Analiza për sifilizin ELISA - dekodimi i analizës. Norma dhe devijimet

Në lidhje me zhvillimin e teknologjive qelizore, biologjisë molekulare, gjenetikës, fizikës, kimisë dhe një sërë disiplinash të tjera të teknologjisë së lartë, metoda të reja me precizion dhe teknologji të lartë po futen në praktikën e përditshme. Këto prirje ndërdisiplinore prekin si fushën e njohurive mjekësore ashtu edhe fushat e lidhura me problemet biologjike dhe biokimike. Gjatë dhjetë viteve të fundit, një metodë e diagnostifikimit laboratorik klinik të quajtur immunoassay enzimë është bërë e përhapur dhe është futur në praktikën masive.

Në përgjithësi, teknologjitë e reaksioneve imunologjike enzimatike dhe radiologjike janë përdorur gjerësisht në tipizimin e qelizave, kulturave qelizore dhe indeve të ndryshme që nga fillimi i viteve 1980. Megjithatë, këto metoda ishin shumë të mundimshme, jo të unifikuara, të pa standardizuara, gjë që përjashtonte përdorimin e tyre për qëllime mjekësore dhe diagnostike në një shkallë masive. Vetëm laboratorë të ngushtë, me njohuri intensive dhe shumë të specializuara përdorën metoda të tilla.

Megjithatë, me zhvillimin e teknologjisë, mikroteknologjisë dhe prodhimit të materialeve të ndryshme biopolimere, është bërë i mundur prodhimi i kompleteve të gatshme të analizës së enzimës që mund të përdoren nga laboratorët e institucioneve të përgjithshme mjekësore. ELISA përdoret gjerësisht për diagnostikimin e të gjitha llojeve të infeksioneve (klamidia, sifilis, citomegalovirus, toksoplazmozë, herpes etj.), si akute dhe kronike, si dhe format latente që ndodhin pa simptoma klinike.Kjo metodë përdoret edhe për të kontrolluar sëmundjet kronike. . Le të përpiqemi të kuptojmë se çfarë lloj metode është dhe cilat parime e mbështesin atë?

Komponentët e imuno-analizimit enzimë - Reaksioni imunitar dhe reaksioni enzimatik

Analiza e imunitetit enzimë, siç nënkupton edhe emri, përbëhet nga dy komponentë të ndryshëm - një përgjigje imune dhe një reaksion enzimatik. Reaksioni imunitar prodhon lidhjen e molekulave biologjike, elementeve të qelizës ose mikroorganizmave, të cilat në të vërtetë përpiqen t'i zbulojnë, dhe reaksioni enzimatik ju lejon të shihni dhe matni rezultatin e reaksionit imunologjik. Kjo do të thotë, përgjigja imune është pjesë e një teknike komplekse që në të vërtetë zbulon mikrobin e dëshiruar. Dhe reaksioni enzimatik është ajo pjesë e një teknike komplekse që ju lejon të përktheni rezultatin e një reaksioni imunitar në një formë që është e dukshme për syrin dhe e arritshme për matje me metoda kimike rutinë. Bazuar në këtë strukturë të metodës së imuno-analizimit enzimë, do t'i analizojmë veçmas të dyja pjesët e saj.

Reagimi imunitar, çfarë është? Çfarë është një antitrup apo antigjen?

Çfarë është një përgjigje imune? Çfarë është një antigjen?
Para së gjithash, le të shohim se cilat janë reagimet imune. reaksionet imune- Këto janë reagime specifike të lidhjes së një antigjeni me një antitrup me formimin e një kompleksi imunitar. Çfarë do të thotë? Në sipërfaqen e çdo qelize të çdo organizmi ka struktura të veçanta të quajtura antigjenet. Antigjenet në përgjithësi janë molekula që mbartin informacione për një qelizë (të ngjashme me informacionin në simbolin e një personi, i cili tregon të dhënat bazë të këtij personi).

Antigjenet individuale dhe të specieve - çfarë është? Pse nevojiten këto antigjene?

Në dispozicion antigjenet individuale, domethënë e natyrshme vetëm për këtë organizëm të veçantë. Këto antigjene individuale janë të ndryshme për të gjithë njerëzit, disa janë të ngjashëm me njëri-tjetrin, por ende të ndryshëm. Nuk ka dy kopje identike të antigjeneve individuale në natyrë!

Lloji i dytë kryesor i antigjeneve është antigjenet e specieve, domethënë e natyrshme në çdo lloj të caktuar të qenieve të gjalla. Për shembull, njerëzit kanë antigjenin e tyre të llojit të përbashkët për të gjithë njerëzit, minjtë kanë antigjenin e tyre të specieve të miut, etj. Në sipërfaqen e çdo qelize, një antigjen specifik dhe individual është domosdoshmërisht i pranishëm.

Antigjeni i llojit përdoret nga qelizat e sistemit imunitar për të identifikuar "mikun ose armikun".

Si ndodh njohja e antigjenit?

Një qelizë imune lidhet me një qelizë të dyshimtë dhe kryen identifikimin pikërisht nga një antigjen individual. Në kujtesën e qelizës imune, "shënohet" se si duket "antigjeni i saj". Kështu, nëse antigjeni i një qelize të dyshimtë përputhet me përshkrimin "antigjeni i vet", atëherë kjo qelizë e trupit të saj nuk përbën rrezik. Më pas qeliza imune “zgjidhet” dhe largohet. Dhe nëse antigjeni nuk përputhet me përshkrimin e "vetes", atëherë qeliza imune e identifikon këtë qelizë si "të huaj", dhe për këtë arsye potencialisht të rrezikshme për të gjithë organizmin. Në këtë rast, qeliza imune nuk "heq qafe", por fillon të shkatërrojë objektin e rrezikshëm. Saktësia e një njohjeje të tillë imunologjike është e mahnitshme - 99.97%. Nuk ka pothuajse asnjë gabim!

Çfarë është një antitrup, kompleks imunitar?
Çfarë është një antitrup?

Një antitrup është një molekulë e veçantë e vendosur në sipërfaqen e një qelize imune. Është antitrupi që lidhet me antigjenet e qelizës së dyshimtë. Më tej, antitrupi transmeton informacion brenda qelizës, ku ndodh identifikimi dhe merr një sinjal kthimi të dy llojeve, "vetë" ose "i huaj". Në sinjalin "vet", antitrupi shkatërron lidhjen me antigjenin dhe liron qelizën.

Çfarë është një kompleks imunitar?
Me sinjalin “alien”, situata shpaloset ndryshe. Antitrupi nuk e prish lidhjen me antigjenin, por përkundrazi, duke dërguar sinjale specifike, shkakton “përforcim”. Biologjikisht, kjo do të thotë që antitrupat e tjerë të vendosur në një pjesë tjetër të qelizës fillojnë të lëvizin në zonën nga vjen sinjali i rrezikut dhe gjithashtu formojnë një lidhje midis tyre dhe antigjenit të kapur. Në fund, antigjeni rezulton të jetë i rrethuar nga të gjitha anët dhe i lidhur fort.Një kompleks i tillë antigjen + antitrup quhet kompleksi imunitar. Nga ky moment fillon shfrytëzimi i antigjenit. Por tani ne nuk jemi të interesuar për detajet e procesit të neutralizimit të antigjenit.

Llojet e antitrupave (IgA, IgM, IgG, IgD, IgE)
Antitrupat janë struktura proteinike, të cilat, në përputhje me rrethanat, kanë një emër kimik, i cili përdoret si sinonim për fjalën antitrup. Kështu që, antitrupa = imunoglobulina.

Ekzistojnë 5 lloje imunoglobulinash (Ig), të cilat lidhen me lloje të ndryshme antigjenesh në vende të ndryshme të trupit të njeriut (për shembull, në lëkurë, në mukozën, në gjak, etj.). Kjo do të thotë, antitrupat kanë një ndarje të punës. Këto imunoglobulina quhen shkronjat e alfabetit latin - A, M, G, D, E dhe caktohen si më poshtë - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

Në diagnostikim, përdoret vetëm një lloj antitrupi, i cili është më specifik për mikrobin që përcaktohet. Kjo do të thotë, lidhja e këtij lloji të antitrupit me antigjenin që përcaktohet gjithmonë ndodh. Më të përdorurat janë IgG dhe IgM.

Është ky parim i përgjigjes imune (saktësia unike dhe specifika e njohjes së objektit biologjik që përcaktohet) që qëndron në themel të imuno-analizimit enzimë.Për shkak të saktësisë së lartë të antitrupave në njohjen e antigjeneve, saktësia e të gjithë metodës së imuno-analizimit enzimë është gjithashtu. me e larta.

reaksion enzimatik

Çfarë është një reaksion enzimatik? Çfarë është afiniteti, substrati dhe produkti i reagimit?
Le t'i drejtohemi shqyrtimit të reaksionit enzimatik në punën e metodës së imuno-analizimit enzimë.

Çfarë është një reaksion enzimatik?

Një reaksion enzimatik është një reaksion kimik në të cilin një substancë shndërrohet në një tjetër nga veprimi i një enzime. Substanca mbi të cilën vepron një enzimë quhet substrate. Substanca që përftohet si rezultat i veprimit të një enzime quhet produkt i reagimit. Për më tepër, veçantia e reaksionit enzimatik është e tillë që një enzimë e caktuar vepron vetëm në një substrat të caktuar. Kjo veti e një enzime për të njohur substratin e saj "të vetin" quhet afiniteti.

Kështu, çdo enzimë kryen vetëm një reagim specifik për të. Ka shumë enzima në botën biologjike, si dhe reaksione enzimatike. Në analizën e imunitetit enzimatik, përdoren vetëm disa reaksione enzimatike - jo më shumë se 10. Në këtë rast, u zgjodhën reaksione të tilla enzimatike, produktet e të cilave janë substanca me ngjyrë. Pse duhet të ngjyrosen produktet e një reaksioni enzimatik? Sepse ekziston një metodë e thjeshtë kimike për llogaritjen e përqendrimit të një substance nga një zgjidhje me ngjyrë - kolorimetria.

Metoda e kolorimetrisë - thelbi dhe parimi

Kolorimetria përdor matjen e densitetit të ngjyrës së tretësirës, ​​dhe përqendrimi i substancës llogaritet nga dendësia e ngjyrës.Në këtë rast, një pajisje e veçantë - një kolorimetër mat densitetin e ngjyrës së tretësirës. Në kolorimetri, dy variante të varësisë së densitetit të ngjyrës nga përqendrimi i një substance janë të mundshme - kjo është një varësi drejtpërdrejt proporcionale ose një varësi e kundërt proporcionale. Me një marrëdhënie proporcionale, sa më i lartë të jetë përqendrimi i substancës, aq më intensiv është densiteti i ngjyrës së tretësirës. Në një marrëdhënie të kundërt proporcionale, sa më i lartë të jetë përqendrimi i një substance, aq më i ulët është densiteti i ngjyrës së tretësirës. Teknikisht, kjo ndodh kështu: merren disa tretësira me një përqendrim të njohur të një substance, matet dendësia e këtyre tretësirave dhe vizatohet grafiku i varësisë së përqendrimit nga dendësia e ngjyrës ( grafiku i kalibrimit).

Më pas matet dendësia e ngjyrës së tretësirës, ​​përqendrimi i së cilës përcaktohet dhe sipas grafikut të kalibrimit, gjendet automatikisht vlera e përqendrimit që i përgjigjet nivelit të densitetit të matur të ngjyrës së tretësirës.

Në analizën e imunitetit enzimë, më shpesh përdoren enzimat e mëposhtme: peroksidaza, fosfataza alkaline, avidina.

Si kombinohen reaksionet imunologjike dhe enzimatike në imuno-analizimin enzimatik? Tani i drejtohemi shqyrtimit të vetë analizës imunosorbente të lidhur me enzimën. Çfarë hapash përfshin dhe çfarë ndodh gjatë këtyre reagimeve? Analiza e imunitetit enzim është direkte dhe indirekte.

Analiza direkte e imunitetit të enzimës - fazat e zbatimit

Në një analizë të drejtpërdrejtë enzimë imunologjike, përdoren antitrupa ndaj antigjenit të zbuluar, të kombinuara me një etiketë specifike. Ky emërtim specifik është substrati i reaksionit enzimatik.

Ngjitja e antigjeneve në sipërfaqen e pusit dhe lidhja e antigjenit me antitrupat

Si kryhet një imunoterapi direkt me enzimë? Merret materiali biologjik (gjaku, gërvishtjet nga mukozat, njollat) dhe vendoset në puse të posaçme. Materiali biologjik lihet në puse për 15-30 minuta në mënyrë që antigjenet të ngjiten në sipërfaqen e puseve. Më tej, antitrupat ndaj antigjenit të zbuluar shtohen në këto puse. Kjo do të thotë që kur zbulohen antigjenet, për shembull, sifilizi, shtohen antitrupa kundër antigjeneve të sifilizit. Këto antitrupa prodhohen në mënyrë industriale dhe laboratorët blejnë komplete të gatshme.Kjo përzierje e materialit testues dhe antitrupave lihet për ca kohë (nga 30 minuta deri në 4-5 orë) në mënyrë që antitrupat të gjejnë dhe të lidhen me antigjenin “e tyre”. mostra e antigjeneve, aq më shumë antitrupa do të lidhen me to.

Heqja e antitrupave "ekstra".

Siç tregohet, antitrupat shoqërohen gjithashtu me një etiketë specifike. Meqenëse antitrupat shtohen me tepricë, jo të gjithë do të lidhen me antigjenet, dhe nëse nuk ka fare antigjen në mostër, atëherë, në përputhje me rrethanat, asnjë antitrup i vetëm nuk do të lidhet. ndaj antigjenit të dëshiruar. Për të hequr antitrupat "shtesë", përmbajtja e puseve thjesht derdhet. Si rezultat, të gjitha antitrupat "shtesë" hiqen dhe ato që kanë kontaktuar antigjenet mbeten, pasi antigjenet "ngjiten" në sipërfaqen e puseve. Puset shpëlahen disa herë me një zgjidhje të veçantë që ju lejon të lani të gjithë antitrupat "shtesë".

Pastaj fillon faza e dytë - reaksioni enzimatik. Tretësira me enzimën shtohet në pusetat e lara dhe lihet 30-60 minuta. Kjo enzimë ka një afinitet për substancën (etiketën specifike) me të cilën lidhen antitrupat. Enzima kryen një reaksion, si rezultat i të cilit kjo etiketë specifike (substrat) shndërrohet në një substancë (produkt) me ngjyrë. Pastaj përqendrimi i kësaj lënde me ngjyrë gjendet me kolorimetri. Meqenëse kjo etiketë specifike shoqërohet me antitrupa, do të thotë që përqendrimi i produktit të reagimit me ngjyrë është i barabartë me përqendrimin e antitrupave. Dhe përqendrimi i antitrupave është i barabartë me përqendrimin e antigjeneve. Kështu, si rezultat i analizës, marrim përgjigjen se cili është përqendrimi i mikrobit apo hormonit të zbuluar.

Kështu funksionon analiza e drejtpërdrejtë e imunitetit me enzimë. Megjithatë, analiza e imunitetit indirekt me enzimë përdoret më shpesh sot, sepse ndjeshmëria dhe saktësia e indirektit është më e lartë se ajo e drejtpërdrejtë. Pra, le të kalojmë në imuno-analizimin indirekt të enzimës.

Analiza e imunitetit indirekt enzimë - hapa

Ekzistojnë dy faza në analizën e imunitetit të enzimës indirekte. Gjatë fazës së parë përdoren antitrupa të paetiketuar ndaj antigjeneve të zbuluara dhe në fazën e dytë përdoren antitrupa të etiketuar kundër antitrupave të parë të paetiketuar. Kjo do të thotë, nuk rezulton lidhja e drejtpërdrejtë e antitrupit me antigjenin, por një kontroll i dyfishtë: lidhja e antitrupave me antigjenin, pas së cilës lidhja e antitrupit të dytë me kompleksin antitrup + antigjen. Si rregull, antitrupat për fazën e parë janë të miut, dhe për fazën e dytë të dhisë.

Fiksimi i antigjeneve në sipërfaqen e pusit dhe lidhja e antigjenit me antitrupat e paetiketuar
Si dhe për analizën direkte të enzimës, merret material biologjik - gjak, gërvishtje, njolla. Materiali biologjik i studiuar futet në puset dhe lihet për 15-30 minuta që antigjenet të ngjiten në sipërfaqen e puseve. Më pas, antitrupat e paetiketuar ndaj antigjeneve shtohen në puset dhe lihen për një periudhë kohore (1-5 orë) në mënyrë që antitrupat të lidhen me antigjenet "e tyre" dhe të formojnë një kompleks imunitar ( faza e parë). Pas kësaj, antitrupat "shtesë", të palidhur hiqen duke derdhur përmbajtjen e puseve. Larja kryhet me një zgjidhje të veçantë për të hequr plotësisht të gjithë antitrupat e palidhur.

Lidhja e antitrupave të etiketuar me antigjenin + kompleksin e antitrupave të paetiketuar
Pas kësaj, merren antitrupat e dytë - etiketohen, shtohen në puse dhe përsëri lihen për një kohë - 15-30 minuta ( faza e dytë). Gjatë kësaj kohe, antitrupat e etiketuar lidhen me të parën - jo të etiketuar dhe formojnë një kompleks - antitrup + antitrup + antigjen. Megjithatë, të dy antitrupat e etiketuar dhe të paetiketuar shtohen në puset me tepricë. Prandaj, është e nevojshme të hiqen përsëri antitrupat "ekstra", tashmë të etiketuar që nuk lidhen me antitrupat e paetiketuar. Për ta bërë këtë, përsërisni procedurën e derdhjes së përmbajtjes së puseve dhe larjes me një zgjidhje të veçantë.

Reaksioni enzimatik - formimi i një përbërjeje me ngjyrë
Pas kësaj, futet një enzimë që kryen reaksionin e shndërrimit të "etiketës" në një substancë me ngjyrë. Ngjyra zhvillohet brenda 5-30 minutave. Më pas kryhet kolorimetria dhe llogaritet përqendrimi i substancës së ngjyrosur. Meqenëse përqendrimi i substancës së ngjyrosur është i barabartë me përqendrimin e antitrupave të etiketuar, dhe përqendrimi i etiketuar është i barabartë me përqendrimin e antitrupave të paetiketuar, i cili, nga ana tjetër, është i barabartë me përqendrimin e antigjenit. Kështu, marrim përqendrimin e antigjenit të zbuluar.
Një kontroll i tillë i dyfishtë në formën e përdorimit të dy llojeve të antitrupave bëri të mundur rritjen e ndjeshmërisë dhe specifikës së metodës së imuno-analizimit enzimë. Pavarësisht zgjatjes së kohës së analizës dhe përfshirjes së fazave shtesë, këto humbje kompensohen nga saktësia e rezultatit. Kjo është arsyeja pse aktualisht shumica dërrmuese e metodave të imuno-analizimit enzimë janë analiza indirekte enzimatike.

Cilat sëmundje zbulohen me anë të analizës enzimatike?

Le të kalojmë në shqyrtimin e sëmundjeve dhe cilat substanca biologjikisht aktive zbulohen nga analiza e imunitetit të enzimës. Substancat e zbuluara nga analiza enzimatike janë paraqitur në tabelë.

Hormonet dhe shënuesit e sëmundjes së tiroides	tiroperoksidaza (TPO)
	tiroglobulina (TG)
	Hormoni stimulues i tiroides (TSH)
	Tiroksina (T4)
	Triiodothyronine (T3)
	Tiroksinë e lirë (T4)
	Triiodothyronine falas (T3)
Diagnostifikimi i funksionit riprodhues	hormoni luteinizues (LH)
	Hormoni stimulues i folikulit (FSH)
	Prolaktina
	Progesteroni
	Estradiol
	Testosteroni
	kortizolit
	Globulina lidhëse steroide (SHB)
	Alfafetoproteina (AFP)
shënuesit e tumorit	Gonadotropina korionike (CG)
	Antigjeni specifik i prostatës (PSA)
	SA - 125
	SA - 19.9
	CYFRA-21-1
	M - 12 (SA - 15,3)
	MUC-1 (M-22)
	MUC1 (M–20)
	Alveomucina
	K - zinxhir
	L - zinxhir
	Faktori i nekrozës së tumorit (TNFα)
	γ - interferon
	Antigjeni kancero-embrional (CEA)
Diagnoza e sëmundjeve infektive

ELISA është një studim laboratorik modern, gjatë të cilit kërkohen antitrupa (ose antigjene) specifike të gjakut për sëmundje specifike për të identifikuar jo vetëm etiologjinë, por edhe stadin e sëmundjes.

1. kërkimi i antitrupave specifikë ndaj ndonjë sëmundjeje infektive;
2. kërkimi i antigjeneve të ndonjë sëmundjeje infektive;
3. studimi i gjendjes hormonale të pacientit;
4. ekzaminimi për praninë e sëmundjeve autoimune.

Si me çdo metodë të diagnostikimit laboratorik, ELISA ka avantazhet dhe disavantazhet e saj. Përparësitë e metodës përfshijnë:

1. specifikiteti dhe ndjeshmëria e lartë e metodës (më shumë se 90%);
2. aftësia për të përcaktuar sëmundjen dhe për të ndjekur dinamikën e procesit, domethënë një krahasim i sasisë së antitrupave në intervale të ndryshme kohore;
3. disponueshmëria dhe shpejtësia e këtij studimi;
4. metoda jo-invazive e marrjes së mostrave të materialit nuk është një studim;

Disavantazhi i metodës është fakti se gjatë analizës është e mundur të identifikohet jo agjenti shkaktar i sëmundjes, por vetëm përgjigja imune ndaj saj (antitrupat).

Thelbi i metodës ELISA

Ekzistojnë disa lloje të ELISA: direkte, indirekte, metoda bllokuese, konkurruese. Megjithatë, në praktikë, më së shpeshti përdoret imuno-analizimi heterogjen i fazës së ngurtë ose ELISA.

Baza e analizës imunosorbente të lidhur me enzimën është reagimi imunitar i një antigjeni dhe një antitrupi me formimin e një kompleksi imunitar, që rezulton në një ndryshim në aktivitetin enzimatik të etiketave specifike në sipërfaqen e antitrupave.

Në fakt, ky proces mund të ndahet në disa faza:

1. në sipërfaqen e puseve të sistemit të testimit ekziston një antigjen i pastruar i një patogjeni të caktuar. Kur shtohet serumi i gjakut të kafshës, ndodh një reaksion specifik midis këtij antigjeni dhe antitrupit të dëshiruar;
2. më tej, një kromogen i veçantë (konjugat i etiketuar me peroksidazë) shtohet në pus. Ndodh një reaksion enzimatik, duke rezultuar në formimin e një substance me ngjyrë në pusin e tabletës. Intensiteti i ngjyrës së tij varet nga sasia e imunoglobulinave (antitrupave) që përmban serumi i kafshës;
3. Më pas vjen vlerësimi i rezultatit. Me ndihmën e një spektrofotometri shumëkanalësh, densiteti optik i materialit testues krahasohet me densitetin optik të mostrave të kontrollit dhe rezultatet përpunohen matematikisht. Sasia e antitrupave në një pacient varet drejtpërdrejt nga lartësia e densitetit optik të një pusi të caktuar.

Duhet mbajtur mend: për secilin sistem testimi, zhvillohen tregues individualë për të marrë parasysh rezultatet, treguesit e normës dhe patologjinë ("vlerat e referencës"). Kjo duhet të merret parasysh kur vlerësohen rezultatet e secilit studim specifik.

Nuk është korrekte të interpretohen rezultatet e një laboratori nga "vlerat referuese" të një laboratori tjetër. Është gjithashtu e gabuar të krahasohen rezultatet e laboratorëve të ndryshëm me njëri-tjetrin.

Kur vlerësohen rezultatet për infeksione specifike, klasa e antitrupave të zbuluar dhe numri i tyre janë të rëndësishme. Nga kjo varet jo vetëm çështja e etiologjisë së infeksionit, por edhe faza e pritshme e sëmundjes (akute, kronike), si dhe prania e një infeksioni aktiv (akut ose përkeqësimi kronik) në kohën e ekzaminimit. .

Cila është koha e përafërt e shfaqjes së antitrupave?

Antitrupat më të hershëm janë IgM. Ato mund të zbulohen 1-3 javë pas një infeksioni të mundshëm, i cili karakterizon fazën akute të procesit infektiv. Situata e dytë e shfaqjes së antitrupave IgM është një përkeqësim i një procesi kronik. IgM qarkullojnë mesatarisht për rreth 3 muaj, pastaj numri i tyre gradualisht zhduket. Megjithatë, në disa pacientë, sasitë e gjurmëve të IgM mund të zbulohen brenda 1-2 viteve nga infektimi.

Nga java e 4-të pas infektimit fillojnë të shfaqen antitrupat IgG. Në shumicën e infeksioneve, titri i tyre rritet gradualisht me një maksimum në kohë të ndryshme (mesatarisht, pas 1,5-2 muajsh), atëherë titri mbetet në nivel të ulët dhe tregon imunitet. Në disa sëmundje, niveli i IgG nuk është i lartë.

Opsionet e zbulimit të antitrupave

• Zbulimi i izoluar i antitrupave IgM sugjeron një infeksion primar.
• Zbulimi i njëkohshëm i IgM dhe IgG në gjak është tipik për infeksionin parësor në 2-3 muajt e mëparshëm, si dhe gjatë një përkeqësimi të një sëmundjeje kronike.
• Zbulimi i IgG në izolim mund të tregojë si imunitetin ndaj sëmundjes ashtu edhe infeksionin kronik. Në situatën e dytë, ka rëndësi si sasia e antitrupave (titri) ashtu edhe ndryshimi i këtij titri me kalimin e kohës. Në mënyrë tipike, studimet kryhen në intervale prej 2-4-6 javësh.

Analiza ELISA është një teknikë moderne për diagnostikimin laboratorik të një numri të konsiderueshëm sëmundjesh të ndryshme. Shkurtesa qëndron për immunoassay enzimë. Thelbi i teknikës është përcaktimi i titrit (aktivitetit) të antitrupave.

Teknika ELISA po fiton popullaritet të konsiderueshëm sot. Përdoret në mjekësinë klinike për diagnostikimin e patologjive të ndryshme, si dhe në studimet eksperimentale që kërkojnë përcaktimin e saktë të përqendrimit të përbërësve të ndryshëm në mjediset e studiuara.

Parimi i teknikës ELISA

ELISA është një reaksion imunologjik. Ai bazohet në shtimin e antitrupave specifikë
ose antigjene në mjedisin e provës (më shpesh në gjakun e provës) me përcaktimin e mëvonshëm enzimatik të përqendrimit të komplekseve antigjen-antitrupa që rezultojnë. Nga përqendrimi i kompleksit, mund të gjykohet niveli ose aktiviteti i analitit në mjedisin e provës.

Përcaktimi i përqendrimit të komplekseve antigjen-antitrup zakonisht kryhet duke përdorur pajisje speciale me metodën kromatografike.

Indikacionet për kryerjen

Analiza ELISA kryhet për indikacione të ndryshme, kryesoret në mjekësinë klinike janë:

• Diagnoza e patologjisë infektive me një transmetim kryesisht seksual (IST), e cila përfshin klamidia, mykoplazmoza, ureaplasmosis, trikomoniaza, ndërsa zbulohen antitrupa specifikë ndaj agjentit infektiv.
• Diagnoza e sëmundjeve infektive të lokalizimit të ndryshëm për të përcaktuar fazën e procesit patologjik, kryesisht në procesin e diagnostikimit të hepatitit viral parenteral dhe HIV.
• Përcaktimi i përqendrimit të hormoneve për diagnostikimin e patologjive të ndryshme të organeve të sistemit endokrin (gjëndra endokrine).
• Përcaktimi i komponimeve të ndryshme për diagnostikimin e shkakut të dehjes së trupit në rast helmimi, pickimi nga insektet ose gjarpërinjtë.

Me këto indikacione mjekësore, kryhet një test gjaku ELISA. Gjithashtu, kjo teknikë përdoret në mënyrë aktive në mjekësinë eksperimentale gjatë studimeve të ndryshme klinike gjatë zhvillimit të barnave të reja, vaksinave për imunoprofilaksinë.

Si bëhet studimi

Një test gjaku ELISA kryhet në një laborator të specializuar. Më parë, për zbatimin e tij, merret gjak venoz, zakonisht nga vena kubitale në një vëllim 5-10 ml, i cili më pas dërgohet në laborator. Mesatarisht, rezultati i analizës mund të merret të nesërmen, gjë që është një pikë e rëndësishme për caktimin e menjëhershëm të trajtimit pas vendosjes së diagnozës së sëmundjes.

Si të përgatiteni për ELISA

Për të marrë rezultate të besueshme të studimit me anë të imuno-analizimit enzimë, duhet të ndiqni disa rekomandime të thjeshta përgatitore, të cilat përfshijnë:

• Një ditë para testit, duhet të ndaloni së ngrëni ushqime yndyrore (mish, mish të tymosur) dhe alkool.
• Materiali për hulumtim duhet të merret në mëngjes në stomak bosh.
• Në ditën e studimit, është e dëshirueshme të shmanget stresi fizik dhe psiko-emocional.
• Para studimit, duhet të përpiqeni të mos pini duhan.

Shumica e rezultateve të rreme pozitive të marra nga analiza e imunitetit të enzimës janë për shkak të zbatimit jo të duhur të rekomandimeve përgatitore. Kjo në të shumtën e rasteve shoqërohet me ngrënien e ushqimeve të yndyrshme, të cilat çojnë në një rritje të përqendrimit të triglicerideve (yndyrave) në plazmën e gjakut, të cilat reduktojnë specifikën e ELISA-s.

Deshifrimi i rezultateve

Testi i gjakut për antitrupat duke përdorur ELISA ka 2 modifikime - përcaktimin cilësor dhe sasior. Në
përcaktimi cilësor i antitrupave, rezultati mund të jetë pozitiv (zbulohen antitrupa, gjë që tregon praninë e mundshme të një procesi patologjik të shkaktuar nga agjenti infektiv) ose negativ (pa antitrupa, gjë që tregon mungesën e një procesi infektiv).

Mungesa e antitrupave nuk është gjithmonë një tregues 100% i mungesës së një procesi infektiv. Kjo për faktin se pas infeksionit, antitrupat nuk formohen menjëherë, por në një periudhë të caktuar kohore (të paktën rreth 2 javë). Prandaj, për të konfirmuar mungesën e infeksionit, ELISA mund të përsëritet pas një kohe.

Me ELISA sasiore, përcaktohet titri (aktiviteti) i antitrupave, si dhe klasat e tyre. Në shumicën e rasteve, për diagnostikimin e sëmundjeve infektive, përcaktohen antitrupat e klasës IgG (imunoglobulinat G) dhe IgM (imunoglobulinat M), të cilat formohen në trup në intervale të ndryshme pas infektimit, kështu që deshifrimi i rezultatit të analizës mund të ketë disa kuptime:

• Rritja e aktivitetit të IgM dhe mungesa e IgG janë dëshmi e një infeksioni të kohëve të fundit dhe një rrjedhë akute e procesit infektiv.
• Një rritje në aktivitetin e IgM dhe IgG është një përkeqësim i procesit infektiv në rrjedhën e tij kronike dhe infeksion afatgjatë.
• Aktiviteti i lartë i IgG dhe mungesa e IgM është një rrjedhë kronike e procesit infektiv në sfondin e një infeksioni të gjatë, pas së cilës kanë kaluar më shumë se gjashtë muaj (koha e nevojshme për formimin e antitrupave të klasës IgG).

Në përgjithësi, interpretimi i rezultateve të ELISA për çdo proces infektiv ka veçori të caktuara. Një përcaktim më i saktë i pranisë së një sëmundjeje infektive, si dhe fazës së rrjedhës së saj, kryhet nga një mjek.

ELISA është aktualisht metoda e zgjedhur për diagnostikimin e shumicës së sëmundjeve infektive. Bazuar në rezultatet e një studimi të tillë, mjeku ka mundësinë të vendosë një diagnozë të saktë dhe të përcaktojë fazën e rrjedhës së procesit patologjik për caktimin e trajtimit të mëvonshëm adekuat dhe efektiv.

Metodat moderne të diagnostikimit bëjnë të mundur në laborator identifikimin e një sëmundjeje të veçantë me ndihmën e testeve speciale. Njëra prej tyre duhet të përfshijë analizën e imunitetit me enzimë, përmes së cilës mund të konfirmoni një diagnozë paraprake.

ELISA është një nga metodat më efektive dhe moderne për zbulimin e çrregullimeve që lidhen me dështimet imune dhe hormonale, si dhe me proceset onkologjike. Gjatë analizës në gjak, mund të zbulohen antitrupa që prodhohen kur ka një infeksion në trup. Duke pasur parasysh këtë nuancë, është e mundur të zbulohet sëmundja edhe në fazën shumë të hershme të zhvillimit të saj.

Cila është baza e metodologjisë

Rezultatet e analizës ELISA bazohen në marrjen e reaksioneve kimike ndaj enzimave që shërbejnë si shenja të veçanta identifikimi për njohjen e antitrupave. Prandaj, gjatë reaksioneve imunokimike, antitrupat fillojnë të ndërveprojnë me disa antigjene. E gjithë kjo jep bazë për të pohuar se rezultatet e rreme gjatë dhurimit të gjakut për ELISA janë minimale.

Studimi ju lejon të përcaktoni numrin e qelizave imune, vetitë e tyre, si dhe praninë e antitrupave të nevojshëm

Një rezultat pozitiv konsiderohet kur zbulohet ngjyra e tretësirës. Ngjyra tregon se antigjenet ndërveprojnë me antitrupat. Në rastin kur asgjë e tillë nuk ndodh, rezultati është negativ.

Analiza imunosorbente e lidhur me enzimën (ELISA) kryhet për një vlerësim gjithëpërfshirës të funksioneve mbrojtëse të trupit. Gjatë studimit përcaktohen numri dhe vetitë e qelizave imune, prania e antitrupave të nevojshëm. Testi i gjakut ELISA kryhet për të diagnostikuar sëmundjet infektive, hematologjike, autoimune, imunodefiçencat primare dhe dytësore. Konsideroni se çfarë është një test gjaku nga ELISA dhe cilat indikacione ekzistojnë për këtë studim.

Cfare eshte

Një test gjaku ELISA është një metodë laboratorike që zbulon antitrupat ose antigjenet në një mostër gjaku. Ky studim përdoret për të zbuluar nivelin e imunoglobulinave, komplekseve imunologjike, hormoneve.

Indikacionet për analiza

Për caktimin e një testi gjaku ELISA, ekzistojnë indikacionet e mëposhtme:

• diagnoza e infeksioneve seksualisht të transmetueshme - ureaplazma, mikoplazma, klamidia, trichomonas, sifilizi;
• diagnoza e sëmundjeve virale - citomegalovirus, herpes, hepatiti, virusi Epstein-Barr;
• përcaktimi i nivelit të hormoneve;
• diagnostikimi i sëmundjeve onkologjike;
• përcaktimi i mungesës së imunitetit;
• diagnostikimi i alergjive;
• ekzaminim gjithëpërfshirës para operacionit para transplantimit të organeve;
• vlerësimi i efektivitetit të terapisë.

Parimi i metodës

Parimi i funksionimit të metodës së imuno-analizimit enzimë bazohet në përcaktimin e proteinave-antitrupave specifikë në gjak - imunoglobulinave. Imunoglobulinat prodhohen nga sistemi imunitar i njeriut kur antigjenet (mikroorganizmat e huaj) hyjnë në trup. Këto molekula imune lidhen me një sërë agjentësh infektivë në trup dhe i neutralizojnë ato.

Imunoglobulinat kanë një karakteristikë të rëndësishme - specifikën. Për shkak të kësaj, ata mund të lidhen me një antigjen specifik, duke formuar një kompleks antigjen-antitrup. Gjatë një testi gjaku ELISA, është ky kompleks që përcaktohet në mënyrë cilësore dhe sasiore.

Ekzistojnë pesë klasa të imunoglobulinave. Por zakonisht përcaktohen tre klasa - imunoglobulinat A, M, G. Këto antitrupa grumbullohen në trup në kohë të ndryshme nga momenti i infektimit.

• Imunoglobulinat klasa M (IgM) shfaqen në gjak për herë të parë në ditën e pestë nga momenti i infektimit. Ato qëndrojnë në trup për 5-6 javë, më pas zhduken nga qarkullimi i gjakut. Antitrupat IgM tregojnë një periudhë akute të sëmundjes ose një përkeqësim të sëmundjes në rrjedhën e saj kronike.
• Përafërsisht 3-4 javë pas infektimit, imunoglobulinat shfaqen në gjak klasa G (IgG). Ato mund të ekzistojnë në gjakun e njeriut për disa muaj apo edhe vite. Sipas dekodimit të analizës së gjakut ELISA, nëse në dy mostra gjaku të marra radhazi dy javë më vonë, rritet sasia e imunoglobulinave IgG, flitet për një infeksion aktual ose riinfeksion - riinfeksion me të njëjtin infeksion.
• Imunoglobulinat klasa A (IgA) mund të zbulohet me këtë metodë kërkimore 2-4 javë pas infektimit ose përkeqësimit të një sëmundjeje infektive. Nga këto, vetëm 20% qarkullon në gjak, pjesa tjetër sekretohet nga mukozat. Antitrupat IgA zhduken nga qarkullimi i gjakut 2-8 javë pas shkatërrimit të agjentëve infektivë. Zhdukja e këtyre imunoglobulinave do të thotë një kurë për infeksionin. Nëse pas përfundimit të sëmundjes konstatohet prania e antitrupave IgA në gjak, atëherë sëmundja ka kaluar në fazën kronike.

Përgatitja për analizë

Gjaku i njeriut përdoret më shpesh për të kryer një test gjaku ELISA. Por ju gjithashtu mund të ekzaminoni përmbajtjen e trupit qelqor, lëngun cerebrospinal, lëngun amniotik.

Një mostër gjaku për hulumtim merret nga pacienti nga vena kubitale. Rekomandohet dhurimi i gjakut me stomakun bosh (duhet të kalojnë të paktën 12 orë nga momenti i vaktit të fundit). Është e nevojshme t'i tregoni mjekut nëse pacienti po merr medikamente, pasi disa prej tyre mund të ndryshojnë rezultatin e analizës. Besueshmëria e rezultateve të studimit ndikohet nga përdorimi i alkoolit dhe drogës.

Deshifrimi

Forma e rezultatit të kësaj analize tregon një rezultat pozitiv (+) ose negativ (-) për secilën klasë të imunoglobulinave.

Merrni parasysh interpretimin e një dekodimi të mundshëm të testit të gjakut ELISA.

• Rezultati negativ i IgM, IgG, IgA - mungesa e imunitetit ndaj infeksionit.
• Rezultati IgM negativ, IgA dhe IgG pozitiv - imunitet pas infeksionit ose pas vaksinimit.
• IgG negative ose pozitive, IgA dhe IgM pozitive është një infeksion akut.
• Një rezultat pozitiv i IgM, IgG, IgA është një përkeqësim i një sëmundjeje kronike infektive.
• Një rezultat negativ IgM dhe një rezultat negativ ose pozitiv IgG, IgA është një infeksion kronik.
• Rezultat negativ IgM dhe pa IgG, IgA - rikuperim.

Përparësitë e metodës

Një test gjaku ELISA ka shumë përparësi. Ato kryesore mund të dallohen:

• saktësi relativisht e lartë (ndjeshmëri);
• mundësia e diagnozës së hershme;
• aftësia për të ndjekur dinamikën e procesit infektiv;
• një nivel i lartë unifikimi, i cili lejon anketat masive;
• një periudhë e shkurtër kohore e nevojshme për të marrë rezultatin e analizës;
• komoditet në punë;
• automatizimi i të gjitha fazave të analizës;
• kosto relativisht e ulët.

Të metat

Disavantazhi i metodës ELISA është se ndonjëherë jep rezultate false negative ose false pozitive. Përveç gabimeve teknike gjatë studimit, shkak i rezultateve të rreme mund të jetë faktori reumatoid tek pacienti, prania e sëmundjeve kronike (në të cilat prodhohen antitrupa), çrregullimet metabolike dhe marrja e medikamenteve të caktuara.

• ascariasis;
• trikinoza - analiza kryhet disa herë, niveli maksimal i antitrupave përcaktohet në 4-12 javë pas infektimit;
• cisticerkoza;
• taeniaza;
• fascioliasis - antitrupat përcaktohen në fazën akute të sëmundjes;
• opisthorchiasis - kryen diagnozën diferenciale midis formave kronike dhe akute të sëmundjes;
• giardiasis;
• leishmanioza viscerale dhe e lëkurës;
• amebiaza;
• toksoplazmoza.

4.2 4.20 nga 5 (5 Vota)