Taksonomija, pneumokok, laboratorijske metode za influencu

MINISTARSTVO ZDRAVLJA RUSKE FEDERACIJE DRŽAVNO MEDICINSKO SVEUČILIŠTE KAZAN KATEDRA ZA MIKROBIOLOGIJU

PNEUMOKOK

KAZAN 1999

UDK 576.851.21(07)

Objavljeno odlukom Središnjeg koordinacijskog i metodološkog vijeća Kazanskog državnog medicinskog sveučilišta.

Sastavio:

(Pročelnik Odsjeka za mikrobiologiju, doktor medicinskih znanosti, profesor O.K. Pozdeev, asistent Odsjeka za mikrobiologiju, kandidat medicinskih znanosti, E.R. Fedorova.

Recenzenti:

Voditelj Odsjeka za epidemiologiju Kazanskog državnog medicinskog sveučilišta, doktor medicinskih znanosti, izvanredni profesor M.Sh. Shafeev, voditelj Odjela za epidemiologiju Kazanske državne medicinske akademije, doktor medicinskih znanosti, profesor V.E. Grigoriev.

Pneumokok /O.K. Pozdeev, E.R. Fedorov - Kazan: KSMU, 1999. - 14 s.

Kopiranjem, distribucijom, objavljivanjem teksta ili njegovog dijela na svojim resursima prihvaćate odgovornost u skladu s važećim zakonodavstvom.

Isključivo za korištenje djela u osobne svrhe (članak 18., članak 26. Zakona Ruske Federacije „O autorskom pravu i srodnim pravima”). Komercijalna reprodukcija je zabranjena.

Državno medicinsko sveučilište u Kazanu, 1999

Pneumokok (Streptococcus pneumoniae) prvi je izolirao Pasteur (1881.) radeći na cjepivu protiv bjesnoće i u početku se smatrao uzročnikom bjesnoće. Etiološku ulogu mikroorganizama u razvoju upale pluća u ljudi dokazali su Frenkel i Weichselbaum (1884). Bakterije koloniziraju ljudske i životinjske organizme i pripadaju skupini takozvanih “oralnih” streptokoka. Glavni su uzročnici upale pluća, a mogu izazvati i pleuritis, meningitis, puzajući čir na rožnici, gnojnu upalu srednjeg uha, septička stanja i druge bolesti. U IX izdanju Bergeyeva vodiča za bakterije (1994.), pneumokoki su uključeni u skupinu 17, “Gram-pozitivni koki”.

Epidemiologija lezija. Pneumokok je jedan od glavnih uzročnika bakterijske pneumonije zabilježene izvan bolnica (2-4 slučaja na 1000 ljudi); Svake godine u svijetu se zabilježi najmanje 500.000 slučajeva pneumokokne upale pluća (stvarna vrijednost je mnogo veća). Djeca i starije osobe su najosjetljivije na infekciju. Rezervoar infekcije su bolesnici i kliconoše (20-50% djece predškolske dobi i 20-25% odraslih); glavni put prijenosa je kontakt; tijekom izbijanja također se prenosi zrakom. Vrhunac incidencije javlja se u hladnoj sezoni. U velikoj većini slučajeva, klinički oblici infekcije razvijaju se kada je tjelesna otpornost oslabljena (uključujući i zbog hladnog stresa), kao i na pozadini drugih patologija (anemija srpastih stanica, Hodgkinova bolest, HIV infekcija, mijelom, dijabetes melitus , stanja nakon splenektomije itd.) ili s alkoholizmom. Opcije 1, 2 i 3 imaju najveće epidemiološko značenje u patologiji kod odraslih; za djecu - 1, 2, 3 i 14 opcija. Virulencija serovara u silaznom redoslijedu je varijante 3, 1, 2, 5, 7 i 8. Na pneumokoke su osjetljivi bijeli miševi (ako su zaraženi uginu od septikemije unutar 24 sata), telad, janjad, prasad, psi i majmuni.

Morfologija. Pneumokoki su nepokretni, ne stvaraju spore, blago su izduženog oblika koji podsjećaju na obrise plamena svijeće. U razmazima kliničkog materijala oni su raspoređeni u parove, od kojih je svaki okružen debelom kapsulom. U razmazima iz medija kulture mogu se nalaziti u kratkim lancima i biti više zaobljeni. Na jednostavnim medijima tvore tanku kapsulu; njegov razvoj se potiče uvođenjem krvi, seruma ili ascitne tekućine. Stvaranje kapsule je najizraženije kod bakterija tipa III. Kada su raspoređene u lance, kapsula može biti uobičajena.

Kulturna dobra. Pneumokoki su aerobi ili fakultativni anaerobi; Pri uzgoju se preferiraju kapnofilni uvjeti (5-10% CO2). Oni su kemoorganogrofi i dobro rastu na mediju krvi ili seruma s dodatkom 0,1% glukoze. Mogu rasti u temperaturnom rasponu od 28-42 °C, optimalno - 37 °C. Optimalni pH -7,6-7,8. Na gustim podlogama stvaraju nježne, prozirne, jasno definirane kolonije promjera oko 1 mm. Ponekad mogu biti ravne sa središnjim udubljenjem; poput drugih streptokoka, kolonije se nikada ne spajaju

između sebe. Na krvnom agaru stvaraju male prozirne zelenkastosive kolonije. Središte kolonija je tamnije, periferija svjetlija. Ispod kolonije i duž njezine periferije vidljiva je zona a-hemolize u obliku zelenkasto obojene zone (što je posljedica prijelaza hemoglobina u methemoglobin). Kolonije pneumokoka tipa III često imaju mukoznu konzistenciju i veličine su do 2 mm. Malo su zamućene i mogu se stopiti jedna s drugom. Tvore S- i R-oblike kolonija. Pri prijelazu iz S- u R-oblik gube sposobnost sintetiziranja kapsule. Na tekućim podlogama sa serumom i 0,2% glukoze daju jednoličnu mutnoću i mali flokulentni talog. Duljim uzgojem povećava se talog.

Održivost. Pneumokoki spadaju u skupinu nestabilnih mikroorganizama. U suhom ispljuvku ostaju do dva mjeseca. Može se dugo čuvati na niskim temperaturama; na temperaturi od 60 °C ugibaju unutar 3-5 minuta. 3% otopina karbolne kiseline ubija ih za 1-2 minute. Optohin (u koncentraciji 1:100 000) i žuč štetno djeluju na pneumokok, što se koristi za identifikaciju bakterija.

Pneumokok se od ostalih mikroorganizama razlikuje po nizu svojstava (Tablica 1).

Tablica 1 Biokemijska svojstva pneumokoka

Ispitni supstrat	Proizlaziti	Ispitni supstrat	Proizlaziti
Rast na 100°C
		rafinoza
Srijeda sa 6,5% Nad
a-hemoliza
B-hemoliza		Trehaloza
		Fosfataza
Hipurirati		β-galaktozidaza
Glicerol
Oznake: “+” - 90% ili više sojeva je pozitivno; (+) - 80-89% sojeva je pozitivno; d - 21-79% sojeva je pozitivno; (-) - 11-20% sojeva je pozitivno; “- - 90% ili više sojeva je negativno.

Antigenska struktura. U pneumokoku je nađeno nekoliko vrsta antigena: polisaharid, 0-somatski antigen, smješten u staničnoj stijenci; polisaharidni kapsularni K-antigeni i M-protein. Polisaharidni somatski antigen sličan je C-supstanci drugih streptokoka. Odnos određuje sličnost u kemijskoj strukturi ribiteihoične kiseline povezane s kolin fosfatom. Antigeni kapsule također imaju polisaharidnu prirodu, sastoje se od monosaharida koji se ponavljaju u različitim kombinacijama: D-glukoza, D-galaktoza i L-ramnoza. Na temelju strukture kapsularnih antigena pneumokoke dijelimo na 84 serovara. Treba imati na umu da kapsularni antigeni križno reagiraju s antiserumima na antigene streptokoka skupine A i B, kao i sa serumima na antigene Klebsiella i Escherichia. Tijekom prijelaza iz S u R oblik gube se kapsularni antigeni. Za serotipizaciju pneumokoka izrađuju se grupni serumi, označeni latiničnim slovima (A, B, C, D itd.) i serovarijantni serumi, označeni rimskim brojevima. Aglutinirajući serum III nije uključen u mješavine seruma. Pušta se zasebno i ne može se uzgajati. Kod ljudi se najčešće izoliraju pneumokoki serovarijante I, II i III. Oni su najvirulentniji za ljude, pa se test aglutinacije inicijalno izvodi pomoću antiseruma za te varijante. Ako je rezultat negativan, provodi se reakcija aglutinacije s mješavinom seruma A, B, C itd. (do dobivanja pozitivnog rezultata), a potom odvojenim antiserumima. Za bržu identifikaciju serovara koristi se Neufeldova reakcija (bubrenje imunološke kapsule). Metoda se temelji na sposobnosti pneumokoknih kapsula da se povećaju u volumenu u prisutnosti homolognog antiseruma, što se bilježi svjetlosnim optičkim mikroskopom. Kapsularni polisaharidi imaju senzibilizirajuća svojstva, koja se očituju u razvoju reakcije preosjetljivosti odgođenog tipa, otkrivene kožnim testovima.

Faktori patogenosti. Glavni čimbenik je kapsula koja štiti bakterije od mikrobicidnog potencijala fagocita i odvraća ih od djelovanja opsonina. Neinkapsulirani sojevi su praktički avirulentni i rijetki. Većina skupine antipneumokoknih AT sastoji se od AT do Ag kapsula. Važna funkcija kapsule i M-proteina je i osiguranje prianjanja na sluznicu. Tvar C je esencijalna jer specifično djeluje s C-reaktivnim proteinom. Posljedica takve reakcije je aktivacija komplementarne kaskade i oslobađanje medijatora akutne faze upale; njihovo nakupljanje u plućnom tkivu potiče migraciju polimorfonuklearnih fagocita. Stvaranje snažnih upalnih infiltrata popraćeno je poremećajem homeostaze plućnog tkiva i njegovom hepatizacijom. Pneumokoki proizvode endotoksin, a- i beta-hemolizine (pneumolizine) i leukocidin. α-pneumolizin je termolabilni protein sposoban neutralizirati O-streptolizin,

eritrogena tvar, neuraminidaza. Pneumokoki također sintetiziraju brojne enzime koji pridonose patogenezi lezija - muramidazu, hijaluronidazu (promiče širenje mikroorganizama u tkivima), peptidazu (razgrađuje IgA).

Patogeneza lezija. Biotop pneumokoka je gornji dišni put. Patogeneza većine pneumonija uključuje aspiraciju sline koja sadrži S. pneumoniae i prodor bakterija u donje dišne ​​putove. Neophodan je poremećaj zaštitnih drenažnih mehanizama - impulsa kašlja i mukocilijarnog klirensa. U odraslih se češće opažaju lobarne lezije pluća; u djece i starijih osoba prevladavaju peribronhijalne ili žarišne lezije. Stvaranje snažnih upalnih infiltrata popraćeno je poremećajem homeostaze plućnog tkiva i njegovom hepatizacijom. Infekcije s najvirulentnijim serovarom 3 mogu biti popraćene stvaranjem šupljina u plućnom parenhimu. Iz primarnog žarišta uzročnik može prodrijeti u pleuralnu šupljinu i perikard ili se diseminirati hematogeno i izazvati meningitis, endokarditis i lezije zglobova.

Kliničke manifestacije. Klasična pneumokokna pneumonija počinje iznenada; Primjećuju porast tjelesne temperature, produktivan kašalj i bol u prsima. U oslabljenih osoba i starijih osoba bolest se razvija polagano, uz blago povišenu temperaturu, poremećaj svijesti i znakove zatajivanja plućnog srca. Streptokokni meningitis registriran je u svim dobnim skupinama; karakterizirani su burnim početkom s porastom tjelesne temperature, ukočenošću vratnih mišića, glavoboljom, mučninom i povraćanjem. Lezije krvnih žila moždanih ovojnica često su popraćene gubitkom svijesti; među djecom i starijim osobama smrtnost može doseći 80%. Često se hematogene pneumokokne lezije, kao i sinusitis, mastoiditis, otitis media, endokarditis i peritonitis, bilježe kod osoba s imunodeficijencijama (na primjer, zaraženih HIV-om) ili pacijenata sa splenektomijom. Nakon bolesti razvija se nestabilna imunost koja je specifična za određeni tip i uzrokovana je pojavom antitijela na tipični kapsularni polisaharid.

Liječenje. Osnova liječenja pneumokokne infekcije su antibiotici - penicilin, tetraciklin, kloramfenikol, vankomicin, rifampicin, ceftriakson.

Prevencija. Nespecifična prevencija pneumokoknih infekcija usmjerena je na identifikaciju bolesnika i nositelja s njihovim naknadnim liječenjem. Za specifičnu prevenciju infekcije polivalentnim polisaharidnim cjepivom "Pneumovex 23" cijepe se djeca starija od dvije godine, rizične odrasle osobe, kao i zdrave osobe tijekom izbijanja bolesti. Lijek sadrži 23 kapsularna polisaharidna antigena pneumokoka (1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 19A, 20). , 22F , 23F, 33F). Antigeni

pneumokoki su dobiveni iz 90% sojeva izoliranih iz krvi pacijenata s invazivnom pneumokoknom infekcijom u SAD-u i odgovaraju sojevima pronađenim u Rusiji. Imunizacija se provodi dva puta u razmaku od 5-8 godina.

Nakon cijepljenja stvara se umjetna, aktivna, tipospecifična imunost.

Laboratorijska dijagnostika. “Zlatni standard” je izolacija patogena. Treba imati na umu da se materijal mora brzo ispitati, jer bakterije su sklone brzoj autolizi zbog aktivnosti unutarstaničnih enzima. Materijal za ispitivanje je ispljuvak, pleuralni izljev i drugi eksudati, cerebrospinalna tekućina, krv, sluz iz nosa i ždrijela, iscjedak iz ulceracija oka, iscjedak iz uha, urin, komadići organa (u slučaju smrti bolesnika) . Signalni odgovor na pneumokoknu infekciju može se dati kada se u razmazima sputuma otkriju neutrofili i gram-pozitivni lanceolatni diplokoki (najmanje 10 po vidnom polju). Inače, pribjegavaju izolaciji patogena.

Prva faza studije. Patološki materijal se podvrgava preliminarnoj bakterioskopiji (osim krvi). Sputum se stavi u sterilnu Petrijevu zdjelicu, ispere, omčom se uhvati gnojna kvržica sluznice, izmrvi na predmetnom staklu, osuši i oboji po Gramu. Bris otkriva gram-pozitivne koke lancetastog ili ovalnog oblika okružene kapsulom (stvaranje kapsule opaža se samo kod pneumokoka izoliranih od bolesnih i zaraženih životinja). Detekcija pneumokoknih kapsula može se provesti metodom Burri-Gins. Inokulacija patološkog materijala provodi se na 5-10% krvnog ili serumskog agara i na podlozi za obogaćivanje (8-10% bujon sirutke). Ako se sumnja na sepsu pneumokokne prirode, 5-10 ml krvi bolesnika inokulira se u 45-90 ml bujona sirutke. Cerebrospinalna tekućina, ako je bistra, centrifugira se i nekoliko kapi iz sedimenta inokulira na hranjive podloge. Polučvrsti agar sirutke koristi se kao medij za obogaćivanje. Usjevi su inkubirani na 37 °C 24 sata. Najbolja metoda za izolaciju čiste kulture pneumokoka je inficiranje bijelih miševa patološkim materijalom. Iskašljaj, ispran u Petrijevoj zdjelici sterilnom fiziološkom otopinom, melje se u sterilnom tarioniku sterilnim tučkom ili lomljenim staklom uz dodatak fiziološke otopine u omjeru 1:2-1:5. Suspenzija se istaloži, supernatant tekućine u količini od 0,5-1 ml se daje intraperitonealno bijelim miševima. Ako su u materijalu prisutni pneumokoki, miševi uginu unutar 72 sata. Tipični pneumokoki nalaze se u razmazima iz organa i krvi. Organi i krv također se uzgajaju na bujonu sirutke i na Petrijevim zdjelicama s krvlju ili serumskim agarom.

Druga faza studije. Proučava se obrazac rasta na hranjivim podlogama. Na krvnom agaru kolonije pneumokoka su male, okrugle, glatke

rubovi, nježni, okruženi zonom zelenila medija (što vrlo podsjeća na rast viridans streptokoka). Na serumskom agaru kolonije su nježne, prozirne i prozirne. Tijekom bakterioskopije razmaza obojenih po Gramu. Otkrivaju se gram-pozitivni diplokoki bez kapsula. Nakon bakterioskopije, kolonije sumnjive na pneumokoke se subkulturiraju na kosi serum ili krvni agar ili u bujon sirutke. Prilikom mikroskopiranja razmaza iz medija za obogaćivanje, uz različitu mikrofloru, mogu se otkriti gram-pozitivni koki, raspoređeni u parovima ili kratkim lancima. Materijal iz medija za obogaćivanje prenosi se na čvrste hranjive medije. Usjevi su inkubirani na 37°C 24 sata.

Treća faza studije. Na kosinama krvnog agara, pneumokoki stvaraju osjetljivu, tanku, prozirnu prevlaku. U juhi od sirutke pneumokoki uzrokuju zamućenje i lagani talog. U razmazima iz čvrstih podloga za kulture, pneumokoki mogu imati različit izgled. Uz diplokoke izduženog oblika sa šiljastim vanjskim krajevima, koji podsjećaju na plamen svijeće, nalaze se stanice pravilnog ovalnog i okruglog oblika. U bujonskoj kulturi pneumokoki su često raspoređeni u lance. Na temelju morfoloških i kulturalnih svojstava pneumokoke je teško razlikovati od viridans streptokoka, stoga je predložen niz posebnih testova za njihovo razlikovanje:

Topljivost u žuči (test deoksiholata);

Sposobnost razgradnje inulina;

Osjetljivost na optohin;

Reakcija aglutinacije sa specifičnim antipneumokoknim serumima;

Sposobnost razgradnje glukoze, maltoze, saharoze, laktoze, manitola, sorbitola i salicina.

Najpristupačnije metode za razlikovanje pneumokoka od ostalih streptokoka su test s optohinom (inhibira njihov rast); Od viridans streptokoka razlikuju se po sposobnosti fermentacije inulina, kao i osjetljivosti na žuč.

Test deoksiholata. Nakon preliminarne bakterioskopije, 10 kapi izolirane čiste kulture (poželjno bujona) doda se u epruvetu s 5 kapi sterilne goveđe žuči. Kontrola je kultura dodana u epruvetu s 5 kapi fiziološke otopine. Nakon 30-60 minuta inkubacije na 37 °C uočava se potpuna liza kulture u obliku bistrenja u epruveti sa žuči; u kontrolnoj epruveti smjesa ostaje mutna. Treba imati na umu da su avirulentne kulture pneumokoka otporne na žuč.

Otpornost na žuč također se može testirati kulturom u 10% žučnom bujonu. Ispitni materijal se dodaje mediju, a juha postaje mutna. Nakon 24 sata inkubacije na 37 °C, prisutnost pneumokoka bit će naznačena bistrenjem bujona kao rezultatom lize bakterija.

Također možete koristiti diskove natopljene 20% otopinom žuči. Diskovi se stavljaju na uzgojenu kulturu u zdjelici i inkubiraju 1-2 sata na 37 °C. U prisutnosti pneumokoka, kolonije se liziraju oko diska na udaljenosti od 1-2 mm.

Test na inulin. Kultura pneumokoka se inokulira na podlogu s inulinom. U tu svrhu dodajte 200 ml sterilne destilirane vode, 18 ml lakmusove tinkture i 3 g inulina u 100 ml goveđeg seruma koji se zagrijava na 56 °C 30 minuta i sterilizirajte tekućom parom 30 minuta. Usjevi su inkubirani na 37 °C 24 sata. Pneumokok razgrađuje inulin, uzrokujući crvenu boju medija. Viridans streptococcus ne uzrokuje crvenilo okoline.

Test s optochinom. Ispitivana kultura pneumokoka inokulira se na bujon sirutke s optohinom u razrjeđenju 1:100 000 ili 1:200 000. Pneumokok ne raste na takvoj podlozi. Također možete odrediti osjetljivost na optohin nanošenjem na 10% krvni agar koji sadrži optohin u razrjeđenju od 1:50 000. Kontrola je inokulacija kulture na krvni agar. Pneumokoki ne rastu na podlozi s optohinom, rast pneumokoka uočava se na kontrolnoj podlozi. Mogu se koristiti diskovi namočeni u 6 μg optohina koji se nanose na površinu podloge nakon inokulacije. Kod pneumokoka se oko diska formira zona inhibicije rasta promjera najmanje 18 mm.

Test virulencije. Dnevna kultura pneumokoka uzgojena u bujonu sirutke razrijedi se 1% sterilnom peptonskom vodom (pH - 7,6) ili blago alkalnom bujonom do 1:10. Razrijeđena kultura se daje intraperitonealno bijelim miševima težine 16-20 g u volumenu od 0,5 ml i promatra se 72 sata. Organi mrtvog miša se inokuliraju na hranjive podloge, a razmazi otisaka prstiju se mikroskopski pregledaju. Visoko virulentne kulture uključuju pneumokoke koji uzrokuju smrt miševa nakon unošenja kulture u razrjeđenju 1:10. Avirulentne kulture ne uzrokuju smrt kod miševa.

Serotipizacija pneumokoka. 18-satna kultura testirana je Sabinovom reakcijom mikroaglutinacije. 4 kapi kulture pneumokoka nanesu se na predmetno staklo. U 1 kap dodajte kap antipneumokoknog seruma tipa 1, u 2. - serum tipa II, u 3. - serum - 111, u 4. - kap normalnog seruma. Smjese na staklu miješaju se omčom i ispituju pod povećalom ili mikroskopom pri malom povećanju. U pozitivnom slučaju, aglutinacija se opaža u jednoj od prve tri kapi. Tip pneumokoka određuje se reakcijom aglutinacije sa specifičnim aglutinirajućim serumima prva tri fiksna tipa. Kulture koje nisu aglutinirane ovim vrstama seruma klasificiraju se kao X-skupina. Reakcija se postavlja na sljedeći način. Ulijte 0,5 ml 18-satne bujonske kulture u epruvete. Zatim se doda jednaki volumen seruma razrijeđenog fiziološkom otopinom u omjeru 1:5. Kontrole su 2 epruvete, od kojih jedna sadrži ispitnu kulturu pomiješanu s

normalni zečji serum, a drugi - samo testna kultura. Sadržaj epruveta se temeljito protrese i stavi u termostat na 37 °C tijekom 2 sata, nakon čega se provodi preliminarno izračunavanje reakcije. Konačni rezultati bilježe se nakon dodatnog skladištenja na sobnoj temperaturi 20 sati. Aglutinacija se ocjenjuje kao četiri plusa ako je sadržaj epruveta potpuno bistar, a aglutinacijska kultura je gusti film koji se ne lomi mućkanjem; tri plusa ako se, kada je sadržaj epruvete potpuno očišćen, aglutinirajuća kultura lako raspada na dijelove; dva plusa - ako ne dođe do čišćenja, čestice aglutinirane kulture jasno su vidljive golim okom u zamućenom sadržaju epruvete; aglutinacijom za jedan plus u epruveti se nalazi sitnozrnasta smjesa slijepljenih pneumokoka. U slučaju negativne reakcije vidljive okom, aglutinacija se ne opaža;

Sadržaj epruveta nakon mućkanja je jednoliko zamućen.

Tipizacija pneumokoka X-skupine provodi se pomoću skupine

serumi koji sadrže mješavinu uzetih tipičnih aglutinirajućih seruma

u jednakim volumenima. Pripremite sljedeće grupne serume

miješanje jednakih volumena nerazrijeđene standardne dijagnostike

serumi (Lund, I960):

A -1, II, IV, V, XVIII serovari;

B - VI, VIII, XIX serovari;

C - VII, XX. XXIV, XXXI, XL serovari;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII serovari;

E - X, XXI. XXXIII, XXXIX serovari;

F - XII. XVII. XXII, XXXVII, XXXII, XLI serovari;

G - XIII, XXV. XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII serovari;

J - XLIII. XLIV, XLV, XLVI serovari.

Aglutinacijski serum tipa III koristi se per se (bez miješanja s drugim standardnim serumima) zbog poteškoća u dobivanju dovoljno visokog titra. Tipizacija se provodi u dva stupnja: najprije pomoću grupnih seruma, a potom pojedinačnih seruma skupine s kojima je dobivena pozitivna reakcija. Serotipizacija pneumokoka prvenstveno se koristi za epidemiološka ispitivanja rezultata specifične seroterapije i seroprofilakse.

Mikroaglutinacija pneumokoka Sabinovom metodom može se postići miješanjem antipneumokoknih seruma s eksudatom iz trbušne šupljine miša kontaminiranog sputumom bolesnika. Već četiri sata nakon infekcije u eksudatu se otkriva čista kultura pneumokoka, koja daje pozitivnu Sabinovu aglutinaciju.

Ubrzane metode detekcije i tipizacije pneumokoka. 1. Neufeldova metoda ili fenomen bubrenja pneumokokne kapsule. Jedna grudica svježe izlučenog ispljuvka bolesnika aplicira se na tri

pokrovna stakalca, na svako dodati kap nerazrijeđenog specifičnog antipneumokoknog seruma (tipovi 1, II, III) i kap Loefflerovog modrila. Kapi se dobro promiješaju i pokriju predmetnim staklom s udubljenjem po rubovima namazanim vazelinom. Nakon dvije minute viseće kapljice pregledaju se pod mikroskopom s imerzijskim sustavom. U pozitivnom slučaju vidljivo je naglo povećanje pneumokoknih kapsula. Ako je rezultat negativan, kapsule se teško cijene. Reakcija bubrenja je specifična i ne daje pozitivan rezultat kod drugih kapsularnih bakterija. Ne koristim ga za ispitivanje sputuma pacijenata liječenih sulfonamidima i antibioticima, jer u tom slučaju mogu se izolirati nekapsularni pneumokoki.

2. Metoda taloženja. 5-10 ml sputuma kuha se u vodenoj kupelji dok se ne dobije gusti ugrušak. Ugrušak se samelje i doda se mala količina fiziološke otopine te ponovno kuha nekoliko minuta kako bi se iz pneumokoka ekstrahirao specifični polisaharid. Suspenzija se centrifugira i provodi se reakcija prstenaste precipitacije s dobivenom bistrom tekućinom i specifičnim standardnim serumima u epruvetama za taloženje. Pojava prstena na granici između tekućina ukazuje na pozitivan rezultat.

3. Određivanje pneumokoknih kapsula po Burriju. Kap ispitnog materijala i kap tinte nanese se na kraj stakalca. Smjesa se promiješa i napravi razmaz, osuši na zraku i bez fiksiranja pregleda pod mikroskopom. Podloga preparata je tamno zadimljena, mikrobna tijela i njihove kapsule nisu obojene. Preparat pripremljen po Burriju može se fiksirati Nikiforovljevom smjesom, isprati vodom i bojati 3-5 minuta ciel fuksinom razrijeđenim u omjeru 1:3. Na tamnoj pozadini razmaza ističu se neobojene kapsule unutar kojih se nalaze bakterije svijetle grimizne boje (Hinsova metoda).

Šarlah uzrokuju različite serotipove beta-hemolitičkih streptokoka koji imaju M-antigen i proizvode eritrogenin (toksigeni streptokoki serogrupe A) - (Streptococcus pyogenes). U nedostatku antitoksičnog imuniteta javlja se šarlah, au prisutnosti grlobolja.

Klinička slika

 Intoksikacija - groznica, opća slabost, glavobolje.

 Osip od šarlaha je točkast, umjerenim pritiskom staklenom lopaticom točkice su jasnije vidljive. Kad se jače pritisne, osip poprima zlatnožućkastu nijansu kože. Pojavljuje se 1-3 dana bolesti i lokaliziran je uglavnom na obrazima, preponama i stranama tijela. Koža nazolabijalnog trokuta ostaje blijeda i bez osipa. Osip obično traje 3-7 dana, zatim nestaje, ne ostavljajući pigmentaciju. Osip se zgusne na zavojima udova - aksilarni, lakat, poplitealna područja.

 Grimizni jezik - 2-4 dana bolesti bolesnikov jezik postaje izrazito zrnast, svijetlocrvene boje, takozvani „malinasti“ jezik.

 Grlobolja je stalni simptom šarlaha. Može biti ozbiljnije od obične upale grla.

 Ljuštenje kože - javlja se nakon nestanka osipa (14 dana od početka bolesti): u predjelu dlanova i stopala je krupno pločasto, počinje od vrhova prstiju; Na tijelu, vratu i ušima postoji ljuštenje poput pitirijaze.

Pneumokoki, taksonomija. Svojstva. Serološke skupine. Razlike od drugih streptokoka. Izazvane bolesti. Principi i metode laboratorijske dijagnostike.

Morfologija i biološka svojstva. Pneumokok (Streptococcus pneumoniae) je ovalni, malo izduženi kok lancetastog oblika raspoređen u paru, nalik na plamen svijeće. Također se mogu nalaziti u kratkim lancima, nalik na streptokoke. Pokretne, ne stvaraju spore, gram-pozitivne.
Uzgajaju se na podlozi s dodatkom proteina: krvi, seruma i ascitne tekućine. Na krvnom agaru kolonije pneumokoka su sitne, nalik kapljicama rose, prozirne na propusnom svjetlu, s udubljenim središtem, okružene zonom nepotpune hemolize, zelenkaste boje, slične kolonijama viridans streptococcus. U tekućem mediju stvaraju malu zamućenost, ponekad stvarajući talog. Biokemijski su vrlo aktivni: razgrađuju glukozu, laktozu, maltozu, inulin i druge ugljikohidrate u kiselinu, ne ukapljuju želatinu i ne stvaraju indol. Razgradnja inulina je diferencijalna dijagnostička značajka koja pomaže razlikovati pneumokoke od streptokoka, koji ne razgrađuju inulin. Važna značajka razlikovanja je sposobnost pneumokoka da se otopi u žuči, dok su streptokoki dobro očuvani u njemu.

Patogeneza i klinika. Pneumokoki su uzročnici lobarne pneumonije kod ljudi. Također mogu uzrokovati puzajući čir na rožnici, katar gornjih dišnih putova, meningitis, endokarditis, oštećenje zglobova i druge bolesti.

Imunitet nakon bolesti je slabo napregnut, kratkotrajan i tipospecifičan.
Mikrobiološka dijagnostika. Materijali za studiju su ispljuvak, krv, bris grla i cerebrospinalna tekućina. Zbog činjenice da pneumokok brzo umire, patološki materijal mora se što prije dostaviti u laboratorij na ispitivanje.

Meningokok. Taksonomija, svojstva. Antigenska struktura meningokoka, klasifikacija. Patogeneza meningokokne infekcije, kliničke manifestacije. Principi i metode mikrobiološke dijagnostike. Razlikovanje uzročnika meningokokne infekcije i drugih meningokoka. Specifična prevencija.

N.meningitidis (meningokok).

Meningokok je uzročnik meningokokne infekcije - striktna antroponoza s prijenosom uzročnika zrakom. Glavni izvor su mediji. Prirodni rezervoar je ljudski nazofarinks. Morfološka, ​​kulturalna i biokemijska svojstva slična su gonokoku. Razlike - fermentiraju ne samo glukozu, već i maltozu, te proizvode hemolizin. Imaju kapsulu koja je veća i ima drugačiju strukturu od gonokoka.

Antigenski sastav. Imaju četiri glavna antigenska sustava.

1. Polisaharidni antigeni specifični za kapsularnu skupinu. Sojevi serogrupe A najčešće uzrokuju izbijanje epidemija.

2. Proteinski antigeni vanjske membrane. Na temelju ovih antigena meningokoke serogrupe B i C dijele se na klase i serotipove.

3. Antigeni specifični za rod i vrstu.

4. Lipopolisaharidni antigeni (8 vrsta). Imaju visoku toksičnost i uzrokuju pirogeni učinak.

Faktori patogenosti.Čimbenici adhezije i kolonizacija - proteini pili i vanjske membrane. Čimbenici invazivnosti su hijaluronidaza i drugi proizvedeni enzimi (neuraminidaza, proteaze, fibrinolizin). Veliku važnost imaju kapsularni polisaharidni antigeni koji štite mikroorganizme od fagocitoze.

Imunitet postojan, antimikrobni.

Laboratorijska dijagnostika na temelju bakterioskopije, izolacije kulture i njezine biokemijske identifikacije, seroloških dijagnostičkih metoda. Materijal se inokulira na čvrste i polutekuće hranjive podloge koje sadrže krv, ascitnu tekućinu i krvni serum.

Smatra se da kulture pozitivne na oksidazu pripadaju rodu Neisseria. Meningokoke karakterizira fermentacija glukoze i maltoze. Pripadnost seroskupini utvrđuje se testom aglutinacije (RA).

Gonokoki. Taksonomija, svojstva. Patogeneza gonokokne infekcije, karakteristike imuniteta. Principi i metode laboratorijske dijagnostike akutne i kronične gonoreje, blenoreje. RSK Bordet-Gengou, svrha, mehanizam, obračun reakcije. Prevencija blenoreje u novorođenčadi. Prevencija i liječenje gonoreje. Specifična terapija.

N.gonorrheae (gonokok).

Gonokok je uzročnik gonoreje, spolno prenosive bolesti s upalnim manifestacijama u genitourinarnom traktu. Supstrat za kolonizaciju je epitel uretre, rektuma, spojnice oka, ždrijela, vrata maternice, jajovoda i jajnika.

Diplokoki, koji se lako boje metilenskim modrilom i drugim anilinskim bojama, su pleomorfni (polimorfizam). Vrlo su izbirljivi u pogledu uvjeta uzgoja i hranjivih podloga. Od ugljikohidrata fermentira samo glukoza.

Antigenska struktura vrlo varijabilan – karakteriziran faznim varijacijama (nestankom antigenih determinanti) i antigenskim varijacijama (promjenama antigenih determinanti).

Faktori patogenosti. Glavni faktori su popili, uz pomoć kojih gonokoki vrše adheziju i naseljavanje epitelnih stanica sluznice genitourinarnog trakta, te lipopolisaharid(endotoksin koji se oslobađa kada su gonokoki uništeni). Gonokoki sintetiziraju IgAI proteazu, koja razgrađuje IgA.

Laboratorijska dijagnostika. Bakterioskopska dijagnoza uključuje bojenje po Gramu i metilensko modrilo. Tipični znakovi gonokoka su gram-negativno bojenje, diplokoki u obliku graha, intracelularna lokalizacija.

Inokulacija se provodi na posebnim podlogama (KDS-MPA iz mesa kunića ili goveđeg srca sa serumom, ascites-agar, krvni agar).

Uzročnici plinske anaerobne infekcije. Taksonomija. Svojstva. Karakteristike toksina. Patogeneza, klinički oblici. Principi i metode laboratorijske dijagnostike, lijekovi za specifičnu prevenciju i liječenje.

Plinska gangrena je anaerobna poliklostridijalna (tj. uzrokovana raznim vrstama klostridija) rana (traumatska) infekcija. Glavna važnost je C.perfringens, rjeđe - C.novyi, kao i druge vrste klostridija u trajnim asocijacijama jedna s drugom, aerobne piogene koke i truležne anaerobne bakterije.

C.perfringens je normalan stanovnik crijeva ljudi i životinja, au tlo ulazi izmetom. Uzročnik je infekcije rane - uzrokuje bolest kada uzročnik uđe u ranu u anaerobnim uvjetima. Vrlo je invazivan i toksikogen. Invazivnost je povezana s proizvodnjom hijaluronidaze i drugih enzima koji destruktivno djeluju na mišićno i vezivno tkivo. Glavni faktor patogenosti – egzotoksin, koji ima hemo-, nekro-, neuro-, leukotoksične i letalne učinke. Sukladno antigenskoj specifičnosti egzotoksina, oni se izoliraju serotipovi uzročnik bolesti. Uz plinsku gangrenu, C. perfringens uzrokuje toksične infekcije hranom (baziraju se na djelovanju enterotoksina i nekrotoksina).

Značajke patogeneze. Za razliku od gnojnih bolesti uzrokovanih aerobima, kod anaerobne infekcije ne prevladava upala, već nekroza, edem, stvaranje plinova u tkivima, trovanje toksinima i produktima razgradnje tkiva.

Imunitet- pretežno antitoksičan.

Laboratorijska dijagnostika uključuje bakterioskopiju iscjetka iz rane, izolaciju i identifikaciju uzročnika, detekciju i identifikaciju toksina u biološkim uzorcima reakcijom neutralizacije sa specifičnim antitoksičnim protutijelima.

Prevencija i liječenje. Osnova za sprječavanje plinske gangrene je pravodobno i ispravno kirurško liječenje rana. U slučaju teških rana, daju se antitoksični serumi protiv glavnih vrsta klostridija, po 10 tisuća IU, u medicinske svrhe - 50 tisuća IU.

Clostridia tetanus. Taksonomija. Svojstva, karakteristike toksina. Patogeneza bolesti. Silazni tetanus. Klinika. Principi i metode laboratorijske dijagnostike. Svrha bakterioloških istraživanja, lijekovi za specifičnu prevenciju i liječenje.

Tetanus je akutna infekcija rane koju karakteriziraju lezije neurotoksin motornih stanica leđne moždine i mozga, što se očituje u vidu konvulzija poprečno-prugastih mišića. Obolijevaju ljudi i domaće životinje. Tlo, posebno onečišćeno ljudskim i životinjskim izmetom, stalan je izvor zaraze tetanusom.

Uzročnik je C.tetani - veliki gram-pozitivni štapić koji stvara spore. Spore su smještene terminalno (vrsta batka), a pokretne su zahvaljujući bičevima – peritrihima. Obavezan anaerob. Spore su vrlo otporne.

Antigenska svojstva. Uzročnik ima O- i H-antigene.

Faktori patogenosti. Glavni faktor je najjači egzotoksin. Dvije su njegove glavne frakcije: tetanospazmin (neurotoksin) i tetanolizin (hemolizin). Neurotoksin ulazi u središnji živčani sustav u područja mioneuralnih sinapsi, prenosi se s neurona na neuron u području sinapsi, nakuplja se u motoričkim područjima leđne moždine i mozga te blokira sinaptički prijenos. Smrt nastupa od paralize respiratornog centra, asfiksije (oštećenje mišića grkljana, dijafragme, međurebarnih mišića) ili paralize srca.

Laboratorijska dijagnostika. Mikrobiološka dijagnostika uključuje bakterioskopiju polaznih materijala, kulturu za izolaciju uzročnika i njegovu identifikaciju te dokazivanje toksina tetanusa.

Izolacija uzročnika provodi se prema standardnoj shemi za anaerobe, korištenjem različitih čvrstih i tekućih (Kitt-Tarozzijev medij) podloga, identifikacija na temelju morfoloških, kulturalnih, biokemijskih i toksigenih svojstava.

Najjednostavnija i najučinkovitija metoda mikrobiološke dijagnostike je biotest na bijelim miševima. Jedna skupina je zaražena ispitivanim materijalom, druga (kontrola) - nakon miješanja uzoraka s antitoksičnim tetanusnim serumom. U prisutnosti toksina tetanusa pokusna skupina miševa umire, dok kontrolna ostaje živa.

Liječenje i hitna prevencija. Koriste se donorski tetanusni imunoglobulin (antitoksin), antitoksični serum (350 IU/kg), antibiotici (penicilini, cefalosporini). Za stvaranje cjepnog imuniteta koristi se tetanusni toksoid, najčešće u sastavu DTP cjepiva (tetanusni toksoidi, difterijski i mrtvi bacili pertusisa).

Clostridium botulizam. Taksonomija. Svojstva. Karakteristike toksina, razlika od egzotoksina uzročnika drugih prehrambenih infekcija. Principi i metode laboratorijske dijagnostike. Lijekovi za specifičnu prevenciju i liječenje.

Botulizam je teško trovanje hranom povezano s konzumacijom proizvoda kontaminiranih s C.botulinum i karakterizirano specifičnim oštećenjem središnjeg živčanog sustava. Ime je dobila po lat. botulus - kobasica.

Svojstva patogena. Veliki polimorfni gram-pozitivni štapići, pokretni, imaju peritrihous flagella. Spore su ovalne i nalaze se subterminalno (teniski reket). Oni proizvode osam vrsta toksina, koji se razlikuju po antigenskoj specifičnosti, pa se prema tome razlikuje 8 vrsta patogena. Među najvažnijim karakteristikama je prisutnost ili odsutnost proteolitičkih svojstava (hidroliza kazeina, proizvodnja sumporovodika).

Toksin ima neurotoksični učinak. Toksin ulazi u tijelo s hranom, iako se vjerojatno može akumulirati kada se patogen razmnožava u tkivima tijela. Toksin je toplinski labilan, iako je za potpunu inaktivaciju potrebno kuhanje do 20 minuta. Toksin se brzo apsorbira u gastrointestinalnom traktu, prodire u krv, selektivno djeluje na jezgre produžene moždine i ganglijske stanice leđne moždine. Razvijaju se neuroparalitički fenomeni - poremećaji gutanja, afonija, disfagija, oftalmoplegični sindrom (strabizam, dvoslike, spušteni kapci), paraliza i pareza mišića ždrijela i grkljana, prestanak disanja i srčane aktivnosti.

Laboratorijska dijagnostika. Principi su zajednički za klostridije.

Liječenje i prevencija. Temelji se na ranoj uporabi antitoksičnih seruma (polivalentnih ili, kada se utvrdi vrsta, homolognih). Prevencija se temelji na sanitarnom i higijenskom režimu pri obradi prehrambenih proizvoda. Posebno su opasni domaći konzervirani šampinjoni i drugi proizvodi koji se čuvaju u anaerobnim uvjetima.

11. Pseudomonas aeruginosa. Taksonomija. Svojstva. Izazvane bolesti.
Uloga u nozokomijalnim infekcijama. Principi i metode laboratorijske dijagnostike.

Rod pseudomonas, P. aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa) jedan je od glavnih uzročnika lokalnih i sustavnih gnojno-upalnih procesa u medicinskim bolnicama.

Uzročnik je rasprostranjen posvuda (voda, tlo, biljke, životinje), a normalno se nalazi u čovjeka (najčešće u crijevima, na koži i sluznicama). Morfologija- gram-negativni ravni ili blago zakrivljeni štap, pokretni, smješteni pojedinačno, u parovima ili u kratkim lancima u razmazima. Sintetizira sluz (kapsularnu tvar), osobito virulentnije mukoidne sojeve.

Kulturna dobra. On je aerob i ima skup enzima koji odgovara tipu disanja (citokromi, citokrom oksidaza, dehidraze. Na tekućim podlogama stvara sivkastosrebrnasti film. Na čvrstim podlogama često se uočava fenomen dugine lize. Do kraja dana zbog sinteze pigmenta piocijanin U kulturi se pojavljuje plavo-zelena boja.

Biokemijska svojstva. Pseudomonas aeruginosa karakterizira niska saharolitička aktivnost (oksidira samo glukozu), visoka proteolitička aktivnost i stvaranje zone beta-hemolize na krvnom agaru. Sintetizira trimetilamin koji usjevima daje ugodan miris jasmina. Proizvodi proizvodnju bakteriocina - piocini.

Antigena i patogena svojstva. Glavni antigeni Pseudomonas aeruginosa su somatski O-antigen specifičan za skupinu i flagelarni H-antigen specifičan za tip. O-antigeni kompleks - agregat LPS-a s proteinima i lipidima stanične stijenke, ima svojstva endotoksina i jedan je od glavnih faktora patogenosti. Pseudomonas aeruginosa ima veliki skup faktora patogenosti - endotoksin (LPS, sličan drugim gram-negativnim bakterijama), niz egzotoksina - citotoksin, egzoenzim S, hemolizini, egzotoksin A (najvažniji, podsjeća na egzotoksin difterije), enzime ( kolagenaza, neuraminidaza, proteaze).

Laboratorijska dijagnostika. P.aeruginisa je dobila ime po plavkasto-zelenoj boji iscjetka iz rane i zavojnog materijala. Glavna dijagnostička metoda je bakteriološka. Detekcija pigmenta piocijanina je važna. Liječenje i specifična prevencija. Ne postoji specifična prevencija. Za toksične infekcije hranom i crijevnu disbiozu uzrokovanu Pseudomonas aeruginosa, učinkovit je složen intesti-bakteriofag koji uključuje pseudomonas fag. Od antibakterijskih lijekova najčešće se koriste aminoglikozidi, cefalosporini i kinoloni.

Oportunističke gram-negativne bakterije - uzročnici gnojno-upalnih procesa (proteus, klebsiella, čudotvorni bacil i dr.), taksonomija. Opće karakteristike enterobakterija. Principi i metode laboratorijske dijagnostike.

Rod Klebsiella.

Rod Klebsiella pripada obitelji Enterobacteriaceae. Značajka predstavnika roda je sposobnost formiranja kapsule. Glavna vrsta je K. pneumoniae. Uzrokuju oportunističke lezije - bolničku upalu pluća, infekcije mokraćnog sustava, proljev u novorođenčadi. Klebsiella uzrokuje mastitis, septikemiju i upalu pluća u životinja te se stalno nalazi na koži i sluznicama ljudi i životinja. Klebsiella su ravne, nepomične šipke različitih veličina. Fakultativni anaerobi. Oksidaza – negativna, katalaza – pozitivna.

Faktori patogenosti. Tu spadaju polisaharidna kapsula (K-antigen), endotoksin, fimbrije, sideroforni sustav (veže ione željeza i smanjuje njihov sadržaj u tkivima), toplinski labilni i toplinski stabilni egzotoksini.

Kliničke manifestacije. K.pneumoniae (subsp. pneumoniae) karakteriziraju bolnički bronhitis i bronhopneumonija, lobarna pneumonija, infekcije mokraćnog sustava, lezije moždanih ovojnica, zglobova, kralježnice, očiju, kao i bakterijemija i septikopiemija. Podvrsta ozaenae uzrokuje poseban oblik kroničnog atrofičnog rinitisa - ozen.

Laboratorijska dijagnostika. Glavna metoda je bakteriološka. Liječenje. Jedna od značajki Klebsiella je njihova otpornost na više lijekova i razvoj lezija na pozadini smanjenja otpornosti tijela. Antibiotici se koriste za generalizirane i trome kronične oblike klebsielle, obično u kombinaciji s lijekovima koji stimuliraju imunološki sustav.

Rod Proteus.

Rod Proteus pripada obitelji Enterobacteriaceae. Rod je dobio ime po sinu Posejdona Proteusa, koji je mogao promijeniti svoj izgled. Predstavnici roda sposobni su promijeniti vanjske manifestacije rasta na čvrstim hranjivim medijima, a također se razlikuju po najvećem pleomorfizmu (varijabilnost morfologije) u usporedbi s drugim enterobakterijama.

Proteji razgrađuju tirozin, smanjuju nitrate, oksidaza je negativna, katalaza je pozitivna. Žive u crijevima mnogih vrsta kralješnjaka i beskralješnjaka, tlu, otpadnim vodama i raspadajućim organskim tvarima. Može uzrokovati infekcije mokraćnog sustava kod ljudi, kao i septičke lezije kod pacijenata s opeklinama i nakon operacije. Često uzrokuju i trovanje hranom. P.vulgaris i P.mirabilis najčešće imaju ulogu u patologiji.

Kulturna dobra. Proteji rastu na jednostavnom mediju u širokom temperaturnom rasponu. Optimalni pH je 7,2-7,4, temperatura je od +35 do 37 stupnjeva Celzijusa. Kolonije proteja u O-formi su okrugle, poludigitalne i konveksne, dok H-forme kontinuirano rastu. Rast proteja prati truli miris. Karakterističan je fenomen rojenja, H-forme daju karakterističnu puzajuću izraslinu na MPA u obliku plavičasto-dimljastog nježnog vela. Kod sjetve prema Shushkevich metodi u kondenzacijskoj vlazi svježe izrezanog MPA, kultura se postupno diže u obliku vela na površinu agara. Na MPB-u se uočava difuzna mutnoća medija s gustim bijelim talogom na dnu.

Faktori patogenosti. To uključuje LPS stanične stijenke, sposobnost "rojenja", fimbrije, proteaze i ureaze, hemolizine i hemaglutinine.

Laboratorijska dijagnostika. Glavna metoda je bakteriološka. Koriste se diferencijalno dijagnostički mediji (Ploskirev), mediji za obogaćivanje i MPA prema Shushkevich metodi. Liječenje. Za crijevnu disbakteriozu povezanu s Proteas (kolitis), možete koristiti Proteus phage i lijekove koji ga sadrže (intestiphage, coliproteus bacteriophage).

"Čudesni štap" (Serratia marcescens), vrsta bakterije iz reda pigmentnih mikroorganizama. Gram-negativne pokretne (peritrične) šipke koje ne nose spore. Po vrsti metabolizma - fakultativni anaerob. Na površini agara stvara glatke ili zrnate tamno i svijetlo crvene kolonije s metalnim sjajem. Živi u tlu, vodi i hrani. Razvijajući se na kruhu (pri visokoj vlažnosti), u mlijeku, boji ih u crveno; takvi proizvodi nisu dopušteni u prodaji. Uvjetno patogen za životinje i ljude; može uzrokovati gnojenje.

13. Escherichia. Taksonomija. Bolesti uzrokovane Escherichiom coli. Patogene varijante dijarejačne Escherichije. Antigenska struktura, klasifikacija. Značajke mikrobiološke dijagnostike. Razlikovanje proljevastih Escherichia od oportunističkih.

Escherichia je najčešća aerobna crijevna bakterija koja pod određenim uvjetima može uzrokovati široku skupinu bolesti čovjeka, kako intestinalne (proljevi), tako i izvancrijevne (bakterijemija, infekcije mokraćnog sustava i dr.) lokalizacije. Glavna vrsta je E. coli (Escherichia coli) - najčešći uzročnik zaraznih bolesti uzrokovanih enterobakterijama. Ovaj patogen je pokazatelj fekalne kontaminacije, posebno u vodi.

Kulturna dobra. Na tekućim podlogama E. coli stvara difuzno zamućenje, a na čvrstim podlogama stvara kolonije S- i R-forme. Na Endo, glavnom mediju za Escherichiju, E. coli koje fermentiraju laktozu stvaraju intenzivno crvene kolonije s metalnim odsjajem, one koje ne fermentiraju stvaraju blijedoružičaste ili bezbojne kolonije s tamnijim središtem, na Mediju Ploskirev su crvene sa žućkastom nijansom; na Levinovom su mediju tamnoplavi s metalnim sjajem.

Biokemijska svojstva. U većini slučajeva E. coli fermentira ugljikohidrate (glukoza, laktoza, manitol, arabinoza, galaktoza itd.) uz stvaranje kiseline i plina, proizvodi indol, ali ne stvara sumporovodik i ne ukapljuje želatinu.

Glavni čimbenici patogenosti dijarejačne E.coli.

1. Čimbenici adhezije, kolonizacije i invazije povezani s pilima, fimbrijskim strukturama i proteinima vanjske membrane. Kodirani su plazmidnim genima i potiču kolonizaciju donjeg dijela tankog crijeva.

2. Egzotoksini: citotonini (potiču hipersekreciju tekućine stanicama crijeva, remete metabolizam vode i soli i potiču razvoj proljeva) i enterocitotoksini (djeluju na stanice stijenke crijeva i endotel kapilara).

3. Endotoksin (lipopolisaharid).

Ovisno o prisutnosti različitih čimbenika patogenosti, dijarejačne E. coli se dijele u pet glavnih tipova: enterotoksigene, enteroinvazivne, enteropatogene, enterohemoragične, enteroadhezivne.

4. Patogene E. coli karakteriziraju stvaranje bakteriocina (kolicina).

Enterotoksigena E.coli imaju visokomolekularni toplinski labilan toksin, sličan djelovanju koleri, koji uzrokuje proljev sličan koleri (gastroenteritis kod male djece, putnički proljev itd.).

Enteroinvazivna Escherichia coli sposobni prodrijeti i umnožiti se u epitelnim stanicama crijeva. Uzrokuju obilan proljev s primjesama krvi i velikim brojem leukocita (pokazatelj invazivnog procesa) u izmetu. Klinički nalikuje dizenteriji. Sojevi imaju neke sličnosti s Shigella (nepomični, ne fermentiraju laktozu i imaju visoka enteroinvazivna svojstva).

Enteropatogena E.coli- glavni uzročnici proljeva u djece. Lezije se temelje na prianjanju bakterija na crijevni epitel uz oštećenje mikrovila. Karakterizira ga vodenasti proljev i teška dehidracija.

Enterohemoragijska Escherichia coli uzrokuju proljev pomiješan s krvlju (hemoragijski kolitis), hemolitičko-uremijski sindrom (hemolitička anemija u kombinaciji s zatajenjem bubrega). Najčešći serotip enterohemoragične Escherichie coli je O157:H7.

Enteroadhezivna E. coli ne stvaraju citotoksine, slabo proučeni.

Laboratorijska dijagnostika. Glavni pristup je izolacija čiste kulture na diferencijalnoj dijagnostičkoj podlozi i njezina identifikacija prema antigenskim svojstvima. RA se dijagnosticira setom polivalentnih OK (za O- i K-antigene) seruma.

Među patogenim streptokocima posebno mjesto zauzima S.pneumoniae (pneumokok). Ima vrlo važnu ulogu u ljudskoj infektivnoj patologiji. Ova vrsta je jedan od glavnih uzročnika lobarne pneumonije. Prema daleko nepotpunim podacima, svake godine u svijetu ima više od 500 tisuća pneumonija uzrokovanih pneumokokom, osobito često u djece i starijih osoba. Osim upale pluća, ovaj mikrob uzrokuje meningitis, endokarditis, peritonitis, upalu srednjeg uha, rinitis, sinusitis, sepsu, puzajući čir na rožnici i niz drugih bolesti. Za provedbu laboratorijske dijagnostike koriste se bakterioskopske, bakteriološke i biološke metode. Materijal za pretragu je ispljuvak, gnoj, krv, likvor, sluz iz usta i nazofarinksa, iscjedak iz maksilarnog sinusa, očiju i ušiju. Važno je odmah poslati materijal u laboratorij i vrlo brzo ga pregledati, jer su pneumokoki osjetljivi na autolizu.

Bakterioskopski pregled

Bakterioskopski pregled materijala (osim krvi) svodi se na izradu dva brisa. Jedna od njih je obojena Gramom, druga Burri-Ginsom, što omogućuje identifikaciju kapsule. Pneumokoki se nalaze u obliku lancetastih diplokoka, okruženih zajedničkom čahurom. Ako se u vidnom polju nađe 10 ili više tipičnih diplokoka, velika je vjerojatnost da se može zaključiti da je prisutna S. pneumoniae. Međutim, primarna mikroskopija ne daje pravo postavljanja konačne dijagnoze, budući da razmazi mogu sadržavati kapsularne nepatogene diplokoke - predstavnike normalne mikroflore. Stoga je potrebno inokulirati klinički materijal i izolirati čistu kulturu.

Bakteriološka istraživanja

Za sepsu uz bolesnikov krevet, inokulirajte 10 ml krvi u bočicu koja sadrži 100 ml sirutke ili šećerne juhe, inkubirajte 18-20 sati na 37 °C, zatim inokulirajte na krvni agar, izolirajte i identificirajte čistu kulturu. Za meningitis, cerebrospinalna tekućina se centrifugira i sediment inokulira na krvni agar. Na njemu pneumokoki rastu u obliku malih okruglih kolonija, okruženih zelenim pojasom, u središtu kolonije vidljivo je karakteristično udubljenje. Nije preporučljivo uzgajati sputum ili gnoj na hranjivim podlogama, budući da prisutnost saprofitne mikroflore potiskuje rast S. pneumoniae. Bolje je uvesti ispitni materijal u trbušnu šupljinu bijelih miševa. Biotest je brza, pouzdana i točna metoda za izolaciju čiste kulture pneumokoka. Bijeli miševi su vrlo osjetljivi na ove bakterije i unutar 10-12 sati nakon infekcije pneumokoki prodiru u krv i parenhimske organe, uzrokujući sepsu. Uzgoj krvi iz srca ili dijelova unutarnjih organa tijekom autopsije životinja omogućuje izolaciju čiste kulture patogena. Za identifikaciju pneumokoka koriste se njihova svojstva. Za razliku od drugih vrsta streptokoka, S.pneumoniae ne raste na podlozi s optohinom, inulin je fermentiran i vrlo je osjetljiv na djelovanje žuči (test deoksiholata). Brza liza pneumokoka putem žuči može se otkriti ako se 0,5 ml žuči doda u 1 ml bujonske kulture. Nakon 15-20 minuta u termostatu dolazi do potpune lize bakterijskih stanica. Za određivanje pneumokoknih serovara (trenutačno ih ima 85) koristi se reakcija aglutinacije stakla sa standardnim serumima ili fenomen "bubrenja kapsule". U prisutnosti homolognog seruma, pneumokokna kapsula jako nabubri. Još je bolje provesti serotipizaciju komercijalnim reagensima u reakcijama lateks aglutinacije ili koaglutinacije, kroz koje se otkrivaju kapsularni antigeni. Od streptokoka značajan je i rod Enterococcus od kojih su najznačajnije vrste E.faecalis, E.faecium i E.durans. U prirodi su prilično rasprostranjene. Njihova glavna ekološka niša su crijeva ljudi i životinja, ali se nalaze i kao dio normalne mikroflore kože perineuma, urogenitalnih organa, oro- i nazofarinksa. Mogu uzrokovati gnojenje rana, bakterijemiju, oštećenje urogenitalnog sustava, osobito u bolesnika s dugotrajnim kateterima, toksične infekcije izazvane hranom, disbakteriozu probavnog trakta, rjeđe endokarditis. U razmazima ispitivanog materijala enterokoki se nalaze u parovima, kratkim lancima ili u obliku grozdova, gram-pozitivni. Bakteriološka dijagnostika enterokoknih infekcija provodi se bez ikakvih poteškoća, budući da se te bakterije dobro razvijaju na jednostavnim medijima. Selektivan je za njih agar dif-3 (do 600 ml 3% MPA, dodati 400 ml 40% žuči). Nakon 24 sata inkubacije, kolonije koje su narasle su veličine 0,4-1,0 mm i sivkaste su boje. Na krvnom agaru dolazi do nepotpune ili potpune hemolize oko kolonija. Za razliku od viridans streptokoka, enterokok može rasti na MPA sa 6,5% NaCl, reducirajući mlijeko metilenskim modrilom na 37°C nakon 4-6 sati. Identifikacija izoliranih usjeva provodi se prema morfološkim, kulturalnim i biokemijskim karakteristikama.

Stranica 40 od ​​91

Uzročnik lobarne pneumonije (upale pluća) je pneumokok - Diplococcus pneumoniae, kojeg je prvi otkrio Pasteur u slini osobe umrle od bjesnoće (1881.).
Morfologija i tinktorijalna svojstva. Pneumokoki (sl. 67 i 68 u umetku) su parni koki izduženog lancetastog oblika. Stoga se inače nazivaju lancetasti diplokoki. Formirajući kratke lance, pneumokoki postaju slični streptokocima, te stoga II. F. Gamaleya ih je nazvao Streptococcus lanceolatus. Veličina ćelije kreće se od 0,5X0,75 do 1X1,5 μm. Nemaju spore ni flagele. Posebnost pneumokoka je stvaranje kapsule, koja se može jasno izraziti u patološkim materijalima (ispljuvak, krv, itd.). Kada se uzgaja na hranjivim medijima, kapsula se gubi. Pneumokoki lako prihvaćaju anilinske boje i boje se pozitivno po Gramu.
Kulturalna i biokemijska svojstva.

Riža. 68. Pneumokok u razmazu sputuma.

Pneumokoki su aerobi i fakultativni anaerobi. Temperaturni optimum je oko 37°. Rastu na podlogama koje sadrže životinjske bjelančevine (krvni ili serumski agar, ascitagar).
Nakon 24 sata na površini agara stvaraju se male kolonije koje podsjećaju na kolonije streptokoka, ali manje i prozirnije.
Na kosom agaru, s obilnom inokulacijom, dobiva se vrlo osjetljiva prozirna prevlaka koja se sastoji od sićušnih kolonija koje se ne spajaju; na bujonu je blago zamućenje i mali ljuskasti sediment.
Svježe izolirani sojevi ne rastu na želatini. Stari laboratorijski sojevi pneumokoka mogu proizvesti male bjelkaste kolonije već na 18-22°. Želatina nije ukapljena.
Dobro rastu u mlijeku, zgrušavajući ga u kiselinu.
Na krvnom agaru se oko kolonija formira zona nepotpune hemolize sa zelenkastosmeđom obojenošću podloge.

Riža. 67. Pneumokok u čistoj kulturi iz bujona.

Pneumokoki razgrađuju saharozu, rafinozu i laktozu. Najvažnija karakteristika je razgradnja inulina. Većina streptokoka nema ovo svojstvo. Virulentni pneumokoki su topljivi u žuči.
Antigenska struktura i serološki tipovi pneumokoka. Citoplazma pneumokoka sadrži proteinski antigen zajednički za sve pneumokoke. Ovaj antigen određuje njihovu specifičnost vrste. Kapsula sadrži specifične polisaharidne antigene (hapten), koji se razlikuju po svom kemijskom sastavu kod različitih pneumokoka (tip antigena). Na temelju ovih tipičnih antigena, pomoću reakcije aglutinacije i precipitacije, svi pneumokoki se dijele u tri glavne skupine (I, II, III) i četvrtu skupinu (X-skupina). X-skupina uključuje više od 70 vrsta.
Otpornost. Na umjetnim hranjivim podlogama pneumokoki brzo ugibaju (4-7 dana). Pod slojem vazelina u tekućim i polutekućim medijima koji sadrže proteine, ostaju sposobni za život 3-12 mjeseci.
Pneumokoki dobro podnose sušenje: u suhom ispljuvku na difuznom svjetlu ostaju do 2 mjeseca. Zagrijani na 52-55° ugibaju za 10 minuta, na 60° još brže. U otopini karbolne kiseline (3%), pneumokoki umiru unutar 1-2 minute.
Pneumokoki su posebno osjetljivi na optohin. Pod utjecajem potonjeg, umiru u koncentraciji od 1: 1.000.000.
Stvaranje toksina i patogenost za životinje. Pneumokokni otrov je endotoksin. Od laboratorijskih životinja na pneumokok su osjetljiviji bijeli miševi i kunići. Parenteralna primjena virulentnih pneumokoka nakon 24-48 sati uzrokuje uginuće životinja sa simptomima sepse. Obdukcijom se na mjestu injekcije nalazi fibrinozni eksudat, slezena je povećana i hiperemična.
Patogeneza i bolesti u ljudi. Ulazno mjesto infekcije obično je sluznica ždrijela. Unošenje pneumokoka u tijelo i njihov prodor u plućno tkivo može se očito dogoditi i kroz limfni i cirkulacijski sustav, te izravno kroz ogranke bronha. Najčešća bolest je lobarna pneumonija, koju karakterizira iznenadan početak, visoka temperatura, katkad uz zimicu, bol u boku pri disanju, glavobolja, katkad gubitak svijesti, delirij i jaka uznemirenost. Potom se javlja kašalj s karakterističnim hrđavocrvenim ispljuvkom. U plućima se opaža proces koji često zahvaća jedan, rjeđe dva ili tri režnja.
Izvori infekcije su bolesna osoba i kliconoša. Infekcija izvana događa se i aerogeno - kapljicama iz nositelja i putem infekcije prašinom. Pneumokoki mogu dugo ostati u osušenom ispljuvku (oko 2 mjeseca) i ući u zrak s prašinom.
Pri pregledu zdravih ljudi često se u nazofarinksu nalaze patogeni pneumokoki, pa se ne može isključiti mogućnost autoinfekcije, a značajnu ulogu imaju čimbenici koji slabe otpornost organizma, poput hipotermije.
Osim lobarne pneumonije, pneumokoki uzrokuju upalu srednjeg uha, moždanih ovojnica (meningitis), kao i sluznice nosa i zračnih sinusa, tonzilitis, puzajući čir na rožnici i upalu suzne vrećice.
Imunitet. Preboljela upala pluća ne osigurava imunitet. Bolest se može više puta ponoviti. To se objašnjava prisutnošću mnogih vrsta pneumokoka i činjenicom da preboljela upala pluća povećava osjetljivost organizma na pneumokoke.
Serum preboljelih sadrži protutijela (aglutinine i dr.).
Do trenutka krize s upalom pluća, koncentracija antitijela u krvi doseže značajan titar, a fagocitoza se naglo povećava (I. Ya. Chistovich). Na temelju ovih podataka, imunost kod upale pluća treba promatrati prvenstveno kao fagocitnu, u kojoj glavnu ulogu imaju antitijela (bakteriotropini).
Mikrobiološka dijagnostika. Materijali za istraživanje pneumokoknih bolesti su ispljuvak, krv i gnoj uzeti iz različitih lezija, a rjeđe cerebrospinalna tekućina.
Patološki materijal (isključujući krv) pregledava se bakterioskopski, bakteriološki i inficiranjem bijelih miševa. Mora se pribjeći potonjoj metodi jer izvorni materijal, osobito ispljuvak, obično sadrži obilnu stranu mikrofloru, što pri izravnoj inokulaciji materijala na hranjive medije otežava izolaciju pneumokoka.
Razmazi sputuma, gnoja itd. boje se po Gramu. Pod mikroskopom se nalaze lancetasti diplokoki okruženi kapsulom, pozitivno obojeni po Gramu.
Za izolaciju kultura, inokulirajte ih na krvni agar ili ascig agar. Nakon 24-48 sati rasta na 37°C, u prisutnosti pneumokoka, pojavljuju se karakteristične kolonije. Kolonije se siju na kose sirutke ili ascites agar, a izolirana kultura se testira na topljivost u žuči i sposobnost razgradnje inulina.
Zaraza bijelog miša najpouzdaniji je način izolacije kulture pneumokoka. Materijal s bolesnika ili leša (ispljuvak, gnoj, komadić organa i sl.) stavlja se u sterilnu čašicu, zatim usitnjava u sterilnom mužaru, dodaje 1-2 ml sterilnog bujona i 0,5 ml te suspenzije intraperitonealno se ubrizgava. u bijelog miša. Nakon uginuća miša, koje nastupa unutar 12-48 sati, uzimaju se hemokulture iz srca, a gotovo u svim slučajevima dobiva se čista kultura pneumokoka.
Ako se sumnja na sepsu, 10-20 ml krvi inokulira se u ascitični ili serumski bujon. Nakon obogaćivanja, bujon se inokulira na krvni agar, a izolirana čista kultura identificira se morfološkim i biokemijskim karakteristikama.
Specifična terapija i kemoterapija. Trenutno se sulfonamidni lijekovi i antibiotici (penicilin, biomicin, tetraciklin, itd.) s velikim uspjehom koriste za liječenje lobarne pneumonije.

U rod Streptococcus spadaju: Streptococcus pyogenes (hemolitički) i Streptococcus pneumoniae (pneumokok). Streptokoke su prvi otkrili Billroth (1874.) i L. Pasteur (1879.). Proučavao ih je E. Rosenbach (1884).

Streptococcus pyogenes (hemolitički)

Morfologija. Streptokoki su koke koje imaju sferični oblik. Promjer svakog koka je u prosjeku 0,6-1 mikrona, ali karakterizira ih polimorfizam: postoje mali i veliki koki, strogo sferni i ovalni. Streptokoki su raspoređeni u lanac, što je rezultat njihove podjele u istoj ravnini. Duljina lanaca je različita. Na čvrstoj hranjivoj podlozi lanci su obično kratki, na tekućoj podlozi su dugi. Streptokoki su nepokretni i nemaju spore (vidi sliku 4.) Svježe izolirane kulture ponekad tvore kapsulu. U ultratankim rezovima vidljiva je mikrokapsula ispod koje se nalazi troslojna stanična stijenka i troslojna citoplazmatska membrana. Gram pozitivan.

Uzgoj. Streptokoki su fakultativni anaerobi. Rastu na temperaturi od 37° C i pH 7,6-7,8. Optimalne podloge za njihov rast su podloge koje sadrže krv ili krvni serum. Na čvrstim hranjivim podlogama kolonije streptokoka su male, plosnate, mutne i sivkaste boje. Neke vrste streptokoka stvaraju hemolizu na krvnom agaru. β-hemolitički streptokoki stvaraju jasnu zonu hemolize, α-hemolitički streptokoki tvore malu zelenkastu zonu (posljedica prijelaza hemoglobina u methemoglobin). Postoje streptokoki koji ne proizvode hemolizu.

U šećernoj juhi streptokoki rastu uz stvaranje sitnozrnatog taloga uz stijenku i na dnu, dok juha ostaje prozirna.

Enzimska svojstva. Streptokoki imaju saharolitička svojstva. Oni razgrađuju glukozu, laktozu, saharozu, manitol (ne uvijek) i maltozu u kiselinu. Njihova proteolitička svojstva su slabo izražena. Oni zgrušavaju mlijeko, ali ne ukapljuju želatinu.

Stvaranje toksina. Streptokoki proizvode brojne egzotoksine: 1) streptolizine – uništavaju crvena krvna zrnca (O-streptolizin ima kardiotoksični učinak); 2) leukocidin - uništava leukocite (nastaju od visoko virulentnih sojeva); 3) eritrogeni (šarlah) toksin - određuje kliničku sliku šarlaha - intoksikacija, vaskularne reakcije, osip itd. Sinteza eritrogenog toksina određena je profagom; 4) citotoksini – imaju sposobnost izazivanja glomerulonefritisa.

U streptokoku su pronađeni različiti antigeni. Citoplazma stanice sadrži specifičan antigen nukleoproteinske prirode - isti za sve streptokoke. Antigeni proteinskog tipa nalaze se na površini stanične stijenke. U staničnoj stijenci streptokoka pronađen je antigen polisaharidne skupine.

Na temelju sastava frakcije antigena specifične za polisaharidnu skupinu, svi streptokoki se dijele u skupine, označene velikim slovima od A, B, C, D itd. do S. Osim skupina, streptokoki se dijele na serološke tipove, koji su označeni arapskim brojevima.

Grupa A uključuje 70 vrsta. U ovu skupinu spada većina streptokoka koji uzrokuju razne bolesti kod ljudi. Skupina B uključuje uglavnom streptokoke koji su oportunistički za ljude. Skupina C uključuje streptokoke patogene za ljude i životinje. Grupu D čine streptokoki koji su nepatogeni za ljude, ali u ovu grupu spadaju i enterokoki koji su stanovnici probavnog trakta ljudi i životinja. Ulazeći u druge organe, uzrokuju upalne procese: kolecistitis, pijelitis itd. Dakle, mogu se klasificirati kao oportunistički mikrobi.

Pripadnost izoliranih kultura jednoj od seroloških skupina utvrđuje se reakcijom taloženja s grupnim serumima. Za određivanje seroloških tipova koristi se reakcija aglutinacije sa serumima specifičnim za tip.

Streptokoki su prilično stabilni u okolišu. Na temperaturi od 60°C ugibaju nakon 30 minuta.

Oni ostaju u osušenom gnoju i ispljuvku mjesecima. Normalne koncentracije dezinficijensa uništavaju ih za 15-20 minuta. Enterokoki su mnogo otporniji, dezinfekcijske otopine ih ubijaju tek nakon 50-60 minuta.

Osjetljivost životinja. Na patogene streptokoke osjetljiva su goveda, konji, psi i ptice. Od laboratorijskih životinja osjetljivi su kunići i bijeli miševi. Međutim, streptokoki koji su patogeni za ljude nisu uvijek patogeni i za pokusne životinje.

Izvori infekcije. Ljudi (bolesnici i kliconoše), rjeđe životinje ili zaraženi proizvodi.

Putevi prijenosa. Prašina u zraku i zrakom, ponekad u hrani, moguće u kontaktu s kućanstvom.

Bolesti mogu nastati kao posljedica egzogene infekcije, kao i endogeno - aktivacijom oportunističkih streptokoka koji žive na sluznici ždrijela, nazofarinksa i rodnice. Smanjenje otpornosti organizma (hlađenje, gladovanje, prekomjerni rad itd.) može dovesti do autoinfekcija.

Presenzibilizacija je od velike važnosti u patogenezi streptokoknih infekcija - kao posljedica prethodno preboljene bolesti streptokokne etiologije.

Kada streptokoki prodru u krvotok, uzrokuju teški septički proces.

Bolesti kod ljudi najčešće uzrokuju β-hemolitički streptokoki serološke skupine A. Oni proizvode enzime patogenosti: hijaluronidazu, fibrinolizin (streptokinazu), deoksiribonukleazu i dr. Osim toga, streptokoki imaju kapsulu i M-protein, koji imaju antifagocitna svojstva.

Streptokoki uzrokuju različite akutne i kronične infekcije u ljudi, gnojne i negnojne, različite kliničke slike i patogeneze. Gnojne - flegmone, apscesi, infekcije rana, negnojne - akutne infekcije gornjih dišnih putova, erizipel, šarlah, reumatizam i dr.

Streptokoki često uzrokuju sekundarne infekcije kod gripe, ospica, hripavca i drugih bolesti te često kompliciraju infekcije rana.

Imunitet. Priroda imuniteta je antitoksična i antibakterijska. Postinfektivni antimikrobni imunitet je slab. To se objašnjava slabom imunogenošću streptokoka i velikim brojem serovara koji ne daju križni imunitet. Osim toga, kod streptokoknih bolesti, opaža se alergizacija tijela, što objašnjava tendenciju recidiva.

Prevencija. Svodi se na sanitarno-higijenske mjere, jačanje ukupne otpornosti organizma. Specifična prevencija nije razvijena.

Liječenje. Koriste se antibiotici. Često se koristi penicilin, na koji streptokoki nisu postali rezistentni, te eritromicin i tetraciklin.

Značaj streptokoka u etiologiji reumatskog karditisa. Patogeneza reumatskog karditisa nije dovoljno proučena. Ali brojne činjenice govore u prilog ulozi streptokoka u razvoju ove bolesti:

1. U bolesnika s reumatskim karditisom, B-hemolitički streptokok se uzgaja iz grla.

2. Reumatizam se često javlja nakon preležane upale krajnika, tonzilitisa, faringitisa, koji senzibiliziraju tijelo.

3. U krvnom serumu pacijenata otkrivaju se antistreptolizin i antistreptohialuronidaza - antitijela na streptokokne enzime i toksine.

4. Neizravna potvrda uloge streptokoka je uspješno liječenje penicilinom.

U novije vrijeme L-formama streptokoka daje se značaj u nastanku kroničnih oblika reumatskog karditisa.

Prevencija egzacerbacija reumatskog karditisa svodi se na prevenciju streptokoknih bolesti (na primjer, u proljeće i jesen provodi se preventivni tečaj penicilina). Liječenje se svodi na korištenje antibakterijskih lijekova - penicilina.

Značaj streptokoka u etiologiji šarlaha. G. N. Gabrichevsky (1902) prvi je predložio da je hemolitički streptokok uzročnik šarlaha. Ali budući da se streptokoki izolirani u drugim bolestima nisu razlikovali od uzročnika šarlaha, ovo mišljenje nisu dijelili svi. Sada je utvrđeno da šarlah izazivaju streptokoki skupine A, koji proizvode eritrogeni toksin.

Oni koji su se oporavili od bolesti razvijaju imunitet - stabilan, antitoksičan. Njegova se napetost utvrđuje postavljanjem Dickove reakcije - intradermalne injekcije eritrogenog toksina. Kod osoba koje nisu bolesne pojavljuje se hiperemija i otok oko mjesta ubrizgavanja, što se karakterizira kao pozitivna reakcija (nedostatak antitoksina u krvnom serumu). Kod onih koji su preboljeli takvu reakciju nema, budući da antitoksin koji su stvorili neutralizira eritrogeni toksin.

Prevencija. Izolacija, hospitalizacija. Gama globulin se daje kontaktnoj, oslabljenoj djeci. Specifična prevencija nije razvijena.

Liječenje. Koriste se penicilin i tetraciklin. U teškim slučajevima primjenjuje se antitoksični serum.

Svrha studije: identifikacija streptokoka i određivanje njegovog serovara.

Materijal za istraživanje

1. Sluz iz grla (upala grla, šarlah).

2. Struganje zahvaćenog područja kože (erizipela, streptoderma).

3. Gnoj (apsces).

4. Mokraća (nefritis).

5. Krv (sumnja na sepsu; endokarditis).

Osnovne metode istraživanja

1. Bakteriološki.

2. Mikroskopski.

Napredak studije

Drugi dan studija

Izvadite čaše iz termostata i pregledajte. Ako postoje sumnjive kolonije, od nekih od njih napravi se bris, oboji po Gramu i mikroskopski pregleda. Ako se u razmazu otkriju streptokoki, dio preostale kolonije se potkulturira u epruvete na agaru sa serumom za izolaciju čiste kulture i na bujonu s krvlju u epruvetama. Do kraja dana, 5-6-satna kultura iz bujona ili agara se potkulturira u Martin bujon s 0,25% glukoze kako bi se odredila serološka skupina u Lensfieldovoj precipitacijskoj reakciji. Epruvete i boce stavljaju se u termostat i ostavljaju do sljedećeg dana.

Treći dan studija

Usjevi se skidaju s termostata, provjerava se čistoća kulture na kosom agaru, prave se razmazi, boje po Gramu i mikroskopski pregledaju. Ako postoji čista kultura streptokoka, inokulirati na Hissove podloge (laktoza, glukoza, maltoza, saharoza i manitol), mlijeko, želatinu, 40% žuč i staviti u termostat.

Gledajući Martinovu čorbu. U prisutnosti specifičnog rasta provodi se Lensfieldova precipitacijska reakcija kako bi se odredila serološka skupina.

Postavljanje reakcije taloženja prema Lensfieldu. Dnevna kultura uzgojena u Martinovoj juhi se ulije u nekoliko epruveta za centrifugiranje i centrifugira 10-15 minuta (3000 okretaja u minuti).

Tekućina supernatanta se ulije u staklenku s otopinom dezinfekcijskog sredstva, a talog se napuni sterilnom izotoničnom otopinom natrijevog klorida i ponovno centrifugira. 0,4 ml 0,2% klorovodične kiseline doda se talogu sakupljenom iz svih epruveta za centrifugiranje. Zatim se epruveta stavi u vodenu kupelj i kuha 15 minuta uz povremeno mućkanje. Nakon vrenja, nastala suspenzija se ponovno centrifugira. Antigen se ekstrahira u supernatant, koji se izlije u čistu epruvetu i neutralizira 0,2% otopinom natrijevog hidroksida do pH 7,0-7,2. Kao indikator dodaje se bromtimol modrilo (0,01 ml 0,04% otopine). Ovom reakcijom boja se mijenja iz slamnato žute u plavu.

Zatim se 0,5 ml seruma antistreptokokne skupine ulije u 5 epruveta za taloženje, koje se pripreme imunizacijom kunića (vidi Poglavlje 19). U 1. epruvetu dodaje se serum A, u 2. serum B, u 3. serum C, u 4. serum D, u 5. izotonična otopina natrijevog klorida (kontrola). Nakon toga, Pasterovom pipetom, dobiveni ekstrakt (antigen) pažljivo rasporediti u sve epruvete uz stijenku.

Ako je reakcija pozitivna u epruveti s homolognim serumom, na granici ekstrakta sa serumom stvara se tanki mliječnobijeli prsten (slika 38).

Četvrti dan istraživanja

Rezultati se bilježe (Tablica 25).

Trenutno se određuje deoksiribonukleaza, antistreptohijaluronidaza i antistreptolizin-O.

Kontrolna pitanja

1. Koje osnovne laboratorijske metode pretrage za identifikaciju streptokoka poznajete?

2. Zašto koristiti Lensfieldovu reakciju taloženja?

3. Zašto bi antigen trebao biti proziran pri izvođenju ove reakcije? Opišite tehniku ​​postavljanja ove reakcije.

Od nastavnika nabavite antistreptokokne serume A, B, C, D i izotonsku otopinu natrijevog klorida. Postavite reakciju taloženja, pokažite rezultate učitelju i skicirajte ih.

Kulturni mediji

Krvni agar(vidi poglavlje 7).

Serumski agar(vidi poglavlje 7).

Njegovi mediji(suho).

mesna peptonska želatina (MPG). U 100 ml MPB dodati 10-15 g sitno sjeckane želatine. Želatina bi trebala nabubriti kada se polagano zagrijava u vodenoj kupelji (na temperaturi od 40-50 ° C). Otopljenoj želatini doda se 10% otopina natrijeva karbonata (soda bikarbona) i pH se namjesti na 7,0. Zatim odmah filtrirajte kroz nabrani filter. Filtriranje je sporo. Kako bi se ubrzao proces, filtracija se može obaviti u vrućem autoklavu. Filtrirani medij se ulije u epruvete od 6-8 ml i sterilizira. Sterilizacija se provodi ili frakcijski na temperaturi od 100 ° C 3 dana za redom, ili istovremeno na 110 ° C tijekom 20 minuta u autoklavu. Hlađenje medija provodi se u epruvetama postavljenim okomito.

Priprema mlijeka. Svježe mlijeko se prokuha, stavi jedan dan na hladno mjesto, skine s vrhnja i ponovno prokuha. Ostavite jedan dan i uklonite gornji sloj. Obrano mlijeko se filtrira kroz sloj vate, zatim alkalizira 10% otopinom natrijeva karbonata do pH 7,2 i ulije u epruvete od 5-6 ml.

Broth Martin. U mesnu vodu dodaje se jednaka količina Martinovog peptona (mljeveni svinjski želuci izloženi solnoj kiselini). Dobivena smjesa se kuha 10 minuta, alkalizira se 10%-tnom otopinom natrijevog hidroksida do pH 8,0, doda se 0,5 natrijevog acetata, ponovno prokuha i izlije u sterilne posude. Martinovoj juhi dodaje se 0,25% glukoze.

Srijeda Kitta - Tarozzi(vidi poglavlje 34).

Streptococcus pneumoniae (pneumokok)

Pneumokoke je prvi opisao R. Koch (1871).

Morfologija. Pneumokoki su diplokoki kod kojih su stranice stanica okrenute jedna prema drugoj spljoštene, a suprotne produljene, pa imaju lancetasti oblik koji podsjeća na plamen svijeće (vidi sl. 4). Veličina pneumokoka je 0,75-0,5 × 0,5-1 mikrona, nalaze se u parovima. U tekućim hranjivim medijima često formiraju kratke lance, postajući slični streptokoku. Preumokoki su nepokretni, nemaju spore, au tijelu formiraju kapsulu koja okružuje oba koka. Kapsula sadrži tvar otpornu na toplinu antifagin (štiti pneumokok od fagocitoze i djelovanja protutijela). Kada rastu na umjetnim hranjivim podlogama, pneumokoki gube svoju kapsulu. Pneumokoki su gram-pozitivni. Gram-negativne bakterije nalaze se u starijim kulturama.

Uzgoj. Pneumokoki su fakultativni anaerobi. Rastu na temperaturi od 36-37° C i pH 7,2-7,4. Zahtjevni su na podloge, jer ne mogu sintetizirati mnoge aminokiseline, pa rastu samo na podlogama s dodatkom nativnih proteina (krv ili serum). Na serumskom agaru stvaraju male, nježne, prilično prozirne kolonije. Na krvnom agaru rastu vlažne kolonije zelenkastosive boje, okružene zelenom zonom, što je rezultat pretvorbe hemoglobina u methemoglobin. Pneumokoki dobro rastu u bujonu s dodatkom 0,2% glukoze i u bujonu sa sirutkom. Rast u tekućim medijima karakterizira difuzno zamućenje i prašnjavi sediment na dnu.

Enzimska svojstva. Pneumokoki imaju dosta izraženu saharolitičku aktivnost. Razgrađuju: laktozu, glukozu, saharozu, maltozu, inulin i stvaraju kiselinu. Manitol nije fermentiran. Njihova proteolitička svojstva su slabo izražena: zgrušavaju mlijeko, ne ukapljuju želatinu i ne stvaraju indol. Pneumokoki se otapaju u žuči. Razgradnja inulina i otapanje u žuči je važna dijagnostička karakteristika koja razlikuje Streptococcus pneumoniae od Streptococcus pyogenes.

Faktori patogenosti. Pneumokoki proizvode hijaluronidazu, fibrinolizin itd.

Stvaranje toksina. Pneumokoki proizvode endotoksin, hemolizin i leukocidin. Virulencija pneumokoka također je povezana s prisutnošću antifagina u kapsuli.

Antigenska struktura i klasifikacija. U citoplazmi pneumokoka nalazi se proteinski antigen zajednički cijeloj skupini, au kapsuli polisaharidni antigen. Na temelju polisaharidnog antigena svi pneumokoki se dijele u 84 serovara. Među onima koji su patogeni za ljude, najčešći su serovari I, II i III.

Otpornost na čimbenike okoliša. Pneumokoki spadaju u skupinu nestabilnih mikroorganizama. Temperatura od 60°C ubija ih za 3-5 minuta. Dosta su otporne na niske temperature i sušenje. U osušenom ispljuvku ostaju održivi do 2 mjeseca. Mogu se čuvati na hranjivoj podlozi ne više od 5-6 dana. Stoga je kod uzgoja potrebno vršiti presađivanje svaka 2-3 dana. Konvencionalne otopine dezinfekcijskih sredstava: 3% fenol, sublimat u razrjeđenju 1:1000 uništavaju ih u nekoliko minuta.

Pneumokoki su posebno osjetljivi na optohin koji ih ubija u razrjeđenju 1:100 000.

Osjetljivost životinja. Prirodni domaćin pneumokoka je čovjek. Međutim, pneumokoki mogu izazvati bolest kod teladi, janjadi, prasadi, pasa i majmuna. Od pokusnih životinja na pneumokok su vrlo osjetljivi bijeli miševi.

Izvori infekcije. Bolesna osoba i nositelj bakterije.

Putevi prijenosa. Kapljice u zraku, možda i prašina u zraku.

Ulazna kapija. Sluznica gornjih dišnih puteva, očiju i ušiju.

Bolesti kod ljudi. Pneumokoki mogu izazvati gnojno-upalne bolesti različitih lokalizacija. Specifični za pneumokoke su:

1) lobarna upala pluća;

2) puzajući ulkus rožnice;

Najčešća bolest je lobarna pneumonija koja zahvaća jedan, rjeđe dva ili tri režnja pluća. Bolest je akutna, praćena visokom temperaturom i kašljem. Obično završi kritično.

Imunitet. Nakon bolesti ostaje nestabilan imunitet, jer upalu pluća karakteriziraju recidivi.

Prevencija. Svodi se na sanitarne i preventivne mjere. Specifična prevencija nije razvijena.

Liječenje. Koriste se antibiotici - penicilin, tetraciklin itd.

Kontrolna pitanja

1. Morfologija pneumokoka. Uzgoj i enzimska svojstva.

2. Koji čimbenici određuju patogenost pneumokoka i što štiti pneumokoke od fagocitoze?

3. Koja su glavna vrata pneumokokne infekcije. Koje bolesti uzrokuju pneumokoki?

Mikrobiološki pregled

Svrha studije: identifikacija pneumokoka.

Materijal za istraživanje

1. Ispljuvak (upala pluća).

2. Sluz iz grla (upala grla).

3. Iscjedak iz ulkusa (puzajući ulkus rožnice).

4. Iscjedak iz uha (otitis media).

5. Gnoj (apsces).

6. Pleuralni punktat (pleuritis).

7. Krv (sumnja na sepsu).

1 (Bolje je uzeti jutarnji sputum (s specifičnom upalom pluća, sputum ima hrđavu boju).)

Osnovne metode istraživanja

1. Mikroskopski.

2. Mikrobiološki.

3. Biološki.

Napredak studije

Biološki uzorak. Malo (3-5 ml sputuma) se emulgira u sterilnom bujonu, 0,5 ml ove smjese se ubrizgava intraperitonealno u bijelog miša. Nakon 6-8 sati, miš pokazuje znakove bolesti. U ovom trenutku pneumokok se već može otkriti u eksudatu trbušne šupljine. Eksudat se uzima sterilnom špricom. Od njega se prave razmazi, boje po Gramu i pregledavaju pod mikroskopom. Kako bi se izolirala čista kultura, eksudat se inokulira na serumski agar. Ako miš ugine ili se razboli, krv iz srca se uzgaja na serumskom agaru kako bi se izolirala čista kultura. Usjevi se stavljaju u termostat.

Ubrzana metoda za određivanje vrste pneumokoka(reakcija mikroaglutinacije). Na stakalce se nanesu 4 kapi eksudata iz trbušne šupljine zaraženog miša. Prvoj kapi dodaje se aglutinirajući serum tipa I, drugoj kapi serum tipa II, trećoj kapi tipa III, a četvrtoj izotonična otopina natrijeva klorida (kontrola).

Serumi tipa I i II prethodno su razrijeđeni u omjeru 1:10, a serum tipa III - 1:5. Sve kapi se promiješaju, osuše, fiksiraju i boje razrijeđenim fuksinom. Ako je rezultat pozitivan, u jednoj od kapi bilježi se nakupljanje mikroba (aglutinacija).

Drugi dan studija

Kulture se izvade iz termostata, pregledaju i naprave se razmazi od sumnjivih kolonija. Ako su u razmazima prisutni gram-pozitivni lanceolatni diplokoki, izoliraju se 2-3 kolonije na kosom serumskom agaru kako bi se dobila čista kultura. Usjevi se stavljaju u termostat. Od juhe se naprave razmazi, boje po Gramu i pregledaju pod mikroskopom.

Treći dan studija

Usjevi se uklanjaju iz termostata. Provjeravaju čistoću kulture - rade briseve, boje po Gramu i mikroskopiraju. Ako u izoliranoj kulturi ima gram-pozitivnih lanceolatih diplokoka, izolirana kultura identificira se uzgojem:

1) na Hiss mediju (laktoza, glukoza, saharoza, maltoza) sjetva se provodi na uobičajeni način - ubrizgavanjem u medij;

2) na podlozi s inulinom;

3) na mediju s optohinom;

4) napraviti pretragu žuči.

Inulin test. Kultura koja se proučava se sije na hranjivi medij koji sadrži inulin i lakmus tinkturu i stavlja u termostat. Nakon 18-24 sata, usjevi se uklanjaju iz termostata. U prisutnosti pneumokoka podloga pocrveni (streptokoki ne mijenjaju konzistenciju i boju podloge).

Određivanje osjetljivosti na optohin. Izolirana kultura se inokulira na 10% krvni agar koji sadrži optohin 1:50000. Pneumokok, za razliku od streptokoka, ne raste na podlozi koja sadrži optohin.

Test žuči. 1 ml ispitivane bujonske kulture ulije se u aglutinacijske epruvete. U jednu od njih doda se kap zečje žuči, druga epruveta služi kao kontrola. Obje epruvete se stave u termostat. Nakon 18-24 sata dolazi do lize pneumokoka, što se izražava u bistrenju mutne juhe. U kontroli, suspenzija ostaje mutna.

Uzorak žuči može se provesti na čvrstom hranjivom mediju. Da biste to učinili, zrno suhe žuči nanosi se na koloniju pneumokoka uzgojenih u posudama s agarom i serumom - kolonija se otapa i nestaje.

Četvrti dan istraživanja

Rezultati se bilježe (Tablica 26).

Bilješka. j - razgradnja ugljikohidrata uz stvaranje kiseline.

Trenutno se serološke metode istraživanja (RSK i RIGA) naširoko koriste za određivanje streptokoknih protutijela. Određivanje skupine i serovara izolirane kulture provodi se pomoću fluorescentnih protutijela.

Određivanje virulencije pneumokoka. Dnevna bujonska kultura pneumokoka razrijedi se s 1% peptonske vode od 10 -2 do 10 -8, 0,5 ml svakog razrjeđenja dano je dvama bijelim miševima. Kultura koja je uzrokovala smrt miševa u razrjeđenju od 10 -7 ocjenjuje se kao virulentna, a u razrjeđenju od 10 -4 -10 -6 smatra se umjereno virulentnom. Kultura koja ne uzrokuje smrt miševa je avirulentna.

Kontrolna pitanja

1. Koje metode izolacije čiste kulture pneumokoka poznajete?

2. Koja je životinja najosjetljivija na pneumokok?

3. Koje se reakcije provode s eksudatom zaraženog miša i u koju svrhu?

4. Od kojih predstavnika piogenih koka treba razlikovati pneumokok i kojim testom?

5. Kako odrediti virulentnost pneumokoka?

Vježbajte

Napravite dijagram pregleda sputuma, navodeći njegove faze po danu.

Kulturni mediji

Serumski agar(vidi poglavlje 7).

Juha od sirutke(vidi poglavlje 7).

Krvni agar(vidi poglavlje 7).

Njegovi mediji(suho).

Uzorak medija s inulinom. U 200 ml destilirane vode dodati 10 ml inaktiviranog goveđeg seruma, 18 ml tinkture lakmusa i 3 g inulina. Sterilizirajte mlazom pare na 100°C 3 dana zaredom. Juha od žuči (vidi Poglavlje 7).