Bakteriološki laboratorij proučava. Bakteriološki laboratorij - laboratoriji, paraklinike

Uvod

Kao opći dio svake druge znanosti, opća se bakteriologija ne bavi posebnim pitanjima (recimo, identifikacijom pojedinih vrsta bakterija), nego problemima općenito; njegova metodologija pokriva osnovne postupke koji se široko koriste u velikom broju laboratorijskih studija. Ovo nastavno pomagalo nije usmjereno na identifikaciju bilo koje skupine mikroorganizama. To je zadatak sljedećih publikacija - o privatnoj i sanitarnoj mikrobiologiji. Međutim, ovdje predstavljene metode mogu biti korisne u bilo kojem području gdje su uključene bakterije i mogu se primijeniti na praktične probleme koji uključuju izolaciju i tipizaciju bakterija.

Bakteriologija je postala znanost tek nakon što su razvijene jedinstvene tehnike pomoću kojih nastavlja utjecati i prodirati u kasnija znanstvena područja kao što su virologija, imunologija i molekularna biologija. Tehnika korištenja čistih kultura koju je razvio R. Koch te imunološke reakcije i kemijske analize koje je prvi upotrijebio L. Pasteur nisu izgubile na značaju.

Metodologija opće bakteriologije odražava se u ovoj publikaciji korištenjem strukture koja je tipična za standardne udžbenike u ovoj disciplini. Međutim, za razliku od laboratorijskih radionica na kolegiju mikrobiologije za sveučilišta, on je detaljnije predstavljen u nekim dijelovima i služi samo kao referenca. Ova struktura uzima u obzir specifično obrazovanje i specijalizaciju bakteriologa i veterinarskih stručnjaka. Često se gradivo iznosi proizvoljno, pa se neke metode spominju više puta, zbog želje da se pokaže njihova međusobna povezanost.

Bakteriološki laboratorij

Bakteriološki laboratoriji kao ustrojstvene jedinice organiziraju se u sastavu područnih, područnih, međupodručnih veterinarskih laboratorija, kao iu sastavu područnih veterinarskih laboratorija. Također su organizirani u centrima sanitarnog i epidemiološkog nadzora, u bolnicama za zarazne bolesti, općim bolnicama, nekim specijaliziranim bolnicama (na primjer, u tuberkuloznim, reumatološkim, dermatovenerološkim) iu poliklinikama. Bakteriološki laboratoriji dio su specijaliziranih istraživačkih ustanova. Bakteriološki laboratoriji stalno se koriste za potvrđivanje ili utvrđivanje ocjene prikladnosti mesa za prehrambene svrhe prema VSE.

Predmeti istraživanja u bakteriološkim laboratorijima su:

1. Izlučevine iz tijela: urin, feces, sputum, gnoj, kao i krv, patološki i kadaverični materijal.

2. Objekti vanjske okoline: voda, zrak, tlo, ispiranje iz opreme, hrana za životinje, tehnološke sirovine dobivene klanjem domaćih životinja.

3. Prehrambeni proizvodi, uzorci mesa i mesnih prerađevina, mlijeka i mliječnih proizvoda za koje je potrebno izvršiti ocjenu prikladnosti za prehrambene svrhe.

Prostorije bakteriološkog laboratorija i oprema radnog mjesta

Specifičnosti mikrobiološkog rada zahtijevaju da prostorija namijenjena laboratoriju bude izolirana od dnevnih soba, prehrambenih jedinica i drugih neosnovnih proizvodnih prostora.

Bakteriološki laboratorij obuhvaća: laboratorijske prostorije za bakteriološka istraživanja i pomoćne prostorije; autoklav ili sterilizacija za dezinfekciju otpadnog materijala i kontaminiranog pribora; praonica opremljena za pranje suđa; bakteriološka kuhinja – za pripremu, punjenje, sterilizaciju i čuvanje hranjivih podloga; vivarij za držanje pokusnih životinja; materijal za skladištenje rezervnih reagensa, posuđa, opreme i kućanske opreme.

Navedene pomoćne prostorije, kao samostalne građevinske cjeline, dio su velikih bakterioloških laboratorija. U malim laboratorijima bakteriološka kuhinja i kuhinja za sterilizaciju spojene su u jednu prostoriju; Ne postoji posebna prostorija za držanje pokusnih životinja.

Prostorije mikrobioloških laboratorija podijeljene su u 2 zone prema stupnju opasnosti za osoblje:

I. “Zarazna” zona - prostorija ili skupina laboratorijskih prostorija u kojima se manipulira i skladišti patogene biološke agense, osoblje je odjeveno u odgovarajuću vrstu zaštitne odjeće.

II. "Čista" zona - prostorije u kojima se ne radi s biološkim materijalom, osoblje je odjeveno u osobnu odjeću.

Najsvjetlije, najprostranije prostorije raspoređene su za laboratorijske prostorije u kojima se provode sve bakteriološke studije. Zidovi u ovim prostorijama do visine od 170 cm od poda obojeni su u svijetle boje uljanom bojom ili obloženi pločicama. Pod je prekriven relinom ili linoleumom. Ova vrsta završne obrade omogućuje vam korištenje otopina za dezinfekciju prilikom čišćenja prostorije.

Svaka prostorija treba imati umivaonik s tekućom vodom i policu za bocu dezinfekcijske otopine.

Jedna od prostorija opremljena je staklenom kutijom - izoliranom prostorijom s predprostorom (predboksom) za izvođenje radova u aseptičnim uvjetima. U boks se postavljaju stol za sjetvu i stolica, a iznad radnog mjesta montiraju se baktericidne lampe. U pretprostoru je smješten ormar za čuvanje sterilnog materijala. Prozori i vrata prostorija u "zaraznoj" zoni moraju biti zapečaćeni. Postojeća ispušna ventilacija iz "zarazne" zone mora biti izolirana od ostalih ventilacijskih sustava i opremljena finim zračnim filtrima.

Laboratorij je opremljen laboratorijskim stolovima, ormarima i policama za odlaganje opreme, posuđa, boja i reagensa potrebnih za rad.

Za rad bakteriologa i laboranta vrlo je važna pravilna organizacija radnog mjesta. Laboratorijski stolovi postavljeni su u blizini prozora. Prilikom postavljanja treba nastojati osigurati da svjetlost pada ispred ili sa strane osobe koja radi, po mogućnosti s lijeve strane, ali nikako odostraga. Preporučljivo je da prostorije za analizu, posebno za mikroskopiranje, imaju prozore orijentirane prema sjeveru ili sjeverozapadu, jer je za rad potrebno ravnomjerno, difuzno svjetlo. Površinska osvijetljenost stolova za rad treba biti 500 luksa. Radi lakše dezinfekcije površina laboratorijskih stolova prekrivena je plastikom ili presvučena željezom. Svaki zaposlenik laboratorija ima zasebno radno mjesto dimenzija 150 x 60 cm.

Sva radna mjesta opremljena su predmetima potrebnim za svakodnevni bakteriološki rad čiji je popis dat u tablici 1.

Stol 1.

Potrebni predmeti za bakteriološki rad

Ime proizvoda	Približna količina
1. Set boja i reagensa za slikanje
2. Staklo	25-50
3. Pokrovna stakla	25-50
4. Čaše s rupama	5-10
5. Stalak za epruvete
6. Bakterijska petlja
7. Staklene lopatice
8. Metalne lopatice
9. Teglica od vate
10. Pipete graduirane na 1, 2, 5, 10 ml	25 svakog sveska
11. Pasteurove pipete	25-50
12. Pinceta, škare, skalpel	od 1
13. Spremnici s otopinama za dezinfekciju
14. Mikroskop s iluminatorom
15. Povećalo 5´
16. Podmazivač s uronjenim uljem
17. Filter papir	3-5 listova
18. Staklenka s dezinfekcijskom otopinom za pipete
19. Alkoholni ili plinski plamenik
20. Instalacija za preparate za bojenje
21. Pješčani sat na 1 ili 2 minute	od 1
22. Kruška s gumenom cijevi
23. Olovka na staklu
24. Staklenka alkoholne vate
25. Potrebno sterilno posuđe	-

Dezinfekcija

Dezinfekcija je uništavanje mikroorganizama u objektima okoliša.

U mikrobiološkim laboratorijima mjere dezinfekcije koriste se vrlo široko. Po završetku rada sa zaraznim materijalom djelatnici bakterioloških laboratorija provode preventivnu dezinfekciju ruku i radnog mjesta.

Istrošeni patološki materijal (feces, urin, sputum, razne vrste tekućina, krv) dezinficira se prije bacanja u kanalizaciju.

Graduirane i Pasteurove pipete, staklene lopatice i metalni instrumenti kontaminirani patološkim materijalom ili kulturom mikroba odmah nakon upotrebe spuštaju se u staklene posude s otopinom za dezinfekciju koje se nalaze na stolu na svakom radnom mjestu.

Predmetna i pokrovna stakla koja se koriste u radu također podliježu obveznoj dezinfekciji, jer čak i fiksirani i obojeni razmaz ponekad zadržava vitalne mikroorganizme koji mogu biti izvor intralaboratorijske kontaminacije. Dezinficijensima se ne tretira samo ono posuđe u kojem su se uzgajali mikroorganizmi. Stavlja se u metalne spremnike ili kante, zatvara i šalje na autoklaviranje.

Izbor dezinficijensa, koncentracija njegove otopine, omjer između količine dezinficijensa i materijala koji se dezinficira, kao i trajanje dezinficijensa određuju se ovisno o konkretnim uvjetima, vodeći računa prije svega o stabilnosti dezinficiranih mikroba, stupanj očekivane kontaminacije, sastav i konzistenciju materijala u kojem se nalaze.

Dezinfekcija ruku nakon rada sa zaraznim materijalom iu dodiru s kožom. Po završetku rada sa zaraznim materijalom, ruke se profilaktički dezinficiraju. Vata ili gazni ubrus se navlaži 1% otopinom kloramina, prvo se obriše lijeva, a zatim desna ruka u sljedećem redoslijedu: stražnja strana ruke, površina dlana, interdigitalni prostori, kreveti za nokte. Dakle, najprije se tretiraju najmanje onečišćena područja, a zatim se prelazi na najjače onečišćena područja kože. Brišite ruke 2 minute s dva uzastopna tampona. Kada se ruke kontaminiraju kulturom patogenog mikroba ili patološkim materijalom, najprije se dezinficiraju kontaminirana područja kože. U tu svrhu pokriju se 3-5 minuta vatom navlaženom 1% otopinom kloramina, zatim se vata baci u spremnik ili kantu s otpadnim materijalom, a ruke se tretiraju drugim tupferom u istoj. način kao tijekom preventivne dezinfekcije. Nakon tretmana kloraminom, operite ruke toplom vodom i sapunom. Kod rada s bakterijama koje stvaraju spore, tretman ruku se provodi s 1% aktiviranim kloraminom. Ako zarazni materijal dođe u dodir s rukama, izloženost dezinficijensu se povećava na 5 minuta.

Sterilizacija

Sterilizacija, za razliku od dezinfekcije, podrazumijeva uništavanje svih vegetativnih i sporonosnih, patogenih i nepatogenih mikroorganizama u predmetu koji se sterilizira. Sterilizacija se provodi na različite načine: parom, suhim vrućim zrakom, kuhanjem, filtracijom itd. Izbor jedne ili druge metode sterilizacije određen je kvalitetom i svojstvima mikroflore predmeta koji se sterilizira.

Priprema i sterilizacija laboratorijske opreme

Prije sterilizacije laboratorijsko stakleno posuđe se opere i osuši. Epruvete, bočice, boce, madraci i boce zatvaraju se čepovima od pamučne gaze. Stavite papirnate čepove preko čepova na svaku posudu (osim epruveta).

Gumeni, pluteni i stakleni čepovi steriliziraju se u posebnoj vrećici zavezanoj za grlo posude. Petrijeve zdjelice se steriliziraju zamotane u papir, po 1-10 komada. Pasterove pipete 3-15 kom. zamotan u omotni papir. Na vrh svake pipete stavlja se komadić vate kako bi se spriječio ulazak materijala u okoliš. Prilikom omatanja pipeta treba paziti da se ne polome začepljeni krajevi kapilara. Tijekom rada, pipete se vade iz vrećice za gornji kraj.

U gornji dio graduiranih pipeta, kao kod Pasteurovih pipeta, umetne se sigurnosna vata, a zatim se zamota u debeli papir, prethodno izrezan na trake širine 2-2,5 cm i duljine 50-70 cm. Traka se stavi na stol, lijevi kraj je presavijen i omotan vrhom pipete, a zatim, okrećući pipetu, omotajte traku papira na nju. Da se papir ne bi rasklopio, suprotni kraj je uvrnut ili zalijepljen. Na papiru je napisan volumen umotane pipete. Ako postoje pernice, u njima se steriliziraju graduirane pipete.

Laboratorijsko stakleno posuđe se sterilizira:

a) suha toplina na temperaturi od 180°C, odnosno 160°C, 1 sat i 150 minuta.

b) u autoklavu pod pritiskom od 1,5 atm. 60 minuta, za uništavanje mikroflore spora - 90 minuta na 2 atm.

Sterilizacija štrcaljki. Šprice se steriliziraju u rastavljenom obliku: odvojeno cilindar i klip u 2% otopini natrijevog bikarbonata 30 minuta. Pri radu s mikroflorom koja nosi spore, sterilizacija se provodi u autoklavu na 132±2°C (2 atm.) 20 minuta, na 126±2°C (1,5 atm.) - 30 minuta. Sterilizirana štrcaljka se sastavlja nakon što se ohladi, klip se umetne u cilindar, stavi se igla, nakon što se prethodno izvadi trn s nje. Igla, cilindar i klip se uzimaju pincetom, koja se sterilizira zajedno sa štrcaljkom.

Sterilizacija metalnih instrumenata. Metalni instrumenti (škare, skalpeli, pincete i dr.) sterilizirani su u 2% otopini natrijevog bikarbonata, čime se sprječava hrđanje i gubitak oštrine. Preporuča se oštrice skalpela i škara omotati vatom prije uranjanja u otopinu.

Sterilizacija bakterijskih petlji. Bakterijske petlje od platinske ili nikromske žice steriliziraju se u plamenu alkoholnog ili plinskog plamenika. Ova metoda sterilizacije naziva se kalcinacija ili flambiranje.

Petlja se postavlja u vodoravni položaj u donjem, najhladnijem dijelu plamena plamenika kako bi se spriječilo prskanje spaljenog patogenog materijala. Nakon što izgori, petlja se pomakne u okomiti položaj, prvo donji, zatim gornji dio žice se užari i progori držač petlje. Kalcinacija općenito traje 5-7 sekundi.

Priprema za sterilizaciju i sterilizacija papira, gaze i vate. Vata, gaza, filter papir steriliziraju se u sušioniku na temperaturi od 160°C u roku od sat vremena od trenutka kada termometar očita tu temperaturu ili u autoklavu na tlaku od 1 atm. unutar 30 minuta.

Prije sterilizacije papir i gaza se izrežu na komade, a vata se uvalja u kuglice ili tampone potrebne veličine. Nakon toga se svaka vrsta materijala posebno, jedan ili više komada, zamota u debeli papir. Ako pakiranje pukne, sterilizirani materijal treba ponovno sterilizirati jer je narušena njegova sterilnost.

Sterilizacija rukavica i ostalih proizvoda od gume. Gumeni proizvodi (rukavice, cijevi i sl.) kontaminirani vegetativnim oblikom mikroba steriliziraju se kuhanjem u 2% otopini natrijevog bikarbonata ili puštanjem vodene pare 30 minuta; kada je kontaminirana mikroflorom koja nosi spore, u autoklavu pod tlakom od 1,5-2 atm. 30 ili 20 minuta. Prije sterilizacije, gumene rukavice se iznutra i izvana posipaju talkom da se ne zalijepe. Između rukavica stavlja se gaza. Svaki par rukavica posebno se zamota u gazu iu tom obliku se stavlja u kutije.

Sterilizacija kultura patogenih mikroba. Epruvete i čašice s mikrobnim kulturama koje nisu potrebne za daljnji rad stavljaju se u metalni spremnik, zatvara se poklopac i šalje na sterilizaciju. Kulture patogenih mikroba, vegetativnih oblika, ubijaju se u autoklavu 30 minuta pri tlaku od 1 atm. Isporuku spremnika za sterilizaciju u autoklav vrši posebno određena osoba uz potpis. Režim sterilizacije bilježi se u posebnom dnevniku. Prilikom uništavanja kultura mikroba I. i II. skupine patogenosti, kao i materijala kontaminiranog ili sumnjivog na kontaminaciju uzročnicima iz tih skupina, spremnici s otpadnim materijalom prenose se na metalne posude s visokim stranicama u prisutnosti osobe u pratnji ovlaštene za rad sa zaraznim materijalom.

Vrste sterilizacije

Sterilizacija kuhanjem. Sterilizacija prokuhavanjem provodi se u sterilizatoru. U sterilizator se ulijeva destilirana voda jer voda iz slavine stvara kamenac. (Stakleni predmeti potapaju se u hladnu vodu, metalni u vruću vodu uz dodatak natrijevog bikarbonata). Predmeti koji se steriliziraju kuhaju se na laganoj vatri 30-60 minuta. Početkom sterilizacije smatra se trenutak kada voda zavrije u sterilizatoru. Na kraju kuhanja sterilnom pincetom uzimaju se instrumenti koji se kuhaju zajedno s ostalim predmetima.

Sterilizacija suhom toplinom. Sterilizacija suhom toplinom provodi se u Pasteur-ovoj peći. Materijal pripremljen za sterilizaciju stavlja se na police tako da ne dolazi u dodir sa stjenkama. Kabinet se zatvori i zatim se uključi grijanje. Trajanje sterilizacije na temperaturi od 150°C je 2 sata, na 165°C – 1 sat, na 180°C – 40 minuta, na 200°C – 10-15 minuta (na 170°C papir i vata se okreću). žuti, a na višim temperaturama pougljeni). Početkom sterilizacije smatra se trenutak kada temperatura u pećnici dosegne željenu visinu. Na kraju perioda sterilizacije, pećnica se isključuje, ali se vrata ormarića ne otvaraju dok se potpuno ne ohlade, jer hladan zrak koji ulazi u ormarić može uzrokovati stvaranje pukotina na vrućem posuđu.

Sterilizacija parom pod pritiskom. Sterilizacija parom pod tlakom provodi se u autoklavu. Autoklav se sastoji od dva kotla umetnuta jedan u drugi, kućišta i poklopca. Vanjski kotao naziva se vodeno-parna komora, unutarnji kotao naziva se sterilizacijska komora. Para se stvara u vodoparnom kotlu. Materijal koji se sterilizira stavlja se u unutarnji kotao. Na vrhu kotla za sterilizaciju postoje male rupice kroz koje prolazi para iz vodeno-parne komore. Poklopac autoklava je hermetički pričvršćen na kućište. Osim navedenih glavnih dijelova, autoklav ima niz dijelova koji reguliraju njegov rad: manometar, vodomjerno staklo, sigurnosni ventil, odvodni, zračni i kondenzacijski ventil. Manometar se koristi za određivanje tlaka koji se stvara u sterilizacijskoj komori. Normalni atmosferski tlak (760 mm Hg) uzima se kao nula, stoga je u autoklavu u stanju mirovanja igla manometra na nuli. Postoji određeni odnos između očitanja manometra i temperature (Tablica 2).

Tablica 2.

Odnos između očitanja manometra i temperature vrenja vode

Crvena crta na skali manometra određuje maksimalni dopušteni radni tlak u autoklavu. Sigurnosni ventil služi za zaštitu od prekomjernog porasta tlaka. Postavljen je na zadani tlak, odnosno tlak na kojem se mora izvršiti sterilizacija, a kada igla manometra prijeđe crtu, ventil autoklava se automatski otvara i ispušta višak pare, čime se usporava daljnji porast tlaka.

Na bočnoj stijenci autoklava nalazi se vodomjerno staklo koje pokazuje razinu vode u kotlu za vodu i paru. Na staklenoj cijevi vodomjera postoje dvije vodoravne crte - donja i gornja, koje označavaju dopuštenu donju, odnosno gornju razinu vode u parnoj komori. Zračni ventil je dizajniran za uklanjanje zraka iz sterilizacijske i vodeno-parne komore na početku sterilizacije, jer zrak, kao loš vodič topline, remeti režim sterilizacije. Na dnu autoklava nalazi se slavina za kondenzaciju koja oslobađa sterilizacijsku komoru od kondenzata koji nastaje tijekom perioda zagrijavanja steriliziranog materijala.

Pravila za rad s autoklavom. Prije početka rada pregledajte autoklav i kontrolnu opremu. U autoklavima s automatskom regulacijom pare, strelice na električnom vakuumometru vodeno-parne komore postavljene su u skladu s načinom sterilizacije: donja strelica je postavljena na 0,1 atm. donji, gornji - za 0,1 atm. iznad radnog tlaka, vodeno-parna komora se napuni vodom do gornje oznake mjernog stakla. Za vrijeme punjenja vodom, ventil na cijevi kroz koju para ulazi u komoru je otvoren kako bi se omogućio slobodan izlazak zraka iz kotla. Komora za sterilizaciju autoklava je napunjena materijalom koji se sterilizira. Nakon toga, poklopac (ili vrata) autoklava je zatvoren, čvrsto pričvršćen središnjom bravom ili zasunima; da biste izbjegli izobličenje, vijke zavrnite unakrsno (duž promjera). Zatim uključite izvor grijanja (električna struja, para), zatvorite ventil na cijevi koja povezuje izvor pare s komorom za sterilizaciju. S početkom stvaranja pare i stvaranjem tlaka u vodeno-parnoj komori provodi se pročišćavanje (uklanjanje zraka iz kotla za sterilizaciju). Način uklanjanja zraka određen je dizajnom autoklava. Isprva zrak izlazi u odvojenim dijelovima, zatim se pojavljuje glatki, kontinuirani mlaz pare, što ukazuje da je zrak potpuno istisnut iz sterilizacijske komore. Nakon uklanjanja zraka, slavina se zatvara, au sterilizacijskoj komori počinje postupno povećanje tlaka.

Početkom sterilizacije smatra se trenutak kada igla manometra pokaže namješteni tlak. Nakon toga se smanjuje intenzitet zagrijavanja kako bi tlak u autoklavu ostao na istoj razini potrebno vrijeme. Na kraju vremena sterilizacije zagrijavanje se zaustavlja. Zatvorite ventil u cjevovodu koji dovodi paru u komoru za sterilizaciju i otvorite ventil na kondenzacijskoj (donjoj) cijevi kako biste smanjili tlak pare u komori. Nakon što igla manometra padne na nulu, polako olabavite stezne uređaje i otvorite poklopac autoklava.

Temperatura i trajanje sterilizacije određeni su kvalitetom materijala koji se sterilizira i svojstvima mikroorganizama kojima je zaražen.

Kontrola temperature u sterilizacijskoj komori provodi se povremeno pomoću bakterioloških testova. Biotestove proizvode bakteriološki laboratoriji Centra za osjetljive znanosti. Ako ovi testovi nisu prošli, provjerava se tehničko stanje autoklava.

Sterilizacija strujom vodene pare. Sterilizacija s protočnom parom provodi se u Kochovom aparatu s protočnom parom ili u autoklavu s odvrnutim poklopcem i otvorenim izlaznim ventilom. Kochov aparat je metalni šuplji cilindar s dvostrukim dnom. Prostor između gornje i donje donje ploče je 2/3 ispunjen vodom (postoji slavina za ispuštanje preostale vode nakon sterilizacije). Poklopac uređaja ima rupu u sredini za termometar i nekoliko malih rupa za izlazak pare. Materijal koji se sterilizira labavo se stavlja u komoru uređaja kako bi se osigurao maksimalan kontakt s parom. Početkom sterilizacije smatra se vrijeme od trenutka kada voda proključa i para uđe u sterilizacijsku komoru. U aparatu s fluidnom parom uglavnom se steriliziraju hranjivi mediji čija se svojstva mijenjaju na temperaturama iznad 100°C. Sterilizaciju protočnom vodenom parom potrebno je ponoviti jer jednokratno zagrijavanje na temperaturi od 100°C ne osigurava potpunu dezinfekciju. Ova metoda se naziva frakcijska sterilizacija: sterilizirani materijal se tretira s tekućom parom 30 minuta dnevno tijekom 3 dana. U razmacima između sterilizacija materijal se drži na sobnoj temperaturi kako bi spore proklijale u vegetativne oblike koji ugibaju tijekom naknadnog zagrijavanja.

Tindalizacija. Tyndalizacija je frakcijska sterilizacija primjenom temperatura ispod 100°C, koju je predložio Tyndall. Materijal koji se sterilizira zagrijava se u vodenoj kupelji opremljenoj termostatom jedan sat na temperaturi od 60-65°C tijekom 5 dana ili na 70-80°C tijekom 3 dana. U razmacima između zagrijavanja tretirani materijal se drži na temperaturi od 25°C kako bi spore proklijale u vegetativne oblike koji naknadnim zagrijavanjem ugibaju. Tindalizacija se koristi za defertilizaciju hranjivih medija koji sadrže proteine.

Mehanička sterilizacija pomoću bakterijskih ultrafiltera. Bakterijski filtri služe za oslobađanje tekućine od bakterija koje se u njoj nalaze, kao i za odvajanje bakterija od virusa, faga i egzotoksina. Bakterijski filteri ne zadržavaju viruse, pa se ultrafiltracija ne može smatrati sterilizacijom u prihvaćenom značenju te riječi. Za izradu ultrafiltera koriste se fino porozni materijali (kaolin, azbest, nitroceluloza itd.) koji mogu uhvatiti bakterije.

Azbestni filteri (Seitz filteri) su azbestne ploče debljine 3-5 mm i promjera 35 i 140 mm za filtriranje malih i velikih količina tekućine. Kod nas se azbestni filtri proizvode u dvije marke: “F” (filtrirajući), koji zadržavaju suspendirane čestice, ali propuštaju bakterije, i “SF” (sterilizirajući), gušći, zadržavajuće bakterije. Prije upotrebe azbestni filtri se montiraju u filtarske uređaje i zajedno s njima steriliziraju u autoklavu. Azbestni filteri se koriste jednokratno. Membranski ultrafilteri izrađeni su od nitroceluloze i bijeli su diskovi promjera 35 mm i debljine 0,1 mm.

Bakterijski filteri se razlikuju po veličini pora i označeni su serijskim brojevima (Tablica 3).

Tablica 3.

Bakterijski filteri

Neposredno prije upotrebe membranski filteri se steriliziraju kuhanjem. Filtri se stave u destiliranu vodu, zagrijanu na temperaturu od 50-60°C, da se ne uvrnu, i kuhaju na laganoj vatri 30 minuta, uz 2-3 puta mijenjanje vode. Kako bi se izbjegla oštećenja, sterilizirani filteri se iz sterilizatora vade flambiranom i ohlađenom pincetom s glatkim vrhovima.

Za filtriranje tekućina, bakterijski filtri se postavljaju u posebne filtarske uređaje, posebno Seitz filtar.

Sastoji se od 2 dijela: gornjeg, u obliku cilindra ili lijevka, i donjeg potpornog dijela aparata, s tzv. filter je postavljen. Potporni dio aparature ima oblik lijevka, čiji se suženi dio nalazi u gumenom čepu grla Bunsenove tikvice. U radnom stanju, gornji dio uređaja je fiksiran na donji dio vijcima. Prije početka filtracije, spojevi različitih dijelova instalacije pune se parafinom kako bi se stvorila brtva. Odvodna cijev tikvice spojena je gumenom cijevi debelih stijenki na vodenu, uljnu ili biciklističku pumpu. Nakon toga se filtrirana tekućina ulije u cilindar ili lijevak aparata i uključi pumpa, stvarajući vakuum u prihvatnoj posudi. Kao rezultat nastale razlike tlaka, filtrirana tekućina prolazi kroz pore filtera u prijemnik. Mikroorganizmi ostaju na površini filtera.

Priprema razmaza

Za proučavanje mikroorganizama u obojenom obliku, razmaz se napravi na stakalcu, osuši, fiksira i zatim oboji.

Ispitni materijal se raspoređuje u tankom sloju po površini dobro odmašćenog predmetnog stakla.

Brisevi se pripremaju iz mikrobnih kultura, patološkog materijala (sputum, gnoj, urin, krv i dr.) i iz organa lešina.

Tehnika pripreme razmaza određena je prirodom materijala koji se proučava.

Izrada razmaza iz mikrobnih kultura s tekućom hranjivom podlogom i iz tekućeg patološkog materijala (urin, cerebrospinalna tekućina i dr.). Mala kap ispitivane tekućine se bakterijskom petljom nanese na predmetno staklo i kružnim pokretima petlje se rasporede u ravnomjernom sloju u obliku kruga promjera novčića.

Priprema krvnih razmaza. Kap krvi se nanosi na predmetno staklo, bliže jednom od njegovih krajeva. Drugo - brušeno staklo, koje treba biti uže od predmetnog stakla, stavlja se na prvo pod kutom od 45° i prinosi kapi krvi dok ne dođe u dodir s njom. Nakon što se krv razlila po brušenom rubu, staklom se klizi s desna na lijevo, ravnomjerno raspoređujući krv u tankom sloju po cijeloj površini stakla. Debljina poteza ovisi o kutu između stakala: što je kut oštriji, potez je tanji. Pravilno pripremljen bris ima svijetloružičastu boju i jednaku debljinu u cijelosti.

Priprema guste kapljice. Kap krvi nanese se na sredinu stakalca pomoću Pasteurove pipete ili se staklo nanese izravno na kap krvi koja strši. Krv nanesena na staklo razmazuje se bakterijskom petljom tako da promjer dobivene mrlje odgovara veličini kovanice od penija. Staklo se ostavi u vodoravnom položaju dok se krv ne osuši. Krv u "debeloj kapi" raspoređena je neravnomjerno, tvoreći neravni rub.

Priprema razmaza od viskoznog materijala (ispljuvak, gnoj). Sputum ili gnoj naneseni na stakalce bliže uskom rubu prekrivaju se drugim stakalcem. Čaše su lagano pritisnute jedna na drugu.

Nakon toga se slobodni krajevi stakla hvataju prstima 1 i 2 obje ruke i pomiču u suprotnim smjerovima tako da pri pomicanju oba stakla čvrsto prianjaju jedno uz drugo. Rezultat su razmazi s ravnomjerno raspoređenim materijalom koji zauzima veliko područje.

Izrada razmaza iz kultura s čvrstih hranjivih podloga. U sredinu čistog, dobro namazanog stakalca stavi se kap vode, au nju se stavi bakterijska petlja s malom količinom mikrobne kulture koja se proučava, tako da kap tekućine postane lagano zamućena. Nakon toga se višak mikrobnog materijala na omči spali u plamenu i razmaz se pripremi prema gore opisanoj metodi.

Izrada razmaza iz organa i tkiva. U svrhu dezinfekcije, površina organa se kauterizira zagrijanim čeljustima pincete, na tom mjestu se napravi rez i iz dubine se šiljastim škarama izrezuje komadić tkiva koji se stavlja između dva predmetna stakla. . Zatim postupite na isti način kao kod pripreme razmaza od gnoja i sputuma. Ako je tkivo organa gusto, tada se iz dubine reza napravi struganje skalpelom. Materijal dobiven struganjem se skalpelom ili bakterijskom petljom raspoređuje u tankom sloju po površini stakla.

Za proučavanje relativnog položaja elemenata tkiva i mikroorganizama u njemu, izrađuju se razmazi otisaka prstiju. Da bi se to učinilo, komadić tkiva izrezan iz sredine organa uhvati se pincetom i nekoliko puta uzastopno nanese izrezanom površinom na predmetno staklo, čime se dobije niz mrlja-otisaka.

Sušenje i fiksiranje razmaza. Razmaz pripremljen na stakalcu suši se na zraku i fiksira nakon potpunog sušenja. Kada se fiksira, razmaz se fiksira na površini stakalca, pa se mikrobne stanice ne isperu tijekom naknadnog bojenja preparata. Osim toga, mrtve mikrobne stanice bolje se boje od živih.

Postoji fizička metoda fiksacije, koja se temelji na učinku visoke temperature na mikrobnu stanicu, i kemijska metoda, koja uključuje korištenje sredstava koja uzrokuju koagulaciju proteina. Nemojte snimati razmaze koji sadrže patogene skupine patogenosti I–II iznad plamena.

Fizička metoda fiksacije. Predmetno stakalce s preparatom uzima se pincetom ili prstima I i II desne ruke za rebra s potezom prema gore i lagano se pomiče 2-3 puta preko gornjeg dijela plamena plamenika. Cijeli postupak fiksacije ne bi trebao trajati više od 2 sekunde. Pouzdanost fiksacije provjerava se sljedećom jednostavnom tehnikom: nerazmazana površina predmetnog stakla nanese se na stražnju površinu lijeve ruke. Kada je razmaz pravilno fiksiran, staklo bi trebalo biti vruće, ali ne izazivati ​​osjećaj peckanja.

Metoda kemijske fiksacije. Za fiksiranje razmaza također se koriste kemikalije i spojevi navedeni u tablici 4.

Tablica 4.

Supstance za kemijsku fiksaciju

Predmetno staklo s osušenim razmazom uroni se u bočicu s fiksatorom i potom osuši na zraku.

Potezi bojanja

Tehnika slikanja razmazom. Za bojenje mrlja koriste se otopine boja ili papir za bojanje, kako je predložio A.I. Sinev. Jednostavnost pripreme, laka upotreba, kao i mogućnost čuvanja papira s tintom na neodređeno dugo vrijeme bili su osnova za njihovu široku upotrebu u raznim metodama bojanja.

Bojanje poteza s tuš papirom. Na osušeni i fiksirani preparat nakapa se nekoliko kapi vode i stave papirići u boji dimenzija 2´2 cm.Papir za cijelo vrijeme bojenja treba ostati vlažan i čvrsto prianjati uz površinu stakla. Prilikom sušenja papir se dodatno navlaži vodom. Trajanje bojenja razmaza određeno je metodom bojenja. Po završetku bojenja papir se pažljivo ukloni pincetom, a razmaz ispere vodom iz slavine i osuši na zraku ili filtar papirom.

Bojenje razmaza otopinama boja. Na osušeni i fiksirani preparat pipetom se nanosi boja u tolikoj količini da prekrije cijeli razmaz. Kod bojenja razmaza koncentriranim otopinama bojila (Ziehl karbol fuksina, karbolnog encijana ili kristal violeta) bojenje se vrši preko filter papira koji zadržava čestice boje: na fiksirani razmaz stavi se traka filter papira i na nju se izlije otopina boje. .

Za mikroskopski pregled boje se pripremljeni razmazi, osušeni i fiksirani. Bojanje može biti jednostavno i složeno. Jednostavno bojanje uključuje nanošenje jedne boje na razmaz određeno vrijeme. Najčešće se za jednostavno bojenje koriste alkohol-voda (1:10) Pfeiffer fuksin, Lefflerovo metilensko plavo i safranin. Eozin, kao i kisela boja, koristi se samo za bojenje citoplazme stanica i nijansiranje pozadine. Kiseli fuksin potpuno je neprikladan za bojenje bakterija.

fotografija sa stranice lentachel.ru

Prije samo stotinu godina kontaminacija tijekom znanstvenih istraživanja smatrala se gotovo neizbježnom. Mnogi znanstvenici izlažu svoje tijelo smrtnom riziku proučavajući mikrobe i bakterije o čijoj prirodi malo znaju. Danas je većina opasnih mikroorganizama koji nas okružuju opisana i proučena, štoviše, za bakteriološke laboratorije osigurani su posebni medicinski proizvodi čija uporaba s 99% vjerojatnosti štiti istraživače od bilo kakvih profesionalnih rizika.

Svi predmeti s kojima rade djelatnici bakteriološkog laboratorija zasićeni su patogenom mikroflorom. Kako bi se održalo zdravo unutarnje okruženje i izbjegao izravan kontakt s kontaminiranim materijalom, koriste se namještaj, odjeća i posuđe s poboljšanim zaštitnim i antimikrobnim svojstvima.

Hermetički zatvoreni stakleni i metalni ormari i kutije, laboratorijski stolovi prikladni za dezinfekciju, sterilizaciju i opremu za autoklaviranje te zaključani hladnjak su predmeti koji osiguravaju sigurnost ljudi koji provode istraživanja na zaraženim uzorcima.

Svi spremnici koji se koriste za čuvanje uzoraka: tikvice, graduirane čaše hermetički su zatvoreni kako bi se izbjeglo širenje mikroba u laboratorijskom zraku.

Za izradu spremnika koristi se posebno nelomljivo staklo ili plastika visoke čvrstoće. Dvostruke stijenke, poseban stabilan oblik dna, gumeni elementi na poklopcima, posudama i kivetama stvaraju najbolje uvjete za izolaciju tako opasnih susjeda kao što su meningokoki, streptokoki, stafilokoki, bacili i klostridije.

Prije početka istraživanja osoblje oblači posebnu odjeću: zaštitnu haljinu, masku, naočale. Za rad s vrlo opasnim tvarima koriste se gumirane pregače ili posebne haljine s impregnacijom koja odbija vlagu.

Ispravna pravovremena obrada zraka ultraljubičastim ozračivačima i baktericidnim svjetiljkama, korištenje provjerenih modifikacija praonice, opskrba svih zaposlenika punim kompletom zaštitne odjeće opće je prihvaćen standard od kojeg je odstupanje administrativno, a u slučaju težih posljedica , kazneno kažnjiv.

Sveobuhvatna opremljenost i provedba svih mjera opreza pomaže u očuvanju zdravlja zaposlenika, smanjenju profesionalnog morbiditeta i osiguravanju visoke istraživačke produktivnosti: primijećeno je da uporaba pouzdane, provjerene zaštitne opreme smanjuje tjeskobu i potiče brže i učinkovitije djelovanje.

Bakteriološki laboratorij

Bakteriološki laboratorij izdvojen je kao samostalni odjel 1996. godine.

Voditelj - kandidat medicinskih znanosti, bakteriolog najviše kategorije Polikarpova Svetlana Veniaminovna

PRIORITETNA PODRUČJA DJELOVANJA

U bakteriološkom laboratoriju provode se sljedeće vrste analiza:

Bakteriološka pretraga krvi (hemokultura) i likvora;
- bakteriološka pretraga sputuma, aspirata traheje, vode za ispiranje bronha;
- bakteriološko ispitivanje iscjedka iz različitih žarišta upale: tonzilitis, faringitis, otitis, sinusitis itd.;
- bakteriološka pretraga punktata, izljeva, eksudata;
- bakteriološko ispitivanje iscjetka iz sluznice ždrijela i nosa na uvjetno patogenu mikrofloru;
- bakteriološki pregled urina za određivanje stupnja bakteriurije;
- bakteriološka pretraga genitalnog sekreta na oportunističku mikrofloru;
- bakteriološka pretraga konjunktivnog iscjetka;
- pregled fecesa na patogenu crijevnu floru;
- bakteriološki pregled stolice za disbakteriozu;
- bakteriološka pretraga majčinog mlijeka;
- kvalitativno određivanje antigena streptokoka skupine B;
- kvalitativno određivanje antigena Helicobacter pylori u ljudskom izmetu;
- kvalitativno određivanje antigena toksina A i B Clostridium difficile u ljudskom izmetu;
- procjena osjetljivosti/rezistentnosti izoliranih mikroorganizama na antibiotike.

DOSTIGNUĆA

U bakteriološkom laboratoriju provode se istraživanja za izolaciju, identifikaciju i određivanje osjetljivosti na antibiotike patogenih i uvjetno patogenih mikroorganizama izoliranih iz različitih biomaterijala.

U rad laboratorija, temeljen na načelima klasične kliničke mikrobiologije, uvedene su nove metode istraživanja koje se temelje na najnovijim dostignućima molekularno genetičkih tehnologija.

Bakteriološki laboratorij provodi mikrobiološke studije koje zadovoljavaju suvremene ruske i međunarodne standarde.

Laboratorijsko osoblje svake godine obavi bakteriološke pretrage više od 10.000 pacijenata hospitaliziranih na bolničkim odjelima, 6.000 pacijenata i novorođenčadi u rodilištu, više od 5.000 pacijenata CDC-a i klinika Istočnog upravnog okruga, obavljajući više od 45.000 mikrobioloških pretraga po godina.

Na temelju laboratorija razvijena je i stalno se modernizira „Automatska radna stanica za mikrobiologa, epidemiologa i kemoterapeuta“ koja uključuje dva programa: MICROB-AUTOMAT i MIKROBIOLOŠKI MONITORING SUSTAV „MICROB“ (SMM). Programi nam omogućuju rješavanje glavnih zadataka bolničke mikrobiološke službe: kontinuirano praćenje mikrobnog krajolika i razine njegove rezistencije na antibiotike radi propisivanja odgovarajuće antibiotske terapije i pravodobnog otkrivanja slučajeva infekcija povezanih sa zdravstvenom skrbi (HAI).

Radi kvalitetnog mikrobiološkog istraživanja u laboratorij se uvode:

• Sustav upravljanja kvalitetom prema standardu GOST R ISO 15189 -15

“Medicinski laboratoriji. Posebni zahtjevi za kvalitetu i osposobljenost«;

• Osnove MRŠAV tehnologije (Lean manufacturing) - pristupi upravljanju laboratorijem usmjereni na poboljšanje kvalitete rada smanjenjem gubitaka: materijalnih, financijskih, vremenskih;
• Sustav 5S- alat lean proizvodnje - organiziranje radnog prostora u svrhu stvaranja optimalnih uvjeta za obavljanje poslova, održavanje reda, čistoće, urednosti, ušteda vremena i energije.

Od 2014. godine laboratorij sudjeluje u međunarodnom programu praćenja rezistencije na antibiotike u zemljama srednje Azije i istočne Europe u organizaciji WHO(UK NEQAS) Laboratorij sudjeluje u vanjskoj procjeni kvalitete laboratorijskih istraživanja kao stručni laboratorij u sekciji “Klinička mikrobiologija” (FSVOK).

Bakteriolozi već dugi niz godina provode cikluse poboljšanja certifikacije „Suvremene metode istraživanja u kliničkoj mikrobiologiji” u bolnici za radnike sa srednjim medicinskim obrazovanjem iz medicinskih ustanova u Moskvi.

VISOKA TEHNOLOGIJA

• Uvođenje molekularno-genetičkih metoda u dijagnostiku zaraznih bolesti - metoda lančane reakcije polimerazom (PCR) u realnom vremenu;

• određivanje glavnih mehanizama razvoja i širenja rezistencije bakterija na antibakterijske lijekove pomoću fenotipskih i genotipskih metoda;

• korištenje imunokromatografskih ekspresnih metoda (IMCT) za etiološku dijagnostiku uzročnika zaraznih i upalnih bolesti;

• izrada i implementacija elektroničkog modula stručnih mišljenja za bakteriologe, ordinirajuće liječnike, kliničke farmakologe za tumačenje rezultata određivanja osjetljivosti mikroorganizama na antimikrobne lijekove i identificiranje mehanizama rezistencije.

ZNANSTVENA DJELATNOST

Tijekom postojanja Zavoda u laboratoriju su izrađene 2 doktorske disertacije. Zaposlenici odjela redovito izlažu na međunarodnim, sveruskim, gradskim kongresima, konferencijama, simpozijima i seminarima, te redovito objavljuju u znanstvenim i praktičnim publikacijama.

Bakteriološki laboratorij surađuje:

• FSBI "Savezni istraživački centar za epidemiologiju i mikrobiologiju"

ih. Počasni akademik N. F. Gamaleya Ministarstva zdravstva Ruske Federacije";

• FGAU "Znanstveni centar za dječje zdravlje" Ministarstva zdravstva Ruske Federacije;
• Savezna državna proračunska ustanova "Centar za medicinska genetička istraživanja" Ruske akademije medicinskih znanosti;
• Savezna proračunska ustanova Središnji istraživački institut za epidemiologiju Rospotrebnadzora;
• FBUN Moskovski istraživački institut za epidemiologiju i mikrobiologiju nazvan po. G.N. Gabričevski Rospotrebnadzor;
• Odjel za reproduktivnu medicinu i kirurgiju Moskovskog državnog medicinskog i stomatološkog sveučilišta nazvanog po A.I. Evdokimovu (MGMSU);

Znanstveni rad odvija se u sljedećim područjima:

• mikrobiološku dijagnostiku i prevenciju infekcija povezanih sa zdravstvenom skrbi (HAI). Mikrobna ekologija u zdravstvenim ustanovama.
• osobitosti mikrobiološke dijagnostike infekcija donjeg dišnog sustava u bolesnika s cističnom fibrozom;
• proučavanje mehanizama rezistencije enterobakterija na antimikrobne lijekove;
• razvoj algoritama za brzu dijagnostiku nositeljstva streptokoka skupine B u trudnica i novorođenčadi.

ČLANCI, KONFERENCIJE

2016

LABORATORIJSKA OPREMA

Trenutno je bakteriološki laboratorij opremljen suvremenom opremom:

• Automatski analizator hemokulture VersaTREK(TREK Diagnostic Systems) - mogućnost dijagnosticiranja sepse u najkraćem mogućem vremenu - 90% pozitivnih rezultata otkriva se unutar prva 24 sata. Maksimalno vrijeme za protokol istraživanja je 5
• Bakteriološki analizator za identifikaciju i određivanje osjetljivosti mikroorganizama Feniks 100(BD) - prosječno vrijeme za dobivanje rezultata identifikacije je 6-8 sati, prosječno vrijeme za dobivanje rezultata antimikrobne osjetljivosti je 12-16 sati.
• Poluautomatski analizator iEMSČitač(ThermoLabsystems), koji omogućuje ne samo identifikaciju i određivanje osjetljivosti mikroorganizama, već i rješavanje mnogih praktičnih i znanstveno-praktičnih problema: određivanje mikrobne kontaminacije urina i drugih biomaterijala, provođenje laboratorijskog praćenja učinkovitosti antibakterijske terapije, procjena baktericidne aktivnosti krvnog seruma, te istraživanje kinetičkih modela rasta mikroba.

U rad laboratorija uveden je laboratorijski informacijski sustav ALISA, svako radno mjesto bakteriologa je informatizirano.

KOLEKTIVNO

Pivkina Nadežda Vasiljevna

Liječnik-bakteriolog najviše kategorije, ima stručnu prekvalifikaciju u specijalnosti "Bakteriologija". Član Međunarodnog udruženja kliničkih mikrobiologa i antimikrobnih kemoterapeuta (IACMAC), član Federacije laboratorijske medicine (FLM). Koautor je brojnih znanstvenih članaka o problemima kliničke mikrobiologije. Radno iskustvo u specijalnosti od 1992. godine.

Timofeeva Olga Gennadievna

Bakteriolog najviše kategorije, završila je pripravnički staž iz specijalnosti "Bakteriologija" i prošla usavršavanje na temu "PCR analiza u kliničkim dijagnostičkim laboratorijima". Član Federacije laboratorijske medicine (FLM). Trenutno radi na izradi doktorske disertacije. Ima publikacije o problemima kliničke mikrobiologije. Radno iskustvo u specijalnosti od 1996. godine.

Bondarenko Natalija Aleksandrovna

Bakteriolog I. kategorije, član Saveza laboratorijske medicine (FLM). Koautor je brojnih znanstvenih članaka o problemima kliničke mikrobiologije. Radno iskustvo u specijalnosti od 1988.

Balina Valerija Vladimirovna

Bakteriolog, liječnik kliničke laboratorijske dijagnostike. Odradila je pripravnički staž iz specijalnosti “Kliničko-laboratorijska dijagnostika” i stručnu prekvalifikaciju iz specijalnosti “Bakteriologija”. Položio usavršavanje na temu “Molekularno genetičke metode u dijagnostici zaraznih bolesti”. Član Federacije laboratorijske medicine (FLM). Radno iskustvo u specijalnosti od 2013.

Medicinsko osoblje

U laboratoriju su zaposleni:

• 1 medicinski tehnolog
• 1 medicinski laborant
• 5 medicinskih laboranata
• 1 laborant
• Svi zaposlenici imaju najvišu kvalifikacijsku kategoriju.

Stranica 5 od 91

Za provođenje mikrobioloških istraživanja postoje bakteriološki laboratoriji u bolnicama i klinikama ili neovisno o njima. Za istraživanje primaju različite materijale dobivene od bolesnih ljudi (ispljuvak, urin, gnoj, izmet, krv, cerebrospinalna tekućina itd.). Osim toga, postoje i sanitarni i bakteriološki laboratoriji u kojima se voda, zrak i prehrambeni proizvodi podvrgavaju bakteriološkoj kontroli.
Velika je uloga bakterioloških laboratorija iu prevenciji zaraznih bolesti. Neki ljudi nakon preboljele zarazne bolesti (trbušni tifus, dizenterija, difterija itd.) nastavljaju oslobađati patogene mikrobe u okoliš. To su takozvani nosioci bakterija. Nositelji bakterija nalaze se i među zdravim ljudima. Bakteriološki laboratoriji otkrivanjem takvih nositelja bakterija pomažu zdravstvenim vlastima u provođenju niza preventivnih mjera.
Voda i prehrambeni proizvodi kontaminirani patogenim mikroorganizmima mogu izazvati epidemije (masovne bolesti) trbušnog tifusa, kolere i dr., zbog čega je važna svakodnevna sanitarna i bakteriološka kontrola kakvoće vode za piće, mlijeka i drugih proizvoda.
Bakteriološki laboratorij mora raspolagati s najmanje tri prostorije: 1) sobicom - upisnicom za prijem i izdavanje pretraga; 2) srednje kuhanje i pranje - za pripremu hranjivih medija i pranje posuđa; 3) laboratorij za bakteriološka istraživanja. Preporučljivo je imati prostoriju za držanje pokusnih životinja (vivarij). Svaka prostorija treba imati odgovarajući namještaj (kuhinjski i laboratorijski stolovi, razni ormari, taburei i sl.).
Slijedi popis najvažnijih predmeta potrebnih za svakodnevni laboratorijski rad. Svrha njihove uporabe, način rukovanja njima, kao i princip njihovog dizajna opisani su u relevantnim dijelovima tečaja.
Optički uređaji. Biološki mikroskop s imerzijskim sustavom, povećala, aglutinoskop.
Uređaji za sterilizaciju i grijanje. Autoklav, aparati za fluidnu paru, sušionica, Seitz filteri, termostati, sterilizatori za instrumente.
Oprema za medije za kuhanje. Lijevak za vruće filtriranje, lijevak za ulijevanje medija, vodena kupelj, posude različitih veličina, tarirane vage s utezima, stroj za mljevenje mesa, metalni i drveni stalci za filtriranje.
Alati. Skalpeli raznih oblika i vrsta: škare, ravne, zakrivljene, tupog vrha, crijevne škare, anatomske i kirurške pincete, šprice.
Stakleni predmeti. Predmetna stakla, stakalca s jažicom, pokrovna stakalca, bakteriološke epruvete, kratke epruvete za serološke reakcije (aglutinaciju), centrifuge, Heidepreichove zdjelice*, staklene epruvete i štapići, graduirane pipete od 1, 2, 5, 10 ml, Pasteurove pipete, staklo boce s bojom s pipetama, staklene čaše i tikvice različitih veličina, cilindri različitih veličina, lijevci za filtriranje itd.

*Do sada se kod većine mikrobiologa iu udžbenicima posude za dobivanje izoliranih kolonija mikroba nazivaju Petrijevim, a ne Heidenreichovim zdjelicama, što ne odgovara pravom stanju stvari. Čaše je u laboratorijsku praksu prvi uveo ruski mikrobiolog Heidenreich.

Razni predmeti. Bakterijska petlja, platinasta žica, gumene cijevi, ručne rogaste vage s utezima, stalci (drveni, metalni) za epruvete, termometri, kavezi za životinje, uređaji za fiksiranje životinja, centrifuga.
Kemikalije, boje, materijali za medije itd. Agar-agar, želatina, bijela u listićima, ulje za uranjanje, filter papir, upijajuća i obična vata, gaza, etilni alkohol, anilinske boje (magenta, gentian i kristal violet, vesuvin, metilen plava, neutralna, safranin itd.), Giemsa boja, kiseline (dušična, klorovodična, sumporna, karbolna, fosforna, pikrinska, oksalna itd.), lužine (kaustični kalij, kaustična soda, amonijak, soda), soli (kalijev nitrat) , kalijev permanganat, natrijev sulfid, natrijev klorid itd.).

Laboratorijski stol

Za provođenje mikrobioloških istraživanja laborant mora imati odgovarajuće opremljeno radno mjesto. Laboratorijski stol mora imati određenu visinu kako bi ga se lako mikroskopiralo sjedeći za njim (slika 9). Stol po mogućnosti treba prekriti linoleumom, a svako radno mjesto prekriti pocinčanim pladnjem ili staklenim ogledalom. Radno mjesto treba biti opremljeno mikroskopom, stalcima za epruvete i boje, platinastom petljom i iglom za inokulaciju, čašom s mostićem za preparate, podloškom, pješčanim satom, predmetnim i pokrovnim staklima, pipetama, setom boja, filtar papir, alkoholni ili plinski plamenik i staklenku s otopinom za dezinfekciju (lizol, karbolna kiselina, sublimat, kloramin ili lizoform), u koju se za dezinfekciju stavljaju korištena predmetna i pokrovna stakalca, pipete, stakleni štapići itd. Posuđe u koji se mikrobi uzgajaju ne mogu se dezinficirati kemikalijama. Tragovi dezinficijensa na takvom posuđu čine ga naknadno neprikladnim za rast i razmnožavanje mikroorganizama. Posude se nakon upotrebe stavljaju u metalne spremnike ili kante s poklopcem, zatvaraju i steriliziraju u autoklavu. Nakon upotrebe, mali instrumenti (pincete, skalpeli, škare) stavljaju se u sterilizator i kuhaju 30-60 minuta ili se uranjaju u 3-5% sapunsko-karbolnu otopinu kloramina 30-60 minuta.

Riža. 9. Tehnika mikroskopiranja bakterioloških objekata.

Radno mjesto mora biti apsolutno čisto. Neprihvatljivo je da stol bude kontaminiran zaraznim materijalom koji se ispituje (urin, feces, gnoj itd.). U potonjem slučaju, zarazni materijal sa stola može se proširiti na druge okolne predmete i tada je moguća unutarlaboratorijska infekcija. Nakon završenog rada laborant je dužan pospremiti radno mjesto za koje je odgovoran, a radi prevencije staklo na radnom mjestu obrisati komadićem vate navlaženim 5% otopinom karbolne kiseline ili kloramina.

Pravila rada i ponašanja u laboratoriju

Radeći sa zaraznim materijalom, laboratorijski radnici moraju imati na umu mogućnost da se sami zaraze i prenesu zaraznu bolest u svoju obitelj, stan i sl. Stoga moraju biti pažljivi, pažljivi, uredni i pedantni u svom radu.
Pri radu u laboratorijima potrebno je pridržavati se sljedećih pravila:

1. Obavezno je biti u laboratoriju, a još više raditi u njemu, u ogrtaču i marami ili kapici.
2. Ne prelaziti iz jedne laboratorijske prostorije u drugu bez potrebe i koristiti samo predviđeno radno mjesto i opremu.
3. Nemojte jesti niti pušiti u laboratoriju.
4. Pri radu sa zaraznim materijalom i živim kulturama koristiti odgovarajuće alate: pincete, udice, lopatice i druge predmete koji se nakon uporabe moraju uništiti ili učiniti neškodljivima (paljenje na plamenu plamenika, iskuhavanje i sl.). Tekući infektivni materijal usisavajte u pipete ne ustima, već uz pomoć balona, ​​žarulja, prelijevajte tekućinu s infektivnim materijalom iz jedne posude u drugu samo preko nekog spremnika (posude, lavora) u koji se stavlja tekućina za dezinfekciju (otopina karbolne kiseline, Lysol). ) se ulijeva.. Sjetva i presađivanje provodi se spaljivanjem epruveta, spatula, platinastih petlji, pipeta itd. na plamenu plamenika.
5. Ako se posuđe razbije ili se tekućina koja sadrži zarazni materijal ili žive kulture prolije, odmah temeljito dezinficirajte kontaminirano radno područje, odjeću i ruke. Sve to treba učiniti u prisustvu ili pod nadzorom voditelja laboratorija, koji mora biti odmah obaviješten o nezgodi.
6. Sve korištene i nepotrebne predmete i materijal po mogućnosti uništiti (najbolje ih je spaliti ili temeljito neutralizirati u aparatima za sterilizaciju ili tekućinama za dezinfekciju).

Sve predmete koji se dezinficiraju treba sakupiti unutar laboratorija u posebne spremnike, spremnike, kante s poklopcem i sl. i zatvorene prenijeti u autoklav, gdje će isti dan biti dezinficirani. Dostavljanje infektivnog materijala u autoklav i njegovu sterilizaciju moraju nadzirati posebno imenovani odgovorni laboratorijski radnici.

1. Održavajte strogu čistoću i urednost. Dezinficirajte i perite ruke što češće tijekom radnog dana i nakon završetka rada.
2. Laboratorijski radnici podliježu obveznom cijepljenju protiv težih zaraznih bolesti (prije svega protiv crijevnih bolesti).
3. Obvezna je svakodnevna kvantitativna evidencija svih živih usjeva i zaraženih životinja s unosom u posebne dnevnike i knjigovodstvene knjige.
4. Nakon rada sav materijal i kulture potrebne za daljnji rad ostaviti u zaključanom hladnjaku ili sefu, a radno mjesto dovesti u potpuni red.
5. Svakodnevno temeljito čišćenje laboratorijskih prostorija mora se provoditi mokro s tekućinom za dezinfekciju.

Prisutnost raznih bakterija u crijevima smatra se normalnom. Ove bakterije sudjeluju u procesima prerade i asimilacije hrane. Pravilnu probavu i funkcioniranje crijeva dokazuje izmet koji se sastoji od malih čestica bez strukture koje se nazivaju detritus.

Za proučavanje mikrobnog sastava izmeta provodi se analiza spremnika. Ako se broj bakterija poveća, tada osoba doživljava crijevne patologije, bolove u trbuhu raznih vrsta, au izmetu se pojavljuju komadići neprobavljene hrane. Ova studija nam omogućuje da identificiramo uzročnike mnogih bolesti.

Klasifikacija crijevnih bakterija

Međutim, nakon detaljnog proučavanja svrstavaju se u sljedeće skupine:

1. Zdrave bakterije: lakto- i bifidobakterije, Eschecheria. Ovi mikroorganizmi aktiviraju rad crijeva.
2. Oportunistički: enterokoki, kandida, klostridije, stafilokoki. Ti mikroorganizmi pod određenim okolnostima postaju patogeni i sposobni su izazvati razvoj različitih patologija.
3. Patogeni: bacili, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Shingella, Sarcinus. Ova skupina bakterija izaziva razvoj ozbiljnih bolesti.

Postoje razne metode pregleda stolice. Jedna od uobičajenih metoda je analiza bakterija.

Što je test stolice?

Bakteriološki pregled stolice omogućuje vam proučavanje njegovog mikrobnog sastava, kao i određivanje prisutnosti patogena sljedećih bolesti:

• šigeloza;
• dizenterija;
• salmoneloza;
• trbušni tifus;
• kolere i drugih bolesti.

Analiza stolice traje dosta dugo. Studija se provodi prije propisivanja antibiotske terapije.

Indikacije za studiju

Treba istaknuti glavne razloge za davanje testa stolice:

Skatološke studije omogućuju nam identificiranje patologija koje se javljaju u crijevnoj šupljini:

Također je propisan test spremnika za dijagnosticiranje patologija probavnih organa.

Kako se uzima uzorak stolice?

Prije podvrgavanja studiji, pacijent treba biti podvrgnut posebnoj pripremi nekoliko dana.

• zelenilo;
• repa;
• crvena riba;
• rajčice.

Osim toga, mesni proizvodi mogu utjecati na rezultate studije.

U razdoblju pripreme za uzimanje testova potrebno je prestati uzimati antibiotike, protuupalne lijekove i lijekove koji sadrže enzime i željezo.

Prikupljanje materijala za istraživanje mora se obaviti ujutro. Za prikupljanje izmeta koristite sterilnu posudu, koja se može kupiti u ljekarni. Trajanje skladištenja biomaterijala u hladnjaku nije duže od 10 sati.

Kako se provodi istraživanje?

Bakteriološki pregled izmeta omogućuje određivanje fizičkog i kemijskog sastava materijala, njegovih svojstava i prisutnosti patologija. Ova studija pomaže u otkrivanju bakterija u tijelu i promjenama u bioravnoteži.

Skatološka analiza stolice smatra se dopunom bakterijskoj analizi. Ova studija omogućuje procjenu prisutnosti specifičnog mirisa izmeta, njegove konzistencije i gustoće, općeg izgleda te prisutnosti ili odsutnosti mikroorganizama.

Studija uključuje 2 faze:

1. Makroskopska analiza.
2. Mikroskopski.

Mikroskopski pregled otkriva sluz, bjelančevine, povećanu razinu bilirubina, krvne ugruške i jodofilnu floru u stolici. Potonji se formira zahvaljujući aktivnim tvarima koje pretvaraju škrob u glukozu. Otkrivanje jodofilne flore ne ukazuje na infekciju u svim slučajevima. Na razvoj bolesti ukazuje nakupljanje jodnih bakterija uzrokovano vrenjem.

Budući da se djetetovo tijelo ne bori dobro s patogenom florom, takve se bakterije vrlo često dijagnosticiraju u dječjem izmetu.

Danas se koristi metoda sjetve biomaterijala koji se proučava u posebnom okruženju s određenim uvjetima. Stručnjaci utvrđuju sposobnost bakterija da se razmnožavaju i stvaraju kolonije. Da bi se dobili točni rezultati, svi korišteni instrumenti, kao i spremnici s prikupljenim biomaterijalom, moraju biti sterilni.

Patogeni mikroorganizmi proučavaju se za osjetljivost na različite antibakterijske lijekove. Studija se odlikuje visoko točnim rezultatima, prema kojima liječnik može propisati lijekove.

Samo 10% ukupne količine proučavanog materijala može biti patogena mikroflora.

Dekodiranje rezultata

Ispitivanje izmeta omogućuje vam prepoznavanje i određivanje broja bilo koje bakterije. Na temelju dobivenih rezultata liječnik postavlja dijagnozu i propisuje liječenje.

Vrste patogene mikroflore koje se mogu naći u izmetu:

1. E coli. Oni ometaju tjelesnu apsorpciju kalcija i željeza i obično ukazuju na prisutnost glista.
2. Enterobacteriaceae. Najčešće te bakterije uzrokuju razvoj dizenterije i crijevnih infekcija.
3. E. coli sa smanjenom enzimskom aktivnošću ukazuju na stvaranje disbakterioze.
4. Laktoza-negativne bakterije. Uzrokuju smetnje u probavnom procesu i uzrokuju nadutost, žgaravicu, učestalo podrigivanje i osjećaj težine.
5. Hemolitičke bakterije. Oni stvaraju toksine koji negativno utječu na živčani sustav i crijeva. Uzrokuje nastanak alergija.
6. Gljive slične kvascu izazvati razvoj drozd.
7. Klebsiella, izaziva stvaranje gastroenteroloških patologija.
8. Enterokoki, izazvati pojavu zaraznih patologija genitalnih organa, izlučivanja i genitourinarnog sustava.

Tumačenje analize spremnika naznačeno je na obrascima, koji također pokazuju normalne pokazatelje bakterija.

Intestinalna disbioza je vrlo opasna patologija koja uništava zdravu mikrofloru. Ovo stanje dovodi do razvoja dizenterije i stafilokoka. Kako bi se to izbjeglo, preporuča se napraviti analizu stolice za praćenje crijevne bioravnoteže barem jednom godišnje.

Analiza spremnika smatra se pouzdanom studijom koja daje informacije o funkcioniranju njegovih važnih unutarnjih organa: crijeva i želuca. Studija omogućuje pravovremenu identifikaciju patogenih mikroorganizama koji utječu na normalnu mikrofloru. Propisuje se i odraslima i djeci.