Uzročnik sifilisa. Taksonomija

br. 23 Uzročnik sifilisa. Taksonomija. Karakteristično. Mikrobiološka dijagnostika. Liječenje.
Treponema paladij; T. entericum
Morfologija: tipični treponem s 8-12 vijuga, motorički aparat - 3 periplazmatske flagele na svakom polu stanice. Mrlja po Gramu se ne opaža; mrlja po Romanovsky-Giemsa je blijedo ružičasta, otkriva se impregnacijom srebra.
Kulturna dobra: virulentni soj na jami. ne raste u okolišu, akumulacija kulture događa se kroz infekciju kunića u testisu. Virulentni sojevi uzgajaju se na podlozi koja sadrži tkivo mozga i bubrega.
Biokemijska svojstva: mikroaerofil
Antigenska struktura: kompleks, ima specifične proteinske i lipoidne antigene, potonji je po sastavu identičan kardiolipinu ekstrahiranom iz goveđeg srca (difosfadilglicerol)
Čimbenici patogenosti: adhezini su uključeni u proces pričvršćivanja, lipoproteini sudjeluju u razvoju imunopatoloških procesa.
Otpornost: osjetljivo na sušenje, sunčevu svjetlost, ostaje na predmetima dok se ne osuši. Pod nepovoljnim uvjetima prelazi u L-oblike i stvara ciste.
Patogeneza: Uzrokuje sifilis. Iz ulaznih vrata treponema ulazi u regionalne limfne čvorove, gdje se razmnožava. Zatim, T. prodire u krvotok, gdje se veže za endotelne stanice, uzrokujući endarteritis, što dovodi do vaskulitisa i nekroze tkiva. S krvlju se T. širi cijelim tijelom, zasijavajući organe: jetru, bubrege, kosti, kardiovaskularni i živčani sustav.
Imunitet: zaštitni imunitet nije razvijen. Kao odgovor na antigene patogena razvijaju se HNL i autoimuni procesi. Humoralni imunitet se razvija kao odgovor na T. lipoidni antigen i titar je IgA i IgM.
Mikroskopski pregled. Provedite primarni sifilis tijekom pojave šankra. Materijal za istraživanje: iscjedak šankra, sadržaj regionalnih limfnih čvorova, iz kojih se priprema "zdrobljena" kap i ispituje u tamnom polju. Ako je rezultat pozitivan, vidljive su tanke naborane niti duljine 6-14 mikrona, koje imaju 10-12 ujednačenih malih uvojaka pravilnog oblika. Treponema pallidum karakterizirana je pokretima poput njihala i translatorno-fleksijskim pokretima. S razvojem lezija na oralnoj sluznici tijekom sekundarnog sifilisa, kao i s lokalizacijom šankroida u usnoj šupljini, potrebno je razlikovati Treponema pallidum od saprofitnih Treponema, koji su predstavnici normalne mikroflore. U ovom slučaju od odlučujuće je dijagnostičke važnosti otkrivanje tipičnih treponema u punktatu regionalnih limfnih čvorova.
Serodijagnostika. Wassermanova reakcija provodi se istodobno s 2 antigena: 1) specifični, koji sadrže antigen patogena - treponeme uništene ultrazvukom; 2) nespecifični - kardiolipin. Testni serum se razrijedi u omjeru 1:5 i postavi RSC prema općeprihvaćenoj metodi. S pozitivnom reakcijom uočava se kašnjenje hemolize, s negativnom reakcijom dolazi do hemolize crvenih krvnih stanica; intenzitet reakcije se procjenjuje prema tome od (+ + + +) do (-). Prvo razdoblje sifilisa je seronegativno i karakterizira ga negativna Wassermanova reakcija. U 50% pacijenata reakcija postaje pozitivna ne prije 2-3 tjedna nakon pojave šankra. U drugom i trećem razdoblju sifilisa učestalost pozitivnih reakcija doseže 75-90%. Nakon tijeka liječenja, Wassermanova reakcija postaje negativna. Paralelno s Wassermanovom reakcijom provodi se reakcija mikroprecipitacije s nespecifičnim kardiolipinskim antigenom i ispitivanim inaktiviranim krvnim serumom ili plazmom. Nakapaju se 3 kapi seruma u jažicu na ploči od pleksiglasa (ili običnog stakla) i doda se 1 kap kardiolipinskog antigena. Smjesa se temeljito izmiješa i rezultati se uzimaju u obzir. Pozitivna reakcija s krvnim serumom bolesnika sa sifilisom karakterizirana je stvaranjem i gubitkom pahuljica različitih veličina; s negativnim rezultatom opaža se jednolika opalescencija svjetla.
RIF – reakcija neizravne imunofluorescencije – specifična je za dijagnozu sifilisa. Kao antigen koristi se suspenzija treponema tkiva. Koristi se reakcija RIF_200. Serum bolesnika se inaktivira na isti način kao kod Wassermannove reakcije i razrijedi u omjeru 1:200. Kapi antigena se nanose na stakalce, osuše i fiksiraju u acetonu 5 minuta. Zatim se serum pacijenta nanosi na preparat, nakon 30 minuta se ispere i osuši. Sljedeći korak je tretiranje lijeka fluorescentnim serumom protiv humanih globulina. Pripravak se proučava pomoću fluorescentnog mikroskopa, bilježeći stupanj luminiscencije treponema.
Specifična je i RIT reakcija imobilizacije treponema. Živa kultura treponeme dobiva se uzgojem u testisu kunića. Testis se usitnjava u posebnoj podlozi u kojoj treponeme ostaju pokretne. Reakcija se postavlja na sljedeći način: suspenzija tkivnih (pokretnih) treponema se sjedini u epruveti s ispitivanim serumom i doda se svježi komplement. U jednu kontrolnu epruvetu umjesto ispitivanog seruma dodaje se serum zdrave osobe, u drugu umjesto svježeg komplementa dodaje se inaktivirani - inaktivni. Nakon držanja na 35 °C u anaerobnim uvjetima (anaerostat), iz svih epruveta priprema se “zdrobljena” kap te se u tamnom polju određuje broj pokretnih i nepokretnih treponema.
Liječenje: Penicilini, tetraciklini, lijekovi koji sadrže bizmut.

Sifilis je ciklička ljudska spolna bolest koju uzrokuje pallidum spiroheta; Stadij I očituje se šankroidom (fr. šankr– ulkus), stadij II – oštećenje stijenki krvnih žila i različiti osipi, stadij III – gume u raznim organima s oštećenjem živčanog sustava. Guma (lat. . gumena guma- guma) je kronični infiltrat u obliku čvora, sklon propadanju i ulceraciji. Sifilitička guma ( sin.: syphilitic granuloma, gumma syphilide, terciary syphiloma) je bezbolna hemisferična guma, koja je manifestacija tercijarnog aktivnog sifilisa. Patogen – Treponema pallidum- otkrili su 1905. F. Schaudin i E. Hoffmann.

T. pallidum– mikroorganizam spiralnog oblika, dimenzija 0,09 – 0,18 x 6 – 20 mikrona. Broj spiralnih zavoja je od 8 do 12, zavoji su jednolični, nalaze se na istoj udaljenosti jedan od drugog, oko 1 mikrona, visina se smanjuje prema krajevima. U elektronskom mikroskopu izgleda kao zmija ili kišna glista. Na oba kraja treponeme nalaze se blefaroplasti s pričvršćenim flagelama, čiji broj varira od dva do nekoliko; oni tvore aksijalnu nit upletenu oko protoplazmatskog cilindra spirohete. U nepovoljnim uvjetima može formirati ciste. U tijelu životinja može se pojaviti slučaj mukopolisaharida poput kapsule.

Treponema se ne boji dobro anilinskim bojama, zbog čega se uzročnik sifilisa naziva blijeda spiroheta. Reducira srebrni nitrat u metalno srebro, koje se taloži na površini mikroba i čini ga vidljivim u tkivima: kada se boje po Morozovu, treponeme izgledaju smeđe ili gotovo crne. Kada se boje prema Romanovsky-Giemsa, dobivaju blijedo ružičastu boju.

Treponeme se obično razmnožavaju poprečnom diobom, a podijeljene stanice mogu neko vrijeme prianjati jedna uz drugu. Vrijeme podjele je oko 30 sati.

Živi treponemi su vrlo pokretljivi, čine pokrete oko vlastite uzdužne osi, kao i fleksije, valovite i translacijske pokrete.

Do danas ne postoji metoda kojom bi bilo moguće stabilno dobiti kulture treponema. Treponema pallidum, patogena za ljude, nikada nije bila uzgajana u umjetnim hranjivim podlogama, u pilećim embrijima ili kulturama stanica. One vrste njihovih sojeva koje rastu u anaerobnim uvjetima vjerojatno su saprofitne spirohete, bliske uzročniku sifilisa. Njihova fiziologija ostaje malo proučena. Treponeme su kemoorganotrofi, nemaju katalazu i oksidazu, a mogu fermentirati ugljikohidrate. Rastu na vrlo bogatoj podlozi koja sadrži do 11 aminokiselina, vitamine, soli i serumski albumin. Najbolji način uzgoja patogenih spiroheta je zaraza zeca u testisu (eksperimentalni orhitis). Predloženo je da postoji T. pallidumživotni ciklus, uključujući, osim spiralnog oblika, zrnati stadij i stadij cistastih sferičnih tijela. Upravo granulirani oblici ovih mikroorganizama mogu proći kroz bakterijske filtre.

Antigeni treponema su slabo proučeni. Utvrđeno je da treponemi sadrže komplekse proteina, polisaharida i lipida. Antigenski sastav kulture i tkivnih treponema je toliko blizak da se antigeni pripremljeni iz kulture treponema mogu koristiti za RSC u dijagnostici sifilisa. U ljudskom tijelu treponemi stimuliraju proizvodnju protutijela koja uzrokuju imobilizaciju i smrt živih pokretnih treponema, fiksiraju komplement u prisutnosti suspenzije T. pallidum ili srodnih spiroheta, a otkrivaju se i u neizravnom RIF-u.

Uzročnik sifilisa ne proizvodi egzotoksine. Treponema pallidum relativno je neotporna na vanjske utjecaje. Brzo ugibaju sušenjem i na povišenim temperaturama (na 55 °C 15 minuta). U 0,3 – 0,5% otopini HCl momentalno gube pokretljivost; Također ga brzo gube i umiru u prisutnosti arsena, bizmuta i žive. U punoj krvi ili serumu na 4 °C ostaju vitalni 24 sata, što treba uzeti u obzir kod transfuzije krvi.

Epidemiologija. Sifilis je tipična spolna bolest. Izvor infekcije je bolesna osoba, obično zarazna 3 do 5 godina; bolesnici s kasnim oblicima sifilisa nisu zarazni. Infekcija se u velikoj većini slučajeva javlja različitim vrstama spolnih i kućnih kontakata, rjeđe transplacentarnim putem od bolesne majke do djeteta (kongenitalni sifilis) ili kao profesionalna infekcija kontaktom medicinskog osoblja. U prirodnim uvjetima od sifilisa obolijevaju samo ljudi, u pokusima se mogu zaraziti majmuni, hrčci i zečevi. Kod majmuna se šankr razvija na mjestu ubrizgavanja treponeme, kod kunića i hrčaka infekcija je asimptomatska.

Patogeneza i klinika. Razdoblje inkubacije za stečeni sifilis varira od 2 do 10 tjedana, obično 20 – 28 dana. Ulazne točke infekcije najčešće su sluznice spolnih organa, rjeđe usne šupljine, kao i oštećena koža. Na mjestu prodiranja, patogen se umnožava i nastaje primarni sifilom (tvrdi šankr) - erozija ili ulkus sa zbijenom bazom. Zatim, uzročnik ulazi u limfni sustav, te se razvijaju limfangitis i regionalni limfadenitis. Ovo je tipična klinička slika primarnog sifilisa, koja traje 1,5 - 2 mjeseca. Tada ti znakovi nestaju. Sekundarno razdoblje sifilisa povezano je s generalizacijom procesa, kada se povećavaju mnogi limfni čvorovi, a na koži i sluznicama pojavljuju se osipi; Može doći do oštećenja unutarnjih organa i živčanog sustava. Razlikuju se sekundarni svježi i sekundarni rekurentni sifilis. Sa svakim sljedećim relapsom, intenzitet osipa postaje manje izražen, a razdoblja između recidiva se povećavaju. Elementi osipa sadrže veliki broj živih treponema, u tom razdoblju pacijent je najzarazniji. Trajanje sekundarnog sifilisa je do 4 godine ili više. Zatim bolest ulazi u dugo asimptomatsko razdoblje, nakon čega se nakon nekoliko godina razvija tercijarni sifilis. U ovom slučaju uočava se veliko organsko oštećenje unutarnjih organa, kardiovaskularnog sustava, središnjeg živčanog sustava, kostiju, formiraju se gume, praćene propadanjem tkiva i degenerativnim promjenama. Karakteristična klinička karakteristika sifilisa je odsutnost bilo kakvih subjektivnih pritužbi pacijenta (bol, svrbež, žarenje itd.).

Imunitet. Ne postoji prirodni ili umjetni imunitet protiv sifilisa; Postoji samo infektivni imunitet i dokle god on postoji, čovjek praktički nije osjetljiv na novu infekciju. Infektivni imunitet razvija se 10-11 dana nakon pojave tvrdog šankra (imunitet šankroida); tijekom tog razdoblja ponovna infekcija se ili ne opaža ili je novoformirani šankr abortivan (superinfekcija). Nakon toga, tijekom superinfekcije, priroda nastalih lezija odgovara stadiju bolesti u vrijeme ponovne infekcije. Superinfekcija se objašnjava privremenim slabljenjem ili "raspadom" infektivnog imuniteta. Potrebno je razlikovati reinfekciju od superinfekcije, tj. nove, ponovljene infekcije osobe koja je prethodno bolovala od sifilisa (izliječila se) i zbog toga je izgubila infektivni imunitet. Opisani su slučajevi čak tri slučaja sifilisa. Razdoblje inkubacije u takvih bolesnika je kraće, češće se razvija višestruki ulcerozni šankr s limfadenitisom, a serološke reakcije postaju ranije pozitivne. U sekundarnom razdoblju papule na koži često erodiraju. To se objašnjava činjenicom da se kod sifilisa razvija reakcija preosjetljivosti odgođenog tipa, nakon liječenja senzibilizirani limfociti ostaju u tijelu dugo vremena. Infektivna imunost je nesterilne prirode i uzrokovana je humoralnim čimbenicima: u serumu bolesnika nalaze se imunoglobulini klasa G, A i M.

Laboratorijska dijagnostika. Za dijagnosticiranje sifilisa optimalan je integrirani pristup, koji uključuje istodobnu upotrebu nekoliko metoda. Tradicionalno se dijele na izravne, koje omogućuju dokazivanje prisutnosti patogena u materijalu koji se proučava (infekcija životinja, različite vrste mikroskopije i molekularne genetičke metode detekcije DNA T. pallidum– PCR i DNA sondiranje), te neizravni – serološki testovi za otkrivanje protutijela. S druge strane, serološki testovi su predstavljeni ne-treponemalnim i treponemskim testovima.

Materijal koji se ispituje za detekciju treponema izravnim metodama je iscjedak šankra ili njegov punktat, punktat limfnog čvora, struganje rozeole i cerebrospinalna tekućina. Patogen se najbolje detektira u nativnom materijalu mikroskopijom u tamnom polju (vidi sliku 111.4) ili fazno-kontrastnom mikroskopijom, koja omogućuje promatranje različitih tipova kretanja živog patogena. Ako je liječenje antibioticima već počelo, uzročnik se ne može otkriti u patološkom materijalu. Po potrebi se provodi izravni (ili neizravni) RIF ili se preparat boji po Romanovsky-Giemsi. Ove metode se koriste samo za ranu dijagnozu sifilisa.

Serološki testovi mogu se koristiti u različitim stadijima bolesti, osim kod seronegativnog primarnog sifilisa. Obično se koristi kompleks seroloških reakcija. DO netreponemski testovi s vizualnim određivanjem rezultata uključuju: reakciju vezanja komplementa (Wassermannova reakcija = RSKk = RW) s kardiolipinskim antigenom goveđeg srčanog mišića (cross-reacting antigen), reakciju mikroprecipitacije (MR, ili RMP) - mikroreakcija s plazmom i inaktiviranim serumom; RPR - brzi plazma reagin test, i druge reakcije. Stručnjaci smatraju da je za masovni pregled najbolje koristiti dva testa: RPR i RPGA ili ELISA, budući da je RPR osjetljiviji u primarnom sifilisu, RPGA - u kasnijim fazama bolesti i ELISA - u svim fazama. Netreponemski testovi s mikroskopskim očitavanjem rezultata uključuju VDRL test i USR test. Netreponemski testovi koriste se kao testovi probira jer mogu dati lažno pozitivne rezultate. U treponema testovi koriste antigene treponemskog podrijetla. Koriste se za potvrdu rezultata netreponemskih testova (lažno pozitivnih?) za kliničku, epidemiološku i anamnestičku sumnju na sifilis, za dijagnozu latentnih i kasnih oblika, za retrospektivnu dijagnozu. Treponemski testovi uključuju: RSKt (RSK s treponemskim antigenom), RIBT (ili RIT) - reakcija imobilizacije Treponema pallidum, RIF (jedna od najboljih reakcija), RPGA, ELISA, imunobloting.

Mikrobiološka dijagnostika sifilisa

Praktični rad

Medicina i veterina

Naziv "blijeda" treponema dobila je zbog niske sposobnosti bojanja. Postoje i drugi patogeni treponemi: T. pertenue - uzročnik frmbezije, T. carateum - uzročnik pince, T. bejel - uzročnik kronične generalizirane spirohetoze (bejel). Navedeni uzročnici i uzročnici...

Upute studentima za praktičnu nastavu br.36.

Tema lekcije:

Cilj: Proučavanje metoda mikrobiološke dijagnostike, terapije i prevencije sifilisa.

Modul 2 . Specijalna, klinička mikrobiologija i mikrobiologija okoliša.

Tema 36: Mikrobiološka dijagnostika sifilisa.

Relevantnost teme:

Uzročnik sifilisa

Sifilis je zarazna spolna bolest koju uzrokuje Treponema pallidum, a karakterizira je oštećenje kože, unutarnjih organa, kostiju i živčanog sustava. Postoje stečeni i kongenitalni sifilis.

Taksonomija. Uzročnik sifilisa - treponema pallidum (Treponema pallidum) - otkrili su 1905. F. Schaudinn i E. Hoffman; pripada obitelji Spirochaetaceae, odjel Gracilicutes.

Morfologija i tinktorijalna svojstva.Naziv "blijeda" treponema dobila je zbog niske sposobnosti bojanja. Postoje i drugi patogeni treponemi: T. pertenue - uzročnik frmbezije, T. carateum - uzročnik pince, T. bejel - uzročnik kronične generalizirane spirohetoze (bejel). Ovi patogeni i bolesti koje uzrokuju češći su u regijama s vrućom i vlažnom klimom. Treponema pallidum je tanka bakterija spiralnog oblika, duga 4 do 14 mikrona, s jednoličnim malim uvojcima (8-14 uvojaka); uz spiralni oblik može imati i druge oblike - u obliku cista, granula, L-formi; obojen prema Romanovsky-Giemsi u karakterističnu blijedoružičastu boju. Pokreti se kreću od spiralnih do fleksijskih.

Uzgoj.Treponema pallidum je obligatni anaerob, izuzetno zahtjevan prema hranjivim medijima. Treponema uzgojena na hranjivim podlogama - kulturalna spiroheta - razlikuje se od patogene po tome što je manje virulentna, ali su im antigeni slični, što se koristi u serodijagnostici sifilisa.

Antigenska struktura.Treponema pallidum karakterizirana je antigenskim vezama s drugim treponemama, kao i lipoidima životinjskih i ljudskih tkiva. U patogenu je identificirano nekoliko antigena, od kojih je jedan, lipoidni antigen, identičan lipoidnom ekstraktu goveđeg srca.

Otpornost. Treponema pallidum je slabo otporna u okolišu; u 55 0 C umire unutar 15 minuta, osjetljiv je na isušivanje, svjetlost, soli žive, bizmut, arsen, penicilin. Na kućanskim predmetima ostaje zarazna dok se ne osuši; dobro očuvano u kadaveričnom tkivu.

Osjetljivost životinja.Eksperimentalno se patološki proces može izazvati u testisu i koži kunića, te u koži čovjekolikih majmuna.

Epidemiologija. Izvor infekcije je bolesna osoba. Infekcija se javlja uglavnom spolnim kontaktom, rijetko putem kućanskih predmeta (čaše, četkice za zube, cigarete itd.) kontaminiranih iscjetkom bolesnika; Moguća je infekcija poljupcima, mlijekom dojilje (kućni sifilis), ne mogu se isključiti slučajevi infekcije transfuzijom krvi od darivatelja sa sifilisom.

Patogeneza i klinička slika.Uzročnik sifilisa ulazi u tijelo kroz kožu ili sluznicu, širi se kroz organe i tkiva, uzrokujući njihovo oštećenje. Period inkubacije u prosjeku traje 3-4 tjedna. Nakon razdoblja inkubacije sifilis se javlja ciklički u obliku primarnog, sekundarnog i tercijarnog razdoblja. Na mjestu unošenja uzročnika (na genitalijama, u usnoj šupljini itd.) nastaje primarna lezija - šankr - oštro ograničeno zbijanje s čirom na površini. Sekundarno razdoblje sifilisa traje 3-4 godine, karakterizirano osipom i kršenjem općeg stanja tijela. Tercijarno razdoblje karakteriziraju oštećenja kože, sluznice, unutarnjih organa, kostiju i živčanog sustava: pojavljuju se tvorevine sklone propadanju i ulceraciji.

Imunitet. Ne postoji urođeni imunitet na sifilis. Uz sifilis se razvija nesterilni imunitet; Nakon ozdravljenja imunitet nije očuvan, pa su mogući recidivi bolesti.

Mikroskopija tamnog polja koristi se za otkrivanje Treponema pallidum u iscjetku od šankroida. Do kraja primarnog iu sekundarnom razdoblju, Wassermanova sergološka reakcija, Kahnova sedimentna reakcija, citokolični i drugi testovi koji dokazuju antitijela na treponemu pallidum postaju pozitivni. Tijekom masovnih pregleda koristi se selekcijska reakcija, odnosno mikroreakcija na staklu, s kapi krvi ili seruma i posebnim antigenom. Istraživački laboratoriji također koriste reakciju imobilizacije treponema i druge suvremene metode.

Shema mikrobioloških istraživanja za sifilis

Mikroskopski pregled Serodijagnostika

(set seroloških reakcija):

Wassermanova reakcija

Reakcija imobilizacije treponema

Mikroskopiranje nativnog preparata RIF

U tamnom polju

ODGOVORITI ODGOVORITI

Liječenje. Najučinkovitiji antimikrobni agensi su penicilinski antibiotici. Također se koriste pripravci bizmuta, joda i dr.

Prevencija. Ne postoji specifična prevencija. Nespecifična prevencija sastoji se u poštivanju pravila higijene, kao iu provođenju niza sanitarnih i higijenskih mjera javne prirode: registracija pacijenata sa sifilisom, hospitalizacija svih pacijenata sa zaraznim oblicima, uključivanje u pregled svih članova obitelji oboljele osobe, sustavni pregledi rizičnih skupina, edukacija stanovništva i dr.

Specifični ciljevi:

Upoznati morfologiju uzročnika sifilisa.

Odredite značajke kliničkog tijeka sifilisa.

Definirajte pojmove "tkiva" i "kulturne" treponeme.

Interpretirati rezultate mikroskopskog pregleda.

Studijske metode serološke dijagnoze sifilisa.

Upoznati se s metodama prevencije i specifične terapije.

Biti u mogućnosti:

  • Prikupiti materijal za istraživanje od pacijenata
  • Interpretirati rezultate mikroskopskog pregleda
  • Biti u stanju izvesti Wassermanovu reakciju

Teorijska pitanja:

1. Patogen.

  • Svojstva. Otpornost.
  • Patogenost za ljude i životinje. Čimbenici patogenosti, toksini.
  • Patogeneza bolesti u ljudi, imunitet.
  • Mikrobiološka dijagnostika.
  • Specifična prevencija i liječenje

2. Ciljevi postavljanja Wassermanove reakcije.

3. Dijagnostička vrijednost Wassermanove reakcije i sedimentnih reakcija.

4. Mehanizam Wassermanove reakcije.

5. Značajke imuniteta kod sifilisa.

Praktični zadaci koji se izvode na nastavi:

  • Mikroskopiranje demonstracijskih preparata.
  • Skiciranje demonstracijskih mikroslajdova u protokol.
  • Analiza laboratorijske dijagnostičke sheme.
  • Sastavljanje protokola.

Književnost:

1. Korotyaev A.I., Babichev S.A., Medicinska mikrobiologija, imunologija i virologija / Udžbenik za medicinska sveučilišta, St. Petersburg: “Specijalna literatura”, 1998. - 592 str.

2. Timakov V.D., Levashev V.S., Borisov L.B. Mikrobiologija / Udžbenik - 2. izdanje, dopunjeno. i dodatni - M.: Medicina, 1983, - 512 str.

3. Pjatkina K.D. Krivoshein Yu.S. Mikrobiologija s virologijom i imunologijom - Kijev: Vishcha School, 1992. - 431 str.

4. Medicinska mikrobiologija /Uredio V.I. Pokrovsky.- M.: GEOTAR-MED, 2001.- 768 str.

5. Vodič kroz praktičnu nastavu iz mikrobiologije, imunologije i virologije. /Ed. M.P. Zykova.- M. “Medicina”. 1977. 288 str.

6. Cherkes F.K., Bogoyavlenskaya L.B., Belskan N.A. Mikrobiologija. /Ed. F.K. Čerkez M.: Medicina, 1986. 512 str.

7. Bilješke s predavanja.

Dodatna literatura:

1. Makijarov K.A. Mikrobiologija, virologija i imunologija - Alma-Ata.: “Kazahstan”, 1974. 372 str.

2. Titov M.V. Zarazne bolesti - K., 1995. 321 str.

3. Shuvalova E.P. Zarazne bolesti - M.: Medicina, 1990. - 559 str.

4. BME, T. 1, 2, 7.

5. Pavlovich S.A. Medicinska mikrobiologija u grafikonima: Udžbenik. dodatak za liječnički in-tov Mn.: Viš. škola, 1986. 255 str.

Kratke upute za rad na praktičnoj nastavi.

Na početku sata provjerava se stupanj pripremljenosti učenika za sat.

  • Samostalni rad.
  • inscenacija Wassermanove reakcije.
  • Računanje Wassermanove reakcije i zapisivanje u protokol.
  • Analiza i upisivanje shema laboratorijske dijagnostike u protokol.

Samostalni rad također uključuje mikroskopiranje demonstracijskih preparata i njihovo skiciranje u protokol nastave.

Na kraju sata provodi se probna kontrola i analiza konačnih rezultata samostalnog rada svakog studenta.

Tehnološka karta za izvođenje praktične nastave

Ne.

Faze

Vrijeme u min.

Načini učenja

Oprema

Mjesto

Provjera i korekcija izlazne razine pripreme za sat

20

Testovi izlazne razine

Stolovi.

Testovi na temu.

Radna soba

Samostalni rad

35

Grafikon

logična struktura

Zbirka pokaznih lijekova, bioloških proizvoda.

Samokontrola i korekcija naučenog gradiva

15

Ciljani programi obuke

Test kontrola

15

Testovi

Analiza rezultata rada

Algoritam rada u laboratoriju:

Studija laboratorijske dijagnostičke sheme za sifilis.

Mikroskopiranje pripremljenih razmaza uzgojenih i tkivnih treponema.

Upoznavanje s pravilima za prikupljanje materijala od pacijenata za mikroskopiranje materijala koji se proučava.

Mikroskopiranje i analiza demonstracijskih preparata.

Skiciranje lijekova u protokol.

Zapisivanje shema laboratorijske dijagnostike u protokol.

Sastavljanje protokola.

Kontrola ispita i analiza rezultata samostalnog rada svakog studenta.


Ciljani zadaci obuke:

1. Bolesnik je primljen u bolnicu s dijagnozom primarnog sifilisa. Koja se od navedenih dijagnostičkih metoda koristi u ovoj fazi bolesti?

A . mikroskopija tamnog polja;

C. RP u gelu

D. RA

E . neizravna imunofluorescencija

2. Kod pacijenta s odjela maksilofacijalne kirurgije, kada je napravljena Wassermanova reakcija, pokazala se negativnom. Koji se od sljedećih rezultata koristi za određivanje fenomena negativnog RSC?

A . aglutinacijom eritrocita;

B . prisutnošću sedimenta crvenih krvnih stanica;

C . promjenom boje tekućine;

D . formiranjem filma

E . prisustvom hemolize u epruvetama.

3. Pregledom bolesnika s KVD-om otkriveni su papularno-rozeolozni osipi na trupu i udovima te povećani limfni čvorovi. Preliminarna dijagnoza sifilisa. Kojom se laboratorijskom dijagnostičkom metodom može potvrditi ova dijagnoza?

A. alergičan;

B. biološki;

C . bakteriološki;

D . bakterioskopski;

E. ELISA

4. Tijekom pregleda, stomatolog je otkrio tvrdi šankr u pacijentovim ustima. Koja od navedenih laboratorijskih dijagnostičkih metoda može poslužiti za postavljanje dijagnoze?

A . Reakcija imobilizacije treponema

B . Wassermanova reakcija

C. Kahnova reakcija

D. RA

E . bakterioskopski

5. Žena je došla u trudnoću u 8. tjednu trudnoće. Tijekom pregleda uzeta joj je krv kako bi se provjerila prisutnost specifičnih protutijela na treponeme. Kojim se od navedenih seroloških testova mogu dokazati antitijela na treponemu?

A. Wrightova reakcija

B . Wassermanova reakcija

C. Vidalova reakcija

D . Bordet-Gengou reakcija

E. RTGA.

6. Za potvrdu dijagnoze sifilisa laboratorijski tehničar je proveo serološku reakciju, u kojoj je koristio bolesnikov krvni serum, kardiolipidni antigen, komplement i indikatorski sustav. Kako se zove navedena reakcija?

A . Reakcija imobilizacije treponema;

B . Wassermanova reakcija;

C. Kahnova reakcija

D. RP

E . reakcija imunofluorescencije.

7. Prilikom provođenja serološke reakcije za otkrivanje protutijela na uzročnika sifilisa u krvnom serumu pacijenta, treponeme su inkubirane s pacijentovim serumom u anaerobnim uvjetima, nakon čega su bakterije izgubile pokretljivost. Kakva je reakcija dana i što to znači?

A . Wassermanova reakcija, pacijent ima sifilis;

B .Wassermannova reakcija, bolesnik je u razdoblju inkubacije;

C . Reakcija imobilizacije treponema, pacijent ima sifilis;

D . reakcija neizravne imunofluorescencije, pacijent ima sifilis;

E . Reakcija imobilizacije treponema, pacijent je jednom bolovao od sifilisa.

8. Za serološku dijagnozu sifilisa pomoću Wassermanove reakcije laboratorijski liječnik pripremio je sljedeće reagense: kardiolipidni antigen, izotonična otopina natrijevog klorida, hemolitički sustav. Koja je druga komponenta potrebna za izvođenje ove reakcije?

A . živa treponema;

B . crvena krvna zrnca ovaca;

C. upotpuniti, dopuna;

D . antiglobulinski serum;

E . dijagnostički precipitirajući serum.

9. U mikroslijedu pripremljenom iz punktata pacijentovih limfnih čvorova, obojenih prema Romanovsky-Giemsi, liječnik je identificirao tanke mikroorganizme s 12-14 ujednačenih kovrča blijedoružičaste boje. O kojem se uzročniku zarazne bolesti u ovom slučaju može govoriti?

A . povratna groznica;

B. leptospiroza;

C. lišmanijaza

D. sifilis

E. tripanosomijaza.

10. Pacijentu sa sumnjom na primarni sifilis uzet je struganje oralne sluznice. Mikroskopija razmaza obojenog metodom Romanovsky-Giemsa otkrila je zamršene ljubičaste bakterije. Koji je od sljedećih zaključaka točan?

A . pacijentu je dijagnosticirana T. pallidum;

B . Utvrđeno je da pacijent ima atipične oblike T. pallidum;

C . Pacijentu su dijagnosticirane nepatogene treponeme;

D . odabrana je pogrešna metoda slikanja;

E. -

11. Kliničar je posumnjao na primarni sifilis kod pacijenta. Koji je istraživački materijal prikladno prikupiti za potvrdu dijagnoze?

A . tkivna tekućina iz šankra i točkastih limfnih čvorova;

B . struganje od kožnih osipa;

C. cerebrospinalna tekućina;

D. sluz iz nosa

E. slina.

12. Pacijentu sa sumnjom na sekundarni sifilis uzeta je krv za testiranje. Koju dijagnostičku metodu je prikladno primijeniti za potvrdu dijagnoze?

A . Vidalova reakcija;

B . test alergije;

D . Bordet-Gengou reakcija

E . bakteriološka metoda

C . reakcija neizravne imunofluorescencije.


Kao i druga djela koja bi vas mogla zanimati

68128. Riječi u vrhu – a raj u duši 78,5 KB
Meta: usvojiti akademska znanja iz teorije književnosti, idejne i umjetničke analize pjesničkoga djela te poboljšati razumijevanje smislenog čitanja; razviti poetičniju viziju slika; podjeliti ljubav prema umjetničkoj riječi i prema prirodnoj prirodi. Ja ću pročitati poetske stihove, a ti ćeš biti kriv...
68129. Intelektualna igra “Književna zabava” Uvijek ćeš biti u srcima ljudi, Tarase! 43,5 KB
Ševčenko je razvio logično razumijevanje virazne čitanja vikhovuvaty do Ševčenkove riječi i cikavíst do razvoja njegove kreativnosti. Taras Shevchenko Taras Ovo buntovno i proročansko ime poznato je ne samo Ukrajincima nego i ostatku svijeta. Ševčenkov izvor s vodom Džerelnoja je kao duhovna molitva za ljude.
68130. Upoznavanje sa zemljom logike 28,5 KB
Danas nam djecu šalju po neviđenoj cijeni. Djeca do škole idu najkraćim putem, ali mogu godinama lutati raznim labirintima. Djeca ulaze i izlaze iz autobusa. Osovina tvrtke je kojim redom djeca sjede. Borya Petrik Yurko Vira Stas Ira.
68131. Analogija. Nabavite mališane za analogiju 263,5 KB
Vrsta lekcije: savladana lekcija i početnica Vještine: geometrijski likovi i mali predmeti za igru ​​Fotograf; Pojedinačni nizovi geometrijskih figura bebinih usta u nizu. Mijenjam mjesta i pospremam stvari. Sve figure su u različitim bojama, a sada otvorite oči i divite se...
68132. Putovanje oceanom logičnih smjerova 27,5 KB
Meta: Upoznajte djecu s različitim konceptima; razvijati mišljenje, jezik, pamćenje, marljivost; pokazati poniznost, hrabrost. Krenite na lekciju Molimo zabilježite teme i zabilježite lekciju. Danas su troškovi putovanja oko svijeta brodom sve veći. Čeka nas puno raznih pogodnosti. Lyudina je slatka stvar. Misli se pretvaraju u riječi.
68133. Ludi i besmisleni koncepti. Zahtjev za ponavljanje 84,5 KB
Meta: razjasniti i usustaviti znanje učenika o pojmovima ludosti i apsurda pojmova temeljito razumjeti znanje učenika razvezati logičke zadatke razviti logičku svjesnost svjesnosti poštivanja sjećanja; potaknuti ljubav prema stvorenjima, probuditi spoznajni interes za svako živo biće, formulirati samoprosvjetljenja...
68136. MODERNIZACIJA VOZILA U UKRAJINI: MEHANIZMI INSTITUCIONALNE REGULACIJE 188 KB
Djelotvornost i djelotvornost funkcioniranja sustava visokog osvjetljenja Ukrajine na početku 21. stoljeća bit će osigurani samo ako ne budu podložni najvišim vremenskim mandatima koje stvara gospodarstvo. Ova nestabilnost, demografska kriza, socio -kulturni vakuum.

T. pallidum subspecies pallidum je bakterija spiralnog oblika veličine 6-14x0,2-0,3 µm; u usjevima mogu biti veliki. Spiralne kovrče su iste visine, može ih biti do 14. Sposobne su za oblikovanje L-oblika.

Osnovni, temeljni način reprodukcije sifilisa- poprečna podjela. Uzročnik sifilisa U vanjskoj sredini nije jako stabilan i kada se osuši ugine, ali na hladnom ostaje i do 50 dana. Zagrijavanje na temperaturi od 40 °C tijekom jednog sata dovodi do gubitka patogenih svojstava; na 48 °C bakterije umiru unutar 10 minuta.

Uzročnik sifilisa ne boji se dobro anilinskim bojama (otuda i naziv "blijeda spiroheta"). Bakterije sifilisa reducirajte srebrni nitrat u metalno srebro, koje tkaninama daje crnu ili tamnosmeđu boju.

U domaćoj praksi Morozovljeva metoda posrebrivanja je široko rasprostranjena. Prema Romanovsky-Giemsi, ružičasto je obojen i nepatogen Treponema- u ljubičastoj ili plavoj boji. Također se koristi Burri negativni kontrast.

Kulturna svojstva sifilisa. Kultura uzročnika sifilisa

Blijeda spiroheta zahtjevan za uvjete uzgoja, slabo raste na umjetnim medijima; Još uvijek nedostaju metode za stabilnu proizvodnju kultura.

U našoj zemlji najveći broj sojevi sifilisa identificirali su kazanski mikrobiolozi V.M. Aristovski i P.P. Geltser.

Ovi "Kazani" sojevi sifilisa uz soj Reiter koristi se za proizvodnju Ag za serodijagnostiku. Uz dugogodišnji uzgoj bakterije sifilisa prilagođavaju se jednostavnijim okruženjima (na primjer, Kitta-Tarozzi) i gube patogena svojstva.

Kolonije sifilisa mali, pojavljuju se 3-5. dana uzgoja.

Sadržaj članka

Treponema pallidum

Morfologija i fiziologija

T. pallidum ima spiralni oblik, protoplastični cilindar, koji je uvijen u 8-12 vijuga. Iz krajeva stanice izlaze 3 periplazmatske bičeve. Treponema pallidum ne prihvaća dobro anilinske boje, pa se boji bojom Romanovsky-Giemsa. Međutim, najučinkovitija metoda je proučavanje u tamnom polju ili fazno-kontrastnom mikroskopu. Mikroaerofil. Ne raste na umjetnim hranjivim podlogama. T. pallidum se uzgaja u tkivu testisa kunića, gdje se dobro razmnožava i u potpunosti zadržava svoja svojstva, uzrokujući orhitis kod životinje. Antigeni. Antigenska struktura T. pallidum je složena. Povezan je s proteinima vanjske membrane, lipoproteinima. Potonji su antigeni s unakrsnom reakcijom koji su zajednički ljudima i stoci. Koriste se kao antigen u Wassermannovoj reakciji za serodijagnostiku sifilisa.

Patogenost i patogeneza

Čimbenici virulencije Treponema pallidum uključuju proteine ​​vanjske membrane i LPS, koji pokazuju svoja toksična svojstva nakon oslobađanja iz stanice. U isto vrijeme, očito, sposobnost treponeme, kada se dijeli, da formira zasebne fragmente koji prodiru duboko u tkiva, također se može pripisati faktorima virulencije. Postoje tri faze u patogenezi sifilisa. S primarnim sifilisom uočava se formiranje primarnog žarišta - tvrdog šankra na mjestu ulaznih vrata infekcije, nakon čega slijedi prodor u regionalne limfne čvorove, gdje se patogen razmnožava i akumulira. Primarni sifilis traje oko 6 tjedana. Drugi stupanj karakterizira generalizacija infekcije, popraćena prodorom i cirkulacijom uzročnika u krvi, što je popraćeno osipom na koži. Trajanje sekundarnog sifilisa u neliječenih bolesnika kreće se od 1-2 godine. U trećoj fazi otkrivaju se infektivni granulomi (gume sklone propadanju), lokalizirane u unutarnjim organima i tkivima. To razdoblje u neliječenih bolesnika traje nekoliko godina i završava oštećenjem središnjeg živčanog sustava (progresivna paraliza) ili leđne moždine (tabes dorsalis).

Imunitet

Kod sifilisa se javlja humoralni i stanični imunološki odgovor. Dobivena antitijela nemaju zaštitna svojstva. Stanični imunološki odgovor povezan je s fiksacijom patogena i stvaranjem granuloma. Međutim, ne dolazi do uklanjanja treponema iz tijela. Istodobno, nepovoljni okolišni uvjeti potiču stvaranje cista treponema, koje su lokalizirane u stijenci krvnih žila. Vjeruje se da to ukazuje na prijelaz bolesti u remisiju. Zajedno s cistama, treponemi tvore L-forme. Kod sifilisa se formira HRT, koji se može otkriti kožnim alergijskim testom s ubijenom suspenzijom treponema. Vjeruje se da je manifestacija tercijarnog razdoblja sifilisa povezana s HNL-om.

Ekologija i epidemiologija

Sifilis je tipična antroponozna infekcija. Obolijevaju samo ljudi koji su rezervoari zaraze u prirodi. Prijenos infekcije događa se spolnim kontaktom, a znatno rjeđe donjim rubljem i drugim predmetima. U vanjskom okruženju (zrak), treponeme brzo umiru.

Sifilis i druge treponematoze

Sifilis je kronična zarazna spolna bolest ljudi, ima ciklički progresivni tijek, zahvaća kožu, sluznice, unutarnje organe i živčani sustav. Uzročnik bolesti je Treponema pallidum.Postoje tri glavna razdoblja razvoja sifilisa, čije laboratorijske dijagnostičke metode imaju svoje karakteristike. U ranom razdoblju bolesti, materijal za laboratorijsku dijagnozu je iscjedak iz šankra, punktat iz limfnih čvorova, strugotine iz roseole, sifilida itd. Tijekom sekundarnog i tercijarnog razdoblja ispituje se krvni serum i cerebrospinalna tekućina.Budući da je izolacija čistih kultura treponema u konvencionalnim bakteriološkim laboratorijima nemoguća, u primarnom razdoblju bolesti (rjeđe kasnije) provodi se bakterioskopska dijagnostička metoda. Počevši od sekundarnog razdoblja koriste se uglavnom serološke metode.

Bakterioskopski pregled

Prije uzimanja patološkog materijala, sifilitički ulkus se najprije obriše vatom kako bi se uklonio lojni plak i kontaminirajuća mikroflora. Zatim se dno šankra iritira skalpelom ili metalnom lopaticom, ili se ulkus snažno stisne sa strane prstima u gumenoj rukavici kako bi se oslobodio eksudat iz rane. Ako postoji mala količina bistre tekućine, može se dodati kapi 0,85% otopine natrijevog klorida. U slučaju nemogućnosti uzimanja materijala s dna šankra (fimoza, ožiljak na čiru i dr.) radi se punkcija regionalnih limfnih čvorova.Kap tekućine iz čira ili punktata nanese se na tanko staklo. predmetno stakalce (1,1-1,2 mm), pokriti pokrovnim stakalcem i pregledati u tamnom vidnom polju (ljepše!), ili fazno-kontrastnim ili anoptralnim mikroskopom Blijeda treponema u tamnom vidnom polju izgleda kao blago sjajna. tanka nježna spirala sa strmim, ujednačenim, zaobljenim primarnim uvojcima. Pokreti su glatki, pa se savija pod kutom. Ali za njega su posebno karakteristične oscilacije poput njihala. Uzročnika sifilisa treba razlikovati od Treponema refringens (kolonizira vanjske spolne organe), koja je deblja, grublja, nejednakih velikih uvojaka i ima aktivne nestalne pokrete, ali se ne savija. Treponeme fusosp-irohetozne simbioze odlikuju se tankom šarom, blagim uvojcima i nestalnim kretanjem.Pri dijagnosticiranju oralnog sifilisa treba razlikovati blijedu treponemu od dentalnih treponema, osobito T. dentium, kao i od T. buccalis. Prvi od njih općenito je teško razlikovati od sifilitičkog. No, kraći je, ima 4-8 oštrih uvojaka i nema kretanja poput njihala. T. buccalis je deblja, grubih početnih uvojaka i nepravilnog kretanja.Ako postoji sumnja, treba uzeti u obzir da se sve saprofitne treponeme, za razliku od blijede, dobro boje anilinskim bojama. Oni ne prodiru u limfne čvorove, tako da proučavanje punktata ima veliku dijagnostičku vrijednost. Identifikacija tipičnih treponema u punktatu limfnih čvorova nedvojbeno potvrđuje dijagnozu sifilisa, pa je pregled u tamnom polju utisnutih kapi najbolja metoda za identifikaciju uzročnika sifilisa. Njegove prednosti su što se materijal brzo pregleda, a morfologija treponema u živom stanju je najkarakterističnija. Brisevi tinte metodom Burri više se ne koriste.Ako je nemoguće provesti istraživanje u tamnom vidnom polju, mogu se koristiti različite metode bojenja. Treponema pallidum ne prihvaća dobro anilinske boje. Od mnogih predloženih metoda bojenja, najbolji rezultati postižu se primjenom bojanja po Romanoveki-Giemsi. Pripremljeni razmazi se fiksiraju metilnim alkoholom ili Nikiforovljevom smjesom. Rezultati jasnoće se postižu kada se boja Romanovsky-Giemsa ulije u preparat. Da biste to učinili, komadići šibica se stave u Petrijevu zdjelicu, na njih se stavi predmetno staklo, razmaže se i ulijeva se boja dok ne navlaži razmaz. Vrijeme slikanja se udvostručuje. Pod mikroskopom, blijede treponeme imaju nježno ružičastu boju, dok su druge vrste treponema obojene plavom ili plavo-ljubičastom bojom.Također možete koristiti metodu Morozov posrebrenja. Treponeme u potpunosti zadržavaju svoje morfološke karakteristike i pod mikroskopom izgledaju smeđe ili gotovo crne. Ali posrebreni pripravci ne čuvaju se dugo. Nedavno se metode bojenja treponema rijetko koriste.Ako se započne liječenje sifilisa kemoterapijom, praktički je nemoguće identificirati uzročnika u patološkim materijalima čak i uz pomoć tamnog vidnog polja. Ako se dobije negativan test, mora se ponoviti.

Serološka dijagnostika sifilisa

Pri provođenju seroloških reakcija sada se koriste sljedeće metode istraživanja, objedinjene u Ukrajini: reakcija fiksacije komplementa (CFR), imunofluorescencija (RIF), imobilizacija treponema (PIT), reakcija mikroprecipitacije (MPR) i enzimski imunoanaliza (ELISA). Dugi niz godina glavna i najčešća reakcija bila je reakcija vezanja komplementa ili Wassermannova reakcija (RW). Za njezino izvođenje koristi se krvni serum bolesnika sa sifilisom i cerebrospinalna tekućina u slučaju oštećenja živčanog sustava.Tehnika postavljanja Wassermanove reakcije ne razlikuje se od tehnike izvođenja RSC. Jedina je razlika u tome što se za RO koristi ne samo specifični treponem, već i nespecifični kardiolipinski antigen.l Uzimanje 5-10 ml krvi iz ulnarne vene provodi se na prazan želudac ili ne prije 6 sati nakon obroka. Krv se ne smije uzimati bolesnicima s povišenom tjelesnom temperaturom, nakon konzumiranja alkohola i masne hrane, trudnicama 10 dana prije porođaja i porodiljama. Serum ekstrahiran iz krvi zagrijava se na temperaturi od 56 °C 30 minuta kako bi se inaktivirao vlastiti komplement. RO se mora postaviti s dva antigena: specifičnim i nespecifičnim Ultrazvučno specifični treponemski antigen priprema se iz kultura Treponema pallidum (Reiterov soj) uzgojenih u epruvetama i izloženih ultrazvuku. Proizvodi se u obliku liofiliziranog praha. Nespecifični kardiolipinski antigen priprema se alkoholnom ekstrakcijom lipida iz goveđeg srca i pročišćavanjem od balastnih smjesa, pakiran u ampule od 2 ml. Za uvođenje antigena u PO, titrira se prema ovim uputama. Neposredno prije stadija RV provodi se titracija komplementa i hemolitičkog seruma prema istoj shemi kao kod RSC. Wassermanova reakcija provodi se kvalitativnom i kvantitativnom metodom. Kvalitativna reakcija provodi se u tri epruvete s dva antigena prema uobičajenoj shemi.Rezultati reakcije ocjenjuju se prema sustavu 4 plus: pozitivna reakcija - kada postoji potpuni ili značajan zastoj hemolize (4+, 3 +); slabo pozitivna reakcija - djelomična odgoda hemolize (2 +); upitna reakcija - blago kašnjenje hemolize (1 +). U slučaju potpune hemolize RO se smatra negativnim.Svaki serum koji je dao pozitivnu kvalitativnu reakciju mora se ispitati kvantitativnom metodom svojim serijskim razrjeđenjem od 1:10 do 1:640.Titar ispitivanog seruma (reagin titar ) smatra se njegovim maksimalnim razrjeđenjem, pri kojem uzrokuje potpuno (4+) ili značajno (3+) kašnjenje hemolize. Kvantitativna metoda određivanja stadija RO važna je za procjenu učinkovitosti liječenja sifilisa. Brzo smanjenje titra reagina ukazuje na uspješnu terapiju. Ako se titar seruma ne smanjuje dulje vrijeme, to ukazuje na nedostatak učinkovitosti korištenih lijekova i potrebu za promjenom taktike liječenja.U slučaju piloze za seronegativni primarni sifilis ili latentni, tercijarni ili kongenitalni, preporuča se izvršiti Wassermanov test na hladnom prema istoj shemi. Kod sumnje na neurosifilis izvodi se RO s cerebrospinalnom tekućinom koja je inaktivirana jer ne sadrži vlastiti komplement. Nerazrijeđena tekućina se uvodi u reakciju u razrjeđenjima od 1: 2 i 1: 5. Wassermanova reakcija postaje pozitivna 2-3 tjedna nakon pojave šankra. U sekundarnom sifilisu, pozitivan je u 100% slučajeva, u tercijarnom sifilisu - u 75%.Osim toga, u kompleksu seroloških reakcija (CSR), reakcija mikroprecipitacije s krvnom plazmom ili inaktiviranim serumom koristi se kao test probira.

Mikroreakcija taloženja

Mikroreakcija precipitacije izvodi se s kardiolipinskim antigenom. Princip reakcije je da kada se plazmi ili serumu oboljelog od sifilisa doda emulzija kardiolipinskog antigena, nastaje precipitat (kompleks antigen-antitijelo) koji se taloži u obliku bijelih ljuskica. Koristi se sljedeća tehnika: tri kapi plazme (ili inaktiviranog seruma) se pipetiraju u jažicu ploče, zatim se doda jedna kap standardne emulzije kardiolipinskog antigena. Reakcijske komponente se miješaju mućkanjem ploče 5 minuta, nakon čega se dodaju tri kapi 0,9% otopine natrijevog klorida i ostavi na sobnoj temperaturi još 5 minuta. Obavezna kontrola sa slabo pozitivnim krvnim serumom. Rezultati se procjenjuju golim okom preko umjetnog izvora svjetlosti. Kada se u rupi pojave velike pahuljice, reakcija se smatra pozitivnom (4 +, 3 +), srednje i male pahuljice smatraju se slabo pozitivnima (2 +, 1 +). Ako je nalaz negativan, ne dolazi do stvaranja precipitata.Mikroreakcija precipitacije može se provesti i kvantitativnom metodom za određivanje titra precipitirajućih protutijela i na temelju toga procijeniti učinkovitost liječenja. Viši MRP titri se postižu s plazmom nego sa serumom. U inozemstvu je analog MRP-a sa serumom bolesnika VDRL (Veneral disease research laboratoiy), a s plazmom - RPR (Rapid plasma reagin).

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Skupina specifičnih reakcija koje se naširoko koriste za serološku dijagnostiku sifilisa uključuje reakciju neizravne imunofluorescencije. Kao antigen koristi suspenziju patogene blijede treponeme soja Nichols iz parenhima testisa kunića 7. dana nakon infekcije. Reakcija se provodi u dvije modifikacije: RIF-ABS i RIF-200. U prvoj opciji koristi se sorbent antitijela (sonikat) - ultrazvučni treponemski antigen za CSC. Proizvodi ga Kaunas poduzeće za proizvodnju bakterijskih pripravaka (Litva). Kod opcije RIF-200 pacijentov serum razrjeđuje se 200 puta kako bi se uklonio utjecaj skupine antitreponemskih protutijela RIF-ABS se izvodi na tankim, dobro odmašćenim stakalcima. Na poleđini stakla staklorezačem se ucrta 10 krugova promjera 0,7 cm.U krugu se na staklo nanosi antigen - suspenzija blijedog treponema - u tolikoj količini da ih ima 50-60 komada. u vidnom polju. Brisevi se suše na zraku, fiksiraju na plamenu i u acetonu 10 minuta. U posebnu epruvetu dodajte 0,2 ml sorbenta (sonikata) i 0,5 ml krvnog seruma bolesnika i dobro promiješajte. Smjesa se nanosi na razmaz (antigen) tako da ga ravnomjerno prekrije i drži 30 minuta u vlažnoj komori na 3–7 °C (reakcija II. faze). Nakon toga razmaz se ispere fosfatnim puferom, osuši i na njega se nanese antišobulinski fluorescentni serum 30 minuta, stavi u vlažnu komoru na 37 °C (faza II). Preparat se ponovno ispere fosfatnim puferom, osuši i pregleda pod fluorescentnim mikroskopom. Uz pozitivnu reakciju, blijeda treponema emitira zlatno-zelenu svjetlost, uz negativnu reakciju, ne svijetli. Tehnika postavljanja RIF-200 je isto kao i RIF-ABS, samo se pacijentov krvni serum prethodno razrijedi 200 puta fosfatnim puferom. Kod izvođenja reakcije imunofluorescencije s cerebrospinalnom tekućinom bolesnika sa sifilisom živčanog sustava koriste se RIF-c i RIF-10, t.j. Tekućina se uvodi u reakciju neaktivirana i razrijeđena ili razrijeđena u omjeru 1:10.

Reakcija imobilizacije treponeme pallidum (PIT)

Reakcija imobilizacije blijedih treponema (PIT) temelji se na fenomenu gubitka njihove pokretljivosti u prisutnosti imobilizirajućih antitreponemskih protutijela iz bolesnikova seruma i komplementa u uvjetima anaerobioze. Kao antigen u reakciji koristi se suspenzija blijede treponeme iz tkiva testisa kunića zaraženog laboratorijskim sojem Nichols. Suspenzija se razrijedi sterilnom 0,85%-tnom otopinom natrijeva klorida tako da u vidnom polju bude 10-15 spiroheta.Za provođenje reakcije uzme se 0,05 ml krvnog seruma bolesnika, 0,35 ml antigena i 0,15 ml komplementa. pomiješano u sterilnoj epruveti. Eksperiment je popraćen kontrolama seruma, antigena i komplementa. Epruvete se stavljaju u anerostat, stvaraju se anatomski uvjeti i drže u termostatu 18-20 sati na temperaturi od 35 ° C. Zatim se iz svake epruvete pripreme prešane kapi, izbroji se najmanje 25 treponema i koliko od njih su pokretni i bilježi se koliko ih je zabilježeno. Postotak specifične imobilizacije blijede treponeme izračunava se po formuli: x = (A-B) / B * 100, gdje je X postotak imobilizacije, A je broj mobilnih treponema u kontrolnoj epruveti, B je broj mobilnih treponema. treponeme u epruveti. Reakcija se smatra pozitivnom kada je postotak imobilizacije 50 ili više, slabo pozitivan - od 30 do 50, sumnjiv - od 20 do 30 i negativan - od 0 do 20. U praktičnim laboratorijima koriste jednostavniju melanger metodu PIT za M.M. Ovčinnikov. Anaerobni eksperimentalni uvjeti stvaraju se stavljanjem reakcijske smjese (seruma, antigena, komplementa) u melangeur čija su oba kraja zatvorena gumenim prstenom. Tehnika melangera omogućuje vam da radite bez složene opreme i aparata za stvaranje anaerobioze, ali daje rezultate koji se ne dobivaju klasičnom tehnikom mikroanaerostata.Reakcije imobilizacije treponema i imunofluorescencija smatraju se najspecifičnijim u serološkoj dijagnozi sifilisa. Pa ipak, PIT se, unatoč svojoj specifičnosti, ne preporučuje za korištenje u širokoj praksi zbog zahtjevnosti njegove provedbe.

Imunoenzimski test (ELISA)

Imunoenzimski test (ELISA) provodi se s kadriolipinskim antigenom (nespecifična, selekcijska reakcija) i treponemskim antigenom (specifična reakcija), čime se potvrđuje dijagnoza sifilisa.Princip neizravne ELISA metode je da se antigen adsorbira na čvrstoj fazi u jažice tablete dodaje se ispitni serum. Ako sadrži antitijela protiv treponema, nastaje kompleks antigen-antitijelo (faza II). Nakon ispiranja nevezanih nespecifičnih protutijela, u jažice se dodaje antiglobulinski serum konjugiran s enzimom (najčešće peroksidazom hrena). Konjugat je čvrsto vezan za kompleks antigen-antitijelo (faza II).Nakon ispiranja nevezanog konjugata u jažice se dodaje supstrat za bojenje OPD-ortofenilendiamin (faza III). Reakcija peroksidaze se zaustavlja dodavanjem sumporne kiseline. Za kontrolu se koriste isti uzorci s pozitivnim i očito negativnim serumom.Rezultati analize bilježe se fotometrom koji određuje optičku gustoću u dvovalnom modu (492 nm i 620 nm). Za postavljanje enzimske reakcije protutijela, osim fotometra, potrebne su jednokanalne i osmerokanalne automatske pipete s vrhom od polipropilena i odgovarajući setovi dijagnostičkih test sustava.ELISA metoda ima široku primjenu u serološkoj dijagnostici sifilisa. Jednako je učinkovit za otkrivanje bolesti u razdoblju inkubacije (1-2 tjedna nakon infekcije), s kliničkim manifestacijama bolesti i njezinim latentnim oblicima. Vrlo često se ELISA koristi u probirnim pretragama stanovništva, posebice u transfuzijskim stanicama, au laboratorijskoj praksi ponekad se koriste i reakcija imunološke adhezije (IAR) i reakcija neizravne hemaglutinacije (IRHA). Prvi od njih temelji se na činjenici da se patogeni testikularni treponemi soja Nichols, pomiješani sa serumom pacijenta u prisutnosti komplementa i ljudskih crvenih krvnih stanica, lijepe na površinu crvenih krvnih stanica. RNGA se široko koristi za dijagnosticiranje sifilisa zbog svoje metodološke jednostavnosti. Postaje pozitivan unutar tri tjedna nakon infekcije. Pozitivan rezultat reakcije ostaje godinama nakon oporavka. Analog ove reakcije u inozemstvu je TRHA (treponema pallidum hemoaglutinacija).
KATEGORIJE

POPULARNI ČLANCI

2023 “kingad.ru” - ultrazvučni pregled ljudskih organa