Добави към любими

Таксономия, пневмококи, грипни лабораторни методи

МИНИСТЕРСТВО НА ЗДРАВЕОПАЗВАНЕТО НА РУСКАТА ФЕДЕРАЦИЯ КАЗАНСКИ ДЪРЖАВЕН МЕДИЦИНСКИ УНИВЕРСИТЕТ КАТЕДРА ПО МИКРОБИОЛОГИЯ

ПНЕВМОКОКОК

Казан 1999г

UDC 576.851.21(07)

Публикувано с решение на Централния координационен и методичен съвет на Казанския държавен медицински университет.

съставен от:

(Ръководител на катедрата по микробиология, доктор на медицинските науки, професор О.К. Поздеев, асистент на катедрата по микробиология, д-р Е.Р. Федорова.

Рецензенти:

Ръководител на катедрата по епидемиология, Казански държавен медицински университет, доктор на медицинските науки, доцент М.Ш. Шафеев, ръководител на катедрата по епидемиология на Казанската държавна медицинска академия, доктор на медицинските науки, професор V.E. Григориев.

Пневмококи /O.K. Поздеев, Е.Р. Федоров-Казан: KSMU, 1999. - 14 с.

С копирането, разпространението, публикуването на текста или част от него на вашите ресурси, вие поемате отговорност в съответствие с приложимото законодателство.

Изключително за използване на произведението за лични цели (член 18, член 26 от Закона на Руската федерация „За авторското право и сродните му права“). Търговското възпроизвеждане е забранено.

Казански държавен медицински университет, 1999 г

Pneumococcus (Streptococcus pneumoniae) е идентифициран за първи път от Pasteur (1881), докато работи върху ваксина против бяс и първоначално се счита за причинител на бяс. Етиологичната роля на микроорганизма в развитието на пневмония при хората е доказана от Frenkel и Weichselbaum (1884). Бактериите колонизират човешки и животински организми и са включени в групата на така наречените "орални" стрептококи. Те са основните причинители на пневмония, могат също така да причинят плеврит, менингит, пълзящи язви на роговицата, гнойно възпаление на средното ухо, септични състояния и други заболявания. В IX издание на бактериалния справочник на Bergey (1994) пневмококите са включени в група 17 "Грам-положителни коки".

Епидемиология на лезиите. Pneumococcus е един от основните причинители на бактериална пневмония, регистрирана извън болниците (2-4 случая на 1000 души); Годишно в света се наблюдават най-малко 500 000 случая на пневмококова пневмония (реалната стойност е много по-висока). Децата и възрастните хора са най-податливи на инфекция. Резервоарът на инфекцията са пациенти и носители (20-50% от децата в предучилищна възраст и 20-25% от възрастните); основният път на предаване е контактът; по време на огнища също във въздуха. Пиковата честота настъпва през студения сезон. В по-голямата част от случаите клиничните форми на инфекция се развиват, когато резистентността на организма е нарушена (включително поради студен стрес), както и на фона на други патологии (сърповидно-клетъчна анемия, болест на Ходжкин, HIV инфекция, миелом, захарен диабет , състояния след спленектомия и др.) или с алкохолизъм. Варианти 1, 2 и 3 играят най-голямо епидемиологично значение в патологията при възрастни; при деца - 1, 2, 3 и 14 варианта. Вирулентност на серовари в низходящ ред - 3, 1, 2, 5, 7 и 8 опции. Белите мишки са чувствителни към пневмококи (при заразяване умират от септицемия за един ден), телета, агнета, прасенца, кучета и маймуни.

Морфология. Пневмококите са неподвижни, не образуват спори, имат леко удължена форма, наподобяваща контурите на пламък на свещ. В натривки от клиничен материал те са подредени по двойки, всяка от които е заобиколена от дебела капсула. В петна от хранителна среда те могат да бъдат разположени в къси вериги и да бъдат по-заоблени. На проста среда те образуват тънка капсула; неговото развитие се стимулира чрез въвеждане на кръв, серум или асцитна течност. Образуването на капсули е най-силно изразено при бактерии тип III. Когато са подредени във вериги, капсулата може да е обща.

културни ценности. Пневмококови аероби или факултативни анаероби; по време на култивирането се предпочитат капнофилни условия (5-10% CO2). Хемоорганографични и растат добре върху кръвна или серумна среда, допълнена с добавяне на 0,1% глюкоза. Виреят в температурен диапазон 28-42 °C, оптималната е 37 °C. Оптимално pH -7,6-7,8. Върху плътна среда те образуват деликатни полупрозрачни, ясно очертани колонии с диаметър около 1 mm. Понякога те могат да бъдат плоски с централна вдлъбнатина; подобно на други стрептококи, колониите никога не се сливат

помежду си. Върху кръвен агар те образуват малки полупрозрачни колонии със зеленикаво-сив цвят. Центърът на колониите е по-тъмен, периферията е по-светла. Под колонията и по нейната периферия се вижда зона на а-хемолиза под формата на зеленикаво обезцветена зона (поради прехода на хемоглобина към метхемоглобина). Колониите от тип III пневмокок често имат мукозна консистенция, размерът им е до 2 mm. Те са неясни, мога да се слея един с друг. Те образуват S- и R-форми на колонии. При прехода от S- към R-форма те губят способността си да синтезират капсула. В течна среда със серум и 0,2% глюкоза се получава равномерно помътняване и малка флокулентна утайка. При продължително отглеждане утайката се увеличава.

Устойчивост. Пневмококите принадлежат към групата на нестабилните микроорганизми. При сухи храчки те се задържат до два месеца. Може да се съхранява дълго време при ниски температури; при температура от 60 ° C, те умират в рамките на 3-5 минути. 3% разтвор на карболова киселина ги убива за 1-2 минути. Optochin (в концентрация 1: 100 000) и жлъчката са вредни за пневмококите, които се използват за идентифициране на бактерии.

Пневмококите се различават от другите микроорганизми по редица свойства (Таблица 1).

Таблица 1 Биохимични свойства на пневмококите

Тестова подложка	Резултат	Тестова подложка	Резултат
Растеж при 100°C

		Рафиноза
Среден с 6,5% Nad

а-хемолиза
В-хемолиза		Трехалоза
		Фосфатаза
хипурат		β-галактозидаза


Глицерол

Обозначения: "+" - 90% или повече щамове са положителни; (+) - 80-89% от щамовете са положителни; d - 21-79% от щамовете са положителни; (-) - 11-20% от щамовете са положителни; „- - 90% или повече от щамовете са отрицателни.

Антигенна структура. В пневмококите са открити няколко вида антигени: полизахарид, 0-соматичен антиген, разположен в клетъчната стена; полизахаридни капсулни К-антигени и М-протеин. Полизахаридният соматичен антиген е подобен на С-субстанцията на други стрептококи. Връзката определя сходството на химичната структура на рибутеихоеновите киселини, свързани с холин фосфата. Капсулните антигени също имат полизахаридна природа, състояща се от монозахариди, повтарящи се в различни комбинации: D-глюкоза, D-галактоза и L-рамноза. Според структурата на капсулните антигени пневмококите се разделят на 84 серовара. Трябва да се помни, че капсулните антигени реагират кръстосано с антисеруми към стрептококови антигени от група А и В, както и със серуми към антигени на Klebsiella и Escherichia. По време на прехода от S към R-форма, капсулните антигени се губят. За пневмококово серотипизиране се произвеждат групови серуми, обозначени с латински букви (A, B, C, D и т.н.) и серовариант, обозначен с римски цифри. Аглутиниращият серум III не е включен в серумните смеси. Пуска се отделно и не може да се отглежда. При хората най-често се изолират пневмококи от I, II и III серотипове. Те са най-вирулентни за хората, така че реакцията на аглутинация първоначално се задава с помощта на антисеруми за тези варианти. Ако резултатът е отрицателен, реакцията на аглутинация се поставя със смес от серуми А, В, С и др. (до получаване на положителен резултат), а след това с отделни антисеруми. За по-бързо идентифициране на серовари се използва реакцията на Neufeld (имунно подуване на капсулата). Методът се основава на способността на пневмококовите капсули да увеличават обема си в присъствието на хомоложен антисерум, което се регистрира чрез светлинно-оптична микроскопия. Капсулните полизахариди имат сенсибилизиращи свойства, проявяващи се в развитието на реакция на свръхчувствителност от забавен тип, открита чрез кожни тестове.

фактори на патогенност. Основният фактор е капсулата, която предпазва бактериите от микробицидния потенциал на фагоцитите и ги отвежда от действието на опсонините. Некапсулираните щамове са практически авирулентни и са редки. По-голямата част от набора от антипневмококови АТ са АТ до Ag капсули. Важна функция на капсулата и М-протеина е и осигуряването на адхезия върху лигавицата. Веществото С, което взаимодейства специфично със С-реактивния протеин, е от съществено значение. Последицата от такъв отговор е активирането на комплементарната каскада и освобождаването на медиатори на острата фаза на възпалението; натрупването им в белодробната тъкан стимулира миграцията на полиморфонуклеарни фагоцити. Образуването на мощни възпалителни инфилтрати е придружено от нарушение на хомеостазата на белодробната тъкан и нейната хепатизация. Пневмококите произвеждат ендотоксин, a- и b-хемолизини (пневмолизини), левкоцидин. а-пневмолизин е термолабилен протеин, способен да неутрализира 0-стрептолизин,

еритрогенно вещество, невраминидаза. Пневмококите също синтезират редица ензими, които допринасят за патогенезата на лезиите - мурамидаза, хиалуронидаза (насърчава разпространението на микроорганизми в тъканите), пептидаза (разцепва IgA).

Патогенезата на лезиите. Биотопът на пневмококите са горните дихателни пътища. Патогенезата на повечето пневмонии включва аспирация на слюнка, съдържаща S. pneumoniae и навлизане на бактерии в долните дихателни пътища. Нарушаването на защитните дрениращи механизми - кашличен шок и мукоцилиарния клирънс са от съществено значение. При възрастни по-често се наблюдават лобарни лезии на белите дробове, при деца и възрастни хора доминират перибронхиални или фокални лезии. Образуването на мощни възпалителни инфилтрати е придружено от нарушение на хомеостазата на белодробната тъкан и нейната хепатизация. Инфекциите с най-вирулентния серовар 3 могат да бъдат придружени от образуване на кухини в белодробния паренхим. От първичното огнище патогенът може да проникне в плевралната кухина и перикарда или да се разпространи хематогенно и да причини менингит, ендокардит и ставни лезии.

Клинични проявления. Класическата пневмококова пневмония започва внезапно; забележете повишаване на телесната температура, продуктивна кашлица и болка в гърдите. При изтощени индивиди и възрастни хора заболяването се развива бавно, с лека треска, нарушено съзнание и признаци на белодробна сърдечна недостатъчност. Стрептококов менингит се регистрира във всички възрастови групи; те се характеризират с бурно начало с повишаване на телесната температура, скованост на мускулите на врата, главоболие, гадене и повръщане. Менингеалните съдови лезии често са придружени от загуба на съзнание; сред децата и в напреднала възраст смъртността може да достигне 80%. Хематогенните пневмококови лезии, както и синузит, мастоидит, отит на средното ухо, ендокардит и перитонит, са доста чести при имунокомпрометирани лица (напр. HIV-инфектирани) или пациенти със спленектомия. След преболедуване се развива нестабилен имунитет, който е типоспецифичен и се дължи на появата на антитела срещу типичния капсулен полизахарид.

Лечение. В основата на лечението на пневмококова инфекция са антибиотици - пеницилин, тетрациклин, хлорамфеникол, ванкомицин, рифампицин, цефтриаксон.

Предотвратяване. Неспецифичната профилактика на пневмококови инфекции е насочена към идентифициране на пациенти и носители с последващо лечение. За специфична профилактика на инфекцията деца над две години, възрастни в риск, както и здрави лица по време на огнището на заболяването се ваксинират с поливалентната полизахаридна ваксина Пневмовекс 23. Лекарството съдържа 23 пневмококови капсулни полизахаридни антигени (1, 2, 3, 4, 5, 6B 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 19A, 20, 22F, 23F, 33F). Антигени

пневмококи са получени от 90% от щамовете, изолирани от кръвта на пациенти с инвазивна пневмококова инфекция в САЩ и съответстващи на щамовете, срещани в Русия. Имунизацията се извършва двукратно с интервал от 5-8 години.

След ваксинацията се създава изкуствен, активен типоспецифичен имунитет.

Лабораторна диагностика. "Златен стандарт" е изолирането на патогена. Трябва да се помни, че материалът трябва да се изследва бързо, т.к. бактериите са склонни към бърза автолиза поради активността на вътреклетъчните ензими. Материалът за изследването е храчка, плеврален излив и други ексудати, цереброспинална течност, кръв, слуз от носа и гърлото, секрет от очни язви, секрет от ухото, урина, части от органи (в случай на смърт на пациента) . Сигнален отговор на пневмококова инфекция може да бъде издаден, ако се открият неутрофили и грам-положителни ланцетни диплококи в натривки от храчки (поне 10 на зрително поле). В противен случай прибягвайте до изолиране на патогена.

Първият етап от изследването.Патологичният материал се подлага на предварителна бактериоскопия (с изключение на кръвта). Храчките се поставят в стерилно петриево блюдо, измиват се, гнойно-лигавичната бучка се улавя с примка, разтрива се върху предметно стъкло, изсушава се и се оцветява по Грам. В намазката се откриват грам-положителни ланцетни или овални коки, заобиколени от капсула (образуването на капсула се наблюдава само при пневмококи, изолирани от болни и заразени животни). Идентифицирането на пневмококови капсули може да се извърши по метода на Burri-Gins. Инокулацията на патологичен материал се извършва върху 5-10% кръвен или серумен агар и обогатителна среда (8-10% серумен бульон). Ако се подозира пневмококов сепсис, 5-10 ml от кръвта на пациента се инокулират в 45-90 ml серумен бульон. Цереброспиналната течност, ако е бистра, се центрофугира и няколко капки от утайката се инокулират върху хранителни среди. Като среда за обогатяване се използва полутечен серумен агар. Културите се инкубират при 37°С в продължение на 24 часа. Най-добрият метод за изолиране на чиста култура от пневмококи е заразяването на бели мишки с патологичен материал. Храчките, измити в петриево блюдо със стерилен физиологичен разтвор, се стриват в стерилно хаванче със стерилен пестик или натрошено стъкло с добавяне на физиологичен разтвор в съотношение 1: 2-1: 5. Суспензията се утаява, супернатантата в количество от 0,5-1 ml се прилага на бели мишки интраперитонеално. При наличие на пневмококи в материала, мишките умират в рамките на 72 часа. В петна от органи и кръв се откриват типични пневмококи. Органите и кръвта също се култивират върху серумен бульон и върху петриеви панички с кръв или серумен агар.

Вторият етап на изследването.Проучете естеството на растежа върху хранителни среди. Върху кръвен агар пневмококовите колонии са малки, кръгли, гладки

ръбове, нежни, заобиколени от зона на озеленяване на околната среда (което много напомня на растежа на зелени стрептококи). Върху серумния агар колониите са нежни, полупрозрачни и прозрачни. С бактериоскопия на петна, оцветени по Грам. открийте Грам-положителни диплококи без капсули. След бактериоскопия колониите, за които има съмнение за пневмококи, се субкултивират върху наклонен серум или кръвен агар или серумен бульон. Микроскопията на петна от обогатяващата среда, заедно с различна микрофлора, може да разкрие грам-положителни коки, подредени по двойки или къси вериги. Материалът от обогатяващата среда се прехвърля в твърда хранителна среда. Културите се инкубират при 37°С за 24 часа.

Третият етап от изследването.Върху наклонен кръвен агар пневмококите образуват деликатно, тънко, полупрозрачно покритие. На бульон от суроватка, пневмококите причиняват мътност и лека утайка. В петна от твърда културална среда пневмококите могат да имат различен вид. Наред с диплококите с удължена форма със заострени външни краища, наподобяващи пламък на свещ, има клетки с правилна овална и кръгла форма. В бульонната култура пневмококите често са подредени във вериги. Въз основа на морфологичните и културните свойства на пневмококите е трудно да се разграничат от виридесцентните стрептококи, поради което е предложен набор от специални тестове за тяхното разграничаване:

Разтворимост в жлъчка (дезоксихолатен тест);

Способността за разграждане на инулин;

Чувствителност към оптохин;

Реакция на аглутинация със специфични антипневмококови серуми;

Способност за разграждане на глюкоза, малтоза, захароза, лактоза, манитол, сорбитол и салицин.

Най-достъпните методи за разграничаване на пневмококите от други стрептококи са тест с оптохин (инхибира растежа им); от зелените стрептококи те се отличават със способността да ферментират инулин, както и чувствителността към жлъчката.

Дезоксихолатен тест. След предварителна бактериоскопия 10 капки изолирана чиста култура (за предпочитане бульон) се добавят към епруветка с 5 капки стерилна говежда жлъчка. Контролата е култура, въведена в епруветка с 5 капки физиологичен разтвор. След 30-60 минути инкубация при 37 °C се наблюдава пълен лизис на културата под формата на избистряне в епруветката с жлъчка, сместа остава мътна в контролната епруветка. Трябва да се помни, че авирулентните култури от пневмококи са устойчиви на жлъчката.

Устойчивостта на жлъчката може също да бъде тествана чрез инокулация в 10% жлъчен бульон. Тестовият материал се добавя към средата, докато бульонът става мътен. След 24-часова инкубация при 37°C, наличието на пневмококи ще бъде показано чрез избистряне на бульона в резултат на бактериален лизис.

Можете да използвате и дискове, напоени с 20% жлъчен разтвор. Дисковете се поставят върху порасналата култура в съда и се инкубират за 1-2 часа при 37°C. При наличие на пневмококи колониите лизират около диска на разстояние 1-2 мм.

Инулин тест. Културата от пневмококи се посява върху среда с инулин. За да направите това, 200 ml стерилна дестилирана вода, 18 ml лакмусова тинктура и 3 g инулин се добавят към 100 ml говежди серум, загрят при 56 ° C в продължение на 30 минути, стерилизиран с течаща пара в продължение на 30 минути. Културите се инкубират при 37°С в продължение на 24 часа. Pneumococcus разлага инулина, което води до оцветяване на средата в червено. Зеленият стрептокок не предизвиква зачервяване на околната среда.

Тест с оптохин. Тестваната пневмококова култура се инокулира в серумен бульон с оптохин в разреждане 1:100 000 или 1:200 000. Пневмококите не се развиват в такава среда. Също така е възможно да се определи чувствителността към оптохин чрез инокулация върху 10% кръвен агар, съдържащ оптохин в разреждане 1:50 000. Контролата е посявка върху кръвен агар. Пневмококите не растат върху средата с Optochin, растеж на пневмококи се наблюдава върху контролната среда. Можете да използвате дискове, импрегнирани с 6 μg оптохин, които се нанасят след инокулация върху повърхността на средата. При пневмококите около диска се образува зона на инхибиране на растежа с диаметър най-малко 18 mm.

Тест за вирулентност. Ежедневната култура на пневмококи, отглеждани върху суроватъчен бульон, се разрежда с 1% стерилна пептонна вода (pH - 7,6) или леко алкален бульон до 1:10. Разредената култура се прилага интраперитонеално на бели мишки с тегло 16-20 g в обем от 0,5 ml и се наблюдава в продължение на 72 часа. От органите на мъртвата мишка се правят посявки върху хранителни среди и се изследват под микроскоп петна-отпечатъци. Силно вирулентните култури включват пневмококи, които причиняват смъртта на мишките след въвеждане на културата в разреждане 1:10. Авирулентните култури не причиняват смърт при мишки.

Серотипиране на пневмококи. 18-часовата култура се тества в реакцията на микроаглутинация на Sabin. 4 капки пневмококова култура се нанасят върху предметно стъкло. Към 1 капка добавете капка антипневмококов серум тип 1, към 2-ра - серум тип II, към 3-та - серум - 111, към 4-та - капка нормален серум. Смесите върху стъклото се разбъркват с примка и се разглеждат под лупа или под микроскоп при малко увеличение. При положителен случай се наблюдава аглутинация в една от първите три капки. Видът на пневмокока се определя в реакцията на аглутинация със специфични аглутиниращи серуми от първите три фиксирани типа. Култури, които не аглутинират с тези типове серуми, се причисляват към Х-групата. Реакцията се настройва както следва. Изсипете 18-часова бульонна култура в 0,5 ml в епруветки. След това добавете равен обем серум, разреден с физиологичен разтвор в съотношение 1:5. Контролите са 2 епруветки, едната от които съдържа тестовата култура, смесена с

нормален заешки серум, а другият - само тестовата култура. Съдържанието на епруветките се разклаща добре и се поставя за 2 часа в термостат при температура 37 ° C, след което се извършва предварително изчисляване на реакцията. Крайните резултати се отбелязват след допълнителна инкубация при стайна температура в продължение на 20 часа. Аглутинацията се оценява с четири плюс, ако съдържанието на епруветките е напълно бистро и аглутинационната култура е плътен филм, който не се разпада при разклащане; с три плюса, ако при пълно избистряне на съдържанието на епруветката аглутиниращата култура лесно се разбива на парчета; два плюса - ако не настъпи просветление, частиците от аглутинирана култура са ясно видими с невъоръжено око в мътното съдържание на епруветката; с аглутинация с един плюс в епруветка се открива финозърнеста смес от слепени пневмококи. При отрицателна реакция, видима за окото, не се наблюдава аглутинация;

съдържанието на епруветките след разклащане е равномерна мътност.

Типизирането на пневмококи от X-група се извършва с помощта на група

серуми, съдържащи смес от взети типични аглутиниращи серуми

в равни обеми. Следните групови серуми се приготвят от

смесване на равни обеми неразредена стандартна диагностика

sera (Lund, I960):

A -1, II, IV, V, XVIII серовари;

B - VI, VIII, XIX серовари;

C - VII, XX. XXIV, XXXI, XL серовари;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII серовари;

E - X, XXI. XXXIII, XXXIX серовари;

F-XII. XVII. XXII, XXXVII, XXXII, XLI серовари;

G - XIII, XXV. XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII серовари;

J-XLIII. XLIV, XLV, XLVI серовари.

Използва се аглутиниращ серум тип III (без смесване с други типични серуми) поради трудността да се получи достатъчно висок титър. Типизирането се извършва на два етапа: първо с помощта на групови серуми, а след това с индивидуални серуми на групата, с която е получена положителна реакция. Пневмококовото серотипиране се използва предимно за епидемиологични изследвания на резултатите от специфична серотерапия и серопрофилактика.

Микроаглутинация на пневмококи по метода на Sabin може да се получи чрез смесване на антипневмококови серуми с ексудат от коремната кухина на мишка, заразена с храчка на пациента. Вече четири часа след инфекцията в ексудата се открива чиста култура от пневмококи, която дава положителна аглутинация на Sabin.

Ускорени методи за откриване и типизиране на пневмококи. 1. Метод на Neufeld или феноменът на подуване на пневмококовата капсула. Една бучка прясно изолирана храчка на пациента се прилага на трима

покривни стъкла, към всяко от тях добавете капка неразреден специфичен антипневмококов серум (1, II, III тип) и капка синьо на Loeffler. Капките се смесват старателно, покриват се с предметно стъкло с дупка, намазано по ръбовете с вазелин. След две минути висящите капки се изследват под микроскоп с имерсионна система. При положителен случай се наблюдава рязко увеличение на пневмококовите капсули. При отрицателен резултат капсулите почти не се ценят. Реакцията на подуване е специфична и не дава положителен резултат при други капсулни бактерии. Не го използвам за изследване на храчки от пациенти, лекувани със сулфонамиди и антибиотици, т.к. в този случай могат да се изолират капсулни пневмококи.

2. Метод на утаяване. 5-10 ml храчки се варят на водна баня до получаване на плътен съсирек. Съсирекът се стрива и се добавя малко количество физиологичен разтвор, отново се вари няколко минути, за да се извлече специфичният полизахарид от пневмококите. Суспензията се центрофугира, с получената бистра течност и специфични типични серуми в епруветки за утаяване, се извършва реакция на пръстеновидно утаяване. Появата на пръстен на границата между течностите показва положителен резултат.

3. Определяне на пневмококови капсули по Burri. Капка от тестовия материал и капка мастило се нанасят върху края на предметното стъкло. Сместа се разбърква и се прави натривка, суши се на въздух и без фиксиране се микроскопира. Фонът на лекарството е тъмно опушен, микробните тела и техните капсули не са оцветени. Препаратът, направен по Бури, може да се фиксира със сместа на Никифоров, измива се с вода, оцветява се с Циля фуксин, разреден 1:3 за 3-5 минути. На тъмния фон на намазката се открояват неоцветени капсули, вътре в които има бактерии с яркочервен цвят (метод на Джин).

скарлатинапричиняват различни серотипове на бета-хемолитични стрептококи с М-антиген и продуциращи еритрогенин (токсигенни стрептококи от серогрупа А) - (Streptococcus pyogenes). При липса на антитоксичен имунитет се появява скарлатина, при наличие на ангина.

Клинична картина

 Интоксикация - треска, общо неразположение, главоболие.

 Скарлатинозен обрив – фино точковиден, при умерен натиск със стъклена шпатула петната се виждат по-ясно. При по-силен натиск обривът става златисто-жълтеникав оттенък на кожата. Появява се на 1-3-ия ден от заболяването и се локализира главно по бузите, в слабините, отстрани на тялото. Кожата на назолабиалния триъгълник остава бледа и без обриви. Обривът обикновено продължава 3-7 дни, след което избледнява, без да оставя пигментация. Характеризира се с удебеляване на обрива по гънките на крайниците - аксиларни, лакътни, подколенни области.

 Ален език - на 2-4-ия ден от заболяването езикът на болния става изразено зърнест, яркочервен, т. нар. "пурпурен" език.

 Ангината е постоянен симптом на скарлатина. Може да бъде по-тежко от обичайното възпалено гърло.

 Белене на кожата – настъпва след изчезване на обрива (14 дни след началото на заболяването): в областта на дланите и стъпалата е едроламеларно, започва от върховете на пръстите; на тялото, шията, ушните миди люспест пилинг.

Пневмококи, таксономия. Имоти. Серологични групи. Отличителни черти от други стрептококи. Причинени заболявания. Принципи и методи на лабораторната диагностика.

Морфология и биологични свойства. Пневмококите (Streptococcus pneumoniae) са чифтни коки с овална, леко удължена ланцетна форма, наподобяващи пламък на свещ. Те могат да бъдат разположени и в къси вериги, наподобяващи стрептококи. Те са неподвижни, не образуват спори и са грам-положителни.
Те се отглеждат върху среда с добавяне на протеин: кръв, серум, с асцитна течност. Върху кръвен агар пневмококовите колонии са малки, наподобяващи капки роса, прозрачни в пропускаща светлина, с депресиран център, заобиколен от зона на непълна хемолиза, зеленикав оттенък, подобен на колониите на зелени стрептококи. В течна среда те дават лека мътност, понякога образувайки утайка. Те са доста активни биохимично: разлагат глюкоза, лактоза, малтоза, инулин и други въглехидрати с образуването на киселина, не втечняват желатина, не образуват индол. Разделянето на инулин е диференциална диагностична характеристика, която помага да се разграничат пневмококите от стрептококите, които не разлагат инулина. Важна отличителна черта е способността на пневмококите да се разтварят в жлъчката, докато стрептококите са добре запазени в нея.

Патогенеза и клиника. Пневмококите са причинители на лобарна пневмония при хората. Те могат също да причинят пълзящи язви на роговицата, катари на горните дихателни пътища, менингит, ендокардит, увреждане на ставите и други заболявания.

След преболедуване имунитетът е слабо напрегнат, краткотраен, типоспецифичен.
Микробиологична диагностика. Материалът за изследването е храчка, кръв, тампон от гърлото, цереброспинална течност. Поради факта, че пневмококът умира бързо, патологичният материал трябва да бъде доставен в лабораторията възможно най-скоро за изследване.

Менингококи. Таксономия, свойства. Антигенна структура на менингококи, класификация. Патогенеза на менингококова инфекция, клинични прояви. Принципи и методи на микробиологична диагностика. Разграничаване на причинителя на менингококова инфекция и други менингококи. специфична профилактика.

N. meningitidis (менингококи).

Менингококът е причинителят на менингококова инфекция - тежка антропоноза с въздушно-капково предаване на патогена. Основният източник са носителите. Естественият резервоар е човешкият назофаринкс. Морфологичните, културните и биохимичните свойства са подобни на гонококите. Разлики - те ферментират не само глюкоза, но и малтоза, произвеждат хемолизин.Те имат капсула, която е по-голяма и има различна структура от тази на гонокока.

антигенен състав.Те имат четири основни антигенни системи.

1. Специфични за капсулна група полизахаридни антигени. Щамовете от серогрупа А най-често причиняват епидемични взривове.

2. Протеинови антигени на външната мембрана. Според тези антигени менингококите от серогрупи B и C се разделят на класове и серотипове.

3. Родо-видоспецифични антигени.

4. Липополизахаридни антигени (8 вида). Те имат висока токсичност, предизвикват пирогенен ефект.

фактори на патогенност.Адхезионни фактори и колонизация - пили и протеини на външната мембрана. Фактори на инвазивност - хиалуронидаза и други произведени ензими (невраминидаза, протеази, фибринолизин). От голямо значение са капсулните полизахаридни антигени, които предпазват микроорганизмите от фагоцитоза.

Имунитетустойчиви, антимикробни.

Лабораторна диагностикавъз основа на бактериоскопия, изолиране на културата и нейната биохимична идентификация, серологични диагностични методи. Инокулацията на материала се извършва върху твърди и полутечни хранителни среди, съдържащи кръв, асцитна течност и кръвен серум.

Оксидаза позитивните култури се считат за принадлежащи към рода Neisseria. Менингококът се характеризира с ферментация на глюкоза и малтоза. Принадлежността към серогрупата се определя в теста за аглутинация (RA).

Гонококи. Таксономия, свойства. Патогенеза на гонококова инфекция, характеристики на имунитета. Принципи и методи за лабораторна диагностика на остра и хронична гонорея, бленорея. RSK Borde-Zhangu, цел, механизъм, отчитане на отговора. Профилактика на бленорея при новородени. Профилактика и лечение на гонорея. специфична терапия.

N.gonorrheae (гонококи).

Gonococcus е причинителят на гонореята, полово предавана болест с възпалителни прояви в пикочните пътища. Субстратът за колонизация е епителът на уретрата, ректума, конюнктивата на окото, фаринкса, шийката на матката, фалопиевите тръби и яйчника.

Диплококите се оцветяват добре с метиленово синьо и други анилинови багрила, плеоморфни (полиморфизъм). Много причудлив към условията на отглеждане и хранителните среди. От въглехидратите ферментира само глюкозата.

Антигенна структурамного променлив - характеризира се с фазови вариации (изчезване на антигенни детерминанти) и антигенни вариации (промени в антигенните детерминанти).

фактори на патогенност.Основните фактори са пиеше, с помощта на които гонококите извършват адхезия и колонизация на епителните клетки на лигавицата на пикочните пътища и липополизахарид(ендотоксин, отделян при унищожаването на гонококи). Гонококите синтезират IgAI, протеаза, която разцепва IgA.

Лабораторна диагностика.Бактериоскопската диагностика включва оцветяване по Грам и метиленово синьо. Типични признаци на гонококи са грам-отрицателно оцветяване, бобовидни диплококи, вътреклетъчна локализация.

Сеитбата се извършва върху специална среда (KDS-MPA от заешко месо или говеждо сърце със серум, асцит-агар, кръвен агар).

Причинители на газообразна анаеробна инфекция. Таксономия. Имоти. характеристики на токсините. Патогенеза, клинични форми. Принципи и методи на лабораторна диагностика, лекарства за специфична профилактика и лечение.

Газовата гангрена е анаеробна поликлостридиална (т.е. причинена от различни видове клостридии) ранева (травматична) инфекция. От първостепенно значение е C.perfringens, по-рядко C.novyi, както и други видове клостридии в устойчиви асоциации помежду си, аеробни пиогенни коки и гнилостни анаеробни бактерии.

C.perfringens е нормален обитател на червата на хора и животни, попада в почвата с изпражненията. Той е причинителят на раневата инфекция - причинява заболяване, когато патогенът навлезе в раната при анаеробни условия. Той е силно инвазивен и токсигенен. Инвазивността е свързана с производството на хиалуронидаза и други ензими, които имат разрушителен ефект върху мускулите и съединителната тъкан. Основен фактор на патогенност - екзотоксин, който има хемо-, некро-, невро-, левкотоксични и летални ефекти. В съответствие с антигенната специфичност на екзотоксините те се изолират серотиповепатоген. Заедно с газовата гангрена, C. perfringens причинява хранително отравяне (те се основават на действието на ентеротоксини и некротоксини).

Характеристики на патогенезата.За разлика от гнойните заболявания, причинени от аероби, анаеробната инфекция не е доминирана от възпаление, а некроза, оток, образуване на газ в тъканите, отравяне с токсини и продукти от разпадане на тъканите.

Имунитет- предимно антитоксични.

Лабораторна диагностикавключва микроскопия на отделяне от рана, изолиране и идентифициране на патогена, откриване и идентифициране на токсин в биотестове с помощта на реакция на неутрализация със специфични антитоксични антитела.

Профилактика и лечение.Профилактиката на газовата гангрена се основава на навременно и правилно хирургично лечение на рани. При тежки рани се прилагат антитоксични серуми срещу основните видове клостридии по 10 хил. IU, за медицински цели - по 50 хил. IU.

Clostridia тетанус. Таксономия. Свойства, характеристики на токсините. Патогенезата на заболяването. Десцендентен тетанус. Клиника. Принципи и методи на лабораторната диагностика. Целта на бактериологичните изследвания, лекарства за специфична профилактика и лечение.

Тетанусът е остра инфекция на рани, характеризираща се с лезии невротоксиндвигателни клетки на гръбначния и главния мозък, което се проявява под формата на спазми на набраздените мускули. Заболяват хора и селскостопански животни. Почвата, особено замърсената с човешки и животински изпражнения, е постоянен източник на инфекция с тетанус.

Патоген - C.tetani - голям спорообразуващ грам-положителен бацил. Спорите са разположени крайно (вид тъпанче), подвижни благодарение на камшичетата - перитрихични. Задължително анаеробно. Спорите са много устойчиви.

антигенни свойства.Причинителят има О- и Н- антигени.

фактори на патогенност.Основният фактор е най-силният екзотоксин. Различават се двете му основни фракции - тетаноспазмин (невротоксин) и тетанолизин (хемолизин). Невротоксинът в централната нервна система прониква в областта на мионевралните синапси, предава се от неврон на неврон в областта на синапсите, натрупва се в двигателните области на гръбначния стълб и мозъка, блокира синаптичната трансмисия. Смъртта настъпва от парализа на дихателния център, асфиксия (увреждане на мускулите на ларинкса, диафрагмата, междуребрените мускули) или парализа на сърцето.

Лабораторна диагностика.Микробиологичната диагностика включва бактериоскопия на суровините, култура за изолиране на патогена и неговата идентификация, откриване на тетаничен токсин.

Изолирането на патогена се извършва съгласно стандартната схема за анаероби, като се използват различни плътни и течни (среда на Kitt-Tarozzi) среди, идентификацията се основава на морфологични, културни, биохимични и токсигенни свойства.

Най-простият и ефективен метод за микробиологична диагностика е биотест върху бели мишки. Едната група се заразява с тестовия материал, втората (контролната) - след смесване на пробите с антитоксичен тетаничен серум. При наличието на тетаничен токсин експерименталната група мишки умира, докато контролната група остава жива.

Лечение и спешна профилактика.Използват се донорски тетаничен имуноглобулин (антитоксин), антитоксичен серум (350 IU/kg), антибиотици (пеницилини, цефалоспорини). За създаване на ваксинален имунитет се използва тетаничен токсоид, по-често като част от DTP ваксината (тетаничен токсоид, дифтерия и убита магарешка кашлица).

Clostridia botulinum. Таксономия. Имоти. Характеристики на токсините, разлика от екзотоксините на патогени на други хранителни инфекции. Принципи и методи на лабораторната диагностика. Лекарства за специфична профилактика и лечение.

Ботулизмът е тежко хранително отравяне, свързано с употребата на продукти, заразени с C.botulinum, и се характеризира със специфично увреждане на централната нервна система. Името си е получил от лат. botulus - наденица.

Свойства на възбудителя.Големи полиморфни грам-положителни пръчици, подвижни, имат перитрихални флагели. Спорите са овални, разположени субтерминално (тенис ракета). Образуват се 8 вида токсини, които се различават по антигенна специфичност и съответно се изолират 8 вида патогени. Сред най-важните характеристики е наличието или отсъствието на протеолитични свойства (хидролиза на казеин, производство на сероводород).

Токсинът има невротоксичен ефект. Токсинът влиза в тялото с храната, въпреки че вероятно може да се натрупа, когато патогенът се размножава в тъканите на тялото. Токсинът е термолабилен, въпреки че е необходимо кипене до 20 минути за пълно инактивиране. Токсинът бързо се абсорбира в стомашно-чревния тракт, прониква в кръвта, селективно действа върху ядрата на продълговатия мозък и ганглиозните клетки на гръбначния мозък. Развиват се невропаралитични явления - нарушения на преглъщането, афония, дисфагия, офталмо-плегичен синдром (страбизъм, двойно виждане, увиснали клепачи), парализа и пареза на мускулите на фаринкса и ларинкса, спиране на дишането и сърцето.

Лабораторна диагностика.Принципите са общи за клостридиите.

Лечение и профилактика.Основата е ранното използване на антитоксични серуми (поливалентни или, когато типът е установен, хомоложни). Профилактиката се основава на санитарно-хигиенния режим при обработката на хранителните продукти. Особено опасни са домашно приготвените консервирани гъби и други продукти, съхранявани при анаеробни условия.

11. Pseudomonas aeruginosa. Таксономия. Имоти. Причинени заболявания.
Роля при нозокомиални инфекции. Принципи и методи на лабораторната диагностика.

Родът pseudomonas, P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) е един от основните причинители на локални и системни гнойно-възпалителни процеси в лечебните заведения.

Патогенът е повсеместен (вода, почва, растения, животни), обикновено се среща при хората (най-често в червата, по кожата и лигавиците). Морфология- Грам-отрицателна права или леко извита пръчка, подвижна, в петна, разположени единично, по двойки или в къси вериги. Синтезира слуз (капсулно вещество), особено по-вирулентни мукоидни щамове.

културни ценности.Той е аероб и има набор от ензими, съответстващи на вида на дишането (цитохроми, цитохромоксидаза, дехидрази).В течна среда образува сивкаво-сребрист филм.В плътна среда често се наблюдава явлението ирисцентен лизис.Чрез края на деня поради синтеза на пигменти пиоцианинпоявява се синьо-зелен цвят на културата.

биохимични свойства. Pseudomonas aeruginosa се характеризира с ниска захаролитична активност (окислява само глюкоза), висока протеолитична активност и образуване на зона на бета-хемолиза върху кръвния агар. Синтезира триметиламин, който придава на културите приятна миризма на жасмин. Произвежда производството на бактериоцини - пиоцини.

Антигенни и патогенни свойства.Основните антигени на Pseudomonas aeruginosa са групово-специфичен соматичен О-антиген и типово-специфичен флагеларен Н-антиген. О-антигенен комплекс - агрегат от LPS с протеини и липиди на клетъчната стена, има свойствата на ендотоксин, е един от основните фактори на патогенността. Pseudomonas aeruginosa има голям набор от фактори на патогенност - ендотоксин (LPS, подобно на други грам-отрицателни бактерии), редица екзотоксини - цитотоксин, екзоензим S, хемолизини, екзотоксин А (най-важният, наподобява дифтериен екзотоксин), ензими (колагеназа). , невраминидаза, протеази).

Лабораторна диагностика. P.aeruginisa получи името си заради синкаво-зеленото оцветяване на отделящите се рани и превръзки. Основният диагностичен метод е бактериологичен. Важно е откриването на пигмента пиоцианин. Лечение и специфична профилактика.Няма специфична профилактика. При хранително отравяне и чревна дисбактериоза, причинена от Pseudomonas aeruginosa, е ефективен сложен чревен бактериофаг, който включва псевдомонас фаг. От антибактериалните лекарства по-често се използват аминогликозиди, цефалоспорини и хинолони.

Условно патогенни грам-отрицателни бактерии - причинители на гнойно-възпалителни процеси (Proteus, Klebsiella, чудодейна пръчка и др.), Таксономия. Обща характеристика на ентеробактериите. Принципи и методи на лабораторната диагностика.

Род Klebsiella.

Родът Klebsiella принадлежи към семейство Enterobacteriaceae. Особеност на представителите на рода е способността да образуват капсула. Основният вид е K. Pneumoniae. Причиняват опортюнистични лезии - нозокомиална пневмония, инфекции на пикочните пътища, диария при новородени. Klebsiella причиняват мастит, септицемия и пневмония при животни, постоянно се намират върху кожата и лигавиците на хора и животни. Klebsiella - прави, неподвижни пръчици с различни размери. факултативни анаероби. Оксидаза - отрицателна, каталаза - положителна.

фактори на патогенност.Те включват полизахаридна капсула (К-антиген), ендотоксин, фимбрии, сидерофорна система (свързва железни йони и намалява съдържанието им в тъканите), термолабилни и термостабилни екзотоксини.

Клинични проявления. K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) се характеризира с болничен бронхит и бронхопневмония, лобарна пневмония, инфекции на пикочните пътища, лезии на менингите, ставите, гръбначния стълб, очите, както и бактериемия и септикопиемия. Подвидът ozaenae причинява специална форма на хроничен атрофичен ринит - езеро.

Лабораторна диагностика.Основният метод е бактериологичен. Лечение.Една от характеристиките на Klebsiella е тяхната мултилекарствена резистентност и развитието на лезии на фона на намаляване на съпротивителните сили на организма. Антибиотиците се използват за генерализирани и бавни хронични форми на Klebsiellesis, обикновено в комбинация с лекарства, които стимулират имунната система.

Род Proteus.

Родът Proteus принадлежи към семейство Enterobacteriaceae. Родът е кръстен в чест на сина на Посейдон Протей, способен да променя външния си вид. Представителите на рода са в състояние да променят външните прояви на растеж върху плътни хранителни среди и също така се отличават с най-голям плеоморфизъм (променливост на морфологията) в сравнение с други ентеробактерии.

Протеините разграждат тирозина, възстановяват нитратите, оксидазата е отрицателна, каталазата е положителна. Те живеят в червата на много видове гръбначни и безгръбначни, почвата, канализацията и разлагащите се органични остатъци. Може да причини инфекции на пикочните пътища при хора, както и септични лезии при пациенти с изгаряния и след операция. Доста често те причиняват и хранително отравяне. P.vulgaris и P.mirabilis имат най-честата роля в патологията.

културни ценности.Протеите растат върху проста среда в широк диапазон от температури. Оптималното pH е 7,2-7,4, температурата е от +35 до 37 градуса по Целзий. Колониите на Proteus в O-формата са заоблени, полупрозрачни и изпъкнали, H-формите дават непрекъснат растеж. Растежът на протеите е придружен от гниеща миризма. Характерно е явлението роене, H-формите придават на MPA характерен пълзящ израстък под формата на синкаво-опушен деликатен воал. При засяване по метода на Шушкевич в кондензационната влага на прясно нарязан МРА културата постепенно се издига под формата на воал нагоре по повърхността на агара. На BCH се отбелязва дифузна мътност на средата с гъста бяла утайка на дъното.

фактори на патогенност.Те включват LPS на клетъчната стена, способността за „роене“, фимбрии, протеази и уреаза, хемолизини и хемаглутинини.

Лабораторна диагностика.Основният метод е бактериологичен. Използват се диференциално диагностични среди (Ploskirev), обогатителни среди и MPA по метода на Шушкевич. Лечение. В случай на чревна дисбактериоза, свързана с протеи (колит), е възможно използването на протеус фаг и препарати, които го съдържат (интестифаг, колипротеус бактериофаг).

"Чудесна пръчка" (Serratia marcescens), вид бактерии от пигментните микроорганизми. Грам-отрицателни подвижни (перитрихни) неспорови пръчици. По вид обмен - факултативен анаероб. На повърхността на агара се образуват гладки или гранулирани тъмно и яркочервени колонии с метален блясък. Живее в почвата, водата, храната. Развивайки се върху хляба (при висока влажност), в млякото, оцветява ги в червено; такива продукти не са разрешени за продажба. Условно патогенен за животни и хора; може да причини нагнояване.

13. Ешерихия. Таксономия. Заболявания, причинени от ешерихия коли. Патогенни варианти на диарогенна ешерихия. Антигенна структура, класификация. Характеристики на микробиологичната диагностика. Разграничаване на диарогенна ешерихия от условно патогенна.

Escherichia са най-често срещаните аеробни чревни бактерии, които при определени условия могат да причинят широка група човешки заболявания, както с чревна (диария), така и с екстраинтестинална (бактериемия, инфекции на пикочните пътища и др.) локализация. Основният вид - E. coli (E. coli) - най-честият причинител на инфекциозни заболявания, причинени от ентеробактерии. Този патоген е индикатор за фекално замърсяване, особено вода.

културни ценности.В течна среда Е. coli дава дифузна мътност, в плътна среда образува S- и R-форми на колонии. В средата на Endo за Escherichia ферментиращите лактоза Escherichia coli образуват интензивно червени колонии с метален блясък, неферментиращите - бледорозови или безцветни колонии с по-тъмен център, в средата на Ploskirev - червени с жълтеникав оттенък, в средата на Levin - тъмни синьо с метален блясък.

биохимични свойства. Escherichia coli в повечето случаи ферментира въглехидрати (глюкоза, лактоза, манитол, арабиноза, галактоза и др.) С образуването на киселина и газ, образува индол, но не образува сероводород и не втечнява желатина.

Основните патогенни фактори на диарията E.coli.

1. Фактори на адхезия, колонизация и инвазия, свързани с пили, фимбриални структури, протеини на външната мембрана. Те са кодирани от плазмидни гени и подпомагат колонизацията на долната част на тънките черва.

2. Екзотоксини: цитотонини (стимулират хиперсекрецията на течност от чревните клетки, нарушават водно-солевия метаболизъм и допринасят за развитието на диария) и ентероцитотоксини (действат върху клетките на чревната стена и капилярния ендотел).

3. Ендотоксин (липополизахарид).

В зависимост от наличието на различни фактори на патогенност, диарогенните Escherichia coli се разделят на пет основни типа: ентеротоксигенни, ентероинвазивни, ентеропатогенни, ентерохеморагични, ентероадхезивни.

4. Патогенната E. coli се характеризира с производството на бактериоцини (колицини).

Ентеротоксигенна E. coliимат високомолекулен термолабилен токсин, подобен по действие на холерата, причиняват холероподобна диария (гастроентерит при малки деца, диария на пътника и др.).

Ентероинвазивна ешерихия колиспособни да проникват и да се размножават в клетките на чревния епител. Те причиняват обилна диария с примес на кръв и голям брой левкоцити (показател за инвазивен процес) в изпражненията. Клинично прилича на дизентерия. Щамовете имат някои прилики с Shigella (неподвижни, не ферментират лактоза, имат високи ентероинвазивни свойства).

Ентеропатогенна E.coli- основните причинители на диария при деца. В основата на лезиите е адхезията на бактериите към чревния епител с увреждане на микровилите. Характеризира се с водниста диария и тежка дехидратация.

Ентерохеморагична ешерихия колипричиняват диария, примесена с кръв (хеморагичен колит), хемолитично-уремичен синдром (хемолитична анемия в комбинация с бъбречна недостатъчност). Най-често срещаният серотип на ентерохеморагична Escherichia coli е O157:H7.

Ентероадхезив E.coliне образуват цитотоксини, са слабо проучени.

Лабораторна диагностика.Основният подход е изолирането на чиста култура върху диференциална диагностична среда и нейното идентифициране чрез антигенни свойства. Те поставят RA с набор от поливалентни ОК (към О- и К-антигени) серуми.

Сред патогенните стрептококи особено място заема S.pneumoniae (pneumococcus). Той играе много важна роля в човешката инфекциозна патология. Този вид е един от основните причинители на лобарна пневмония. Според далеч непълни данни всяка година в света има повече от 500 000 случая на пневмония, причинена от пневмококи, особено при деца и възрастни хора. В допълнение към възпалението на белите дробове, този микроб причинява менингит, ендокардит, перитонит, отит на средното ухо, ринит, синузит, сепсис, пълзяща язва на роговицата и редица други заболявания. За лабораторна диагностика се използват бактериоскопски, бактериологични и биологични методи. Материал за изследване на храчки, гной, кръв, цереброспинална течност, слуз от орофаринкса и назофаринкса, изхвърляне от максиларния синус, очи и уши. Важно е незабавно да изпратите материала в лабораторията и да го анализирате много бързо, тъй като пневмококите са податливи на автолиза.

Бактериоскопско изследване

Бактериоскопското изследване на материала (с изключение на кръвта) се свежда до производството на две намазки. Единият от тях е оцветен за Грам, вторият - за Бури-Гинс, което позволява идентифицирането на капсулата. Пневмококите са разположени под формата на ланцетни диплококи, заобиколени от обща капсула. Ако в зрителното поле се открият 10 или повече типични диплококи, е много вероятно наличието на S.pneumoniae. Първичната микроскопия обаче не дава право да се направи окончателна диагноза, тъй като намазките могат да съдържат капсулни непатогенни диплококи - представители на нормалната микрофлора. Следователно е необходимо да се извърши сеитба на клиничен материал и да се изолира чиста култура.

Бактериологични изследвания

В случай на сепсис, 10 ml кръв се инокулират до леглото на пациента във флакон, съдържащ 100 ml серум или захарен бульон, инкубират се 18-20 часа при 37 ° C, след това се засяват върху кръвен агар, чиста култура е изолирани и идентифицирани. При менингит цереброспиналната течност се центрофугира и утайката се култивира върху кръвен агар. Върху него пневмококите растат под формата на малки кръгли колонии, заобиколени от зелена зона, в центъра на колонията се вижда характерна депресия. Посяването на храчки или гной върху хранителни среди не е препоръчително, тъй като наличието на сапрофитна микрофлора инхибира растежа на S.pneumoniae. По-добре е тестваният материал да се въведе в коремната кухина на бели мишки. Биологичният анализ е бърз, надежден и точен метод за изолиране на чиста пневмококова култура. Белите мишки са много чувствителни към тези бактерии и в рамките на 10-12 часа след заразяването пневмококите проникват в кръвта и паренхимните органи, причинявайки сепсис. Кръвната култура от сърцето или части от вътрешните органи по време на аутопсията на животни ви позволява да изолирате чиста култура на патогена. За идентифициране на пневмококи се използват техните свойства. За разлика от други видове стрептококи, S.pneumoniae не се развива на среда с оптохин, инулинът е ферментирал и е много чувствителен към действието на жлъчката (дезоксихолатен тест). Бързият лизис на пневмококите под действието на жлъчката може да се установи, ако към 1 ml бульонна култура се добавят 0,5 ml жлъчка. След 15-20 минути престой в термостата настъпва пълно лизиране на бактериалните клетки. За определяне на сероварите на пневмококите (сега има 85 от тях) се използва реакция на аглутинация върху стъкло с типични серуми или феноменът на "подуване на капсулата". При наличие на хомоложен серум пневмококовата капсула силно набъбва. Дори по-добре, определянето на серотип се извършва с търговски реагенти за латексна аглутинация или коаглутинация, които показват капсулни антигени. Сред стрептококите значение има и родът Enterococcus, най-значимите видове от който са E.faecalis, E.faecium и E.durans. Те са доста широко разпространени в природата. Основната им екологична ниша са червата на хората и животните, но те се срещат и в нормалната микрофлора на кожата на перинеума, пикочно-половите органи, орофаринкса и назофаринкса. Те могат да причинят нагнояване на рани, бактериемия, лезии на урогениталната система, особено при пациенти с дългосрочно функциониращи катетри, хранително отравяне, чревна дисбактериоза, по-рядко ендокардит. В петна от тестовия материал ентерококите са подредени по двойки, къси вериги или под формата на клъстери, грам-положителни. Бактериологичната диагностика на ентерококови инфекции се извършва без никакви затруднения, тъй като тези бактерии се развиват добре върху прости среди. Agar dif-3 е селективен за тях (до 600 ml 3% MPA се добавят 400 ml 40% жлъчка). След 24 часа инкубация колониите, които са се разраснали, са с размер 0,4-1,0 mm със сивкав цвят. На кръвния агар настъпва непълна или пълна хемолиза около колониите. За разлика от виридесцентните стрептококи, ентерококите могат да растат върху MPA с 6,5% NaCl, редуциращи млякото с метиленово синьо при 37°C след 4-6 часа. Идентифицирането на изолирани култури се извършва по морфологични, културни и биохимични характеристики.

Страница 40 от 91

Причинителят на лобарната пневмония (пневмония) е пневмокок - Diplococcus pneumoniae, открит за първи път от Пастьор в слюнката на човек, починал от бяс (1881 г.).
Морфология и тинкториални свойства. Пневмококите (фиг. 67 и 68 на вложката) са чифтни коки, които имат удължена форма като ланцет. Поради това те се наричат иначе ланцетни диплококи. Образувайки къси вериги, пневмококите стават подобни на стрептококите и следователно II. Ф. Гамалея ги нарича Streptococcus lanceolatus. Размерът на клетката варира от 0,5X0,75 до 1X1,5 микрона. Те нямат спори или флагели. Отличителна черта на пневмокока е образуването на капсула, която е добре изразена в патологични материали (храчка, кръв и др.). При култивиране върху хранителни среди капсулата се губи. Пневмококите лесно възприемат анилинови багрила и оцветяват положително по Грам.
Културални и биохимични свойства.

Ориз. 68. Пневмококи в цитонамазка от храчки.

Пневмококите са аероби и факултативни анаероби. Оптималната температура е около 37°. Отглеждайте върху среда, съдържаща животински протеин (кръвен или серумен агар, асцитагар).
На повърхността на агара след 24 часа се образуват малки колонии, наподобяващи стрептококови, но по-малки и по-прозрачни.
Върху наклонен агар, с обилна инокулация, се получава много деликатно прозрачно покритие, състоящо се от най-малките, несливащи се колонии, върху бульон - леко помътняване и малка люспеста утайка.
Прясно изолирани щамове не растат върху желатин. Старите лабораторни щамове на пневмококи могат да произвеждат малки белезникави колонии още при 18-22°C. Желатинът не е втечнен.
Те растат добре на мляко, подсирвайки го с образуването на киселина.
Върху кръвния агар около колониите се образува зона на непълна хемолиза със зеленикаво-кафяво оцветяване на средата.

Ориз. 67. Пневмококи в чиста култура от бульон.

Пневмококите разлагат захароза, рафиноза и лактоза. Най-важната характеристика е разграждането на инулина. Повечето стрептококи нямат това свойство. Вирулентните пневмококи са разтворими в жлъчката.
Антигенна структура и серологични видове пневмококи. Цитоплазмата на пневмококите съдържа протеинов антиген, общ за всички пневмококи. Този антиген определя тяхната видова специфичност. Капсулата съдържа специфични полизахаридни антигени (хаптен), които се различават по своя химичен състав при различните пневмококи (типични антигени). Въз основа на тези типични антигени всички пневмококи се разделят на три основни групи (I, II, III) и четвърта комбинирана група (X-група), използвайки реакцията на аглутинация и преципитация. Х-групата включва повече от 70 вида.
съпротива. На изкуствени хранителни среди пневмококите бързо умират (4-7 дни). Под слой вазелиново масло в течна и полутечна среда, съдържаща протеин, те остават жизнеспособни 3-12 месеца.
Пневмококите понасят добре изсушаването: в сухи храчки при дифузна светлина те продължават да съществуват до 2 месеца. При нагряване до 52-55 °, те умират за 10 минути, при 60 ° - дори по-бързо. В разтвор на карболова киселина (3%) пневмококите умират за 1-2 минути.
Пневмококите са особено чувствителни към оптохин. Под въздействието на последния те умират в концентрация 1: 1 000 000.
Образуване на токсини и патогенност за животни. Пневмококовата отрова е ендотоксин. От лабораторните животни белите мишки и зайците са по-чувствителни към пневмококи. Парентералното приложение на вирулентни пневмококи след 24-48 часа причинява смърт на животни със сепсис. При аутопсия на мястото на инжектиране се открива фибринозен ексудат, далакът е увеличен и хиперемиран.
Патогенеза и заболявания при човека. Входната врата на инфекцията обикновено е лигавицата на фаринкса. Въвеждането на пневмококи в тялото и тяхното проникване в тъканта на белия дроб може, очевидно, да се случи както през лимфната и кръвоносната система, така и директно през разклоненията на бронхите. Най-често срещаното заболяване е крупозната пневмония, която се характеризира с внезапно начало, висока температура, понякога с втрисане, болка встрани при дишане, главоболие, понякога загуба на съзнание, делириум, силна възбуда. В бъдеще се появява кашлица с характерна ръждиво-червена храчка. В белите дробове има процес, който улавя по-често един, по-рядко - два или три лоба.
Източници на инфекция са болен човек и бактерионосител. Заразяването отвън става както по аерогенен път - по капков път от носителя, така и чрез прахова инфекция. Пневмококите могат да се задържат в изсушена храчка за дълго време (около 2 месеца) и да навлязат във въздуха с прах.
При изследване на здрави хора често се откриват патогенни пневмококи в назофаринкса, така че не се изключва възможността за автоинфекция и факторите, които отслабват съпротивителните сили на организма, като хипотермия, играят важна роля.
Освен крупозна пневмония, пневмококите причиняват възпаление на средното ухо, мозъчните обвивки (менингит), както и на лигавицата на носа и синусите, възпалено гърло, пълзяща язва на роговицата и възпаление на слъзния сак.
Имунитет. Прехвърлената пневмония не дава имунитет. Заболяването може да се повтори повече от веднъж. Това се дължи на наличието на много видове пневмококи и факта, че прекарана пневмония повишава чувствителността на организма към пневмококите.
Серумът на възстановени пациенти съдържа антитела (аглутинини и др.).
По време на кризата при пневмония концентрацията на антитела в кръвта достига значителен титър и фагоцитозата се увеличава драстично (I. Ya. Chistovich). Въз основа на тези данни имунитетът при пневмония трябва да се разглежда предимно като фагоцитен, в който важна роля играят антителата (бактериотропини).
Микробиологична диагностика. Материали за изследване на пневмококови заболявания са храчки, кръв и гной, взети от различни лезии, по-рядко цереброспинална течност.
Патологичният материал (с изключение на кръвта) се изследва бактериоскопски, бактериологично и чрез заразяване на бели мишки. Последният метод трябва да се използва, тъй като изходният материал, особено храчката, обикновено съдържа обилна външна микрофлора, която, когато материалът се инокулира директно върху хранителни среди, затруднява изолирането на пневмокок.
Натривките от храчки, гной и др. се оцветяват по Грам. Под микроскоп се откриват ланцетни диплококи, положително оцветени по Грам, заобиколени от капсула.
Културите се изолират върху кръвен агар или асциг агар. След 24-48 часа растеж при 37° се появяват характерни колонии при наличие на пневмококи. Колониите се посяват върху наклонен серум или асцитен агар и изолираната култура се проверява за разтворимост в жлъчка и за способност да разгражда инулин.
Инфекцията на бяла мишка е най-сигурният начин за изолиране на култура от пневмококи. Материал от болен или труп (храчка, гной, парче от орган и др.) се поставя в стерилна чаша, след което се стрива в стерилно хаванче, с 1-2 ml стерилен бульон и 0,5 ml от тази суспензия. инжектиран интраперитонеално на бяла мишка. След смъртта на мишката, която настъпва в рамките на 12-48 часа, се вземат кръвни култури от сърцето, като в почти всички случаи се получава чиста култура на пневмококи.
Ако се подозира сепсис, 10-20 ml кръв се инокулират в асцитен или серумен бульон. След обогатяване от бульона се правят посявки върху кръвен агар и изолираната чиста култура се идентифицира по морфологични и биохимични характеристики.
специфична терапия и химиотерапия. Понастоящем за лечение на лобарна пневмония с голям успех се използват сулфаниламидни препарати и антибиотици (пеницилин, биомицин, тетрациклин и др.).

Родът Streptococcus включва: Streptococcus pyogenes (хемолитичен) и Streptococcus pneumoniae (пневмокок). Стрептококите са открити за първи път от Billroth (1874), L. Pasteur (1879). Те са изследвани от E. Rosenbach (1884).

Streptococcus pyogenes (хемолитичен)

Морфология. Стрептококите са коки, които имат сферична форма. Диаметърът на всеки кокус е средно 0,6-1 μm, но те се характеризират с полиморфизъм: има малки и големи коки, строго сферични и овални. Стрептококите са подредени във верига, което е резултат от разделянето им в една и съща равнина. Дължините на веригата варират. В плътна хранителна среда веригите обикновено са къси, в течни - дълги. Стрептококите са неподвижни, нямат спори (виж фиг. 4) Прясно изолираните култури понякога образуват капсула. На ултратънки срезове се вижда микрокапсула, под нея има трислойна клетъчна стена и трислойна цитоплазмена мембрана. Грам-положителен.

отглеждане. Стрептококите са факултативни анаероби. Расте при температура 37 ° C и pH 7,6-7,8. Оптималните среди за тяхното култивиране са среди, съдържащи кръв или кръвен серум. Върху плътни хранителни среди колониите от стрептококи са малки, плоски, мътни, сивкави на цвят. На кръвен агар някои разновидности на стрептококи образуват хемолиза. β-хемолитичните стрептококи образуват ясна зона на хемолиза, α-хемолитичните стрептококи образуват малка зеленикава зона (резултат от прехода на хемоглобина към метхемоглобин). Има стрептококи, които не дават хемолиза.

Върху захарния бульон стрептококите се развиват с образуването на париетална и близка до дъното финозърнеста утайка, докато бульонът остава прозрачен.

Ензимни свойства. Стрептококите имат захаролитични свойства. Те разграждат глюкоза, лактоза, захароза, манитол (не винаги) и малтоза, за да образуват киселина. Протеолитичните им свойства са слабо изразени. Те коагулират млякото, желатинът не се втечнява.

образуване на токсини. Стрептококите образуват редица екзотоксини: 1) стрептолизини - унищожават червените кръвни клетки (О-стрептолизин има кардиотоксичен ефект); 2) левкоцидин - унищожава левкоцитите (образувани от силно вирулентни щамове); 3) еритрогенен (скарлатинен) токсин - предизвиква клиничната картина на скарлатината - интоксикация, съдови реакции, обрив и др. Синтезът на еритрогенен токсин се определя от профага; 4) цитотоксини – имат способността да предизвикват гломерулонефрит.

Стрептококите имат различни антигени. Цитоплазмата на клетката съдържа антиген със специфична нуклеопротеидна природа - еднаква за всички стрептококи. Антигените от протеинов тип са разположени на повърхността на клетъчната стена. В клетъчната стена на стрептококите е открит антиген от полизахаридната група.

Според състава на полизахаридната група-специфична антигенна фракция, всички стрептококи се разделят на групи, обозначени с главни латински букви A, B, C, D и т.н. до S. В допълнение към групите, стрептококите се разделят на серологични типове , които са обозначени с арабски цифри.

Група А включва 70 типа. Тази група включва повечето стрептококи, които причиняват различни заболявания при хората. Група Б включва предимно опортюнистични човешки стрептококи. Група С включва стрептококи, патогенни за хората и животните. Група D се състои от стрептококи, които не са патогенни за хората, но тази група включва ентерококи, които са обитатели на чревния тракт на хора и животни. Попадайки в други органи, те причиняват възпалителни процеси: холецистит, пиелит и др. По този начин те могат да бъдат приписани на условно патогенни микроби.

Принадлежността на изолираните култури към една от серологичните групи се определя чрез реакция на утаяване с групови серуми. За определяне на серологичните типове се използва реакция на аглутинация със специфични за типа серуми.

Стрептококите са доста стабилни в околната среда. При температура от 60 ° C те умират след 30 минути.

В засъхналата гной и храчки те персистират с месеци. Обичайните концентрации на дезинфектанти ги унищожават за 15-20 минути. Ентерококите са много по-устойчиви, дезинфекционните разтвори ги убиват само след 50-60 минути.

Възприемчивост на животните. Говеда, коне, кучета и птици са податливи на патогенни стрептококи. От лабораторните животни чувствителни са зайци и бели мишки. Патогенните за човека стрептококи обаче не винаги са патогенни за опитни животни.

Източници на инфекция. Хора (болни и носители), по-рядко животни или заразени продукти.

Пътища на предаване. Възможно е въздушен и въздушен прах, понякога хранителен, контактно-битов.

Заболяванията могат да възникнат в резултат на екзогенна инфекция, както и ендогенно - с активиране на опортюнистични стрептококи, които живеят върху лигавиците на фаринкса, назофаринкса и вагината. Намаляването на съпротивителните сили на организма (охлаждане, гладуване, преумора и др.) може да доведе до автоинфекции.

От голямо значение в патогенезата на стрептококови инфекции е предварителната сенсибилизация - в резултат на предишно прехвърлено заболяване на стрептококова етиология.

При проникване в кръвния поток стрептококите причиняват тежък септичен процес.

Заболявания при хоратапо-често причиняват β-хемолитични стрептококи от серологична група А. Те произвеждат ензими за патогенност: хиалуронидаза, фибринолизин (стрептокиназа), дезоксирибонуклеаза и др. В допълнение, капсула, М-протеин, които имат антифагоцитни свойства, се откриват в стрептококите.

Стрептококите причиняват различни остри и хронични инфекции при хората, както с образуване на гной, така и негнойни, различни по клинична картина и патогенеза. Гнойни - флегмони, абсцеси, раневи инфекции, негнойни - остри инфекции на горните дихателни пътища, еризипел, скарлатина, ревматизъм и др.

Стрептококите често причиняват вторични инфекции при грип, морбили, магарешка кашлица и други заболявания и често усложняват раневите инфекции.

Имунитет. По природа имунитетът е антитоксичен и антибактериален. Постинфекциозният антимикробен имунитет е слаб. Това се дължи на слабата имуногенност на стрептококите и голям брой серовари, които не дават кръстосан имунитет. В допълнение, при стрептококови заболявания се наблюдава алергизация на тялото, което обяснява склонността към рецидив.

Предотвратяване. Свежда се до санитарно-хигиенни мерки, укрепващи цялостната устойчивост на организма. Не е разработена специфична профилактика.

Лечение. Прилагайте антибиотици. По-често се използва пеницилин, към който стрептококите не са придобили резистентност, както и еритромицин и тетрациклин.

Стойността на стрептококите в етиологията на ревматичните сърдечни заболявания. Патогенезата на ревматичното сърдечно заболяване не е добре разбрана. Но редица факти говорят в полза на ролята на стрептокока в развитието на това заболяване:

1. При пациенти с ревматична болест на сърцето се засява В-хемолитичен стрептокок от фаринкса.

2. Ревматизмът често се появява след прекарани възпалено гърло, тонзилит, фарингит, сенсибилизиране на тялото.

3. Антистрептолизин, антистрептохиалуронидаза - антитела срещу стрептококови ензими, токсини се откриват в кръвния серум на пациентите.

4. Косвено потвърждение за ролята на стрептокока е успешното лечение с пеницилин.

Напоследък L-формите на стрептококите се отдават на голямо значение при възникването на хронични форми на ревматична болест на сърцето.

Предотвратяването на екзацербации на ревматично сърдечно заболяване се свежда до предотвратяване на стрептококови заболявания (например през пролетта и есента се провежда профилактичен курс на приложение на пеницилин). Лечението се свежда до употребата на антибактериални лекарства - пеницилин.

Стойността на стрептококите в етиологията на скарлатина. G. N. Gabrichevsky (1902) е първият, който предполага, че хемолитичният стрептокок е причинителят на скарлатина. Но тъй като стрептококите, изолирани при други заболявания, не се различават от причинителите на скарлатина, това мнение не се споделя от всички. Сега е установено, че скарлатината се причинява от стрептококи от група А, които произвеждат еритрогенен токсин.

При преболедувалите възниква имунитет - устойчив, антитоксичен. Напрежението му се определя чрез задаване на реакцията на Дик - интрадермално инжектиране на еритрогенен токсин. При тези, които не са болни около мястото на инжектиране, се появяват хиперемия и оток, което се характеризира като положителна реакция (липса на антитоксин в кръвния серум). При тези, които са били болни, такава реакция липсва, тъй като образуваният в тях антитоксин неутрализира еритрогенния токсин.

Предотвратяване. Изолация, хоспитализация. На контактни, отслабени деца се дава гамаглобулин. Не е разработена специфична профилактика.

Лечение. Използвайте пеницилин, тетрациклин. В тежки случаи се прилага антитоксичен серум.

Целта на изследването: откриване на стрептокок и определяне на неговия серовар.

Изследователски материал

1. Слуз от гърлото (тонзилит, скарлатина).

2. Остъргване от засегнатата област на кожата (еризипел, стрептодермия).

3. Гной (абсцес).

4. Урина (нефрит).

5. Кръв (съмнение за сепсис; ендокардит).

Основни методи на изследване

1. Бактериологичен.

2. Микроскопични.

Напредък на изследванията

Втори ден на изследване

Извадете чашите от термостата и погледнете. При наличие на съмнителни колонии се правят натривки от част от тях, оцветени по Грам и микроскопски. Ако в намазката се открият стрептококи, част от останалата колония се субкултивира в епруветки върху агар със серум за изолиране на чиста култура и върху бульон с кръв в епруветки. До края на деня 5-6-часова култура от бульон или агар се субкултивира върху бульон на Marten с 0,25% глюкоза, за да се определи серологичната група в реакцията на утаяване на Lensfield. Епруветките и флаконите се поставят в термостат и се оставят до следващия ден.

Трети ден изследвания

Културите се изваждат от пещта, чистотата на културата се проверява върху наклонения агар, правят се петна, оцветяват се по Грам и се микроскопират. При наличие на чиста култура от стрептококи те се засяват върху среда на Hiss (лактоза, глюкоза, малтоза, захароза и манитол), мляко, желатин, 40% жлъчка и се поставят в термостат.

Разгледайте бульона на Мартин. При наличие на специфичен растеж се провежда преципитационен тест на Lensfield за определяне на серологичната група.

Настройка на реакцията на утаяване според Ленсфийлд. Дневната култура, отглеждана върху бульона на Мартин, се излива в няколко центрофужни епруветки, центрофугирани за 10-15 минути (3000 rpm).

Супернатантата се излива в буркан с дезинфекционен разтвор, а утайката се излива в стерилен изотоничен разтвор на натриев хлорид и отново се центрофугира. Към утайката, събрана от всички центрофужни епруветки, добавете 0,4 ml 0,2% солна киселина. След това епруветката се поставя на водна баня и се вари 15 минути, като периодично се разклаща. След кипене получената суспензия отново се центрофугира. След това антигенът се екстрахира в супернатантата, която се излива в чиста епруветка и се неутрализира с 0,2% разтвор на натриев хидроксид до рН 7,0-7,2. Като индикатор се добавя бромотимолово синьо (0,01 ml от 0,04% разтвор). При тази реакция цветът се променя от сламеножълт на син.

След това 0,5 ml серуми от антистрептококова група, които се приготвят чрез имунизиране на зайци, се изсипват в 5 епруветки за утаяване (виж Глава 19). Серум A се въвежда в 1-ва епруветка, серум B във 2-ра, серум C в 3-та, серум D в 4-та, изотоничен разтвор на натриев хлорид (контролен) в 5-та. След това с пастьорска пипета полученият екстракт (антиген) внимателно се наслоява по стената във всички епруветки.

При положителна реакция в епруветка с хомоложен серум на границата на екстракта със серум се образува тънък млечнобял пръстен (фиг. 38).

Четвърти ден на изследване

Резултатите се записват (Таблица 25).

В момента се определя дезоксирибонуклеаза, както и антистрептохиалуронидаза, антистрептолизин-О.

тестови въпроси

1. Какви са основните методи за лабораторно изследване за откриване на стрептококи, които познавате?

2. За какво е реакцията на утаяване на Ленсфийлд?

3. Защо антигенът трябва да е прозрачен по време на тази реакция? Опишете техниката за поставяне на тази реакция.

Вземете антистрептококов серум A, B, C, D и изотоничен разтвор на натриев хлорид от учителя. Задайте реакцията на утаяване, покажете резултатите на учителя и нарисувайте.

Хранителни среди

агар с кръв(вижте глава 7).

Серумен агар(вижте глава 7).

Медиите му(сух).

Месен пептонен желатин (MPG). Към 100 мл МПБ се добавят 10-15 г ситно нарязан желатин. Желатинът трябва да набъбне при бавно нагряване на водна баня (при температура 40-50 ° C). 10% разтвор на натриев карбонат (сода за хляб) се добавя към разтопения желатин и рН се регулира до 7,0. След това веднага се филтрира през нагънат филтър. Филтрирането е бавно. За да се ускори процесът, филтрирането може да се извърши в горещ автоклав. Филтрираната среда се излива в епруветки от 6-8 ml и се стерилизира. Стерилизацията се извършва или частично при температура 100 ° C в продължение на 3 дни подред, или едновременно при 110 ° C в продължение на 20 минути в автоклав. Охлаждането на средата се извършва в епруветки, поставени вертикално.

Приготвяне на мляко. Прясното мляко се довежда до кипене, поставя се на хладно място за едно денонощие, освобождава се от сметаната, отново се вари. Оставете за един ден и отстранете горния слой. Обезмасленото мляко се филтрира през слой памучна вата, след което се алкализира с 10% разтвор на натриев карбонат до рН 7,2 и се излива в епруветки от 5-6 ml.

Бульон Мартин. Равно количество пептон Marten (кайма от свински стомаси, изложени на солна киселина) се добавя към водата за месо. Получената смес се вари 10 минути, алкализира се с 10% разтвор на натриев хидроксид до рН 8,0, добавя се 0,5 натриев ацетат, отново се вари и се изсипва в стерилни съдове. В бульона на Мартин се добавя 0,25% глюкоза.

Сряда Кит - Тароци(вижте глава 34).

Streptococcus pneumoniae (пневмококи)

Пневмококите са описани за първи път от R. Koch (1871).

Морфология. Пневмококите са диплококи, при които страните на клетките, обърнати една към друга, са сплескани, а срещуположните страни са удължени, поради което имат копиевидна форма, наподобяваща пламък на свещ (виж фиг. 4). Размерът на пневмококите е 0,75-0,5 × 0,5-1 μm, те са разположени по двойки. В течни хранителни среди те често образуват къси вериги, наподобяващи стрептококи. Превмококите са неподвижни, нямат спори, образуват капсула в тялото, която обгражда и двата кока. Капсулата съдържа топлоустойчиво вещество антифагин (което предпазва пневмокока от фагоцитоза и действието на антитела). При отглеждане на изкуствени хранителни среди пневмококите губят капсулата си. Пневмококите са грам положителни. Грам-отрицателни бактерии се срещат в стари култури.

отглеждане. Пневмококите са факултативни анаероби. Расте при температура 36-37 ° C и рН 7,2-7,4. Те са взискателни към средата, тъй като не могат да синтезират много аминокиселини, поради което растат само върху среда с добавяне на естествен протеин (кръв или серум). На агар със серум се образуват малки, деликатни, сравнително прозрачни колонии. Върху агар с кръв растат влажни зеленикаво-сиви колонии, заобиколени от зелена зона, която е резултат от превръщането на хемоглобина в метхемоглобин. Пневмококите растат добре в бульон с добавяне на 0,2% глюкоза и в бульон със суроватка. Растежът в течна среда се характеризира с дифузна мътност и прахообразна утайка на дъното.

Ензимни свойства. Пневмококите имат доста изразена захаролитична активност. Те разграждат: лактоза, глюкоза, захароза, малтоза, инулин с образуването на киселина. Не ферментирайте манитол. Техните протеолитични свойства са слабо изразени: те коагулират млякото, не втечняват желатина и не образуват индол. Пневмококите се разтварят в жлъчката. Разцепването на инулин и разтварянето му в жлъчката е важна диагностична характеристика, която разграничава Streptococcus pneumoniae от Streptococcus pyogenes.

фактори на патогенност. Пневмококите произвеждат хиалуронидаза, фибринолизин и др.

образуване на токсини. Пневмококите произвеждат ендотоксин, хемолизин, левкоцидин. Вирулентността на пневмококите също се свързва с наличието на антифагин в капсулата.

Антигенна структура и класификация. В цитоплазмата на пневмококите има протеинов антиген, общ за цялата група, а в капсулата има полизахариден антиген. Според полизахаридния антиген всички пневмококи са разделени на 84 серовара. Серовари I, II, III са най-честите патогени за хората.

Устойчивост на околната среда. Пневмококите принадлежат към групата на нестабилните микроорганизми. Температура от 60 ° C ги унищожава за 3-5 минути. Те са доста устойчиви на ниски температури и изсушаване. В изсъхнали храчки те остават жизнеспособни до 2 месеца. На хранителна среда те остават не повече от 5-6 дни. Ето защо при култивиране е необходимо да се извършва повторно засяване на всеки 2-3 дни. Конвенционалните разтвори на дезинфектанти: 3% фенол, сублимат в разреждане 1:1000 ги унищожават за няколко минути.

Пневмококите са особено чувствителни към оптохин, който ги убива при разреждане 1:100 000.

Възприемчивост на животните. Хората са естествен гостоприемник на пневмококите. Пневмококите обаче могат да причинят заболяване при телета, агнета, прасенца, кучета и маймуни. От опитните животни белите мишки са силно чувствителни към пневмококи.

Източници на инфекция. Болен човек и бактерионосител.

Пътища на предаване. Пренася се във въздуха, може да бъде във въздуха.

входна порта. Лигавицата на горните дихателни пътища, очите и ухото.

Заболявания при хората. Пневмококите могат да причинят гнойно-възпалителни заболявания с различна локализация. Специфични за пневмококите са:

1) лобарна пневмония;

2) пълзяща язва на роговицата;

Най-често срещаното заболяване е крупозната пневмония, която засяга един, по-рядко два или три дяла на белия дроб. Заболяването протича остро, придружено от висока температура, кашлица. Обикновено завършва критично.

Имунитет. След заболяването остава нестабилен имунитет, тъй като пневмонията се характеризира с рецидиви.

Предотвратяване. Това се свежда до санитарни и превантивни мерки. Не е разработена специфична профилактика.

Лечение. Използват се антибиотици – пеницилин, тетрациклин и др.

тестови въпроси

1. Морфология на пневмококите. Култивиране и ензимни свойства.

2. Какви фактори определят патогенността на пневмококите и какво предпазва пневмококите от фагоцитоза?

3. Кои са основните входни врати на пневмококовата инфекция. Какви заболявания се причиняват от пневмококи?

Микробиологични изследвания

Целта на изследването: откриване на пневмокок.

Изследователски материал

1. Храчки (пневмония).

2. Слуз от фаринкса (тонзилит).

3. Секреция от язвата (пълзяща язва на роговицата).

4. Секреция от ухото (отит на средното ухо).

5. Гной (абсцес).

6. Плеврален пунктат (плеврит).

7. Кръв (съмнение за сепсис).

1 (По-добре е да вземете сутрешна храчка (при специфична пневмония храчката има ръждив цвят).)

Основни методи на изследване

1. Микроскопичен.

2. Микробиологични.

3. Биологичен.

Напредък на изследванията

биологична проба. Малко (3-5 ml храчка) се емулгира в стерилен бульон, 0,5 ml от тази смес се инжектира интраперитонеално на бяла мишка. След 6-8 часа мишките показват признаци на заболяването. По това време вече може да се открие пневмокок в ексудата на коремната кухина. Ексудатът се взема със стерилна спринцовка. От него се правят натривки, оцветяват се по Грам и се микроскопират. За да се изолира чиста култура, ексудатът се инокулира върху агар със серум. Ако мишката умре или се разболее, кръвта се култивира от сърцето върху серумен агар, за да се изолира чиста култура. Културите се поставят в термостат.

Ускорен метод за определяне на вида на пневмокока(реакция на микроаглутинация). 4 капки ексудат от коремната кухина на заразена мишка се нанасят върху предметно стъкло. Към първата капка се добавя аглутиниращ серум тип I, към втората - серум от тип II, към третата - изотоничен разтвор на натриев хлорид (контролен) - към четвъртата.

Серумите тип I и II са предварително разредени в съотношение 1:10, а серумът тип III - 1:5. Всички капки се разбъркват, изсушават, фиксират и оцветяват с разреден магента. При положителен резултат в една от капките се отбелязва микробна агрегация (аглутинация).

Втори ден на изследване

Културите се изваждат от термостата, изследват се и се правят намазки от съмнителни колонии. При наличие на грам-положителни ланцетни диплококи в намазки се изолират 2-3 колонии върху наклонен агар със серум за получаване на чиста култура. Културите се поставят в термостат. От бульона се правят натривки, оцветяват се по Грам и се микроскопират.

Трети ден изследвания

Културите се отстраняват от термостата. Проверете чистотата на културата - направете цитонамазки, оцветете по Грам и микроскопирайте. Ако в изолираната култура присъстват грам-положителни ланцетни диплококи, изолираната култура се идентифицира чрез инокулация:

1) върху средата на Hiss (лактоза, глюкоза, захароза, малтоза), засяването се извършва по обичайния начин - чрез инжектиране в средата;

2) върху среда с инулин;

3) върху средата с оптохин;

4) поставете проба с жлъчка.

Инулин тест. Изследваната култура се посява върху хранителна среда, съдържаща инулин и лакмусова тинктура, и се поставя в термостат. След 18-24 часа посевите се изваждат от термостата. При наличие на пневмококи средата става червена (стрептококите не променят консистенцията и цвета на средата).

Определяне на чувствителността към оптохин. Изолираната култура се посява върху 10% кръвен агар, съдържащ оптохин 1:50 000. Пневмококите, за разлика от стрептококите, не растат върху среда, съдържаща оптохин.

Тест на жлъчката. 1 ml от изследваната бульонна култура се излива в аглутинационни епруветки. Към една от тях се добавя капка заешка жлъчка, втората епруветка служи за контрола. И двете епруветки се поставят в термостат. След 18-24 часа настъпва лизиране на пневмококи, което се изразява в избистряне на мътен бульон. При контролата суспензията остава мътна.

Проба с жлъчка може да се постави върху плътна хранителна среда. За да направите това, зърно суха жлъчка се прилага върху колония от пневмококи, отглеждани в агар и серумни плочи - колонията се разтваря - изчезва.

Четвърти ден на изследване

Резултатите се записват (Таблица 26).

Забележка. до - разграждането на въглехидратите с образуването на киселина.

В момента серологичните методи за изследване (RSK и RIGA) се използват широко за определяне на стрептококови антитела. Определянето на групата и серовара на изолираната култура се извършва с помощта на флуоресцентни антитела.

Определяне на пневмококова вирулентност. Ежедневна бульонна култура от пневмококи се разрежда с 1% пептонна вода от 10 -2 до 10 -8, 0,5 ml от всяко разреждане се прилага на две бели мишки. Културата, която е причинила смъртта на мишки при разреждане 10 -7, се оценява като вирулентна, при разреждане 10 -4 -10 -6 се счита за умерено вирулентна. Културата, която не е причинила смъртта на мишки, е авирулентна.

тестови въпроси

1. Какви методи за изолиране на чиста култура от пневмококи познавате?

2. Кое животно е най-податливо на пневмококи?

3. Какви реакции се прилагат с ексудат от заразена мишка и с каква цел?

4. От кои представители на пиогенните коки трябва да се диференцира пневмококът и с какво изследване?

5. Как да се определи вирулентността на пневмококите?

Упражнение

Направете схема за изследване на храчки, като посочите нейните етапи по дни.

Хранителни среди

Серумен агар(вижте глава 7).

Суроватъчен бульон(вижте глава 7).

агар с кръв(вижте глава 7).

Медиите му(сух).

Инулинова тестова среда. Към 200 ml дестилирана вода се добавят 10 ml инактивиран говежди серум, 18 ml лакмусова тинктура и 3 g инулин. Стерилизирайте с течаща пара при 100°C в продължение на 3 последователни дни. Жлъчен бульон (вижте глава 7).

КАТЕГОРИИ

Прожекция

Ултразвук на крайници

Видове ултразвук

ултразвук на корема

ултразвук на гръдния кош

ПОПУЛЯРНИ СТАТИИ

	Колко време отнема дексаметазонът да започне да действа?
	Мексидол таблетки как да приемате преди или след хранене
	Postinor - инструкции за употреба
	Малко кръв в тялото - причини, симптоми, лечение Забавете усвояването на желязото
	Pont du Gard: най-високият древен римски акведукт в света Паметник на архитектурата и историята на Франция®

2022 "kingad.ru" - ултразвуково изследване на човешки органи