμα, η μελέτη πραγματοποιείται με μεθόδους που βασίζονται στην αντίδραση συγκόλλησης. Κανονικά, και οι δύο εξετάσεις δίνουν αρνητικό αποτέλεσμα. Η ανάλυση πραγματοποιείται εντός μιας ημέρας. Συνολικά, υπήρχαν 87 διευθύνσεις στη Μόσχα όπου μπορούσε να γίνει αυτή η ανάλυση.

- μια δοκιμή αντισφαιρίνης που στοχεύει στην ανίχνευση στο Rh-αρνητικό αίμα ατελών αντι-ερυθροκυτταρικών αντισωμάτων στον παράγοντα Rh - μια ειδική πρωτεΐνη που βρίσκεται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων του Rh-θετικού αίματος. Υπάρχουν δύο τύποι αυτής της εξέτασης: άμεση - ανίχνευση αντισωμάτων στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, έμμεση - ανίχνευση αντισωμάτων στον ορό του αίματος. Πραγματοποιείται άμεση δοκιμή στη διάγνωση και παρακολούθηση της θεραπείας ασθενειών του αίματος: αιμολυτική αναιμία, αιμολυτική νόσος του νεογνού και άλλα. Πραγματοποιείται έμμεση εξέταση για την αξιολόγηση της συμβατότητας του αίματος του δότη και του λήπτη κατά τη μετάγγιση, καθώς και για τον προσδιορισμό της παρουσίας και του κινδύνου σύγκρουσης Rh κατά τον σχεδιασμό και τη διαχείριση της εγκυμοσύνης. Το υλικό για τη δοκιμή Coombs είναι το φλεβικό αίμα, η μελέτη πραγματοποιείται με μεθόδους που βασίζονται στην αντίδραση συγκόλλησης. Κανονικά, και οι δύο εξετάσεις δίνουν αρνητικό αποτέλεσμα. Η ανάλυση πραγματοποιείται εντός μιας ημέρας.

Το τεστ Coombs είναι μια κλινική εξέταση του Rh-αρνητικού αίματος, με στόχο την ανίχνευση αντισωμάτων στον παράγοντα Rh. Το τεστ χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό του κινδύνου ανάπτυξης σύγκρουσης Rhesus και αιμολυτικών αντιδράσεων. Σε κάθε άτομο, η επιφάνεια των ερυθροκυττάρων περιέχει ένα ορισμένο σύνολο αντιγόνων ή συγκολλητογόνων - ενώσεις ποικίλης φύσης, η παρουσία ή η απουσία των οποίων χρησιμοποιείται για να κριθεί ο τύπος αίματος και ο παράγοντας Rh. Υπάρχουν πολλοί τύποι αντιγόνων, στην ιατρική πρακτική, τα συγκολλητογόνα Α και Β, που καθορίζουν την ομάδα αίματος, και το συγκολλητογόνο D, ο παράγοντας Rh, έχουν τη μεγαλύτερη πρακτική σημασία. Με θετικό παράγοντα Rh, τα αντιγόνα D ανιχνεύονται στην εξωτερική μεμβράνη των ερυθροκυττάρων, με αρνητικό - όχι.

Το τεστ Coombs, το οποίο ονομάζεται επίσης τεστ αντισφαιρίνης, στοχεύει στην ανίχνευση ατελών αντισωμάτων κατά των ερυθροκυττάρων στο σύστημα του παράγοντα Rh στο αίμα. Τα αντισώματα κατά του παράγοντα Rh είναι ειδικές ανοσοσφαιρίνες που παράγονται στο Rh-αρνητικό αίμα όταν εισέρχονται ερυθροκύτταρα με συγκολλητογόνα D. Αυτό μπορεί να συμβεί όταν το αίμα του εμβρύου και της εγκύου αναμειγνύεται, με μεταγγίσεις αίματος που πραγματοποιούνται χωρίς προηγούμενη ομαδοποίηση αίματος. Το τεστ Coombs υπάρχει σε δύο εκδόσεις - άμεση και έμμεση. Κατά την εκτέλεση μιας άμεσης δοκιμής Coombs, ανιχνεύονται αντισώματα προσκολλημένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Η μελέτη χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της αιτίας της αιμολυτικής αντίδρασης. Η έμμεση δοκιμή Coombs στοχεύει στην ανίχνευση αντισωμάτων κατά των ερυθροκυττάρων στο πλάσμα του αίματος. Είναι απαραίτητο να προσδιοριστεί η συμβατότητα του αίματος του δότη και του λήπτη ή της μητέρας και του εμβρύου, βοηθά στην πρόληψη της ανάπτυξης της σύγκρουσης Rhesus και της επακόλουθης αιμόλυσης των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Το αίμα και για τις δύο παραλλαγές του τεστ Coombs λαμβάνεται από φλέβα. Η ανάλυση πραγματοποιείται με τη μέθοδο της συγκόλλησης χρησιμοποιώντας ορό αντισφαιρίνης. Τα αποτελέσματα της μελέτης χρησιμοποιούνται στην αιματολογία για τον εντοπισμό των αιτιών των αιμολυτικών αντιδράσεων, στη χειρουργική επέμβαση και την ανάνηψη κατά τη διάρκεια μεταγγίσεων αίματος, στη μαιευτική και γυναικολογία στην παρακολούθηση της εγκυμοσύνης σε γυναίκες με Rh-αρνητικό αίμα.

Ενδείξεις

Το άμεσο τεστ Coombs, το οποίο ανιχνεύει αντισώματα προσκολλημένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, συνταγογραφείται για αιμολυτικές αντιδράσεις (καταστροφή ερυθρών αιμοσφαιρίων) ποικίλης προέλευσης. Η μελέτη ενδείκνυται για πρωτοπαθή αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία, αιμολυτική αναιμία μετά τη μετάγγιση, αιμολυτική νόσο του νεογνού, αιμόλυση ερυθρών αιμοσφαιρίων που προκαλείται από αυτοάνοσα, νεοπλασματικά ή λοιμώδη νοσήματα, καθώς και λήψη φαρμάκων, για παράδειγμα, κινιδίνη, μεθυλντόπα, προκαϊναμίδη . Το έμμεσο τεστ Coombs, το οποίο ανιχνεύει αντισώματα στο πλάσμα του αίματος, χρησιμοποιείται για την πρόληψη της ανάπτυξης της σύγκρουσης Rhesus. Ενδείκνυται για ασθενείς που προετοιμάζονται για μεταγγίσεις αίματος, καθώς και για εγκύους με αρνητικό παράγοντα Rh, υπό την προϋπόθεση ότι ο μελλοντικός πατέρας του παιδιού έχει θετικό παράγοντα Rh.

Προκειμένου να προσδιοριστεί η συμβατότητα Rh, το τεστ Coombs δεν χορηγείται σε ασθενείς με Rh θετικό αίμα. Σε αυτές τις περιπτώσεις, υπάρχουν ήδη αντιγόνα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, η παραγωγή αντισωμάτων δεν μπορεί να πυροδοτηθεί με μετάγγιση αίματος ή με την είσοδο εμβρυϊκού αίματος στην κυκλοφορία του αίματος της εγκύου. Επίσης, η μελέτη δεν ενδείκνυται για έγκυες γυναίκες εάν και οι δύο γονείς έχουν αρνητικό παράγοντα Rh, ένα κληρονομικό υπολειπόμενο χαρακτηριστικό. Ένα παιδί σε τέτοια ζευγάρια έχει πάντα αίμα Rh-αρνητικό, μια ανοσολογική σύγκρουση με τη μητέρα είναι αδύνατη. Σε αιμολυτικές παθολογίες, το τεστ αντισφαιρίνης δεν χρησιμοποιείται για την παρακολούθηση της επιτυχίας της θεραπείας, καθώς τα αποτελέσματα δεν αντικατοπτρίζουν τη δραστηριότητα της διαδικασίας καταστροφής των ερυθροκυττάρων.

Ο περιορισμός της δοκιμής Coombs είναι η πολυπλοκότητα της ερευνητικής διαδικασίας - για να ληφθούν αξιόπιστα αποτελέσματα, είναι απαραίτητο να τηρούνται οι συνθήκες θερμοκρασίας και χρόνου, οι κανόνες παρασκευής αντιδραστηρίων και βιοϋλικών. Το πλεονέκτημα του τεστ Coombs είναι η υψηλή ευαισθησία του. Στην αιμολυτική αναιμία, τα αποτελέσματα αυτής της εξέτασης παραμένουν θετικά, ακόμη και αν η αιμοσφαιρίνη, η χολερυθρίνη και τα δικτυοερυθρά κύτταρα επανέλθουν στο φυσιολογικό.

Προετοιμασία για ανάλυση και συλλογή υλικού

Το υλικό για τη διενέργεια της εξέτασης Coombs είναι το φλεβικό αίμα. Δεν υπάρχουν ειδικές απαιτήσεις για το χρόνο της διαδικασίας αιμοληψίας και για την προετοιμασία του ασθενούς. Όπως σε κάθε μελέτη, συνιστάται να κάνετε ένα διάλειμμα μετά το φαγητό για τουλάχιστον 4 ώρες και τα τελευταία 30 λεπτά να σταματήσετε το κάπνισμα, να ασκηθείτε και να αποφύγετε το συναισθηματικό στρες. Αξίζει επίσης να συζητήσετε με το γιατρό σας εκ των προτέρων την ανάγκη διακοπής της λήψης φαρμάκων - ορισμένα φάρμακα μπορεί να αλλοιώσουν τα αποτελέσματα της δοκιμής Coombs. Το αίμα λαμβάνεται με μια σύριγγα από την κυλινδρική φλέβα, λιγότερο συχνά από μια φλέβα στο πίσω μέρος του χεριού. Μέσα σε λίγες ώρες, το υλικό παραδίδεται στο εργαστήριο.

Κατά την εκτέλεση μιας άμεσης δοκιμής Coombs, ορός αντισφαιρίνης προστίθεται στον ορό αίματος του ασθενούς. Μετά από κάποιο χρονικό διάστημα, το μείγμα εξετάζεται για την παρουσία συσσωματωμάτων - σχηματίζονται εάν υπάρχουν αντισώματα στα ερυθρά αιμοσφαίρια. Με θετικό αποτέλεσμα, προσδιορίζεται ένας συγκολλητικός τίτλος. Η έμμεση δοκιμή Coombs αποτελείται από περισσότερα βήματα. Πρώτον, τα αντισώματα που υπάρχουν στον ορό στερεώνονται στα εγχυόμενα ερυθροκύτταρα κατά τη διάρκεια της επώασης. Στη συνέχεια προστίθεται ορός αντισφαιρίνης στο δείγμα, μετά από λίγο προσδιορίζεται η παρουσία και ο τίτλος των συγκολλητικών. Η περίοδος ανάλυσης είναι 1 ημέρα.

Κανονικά αποτελέσματα

Κανονικά, το αποτέλεσμα της άμεσης δοκιμής Coombs είναι αρνητικό (-). Αυτό σημαίνει ότι δεν υπάρχουν αντισώματα που να σχετίζονται με τα ερυθρά αιμοσφαίρια στο αίμα και δεν μπορούν να είναι η αιτία της αιμόλυσης. Το φυσιολογικό αποτέλεσμα της έμμεσης δοκιμής Coombs είναι επίσης αρνητικό (-), δηλαδή δεν υπάρχουν αντισώματα στον παράγοντα Rh στο πλάσμα του αίματος. Κατά την προετοιμασία για μετάγγιση αίματος για τη λήπτρια, αυτό σημαίνει συμβατότητα με το αίμα του δότη, ενώ παρακολουθείται η εγκυμοσύνη - απουσία ευαισθητοποίησης Rh της μητέρας, χαμηλός κίνδυνος ανάπτυξης ανοσολογικής σύγκρουσης. Φυσιολογικοί παράγοντες, όπως οι διατροφικές συνήθειες ή η σωματική δραστηριότητα, δεν μπορούν να επηρεάσουν το αποτέλεσμα της εξέτασης. Επομένως, εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, είναι απαραίτητη η συμβουλή γιατρού.

Διαγνωστική αξία της ανάλυσης

Ένα θετικό αποτέλεσμα δοκιμής Coombs εκφράζεται ποιοτικά, από (+) έως (++++), ή ποσοτικά, σε τίτλους από 1:16 έως 1:256. Ο προσδιορισμός της συγκέντρωσης των αντισωμάτων στα ερυθροκύτταρα και στον ορό του αίματος πραγματοποιείται και στους δύο τύπους δειγμάτων. Με θετικό αποτέλεσμα της άμεσης δοκιμής Coombs, ανιχνεύονται αντισώματα στην εξωτερική μεμβράνη των ερυθρών αιμοσφαιρίων, τα οποία οδηγούν στην καταστροφή αυτών των αιμοσφαιρίων. Η αιτία μπορεί να είναι μετάγγιση αίματος χωρίς προηγούμενη τυποποίηση - αιμολυτική αντίδραση μετά τη μετάγγιση, καθώς και νεογνική ερυθροβλάστωση, αιμολυτική αντίδραση λόγω χρήσης φαρμάκων, πρωτοπαθής ή δευτερογενής αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία. Η δευτερογενής καταστροφή των ερυθροκυττάρων μπορεί να προκληθεί από συστηματικό ερυθηματώδη λύκο, σύνδρομο Evans, μακροσφαιριναιμία Waldenström, παροξυσμική ψυχρή αιμοσφαιρινουρία, χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία, λέμφωμα, λοιμώδη μονοπυρήνωση, σύφιλη, μυκοπλασματική πνευμονία.

Ένα θετικό αποτέλεσμα της έμμεσης δοκιμής Coombs υποδεικνύει την παρουσία αντισωμάτων στον παράγοντα Rh στο πλάσμα. Στην πράξη, αυτό σημαίνει ότι έχει συμβεί ευαισθητοποίηση Rh, υπάρχει πιθανότητα να αναπτυχθεί σύγκρουση Rh μετά από έγχυση αίματος δότη κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης. Για την πρόληψη των επιπλοκών της εγκυμοσύνης, οι γυναίκες με θετικό αποτέλεσμα του τεστ Coombs τοποθετούνται σε ειδικά αρχεία.

Θεραπεία αποκλίσεων από τον κανόνα

Το τεστ Coombs αναφέρεται σε ισοορολογικές μελέτες. Τα αποτελέσματά του καθιστούν δυνατό τον εντοπισμό μιας αιμολυτικής αντίδρασης, καθώς και τον προσδιορισμό της συμβατότητας του αίματος του δότη και του λήπτη, της μητέρας και του εμβρύου, προκειμένου να αποφευχθεί η ανάπτυξη της σύγκρουσης Rhesus. Εάν το αποτέλεσμα της εξέτασης είναι θετικό, τότε είναι απαραίτητο να ζητήσετε συμβουλές από τον θεράποντα ιατρό - μαιευτήρα-γυναικολόγο, αιματολόγο, χειρουργό.

Αντισώματαπου βρίσκεται στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων, μπορεί να είναι τόσο σε στατική όσο και σε ελεύθερη κατάσταση πλάσμα αίματος. Ανάλογα με την κατάσταση των αντισωμάτων, πραγματοποιείται άμεση ή έμμεση αντίδραση Coombs. Εάν υπάρχει λόγος να πιστεύουμε ότι τα αντισώματα είναι στερεωμένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, εκτελείται μια άμεση δοκιμή Coombs. Σε αυτή την περίπτωση, η δοκιμή περνά σε ένα στάδιο - προστίθεται ορός αντισφαιρίνης. Εάν υπάρχουν ελλιπή αντισώματα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, συγκόλλησηερυθροκύτταρα.

Έμμεση αντίδραση

Η έμμεση αντίδραση Coombs προχωρά σε 2 βήματα. Πρώτον, είναι απαραίτητο να εφαρμοστεί τεχνητά καθιστό ευπαθήερυθροκύτταρα. Για να γίνει αυτό, επωάζονται τα ερυθροκύτταρα και ο υπό μελέτη ορός αίματος, γεγονός που προκαλεί τη στερέωση αντισωμάτων στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων. Μετά από αυτό, πραγματοποιείται το δεύτερο στάδιο της δοκιμής Coombs - η προσθήκη ορού αντισφαιρίνης.

αντίδραση καθίζησης - RP (από Lat praecipilo σε ίζημα) είναι ο σχηματισμός και η καθίζηση ενός συμπλόκου ενός διαλυτού μοριακού αντιγόνου με αντισώματα υπό μορφή θολότητας, που ονομάζεται επισπεύδει. Σχηματίζεται με ανάμειξη αντιγόνων και αντισωμάτων σε ισοδύναμες ποσότητες, η περίσσεια ενός από αυτά μειώνει το επίπεδο σχηματισμού του ανοσοποιητικού συμπλέγματος. Η αντίδραση κατακρήμνισης τοποθετείται σε δοκιμαστικούς σωλήνες (αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου), σε γέλες, θρεπτικά μέσα κ.λπ. Ποικιλίες της αντίδρασης καθίζησης σε ημί-υγρή γέλη άγαρ ή αγαρόζης χρησιμοποιούνται ευρέως, διπλή ανοσοδιάχυση σύμφωνα με Ouchterlony, ανοσοδιάχυση ραδίου, ανοσοηλεκτροφόρησηκαι τα λοιπά.

Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου. Η αντίδραση διεξάγεται σε στενούς σωλήνες καθίζησης: ένα διαλυτό αντιγόνο τοποθετείται στο στρώμα του ανοσοποιητικού ορού. Με βέλτιστη αναλογία αντιγόνου και αντισωμάτων, σχηματίζεται ένα αδιαφανές στρώμα στο όριο αυτών των δύο διαλυμάτων. δακτύλιος ιζήματος. Εάν χρησιμοποιούνται βρασμένα και φιλτραρισμένα εκχυλίσματα ιστών ως αντιγόνα στην αντίδραση, τότε μια τέτοια αντίδραση ονομάζεται αντίδραση Ι-θερμοκαθίζηση (αντίδραση κατά την οποία ανιχνεύεται το απτένιο του άνθρακα).
Αντίδραση διπλής ανοσοδιάχυσης Ouchterlony. Για τη ρύθμιση της αντίδρασης, το λιωμένο πήκτωμα άγαρ χύνεται σε ένα λεπτό στρώμα σε μια γυάλινη πλάκα και μετά τη στερεοποίηση, ανοίγονται οπές σε αυτό. Τα αντιγόνα και οι οροί του ανοσοποιητικού τοποθετούνται χωριστά στα φρεάτια του τζελ, τα οποία διαχέονται το ένα προς το άλλο. Στο σημείο συνάντησης σε ισοδύναμες αναλογίες, σχηματίζουν ένα ίζημα με τη μορφή λευκής ταινίας. Σε συστήματα πολλαπλών συστατικών, πολλές γραμμές ιζήματος εμφανίζονται μεταξύ των φρεατίων με αντιγόνα και αντισώματα. Σε πανομοιότυπα AG, οι γραμμές ιζήματος συγχωνεύονται. σε μη πανομοιότυπα ΑΓ, τέμνονται.
Αντίδραση ακτινικής ανοσοδιάχυσης.Ο ανοσοποιητικός ορός με τηγμένο γέλη άγαρ χύνεται ομοιόμορφα στο ποτήρι. Μετά τη στερεοποίηση στο πήκτωμα, κατασκευάζονται φρεάτια στα οποία τοποθετείται το αντιγόνο σε διάφορες αραιώσεις. Το αντιγόνο, διαχέοντας στο πήκτωμα, σχηματίζει δακτυλιοειδείς ζώνες καθίζησης γύρω από τα φρεάτια με αντισώματα. Η διάμετρος του δακτυλίου καθίζησης είναι ανάλογη της συγκέντρωσης του αντιγόνου. Η αντίδραση χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό στον ορό του αίματος ανοσοσφαιρινών διαφόρων τάξεων, συστατικών του συστήματος συμπληρώματος κ.λπ.
Ανοσοηλεκτροφόρηση- συνδυασμός της μεθόδου ηλεκτροφόρησης και ανοσοκατακρήμνισης: ένα μείγμα αντιγόνων εισάγεται στα φρεάτια της γέλης και διαχωρίζεται στο πήκτωμα χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση, στη συνέχεια εισάγεται ανοσοορός στην αυλάκωση παράλληλη με τις ζώνες ηλεκτροφόρησης, τα αντισώματα της οποίας διαχέονται στο πήκτωμα και σχηματίζουν μια γραμμή καθίζησης στο σημείο «συνάντησης» με το αντιγόνο.
αντίδραση κροκίδωσης(σύμφωνα με τον Ramon) (από το λατ. f1oecus - νιφάδες μαλλί) - η εμφάνιση ωχρότητας ή νιφάδας μάζας (ανοσοκαθίζηση) σε δοκιμαστικό σωλήνα κατά την αντίδραση τοξίνης - αντιτοξίνης ή τοξοειδούς - αντιτοξίνης. Χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας αντιτοξικού ορού ή τοξοειδούς.

Δακτυλογράφηση HLA- μελέτη του κύριου συμπλέγματος ανθρώπινης ιστοσυμβατότητας - συμπλέγματος HLA. Αυτός ο σχηματισμός περιλαμβάνει μια περιοχή γονιδίων στο χρωμόσωμα 6 που κωδικοποιούν αντιγόνα HLA που εμπλέκονται σε διάφορες ανοσοαποκρίσεις.

Καθήκοντα στο Δακτυλογράφηση HLAμπορεί να είναι πολύ διαφορετική - βιολογική ταυτοποίηση (ο τύπος HLA κληρονομείται μαζί με τα γονίδια των γονέων), προσδιορισμός προδιάθεσης για διάφορες ασθένειες, επιλογή δοτών για μεταμόσχευση οργάνων - σε αυτήν την περίπτωση, συγκρίνονται τα αποτελέσματα του τύπου HLA των ιστών δότη και λήπτη. Με τη βοήθεια της τυποποίησης HLA καθορίζεται πόσο όμοιοι ή διαφορετικοί είναι οι σύζυγοι ως προς τα αντιγόνα ιστικής συμβατότητας προκειμένου να διαγνωστούν περιπτώσεις υπογονιμότητας.

Η πληκτρολόγηση HLA προτείνει Ανάλυση πολυμορφισμού HLAκαι πραγματοποιείται με δύο μεθόδους - ορολογική και μοριακή γενετική. Η κλασική ορολογική μέθοδος τυποποίησης HLA βασίζεται στη μικρολεμφοκυτταροτοξική εξέταση, ενώ η μοριακή μέθοδος χρησιμοποιεί PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης).

Ορρολογικός Δακτυλογράφηση HLAπραγματοποιούνται σε μεμονωμένους κυτταρικούς πληθυσμούς. Τα κύρια αντιγόνα του συμπλέγματος ιστοσυμβατότητας μεταφέρονται κυρίως από λεμφοκύτταρα. Ως εκ τούτου, ένα εναιώρημα των Τ λεμφοκυττάρων χρησιμοποιείται ως οι κύριοι φορείς των αντιγόνων κατηγορίας Ι και ένα εναιώρημα των Β λεμφοκυττάρων για τον προσδιορισμό των αντιγόνων HLA τάξης II. Χρησιμοποιείται είτε φυγοκέντρηση είτε ανοσομαγνητικός διαχωρισμός για την απομόνωση των επιθυμητών πληθυσμών κυττάρων από πλήρες αίμα. Πιστεύεται ότι η πρώτη μέθοδος μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς θετικά δεδομένα, καθώς ορισμένα από τα κύτταρα πεθαίνουν σε αυτή την περίπτωση. Η δεύτερη μέθοδος αναγνωρίζεται ως πιο ειδική - ενώ πάνω από το 95% των κυττάρων παραμένουν βιώσιμα.

Αλλά η βάση για τη σταδιοποίηση μιας λεμφοκυτταροτοξικής δοκιμής Δακτυλογράφηση HLAείναι ένας ειδικός ορός που περιέχει αντισώματα σε διάφορες αλληλικές παραλλαγές των HLA αντιγόνων I και II τάξεων. Η ορολογική εξέταση σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε τον τύπο HLA εξετάζοντας ποιοι από τους ορούς αντιδρούν με λεμφοκύτταρα και ποιοι όχι.

Εάν συμβεί μια αντίδραση μεταξύ των κυττάρων και του ορού, σχηματίζεται ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος στην επιφάνεια του κυττάρου. Μετά την προσθήκη ενός διαλύματος που περιέχει συμπλήρωμα, συμβαίνει λύση και κυτταρικός θάνατος. Η ορολογική δοκιμή του τύπου HLA αξιολογείται χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού για την αξιολόγηση θετικών (ερυθρός φθορισμός) και αρνητικών (πράσινος φθορισμός) αντιδράσεις ή μικροσκοπία αντίθεσης φάσης για χρώση των πυρήνων των νεκρών κυττάρων. Το αποτέλεσμα της τυποποίησης HLA προκύπτει λαμβάνοντας υπόψη την ειδικότητα των ορών που αντέδρασαν και των ομάδων αντιγόνων που αντιδρούν διασταυρούμενα, την ένταση της αντίδρασης κυτταροτοξικότητας.

Τα μειονεκτήματα της ορολογικής Δακτυλογράφηση HLAείναι η παρουσία διασταυρούμενων αντιδράσεων, η ασθενής συγγένεια αντισωμάτων ή η χαμηλή έκφραση των αντιγόνων HLA, η απουσία πρωτεϊνικών προϊόντων σε έναν αριθμό γονιδίων HLA.

Πιο σύγχρονες, μοριακές μέθοδοι Δακτυλογράφηση HLAΧρησιμοποιούνται ήδη τυποποιημένα συνθετικά δείγματα, τα οποία δεν αντιδρούν με αντιγόνα στην επιφάνεια των λευκοκυττάρων, αλλά με DNA και δείχνουν άμεσα ποια αντιγόνα υπάρχουν στο δείγμα. Οι μοριακές μέθοδοι δεν απαιτούν ζωντανά λευκοκύτταρα, μπορεί να μελετηθεί οποιοδήποτε ανθρώπινο κύτταρο και μερικά μικρολίτρα αίματος αρκούν για να λειτουργήσουν ή μπορεί να περιοριστεί στην απόξεση από τον στοματικό βλεννογόνο.

Μοριακή γενετική Δακτυλογράφηση HLAχρησιμοποιεί τη μέθοδο PCR, το πρώτο βήμα της οποίας είναι η λήψη καθαρού γονιδιωματικού DNA (από ολικό αίμα, εναιώρημα λευκοκυττάρων, ιστούς).

Στη συνέχεια το δείγμα DNA αντιγράφεται - ενισχύεται σε δοκιμαστικό σωλήνα χρησιμοποιώντας εκκινητές (βραχύ μονόκλωνο DNA) ειδικά για έναν συγκεκριμένο τόπο HLA. Τα άκρα κάθε ζεύγους εκκινητών πρέπει να είναι αυστηρά συμπληρωματικά σε μια μοναδική αλληλουχία που αντιστοιχεί σε ένα συγκεκριμένο αλληλόμορφο, διαφορετικά δεν λαμβάνει χώρα ενίσχυση.

Μετά την PCR, κατά την επαναλαμβανόμενη αντιγραφή, λαμβάνεται μεγάλος αριθμός θραυσμάτων DNA, τα οποία μπορούν να αξιολογηθούν οπτικά. Για να γίνει αυτό, τα μείγματα της αντίδρασης υποβάλλονται σε ηλεκτρόλυση ή υβριδισμό και προσδιορίζεται εάν έχει συμβεί μια συγκεκριμένη ενίσχυση χρησιμοποιώντας ένα πρόγραμμα ή πίνακα. Το αποτέλεσμα της τυποποίησης HLA παρουσιάζεται με τη μορφή μιας περιεκτικής αναφοράς σε γονιδιακά και αλληλικά επίπεδα. Λόγω της τυποποίησης των δειγμάτων που χρησιμοποιήθηκαν, το μοριακό Δακτυλογράφηση HLAακριβέστερα ορολογικά. Επιπλέον, παρέχει περισσότερες πληροφορίες (περισσότερα νέα αλληλόμορφα DNA) και υψηλότερο επίπεδο λεπτομέρειας, καθώς σας επιτρέπει να αναγνωρίζετε όχι μόνο τα αντιγόνα, αλλά και τα ίδια τα αλληλόμορφα, τα οποία καθορίζουν ποιο αντιγόνο υπάρχει στο κύτταρο.

ανοσολογική αντίδραση λύσης.Η αντίδραση βασίζεται στην ικανότητα συγκεκριμένων αντισωμάτων να σχηματίζουν ανοσοσυμπλέγματα με κύτταρα, συμπεριλαμβανομένων ερυθροκυττάρων, βακτηρίων, γεγονός που οδηγεί σε ενεργοποίηση του συστήματος συμπληρώματος κατά μήκος της κλασικής οδού και λύση των κυττάρων. Από τις ανοσολογικές αντιδράσεις λύσης, πιο συχνά χρησιμοποιείται η αντίδραση αιμόλυσης και σπάνια η αντίδραση βακτηριόλυσης (κυρίως στη διαφοροποίηση της χολέρας και των δονήσεων που μοιάζουν με χολέρα).

αντίδραση αιμόλυσης.Υπό την επίδραση της αντίδρασης με αντισώματα παρουσία συμπληρώματος, το θολό εναιώρημα των ερυθροκυττάρων μετατρέπεται σε ένα έντονο κόκκινο διαφανές υγρό - "λακά αίμα" λόγω της απελευθέρωσης αιμοσφαιρίνης. Κατά τη ρύθμιση μιας διαγνωστικής αντίδρασης στερέωσης συμπληρώματος (RCC), η αντίδραση αιμόλυσης χρησιμοποιείται ως δείκτης: για να ελεγχθεί η παρουσία ή η απουσία (δέσμευση) ελεύθερου συμπληρώματος.

Τοπική αντίδραση αιμόλυσης σε γέλη(αντίδραση Jerne) είναι μια από τις παραλλαγές της αντίδρασης αιμόλυσης. Σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τον αριθμό των κυττάρων που σχηματίζουν αντισώματα. Ο αριθμός των κυττάρων που εκκρίνουν αντισώματα - αιμολυσίνες, καθορίζεται από τον αριθμό των πλακών αιμόλυσης που εμφανίζονται σε μια γέλη άγαρ που περιέχει ερυθροκύτταρα, ένα κυτταρικό εναιώρημα του μελετημένου λεμφικού ιστού και του συμπληρώματος.

Μέθοδος ανοσοφθορισμού

(RIF, αντίδραση ανοσοφθορισμού) - μια μέθοδος για την ανίχνευση ειδικού Ag (Ab) χρησιμοποιώντας Ab (Ag) συζευγμένο με φθόριο. Έχει υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα. Χρησιμοποιείται για λοιμώξεις express d-ki. ασθένειες (αναγνώριση του αιτιολογικού παράγοντα στο ερευνητικό υλικό), καθώς και για τον προσδιορισμό αντισωμάτων και επιφανειακών υποδοχέων και δεικτών λευκοκυττάρων (ανοσοφαινοτυποποίηση) και άλλων κυττάρων. Απευθείας Ι. μ.συνίσταται στην επεξεργασία μιας τομής ιστού ή επιχρίσματος από παθολογικό υλικό ή μικροβιακό to-ry with-coy που περιέχει ειδικά αντισώματα συζευγμένα με φθορόχρωμα· το φάρμακο πλένεται για να αφαιρεθούν τα μη δεσμευμένα αντισώματα και εξετάζεται σε μικροσκόπιο φθορισμού. Σε θετικές περιπτώσεις, εμφανίζεται ένα φωτεινό ανοσοσύμπλεγμα γύρω από την περιφέρεια του αντικειμένου. Ο έλεγχος είναι απαραίτητος για τον αποκλεισμό της μη ειδικής φωταύγειας. Στο έμμεσος. Τους.Στο πρώτο στάδιο, μια τομή ή ένα επίχρισμα ιστού αντιμετωπίζεται με έναν μη φθορίζοντα ειδικό παράγοντα, στο δεύτερο στάδιο, με έναν παράγοντα φωταύγειας έναντι των -σφαιρινών αυτού του ζώου, ο οποίος εφαρμόστηκε στο πρώτο στάδιο. Σε μια θετική περίπτωση, σχηματίζεται ένα φωτεινό σύμπλεγμα, που αποτελείται από Ar, Am προς αυτό και Am έναντι At (μέθοδος σάντουιτς). Εκτός από ένα μικροσκόπιο φωταύγειας, για να ληφθεί υπόψη το RIF κατά τη διάρκεια του φαινοτύπου των κυττάρων, διαλογέας κυττάρων λέιζερ .

κυτταρομετρία ροής- μέθοδος οπτικής μέτρησης των παραμέτρων ενός κυττάρου, των οργανιδίων του και των διεργασιών που συμβαίνουν σε αυτό.

Η τεχνική συνίσταται στην ανίχνευση της σκέδασης του φωτός από μια δέσμη λέιζερ όταν ένα κύτταρο περνά μέσα από αυτό σε πίδακα υγρού και ο βαθμός διασποράς του φωτός επιτρέπει σε κάποιον να πάρει μια ιδέα για το μέγεθος και τη δομή του κυττάρου. Επιπλέον, η ανάλυση λαμβάνει υπόψη το επίπεδο φθορισμού των χημικών ενώσεων που αποτελούν το κύτταρο (αυτοφθορισμός) ή που εισάγονται στο δείγμα πριν από την κυτταρομετρία ροής.

Το κυτταρικό εναιώρημα, που είχε προηγουμένως επισημανθεί με φθορίζοντα μονοκλωνικά αντισώματα ή φθορίζουσες βαφές, εισέρχεται στο υγρό ρεύμα που διέρχεται από το κύτταρο ροής. Οι συνθήκες επιλέγονται με τέτοιο τρόπο ώστε τα κελιά να παρατάσσονται το ένα μετά το άλλο λόγω του λεγόμενου. υδροδυναμική εστίαση ενός πίδακα σε ένα πίδακα. Τη στιγμή που το κύτταρο διασχίζει τη δέσμη λέιζερ, οι ανιχνευτές καταγράφουν:

σκέδαση φωτός σε μικρές γωνίες (από 1° έως 10°) (αυτό το χαρακτηριστικό χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του μεγέθους των κελιών).

σκέδαση φωτός υπό γωνία 90° (σας επιτρέπει να κρίνετε την αναλογία πυρήνα/κυτταροπλάσματος, καθώς και την ετερογένεια και την κοκκοποίηση των κυττάρων).

ένταση φθορισμού σε πολλά κανάλια φθορισμού (από 2 έως 18-20) - σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τη σύνθεση υποπληθυσμού του κυτταρικού εναιωρήματος κ.λπ.

Σε πιάτο ή γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα εφαρμόζονται με σιφώνια (διαφορετικά!) 1 μεγάλη σταγόνα ορού O (I), A (II), B (III). Παρατηρώντας την ώρα, με μια καθαρή γυάλινη ράβδο ή μια καθαρή γωνία της γυάλινης πλάκας, οι σταγόνες του ορού συνδυάζονται με σταγόνες αίματος. Ο προσδιορισμός διαρκεί 5 λεπτά, ανακινώντας την πλάκα, στη συνέχεια προστίθεται 1 σταγόνα αλατούχου διαλύματος σε κάθε μείγμα σταγόνων και τα αποτελέσματα αξιολογούνται. Είναι καλύτερα αν ο ορός είναι 2 διαφορετικών σειρών. Τα αποτελέσματα των ομάδων αίματος πρέπει να ταιριάζουν και στις δύο σειρές ορού.

Αξιολόγηση των αποτελεσμάτων της ισοαιμοσυγκόλλησης:

ισοαιμοσυγκόλληση. Με μια θετική αντίδραση, μικροσκοπικοί κόκκινοι κόκκοι κολλημένων ερυθρών αιμοσφαιρίων εμφανίζονται στο μείγμα. Οι κόκκοι συγχωνεύονται σε μεγαλύτερους κόκκους και οι τελευταίοι σε νιφάδες. Ο ορός είναι σχεδόν αποχρωματισμένος.

με αρνητική αντίδραση, το μείγμα παραμένει ομοιόμορφο ροζ για 5 λεπτά και δεν ανιχνεύονται κόκκοι.

όταν εργάζεστε με 3 ορούς ομάδων O(I), A(II), B(III), είναι δυνατοί 4 συνδυασμοί αντιδράσεων:

1. εάν και οι 3 οροί έδωσαν αρνητική αντίδραση, δηλαδή το μείγμα είναι ομοιόμορφο ροζ - αυτός είναι ο τύπος αίματος O (I).

   εάν μόνο ο ορός της ομάδας Α (II) έδωσε αρνητική αντίδραση και οι οροί O (I) και B (III) έδωσαν θετική αντίδραση, δηλαδή εμφανίστηκαν κόκκοι - αυτή είναι η ομάδα αίματος Α (II).

   ο ορός της ομάδας Β(ΙΙ) έδωσε αρνητική αντίδραση και οι οροί των ομάδων Ο(Ι) και Α(ΙΙ) έδωσαν θετική αντίδραση - αυτή είναι η ομάδα αίματος Β(ΙΙΙ).

Και οι 3 οροί έδωσαν θετικές αντιδράσεις - το δοκιμασμένο αίμα της ομάδας ΑΒ (IV). Στην περίπτωση αυτή πραγματοποιείται μελέτη με τον ορό της ομάδας ΑΒ (IV).

Σημείωση!Οι σταγόνες του αίματος που μελετήθηκε πρέπει να είναι 5-10 φορές μικρότερες από τις σταγόνες ορού.

Σφάλματα ισοαιμοσυγκόλλησης.

Να μην συγκολλάται εκεί που πρέπει και να έχει συγκόλληση εκεί που δεν πρέπει. Αυτό μπορεί να οφείλεται σε χαμηλό τίτλο ορού συν κακή συγκόλληση ερυθροκυττάρων.

Η παρουσία συγκόλλησης εκεί που δεν πρέπει- πρόκειται για ψευδοσυγκόλληση, όταν σωροί ερυθροκυττάρων σχηματίζουν "στήλες νομισμάτων". Το κούνημα του πιάτου ή η προσθήκη φυσιολογικού ορού τα καταστρέφει.

Πανσυγκόλληση, όταν ο ορός κολλάει μαζί όλα τα ερυθρά αιμοσφαίρια, συμπεριλαμβανομένης της δικής του ομάδας αίματος. Μέχρι το 5ο λεπτό εξαφανίζονται τα σημάδια της συγκόλλησης.

Υπάρχει επίσης η λεγόμενη ψυχρή πανσυγκόλληση, όταν τα ερυθροκύτταρα κολλάνε μεταξύ τους λόγω της χαμηλής θερμοκρασίας του αέρα (κάτω από 15 ° C) στο δωμάτιο.

Σε όλες αυτές τις περιπτώσεις, είτε πραγματοποιείται επαναλαμβανόμενη αντίδραση, είτε σύμφωνα με τυπικά ερυθροκύτταρα.

Προσδιορισμός της Rh-σύνδεσης του αίματος

Για τον προσδιορισμό της συσχέτισης Rh, δηλαδή για την ανίχνευση της παρουσίας ή απουσίας αντιγόνων του συστήματος Rh στο αίμα των ανθρώπων, χρησιμοποιούνται τυπικοί οροί (αντιδραστήρια) anti-Rhesus, οι οποίοι είναι διαφορετικοί ως προς την ειδικότητα, δηλαδή περιέχουν αντισώματα σε σχέση με διάφορα αντιγόνα αυτού του συστήματος. Για τον προσδιορισμό του αντιγόνου Rh 0 (D), ο ορός anti-Rhesus χρησιμοποιείται συχνότερα με την προσθήκη ενός διαλύματος ζελατίνης 10% ή χρησιμοποιείται ένα τυπικό αντιδραστήριο anti-Rhesus που έχει παρασκευαστεί εκ των προτέρων με ένα διάλυμα πολυγλυκίνης 33%. Για την απόκτηση ακριβέστερων αποτελεσμάτων της μελέτης, καθώς και για την ανίχνευση αντιγόνων άλλων ορολογικών συστημάτων, χρησιμοποιείται το τεστ Coombs (είναι επίσης πολύ ευαίσθητο στον προσδιορισμό της συμβατότητας του μεταγγιζόμενου αίματος). Για τη μελέτη χρησιμοποιείται φυσικό αίμα ή παρασκευασμένο με κάποιο είδος συντηρητικού. Σε αυτή την περίπτωση, το αίμα πρέπει να πλυθεί από το συντηρητικό με δεκαπλάσιο όγκο ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου. Κατά τον προσδιορισμό της συσχέτισης Rh- Rh 0 (D) θα πρέπει να χρησιμοποιούνται δύο δείγματα ορού ή αντιδραστηρίου anti-Rhesus δύο διαφορετικών σειρών και ταυτόχρονα να χρησιμοποιούνται τυπικά ερυθροκύτταρα που λαμβάνονται από αίμα από αίμα από Rh-θετικό (Rh +) και Rh-αρνητικό (Rh - ) τα άτομα. Κατά τον προσδιορισμό άλλων ισοαντιγόνων, θα πρέπει να χρησιμοποιούνται αντίστοιχα ερυθροκύτταρα ελέγχου, τα οποία περιέχουν ή δεν διαθέτουν το αντιγόνο κατά του οποίου κατευθύνονται τα αντισώματα στον τυπικό ορό.

Οι ατελείς θερμικές συγκολλητίνες είναι ο πιο κοινός τύπος αντισωμάτων που μπορεί να προκαλέσει την ανάπτυξη αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας. Αυτά τα αντισώματα ανήκουν στο IgG, σπάνια - σε IgM, IgA.

ΔΟΚΙΜΗ COOMBS

Δοκιμή Coombs: μια εισαγωγή.Το τεστ Coombs είναι μια εργαστηριακή διαγνωστική μέθοδος που βασίζεται στην αντίδραση αιμοσυγκόλλησης.

Η κύρια μέθοδος για τη διάγνωση της αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας είναι το τεστ Coombs. Βασίζεται στην ικανότητα αντισωμάτων ειδικά για ανοσοσφαιρίνες (ειδικά IgG) ή συστατικών του συμπληρώματος (ειδικά C3) να συγκολλούν ερυθροκύτταρα επικαλυμμένα με IgG ή C3.

Η δέσμευση των IgG και C3b στα ερυθροκύτταρα παρατηρείται στην αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία και στην επαγόμενη από φάρμακα ανοσοαιμολυτική αναιμία. Άμεση δοκιμή Coombs.Η άμεση δοκιμή Coombs χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων ή συστατικών συμπληρώματος που είναι στερεωμένα στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Διενεργείται ως εξής:

Για να ληφθούν αντισώματα σε ανθρώπινες ανοσοσφαιρίνες (ορός αντισφαιρίνης) ή συμπλήρωμα (αντισυμπληρωματικός ορός), το ζώο ανοσοποιείται με ανθρώπινο ορό, ανοσοσφαιρίνες ή ανθρώπινο συμπλήρωμα. Ο ορός που λαμβάνεται από το ζώο καθαρίζεται από αντισώματα σε άλλες πρωτεΐνες.

Τα ερυθροκύτταρα του ασθενούς πλένονται με φυσιολογικό ορό για την πλήρη απομάκρυνση του ορού, ο οποίος εξουδετερώνει τα αντισώματα έναντι των ανοσοσφαιρινών και του συμπληρώματος και μπορεί να προκαλέσει ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα.

Εάν αντισώματα ή συστατικά του συμπληρώματος στερεωθούν στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων, η προσθήκη αντισφαιρίνης ή αντισυμπληρωματικού ορού προκαλεί συγκόλληση των ερυθροκυττάρων.

Η άμεση δοκιμή Coombs χρησιμοποιείται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

αυτοάνοση αιμόλυση.

Αιμολυτική νόσος του νεογνού.

Προκαλούμενη από φάρμακα ανοσοαιμολυτική αναιμία.

Αντιδράσεις αιμολυτικής μετάγγισης. Έμμεση δοκιμή Coombs.Το έμμεσο τεστ Coombs ανιχνεύει αντισώματα στα ερυθροκύτταρα στον ορό. Για να γίνει αυτό, ο ορός του ασθενούς επωάζεται με ερυθροκύτταρα δότη της ομάδας 0 και στη συνέχεια πραγματοποιείται απευθείας δοκιμή Coombs.

Η έμμεση δοκιμή Coombs χρησιμοποιείται στις ακόλουθες περιπτώσεις:

Προσδιορισμός της ατομικής συμβατότητας του αίματος του δότη και του λήπτη.

Ανίχνευση αλλοαντισωμάτων, συμπεριλαμβανομένων των αντισωμάτων που προκαλούν αιμολυτικές αντιδράσεις μετάγγισης.

Προσδιορισμός αντιγόνων επιφανειακών ερυθροκυττάρων στην ιατρική γενετική και την ιατροδικαστική.

Επιβεβαίωση πανομοιότυπων διδύμων σε μεταμόσχευση μυελού των οστών.

Για τη διεξαγωγή βιολογικού τεστ, το αίμα μεταγγίζεται όσο το δυνατόν γρηγορότερα (κατά προτίμηση με πίδακα). Μετά τη μετάγγιση 25 ml αίματος, ο σωλήνας του συστήματος συσφίγγεται με σφιγκτήρα. Στη συνέχεια γίνεται μια παύση για 3 λεπτά, κατά την οποία παρακολουθείται η κατάσταση του παραλήπτη. Για τη δημιουργία ενός βιολογικού δείγματος, 25 ml αίματος εγχέονται τρεις φορές.Στο τέλος της εξέτασης (μετά τη μετάγγιση των πρώτων 75 ml αίματος σε κλασματικές δόσεις των 25 ml σε διαστήματα 3 λεπτών), το σύστημα ρυθμίζεται στον απαιτούμενο ρυθμό μετάγγισης. Όταν μεταγγίζετε έναν ασθενή με περισσότερα από ένα φιαλίδια αίματος, είναι απαραίτητο να αφαιρέσετε τη βελόνα από τη φλέβα. Σε αυτή την περίπτωση, η βελόνα αφαιρείται από το δοκιμαστικό σωλήνα του φιαλιδίου στο οποίο έχει εξαντληθεί το αίμα και εισάγεται στο επόμενο φιαλίδιο. Ο σωλήνας συστήματος (λαστιχένιο ή πλαστικό) συσφίγγεται αυτή τη στιγμή με σφιγκτήρα. Εάν κατά τη διάρκεια μιας μετάγγισης αίματος υπάρχει ανάγκη για ενδοφλέβια χορήγηση οποιουδήποτε άλλου φαρμάκου στον λήπτη, αυτό γίνεται με τρύπημα του ελαστικού σωλήνα του συστήματος. Τα τρυπήματα ενός πλαστικού σωλήνα είναι απαράδεκτα, καθώς δεν πέφτουν. Μετά από κάθε μετάγγιση αίματος, ο ασθενής πρέπει να παρακολουθείται για τον εντοπισμό και την έγκαιρη εξάλειψη πιθανών επιπλοκών, συμπεριλαμβανομένων των αλλεργικών αντιδράσεων. Η θερμοκρασία του σώματος πρέπει να μετράται 2 ώρες μετά το τέλος της μετάγγισης αίματος. Με αύξηση της μέτρησής του πρέπει να επαναλαμβάνεται τις επόμενες 4 ώρες κάθε ώρα. Εξίσου σημαντική είναι η παρακολούθηση της ούρησης και της σύνθεσης των ούρων, γεγονός που καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό της παρουσίας τοξικής αντίδρασης μετά τη μετάγγιση. Η εμφάνιση ολιγουρίας και ανουρίας μετά από μετάγγιση αίματος, η παρουσία αιμοσφαιρίων και πρωτεΐνης στα ούρα αποτελούν άμεση ένδειξη ανάπτυξης αιμόλυσης μετά τη μετάγγιση.

Δοκιμή Coombs- ανάλυση για την ανίχνευση αντισωμάτων προσκολλημένων στην επιφάνεια ή διαλυμένων στο πλάσμα. Με τη βοήθειά του, ανιχνεύεται η ανοσοποίηση και τα αντισώματα στα ερυθρά αιμοσφαίρια. Το δεύτερο όνομα είναι το τεστ αντισφαιρίνης. Συμβαίνει άμεσα και έμμεσα.

Στο άμεση εξέταση αντισφαιρίνηςανιχνεύει αντισώματα στερεωμένα στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων. Διενεργείται με υποψία, με άλλα αυτοάνοσα νοσήματα, μετά από λήψη φαρμάκων (μεθυλντόπα, πενικιλίνη, κινίνη) και.

Τα ερυθροκύτταρα έχουν ευαισθητοποιηθεί in vivo - τα αντισώματα είναι ήδη σταθερά συνδεδεμένα με αυτά και η προσθήκη ορού αντισφαιρίνης (anti-IgG) προκαλεί τη συγκόλληση των ευαισθητοποιημένων κυττάρων μεταξύ τους, κάτι που είναι ορατό με γυμνό μάτι.

Έμμεση δοκιμή Coombsανιχνεύει αντισώματα κατά των ερυθροκυττάρων στο πλάσμα του αίματος, πραγματοποιείται πριν από τη μετάγγιση αίματος και κατά τη διάρκεια.

Αντισώματα κατά των ερυθροκυττάρων - ένας τύπος αυτοαντισώματος, δηλ. αντισώματα κατά των δικών τους ιστών. Ένα αυτοαντίσωμα εμφανίζεται όταν το ανοσοποιητικό σύστημα αντιδρά αφύσικα σε ορισμένα φάρμακα, όπως υψηλές δόσεις πενικιλίνης.

Τα ερυθροκύτταρα στην επιφάνειά τους περιέχουν διάφορες χημικές δομές (γλυκολιπίδια, σακχαρίτες, γλυκοπρωτεΐνες και πρωτεΐνες), που στην ιατρική ονομάζονται αντιγόνα. Ένα άτομο κληρονομεί από τους γονείς του έναν συγκεκριμένο χάρτη αντιγόνων σε κάθε ερυθρό αιμοσφαίριο.

Τα αντιγόνα συνδυάζονται σε ομάδες και δίπλα σε αυτό, το αίμα χωρίζεται σε διάφορες ομάδες - σύμφωνα με το σύστημα AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Τα πιο διάσημα και σημαντικά στο έργο ενός γιατρού είναι το AB0 και ο παράγοντας Rh (Rh).

Σύστημα AB0

Η Rh-σύνδεση ενός ατόμου καθορίζεται από την παρουσία αυτών των αντιγόνων. Ένα ιδιαίτερα σημαντικό αντιγόνο ερυθροκυττάρων είναι το αντιγόνο D. Αν υπάρχει, τότε μιλάνε για Rh-θετικό RhD αίματος, και αν δεν είναι - περίπου Rh αρνητικό Rhd.

Εάν το αντίστοιχο αντίσωμα ενωθεί με τα αντιγόνα των ερυθροκυττάρων, τότε το ερυθροκύτταρο καταστρέφεται - θα υπάρξει αιμόλυση.

Ενδείξεις

Η κύρια ένδειξη για απευθείαςτεστ αντισφαιρίνης- Υποψία αιμολυτικής αναιμίας. Τις περισσότερες φορές πραγματοποιείται με πρωτοπαθή αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία, αιμόλυση με ρευματικά, νεοπλασματικά, λοιμώδη νοσήματα, αιμόλυση που προκαλείται από φάρμακα.

Εάν η αναιμία εμφανιστεί λίγες μέρες ή μήνες μετά από μετάγγιση αίματος ή με παρατεταμένο ίκτερο σε νεογέννητο, γίνεται επίσης μια άμεση εξέταση Coombs.

Εμμεσοςδιενεργήθηκε δοκιμή αντισφαιρίνηςπριν από τη μετάγγιση αίματος και κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης μιας γυναίκας με αρνητική Rh.

Αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία

Αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία (πρωτοπαθής)είναι ένα κλασικό αυτοάνοσο νόσημα με άγνωστα αίτια. Η αλληλεπίδραση μέσα στο ανοσοποιητικό σύστημα διαταράσσεται, γεγονός που οδηγεί στην αντίληψη των δικών του ερυθροκυττάρων ως ξένων. Στους λεμφαδένες συντίθενται αντισώματα της κατηγορίας IgG (αντιδρούν στους t 37 ° C) ή / και IgM (στους t 40 ° C), τα οποία, όταν συνδέονται στην επιφάνεια του ερυθροκυττάρου, ξεκινούν έναν αριθμό ενζύμων (το σύστημα συμπληρώματος) και «τρυπούν» το τοίχωμα των ερυθροκυττάρων, γεγονός που οδηγεί στην καταστροφή του - αιμόλυση.

Τα πρώτα συμπτώματα οφείλονται τόσο στην καταστροφή των ερυθρών αιμοσφαιρίων όσο και στη μείωση της αιμοσφαιρίνης. Ανάμεσα τους:

• κόπωση, γενική αδυναμία, ευερεθιστότητα
• δύσπνοια
• πόνος στην κοιλιά και στο στήθος, ναυτία
• σκούρο χρώμα ούρων
• πόνος στην πλάτη
• ικτερικός χρωματισμός του δέρματος και των βλεννογόνων
• μείωση του αριθμού των ερυθροκυττάρων και

θετικό άμεσο αποτέλεσμα Δοκιμή Coombs 100% επιβεβαιώνει τη διάγνωση της αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας, αποδεικνύοντας την αυτοάνοση προέλευσή της. Ταυτόχρονα, ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν καθιστά δυνατή την αφαίρεση της διάγνωσης.

Δευτεροπαθής αιμολυτική αναιμία

Η δευτερογενής αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία και το θετικό τεστ Coombs μπορεί να είναι με τις ακόλουθες ασθένειες:

• σύνδρομο Evans
• λοίμωξη από πνευμονία

Ένα θετικό τεστ αντισφαιρίνης σε αυτές τις ασθένειες είναι ένα από τα συμπτώματα και όχι διαγνωστικό κριτήριο.

Αιμολυτική νόσος του νεογνού

Αιτία αιμολυτική νόσος του νεογνούασυμβατότητα της ομάδας αίματος στη μητέρα και το έμβρυο, στις περισσότερες περιπτώσεις σύμφωνα με το σύστημα Rh, σε μεμονωμένες περιπτώσεις - σύμφωνα με το σύστημα AB0, περιστασιακά - σύμφωνα με άλλα αντιγόνα.

Η σύγκρουση Rh αναπτύσσεται εάν σε μια γυναίκα με αρνητική Rh το έμβρυο έχει κληρονομήσει αίμα θετικό Rh από τον πατέρα της.

Η ασθένεια σε ένα νεογέννητο αναπτύσσεται μόνο εάν η μητέρα έχει ήδη αναπτύξει αντισώματα στα αντίστοιχα αντιγόνα, κάτι που συμβαίνει μετά από προηγούμενες εγκυμοσύνες, εκτρώσεις, μεταγγίσεις ασυμβίβαστου αίματος. Ο πιο συνηθισμένος λόγος για την ενεργοποίηση της σύνθεσης αντισωμάτων στα αντιγόνα της ερυθροκυτταρικής μεμβράνης είναι ο τοκετός (αιμορραγία εμβρύου-μητέρας). Οι πρώτες γεννήσεις γενικά περνούν χωρίς επιπλοκές, αλλά οι επόμενες γεννήσεις είναι γεμάτες με αιμολυτική νόσο του νεογνού τις πρώτες ημέρες μετά τη γέννηση.

Συμπτώματα αιμολυτικής νόσου του νεογνού:

• κιτρίνισμα του δέρματος
• , και βλεννογόνο
• διόγκωση του ήπατος και της σπλήνας
• αναπνευστικές διαταραχές
• πρήξιμο ολόκληρου του σώματος
• διέγερση και σταδιακή καταστολή του κεντρικού νευρικού συστήματος

Αναιμία μετά από μετάγγιση αίματος

Έμμεση δοκιμή Coombsδιενεργείται πριν από τη μετάγγιση αίματος για την αξιολόγηση της συμβατότητας και μια άμεση εξέταση Coombs - μετά από αυτήν εάν υπάρχει υποψία αιμόλυσης μετά τη μετάγγιση, π.χ. εάν έχετε συμπτώματα όπως πυρετό, πότισμα (διαβάστε παρακάτω). Σκοπός της εξέτασης είναι η ανίχνευση αντισωμάτων στα μεταγγιζόμενα ερυθρά αιμοσφαίρια που έχουν συνδεθεί με τα ερυθρά αιμοσφαίρια του δέκτη και αποτελούν την αιτία της αιμόλυσης μετά τη μετάγγιση, καθώς και την πρόωρη απομάκρυνση των ερυθρών αιμοσφαιρίων δότη από την κυκλοφορία του λήπτη (του δέκτη).

Συμπτώματα:

• αύξηση της θερμοκρασίας του σώματος
• εξάνθημα στο δέρμα
• πόνος στην πλάτη
• το κόκκινο
• ναυτία
• ζάλη

Αποκρυπτογράφηση

Αξίζει να υπενθυμίσουμε ότι οι θεμελιώδεις κανόνες για την αποκωδικοποίηση των άμεσων και έμμεσων δοκιμών αντισφαιρίνης είναι οι ίδιοι. Η μόνη διαφορά είναι η θέση των αντισωμάτων - στο αίμα ή ήδη στα ερυθροκύτταρα.

• αν Η άμεση δοκιμή Coombs είναι αρνητική- σημαίνει ότι το αντίσωμα δεν «κάθεται» στα ερυθροκύτταρα και θα πρέπει να αναζητηθεί περαιτέρω η αιτία των συμπτωμάτων και να γίνει έμμεση δοκιμή Coombs
• εάν ανιχνευθεί θετικό αποτέλεσμα του τεστ Coombs μετά από μετάγγιση αίματος, λοιμώξεις, φάρμακα - η θετικότητα διαρκεί έως και 3 μήνες (χρόνος ζωής των ερυθροκυττάρων 120 ημέρες - 3 μήνες)
• ένα θετικό αποτέλεσμα της εξέτασης αντισφαιρίνης σε μια αυτοάνοση νόσο διαρκεί μήνες ή και χρόνια

Κανόνας

• άμεσο τεστ Coombs - αρνητικό
• έμμεση δοκιμή Coombs - αρνητική

Ποιοτικά, ένα θετικό αποτέλεσμα μετριέται στον αριθμό των συν από ένα έως τέσσερα (+, ++, +++, ++++), και ποσοτικά σε ψηφιακή μορφή - 1:16, 1:256 κ.λπ.

Ναί. Το γεγονός ότι λάβατε μετάγγιση αίματος πρέπει να το γνωρίζει ο γιατρός σας, καθώς επηρεάζει τη σωστή ερμηνεία των αποτελεσμάτων των εξετάσεων τώρα. Όταν λαμβάνετε αίμα κάποιου άλλου (αν και πολλές φορές ελεγμένο αίμα), υπάρχει πάντα η πιθανότητα το σώμα σας να αναπτύξει αντισώματα κατά του μεταγγιζόμενου αίματος. Αυτά τα αντισώματα είναι που θα έχουν αρνητικό αντίκτυπο στην υγεία. Με τις επόμενες μεταγγίσεις αίματος, ο γιατρός θα πρέπει να γνωρίζει ότι έχετε ήδη λάβει μεταγγίσεις, πράγμα που σημαίνει ότι υπήρχε χρόνος για τη σύνθεση αντισωμάτων. Για τις έγκυες γυναίκες, αυτές οι πληροφορίες είναι ακόμη πιο σχετικές.

3. Εάν υπάρχει αναντιστοιχία στον παράγοντα Rh μεταξύ μητέρας και παιδιού, θα είναι όλα τα παιδιά άρρωστα;

Εξαρτάται από το αν το παιδί είναι Rh-θετικό ή αρνητικό (RhD). Οι φορείς των τύπων αίματος I, II, III και IV μπορεί να είναι και Rh-θετικοί και αρνητικοί. Σε μια κατάσταση όπου η μητέρα είναι Rh-αρνητική και το παιδί είναι Rh-θετικό, αντισώματα θα παράγονται ήδη με την πρώτη εγκυμοσύνη, αλλά μόνο μετά την πρώτη γέννηση (ή τον τερματισμό της εγκυμοσύνης) θα υπάρξει άμεση επαφή μεταξύ του αίματος του μητέρα και το παιδί. Η εφαρμογή της αιμολυτικής δράσης των αντισωμάτων θα είναι μόνο στη δεύτερη και στις επόμενες γεννήσεις, γεγονός που θα οδηγήσει σε αιμολυτική νόσο στο νεογέννητο.

Κάθε γυναίκα με αρνητικό παράγοντα Rh θα πρέπει να εξετάζεται προσεκτικά κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης και μετά τον τοκετό, πραγματοποιείται προληπτική θεραπεία για την πρόληψη της εμφάνισης αντισωμάτων και περαιτέρω επιπλοκών.

4. Κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, είναι απαραίτητο να γνωρίζουμε την ομάδα αίματος του συζύγου πριν από τη διεξαγωγή της εξέτασης Coombs;

Είναι απαραίτητο όχι μόνο να γνωρίζουμε, αλλά και να ελέγχουμε τον τύπο αίματος του βιολογικού πατέρα του παιδιού κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης.

Δεδομένα

• προτάθηκε για πρώτη φορά στο Cambridge το 1945
• κατώφλι ευαισθησίας - τουλάχιστον 300 σταθερά μόρια αντισώματος σε ένα ερυθροκύτταρο
• ο αριθμός των αντισωμάτων που προκαλούν αιμόλυση - ξεχωριστά για κάθε άτομο (από 16-30 έως 300)
• η δυναμική άλλων εργαστηριακών δεικτών αιμολυτικής αναιμίας (αιμοσφαιρίνη, χολερυθρίνη, δικτυοερυθρά αιμοσφαίρια) μπορεί να ομαλοποιηθεί και η δοκιμή Coombs θα παραμείνει στο ίδιο επίπεδο

Η δοκιμή Coombs τροποποιήθηκε τελευταία: 16 Μαρτίου 2018 από Μαρία Μποντιάν

Κανονικά, δεν υπάρχουν αντισώματα στα ερυθροκύτταρα στο αίμα.

Η άμεση δοκιμή Coombs είναι μια δοκιμή αντισφαιρίνης (συγκόλληση γέλης, η οποία επιτρέπει την ανίχνευση πλήρων δισθενών αντισωμάτων), η οποία προσδιορίζει τα αντισώματα της κατηγορίας IgG και το συστατικό C3 του συμπληρώματος στην επιφάνεια των ερυθροκυττάρων. Τυπικά, τα αντισώματα που ανιχνεύονται με απευθείας τεστ Coombs έχουν ευρεία ειδικότητα που δεν σχετίζεται με ένα καλά εδραιωμένο αντιγόνο. Μια θετική άμεση δοκιμή Coombs υποδεικνύει ξεκάθαρα την παρουσία αιμολυτικής αναιμίας σε έναν ασθενή, αν και δεν έχουν όλοι οι ασθενείς με θετική άμεση δοκιμή αντισφαιρίνης αυτή τη νόσο. Περίπου το 10% των ασθενών με αντισώματα ή συστατικά του συμπληρώματος στη μεμβράνη των ερυθροκυττάρων δεν μπορούν να ανιχνευθούν με απευθείας τεστ Coombs (αρνητικό τεστ), αλλά παρόλα αυτά πάσχουν από αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία. Για να διευκρινιστεί η ειδικότητα των αντισωμάτων σε τέτοιες περιπτώσεις, χρησιμοποιούνται δοκιμές με την έκλουσή τους. Το άμεσο τεστ Coombs, θετικό μόνο για συμπλήρωμα, συνήθως σχετίζεται με αντισώματα IgM ψυχρού τύπου. Σε αυτή την περίπτωση, τα αντισώματα IgM δεν υπάρχουν στα ερυθροκύτταρα στη βασική θερμοκρασία του σώματος. Ωστόσο, λόγω του γεγονότος ότι τα αντισώματα IgM σταθεροποιούν ενεργά το συμπλήρωμα και το συμπλήρωμα παραμένει στα ερυθροκύτταρα, σε αυτή τη μορφή αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας (νόσος ψυχρής συγκολλητίνης), η δοκιμή Coombs θα είναι θετική μόνο για συμπλήρωμα.

Το άμεσο τεστ Coombs είναι θετικό στην αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία που προκαλείται από θερμά αντισώματα, στην αυτοάνοση φαρμακευτική αναιμία (όταν λαμβάνουν μεθυλντόπα, έως και το 20% των ασθενών έχουν θετική αντίδραση), στον τύπο αιμολυτικής αναιμίας με προσρόφηση φαρμάκου, στον ανοσοσύνθετο τύπο αιμολυτικής αναιμίας (το η εξέταση είναι θετική μόνο για C3), με αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία που προκαλείται από αντισώματα κρύου - νόσος ψυχρής συγκολλητίνης (η εξέταση είναι θετική μόνο για C3). Με την παροξυσμική ψυχρή αιμοσφαιρινουρία, η άμεση εξέταση Coombs είναι αρνητική.

Έμμεση δοκιμή Coombs - μια έμμεση δοκιμή αντισφαιρίνης (ανιχνεύει ημιτελή αντισώματα) σας επιτρέπει να ανιχνεύσετε άτυπα αντισώματα στο αίμα, συμπεριλαμβανομένων αλλοαντισωμάτων, σε ξένα αντιγόνα ερυθροκυττάρων. Πήρε το όνομά του (έμμεσο) λόγω του ότι προχωρά σε 2 στάδια. Αρχικά, ο ορός αίματος του ασθενούς, που περιέχει ημιτελή αντισώματα, αλληλεπιδρά με το προστιθέμενο σωματιδιακό Ag diagnosticum χωρίς ορατές εκδηλώσεις. Στο δεύτερο στάδιο, ο ορός αντισφαιρίνης που εισάγεται αλληλεπιδρά με ατελή αντισώματα προσροφημένα στα αντιγόνα, με την εμφάνιση ενός ορατού ιζήματος. Η μετάγγιση ομόλογων (αλλογενών) ερυθρών αιμοσφαιρίων ή η εγκυμοσύνη είναι οι πιο κοινές αιτίες αυτών των αντι-ερυθροκυττάρων αντισωμάτων. Ο συνδυασμός μιας θετικής έμμεσης δοκιμής Coombs με μια αρνητική άμεση δοκιμή δεν κάνει τίποτα για τη διάγνωση της αυτοάνοσης αιμολυτικής αναιμίας. Ένα θετικό έμμεσο τεστ Coombs προκαλεί ορισμένες δυσκολίες στην επιλογή αίματος για μετάγγιση και τη διασταύρωση με το συσσωρευμένο αίμα, αλλά δεν έχει άλλη διαγνωστική αξία.