Analiza za sifilis ELISA - tumačenje analize. Norma i odstupanja

U vezi s razvojem staničnih tehnologija, molekularne biologije, genetike, fizike, kemije i niza drugih visokotehnoloških disciplina, nove visokoprecizne i visokotehnološke metode uvode se u svakodnevnu praksu. Ovi interdisciplinarni trendovi utječu kako na područje medicinskog znanja tako i na srodna područja bioloških i biokemijskih problema. Tijekom proteklih deset godina, klinička laboratorijska dijagnostička metoda pod nazivom enzimski imunotest postala je raširena i uvedena u masovnu praksu.

Općenito, tehnologije imunoloških enzimskih i radioloških reakcija naširoko su korištene u tipizaciji stanica, staničnih kultura i raznih tkiva od ranih 80-ih godina 20. stoljeća. Međutim, te su metode bile vrlo radno intenzivne, neunificirane, nestandardizirane, što je onemogućilo njihovu masovnu primjenu u dijagnostičke i terapijske svrhe. Takve su metode koristili samo uski, znanstveni i visoko specijalizirani laboratoriji.

Međutim, razvojem tehnologije, mikrotehnologije i proizvodnje raznih biopolimernih materijala, postalo je moguće proizvoditi gotove enzimske imunodijagnostičke kitove koje mogu koristiti laboratoriji općih medicinskih ustanova. ELISA se široko koristi za dijagnosticiranje svih vrsta infekcija (klamidija, sifilis, citomegalovirus, toksoplazmoza, herpes itd.), kako akutnih tako i kroničnih, kao i latentnih oblika koji se javljaju bez kliničkih simptoma.Ova se metoda također koristi za kontrolu kroničnih bolesti . Pokušajmo shvatiti kakva je to metoda i koja su načela u pozadini?

Komponente enzimskog imunološkog testa - imunološka reakcija i enzimska reakcija

Imunoenzimski test, kao što naziv govori, sastoji se od dvije različite komponente – imunološke reakcije i enzimske reakcije. Imunološka reakcija proizvodi vezanje bioloških molekula, elemenata stanice ili mikroorganizma, koje oni zapravo pokušavaju detektirati, a enzimska reakcija omogućuje vidjeti i izmjeriti rezultat imunološke reakcije. Odnosno, imunološka reakcija je dio složene tehnike koja zapravo otkriva željeni mikrob. A enzimska reakcija dio je složene tehnike koja vam omogućuje pretvaranje rezultata imunološke reakcije u oblik vidljiv oku i dostupan za mjerenje korištenjem rutinskih kemijskih tehnika. Na temelju ove strukture imunoenzimske metode analizirat ćemo oba njezina dijela zasebno.

Imunološka reakcija, što je to? Što je antitijelo ili antigen?

Što je imunološki odgovor? Što je antigen?
Prije svega, pogledajmo što su imunološke reakcije. Imunološke reakcije– to su specifične reakcije vezanja antigena na protutijelo uz stvaranje imunološkog kompleksa. Što to znači? Na površini svake stanice bilo kojeg organizma postoje posebne strukture tzv antigeni. Antigeni su općenito molekule koje nose informaciju o stanici (slično informaciji na bedžu osobe koja označava osnovne podatke te osobe).

Individualni i specijski antigeni – što su oni? Zašto su ti antigeni potrebni?

Dostupno pojedinačni antigeni, odnosno svojstveno samo ovom organizmu. Ovi pojedinačni antigeni su različiti za sve ljude; postoje neki koji su slični jedni drugima, ali ipak različiti. U prirodi ne postoje dvije identične kopije pojedinih antigena!

Druga glavna vrsta antigena je antigeni vrste, odnosno svojstveno bilo kojoj specifičnoj vrsti živih bića. Na primjer, ljudi imaju antigen svoje vrste, zajednički svim ljudima, miševi imaju antigen svoje vrste miša, itd. Na površini svake stanice nužno je prisutan specifičan i individualan antigen.

Antigen vrste koriste stanice imunološkog sustava za prepoznavanje "prijatelja ili neprijatelja".

Kako dolazi do prepoznavanja antigena?

Imunološka stanica kontaktira sumnjivu stanicu i vrši identifikaciju na temelju pojedinačnog antigena. U memoriji imunološke stanice “zapisano” je kako izgleda “njezin antigen”. Stoga, ako antigen sumnjive stanice odgovara opisu "vlastitog antigena", tada ta vlastita stanica tijela ne predstavlja opasnost. Tada se imunološka stanica "odvezuje" i odlazi. A ako antigen ne odgovara opisu "sopstva", tada imunološka stanica identificira tu stanicu kao "stranu", i stoga potencijalno opasnu za cijeli organizam. U ovom slučaju, imunološka stanica se ne "oslobodi", već počinje uništavati opasni objekt. Točnost takvog imunološkog prepoznavanja je nevjerojatna - 99,97%. Greške praktički nema!

Što je antitijelo, imunološki kompleks?
Što je antitijelo?

Antitijelo je posebna molekula koja se nalazi na površini imunološke stanice. To je antitijelo koje se veže na antigene sumnjive stanice. Zatim, antitijelo prenosi informacije unutar stanice, gdje dolazi do prepoznavanja, i prima povratni signal dvije vrste, "svoj" ili "strani". Kada primi "samo" signal, antitijelo prekida vezu s antigenom i oslobađa stanicu.

Što je imunološki kompleks?
Kada je signal "nepoznatiji", situacija se odvija drugačije. Antitijelo ne prekida vezu s antigenom, već, naprotiv, slanjem specifičnih signala uzrokuje “pojačanje”. Biološki, to znači da se druga antitijela smještena u drugom dijelu stanice počinju kretati prema mjestu odakle dolazi signal opasnosti i također stvaraju vezu između sebe i uhvaćenog antigena. Na kraju se ispostavi da je antigen okružen sa svih strana i čvrsto vezan.Taj kompleks antigen + antitijelo naziva se imunološki kompleks. Od tog trenutka počinje iskorištavanje antigena. Ali sada nas ne zanimaju detalji procesa neutralizacije antigena.

Vrste antitijela (IgA, IgM, IgG, IG d, IgE)
Antitijela su proteinske strukture koje prema tome imaju kemijski naziv, koji se koristi kao sinonim za riječ antitijelo. Tako, antitijela = imunoglobulini.

Postoji 5 vrsta imunoglobulina (Ig), koji se vežu za različite vrste antigena na različitim mjestima u ljudskom tijelu (primjerice, na koži, na sluznicama, u krvi itd.). Odnosno, antitijela imaju podjelu poslova. Ovi imunoglobulini nazivaju se slovima latinične abecede - A, M, G, D, E i označavaju se na sljedeći način - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE.

U dijagnostici se koristi samo jedna vrsta antitijela, koja je najspecifičnija za detektirani mikrob. To jest, vezanje ove vrste antitijela na otkriveni antigen uvijek se događa. Najčešće se koriste IgG i IgM.

Upravo je to načelo imunološke reakcije (jedinstvena točnost i specifičnost prepoznavanja biološkog objekta koji se utvrđuje) u osnovi enzimskog imunološkog testa.Zbog visoke točnosti protutijela u prepoznavanju antigena, točnost cjelokupne metode enzimskog imunotestiranja također je visoka. najviše.

Enzimska reakcija

Koja reakcija je enzimska? Što su afinitet, supstrat i produkt reakcije?
Prijeđimo na razmatranje enzimske reakcije u radu metode enzimske imunološke analize.

Što je enzimska reakcija?

Enzimska reakcija je kemijska reakcija u kojoj se jedna tvar pretvara u drugu djelovanjem enzima. Tvar na koju enzim djeluje naziva se supstrat. A tvar koja se dobiva kao rezultat djelovanja enzima naziva se proizvod reakcije. Štoviše, osobitost enzimske reakcije je takva da određeni enzim djeluje samo na određeni supstrat. Ovo svojstvo enzima da prepozna "svoj" supstrat naziva se afinitet.

Dakle, svaki enzim provodi samo jednu za njega specifičnu reakciju. U biološkom svijetu postoji veliki broj poznatih enzima, kao i enzimskih reakcija. U enzimskoj imunodijagnostici koristi se samo nekoliko enzimskih reakcija - ne više od 10. Istodobno su odabrane takve enzimske reakcije, čiji su produkt obojene tvari. Zašto bi produkti enzimske reakcije trebali biti obojeni? Jer za izračunavanje koncentracije tvari iz obojene otopine postoji jednostavna kemijska metoda - kolorimetrija.

Kolorimetrijska metoda - suština i načelo

kolorimetrija koristi mjerenje gustoće boje otopine, a koncentracija tvari izračunava se iz gustoće boje.U ovom slučaju posebnim uređajem - kolorimetrom mjeri se gustoća boje otopine. U kolorimetriji postoje dvije moguće opcije ovisnosti gustoće boje o koncentraciji tvari - izravno proporcionalna ovisnost ili obrnuto proporcionalna ovisnost. S izravno proporcionalnim odnosom, što je veća koncentracija tvari, to je intenzivnija gustoća boje otopine. S obrnuto proporcionalnim odnosom, što je veća koncentracija tvari, niža je gustoća boje otopine. Tehnički, to se događa ovako: uzima se nekoliko otopina s poznatom koncentracijom tvari, mjeri se gustoća tih otopina i konstruira se grafikon ovisnosti koncentracije o gustoći boje ( kalibracijska karta).

Zatim se mjeri gustoća boje otopine čija se koncentracija određuje, a iz kalibracijskog grafikona nalazi se vrijednost koncentracije koja odgovara razini izmjerene gustoće boje otopine.U suvremenim automatskim kolorimetrima kalibracija je provedeno samo jednom, tada uređaj sam gradi kalibracijsku krivulju, koja ostaje u memoriji uređaja, a mjerenje se odvija automatski.

U imunoenzimskom ispitivanju najčešće se koriste sljedeći enzimi: peroksidaza, alkalna fosfataza, avidin.

Kako se imunološke i enzimske reakcije kombiniraju u enzimskom imunološkom testu? Sada ćemo prijeći na razmatranje samog enzimskog imunološkog testa. Koje faze uključuje i što se događa tijekom tih reakcija? Imunoenzimski test može se izravni i neizravni.

Izravni imunoenzimski test - faze provedbe

U izravnoj enzimskoj imunološkoj analizi koriste se protutijela na otkriveni antigen u kombinaciji sa specifičnom oznakom. Ova specifična oznaka je supstrat enzimske reakcije.

Pričvršćivanje antigena na površinu jažice i kombinacija antigena s antitijelom

Kako se izvodi direktni enzimski imunološki test? Uzima se biološki materijal (krv, strugotine sa sluznice, razmazi) i stavlja u posebne rupe. Biološki materijal se ostavi u jažicama 15-30 minuta kako bi se antigeni mogli zalijepiti za površinu jažica. Zatim se u ove jažice dodaju antitijela na detektirani antigen. To znači da se pri otkrivanju antigena, na primjer, sifilisa, dodaju antitijela protiv antigena sifilisa. Ta se antitijela dobivaju industrijski, a laboratoriji kupuju gotove kitove.Ta smjesa ispitivanog materijala i antitijela odstoji neko vrijeme (od 30 minuta do 4-5 sati) kako bi antitijela pronašla i stupila u kontakt sa “svojim” antigenom. Što je u biološkom uzorku više antigena, to će se na njih vezati više antitijela.

Uklanjanje "viška" antitijela

Kao što je navedeno, antitijela su također povezana sa specifičnom oznakom. Budući da se antitijela dodaju u suvišku, neće se sva vezati na antigene, a ako u uzorku nema antigena, tada se, sukladno tome, niti jedno antitijelo neće vezati na antigene. željeni antigen. Kako bi se uklonila "viška" antitijela, sadržaj iz jažica jednostavno se izlije. Kao rezultat toga, uklanjaju se sva "viška" antitijela, a ostaju ona koja su se vezala za antigene, jer su antigeni "zalijepljeni" za površinu jažica. Jažice se ispiru nekoliko puta posebnom otopinom koja vam omogućuje da isperete sva "dodatna" antitijela.

Zatim počinje druga faza - enzimska reakcija. U isprane jažice doda se otopina s enzimom i ostavi 30-60 minuta. Ovaj enzim ima afinitet za tvar (specifična oznaka) na koju su antitijela vezana. Enzim provodi reakciju koja pretvara ovu specifičnu oznaku (supstrat) u obojenu tvar (proizvod). Zatim se pomoću kolorimetrije pronađe koncentracija ove obojene tvari. Budući da je ova specifična oznaka povezana s protutijelima, to znači da je koncentracija produkta obojene reakcije jednaka koncentraciji protutijela. A koncentracija antitijela je jednaka koncentraciji antigena. Dakle, kao rezultat analize dobivamo odgovor o koncentraciji otkrivenog mikroba ili hormona.

Upravo tako radi izravna enzimska imunološka analiza. Međutim, danas se češće koristi neizravna enzimska imunološka analiza, budući da je osjetljivost i točnost neizravne veće od izravne. Dakle, prijeđimo na neizravnu enzimsku imunološku analizu.

Indirektni imunoenzimski test - faze provedbe

Postoje dvije faze u neizravnom enzimskom imunološkom testu. U prvoj fazi koriste se neobilježena antitijela na detektirane antigene, au drugoj fazi se koriste obilježena antitijela na prva neobilježena antitijela. To jest, ne radi se o izravnom vezanju protutijela na antigen, već o dvostrukoj kontroli: vezanju protutijela na antigen, nakon čega slijedi vezanje drugog protutijela na kompleks protutijelo + antigen. U pravilu, antitijela za prvu fazu su miš, a za drugu - koza.

Fiksacija antigena na površini jažice i vezanje antigena na neobilježeno protutijelo
Kao i kod izravnog imunoenzimskog testa, prikuplja se biološki materijal - krv, strugotine, razmazi. Biološki materijal koji se proučava unosi se u jažice i ostavlja 15-30 minuta da se antigeni prilijepe za površinu jažica. Zatim se neobilježena antitijela na antigene dodaju u jažice i ostave određeno vrijeme (1-5 sati) tako da se antitijela vežu za “svoje” antigene i formiraju imunološki kompleks ( Prvi korak). Nakon toga, "višak" nevezanih antitijela uklanja se izlijevanjem sadržaja jažica. Isperite posebnom otopinom kako biste potpuno uklonili sva nevezana antitijela.

Vezanje obilježenog antitijela na kompleks antigen + neobilježeno antitijelo
Nakon toga uzimaju druga označena antitijela, dodaju ih u jažice i ponovno ostavljaju neko vrijeme - 15-30 minuta ( druga faza). Za to vrijeme obilježena antitijela vežu se na prva – neobilježena – i tvore kompleks – antitijelo + antitijelo + antigen. Međutim, i obilježena i neobilježena antitijela dodaju se u jažice u suvišku. Stoga je potrebno ponovno ukloniti “višak” već obilježenih protutijela koja se nisu vezala na neobilježena protutijela. Da biste to učinili, ponovite postupak izlijevanja sadržaja jažica i ispiranja posebnom otopinom.

Enzimska reakcija – stvaranje obojenog spoja
Nakon toga se dodaje enzim koji provodi reakciju pretvaranja “etikete” u obojenu tvar. Boja se razvija unutar 5-30 minuta. Zatim se provodi kolorimetrija i izračunava koncentracija obojene tvari. Budući da je koncentracija obojene tvari jednaka koncentraciji obilježenih protutijela, a koncentracija obilježenih protutijela jednaka je koncentraciji neobilježenih protutijela, koja je pak jednaka koncentraciji antigena. Tako dobivamo koncentraciju detektiranog antigena.
Ova dvostruka kontrola u vidu upotrebe dvije vrste antitijela omogućila je povećanje osjetljivosti i specifičnosti metode enzimskog imunološkog testa. Unatoč produljenju vremena analize i uključivanju dodatnih faza, ti se gubici nadoknađuju točnošću rezultata. Zbog toga su trenutačno velika većina metoda enzimskih imunotestova neizravni enzimski imunotestovi.

Koje se bolesti otkrivaju enzimskim imunološkim testom?

Prijeđimo na razmatranje koje bolesti i koje biološki aktivne tvari otkrivaju enzimski imunološki test. Tvari otkrivene enzimskim imunotestom prikazane su u tablici.

Hormoni i markeri bolesti štitnjače	Peroksidaza štitnjače (TPO)
	Tireoglobulin (TG)
	Hormon koji stimulira štitnjaču (TSH)
	Tiroksin (T4)
	trijodtironin (T3)
	Slobodni tiroksin (T4)
	Slobodni trijodtironin (T3)
Dijagnoza reproduktivne funkcije	Luteinizirajući hormon (LH)
	Folikulostimulirajući hormon (FSH)
	Prolaktin
	progesteron
	Estradiol
	Testosteron
	Kortizol
	Globulin koji veže steroide (SBG)
	alfafetoprotein (AFP)
Tumorski markeri	korionski gonadotropin (CG)
	Antigen specifičan za prostatu (PSA)
	SA – 125
	SA – 19.9
	CYFRA-21-1
	M – 12 (SA – 15.3)
	MUC – 1 (M – 22)
	MUC1 (M – 20)
	Alveomucin
	K – lanac
	L – lanac
	Čimbenik nekroze tumora (TNFα)
	γ – interferon
	Karcinoembrionalni antigen (CEA)
Dijagnostika zaraznih bolesti

ELISA je suvremeni laboratorijski test kojim se traže specifična protutijela u krvi (ili antigeni) na određene bolesti kako bi se utvrdila ne samo etiologija, već i stadij bolesti.

1. tražiti specifična protutijela na bilo koju zaraznu bolest;
2. traženje antigena bilo koje zarazne bolesti;
3. proučavanje hormonskog statusa pacijenta;
4. probir na prisutnost autoimunih bolesti.

Kao i svaka metoda laboratorijske dijagnostike, ELISA ima svoje prednosti i nedostatke. Prednosti metode uključuju:

1. visoka specifičnost i osjetljivost metode (više od 90%);
2. sposobnost određivanja bolesti i praćenja dinamike procesa, odnosno usporedbe broja antitijela u različitim vremenskim razdobljima;
3. dostupnost i brzina ovog istraživanja;
4. neinvazivna metoda prikupljanja materijala, a ne istraživanja;

Nedostatak metode je činjenica da je tijekom analize moguće identificirati ne uzročnika same bolesti, već samo imunološki odgovor na njega (protutijela).

Bit ELISA metode

Postoji nekoliko vrsta ELISA: izravna, neizravna, metoda blokiranja, konkurentna. Međutim, u praksi se najčešće koristi heterogeni enzimski imunotest ili ELISA.

Osnova enzimskog imunološkog testa je imunološka reakcija antigena i protutijela uz stvaranje imunološkog kompleksa, što rezultira promjenom enzimske aktivnosti specifičnih oznaka na površini protutijela.

U osnovi, ovaj proces se može podijeliti u nekoliko faza:

1. na površini jažica tablete test sustava nalazi se pročišćeni antigen specifičnog patogena. Kada se doda serum životinjske krvi, dolazi do specifične reakcije između ovog antigena i željenog antitijela;
2. Zatim se u jažicu dodaje poseban kromogen (konjugat obilježen peroksidazom). Dolazi do enzimske reakcije koja rezultira stvaranjem obojene tvari u jažici ploče. Intenzitet njegove boje ovisi o količini imunoglobulina (antitijela) sadržanih u serumu životinje;
3. Zatim se ocjenjuje rezultat. Višekanalnim spektrofotometrom uspoređuje se optička gustoća ispitivanog materijala s optičkom gustoćom kontrolnih uzoraka i rezultati se matematički obrađuju. Količina antitijela u pacijenta izravno ovisi o visini optičke gustoće dane jažice.

Mora se zapamtiti: za svaki testni sustav razvijeni su pojedinačni pokazatelji za bilježenje rezultata, pokazatelji normalnosti i patologije ("referentne vrijednosti"). To se mora uzeti u obzir pri procjeni rezultata svake pojedinačne studije.

Neispravno je interpretirati rezultate jednog laboratorija na temelju “referentnih vrijednosti” drugog laboratorija. Također je netočno međusobno uspoređivati ​​rezultate različitih laboratorija.

Pri procjeni rezultata za specifične infekcije važna je klasa otkrivenih protutijela i njihova količina. O tome ne ovisi samo pitanje etiologije infekcije, već i očekivani stadij bolesti (akutna, kronična), kao i prisutnost aktivne infekcije (akutne ili pogoršanja kronične) u vrijeme pregleda.

Koji je okvirni vremenski okvir za pojavu antitijela?

Najranija antitijela su IgM. Mogu se otkriti 1-3 tjedna nakon moguće infekcije, što karakterizira akutnu fazu infektivnog procesa. Druga situacija za pojavu IgM protutijela je pogoršanje kroničnog procesa. IgM cirkulira u prosjeku oko 3 mjeseca, zatim njihova količina postupno nestaje. Međutim, u nekih se bolesnika IgM u tragovima može otkriti unutar 1-2 godine nakon infekcije.

Od 4. tjedna nakon infekcije počinju se javljati IgG protutijela. Kod većine infekcija njihov titar postupno raste s maksimumom u različitim vremenima (u prosjeku nakon 1,5-2 mjeseca), zatim titar ostaje na niskoj razini i ukazuje na imunitet. Kod nekih bolesti razine IgG nisu visoke.

Mogućnosti otkrivanja antitijela

• Izolirana detekcija IgM protutijela ukazuje na prisutnost primarne infekcije.
• Istodobno otkrivanje IgM i IgG u krvi tipično je za primarnu infekciju u prethodna 2-3 mjeseca, kao i tijekom pogoršanja kronične bolesti.
• Otkrivanje izoliranog IgG može ukazivati ​​i na imunitet na bolest i na kroničnu infekciju. U drugoj situaciji važna je i količina protutijela (titar) i promjena tog titra tijekom vremena. Obično se istraživanja provode u intervalima od 2-4-6 tjedana.

ELISA analiza je suvremena laboratorijska dijagnostička tehnika za značajan broj različitih bolesti. Skraćenica označava enzimski imunološki test. Suština tehnike je određivanje titra (aktivnosti) antitijela.

ELISA tehnika trenutno dobiva značajnu popularnost. Koristi se u kliničkoj medicini za dijagnozu različitih patologija, kao iu eksperimentalnim studijama koje zahtijevaju točno određivanje koncentracije različitih spojeva u proučavanom mediju.

Princip ELISA tehnike

Imunoenzimski test je imunološka reakcija. Temelji se na dodatku specifičnih protutijela
ili antigena u medij za testiranje (najčešće krv koja se testira), nakon čega slijedi enzimsko određivanje koncentracije nastalih kompleksa antigen-antitijelo. Na temelju koncentracije kompleksa može se prosuditi razina ili aktivnost spoja koji se određuje u ispitnom mediju.

Određivanje koncentracije kompleksa antigen-antitijelo obično se provodi posebnom opremom kromatografskom metodom.

Indikacije za upotrebu

ELISA analiza se provodi za različite indikacije, a glavne u kliničkoj medicini su:

• Dijagnoza zarazne patologije s pretežno spolnim prijenosom (STI), koja uključuje klamidiju, mikoplazmozu, ureaplazmozu, trihomonijazu, dok identificira specifična protutijela na uzročnika infekcije.
• Dijagnostika zaraznih bolesti različite lokalizacije za određivanje stadija patološkog procesa, prvenstveno u procesu dijagnosticiranja parenteralnog virusnog hepatitisa i HIV-a.
• Određivanje koncentracije hormona za dijagnozu različitih patologija organa endokrinog sustava (endokrinih žlijezda).
• Određivanje različitih spojeva za dijagnosticiranje uzroka intoksikacije tijela u slučaju trovanja, ugriza insekata ili zmija.

Za ove medicinske indikacije provodi se ELISA test krvi. Ova se tehnika također aktivno koristi u eksperimentalnoj medicini tijekom različitih kliničkih studija tijekom razvoja novih lijekova i cjepiva za imunoprofilaksu.

Kako se provodi istraživanje

Test krvi pomoću ELISA testa provodi se u specijaliziranom laboratoriju. Za njegovu provedbu prvo se uzima venska krv, najčešće iz kubitalne vene u volumenu od 5-10 ml, koja se zatim šalje u laboratorij. U prosjeku, rezultat testa može se dobiti već sljedeći dan, što je važna točka za promptno propisivanje liječenja nakon dijagnoze bolesti.

Kako se pripremiti za ELISA test

Da biste dobili pouzdane rezultate istraživanja pomoću enzimskog imunološkog testa, trebali biste slijediti nekoliko jednostavnih pripremnih preporuka, koje uključuju:

• Dan prije analize trebali biste prestati jesti masnu hranu (meso, dimljeno meso) i alkohol.
• Materijal za studiju mora se predati ujutro na prazan želudac.
• Na dan studije preporučljivo je izbjegavati fizički i psiho-emocionalni stres.
• Prije studije trebali biste pokušati ne pušiti.

Većina lažno pozitivnih rezultata imunoenzimskog testa posljedica je neispravne provedbe pripremnih preporuka. To je u većini slučajeva povezano s konzumiranjem masne hrane, što dovodi do povećanja koncentracije triglicerida (masti) u krvnoj plazmi, što smanjuje specifičnost ELISA testa.

Dekodiranje rezultata

Test krvi za antitijela pomoću ELISA ima 2 modifikacije - kvalitativno i kvantitativno određivanje. Na
U kvalitativnom određivanju protutijela rezultat može biti pozitivan (otkrivena su protutijela, što ukazuje na moguću prisutnost patološkog procesa uzrokovanog uzročnikom infekcije) ili negativan (nema protutijela, što ukazuje na odsutnost infektivnog procesa).

Odsutnost antitijela nije uvijek 100% pokazatelj odsutnosti infektivnog procesa. To je zbog činjenice da se nakon infekcije protutijela ne stvaraju odmah, već kroz određeno vrijeme (najmanje oko 2 tjedna). Stoga, kako bi se potvrdila odsutnost infekcije, ELISA se može ponoviti nakon nekog vremena.

Kvantitativni ELISA se koristi za određivanje titra (aktivnosti) antitijela, kao i njihovih klasa. U većini slučajeva za dijagnosticiranje zaraznih bolesti određuju se protutijela klase IgG (imunoglobulin G) i IgM (imunoglobulin M), koja se stvaraju u tijelu u različitim vremenskim razmacima nakon infekcije, pa dešifriranje rezultata testa može imati nekoliko značenja:

• Povećana aktivnost IgM i odsutnost IgG dokaz je nedavne infekcije i akutnog tijeka zaraznog procesa.
• Povećanje aktivnosti IgM i IgG je pogoršanje infektivnog procesa tijekom kroničnog tijeka i dugotrajne infekcije.
• Visoka aktivnost IgG i odsutnost IgM je kronični tijek infektivnog procesa na pozadini dugotrajne infekcije, nakon koje je prošlo više od šest mjeseci (vrijeme potrebno za stvaranje antitijela klase IgG).

Općenito, dešifriranje rezultata ELISA za svaki infektivni proces ima određene značajke. Točnije određivanje prisutnosti zarazne bolesti, kao i stadija njezinog tijeka, provodi liječnik.

ELISA je trenutno metoda izbora za dijagnosticiranje većine zaraznih bolesti. Na temelju rezultata takve studije, liječnik ima priliku uspostaviti točnu dijagnozu i odrediti stupanj patološkog procesa kako bi propisao naknadno adekvatan i učinkovit tretman.

Suvremene dijagnostičke tehnike omogućuju prepoznavanje određene bolesti u laboratoriju pomoću posebnih testova. Jedan od njih je enzimski imunološki test krvi, koji može potvrditi prethodno postavljenu dijagnozu.

Imunoenzimski test ELISA jedna je od najučinkovitijih i najsuvremenijih metoda za identifikaciju poremećaja povezanih s imunološkom i hormonskom neravnotežom, kao i onkološkim procesima. Tijekom testa u krvi se mogu otkriti antitijela koja nastaju kada u tijelu postoji infekcija. Uzimajući u obzir ovu nijansu, bolest se može otkriti čak iu najranijoj fazi razvoja.

Što je osnova tehnike?

Rezultati ELISA analize temelje se na dobivanju kemijskih reakcija na enzime, koji služe kao posebne identifikacijske oznake za prepoznavanje protutijela. Posljedično, tijekom imunokemijskih reakcija, protutijela počinju komunicirati s određenim antigenima. Sve to daje osnovu za tvrdnju da su lažni rezultati prilikom davanja krvi na ELISA minimalni.

Studija vam omogućuje da odredite broj imunoloških stanica, njihova svojstva, kao i prisutnost potrebnih antitijela

Rezultat se smatra pozitivnim kada se otkrije obojenost otopine. Boja označava da su antigeni u interakciji s antitijelima. Ako se ništa slično ne dogodi, rezultat je negativan.

Za sveobuhvatnu procjenu zaštitnih funkcija tijela provodi se imunoenzimski test (ELISA). Tijekom studije utvrđuje se broj i svojstva imunoloških stanica i prisutnost potrebnih antitijela. ELISA test krvi provodi se za dijagnosticiranje zaraznih, hematoloških, autoimunih bolesti, primarnih i sekundarnih imunodeficijencija. Razmotrimo što je ELISA test krvi i koje indikacije postoje za provođenje ove studije.

Što je

Test krvi ELISA metodom je laboratorijska metoda kojom se utvrđuju antitijela ili antigeni u uzorku krvi. Ova se studija koristi za određivanje razine imunoglobulina, imunoloških kompleksa i hormona.

Indikacije za analizu

Postoje sljedeće indikacije za propisivanje ELISA testa krvi:

• dijagnoza spolno prenosivih infekcija - ureaplazma, mikoplazma, klamidija, trihomonas, sifilis;
• dijagnoza virusnih bolesti - citomegalovirus, herpes, hepatitis, Epstein-Barr virus;
• određivanje razine hormona;
• dijagnoza onkoloških bolesti;
• određivanje imunodeficijencije;
• dijagnosticiranje alergija;
• preoperativni sveobuhvatni pregled prije transplantacije organa;
• procjena učinkovitosti terapije.

Princip metode

Princip rada metode enzimske imunoanalize temelji se na određivanju specifičnih proteina protutijela u krvi - imunoglobulina. Imunoglobuline proizvodi ljudski imunološki sustav kada antigeni (strani mikroorganizmi) uđu u tijelo. Takve se imunološke molekule vežu za razne infektivne patogene u tijelu i neutraliziraju ih.

Imunoglobulini imaju važnu karakteristiku – specifičnost. Zahvaljujući tome, mogu se vezati za određeni antigen, tvoreći kompleks antigen-antitijelo. Tijekom ELISA testa krvi, ovaj kompleks se određuje kvalitativno i kvantitativno.

Postoji pet klasa imunoglobulina. Ali obično se definiraju tri klase - imunoglobulini A, M, G. Ta se antitijela nakupljaju u tijelu u različitim vremenima od trenutka infekcije.

• Imunoglobulini klasa M (IgM) prvi se pojavljuju u krvi petog dana od trenutka infekcije. Oni ostaju u tijelu 5-6 tjedana, a zatim nestaju iz krvotoka. IgM protutijela ukazuju na akutno razdoblje bolesti ili na pogoršanje bolesti tijekom kroničnog tijeka.
• Otprilike 3-4 tjedna nakon infekcije, imunoglobulini se pojavljuju u krvi klasa G (IgG). Oni mogu postojati u ljudskoj krvi nekoliko mjeseci ili čak godina. Prema tumačenju ELISA testa krvi, ako je u dva uzorka krvi uzeta uzastopno nakon dva tjedna povećana količina IgG imunoglobulina, govore o trenutnoj infekciji ili reinfekciji - ponovnoj infekciji istom infekcijom.
• Imunoglobulini klasa A (IgA) mogu se otkriti ovom metodom istraživanja 2-4 tjedna nakon infekcije ili pogoršanja zarazne bolesti. Od toga samo 20% cirkulira u krvi, ostatak je u sekretu sluznice. IgA protutijela nestaju iz krvotoka 2-8 tjedana nakon uništenja uzročnika infekcije. Nestanak ovih imunoglobulina znači izlječenje infekcije. Ako se nakon prestanka bolesti utvrdi prisutnost IgA protutijela u krvi, to znači da je bolest prešla u kronični stadij.

Priprema za analizu

Za provođenje testa krvi pomoću ELISA metode najčešće se koristi ljudska krv. Ali također možete ispitati sadržaj staklastog tijela, cerebrospinalne tekućine i amnionske tekućine.

Uzorak krvi za testiranje uzima se iz pacijentove antekubitalne vene. Preporuča se darivanje krvi natašte (od posljednjeg obroka mora proći najmanje 12 sati). Potrebno je obavijestiti liječnika ako pacijent uzima lijekove, jer neki od njih mogu promijeniti rezultat testa. Na pouzdanost rezultata studije utječe uporaba alkohola i droga.

Dekodiranje

Obrazac rezultata ovog testa pokazuje pozitivan (+) ili negativan (-) rezultat određivanja svake klase imunoglobulina.

Razmotrimo tumačenje mogućeg tumačenja ELISA testa krvi.

• Negativan nalaz za IgM, IgG, IgA znači nedostatak imuniteta na infekciju.
• Negativan nalaz za IgM, IgA i pozitivan nalaz za IgG je postinfektivna ili postcijepna imunost.
• Negativan ili pozitivan nalaz IgG, IgA i pozitivan nalaz IgM – akutna infekcija.
• Pozitivan rezultat za IgM, IgG, IgA je egzacerbacija kronične zarazne bolesti.
• Negativan IgM nalaz i negativan ili pozitivan IgG nalaz, IgA – kronična infekcija.
• Negativan rezultat IgM i IgG, IgA nisu otkriveni - oporavak.

Prednosti metode

ELISA test krvi ima mnoge prednosti. Mogu se identificirati glavni:

• relativno visoka točnost (osjetljivost);
• mogućnost rane dijagnoze;
• sposobnost praćenja dinamike zaraznog procesa;
• visoka razina unifikacije, koja omogućuje masovne preglede;
• kratko vrijeme potrebno za dobivanje rezultata analize;
• Jednostavnost korištenja;
• automatizacija svih faza analize;
• relativno niske cijene.

Mane

Nedostatak ELISA metode je što ponekad daje lažno negativne ili lažno pozitivne rezultate. Uz tehničke pogreške tijekom studije, uzrok lažnih rezultata može biti pacijentov reumatoidni faktor, prisutnost kroničnih bolesti (kod kojih se proizvode antitijela), metabolički poremećaji ili uporaba određenih lijekova.

• ascariasis;
• trihineloza - analiza se provodi nekoliko puta, maksimalna razina antitijela se određuje 4-12 tjedana nakon infekcije;
• cisticerkoza;
• tenijaza;
• fascioliasis - antitijela se otkrivaju u akutnoj fazi bolesti;
• opisthorchiasis - diferencijalna dijagnoza se provodi između kroničnog i akutnog oblika bolesti;
• giardijaza;
• visceralna i kožna lišmanijaza;
• amebijaza;
• toksoplazmoza.

4.2 4,20 od 5 (5 glasova)