Diagnosticum vi и антигенен еритроцит. Diagnosticum еритроцитна салмонела o
Удостоверение за регистрация № РЗН 2016/3905 от 04.04.2016г.
Предназначение
Комплектът реагенти "Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic for RPHA" (SED-Vi) е предназначен за откриване на антитела срещу Vi-антигена на причинителя на коремен тиф в човешки кръвни серуми чрез тест за пасивна хемаглутинация (RPHA).
Задайте характеристика
Принцип на действие
При наличие на антитела срещу причинителя на коремен тиф се наблюдава хемаглутинация на пилешки еритроцити, сенсибилизирани с Vi-антигена, което води до образуване на "чадър" от утаени еритроцити на дъното на U-образните ямки на таблет. При липса на антитела към причинителя на коремния тиф, утаените еритроцити образуват "точка".
Задайте композиция
| Име на реагента | Описание | Количество в комплект |
|---|---|---|
| Диагностикум еритроцитна салмонела Vi-антигенна, суха 6% (SED) | Формализирани пилешки еритроцити, сенсибилизирани с S.typhi Vi антиген. Суха хигроскопична маса с кафяв цвят. След разтваряне - суспензия от червено-кафяв цвят. | 1 флакон от 0,6 мл |
| Серум за диагностика на адсорбирана салмонела, Vi рецептор, сух (разреден 1:20, (K+)) | Адсорбиран от Salmonella заешки серум, Vi рецептор, разреден 1:20. Суха хигроскопична пореста маса с бял цвят. След разтваряне е бистра жълтеникава или безцветна течност. | 1 флакон от 0,3 мл |
| Разредител за проба (RID) | Бистра синьо-виолетова течност. | 1 флакон, 10 мл |
| Фосфатен буферен разтвор (PBS) | Прозрачна безцветна течност. | 1 флакон, 10 мл |
| Еднократна полимерна плака за имунологични реакции | Еднократна полимерна плака за имунологични реакции от прозрачен безцветен полистирен. | 1 бр. |
Диагностични характеристики
Diagnosticum трябва да се аглутинира в RPHA с диагностичен серум, адсорбиран от салмонела, Vi рецептор, сух (при разреждане 1:20), до титъра, посочен на серумния етикет. Условното ниво на диагностичните характеристики на кръвния серум на здрави хора трябва да се счита за разреждане на серума не по-високо от 1:20. Времето за анализ е 3040 минути. Комплектът е предназначен за изследване на 42 кръвни серума при опция за скрининг или 10 кръвни серума при опция за титриране.
Предпазни мерки
Комплектът е само за ин витро диагностична употреба. Веществата, включени в компонентите на комплекта, са инактивирани и безопасни. При работа с комплекта трябва да се спазват SP 1.3.2322-08 и SanPiN 2.1.7.2790-10.
Допълнително оборудване и материали
Оборудване, материали, решения:
- 1-канални пипетни дозатори с променлив дозиращ обем 5-40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl и 1000 - 5000 µl;
- пипетни дозатори 8- или 12-канални с променлив дозиращ обем 5-40 µl и 40-200 µl;
- дестилирана вода (GOST 6709-72).
Анализирани проби
Изследваните проби от кръвен серум се съхраняват при температура от 2 до 8 °C за не повече от 3 дни от момента на вземане на кръв. Разрешено е да се съхранява суроватка в замразено състояние при температура не по-висока от минус 18 ° C за не повече от 1 година. Преди употреба пробите се размразяват при температура от 16 до 25 °C и се смесват чрез разклащане. Не се допуска повторно замразяване. Не трябва да се използват проби с бактериален растеж и хемолиза. Преди започване на реакцията тестовите серуми се нагряват при 56 °C в продължение на 30 минути.
Провеждане на анализ
Приготвяне на контролен диагностичен серум (К+)
Пригответе работен разтвор от серум, адсорбиран от диагностична салмонела, Vi рецептор, сух (разреден 1:20) от 0,3 ml (К+). За да направите това, към съдържанието на флакона с K+ се добавят 0,3 ml фосфатен буферен разтвор (PBS). Останалото количество серум може да се раздели на аликвоти и да се съхранява замразено при температура не по-висока от минус 18 °C за не повече от 6 месеца.
Изготвяне на диагностикум за еритроцитна салмонела (SED)
За да се подготви работно разреждане на суспензия от салмонела еритроцитна диагностика, 0,6 ml дестилирана вода се добавя към съдържанието на флакон със сух 6% SED и се оставя за хидратация в продължение на 2 часа при температура от 16 до 25 ° C. След това към разтвора се добавят 2,4 ml разтвор на фосфатен буфер (PBS). Работният разтвор се съхранява при температура от 2 до 8 °C за не повече от 1 месец. Не се допуска замразяване.
Декларация на RPHA по време на скрининг на кръвни серуми
Скрининговите серуми се разреждат в ямките на плаката, както следва:
- в първите ямки на таблетката се приготвят предварителни разреждания 1:20, като към тях първо се добавят 190 μl разтвор на RIP, след това 10 μl от изследваните серуми. Всеки серум се добавя с отделен накрайник и внимателно се пипетира (в този случай цветът на разтвора в ямките трябва да се промени от синьо-виолетов на зелен след добавяне на серума);
- скринингови разреждания 1:40 се приготвят във вторите ямки, като първо се въвеждат 25 µl PBS разтвор в тях, а след това 25 µl предварително разредени серуми и внимателно се пипетират.
При всяка настройка на RPHA е необходимо да се извърши контролно определяне на K + титъра. За да направите това, 50 μl PBS разтвор се добавят към 8 ямки на дълъг ред. След това, 50 µl работен разтвор на K+ (1:20) се добавя към първата ямка, внимателно се пипетира и прехвърля в следващите ямки, по 50 µl всяка, като се получават 2-кратни разреждания от 1:40 до 1:5120. В други 4 ямки се добавят 50 μl разтвор на PBS, за да се контролира SED за отсъствие на спонтанна хемаглутинация.
Във всички ямки на таблета със скринингови разреждания на изследваните серуми (с изключение на първата, съдържаща RIP) и контролите, добавете 25 μl SED. Разбъркайте суспензията SED в бутилка или вана преди употреба!Таблетката се разклаща старателно и се оставя при температура от 16 до 25°С за 30 до 40 минути до пълното утаяване на еритроцитите в контролата.
Декларация на RPHA по време на титруване на изследваните кръвни серуми
Титруването на изследваните серуми и К+ работния разтвор се извършва в къси редове на таблетката. Друг къс ред се използва за контрол на липсата на спонтанна хемаглутинация на EDS.
В първите ямки на къси редове за титруване на тестовия серум се добавят 180 μl RIP разтвор. Всички други ямки се пълнят с 50 ul PBS разтвор.
20 μl от тестовите серуми се добавят към ямките с RIP разтвора (получава се разреждане 1:10). Всеки серум се добавя с върха си и внимателно се пипетира (цветът на разтвора в ямките трябва да се промени от синьо-виолетов до зелен). След това 50 μl се прехвърлят от първите ямки в следващите ямки на редовете, като се получават двукратни разреждания от 1:20 до 1:1280. В края на титруването 50 μl разтвори се отстраняват от последните ямки.
При всяка настройка на RPHA е необходимо да се извърши контролно определяне на K + титъра. За да направите това, 50 μl PBS разтвор се добавят към 8 ямки на дълъг ред. След това, 50 µl работен разтвор на K+ (1:20) се добавя към първата ямка, внимателно се пипетира и прехвърля в следващите ямки, по 50 µl всяка, като се получават 2-кратни разреждания от 1:40 до 1:5120.
За да се контролира диагностикума за отсъствие на спонтанна хемаглутинация, към всички ямки на къс ред се добавят 50 μl PBS разтвор.
Във всички ямки (с изключение на първите ямки от всеки ред за изследваните серуми, съдържащи RIP) добавете 25 μl SED. Разбъркайте суспензията SED в бутилка или вана преди употреба! Таблетката се разклаща старателно и се оставя при температура от 16 до 25°С за 30-40 минути до пълното утаяване на еритроцитите в контролата.
Отчитане и интерпретация на резултатите
Отчитане на резултатите при скрининг на кръвни серуми
Отчитането на резултатите се извършва по условна скала от четири кръста. Серумният титър е неговото разреждане, което дава хемаглутинация с най-малко 3 (+++) кръстосвания.
- ++++ (4+) - аглутинираните еритроцити образуват обърнат "чадър" на дъното на отвора, краищата му падат;
- +++ (3+) - аглутинираните еритроцити образуват обърнат "чадър" на дъното на отвора, ръбовете му са равни;
- ++ (2+) - заедно с аглутинираните еритроцити на дъното на отвора има утайка под формата на малък "пръстен" от неаглутинирани еритроцити;
- + (1+) - повечето еритроцити не са аглутинирани и се установяват под формата на малък "пръстен";
- (-) - неаглутинираните еритроцити образуват "точка" на дъното на ямката.
За положителен резултат се счита хемаглутинация на еритроцити, заредени с Vi-антиген, чрез най-малко 3 кръстосвания (+++).
Контролът на качеството на диагностикума е 4 ямки от контролния ред, в които са добавени само PBS разтвор и SED. В тези ямки не трябва да има спонтанна хемаглутинация - реакцията е отрицателна (-). В противен случай изследването трябва да се повтори. Ако по време на повторното поставяне се появи хемаглутинация, тогава лекарството не се използва.
Серумите с отрицателен резултат трябва да се считат за несъдържащи антитела срещу Vi антигена в диагностичен титър 1:40 и по-нисък.
Серумите, които дават положителен резултат при разреждане 1:40, трябва да се тестват повторно във варианта с титруване на серума, за да се установи неговият титър.
Отчитане на резултатите при титриране на кръвни серуми
Серумният титър е неговото разреждане, което дава хемаглутинация с най-малко 3 (+++) кръстосвания.
Контролът на качеството на диагностикума е ямките от реда за контрол на SED. В тези ямки не трябва да има спонтанна хемаглутинация - реакцията е отрицателна (-). В противен случай изследването трябва да се повтори. Ако по време на повторното поставяне се появи хемаглутинация, тогава лекарството не се използва.
Комплектът от реагенти Diagnosticum Salmonella VI-antigenic е предназначен за откриване в човешки кръвен серум на специфични антитела към V-антигена на Salmonella typhoid в реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA).
ХАРАКТЕРИСТИКИ НА КОМПЛЕКТА
2.1. Принципът на метода.
Активният принцип на Diagnosticum Salmonella VI-antigenic е V-антигенът, фиксиран върху повърхността на еритроцитите. При взаимодействие със серуми, съдържащи антитела срещу Vee антигена, се наблюдава феноменът на аглутинация на еритроцитите.
2.2. СЪСТАВ НА КОМПЛЕКТА
| Реактиви | Количество |
| Diagnosticum еритроцитна Salmonella V-антигенна течност- представлява 1% суспензия от формалинизирани и сенсибилизирани с Vi-антиген Salmonella typhoid овчи еритроцити във фосфатен буферен разтвор (рН 7,2). + 0,2; концентрация 0,06 mol/l). Хомогенна суспензия от кафяв цвят без люспи; при утаяване се образуват 2 слоя: гъста кафява утайка от еритроцити и прозрачен жълтеникав супернатант | 1 бутилка - 3 мл |
| Серумна диагностика на адсорбиран рецептор на салмонела Vee dry —хомогенна маса от бяло с кафеникав оттенък до бежово | 1 бутилка - от 0,1 мл |
| 1% суспензия от формализирани, несенсибилизирани овчи еритроцити- хомогенна суспензия от кафяв цвят без люспи; при утаяване се образуват 2 слоя: гъста кафява утайка от еритроцити и прозрачен жълтеникав супернатант | 1 флакон - |
| Разтвор за разреждане на серум и настройка на RPHA - 0,9% разтвор на натриев хлорид е бистра, безцветна течност, pH 6,5 до 7,5 | 2 бутилки - по 8 мл |
| Плака с кръгло дъно за имунологични реакции за еднократна употреба —се състои от 8 реда, всеки от които включва 12 дупки с прозрачно, безцветно, кръгло дъно | 1 бр |
АНАЛИТИЧНИ И ДИАГНОСТИЧНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
3.1. Diagnosticum трябва да се аглутинира в RPHA със серум от сух диагностичен рецептор B, адсорбиран от Salmonella, в разреждане най-малко 1:160.
Условното ниво на диагностичните характеристики на кръвния серум на здрави хора трябва да се счита за разреждане на серума не по-високо от 1:20.
3.2. Времето за анализ е 2 часа.
3.3. Комплектът е предназначен за 8 дефиниции.
ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ
Когато работите с комплекта, трябва да спазвате „Правилата за дизайн, безопасност, промишлена хигиена, противоепидемичен режим и лична хигиена при работа в лаборатории (отдели, отдели) на санитарни и епидемиологични институции от системата на Министерството на здравеопазването на СССР (М., 1981).
Анализираните серуми, както и реагентите в контакт с тях, трябва да се считат за потенциално инфекциозни, способни да задържат или предават ХИВ, вирус на хепатит или всеки друг причинител на вирусна инфекция за дълго време и с тях трябва да се работи внимателно:
- работа в гумени ръкавици;
- при пипетиране е необходимо да се използват автоматични пипети;
- в края на работата анализираните серуми и реагентите в контакт с тях, инструментите, трябва да бъдат третирани с дезинфекционен разтвор
- Избършете оборудването преди и след работа със 70% етилов алкохол.
Анализираните серуми трябва да бъдат инактивирани при 56 0 C за 30 минути.
Диагностичният адсорбиран от салмонела рецептор Vee сух инактивиран серум, включен в комплекта.
Резултатите от обективния анализ са гарантирани при следните условия:
- съхранението на всички реактиви от комплекта трябва да се извършва при температура от 2 до 8 0 С;
- не използвайте реактиви с изтекъл срок на годност;
- не използвайте реактивите от комплекта, ако не са надписани по съответния начин върху опаковката им;
- за RPHA използвайте реактиви, включени само в този комплект.
2. диагностикум
4.от унищожени микроби (изолиране на специфични Ag)
Еритроцитна HBs диагностика
2. диагностикум
4. суспензия от er.sheep, третирана с танин и утаени a\g HBs
5. За откриване на специфични антитела в кръвния серум
Диагностикум gp120
2. диагностикум
4.отделете a\g възбуд. ХИВ
5. За откриване на ХИВ
Тетанус еритроцитна диагностика
2. диагностикум
4. суспензия от овце, третирани с танин с възбуждане на тетанус
5. за откриване на специфични антитела в кръвния серум (до възбуждане на тетанус
Антиген кардиолипин за микропреципитация
2. диагностикум
4.извличане на липидни фракции от сърцето на здрав бик
5. За откриване на специфични антитела в кръвния серум
Ултразвуков трепонен антиген
2. диагностикум
4.out of dead ex. сифилис
5. За откриване на специфични антитела в кръвния серум
Диагностикум на корпускулярна туларемия
2. диагностикум
4.на отделни патогенни частици
5. За откриване на специфични антитела в кръвния серум
Диагностикум на дизентерия
2. диагностикум
4. окачване от убит м \ о
5. За откриване на специфични антитела в серума на пациента
Еритроцитна диагностика от Shigella Sonne
2. диагностикум
4. суспензия от е. овце, третирани с тонин
5. За откриване на специфични антитела в кръвния серум
Диагностикум от Salmonella typhimurium
2. диагностикум
4.out of dead ex. салмонела
5. За откриване на специфични антитела в кръвния серум
Серуми
Антигангренозен конски серум 5000 IU
2.серум
4. от кръвен серум на хиперимм.коне с токсоид на възбуждаща газова гангрена
6.парентерално, след тест с глобулин 1:100
нормален човешки имуноглобулин
2.серум
4. от донорски кръвен серум
5.form-e пропуск. специфичен закупени изкуства. имм
6. парентерално
утаяване на антраксен серум
2.серум
4. от кръвен серум на хиперимунизирани животни a\g excit.sib. язви
6. реакция на утаяване (RP)
Ботулинов серум тип - А 400 IU
2.серум
5. за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
6. реакция на неутрализация (RN)
Антраксен глобулин
2.серум
4. от кръвен серум на хиперимунизирани животни a\g възбудими язви
5.form-e пропуск. специфичен закупени изкуства. имм
6. парентерално
Хемолитичен серум
2.серум
4. от серум на хиперимунизирани животни с еритроцити на животни от друг вид
5. за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
Холерен аглутиниращ серум Ogawa
2.серум
4. от кръвен серум на хиперимунизирани животни
5. за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
Светещ серум от туларемия
2.серум
4. от кръвен серум на хиперимунизирани животни a\g възбудим tular.
5. за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
Имуноглобулин срещу човешки кърлежов енцефалит
2.серум
4. от донорски кръвен серум
5.form-e пропуск. специфичен закупени изкуства. имм
6. парентерално
ESNO диагностичен серум
2.серум
4. от кръвен серум на хиперимунизирани животни с ESNO вируси
5. за откриване на специфичен антиген в изследвания материал
Човешки имуноглобулин срещу хепатит В
2.серум
4. от кръвен серум на донор, ваксиниран срещу хепатит В
5.form-e пропуск. специфичен закупени изкуства. имм
6. парентерално
Антиглобулинов серум, белязан с перкоксидаза
2.серум
4. от кръвен серум на хиперимунизирани животни
5. за откриване на специфичен антиген в тестовия материал (HIV)
Имуноглобулин срещу бяс
2.серум
4. от донорски кръвен серум
5.form-e пропуск. специфичен закупени изкуства. имм
Удостоверение за регистрация № РЗН 2016/3905 от 04.04.2016г.
Предназначение
Комплектът реагенти "Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigenic for RPHA" (SED-Vi) е предназначен за откриване на антитела срещу Vi-антигена на причинителя на коремен тиф в човешки кръвни серуми чрез тест за пасивна хемаглутинация (RPHA).
Задайте характеристика
Принцип на действие
При наличие на антитела срещу причинителя на коремен тиф се наблюдава хемаглутинация на пилешки еритроцити, сенсибилизирани с Vi-антигена, което води до образуване на "чадър" от утаени еритроцити на дъното на U-образните ямки на таблет. При липса на антитела към причинителя на коремния тиф, утаените еритроцити образуват "точка".
Задайте композиция
| Име на реагента | Описание | Количество в комплект |
|---|---|---|
| Диагностикум еритроцитна салмонела Vi-антигенна, суха 6% (SED) | Формализирани пилешки еритроцити, сенсибилизирани с S.typhi Vi антиген. Суха хигроскопична маса с кафяв цвят. След разтваряне - суспензия от червено-кафяв цвят. | 1 флакон от 0,6 мл |
| Серум за диагностика на адсорбирана салмонела, Vi рецептор, сух (разреден 1:20, (K+)) | Адсорбиран от Salmonella заешки серум, Vi рецептор, разреден 1:20. Суха хигроскопична пореста маса с бял цвят. След разтваряне е бистра жълтеникава или безцветна течност. | 1 флакон от 0,3 мл |
| Разредител за проба (RID) | Бистра синьо-виолетова течност. | 1 флакон, 10 мл |
| Фосфатен буферен разтвор (PBS) | Прозрачна безцветна течност. | 1 флакон, 10 мл |
| Еднократна полимерна плака за имунологични реакции | Еднократна полимерна плака за имунологични реакции от прозрачен безцветен полистирен. | 1 бр. |
Диагностични характеристики
Diagnosticum трябва да се аглутинира в RPHA с диагностичен серум, адсорбиран от салмонела, Vi рецептор, сух (при разреждане 1:20), до титъра, посочен на серумния етикет. Условното ниво на диагностичните характеристики на кръвния серум на здрави хора трябва да се счита за разреждане на серума не по-високо от 1:20. Времето за анализ е 3040 минути. Комплектът е предназначен за изследване на 42 кръвни серума при опция за скрининг или 10 кръвни серума при опция за титриране.
Предпазни мерки
Комплектът е само за ин витро диагностична употреба. Веществата, включени в компонентите на комплекта, са инактивирани и безопасни. При работа с комплекта трябва да се спазват SP 1.3.2322-08 и SanPiN 2.1.7.2790-10.
Допълнително оборудване и материали
Оборудване, материали, решения:
- 1-канални пипетни дозатори с променлив дозиращ обем 5-40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl и 1000 - 5000 µl;
- пипетни дозатори 8- или 12-канални с променлив дозиращ обем 5-40 µl и 40-200 µl;
- дестилирана вода (GOST 6709-72).
Анализирани проби
Изследваните проби от кръвен серум се съхраняват при температура от 2 до 8 °C за не повече от 3 дни от момента на вземане на кръв. Разрешено е да се съхранява суроватка в замразено състояние при температура не по-висока от минус 18 ° C за не повече от 1 година. Преди употреба пробите се размразяват при температура от 16 до 25 °C и се смесват чрез разклащане. Не се допуска повторно замразяване. Не трябва да се използват проби с бактериален растеж и хемолиза. Преди започване на реакцията тестовите серуми се нагряват при 56 °C в продължение на 30 минути.
Провеждане на анализ
Приготвяне на контролен диагностичен серум (К+)
Пригответе работен разтвор от серум, адсорбиран от диагностична салмонела, Vi рецептор, сух (разреден 1:20) от 0,3 ml (К+). За да направите това, към съдържанието на флакона с K+ се добавят 0,3 ml фосфатен буферен разтвор (PBS). Останалото количество серум може да се раздели на аликвоти и да се съхранява замразено при температура не по-висока от минус 18 °C за не повече от 6 месеца.
Изготвяне на диагностикум за еритроцитна салмонела (SED)
За да се подготви работно разреждане на суспензия от салмонела еритроцитна диагностика, 0,6 ml дестилирана вода се добавя към съдържанието на флакон със сух 6% SED и се оставя за хидратация в продължение на 2 часа при температура от 16 до 25 ° C. След това към разтвора се добавят 2,4 ml разтвор на фосфатен буфер (PBS). Работният разтвор се съхранява при температура от 2 до 8 °C за не повече от 1 месец. Не се допуска замразяване.
Декларация на RPHA по време на скрининг на кръвни серуми
Скрининговите серуми се разреждат в ямките на плаката, както следва:
- в първите ямки на таблетката се приготвят предварителни разреждания 1:20, като към тях първо се добавят 190 μl разтвор на RIP, след това 10 μl от изследваните серуми. Всеки серум се добавя с отделен накрайник и внимателно се пипетира (в този случай цветът на разтвора в ямките трябва да се промени от синьо-виолетов на зелен след добавяне на серума);
- скринингови разреждания 1:40 се приготвят във вторите ямки, като първо се въвеждат 25 µl PBS разтвор в тях, а след това 25 µl предварително разредени серуми и внимателно се пипетират.
При всяка настройка на RPHA е необходимо да се извърши контролно определяне на K + титъра. За да направите това, 50 μl PBS разтвор се добавят към 8 ямки на дълъг ред. След това, 50 µl работен разтвор на K+ (1:20) се добавя към първата ямка, внимателно се пипетира и прехвърля в следващите ямки, по 50 µl всяка, като се получават 2-кратни разреждания от 1:40 до 1:5120. В други 4 ямки се добавят 50 μl разтвор на PBS, за да се контролира SED за отсъствие на спонтанна хемаглутинация.
Във всички ямки на таблета със скринингови разреждания на изследваните серуми (с изключение на първата, съдържаща RIP) и контролите, добавете 25 μl SED. Разбъркайте суспензията SED в бутилка или вана преди употреба!Таблетката се разклаща старателно и се оставя при температура от 16 до 25°С за 30 до 40 минути до пълното утаяване на еритроцитите в контролата.
Декларация на RPHA по време на титруване на изследваните кръвни серуми
Титруването на изследваните серуми и К+ работния разтвор се извършва в къси редове на таблетката. Друг къс ред се използва за контрол на липсата на спонтанна хемаглутинация на EDS.
В първите ямки на къси редове за титруване на тестовия серум се добавят 180 μl RIP разтвор. Всички други ямки се пълнят с 50 ul PBS разтвор.
20 μl от тестовите серуми се добавят към ямките с RIP разтвора (получава се разреждане 1:10). Всеки серум се добавя с върха си и внимателно се пипетира (цветът на разтвора в ямките трябва да се промени от синьо-виолетов до зелен). След това 50 μl се прехвърлят от първите ямки в следващите ямки на редовете, като се получават двукратни разреждания от 1:20 до 1:1280. В края на титруването 50 μl разтвори се отстраняват от последните ямки.
При всяка настройка на RPHA е необходимо да се извърши контролно определяне на K + титъра. За да направите това, 50 μl PBS разтвор се добавят към 8 ямки на дълъг ред. След това, 50 µl работен разтвор на K+ (1:20) се добавя към първата ямка, внимателно се пипетира и прехвърля в следващите ямки, по 50 µl всяка, като се получават 2-кратни разреждания от 1:40 до 1:5120.
За да се контролира диагностикума за отсъствие на спонтанна хемаглутинация, към всички ямки на къс ред се добавят 50 μl PBS разтвор.
Във всички ямки (с изключение на първите ямки от всеки ред за изследваните серуми, съдържащи RIP) добавете 25 μl SED. Разбъркайте суспензията SED в бутилка или вана преди употреба! Таблетката се разклаща старателно и се оставя при температура от 16 до 25°С за 30-40 минути до пълното утаяване на еритроцитите в контролата.
Отчитане и интерпретация на резултатите
Отчитане на резултатите при скрининг на кръвни серуми
Отчитането на резултатите се извършва по условна скала от четири кръста. Серумният титър е неговото разреждане, което дава хемаглутинация с най-малко 3 (+++) кръстосвания.
- ++++ (4+) - аглутинираните еритроцити образуват обърнат "чадър" на дъното на отвора, краищата му падат;
- +++ (3+) - аглутинираните еритроцити образуват обърнат "чадър" на дъното на отвора, ръбовете му са равни;
- ++ (2+) - заедно с аглутинираните еритроцити на дъното на отвора има утайка под формата на малък "пръстен" от неаглутинирани еритроцити;
- + (1+) - повечето еритроцити не са аглутинирани и се установяват под формата на малък "пръстен";
- (-) - неаглутинираните еритроцити образуват "точка" на дъното на ямката.
За положителен резултат се счита хемаглутинация на еритроцити, заредени с Vi-антиген, чрез най-малко 3 кръстосвания (+++).
Контролът на качеството на диагностикума е 4 ямки от контролния ред, в които са добавени само PBS разтвор и SED. В тези ямки не трябва да има спонтанна хемаглутинация - реакцията е отрицателна (-). В противен случай изследването трябва да се повтори. Ако по време на повторното поставяне се появи хемаглутинация, тогава лекарството не се използва.
Серумите с отрицателен резултат трябва да се считат за несъдържащи антитела срещу Vi антигена в диагностичен титър 1:40 и по-нисък.
Серумите, които дават положителен резултат при разреждане 1:40, трябва да се тестват повторно във варианта с титруване на серума, за да се установи неговият титър.
Отчитане на резултатите при титриране на кръвни серуми
Серумният титър е неговото разреждане, което дава хемаглутинация с най-малко 3 (+++) кръстосвания.
Контролът на качеството на диагностикума е ямките от реда за контрол на SED. В тези ямки не трябва да има спонтанна хемаглутинация - реакцията е отрицателна (-). В противен случай изследването трябва да се повтори. Ако по време на повторното поставяне се появи хемаглутинация, тогава лекарството не се използва.
Комплектът от реагенти Diagnosticum Salmonella VI-antigenic е предназначен за откриване в човешки кръвен серум на специфични антитела към V-антигена на Salmonella typhoid в реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA).
ХАРАКТЕРИСТИКИ НА КОМПЛЕКТА
2.1. Принципът на метода.
Активният принцип на Diagnosticum Salmonella VI-antigenic е V-антигенът, фиксиран върху повърхността на еритроцитите. При взаимодействие със серуми, съдържащи антитела срещу Vee антигена, се наблюдава феноменът на аглутинация на еритроцитите.
2.2. СЪСТАВ НА КОМПЛЕКТА
| Реактиви | Количество |
| Diagnosticum еритроцитна Salmonella V-антигенна течност- представлява 1% суспензия от формалинизирани и сенсибилизирани с Vi-антиген Salmonella typhoid овчи еритроцити във фосфатен буферен разтвор (рН 7,2). + 0,2; концентрация 0,06 mol/l). Хомогенна суспензия от кафяв цвят без люспи; при утаяване се образуват 2 слоя: гъста кафява утайка от еритроцити и прозрачен жълтеникав супернатант | 1 бутилка - 6 мл |
| Серумна диагностика на адсорбиран рецептор на салмонела Vee dry —хомогенна маса от бяло с кафеникав оттенък до бежово | 1 бутилка - от 0,1 мл |
| 1% суспензия от формализирани, несенсибилизирани овчи еритроцити- хомогенна суспензия от кафяв цвят без люспи; при утаяване се образуват 2 слоя: гъста кафява утайка от еритроцити и прозрачен жълтеникав супернатант | 1 флакон - |
| Разтвор за разреждане на серум и настройка на RPHA - 0,9% разтвор на натриев хлорид е бистра, безцветна течност, pH 6,5 до 7,5 | 2 бутилки - по 8 мл |
| Плака с кръгло дъно за имунологични реакции за еднократна употреба —се състои от 8 реда, всеки от които включва 12 дупки с прозрачно, безцветно, кръгло дъно | 1 бр |
АНАЛИТИЧНИ И ДИАГНОСТИЧНИ ХАРАКТЕРИСТИКИ.
3.1. Diagnosticum трябва да се аглутинира в RPHA със серум от сух диагностичен рецептор B, адсорбиран от Salmonella, в разреждане най-малко 1:160.
Условното ниво на диагностичните характеристики на кръвния серум на здрави хора трябва да се счита за разреждане на серума не по-високо от 1:20.
3.2. Времето за анализ е 2 часа.
3.3. Комплектът е предназначен за 8 дефиниции.
ПРЕДПАЗНИ МЕРКИ
Когато работите с комплекта, трябва да спазвате „Правилата за дизайн, безопасност, промишлена хигиена, противоепидемичен режим и лична хигиена при работа в лаборатории (отдели, отдели) на санитарни и епидемиологични институции от системата на Министерството на здравеопазването на СССР (М., 1981).
Анализираните серуми, както и реагентите в контакт с тях, трябва да се считат за потенциално инфекциозни, способни да задържат или предават ХИВ, вирус на хепатит или всеки друг причинител на вирусна инфекция за дълго време и с тях трябва да се работи внимателно:
- работа в гумени ръкавици;
- при пипетиране е необходимо да се използват автоматични пипети;
- в края на работата анализираните серуми и реагентите в контакт с тях, инструментите, трябва да бъдат третирани с дезинфекционен разтвор
- Избършете оборудването преди и след работа със 70% етилов алкохол.
Анализираните серуми трябва да бъдат инактивирани при 56 0 C за 30 минути.
Диагностичният адсорбиран от салмонела рецептор Vee сух инактивиран серум, включен в комплекта.
Резултатите от обективния анализ са гарантирани при следните условия:
- съхранението на всички реактиви от комплекта трябва да се извършва при температура от 2 до 8 0 С;
- не използвайте реактиви с изтекъл срок на годност;
- не използвайте реактивите от комплекта, ако не са надписани по съответния начин върху опаковката им;
- за RPHA използвайте реактиви, включени само в този комплект.
Ви-Диагностикум
Diagnosticum Vee
Vi-антигенен
