Diagnostyka immunoenzymatyczna czy analiza ELISA: na czym polega i jakie choroby wykrywa? Analiza ELISA: dekodowanie Co oznacza metoda ELISA?

Test immunoenzymatyczny wykrywa specyficzne przeciwciała lub antygeny wielu chorób. Dzięki technologii diagnostycznej wykrywane są substancje pochodzenia białkowego. Lekarz prowadzący wyjaśnia, dlaczego wynik testu ELISA jest pozytywny i co to oznacza. Do postawienia diagnozy brane są pod uwagę wyniki badań i historia choroby pacjenta.

Co to znaczy

Metodę badawczą zaczęto stosować kilkadziesiąt lat temu. Od tego czasu technologia uległa poprawie, a dokładność wyników wzrosła. Zaletą diagnostyki jest duża czułość. Jest też i wada – technika polega na wyszukiwaniu danego agenta, czyli tzw. należy założyć jego obecność w organizmie.

Obca cząstka (antygen) dostaje się do organizmu wraz z czynnikiem zakaźnym (czynnikiem). Antygenem może być także cząsteczka krwi innej osoby, która nie pasuje do grupy. Obecność takich czynników powoduje reakcję immunologiczną. W wyniku złożonych procesów nerwowych powstają immunoglobuliny. Łączą się z obcymi cząsteczkami, tworząc kompleks immunologiczny. W tej formie organizm łatwiej rozpoznaje cząsteczki i niszczy je przy pomocy układu odpornościowego. Każdy rodzaj mikroorganizmu wytwarza specyficzne przeciwciała.

Do badania pobiera się krew z żyły. Powstałe związki, które mogą zakłócać badanie, są następnie usuwane z materiału. Czasami jako materiał biologiczny pobiera się próbki błony śluzowej lub płynu mózgowo-rdzeniowego; w niektórych przypadkach analizuje się płyn owodniowy. W laboratorium wykorzystywane są specjalne płytki, w których dołkach przygotowywane są cząstki drobnoustrojów chorobotwórczych. Laborant umieszcza tam pobrany materiał i obserwuje, czy powstają związki odpornościowe.

Aby uzyskać dokładne wyniki, należy przystąpić do testu na czczo. Na 2 tygodnie przed przesłaniem materiału należy zaprzestać przyjmowania leków przeciwwirusowych i antybiotyków.

Analiza pozwala potwierdzić następujące choroby:

• toksoplazmoza;
• opryszczka różnego rodzaju;
• wirus cytomegalii;
• salmonelloza;
• czerwonka;
• Zakażenie Helicobacter pylori;
• odra;
• kleszczowe zapalenie mózgu;
• Różyczka;
• choroby układu rozrodczego;
• zapalenie wątroby.

Jest to niepełna lista recept, obejmuje także ospę wietrzną, kiłę i inne choroby, w tym wywoływane przez różne ziarniaki.

Wykrycie co najmniej jednej immunoglobuliny wskazuje, że wynik testu ELISA jest dodatni:

1. Wykrycie IgM wskazuje na ostry etap patologii zakaźnej. Potwierdza to jednoczesną obecność IgA. Wynik ujemny w niektórych przypadkach może wskazywać na przewlekłość choroby.
2. Dodatni wskaźnik IgA wskazuje na utajoną chorobę lub obecność procesu przewlekłego.
3. Wykrycie IgG w różnych przypadkach może wskazywać na obecność przewlekłej postaci choroby lub wskazywać na remisję.

Formularz może zawierać jedynie informację o obecności lub braku patogenu. W niektórych przypadkach wskazany jest wskaźnik ilościowy. Czasami badanie ma na celu określenie poziomu stężenia przeciwciał. W tym celu określa się wskaźnik dodatniości testu ELISA. Wskaźnik ten pozwala określić, jak długo trwa proces patologiczny w organizmie.

Co robić

Lekarz chorób zakaźnych zajmuje się diagnostyką i leczeniem chorób zakaźnych, dlatego w większości przypadków to właśnie on zleca badanie.

Jeżeli wynik testu ELISA będzie pozytywny, należy zgłosić się do lekarza. Niedopuszczalne jest samodzielne wyciąganie wniosków i prowadzenie leczenia. Trudno jest samodzielnie zrozumieć wskaźniki, dekodowanie wyników należy uzyskać od specjalisty.

Na wyniki badań krwi mogą wpływać takie czynniki, jak palenie tytoniu, spożywanie alkoholu i używanie niektórych grup narkotyków. Lekarz może zlecić ponowne badanie w celu wykluczenia błędów w wynikach. Czasami przepisywane są dodatkowe rodzaje badań w celu potwierdzenia diagnozy.

Nie należy wyciągać wniosków przedwcześnie, jeśli wynik testu jest pozytywny. Jednak terminowe badanie pozwoli zidentyfikować chorobę i przepisać niezbędne leczenie.

W kontakcie z

Test ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) wkroczył w życie medycyny praktycznej gdzieś w latach 60. ubiegłego wieku. Jej początkowym zadaniem były badania histologiczne do celów naukowych, które sprowadzały się do poszukiwania i identyfikacji struktury antygenowej komórek żywego organizmu.

Metoda ELISA opiera się na oddziaływaniu antygenów specyficznych (AT) i pokrewnych (AG) w wyniku tworzenia kompleksu „antygen-przeciwciało”, który jest wykrywany za pomocą enzymu. Fakt ten skłonił naukowców do rozważenia, że ​​metodę tę można zastosować w celach diagnostycznych do identyfikacji swoistych immunoglobulin różnych klas biorących udział w odpowiedzi immunologicznej na konkretną infekcję. I to był przełom w klinicznej diagnostyce laboratoryjnej!

Metodę zaczęto aktywnie stosować dopiero na początku lat 80., a następnie głównie w wyspecjalizowanych instytucjach. Pierwsze analizatory immunoenzymów zostały wyposażone w ośrodki i stacje transfuzji krwi, choroby zakaźne i szpitale wenerologiczne, ponieważ na naszym horyzoncie pojawił się groźny AIDS, urodzony na kontynencie afrykańskim, i natychmiast dołączył do „starych” infekcji, wymagał natychmiastowych działań diagnostycznych i poszukiwań za działające na niego leki lecznicze.

Zakres zastosowania metody ELISA

Możliwości testów immunologicznych enzymatycznych są naprawdę szerokie. Teraz trudno sobie wyobrazić, jak można obejść się bez takich badań, które są wykorzystywane dosłownie we wszystkich gałęziach medycyny. Wydaje się, co ELISA może zrobić w onkologii? Okazuje się, że można. I sporo. Zdolność analizy do znalezienia markerów charakterystycznych dla niektórych typów nowotworów złośliwych leży u podstaw wczesnego wykrycia nowotworu, gdy nie jest on jeszcze wykrywany w inny sposób ze względu na jego niewielkie rozmiary.

Nowoczesna kliniczna diagnostyka laboratoryjna (CDL), oprócz markerów nowotworowych, dysponuje bogatym arsenałem paneli ELISA i wykorzystuje je do diagnozowania różnych stanów patologicznych (procesy infekcyjne, zaburzenia hormonalne) oraz monitorowania leków farmaceutycznych w celu określenia ich wpływu na organizm pacjenta i, nawiasem mówiąc, nie tylko człowieka. Obecnie badanie immunoenzymatyczne ma szerokie zastosowanie w służbach weterynaryjnych, gdyż „nasi mali bracia” także są podatni na wiele chorób, na które czasami bardzo cierpią.

Zatem, Test ELISA, dzięki swojej czułości i swoistości, pozwala na podstawie próbki krwi pobranej z żyły określić:

• Stan hormonalny (hormony tarczycy i nadnerczy, hormony płciowe);
• Obecność infekcji wirusowych i bakteryjnych (HIV, B i C, chlamydia, kiła i, a także wiele innych chorób wywołanych przez patogenne mikroorganizmy);
• Ślady życiowej aktywności mikroorganizmów, które zapoczątkowały proces zakaźny, który pomyślnie zakończył się i przeszedł do etapu tworzenia odpowiedzi immunologicznej na ten patogen. Takie ślady, czyli przeciwciała, w wielu przypadkach krążą we krwi przez całe życie, chroniąc w ten sposób osobę przed ponownym zakażeniem.

Jaka jest istota testu ELISA?

Metoda immunoenzymatyczna pozwala określić nie tylko obecność samego patogenu (analiza jakościowa), ale także jego zawartość ilościową w surowicy krwi pacjenta.

Dawka wirusa lub bakterii w istotny sposób wpływa na przebieg procesu infekcyjnego i jego przebieg, dlatego też analiza ilościowa odgrywa ważną rolę w diagnostyce i leczeniu chorób w różnych postaciach i stadiach.

Znając jednak badania immunoenzymatyczne jako metodę ELISA, nawet nie zastanawiamy się, jak udaje się nią objąć tak szeroką gamę mikroorganizmów zamieszkujących naszą planetę, z których wiele stanowi bezpośrednie zagrożenie dla zdrowia i życia ludzi i zwierząt. Ale faktem jest, że ELISA ma wiele opcji (niekonkurencyjnych i konkurencyjnych - bezpośrednich i pośrednich), z których każda rozwiązuje swój własny problem, a tym samym pozwala na ukierunkowane wyszukiwanie.

Do identyfikacji immunoglobulin tej czy innej klasy stosuje się tradycyjny 96-dołkowy panel polistyrenowy (płytkę), w którego dołkach zatężają się zaadsorbowane rekombinowane białka w fazie stałej. Przeciwciała lub antygeny, które dostaną się do dołka z surowicą krwi, znajdą „znany” obiekt i utworzą z nim kompleks (AG – AT), który utrwalony koniugatem enzymatycznym będzie objawiał się zmianą koloru dołka, gdy czytanie wyników.

Test immunoenzymatyczny przeprowadza się przy użyciu systemów testowych o określonej swoistości, produkowanych w specjalnych laboratoriach i wyposażonych we wszystkie niezbędne składniki reagujące. Badania można prowadzić przy użyciu pralek („pralek”) i spektrofotometrów odczytowych, co wiąże się głównie z pracą fizyczną. Na w pełni automatycznych maszynach, które uwalniają asystenta laboratoryjnego od monotonnego wkraplania, mycia i innych rutynowych zadań, praca jest oczywiście szybsza i wygodniejsza, ale nie wszystkie laboratoria mogą sobie pozwolić na taki luksus i nadal pracować w staromodny sposób - na maszyny półautomatyczne.

Interpretacja wyników testu ELISA należy do kompetencji lekarza diagnostyki laboratoryjnej i należy wziąć pod uwagę nieodłączną właściwość prawie wszystkich reakcji immunochemicznych polegającą na dawaniu odpowiedzi fałszywie dodatnich lub fałszywie ujemnych.

Wideo: nowoczesny test immunologiczny enzymatyczny

Wyniki testu ELISA na przykładzie kiły

Test immunologiczny enzymatyczny jest odpowiedni do wykrywania wszystkich form i dodatkowo jest wykorzystywana w badaniach przesiewowych. Do przeprowadzenia analizy wykorzystuje się krew żylną pacjenta pobraną na czczo. W pracy wykorzystuje się tabletki o określonej swoistości (klasy AB A, M, G) lub przeciwciała całkowite.

Biorąc pod uwagę, że przeciwciała w kile powstają w określonej kolejności, w teście ELISA można łatwo odpowiedzieć na pytanie, kiedy doszło do zakażenia i na jakim etapie jest ten proces, a interpretację uzyskanych wyników można przedstawić w postaci:

• IgM wskazuje czas trwania procesu zakaźnego (może pojawić się podczas zaostrzenia przewlekłych chorób zapalnych);
• IgA stwierdza, że ​​do zakażenia doszło ponad miesiąc temu;
• IgG wskazuje, że infekcja jest w pełnym stadium lub że niedawno przeprowadzono leczenie, co można łatwo ustalić na podstawie wywiadu.

Podczas badania na kiłę studzienki ujemne (i kontrola ujemna) pozostaną bezbarwne, podczas gdy studzienki dodatnie (i kontrola dodatnia) będą miały jasnożółty kolor ze względu na zmianę koloru chromogenu dodanego podczas testu. Jednak intensywność barwy nie zawsze pokrywa się z kontrolą, to znaczy może być nieco jaśniejsza lub lekko żółtawa. Są to wątpliwe wyniki, które z reguły podlegają ponownemu badaniu z obowiązkowym uwzględnieniem wskaźników ilościowych uzyskanych na spektrofotometrze, ale ogólnie kolor jest wprost proporcjonalny do liczby kompleksów immunologicznych (powiązanych Ag i AT) .

Najbardziej ekscytującym testem immunoenzymatycznym jest test ELISA na obecność wirusa HIV

Analiza jest być może bardziej interesująca dla szerokiego kręgu populacji niż inne, ponieważ nadal nie można z całą pewnością stwierdzić, że wiele problemów społecznych zniknęło (prostytucja, narkomania itp.). Niestety, wirus HIV dotyka nie tylko te grupy społeczeństwa; można się nim zarazić w różnych okolicznościach, niezwiązanych z niemoralnością seksualną lub zażywaniem narkotyków. Ale jeśli zajdzie potrzeba wykonania testu na HIV, nie powinieneś się obawiać, że wszyscy wokół ciebie dowiedzą się o Twojej wizycie w takim laboratorium. Teraz osoby zakażone wirusem HIV są chronione przez prawo, a ci, którzy mają wątpliwości, mogą zwrócić się do anonimowych biur, gdzie mogą rozwiązać problem bez obawy przed rozgłosem i potępieniem.

Metoda immunoenzymatyczna stosowana w diagnostyce zakażenia wirusem HIV jest jednym z najważniejszych badań standardowych, które jednak wymaga specjalnych warunków, gdyż temat jest bardzo delikatny.

Test ELISA HIV ma sens przeprowadzać po kontakcie seksualnym, transfuzji krwi, innych zabiegach medycznych sugerujących zakażenie oraz po upływie okresu inkubacji („okno seronegatywne”), jednak należy pamiętać, że okres ten nie jest stały. Może zakończyć się za 14-30 dni lub może trwać do sześciu miesięcy, dlatego za średnią wartość uważa się przedział od 45 do 90 dni. Krew na HIV oddaje się w taki sam sposób, jak w przypadku innych infekcji - z żyły na pusty żołądek. Wyniki będą gotowe w zależności od nagromadzenia materiału w laboratorium i jego obciążenia pracą (od 2 do 10 dni), choć najczęściej laboratoria udzielają odpowiedzi tego samego dnia lub następnego.

Czego możesz się spodziewać po wynikach badania na obecność wirusa HIV?

Test ELISA do wykrywania zakażenia wirusem HIV wykrywa przeciwciała przeciwko dwóm typom wirusa: HIV-1 (częściej w Rosji i innych krajach Europy i Azji) oraz HIV-2 (częściej w Afryce Zachodniej).

Zadaniem testu HIV ELISA jest poszukiwanie przeciwciał klasy G, które wykrywane są we wszystkich systemach testowych, ale w późniejszym terminie oraz przeciwciał klasy A i M, wykrywanych w testach rekombinowanych nowej generacji, które umożliwiają wykrycie przeciwciał na najwcześniejszych etapach (okres inkubacji – „okno seronegatywne”). Po teście ELISA możesz spodziewać się następujących odpowiedzi:

1. Wynik pierwotny pozytywny: krew należy zbadać ponownie przy użyciu systemu testowego tego samego typu, ale jeśli to możliwe, innej serii i przez inną osobę (asystenta laboratoryjnego);
2. Powtarzane (+) polega na pobraniu od pacjenta nowej krwi i badaniu podobnym do analizy pierwotnej;
3. Kolejny pozytywny wynik poddawany jest analizie referencyjnej, w której wykorzystuje się wysoce specyficzne zestawy testowe (2-3 szt.);
4. Dodatni wynik w obu (lub trzech) systemach kierowany jest do immunoblottingu (tego samego testu ELISA, ale wykonywanego indywidualnie przy użyciu zestawów testowych o szczególnie wysokiej swoistości).

Wniosek o zakażeniu wirusem HIV wyciąga się wyłącznie na podstawie immunoblottingu. Rozmowa z osobą zarażoną prowadzona jest z zachowaniem całkowitej poufności. Ujawnianie tajemnicy lekarskiej w Rosji, a także w innych krajach, podlega karze karnej.

Szczególną popularność zyskały testy na chlamydię i cytomegalowirusa metodą immunoenzymatyczną, ponieważ pozwalają określić czas zakażenia, stopień zaawansowania choroby i skuteczność działań leczniczych.

Podczas wdrażania można również zaobserwować pojawienie się przeciwciał różnych klas. w różnych fazach stanu patologicznego spowodowanego czynnikiem zakaźnym:

• IgM można wykryć już po siedmiu dniach od zakażenia;
• IgA wskazuje, że infekcja żyje w organizmie dłużej niż miesiąc;
• IgG potwierdza rozpoznanie chlamydii, pomaga monitorować leczenie i określać jego skuteczność. Należy zauważyć, że przeciwciała klasy G pozostają i krążą w organizmie niezależnie od czasu trwania choroby, dlatego aby poprawnie zinterpretować analizę, należy wziąć pod uwagę wartości referencyjne (normy), które nawiasem mówiąc , są różne dla każdego CDL: biorąc pod uwagę markę systemu testowego i specyfikę odczynników znajdujących się w zestawie. Wartości prawidłowe wpisuje się w formularzu obok wyniku testu ELISA.

Jeśli chodzi o , tutaj jest trochę inaczej: Przeciwciała klasy M pojawiają się po około miesiącu do półtora miesiąca, czyli wynik dodatni (IgM+) pojawia się w fazie infekcji pierwotnej lub w trakcie reaktywacji infekcji latentnej i utrzymuje się od 4 do 6 miesięcy.

Obecność przeciwciał klasy G jest charakterystyczna dla początku pierwotnej ostrej infekcji lub reinfekcji. Analiza stwierdza, że ​​wirus jest obecny, ale nie dostarcza informacji, na jakim etapie jest proces zakaźny. Tymczasem określenie prawidłowego miana IgG również nastręcza trudności, ponieważ zależy ono całkowicie od stanu odporności konkretnej osoby, który jednak ustala się na podstawie identyfikacji immunoglobulin klasy G. Biorąc pod uwagę takie zachowanie przeciwciał, w diagnostyce CMV istnieje potrzeba ocena zdolności przeciwciał klasy G do interakcji z CMV, w celu późniejszej jej „neutralizowania” (awidność AT). W początkowej fazie choroby IgG bardzo słabo wiąże się z antygenami wirusowymi (mała awidność) i dopiero wtedy zaczyna wykazywać aktywność, dlatego można mówić o wzroście awidności przeciwciał.

O zaletach immunoenzymatycznego testu immunologicznego można dużo mówić, gdyż dzięki tej metodzie udało się rozwiązać wiele problemów diagnostycznych wykorzystując wyłącznie krew żylną. Nie ma konieczności długiego oczekiwania, zmartwień i problemów z zebraniem materiału do badań. Ponadto systemy testowe do testu ELISA są stale udoskonalane i niedaleki jest dzień, w którym test da wynik w 100% wiarygodny.

Wideo: film edukacyjny Moskiewskiego Państwowego Uniwersytetu Medycznego im. Sechenov o podstawach testu ELISA

Lista dostępnych metod diagnostycznych w ostatnich dziesięcioleciach gwałtownie się poszerza; diagności próbują połączyć zalety wszystkich dotychczasowych badań w nowych metodach, pozbywając się wszystkich ich dotychczasowych wad.

W ostatnim czasie na liście badań diagnostycznych coraz częściej pojawia się test immunoenzymatyczny – badanie nowoczesne i stosunkowo nowe, mało znane przeciętnemu człowiekowi nie zajmującemu się medycyną. Niemniej jednak technika ta szybko zyskuje rzeszę zwolenników wśród wykwalifikowanego personelu medycznego. Możesz spróbować dowiedzieć się, co to jest i w jakich przypadkach należy go używać, zapoznając się z jego funkcjami i głównymi cechami.

Test immunologiczny enzymatyczny jest instrumentalną techniką laboratoryjną opartą na molekularnej reakcji „antygen-przeciwciało”, która pozwala na wykrycie określonych białek w materiale biologicznym (próbkach do badań). Takimi białkami mogą być enzymy, różne mikroorganizmy (wirusy, bakterie, grzyby), pierwotniaki itp.

Po odkryciu metody nadano jej nazwę test ELISA, która nie ma nic wspólnego z nazwiskiem odkrywców, ale jest skrótem od pełnej nazwy w języku angielskim - enzymatyczny test immunoenzymatyczny. Lekarze na całym świecie używają tej nazwy; niektórzy lekarze w krajach rosyjskojęzycznych również tak nazywają tego typu badania.

Główną zasadą tej metody jest molekularna reakcja „antygen-przeciwciało”.

Antygen to dowolna obca cząsteczka, która przedostaje się do organizmu człowieka jako część drobnoustroju wywołującego chorobę. Antygeny są zwykle cząsteczkami białek. Oprócz mikroorganizmów takim „obcym” mogą być obce krwinki, które nie pasują do grupy lub czynnika Rh.

W odpowiedzi na przedostanie się takiego antygenu do organizmu uruchamia się reakcja immunologiczna, której celem jest ochrona przed obcymi cząsteczkami. Dzieje się tak w wyniku syntezy specjalnych czynników układu odpornościowego - przeciwciał (immunoglobulin). Każde przeciwciało jest odpowiednie tylko dla konkretnego antygenu i neutralizuje patogennego „obcego” wiążąc się z nim w pojedynczy kompleks. Jest to proces takiego wiązania, który nazywany jest reakcją „antygen-przeciwciało”.

Rodzaje przeciwciał

Wszystkie przeciwciała (immunoglobuliny) dzielą się na 5 typów w zależności od tego, na jakim etapie odpowiedzi immunologicznej się pojawiają:

W diagnostyce metodą ELISA najczęściej znaczenie mają poziomy immunoglobulin IgG, IgM i IgA. Na podstawie ich mian można dowiedzieć się, czy dana osoba chorowała wcześniej lub niedawno została zarażona, czy rozwinęła się u niej odporność lub czy jego organizm jest bezbronny przed patologią.

Zalety i wady testu immunologicznego enzymatycznego

Obecnie metoda ELISA jest jedną z najdokładniejszych i najbardziej czułych metod. Został przyjęty przez specjalistów z różnych dziedzin medycyny i stale poszerza zakres jego zastosowania.

Zalety metody

• Wysoka dokładność uzyskiwanych danych.
• Czułość (pozwala wykryć wymaganą substancję nawet przy minimalnej obecności patogenu w próbce).
• Możliwość diagnozy już w pierwszych dniach choroby lub w okresie inkubacji.
• Szybkość pozyskiwania danych w porównaniu do innych metod o podobnej dokładności.
• Wysoka automatyzacja procesu i minimalny udział człowieka, co zmniejsza błąd wykonawcy.
• Uzyskanie danych o stadium procesu patologicznego i skuteczności wybranej terapii.
• Bezbolesne i minimalnie inwazyjne podczas pobierania materiału.

Wady metody

• W większości przypadków pozwala określić reakcję organizmu na czynnik chorobotwórczy, a nie sam patogen.
• Przed badaniem należy dokładnie poznać podejrzenie choroby, ponieważ test jest wysoce swoisty.
• Prawdopodobieństwo fałszywych wskaźników spowodowane problemami technicznymi, przyjmowaniem leków, jednoczesną obecnością kilku chorób przewlekłych lub zaburzeniami metabolicznymi w organizmie pacjenta.
• Interpretacji wyników powinien dokonywać wyłącznie wysoko wykwalifikowany specjalista, gdyż do interpretacji uzyskanych danych konieczne jest specjalne przeszkolenie i duży zasób wiedzy medycznej w określonej dziedzinie.
• ELISA jest badaniem dość rzadkim, dlatego nie we wszystkich laboratoriach diagnostycznych wykonuje się go.
• Metoda jest dość droga, ponieważ oprócz odczynników laboratorium musi posiadać wiele drogiego sprzętu i próbki antygenów wytwarzanych w specjalnych instytutach.

W jakich przypadkach stosuje się immunoenzymatyczny test?

Pełna lista wskazań do wykonania testu immunoenzymatycznego jest bardzo szeroka i obejmuje niemal wszystkie gałęzie medycyny.

Najczęściej test ELISA stosuje się w następujących celach:

• wykrywanie chorób zakaźnych;
• diagnostyka chorób przenoszonych drogą płciową;
• określenie stanu odporności lub poszczególnych chorób autoimmunologicznych;
• identyfikacja markerów nowotworowych;
• oznaczanie hormonów.

W przypadku chorób zakaźnych i wirusowych technika ta pozwala zidentyfikować następujące patologie:

Ponadto test ELISA pozwala szybko i skutecznie określić stan zawału, ocenić potencjał rozrodczy organizmu, zidentyfikować alergie, ich źródło itp.

Technikę immunoenzymową wykorzystuje się do prowadzenia badań klinicznych podczas opracowywania nowych leków i oceny ich wpływu na organizm ludzki.

Rodzaje próbek i metody ich doboru do badań

Najczęściej materiałem do badań immunoenzymatycznych jest krew pobierana z żyły łokciowej pacjenta. Pobieranie próbek odbywa się na czczo, głównie rano. Po pobraniu próbki powstałe komórki zakłócające badanie są oddzielane i usuwane z krwi, pozostawiając jedynie surowicę.

Podczas diagnozowania infekcji dróg moczowo-płciowych materiałem często stają się rozmazy z tkanek śluzowych narządów płciowych, śluz z cewki moczowej lub szyjki macicy, próbki z odbytnicy, zeskrobiny z nadżerek lub wrzodów w okolicy pachwiny oraz z innych części ciała. Wymaz można pobrać z jamy ustnej, a także z nosogardzieli.

Czasami w praktyce położniczej i ginekologicznej podczas ciąży stosuje się test immunoenzymatyczny w celu określenia stanu płynu owodniowego. W tym przypadku próbką staje się płyn owodniowy. W tym celu pobiera się niewielką ilość płynu poprzez nakłucie worka owodniowego długą igłą. Wszystkie manipulacje przeprowadzane są przy użyciu sterylnych narzędzi, aby zminimalizować możliwe ryzyko.

Często materiał staje się płynem mózgowo-rdzeniowym lub surowiczym. Dzieje się tak w przypadku znieczulenia miejscowego, które podaje się w formie zastrzyku.

Specjalista wysyłający na badanie powinien wyjaśnić, jakiego rodzaju materiały są potrzebne do wykonania testu immunoenzymatycznego. Często pobiera się próbki kilku rodzajów lub z różnych miejsc jednocześnie. Lekarz wystawiający skierowanie na tego typu badanie powinien poinformować pacjenta także o przygotowaniach do pobrania biomateriału.

Przygotowanie do testu immunologicznego enzymatycznego

Aby zwiększyć dokładność danych uzyskanych po teście immunoenzymatycznym, przygotowanie do selekcji materiału powinno przebiegać następująco:

• na 10 dni przed badaniem należy wykluczyć antybiotyki, leki przeciwwirusowe i przeciwgrzybicze;
• na jeden dzień należy wykluczyć alkohol, palić i zażywać substancje odurzające;
• w tym samym okresie należy unikać nadmiernego wysiłku fizycznego;
• Ostrzeż lekarza przepisującego lek o wszystkich lekach przyjmowanych przez pacjenta;
• Jeśli jesteś w ciąży lub podejrzewasz, że jesteś w ciąży, poinformuj o tym swojego lekarza.

Najlepiej jest pobierać materiały do ​​badań rano, na czczo.

Jeśli diagnoza ma na celu określenie stanu gospodarki hormonalnej, ważne jest, aby dzień wcześniej zapewnić sobie spokój i unikać napięcia nerwowego. W przypadku kobiet o oddaniu krwi na hormony jednoznacznie decyduje okres cyklu miesięcznego, który zostanie omówiony przez lekarza w momencie wizyty.

Na 2-3 dni przed pobraniem próbki należy wykluczyć z menu potrawy smażone i tłuste, a przed badaniem na zapalenie wątroby nie spożywać owoców cytrusowych ani innych pomarańczowych lub żółtych owoców i warzyw.

Interpretacja wyników testów immunoenzymatycznych

Wynik badania jakościowego jest zwykle oznaczony znakami „+” (wykryty) lub „-” (nie znaleziony).

Na podstawie obecności lub braku pewnych grup immunoglobulin można wyciągnąć następujące wnioski:

• JgM (-), JgG (-), JgA (-) - odporność na chorobę jest całkowicie nieobecna (organizm nie spotkał się wcześniej z tego typu antygenem);
• JgM (-), JgG (+), JgA (-) - doszło do wcześniejszej kolizji z tym antygenem lub szczepionką;
• JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - ostry proces patologiczny (najprawdopodobniej pierwotny);
• JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - proces przewlekły;
• JgM (+), JgG (+), JgA (+) - nawrót;
• JgM (-) - etap zdrowienia.

Wartości ilościowe niosą ze sobą duży ładunek informacyjny, ale tylko lekarz prowadzący może je zinterpretować na podstawie wcześniejszych wskazań, wieku pacjenta i norm dla każdej konkretnej choroby. Z tego powodu nie możesz sam ocenić wyników.

Jak długo trzeba czekać na wyniki?

Technika ta ma wiele odmian, w zależności od tego, jaki jest okres pozyskiwania danych. Średni czas trwania diagnostyki ELISA wynosi 4-6 godzin, co pozwala na dostarczenie wyników już następnego dnia.

Najdłuższe metody trwają do 10 dni, np. w przypadku zakażenia wirusem HIV.

W przypadku pilnej potrzeby istnieje możliwość skorzystania z metod ekspresowych, w których odpowiedź uzyskuje się w ciągu 1-2 godzin.

Gdzie mogę wykonać test ELISA?

Ponieważ sprzęt do tego typu diagnostyki jest dość drogi, nie wszystkie laboratoria mogą go kupić. Ponadto testy zawierające określone antygeny mają ograniczony okres przydatności do spożycia (zwykle około 1 roku) i dlatego wymagają ciągłej aktualizacji.

Z tych powodów publiczne placówki medyczne nie zawsze dysponują laboratoriami ELISA. Najczęściej konieczny jest kontakt z dużymi prywatnymi ośrodkami medycznymi lub dużymi ośrodkami diagnostycznymi.

Aby przeprowadzić badanie ELISA, laboratorium musi posiadać specjalną licencję, a personel i asystenci laboratorium muszą przejść specjalne szkolenie.

Najczęściej konkretny ośrodek diagnostyczny lub laboratorium poleca lekarz kierujący pacjenta na badanie.

Koszt testu immunologicznego enzymatycznego

Cena za to badanie uzależniona jest od regionu kraju i poziomu kliniki świadczącej usługę. W Moskwie minimalna cena za oznaczenie jednego antygenu zaczyna się od 700 rubli. W przypadku konieczności jednoczesnej identyfikacji kilku immunoglobulin cena zostanie zsumowana.

W przypadku pilnej analizy koszt wzrasta o 150-200 rubli. dla każdego antygenu.

Pomimo dość wysokiego kosztu, immunoenzymatyczny test pozwala na możliwie szybkie i pouczające badanie pacjenta, co skraca czas do rozpoczęcia leczenia i pozwala na szybszą stabilizację stanu pacjenta.

W tym filmie prezentowany jest film „Podstawy testu immunologicznego enzymatycznego”.

Test ELISA, czyli immunoenzymatyczny test immunoenzymatyczny, należy do testów serologicznych i służy do wykrywania i diagnozowania patologicznych mikroorganizmów w surowicy krwi.

Poprzez analizę, różne klasy immunoglobulin do bakterii: IgM- w ostrym procesie patologicznym, oraz IgG na etapie zdrowienia, które w niektórych przypadkach utrzymują się przez całe życie.

Za pomocą diagnostyki immunoenzymatycznej wykrywa się choroby o różnej etiologii:

Test ELISA jest również wskazany do diagnostyki kiły, gdy pozytywne wyniki zostaną potwierdzone metodą RT, i pozwala monitorować skuteczność leczenia w procesie patologicznym.

Test immunoenzymatyczny jest przepisywany zgodnie ze wskazaniami (w przypadku podejrzenia zakażenia drobnoustrojami) i jest obowiązkowy w czasie ciąży i przed operacją w celu wykrycia nosicielstwa różnych bakterii.

Procedurę analizy wykonuje się rano na czczo, materiał (krew) pobiera się z żyły. Wyniki badania diagnostycznego przygotowywane są w ciągu 10 dni.

Pozytywny wynik testu ELISA

Dodatni wynik testu ELISA potwierdza obecność immunoglobulin klasy IgG i IgM. Wykryto miana we krwi IgM zawsze wskazuje na chorobę w fazie postępującej zdrowa osoba nie ma tych przeciwciał.

A IgG wskazuje na wcześniejszą infekcję lub nosicielstwo drobnoustrojów chorobotwórczych, z których niektóre w małych ilościach uważa się za mieszczące się w normalnych granicach. Na przykład bakterie paciorkowców i gronkowców są obecne w każdym organizmie człowieka.

Syfilis

Przeciwciała IgM dla kiły wykrywane są od 2 tygodni po zakażeniu i wskazują na obecność epizodu pierwotnego, wtórnego lub wrodzonego; po leczeniu znikają po około sześciu miesiącach, bez leczenia - po 18 miesiącach. W przypadku jednoczesnego wykrycia obu typów immunoglobulin, kiła zostaje potwierdzona w ostrej fazie. U osób, które przebyły chorobę Przeciwciała IgG przeciwko kile pozostają w serum do końca życia.

Wirusowe zapalenie wątroby

IgM przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby jest często wykrywana w okresie inkubacji choroby, przed pojawieniem się pierwszych objawów i utrzymuje się w trakcie choroby po wyzdrowieniu, nie jest wykrywana. Wyjątkiem jest wirusowe zapalenie wątroby typu C, w którym IgM wykrywa się zarówno w fazie aktywnej, jak i utajonej lub przewlekłej

Przeciwciała IgG przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu A mogą występować nawet u osób zdrowych, co jest spowodowane przebytą infekcją lub obniżoną odpornością, natomiast u osób zdrowych nie obserwuje się obecności przeciwciał IgG przeciwko wirusowemu zapaleniu wątroby typu B, C i D.

CMVI

Zakażenie CMV jest powszechne niemal wszędzie i nie stanowi zagrożenia dla zdrowia publicznego. Jednak niesie ze sobą zabójczy skutek zagrożenie dla noworodka i płodu podczas zakażenia wewnątrzmacicznego.

Wykrycie przeciwciał IgM przeciwko wirusowi cytomegalii wskazuje na infekcję pierwotną lub aktywację fazy utajonej. Miana IgG utrzymują się u osób, które wyzdrowiały z choroby przez 10 lat.

Opryszczka

U zdrowych ludzi zwykle nie ma przeciwciał przeciwko wirusowi opryszczki. Zawartość IgM wskazuje na ostrą fazę choroby, IgG na fazę utajoną (w tym przypadku osoba jest nosicielem infekcji). Jeśli masz IgG przeciwko opryszczce, powinieneś wiedzieć, że wirus może zostać aktywowany w dowolnym momencie od fazy utajonej do fazy postępującej.

Ospa wietrzna

Podczas ospy wietrznej i przez 2 lata po leczeniu immunoglobuliny klasy IgM pozostają we krwi. Zwykle u zdrowych osób nie wykrywa się przeciwciał przeciwko ospie wietrznej.

Choroby wywołane przez gronkowce i paciorkowce

Wszyscy ludzie mają immunoglobuliny przeciwko gronkowcom i paciorkowcom. Dlatego też możliwa jest diagnostyka procesu patologicznego wywoływanego przez te grupy bakterii poprzez wykonanie metody podwójnego testu immunologicznego. Jeżeli podczas powtarzanego testu ELISA (tydzień po pierwszym) nastąpi wzrost mian, wówczas analizę uznaje się za potwierdzoną.

Chlamydia

Dodatni wynik na chlamydię jest sygnalizowany poprzez identyfikację Miana IgM 1:8 i wyżej i z klasą IgG – 1:64 i wyższe, które wzrastają w trakcie choroby i osiągają wysokie wartości. Na przykład u dzieci chorych na chlamydiowe zapalenie płuc miano wzrasta do 1:2000 – 1:4000. Obecność IgM wskazuje na aktywność chlamydii; jakiś czas po zakażeniu we krwi wykrywane są globuliny IgG.

Na ujemny wynik testu immunologicznego enzymatycznego wskazuje brak przeciwciał IgM. Wykrywalne IgG nie we wszystkich przypadkach są uznawane za potwierdzenie badania diagnostycznego; często utrzymują się przez kilka lat po zakażeniu, a czasem przez całe życie.

Po kile, mononukleozie zakaźnej immunoglobuliny IgG utrzymywać się przez całe życie i są wykrywane w surowicy krwi. Przez 10 lat pozostają mikroorganizmy CMV, odry, różyczki i toksoplazmozy.

Miano amebozy utrzymuje się od kilku miesięcy do kilku lat. Przeciwciała przeciwko bakteriom gronkowców i paciorkowców są wykrywane u absolutnie wszystkich ludzi w małych ilościach.

W powyższych przypadkach wykrycie immunoglobulin IgG po przebytych chorobach pozwala na przyjęcie wyniku testu ELISA jako negatywnego.

Normalne w czasie ciąży

W pierwszym trymestrze ciąży każda kobieta poddawana jest pełnemu badaniu organizmu, które obejmuje badanie immunoenzymatyczne.

Badania na toksoplazmozę, CMV, chlamydię, opryszczkę typu 2 (narządów płciowych), różyczkę, ureaplazmę i mykoplazmę są obowiązkowe, ponieważ choroby te stanowią poważne zagrożenie dla rozwoju płodu. Są w stanie przeniknąć do organizmu dziecka, omijając barierę łożyskową.

Wszędzie stwarzają szczególne zagrożenie pierwszy trymestr ciąży i prawie zawsze prowadzi do wewnątrzmaciczna śmierć płodu i poronienie samoistne.

Problem z powyższymi chorobami polega na tym, że często występują one w fazie bezobjawowej, bez widocznych objawów klinicznych, a ich rozpoznanie można przeprowadzić jedynie poprzez diagnostykę immunoenzymatyczną.

Dobre wyniki analizy można stwierdzić, jeśli w surowicy nie wykryto żadnych mikroorganizmów. Wykrywalne IgG wskazują na nosicielstwo wirusów i wymagają stałego monitorowania kobiety, aby w przypadku nagłego zaostrzenia zapewnić szybkie podjęcie leczenia. Pozytywne IgM sygnalizuje postępujący proces patologiczny i wymaga natychmiastowej eliminacji patogenu.

Wykrywanie tytułu IgG na różyczkę wskazuje na wcześniejszą chorobę i jest normalne w czasie ciąży. IgG do CMV również nie stanowią szczególnego zagrożenia dla płodu, jednak nie można wykluczyć możliwości zaostrzenia (częstotliwość występowania około 1-2%).

Szczególnym zagrożeniem jest obecność IgG przeciwko wirusowi opryszczki typu 2 lub narządom płciowym (HSV2), ponieważ ryzyko zaostrzenia znacznie wzrasta podczas porodu. W okresie ciąży występowanie ostrej fazy występuje w 0,9% przypadków. Zakażenie płodu wirusem opryszczki podczas przejścia przez drogi rodne występuje w 40% przypadków i w 50% prowadzi do śmierci.

W przypadku toksoplazmozy IgM może utrzymywać się do 2 lat po leczeniu. Ryzyko zakażenia płodu w tym przypadku wynosi 17% w pierwszym trymestrze ciąży i wzrasta do 60% w trzecim trymestrze, ponieważ główna droga zakażenia jest przezłożyskowa. Zidentyfikowany IgG na toksoplazmozę wielu ekspertów skłania się do oceny wyniku jako wyniku negatywnego, który praktycznie nie stwarza zagrożenia dla przebiegu ciąży.