Збудник сифілісу. Таксономія

№23 Збудник сифілісу. Таксономія. Характеристики. Мікробіологічна діагностика Лікування.
Treponema palladium; T. entericum
Морфологія: типові трепонеми, що мають 8-12 завитків, руховий апарат – 3 периплазматичні джгутики у кожного полюса клітини. Забарвлення за Грамом не сприймають, по Романівському-Гімзі – слабо рожевого кольору, виявляється імпрегнацією сріблом.
Культуральні властивості: вірулентний штам на пит. середовищах не росте, накопичення культури відбувається шляхом зараження кролика в яєчко. Вірулентні штами культивують на середовищах з мозковою та нирковою тканиною.
Біохімічні властивості: мікроаерофіл
Антигенна структура:складна, володіє специфічним білковим і ліпоїдним антигенами, останній за своїм складом ідентичний кардіоліпіну, екстрагованого з бичачого серця (дифосфадилгліцерин)
Фактори патогенності: у процесі прикріплення беруть участь адгезини, ліпопротеїни беруть участь у розвитку імунопатологічних процесів.
Резистентність: чутливий до висихання, сонячних променів, на предметах зберігається до висихання. За несприятливих умов перетворюється на L-форми і утворює цисти.
Патогенез: Викликають сифіліс. З місця вхідних воріт трепонеми потрапляють до регіональних лімфатичних вузлів, де розмножуються. Далі Т. проникає в кров'яне русло, де прикріплюється до ендотеліоцитів, викликаючи ендартеріїти, що призводять до васкулітів та тканинного некрозу. З кров'ю Т. розноситься по всьому організму, обсідаючи органи: печінку, нирки, кісткову, серцево-судинну, нервову системи.
Імунітет: захисний імунітет не виробляється. У відповідь на антигени збудника розвивається ГЗТ та аутоімунні процеси. Гуморальний імунітет виробляється на ліпоїдний антиген Т. і є титр IgA і IgM.
Мікроскопічне дослідження. Проводять при первинному сифілісі під час появи твердого шанкеру. Матеріал для дослідження: шанкра, що відокремлюється, вміст регіонарних лімфатичних вузлів, з яких готують препарат «роздавлена» крапля і досліджують у темному полі. При позитивному результаті видно тонкі звивисті нитки довжиною 6-14 мкм, що мають 10-12 рівномірних дрібних завитків правильної форми. Для блідої трепонеми характерні маятникоподібні та поступально-згинальні рухи. При розвитку уражень на слизовій оболонці рота при вторинному сифілісі, а також при локалізації твердого шанкеру в порожнині рота доводиться диференціювати бліду трепонему від сапрофітних трепонем, які є представниками нормальної мікрофлори. І тут вирішальне діагностичне значення має виявлення типових трепонем у пунктаті регіонарних лімфатичних вузлів.
Серодіагностика. Реакцію Вассермана ставлять одночасно з 2 антигенами: 1) специфічним, що містить антиген збудника - зруйновані ультразвуком трепонеми; 2) неспецифічним – кардіоліпіновим. Досліджувану сироватку розводять у співвідношенні 1:5 і ставлять РЗК за загальноприйнятою методикою. При позитивній реакції спостерігається затримка гемолізу, при негативній - відбувається гемоліз еритроцитів; Інтенсивність реакції оцінюється відповідно від (+ + + +) До (-). Перший період сифілісу є серонегативним та характеризується негативною реакцією Вассермана. У 50% хворих реакція стає позитивною не раніше ніж через 2-3 тижні після появи твердого шанкеру. У другому та третьому періодах сифілісу частота позитивних реакцій досягає 75-90%. Після проведеного курсу лікування реакція Вассермана стає негативною. Паралельно реакції Вассермана ставиться реакція мікропреципітації з неспецифічним кардіоліпіновим антигеном та досліджуваною інактивованою сироваткою крові або плазмою. У лунку на пластині з плексигласу (або звичайне скло) наносять 3 краплі сироватки і додають 1 краплю кардіоліпінового антигену. Суміш ретельно перемішують та враховують результати. Позитивна реакція сироваткою крові хворого на сифіліс характеризується утворенням і випаданням пластівців різної величини; при негативному результаті спостерігається рівномірна легка опалесценція.
РІФ – реакція непрямої імунофлюоресценції – є специфічною при діагностиці сифілісу. Як антиген використовують суспензію тканинних трепонем. Використовується реакція РІФ_200. Сироватку хворого інактивують так, як для реакції Вассермана, і розводять у співвідношенні 1:200. На предметне скло наносять краплі антигену, висушують і фіксують 5 хв в ацетоні. Потім препарат наносять сироватку хворого, через 30 хв промивають і висушують. Наступним етапом є обробка препарату флюоресцентною сироваткою проти глобулінів людини. Вивчають препарат за допомогою люмінесцентного мікроскопа, відзначаючи міру свічення трепонем.
РИТ-реакція іммобілізації трепонем – також є специфічною. Живу культуру трепонем одержують при культивуванні в яєчку кролика. Яєчко подрібнюють у спеціальному середовищі, в якому трепонеми зберігають рухливість. Ставлять реакцію в такий спосіб: завись тканинних (рухливих) трепонем з'єднують у пробірці з досліджуваної сироваткою і додають свіжий комплемент. В одну контрольну пробірку замість досліджуваної сироватки додають сироватку здорової людини, в іншу замість свіжого комплементу додають інактивований - неактивний. Після витримування при 35 ° С в анаеробних умовах (анаеростат) з усіх пробірок готують препарат «роздавлена» крапля і в темному полі визначають кількість рухомих та нерухомих трепонем.
Лікування: Пеніциліни, тетрацикліни, вісмутовмісні препарати.

Сифіліс – циклічно протікає венеричне захворювання людини, що викликається блідою спірохетою; І стадія проявляється твердим шанкром (фр. chancre– виразка), ІІ стадія – ураженням стінки судин та різними висипами, ІІІ – гуммами в різних органах з ураженням нервової системи. Гумма (лат . gummi– камедь) – хронічний інфільтрат у вигляді вузла, схильний до розпаду та виразки. Сифілітична гумма ( син.: сифілітична гранульома, сифілід гуммозний, сифілома третинна) - безболісна напівкуляста гума, що є проявом третинного активного сифілісу. Збудник – Treponema pallidum– був відкритий 1905 р. Ф. Шаудіном та Е. Гофманом.

T. pallidum- Мікроорганізм спіралеподібної форми, розмірами 0,09 - 0,18 x 6 - 20 мкм. Число завитків спіралі від 8 до 12, завитки рівномірні, розташовані один від одного на однаковій відстані близько 1 мкм, висота у напрямку до кінців зменшується. В електронному мікроскопі має вигляд змії чи дощового хробака. На обох кінцях трепонеми розташовані блефаропласти з прикріпленими до них джгутиками, кількість яких варіює від двох до декількох, вони утворюють осьову нитку, закручену навколо протоплазматичного циліндра спірохети. За несприятливих умов може утворювати цисти. В організмі тварин може виникати мукополісахаридної природи капсулоподібний чохол.

Трепонема погано фарбується аніліновими барвниками, у зв'язку з чим збудник сифілісу і отримав назву блідої спірохети. Відновлює нітрат срібла в металеве срібло, яке відкладається на поверхні мікроба і робить його видимим у тканинах: при фарбуванні за Морозовим трепонеми виглядають коричневими або майже чорними. При фарбуванні по Романівському - Гімзе набувають блідо-рожевого кольору.

Трепонеми зазвичай розмножуються поперечним розподілом, при цьому клітини, що розділилися, можуть протягом деякого часу прилягати один до одного. Час розподілу – близько 30 год.

Живі трепонеми дуже рухливі, здійснюють рухи навколо власної поздовжньої осі, а також згинальний, хвилеподібний та поступальний рух.

До цього часу немає такого методу, у якому вдавалося б стабільно отримувати культури трепонем. Патогенні для людини бліді трепонеми ніколи не вдавалося культивувати на штучних живильних середовищах, курячих ембріонах або культурах клітин. Ті різновиди їхніх штамів, які ростуть в анаеробних умовах, є, ймовірно, сапрофітні спірохети, близькі до збудника сифілісу. Фізіологія їх залишається мало вивченою. Трепонеми відносяться до хемоорганотрофів, не мають каталази та оксидази, можуть зброджувати вуглеводи. Вони ростуть на дуже багатих середовищах, що містять до 11 амінокислот, вітаміни, солі, сироватковий альбумін. Найкращим способом вирощування патогенних спірохет є зараження кролика в яєчко (експериментальний орхіт). Висловлено припущення про існування у T. pallidumжиттєвого циклу, що включає, крім спіралеподібної форми, зернисту стадію та стадію кістоподібних сферичних тіл. Саме зернисті форми цих мікроорганізмів здатні проходити через бактеріальні фільтри.

Антигени трепонем погано вивчені. Встановлено, що у складі трепонем є білкові, полісахаридні та ліпідні комплекси. Антигенний склад культуральних і тканинних трепонем настільки близький, що антигени, виготовлені з культуральних трепонем, можна використовувати для РЗК при діагностиці сифілісу. В організмі людини трепонеми стимулюють вироблення антитіл, які викликають іммобілізацію та загибель живих рухомих трепонем, пов'язують комплемент у присутності суспензії T. pallidumабо споріднених спірохет, а також виявляються в непрямій РІФ.

Збудник сифілісу не утворює екзотоксинів. До зовнішніх впливів бліді трепонеми щодо малостійкі. Швидко гинуть при висушуванні та при підвищених температурах (при 55 °C протягом 15 хв). У 0,3 – 0,5 % розчині HCl миттєво втрачають свою рухливість; так само швидко втрачають її та гинуть у присутності препаратів миш'яку, вісмуту, ртуті. У цілісній крові або сироватці при 4 °C зберігають життєздатність протягом 24 год, що слід враховувати при переливанні крові.

Епідеміологія.Сифіліс – типове венеричне захворювання. Джерело інфекції - хвора людина, зазвичай заразний протягом 3 - 5 років; хворі з пізніми формами сифілісу не заразні. Зараження у переважній більшості випадків відбувається при різних видах статевих та побутових контактів, рідко трансплацентарним шляхом від хворої матері дитині (вроджений сифіліс) або як професійне зараження контактним шляхом у медичного персоналу. У природних умовах на сифіліс хворіє лише людина, в експерименті можливе зараження мавп, хом'ячків і кроликів. У мавп у місці введення трепонем розвивається твердий шанкер, у кроликів та хом'ячків інфекція протікає безсимптомно.

Патогенез та клініка.Інкубаційний період при набутому сифілісі варіює від 2 до 10 тижнів, зазвичай 20 - 28 днів. Вхідними воротами інфекції найчастіше є слизові оболонки статевих органів, рідше – ротові порожнини, а також пошкоджена шкіра. У місці застосування збудник розмножується, формується первинна сифілома (твердий шанкер) - ерозія або виразка з ущільненою основою. Далі збудник потрапляє у лімфатичну систему, розвивається лімфангоїт та регіонарний лімфаденіт. Це типова клініка первинного сифілісу, який продовжується 1,5 – 2 міс. Потім ці ознаки зникають. Вторинний період сифілісу пов'язані з генералізацією процесу, коли збільшуються багато лімфатичні вузли, але в шкірі і слизових оболонках з'являються висипання; можуть спостерігатися ураження внутрішніх органів та нервової системи. Розрізняють вторинний свіжий та вторинний рецидивуючий сифіліс. При кожному наступному рецидиві інтенсивність висипу стає менш вираженою, а періоди між рецидивами збільшуються. В елементах висипу міститься велика кількість живих трепонем, у цей період хворий найбільш заразний. Тривалість вторинного сифілісу – до 4 років та більше. Далі хвороба входить у тривалий безсимптомний період, після якого, за кілька років, розвивається третинний сифіліс. При цьому спостерігаються грубі органічні ураження внутрішніх органів, серцево-судинної системи, ЦНС, кісток, формуються гуми, що супроводжуються розпадом тканини та дегенеративними змінами. Характерною клінічною особливістю сифілісу є відсутність будь-яких суб'єктивних скарг з боку хворого (біль, свербіж, печіння тощо).

Імунітет.Проти сифілісу ні природного, ні штучного імунітету немає; є тільки інфекційний імунітет, і доки він існує, людина практично не сприйнятлива до нового зараження. Інфекційний імунітет розвивається через 10 - 11 днів після появи твердого шанкеру (шанкерний імунітет), у цей період повторне зараження або не спостерігається, або новий шанкер, що утворився, протікає абортивно (суперінфекція). Надалі при суперінфікуванні характер поразок, що виникають, відповідає стадії хвороби в момент повторного зараження. Суперінфекція пояснюється тимчасовим ослабленням чи «зривом» інфекційного імунітету. Від суперінфекції необхідно відрізняти реінфекцію, тобто нове, повторне зараження людини, яка раніше хворіла на сифіліс (вилікувалась) і, отже, втратила інфекційний імунітет. Описано випадки навіть триразового захворювання на сифіліс. Інкубаційний період у таких хворих коротший, частіше розвиваються множинні виразкові шанкри з лімфаденітом, серологічні реакції стають позитивними раніше. У вторинному періоді папули на шкірі часто ерозуються. Це тим, що з сифілісі розвивається реакція гіперчутливості уповільненого типу, після лікування в організмі довго зберігаються сенсибілізовані лімфоцити. Інфекційний імунітет має нестерильний характер та зумовлений гуморальними факторами: у сироватці хворого виявляються імуноглобуліни класів G, A та М.

Лабораторна діагностика.Для діагностики сифілісу оптимальний комплексний підхід, що передбачає одночасне використання декількох методів. Їх традиційно поділяють на прямі, що дозволяють довести наявність збудника у досліджуваному матеріалі (зараження тварин, різні види мікроскопії та молекулярно-генетичні методи детекції ДНК. T. pallidum– ПЛР та ДНК-зондування), та непрямі – серологічні тести для виявлення антитіл. У свою чергу, серологічні тести представлені нетрепонемними та трепонемними.

Досліджуваним матеріалом для виявлення трепонем у прямих методах є твердого шанкра, що відокремлюється, або його пунктат, пунктат лімфатичного вузла, зіскрібок з розеоли, ліквор. Найкраще в нативному матеріалі збудник виявляється темнопольним (див. рис. 111.4) або фазово-контрастною мікроскопією, що дозволяє спостерігати різні типи руху живого збудника. Якщо вже розпочато лікування антибіотиками, збудника у патологічному матеріалі виявити неможливо. При необхідності проводять пряму (або непряму) РИФ або забарвлюють препарат по Романівському – Гімзі. Ці методи використовують лише для ранньої діагностики сифілісу.

Серологічні тести можна використовувати різних стадіях захворювання, крім серонегативного первинного сифілісу. Зазвичай застосовують комплекс серологічних реакцій. До нетрепонемнимтестам з візуальним визначенням результатів відносяться: реакція зв'язування комплементу (реакція Вассермана = РСКк = RW) з кардіоліпіновим антигеном серцевого м'яза бика (перехресно реагує антиген), реакція мікропреципітації (МР, або РМП) - мікрореакція з плазмою та інактивованою; RPR – тест швидких плазмових реагінів та інші реакції. Фахівці вважають, що для масового обстеження найкраще застосовувати два тести: RPR та РПГА або ІФА, оскільки RPR більш чутливий при первинному сифілісі, РПГА – на пізніших стадіях захворювання, а ІФА – на всіх стадіях. До нетрепонемних тестів з мікроскопічним зчитуванням результатів відносяться VDRL-тест та USR-тест. Нетрепонемні тести використовують як відбіркові (скринінгові), так як вони можуть давати хибнопозитивні результати. У трепонемнихУ тестах використовують антигени трепонемного походження. Їх застосовують для підтвердження результатів нетрепонемних тестів (хибнопозитивні?) при клінічній, епідеміологічній та анамнестичній підозрі на сифіліс, для діагностики прихованих та пізніх форм, для ретроспективного діагнозу. До трепонемних тестів відносять: РСКт (РСК з трепонемним антигеном), РІБТ (або РІТ) – реакція іммобілізації блідих трепонем, РІФ (одна з найкращих реакцій), РПГА, ІФА, імуноблотинг.

Мікробіологічна діагностика сифілісу

Практична робота

Медицина та ветеринарія

Назву «бліда» трепонема отримала через низьку здатність до забарвлення. Існують інші патогенні трепонеми: Т. pertenue – збудник фрамбезії, Т. carateum – збудник пінти, Т. bejel – збудник хронічного генералізованого спірохетозу (беджель). Вказані збудники та викликані...

Методичні вказівки для студентів до практичного заняття №36.

Тема заняття:

Ціль: Вивчення методів мікробіологічної діагностики, терапії та профілактики сифілісу.

Модуль 2 . Спеціальна, клінічна та екологічна мікробіологія.

Тема 36: Мікробіологічна діагностика сифілісу.

Актуальність теми:

Збудник сифілісу

Сифіліс – інфекційне венеричне захворювання, що викликається Treponema pallidum, що характеризується ураженням шкіри, внутрішніх органів, кісток, нервової системи. Розрізняють набутий та вроджений сифіліс.

Таксономія. Збудник сифілісу – бліда трепонема (Treрonema pallidum) – відкритий у 1905 р. Ф. Шаудінном та Е. Гоффманом; відноситься до сімейства Spirochaetaceae, відділу Gracilicutes.

Морфологія та тинкторіальні властивості.Назву «бліда» трепонема отримала через низьку здатність до забарвлення. Існують інші патогенні трепонеми: Т. pertenue – збудник фрамбезії, Т. carateum – збудник пінти, Т. bejel – збудник хронічного генералізованого спірохетозу (беджель). Зазначені збудники і хвороби, що викликаються ними, частіше зустрічаються в регіонах зі спекотним і вологим кліматом. Бліда трепонема – тонка бактерія спіралеподібної форми, довжиною від 4 до 14 мкм, з рівномірними дрібними завитками (8-14 завитків); поряд зі спіралеподібною може мати інші форми - у вигляді цист, гранул, L-форм; забарвлюється по Романівському-Гімзі у характерний слабо-рожевий колір. Рухи від гвинтоподібних до згинальних.

Культивування.Бліда трепонема - облігатний анаероб, надзвичайно вибаглива до живильних середовищ. Культивована на поживних середовищах трепонема - культуральна спірохета - відрізняється від меншої патогенної вірулентністю, проте їх антигени подібні, що використовується при серодиагностиці сифілісу.

Антигенна структура.Бліда трепонема характеризується антигенними зв'язками з іншими трепонемами, а також ліпоїдами тканин тварин та людини. Встановлено кілька антигенів у збудника, один з яких – ліпоїдний антиген – ідентичний ліпоїдному екстракту бичачого серця.

резистентність. У навколишньому середовищі бліда трепонема слабостійка; при 55 0 З гине протягом 15 хв, чутлива до висихання, світла, солей ртуті, вісмуту, миш'яку, пеніциліну. На предметах домашнього вжитку зберігає заразливість до висихання; добре зберігається у тканині трупа.

Сприйнятливість тварин.Експериментально патологічний процес можна викликати в яєчку та на шкірі кроликів, у шкірі у людиноподібних мавп.

Епідеміологія. Джерело інфекції – хвора людина. Зараження відбувається переважно статевим шляхом, рідко – через предмети домашнього вжитку (склянки, зубні щітки, цигарки та ін), забруднені відокремлюваним від хворого; можливе зараження через поцілунки, молоко матері-годувальниці (побутовий сифіліс), не виключені випадки зараження при переливанні крові від донорів, хворих на сифіліс.

Патогенез та клінічна картина.Збудник сифілісу проникає в організм через шкіру або слизову оболонку, поширюється органами і тканинами, викликаючи їх ураження. Інкубаційний період триває в середньому 3-4 тижні. Після інкубаційного періоду сифіліс протікає циклічно у вигляді первинного, вторинного та третинного періодів. У місці застосування збудника (на статевих органах, в ротовій порожнині і т.д.) з'являється первинне ураження - твердий шанкер - різко відмежоване ущільнення з виразкою на поверхні. Вторинний період сифілісу триває 3-4 роки, характеризується висипом, порушенням загального стану організму. Третичний період характеризується ураженням шкіри, слизових оболонок, внутрішніх органів, кісток, нервової системи: з'являються утворення, схильні до розпаду, виразки.

Імунітет. Уродженого імунітету до сифілісу немає. При сифілісі розвивається нестерильний імунітет; після лікування імунітет не зберігається, тому можливі повторні захворювання.

Для виявлення блідої трепонеми в твердого шанкра, що відокремлюється, застосовують мікроскопію в темному полі. До кінця первинного та у вторинному періоді стають позитивними сергологічні реакції Вассермана, осадові реакції Кана, цитохолева та інші проби, що виявляють антитіла до блідої трепонеми. При масових обстеженнях застосовують відбірну реакцію, або мікрореакцію на склі, з краплею крові або сироватки та спеціальним антигеном. У дослідницьких лабораторіях використовують реакцію іммобілізації трепонем та інші сучасні методи.

Схема мікробіологічного дослідження при сифілісі

Мікроскопічне дослідження Серодіагностика

(комплекс серологічних реакцій):

Реакція Вассермана

Реакція іммобілізації трепонем

Мікроскопія нативного препарату РІФ

У темному полі

ВІДПОВІДЬ ВІДПОВІДЬ

Лікування. Найбільш ефективними антимікробними засобами є антибіотики ряду пеніциліну. Застосовують також препарати вісмуту, йоду та ін.

Профілактика. Специфічної профілактики немає. Неспецифічна профілактика полягає у дотриманні правил гігієни, а також у проведенні комплексу санітарно-гігієнічних заходів суспільного характеру: облік хворих на сифіліс, госпіталізація всіх хворих на заразні форми, залучення до обстеження всіх членів сім'ї хворого, систематичне обстеження груп ризику, виховання населення тощо.

Конкретні цілі:

Ознайомиться із морфологією збудника сифілісу.

Визначити особливості клінічного перебігу сифілісу.

Визначити поняття «тканинні» та «культуральні» трепонеми.

Трактувати результати мікроскопічного дослідження.

Вивчити методи серологічної діагностики сифілісу.

Ознайомитись з методами профілактики та специфічної терапії.

Вміти:

• Забирати матеріал для дослідження від хворих
• Трактувати результати мікроскопічного дослідження
• Вміти проводити реакцію Вассермана

Теоретичні питання:

1. Збудник.

• Властивості. резистентність.
• Патогенність для людини та тварин. Чинники патогенності, токсини.
• Патогенез захворювання у людей, імунітет.
• Мікробіологічна діагностика
• Специфічна профілактика та лікування

2. Цілі постановки реакції Вассермана.

3. Діагностична цінність реакції Вассермана та осадових реакцій.

4. Механізм реакції Вассермана.

5. Особливості імунітету при сифілісі.

Практичні завдання, які виконуються на занятті:

• Мікроскопія демонстраційних препаратів.
• Замалювання демонстраційних мікропрепаратів у протокол.
• Розбір схем лабораторної діагностики.
• Оформлення протоколу.

Література:

1. Коротяєв А.І., Бабичев С.А., Медична мікробіологія, імунологія та вірусологія / Підручник для медичних ВНЗ, Ст-Пб.: «Спеціальна література», 1998. - 592с.

2. Тімаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Мікробіологія / Підручник. - 2-ге вид., перераб. і доп. - М.: Медицина, 1983, - 512с.

3. П'яткін К.Д. Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією. - Київ: Вища школа, 1992. - 431с.

4. Медична мікробіологія / За редакцією В.І. Покровського. - М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001. - 768с.

5. Посібник до практичних занять з мікробіології, імунології та вірусології. / За ред. М.П. Зикова.- М. «Медицина». 1977. 288с.

6. Черкес Ф.К., Богоявленська Л.Б., Бельскан Н.А. Мікробіологія. / За ред. Ф.К. Черкес. М.: Медицина, 1986. 512с.

7. Конспект лекції.

Додаткова література:

1. Макіяров К.А. Мікробіологія, вірусологія та імунологія. - Алма-Ата.: «Ка-захстан», 1974. 372с.

2. Тітов М.В. Інфекційні хвороби.- К., 1995. 321с.

3. Шувалова Є.П. Інфекційні хвороби. - М.: Медицина, 1990. - 559с.

4. БМЕ, Т. 1, 2, 7.

5. Павлович С.А. Медична мікробіологія у графах: Навч. посібник для мед. ін-тов. Мн.: Вище. шк., 1986. 255с.

Короткі методичні вказівки на роботу на практичному занятті.

На початку заняття проводиться перевірка рівня підготовки студентів до заняття.

• Самостійна робота.
• постановка реакції Вассермана
• Облік реакції Вассермана та запис до протоколу.
• Розбір та запис схем лабораторної діагностики до протоколу.

До складу самостійної роботи входить також мікроскопія демонстраційних препаратів та їх замальовка до протоколу заняття.

Наприкінці заняття проводиться тестовий контроль та аналіз підсумкових результатів самостійної роботи кожного студента.

Технологічна карта проведення практичного заняття

№ п\п	Етапи	Час за хв.	Способи навчання	Устаткування	Місце проведення
	Перевірка та корекція вихідного рівня підготовки до заняття	20	Тестові завдання вихідного рівня	Таблиці. Тести на тему.	Навчальна кімната
	Самостійна робота	35	Граф логічної структури	Колекція демонстраційних препаратів, біопрепаратів.
	Самоконтроль та корекція засвоєного матеріалу	15	Цільові навчальні програми
	Тестовий контроль	15	Тести
	Аналіз результатів роботи

Алгоритм лабораторної роботи:

Вивчення схеми лабораторної діагностики сифілісу.

Мікроскопія готових мазків із культуральних та тканинних трепонем.

Ознайомлення з правилами забору матеріалу від хворих на мікроскопію досліджуваного матеріалу.

Мікроскопія та аналіз демонстраційних препаратів.

Замалювання препаратів у протокол.

Запис схем лабораторної діагностики до протоколу.

Оформлення протоколу.

Тестовий контроль та аналіз результатів самостійної роботи кожного студента.

Цільові навчальні завдання:

1. У КВД надійшов хворий із діагнозом «первинний сифіліс». Який із перерахованих методів діагностики використовують на даній стадії захворювання?

A . темнопольна мікроскопія;

C. РП у гелі

D. РА

E . непряма імунофлюоресценція

2. У хворого відділення щелепно-лицьової хірургії при постановці реакції Вассермана вона виявилася негативною. За яким із перерахованих результатів визначають феномен негативної РЗК?

A . з аглютинації еритроцитів;

B . наявність осаду еритроцитів;

C . щодо зміни кольору рідини;

D . за освітою плівки

E . за наявністю гемолізу у пробірках.

3. При обстеженні хворого КВД було виявлено папульозно-розеолезні висипання на тулубі та кінцівках та збільшення лімфатичних вузлів. Попередньо встановлений діагноз "сифіліс". Яким методом лабораторної діагностики цей діагноз можна підтвердити?

A. алергічним;

B. біологічним;

C . бактеріологічним;

D . бактеріоскопічним;

E. ІФА

4. Під час прийому лікар-стоматолог виявив у хворого у ротовій порожнині твердий шанкер. Який із перерахованих методів лабораторної діагностики можна застосувати для встановлення діагнозу?

A . реакція іммобілізації трепонем

B . реакція Вассермана

C. реакція Кана

D. РА

E . бактеріоскопічний

5. До жіночої консультації прийшла жінка на 8-му тижні вагітності. Під час обстеження її взяли кров для перевірки на наявність специфічних антитіл до трепонем. Яка з наведених нижче серологічних реакцій може бути використана для виявлення антитіл до трепонем?

A. реакція Райта

B . реакція Вассермана

C. реакція Відаля

D . реакція Борде-Жангу

E. РТГА.

6. Для підтвердження діагнозу «сифіліс» лаборант проводив серологічну реакцію, в якій використовував сироватку крові хворого, кардіоліпідний антиген, комплемент та індикаторну систему. Як називається поставлена ​​реакція?

A . реакція іммобілізації трепонем;

B . реакція Вассермана;

C. реакція Кана

D. РП

E . реакція імунофлюоресценції

7. При проведенні серологічної реакції на виявлення антитіл до збудника сифілісу у сироватці крові хворого провели інкубацію трепонем із сироваткою пацієнта в анаеробних умовах, після чого бактерії втратили рухливість. Яка реакція була поставлена, і що вона означає?

A . реакція Вассермана, пацієнт хворий на сифіліс;

B реакція Вассермана, у пацієнта йде інкубаційний період;

C . реакція іммобілізації трепонем, пацієнт хворий на сифіліс;

D . реакція непрямої імунофлюоресценції, пацієнт хворий на сифіліс;

E . реакція іммобілізації трепонем, пацієнт колись переніс сифіліс.

8. Для серологічної діагностики сифілісу з використанням реакції Вассермана лікар-лаборант підготував такі реактиви: кардіоліпідний антиген, ізотонічний розчин хлориду натрію, гемолітичну систему. Який компонент необхідний для постановки цієї реакції?

A . живі трепонеми;

B . еритроцити барана;

C. комплемент;

D . антиглобулінова сироватка;

E . діагностична преципітуюча сироватка.

9. У мікропрепараті, приготованому з пунктату лімфатичних вузлів хворого, забарвленому за Романовським-Гімзою, лікар виявив тонкі мікроорганізми з 12-14 рівномірними завитками блідо-рожевого кольору. Про збудника якого інфекційного захворювання може йтися в цьому випадку?

A . зворотний тиф;

B. лептоспіроз;

C. лейшманіоз

D. сифіліс

E. трипаносомоз.

10. У хворого з підозрою на первинний сифіліс було взято зіскрібок зі слизової ротової порожнини. При мікроскопії мазка пофарбованого методом Романовського-Гімзе було виявлено звивисті бактерії фіолетового кольору. Який із нижченаведених висновків є вірним?

A . у пацієнта виявлено T. pallidum;

B . у пацієнта виявлено атипові форми T. pallidum;

C . у пацієнта виявлено непатогенні трепонеми;

D . було обрано неправильний метод забарвлення;

E. -

11. Лікар-клініцист запідозрив у пацієнта первинний сифіліс. Який матеріал для досліджень доцільно забрати на підтвердження діагнозу?

A . тканинну рідину з твердого шанкеру та пунктат лімфатичних вузлів;

B . зішкріб зі шкірних висипань;

C. ліквор;

D. слиз із носа

E. слину.

12. У хворого з підозрою на вторинний сифіліс на дослідження було взято кров. Який метод діагностики доцільно застосувати для підтвердження діагнозу?

A . реакцію Відаля;

B . алергічну пробу;

D . реакцію Борде-Жангу

E . бактеріологічний метод

C . реакцію непрямої імунофлюоресценції.

А також інші роботи, які можуть Вас зацікавити
68128.		Слова у вірші – і рай у душі	78.5 KB
	Мета: поглибити учнівські знання з теорії літератури ідейнохудожнього аналізу поетичного твору удосконалювати вміння виразного читання; розвивати поетичне мислення образну уяву; виховувати любов до художнього слова та до рідної природи. Я зачитуватиму поетичні рядки а ви повинні підставити...
68129.		Інтелектуальна гра «Літературна веселка» Ти завжди в серцях людей, Тарасе!	43.5 KB
	Шевченка розвивати логічне мислення виразне читання виховувати увагу до слова Шевченка та цікавість до вивчення його творчості. Тарас Шевченко Тарас Це бунтівне пророче ім'я знайоме не тільки українцям а й усьому світові. Шевченко це криниця з джерельною водою, яка втамовує духовну жагу народу.
68130.		Знайомство зі країною Логікою	28.5 KB
	Сьогодні діти ми вирушаємо у незвичайну подорож. Діти ходять до школи найкоротшим шляхом, але можуть годинами блукати різноманітними лабіринтами. Діти імітують посадку на автобус та їзду. Ось компанія яка У якій послідовності сидять діти Боря Петрик Юрко Віра Стас Іра.
68131.		Аналогія. Добір малюнків за аналогією	263.5 KB
	Тип уроку: урок засвоєння умінь та навичок Обладнання: геометричні фігури та предметні малюнки до гри Фотограф; індивідуальні набори геометричних фігур гралото малюнки з послідовністю. Міняю місцями фігури деякі взагалі прибираю. Усі фігури різного кольору А тепер відкрийте очі подивитись...
68132.		Подорож по океану логічних завдань	27.5 KB
	Мета: Познайомити дітей з різними поняттями; розвивати мислення, мову, пам'ять, спостережливість; виховувати сміливість, рішучість. Хід уроку Повідомлення теми та мети уроку. Сьогодні ми вирушаємо у кругосвітню подорож на кораблі. Нас чекає багато різних пригод. Людина – мисляча істота. Думки словами виражає.
68133.		Сумісні та несумісні поняття. Завдання для повторення	84.5 KB
	Мета: узагальнити й систематизувати знання учнів про поняття про сумісні та несумісні поняття удосконалювати вміння учнів розв'язувати логічні завдання розвивати логічне мислення; виховувати любов до тварин пробуджувати пізнавальний інтерес до всього живого формувати самоосвітні...
68136.		МОДЕРНІЗАЦІЯ ВИЩОЇ ОСВІТИ УКРАЇНИ: МЕХАНІЗМИ ІНСТИТУЦІЙНОГО РЕГУЛЮВАННЯ	188 KB
	Результативність та ефективність функціонування системи вищого освіти України на початку ХХІ століття буде забезпечуватись лише у випадку, коли її не зв'язуватимуться вирішенням тимчасових завдань, породжених економіко-політичною нестабільністю, демографічною кризою, соціокультурним вакуумом.

Т. pallidum підвид pallidum – спіралеподібна бактерія розміром 6-14x0,2-0,3 мкм; у культурах може бути великих розмірів. Завитки спіралі однакові на висоті, їх може бути до 14. Чи здатні утворювати L-формьг.

Основний спосіб розмноження сифілісу- Поперечний поділ. Збудник сифілісумалостійкий у зовнішньому середовищі та гине при висиханні, але на холоді зберігається до 50 діб. Прогрівання при температурі 40 ° С протягом години призводить до втрати патогенних властивостей; при 48 ° С бактерії гинуть протягом 10 хв.

Збудник сифілісупогано забарвлюється аніліновими барвниками (звідси назва «бліда спірохета»). Бактерії сифілісувідновлюють нітрат срібла в металеве срібло, що надає тканинам чорного або темно-коричневого забарвлення.

У вітчизняній практиці поширений метод сріблення за Морозовим. По Романовському-Гімзі забарвлюється в рожевий колір, а непатогенні трепонеми- у фіолетовий чи синій. Також застосовують негативне контрастування щодо Буррі.

Культуральні властивості сифілісу. Культура збудника сифілісу

Бліда спірохетавимоглива до умов культивування, що погано зростає на штучних середовищах; методи стабільного одержання культур досі відсутні.

У нашій країні найбільша кількість штамів сифілісувиділили казанські мікробіологи В.М. Аристовський та P.P. Гельцер.

Ці «казанські» штами сифілісупоряд зі штамом Райтера застосовують виготовлення Аг для серодиагностики. При тривалому культивуванні бактерії сифілісуадаптуються до більш простих середовищ (наприклад, Кітта-Тароцці) та втрачають патогенні властивості.

Колонії сифілісудрібні, з'являються на 3-5 добу культивування.

Зміст статті

Бліда трепонема

Морфологія та фізіологія

T.pallidum має форму спіралі, протоплшматичний циліндр, який скручений у 8-12 завитків. Від кінців клітини відходять 3 периплазматичні джгутики. Бліда трепонема погано сприймає анілінові барвники, тому її забарвлюють фарбою Романівського-Гімза. Однак найбільш ефективним методом є її вивчення в темнопольному або фазовоконтрастному мікроскопі. Мікроаерофіл. На штучних живильних середовищах не росте. Т. pallidum культивують у тканині яєчка кролика, де вона добре розмножується та повністю зберігає свої властивості, викликаючи у тваринного орхіт. Антигени. Антигенна структура Т. pallidum складна. Вона пов'язана з білками зовнішньої мембрани, ліпопротеїдів. Останні є перехресно реагують антигенами, загальними для людини і великої рогатої худоби. Вони використовуються як антиген у реакції Вассермана для серодиагностики сифілісу.

Патогенність та патогенез

До факторів вірулентності блідої трепонеми відносять білки зовнішньої мембрани та ЛПС, які виявляють свої токсичні властивості після звільнення з клітини. Разом з тим, мабуть, здатність трепонеми при розподілі утворювати окремі фрагменти, що проникають углиб тканин, також можна віднести до факторів вірулентності. У патогенезі сифілісу розрізняють три стадії. При первинному сифілісі спостерігається утворення первинного вогнища - твердого шанкеру в місці вхідних воріт інфекції, з подальшим проникненням у регіонарні лімфовузли, де збудник розмножується та накопичується. Первинний сифіліс продовжується близько 6 тижнів. Друга стадія характеризується генералізацією інфекції, що супроводжується проникненням та циркуляцією збудника у крові, що супроводжується шкірними висипаннями. Тривалість вторинного сифілісу у нелікованих хворих коливається не більше 1-2 років. У третій стадії виявляються інфекційні гранульоми (гуми, схильні до розпаду), що локалізуються у внутрішніх органах та тканинах. Цей період у нелікованих хворих триває кілька років і закінчується поразкою ЦНС (прогресивний параліч) чи спинного мозку (спинна сухотка).

Імунітет

При сифілісі має місце гуморальна та клітинна імунна відповідь. Антитіла, що утворюються, не мають протективних властивостей. Клітинна імунна відповідь пов'язана з фіксацією збудника та утворенням гранульом. Проте елімінації трепонем з організму у своїй немає. Разом про те несприятливі умови середовища індукують утворення трепонемами цист, які локалізуються у стінці кровоносних судин. Вважають, що це свідчить про перехід захворювання на стадію ремісії. Поряд із цистами трепонеми утворюють L-форми. При сифілісі формується ГЗТ, яка може бути виявлена ​​шкірно-алергічною пробою з убитою суспензією трепонем. Вважають, що прояв третинного періоду сифілісу пов'язані з ГЗТ.

Екологія та епідеміологія

Сифіліс – типово антропонозна інфекція. Хворіють лише люди, які є резервуаром інфекції у природі. Передача інфекції відбувається статевим шляхом та значно рідше – через білизну та інші предмети. У зовнішньому середовищі (повітря) трепонеми швидко гинуть.

Сифіліс та інші трепонематози

Сифіліс - хронічна інфекційна венерична хвороба людини, що має циклічний прогресуючий перебіг, вражає шкіру, слизові оболонки, внутрішні органи та нервову систему. Збудником захворювання є Treponema pallidum. Розрізняють три основні періоди розвитку сифілісу, методи лабораторної діагностики яких мають свої особливості. У ранній період хвороби матеріалом для лабораторної діагностики служить виділення з твердого шанкеру, пунктат з лімфатичних вузлів, зіскрібки з розеол, сифілід тощо. При вторинному та третинному періодах досліджують сироватку крові та ліквор. У зв'язку з тим, що виділення чистих культур трепонем у звичайних бактеріологічних лабораторіях неможливе, під час первинного періоду хвороби (рідко пізніше) проводять бактеріоскопічний метод діагностики. Починаючи з вторинного періоду використовують переважно серологічні методи.

Бактеріоскопічне дослідження

Перед взяттям патологічного матеріалу спочатку сифілітичну виразку протирають ватним тампоном, для видалення сального нальоту та контамінуючої мікрофлори. Потім дно твердого шанкеру подразнюють скальпелем або металевою лопаткою або енергійно стискають виразку з боків пальцями в гумовій рукавичці до виділення ранового ексудату. При невеликій кількості прозорої рідини її можна внести в краплю 0,85% розчину хлориду натрію. При неможливості взяти матеріал з дна шанкра (фімоз, рубцювання виразки та ін.) проводять пункцію регіонарних лімфатичних вузлів. темне поле зору (краще!), або за допомогою фазово-контрастного або аноптрального мікроскопа. Бліда трепонема в темному полі зору має вигляд трохи блискучої тонкої ніжної спіралі з крутими рівномірними округлими первинними завитками. Рухи плавні, тим вона згинається під кутом. Але особливо характерні для неї маятникові коливання. Збудник сифілісу необхідно відрізняти від Treponema refringens (що колонізує зовнішні статеві органи), яка товстіша, грубіша, з нерівномірними великими завитками і має активні безладні рухи, але не згинається. При діагностиці ротового сифілісу бліду трепонему слід диференціювати і від зубних трепонем, особливо Т. dentium, а також від Т. buccalis. Першу їх взагалі важко від сифілітичного. Вона, щоправда, коротше, має 4-8 гострих завитків, маятникоподібний рух відсутній. Т. buccalis товщі, має грубі початкові завитки і безладний рух. За будь-яких сумнівів потрібно враховувати, що всі сапрофітні трепонеми, на відміну від блідої, добре забарвлюються аніліновими барвниками. Вони не проникають у лімфатичні вузли, тому дослідження пунктатів має велику діагностичну цінність. Виявлення в пунктаті лімфатичних вузлів типових трепонем беззаперечно підтверджує діагноз сифілісу. Його переваги полягають у тому, що матеріал досліджують швидко, а морфологія трепонем у живому стані найбільш характерна. У разі неможливості провести дослідження в темному полі зору можна використовувати різні методи фарбування. Бліда трепонема погано сприймає анілінові барвники. З багатьох запропонованих способів забарвлення найкращі результати отримують при використанні забарвлення по Романові-Гімзі. Виготовлені мазки фіксують метиловим спиртом або суміші Никифорова. Чіткість результати одержують, коли фарбу Романовського-Гімзи наливають у препарат. Для цього в чашку Петрі поміщають уламки сірників, на них поміщають предметне скло мазком вниз і наливають барвник, допоки він змочите мазок. Час забарвлення у своїй подвоюють. При мікроскопії бліді трепонеми мають ніжно-рожевий колір, а інші види трепонему забарвлюються в синій або синьо-фіолетовий колір. Можна використовувати і метод сріблення Морозовим. Трепонеми повністю зберігають свої морфологічні особливості та виглядають під мікроскопом коричневими або майже чорними. Але срібні препарати довго не зберігаються. Останнім часом методи фарбування трепонем застосовують рідко. Якщо розпочато лікування сифілісу хіміопрепаратами, виявити збудник у патологічних матеріалах навіть за допомогою темного поля зору практично не вдається. При отриманні негативного аналізу його потрібно повторити.

Серологічна діагностика сифілісу

При проведенні серологічних реакцій тепер використовують такі уніфіковані в Україні методи досліджень: реакції зв'язування комплементу (РСК), імунофлуоресценції (РІФ), іммобілізації трепонем (PIT), мікрореакцію преципітації (МПР) та імуноферментний аналіз (ІФА). Протягом багатьох років основний та найбільш найпоширенішою реакцією вважалася реакція зв'язування комплементу або реакція Вассермана (РВ, RW). Для її постановки використовують сироватку крові хворого на сифіліс та спинномозкову рідину при ураженні нервової системи. Методика постановки реакції Вассермана не відрізняється від техніки проведення РСК. Різниця лише в тому, що для РВ використовують не тільки специфічний трепонемний, а неспецифічний кардіоліпіновий антиген. Взяття 5-10 мл крові з ліктьової вени проводять натще або не раніше 6 годин після їди. Не можна брати кров у хворих з підвищеною температурою, після вживання алкоголю та жирної їжі, у вагітних жінок за 10 днів до пологів та породіль. Видобуту з крові сироватку прогрівають при температурі 56 ° С протягом 30 хв для інактивації власного комплементу. РО обов'язково ставлять з двома антигенами: специфічним і неспецифічним. Специфічний ультраозвучений трепонемний антиген готують з культур блідих трепонем (штам Рейтера), вирощених у пробірках і схильних до дії ультразвуку. Його випускають у вигляді висушеного ліофільно порошку. Неспецифічний кардіоліпіновий антиген готують шляхом спиртового екстрагування ліпідів з бичачого серця та очищення від баластових сумішей, що розфасовують в ампули по 2 мл. Для введення антигену в РВ його титрують згідно з даною інструкцією. Безпосередньо перед постановкою РВ проводять титрування комплементу та гемолітичної сироватки за такою ж схемою, як і РСК. Реакцію Вассермана ставлять як якісним, і кількісним методом. Якісну реакцію проводять у трьох пробірках із двома антигенами за звичайною схемою. Результати реакції оцінюють за 4 плюсовою системою: позитивна реакція – коли є повна або значна затримка гемолізу (4+, 3+); слабопозитивна реакція – часткова затримка гемолізу (2+); сумнівна реакція – незначна затримка гемолізу (1+). У разі виникнення повного гемолізу РВ вважають негативною. Кожну сироватку, яка дала позитивну якісну реакцію, необхідно дослідити і кількісним методом з послідовним її розведенням від 1:10 до 1:640. якому настає повна (4+) або значка (3+) затримка гемолізу. Кількісний метод постановки РВ має важливе значення для оцінки ефективності лікування сифілісу. Швидке зниження титру реагінів свідчить про успішну терапію. Якщо титр сироватки довго не знижується, це свідчить про відсутність ефективності застосовуваних препаратів і необхідність змінити тактику лікування. У разі підозри на нейросифіліс РВ проводять зі спинномозковою рідиною, яку інактивують, оскільки вона не містить власного комплементу. В реакцію вводять нерозведений ліквор і в розведеннях 1:2 та 1:5. Реакція Вассермана стає позитивною через 2-3 тижні після появи твердого шанкеру. При вторинному сифілісі вона випадає позитивною у 100% випадків, у третинному – у 75%. Крім того, у комплексі серологічних реакцій (КСР) як скринінг-тест використовують мікрореакцію преципітації з плазмою крові або інактивованою сироваткою.

Мікрореакція преципітації

Мікрореакцію преципітації ставлять із кардіоліпіновим антигеном. Принцип реакції полягає в тому, що при додаванні до плазми або сироватці крові хворого на сифіліс емульсії кардіоліпінового антигену утворюється преципітат (комплекс антиген-антитіло), який осаджується у вигляді пластівців білого кольору. Користуються такою методикою: у лунку пластини вносять піпеткою три краплі плазми (або інактивованої сироватки), потім додають одну краплю емульсії стандартного антигену кардіоліпіну. Компоненти реакції змішують струшуванням пластини протягом 5 хв, після чого додають три краплі 0,9% розчину натрію хлориду і залишають при кімнатній температурі ще на 5 хв. Обов'язковий контроль зі слабопозитивною сироваткою крові. Результати оцінюють неозброєним оком над штучним джерелом висвітлення. При появі в лунці великих пластівців реакцію вважають позитивною (4+, 3+), середніх та дрібних – як слабопозитивні (2+, 1+). При негативному результаті преципітату не утворюється. Мікрореакцію преципітації можна проводити і кількісним методом для встановлення титру антитіл преципітуючих і оцінки на цій основі ефективності лікування. Вищі титри МРП отримують з плазмою, ніж із сироваткою. За кордоном аналогом МРП із сироваткою хворого є VDRL (Veneral disease research laboratoiy), а з плазмою – RPR (Rapid plasma reagin).

Реакція імунофлюоресценції (РІФ)

До групи специфічних реакцій, які використовуються для серологічної діагностики сифілісу, належить непряма реакція імунофлюоресценції. Як антиген, в ній використовують завись патогенних блідих трепонем штаму Нікольса з паренхіми яєчок кролика на 7-й день після зараження. Реакцію ставлять у двох модифікаціях: РІФ-АБС та РІФ-200. У першому варіанті використовують сорбент антитіл (сонікат) - ультраозвучений трепонемний антиген для РЗК. Його випускає Каунаське підприємство із виробництва бактерійних препаратів (Литва). При варіанті РІФ-200 сироватку хворого розводять у 200 разів з метою зняти вплив групових протитрепонемних антитіл. Постановку РІФ-АБС проводять на тонких, добре знежирених предметних скла. На зворотному боці скла склорізом позначені 10 кружечків діаметром 0,7 см. У рамках кружка на скло наносять антиген - завись блідих трепонем - в такій кількості, щоб у полі зору їх було 50-60. Мазки висушують на повітрі, фіксують над полум'ям та 10 хв в ацетоні. В окрему пробірку вносять 0,2 мл сорбенту (сонікату) та 0,5 мл сироватки крові хворого, добре перемішують. Суміш наносять на мазок (антиген) так, щоб рівномірно покрити його, витримують 30 хв у вологій камері при 3 7 ° С (II фаза реакції). Після цього мазок промивають фосфатним буфером, висушують і наносять на нього антишобулінову флуоресцентну сироватку на 30 хв, ставлять у вологу камеру при 37°С (II фаза). Препарат знову промивають фосфатним буфером, висушують і досліджують під люмінесцентним мікроскопом. При позитивній реакції бліді трепонеми випромінюють золотисто-зелене світло, при негативній - не світяться. у 200 разів фосфатним буфером. При проведенні реакції імунофлюоресценції зі спинномозковою рідиною хворого на сифіліс нервової системи використовують РИФ-ц і РИФ-10, тобто. ліквор вводять у реакцію неінактивованим та розведеним, або розведеним 1:10.

Реакція імобілізації блідих трепонем (PIT)

Реакція імобілізації блідих трепонем (PIT) заснована на феномені втрати їх рухливості в присутності іммобілізуючих протитрепонемних антитіл сироватки хворого та комплементу в умовах анаеробіозу. Як антиген у реакції використовують завись блідих трепонем із тестикулярної тканини кролика, зараженого лабораторним штамом Нікольса. Суспензію розводять стерильним 0,85% розчином хлориду натрію так, щоб у полі зору було 10-15 спірохет. Для проведення реакції в стерильній пробірці змішують 0,05 мл сироватки крові хворого, 0,35 мл антигену і 0,15 мл комплементу. Досвід супроводжують контролюми сироватки, антигену та комплементу. Пробірки поміщають в анаеростат, створюють анаробні умови та витримують у термостаті 18-20 год при температурі 35°С. Потім з кожної пробірки готують препарат натиснені краплі, підраховують не менше 25 трепонем та відзначають, скільки з них рухомих та скільки нерухомих. Відсоток специфічної іммобілізації блідих трепонем підраховують за формулою: х = (А-В) / В * 100, де X - відсоток іммобілізації, А - число рухомих трепонем у контрольній пробірці, В - число рухомих трепонем у дослідній пробірці. Реакція вважається позитивною, коли відсоток іммобілізації становить 50 і більше, слабопозитивний – від 30 до 50, сумнівною – від 20 до 30 та негативною – від 0 до 20. У практичних лабораторіях використовують простіший меланжерний метод PIT за М.М. Овчинніковим. Анаеробні умови досвіду створюються приміщенням реагує суміші (сироватки, антиген, комплемент) в меланжери, обидва кінці якого закривають гумовим кільцем. Меланжерна методика дозволяє обійтися без складного обладнання та апаратури для створення анаеробіозу, але дає такі результати, які не поступаються класичній мікроанаеростатній методиці. Реакції іммобілізації трепонем та імунофлуоресценції вважають найбільш специфічними у серологічній діагностиці сифілісу. І все ж таки, PIT, незважаючи на її специфічність, не рекомендують для використання в широкій практиці через трудомісткість постановки.

Імуноферментний аналіз (ІФА)

Імуноферментний аналіз (ІФА) проводять як з кадріоліпіновим антигеном (неспецифічна, відбіркова реакція), так і трепонемним (специфічна реакція), яка підтверджує діагноз сифілісу. Принцип непрямого методу ІФА полягає в тому, що в антигені досліджувану сироватку. Якщо вона містить антитіла проти трепонем, утворюється комплекс антиген-антитіло (II фаза). Після відмивання незв'язаних неспецифічних антитіл до лунок вносять антиглобулінову сироватку, кон'юговані з ферментом (найчастіше з пероксидазою хрону). Кон'югат міцно приєднується до комплексу антиген-антитіло (II фаза). Після відмивання незв'язаного кон'югату в лунки додають окрасний субстрат ОФД - ортофенілендіамін (III фаза). Пероксидазну реакцію зупиняють, додаючи сірчану кислоту. Для контролю ставлять такі ж проби з позитивною і свідомо негативною сироватками. Облік результатів аналізу проводять за допомогою фотометра, який визначає оптичну щільність в двохвильовому режимі (492 нм і 620 нм). Для постановки реакції ензиммічених антитіл, крім фотометра, потрібні одно- та восьмиканальні автоматичні піпетки з поліпропіленовим наконечником та відповідні набори діагностичних тест-систем. Метод ІФА знаходить широке застосування у серологічній діагностиці сифілісу. Він однаково ефективний для виявлення хвороби в інкубаційному періоді (через 1-2 тижні після інфікування), при клінічних проявах хвороби та прихованих його формах. Дуже часто ІФА використовують при скринінгових обстеженнях населення, особливо на станціях переливання крові. У лабораторній практиці іноді застосовують також реакцію імунної прилипання (РІП) та реакцію непрямої гемаглютинації (РНГА). Перша з них ґрунтується на тому, що патогенні тестикулярні трепонеми штаму Нікольса при змішуванні із сироваткою хворого у присутності комплементу та еритроцитів людини прилипають до поверхні червоних кров'яних тілець. РНГА досить широко використовується для діагностики сифілісу завдяки своїй методичній простоті. Вона стає позитивною вже за три тижні після зараження. Позитивний результат реакції залишається роками після одужання. Аналогом цієї реакції там є ТРНА (Treponema pallidum haemoagglutination).