Таксономія, пневмокок, методи лаб д. грипу

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я РОСІЙСЬКОЇ ФЕДЕРАЦІЇ КАЗАНСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ КАФЕДРА МІКРОБІОЛОГІЇ

Пневмококи

КАЗАНЬ 1999

УДК 576.851.21(07)

Друкується за рішенням Центральної координаційно-методичної ради Казанського державного медичного університету.

Укладачі:

(Завідувач кафедри мікробіології д.м.н., професор О.К.Поздєєв, помічник кафедри мікробіології к.м.н., Є.Р.Федорова.

Рецензенти:

завідувач кафедри епідеміології Казанського державного медичного університету, д.м.н., доцент М.Ш. Шафєєв, завідувач кафедри епідеміології Казанської державної медичної академії, д.м.н., професор В.Є. Григор'єв.

Пневмококи /O.K. Поздєєв, Є.Р. Федорова-Казань: КДМУ,1999. – 14 с.

Копіюючи, розповсюджуючи, публікуючи текст або його частину на своїх ресурсах, Ви берете на себе відповідальність згідно з чинним законодавством.

Винятково для використання твору в особистих цілях (ст.18, ст.26 Закону РФ «Про авторське право та суміжні права»). Комерційне відтворення заборонено.

Казанський державний медичний університет, 1999

Пневмокок (Streptococcus pneumoniae) вперше виділив Пастер (1881) під час роботи над антирабічною вакциною і спочатку вважав його збудником сказу. Етіологічну роль мікроорганізму у розвитку пневмоній у людини довели Френкель та Вайхзельбаум (1884). Бактерії колонізують організми людини і тварин і входять до групи про «оральних» стрептококів. Є основними збудниками запалення легень, також можуть спричинити плеврити, менінгіти, повзучі виразки рогівки, гнійні запалення середнього вуха, септичні стани та інші захворювання. У IX виданні визначника бактерій Берджі (1994) пневмококи включені в 17 групу «Грампозитивні коки».

Епідеміологія поразок. Пневмокок - один з основних збудників бактеріальних пневмоній, що реєструються поза стаціонарами (2-4 випадки на 1000 осіб); щорічно у світі спостерігають не менше 500000 випадків пневмококових пневмоній (реальна величина значно більша). Найбільш схильні до інфекції діти та особи похилого віку. Резервуар інфекції - хворі та носії (20-50% дітей дошкільного віку та 20-25% дорослих осіб); основний шлях передачі – контактний; у період спалахів також повітряно-краплинний. Пік захворюваності посідає холодну пору року. У переважній більшості випадків клінічні форми інфекції розвиваються при порушеннях резистентності організму (у тому числі внаслідок холодових стресів), а також на тлі іншої патології (серповидноклітинної анемії, хвороби Ходжкіна. ВІЛ-інфекції, мієломи, цукрового діабету, станів після спленектомії та ін.). або за алкоголізму. Найбільше епідеміологічне значення у патології у дорослих відіграють варіанти 1, 2 та 3; у дітей - 1, 2, 3 та 14 варіанти. Вірулентність сероварів у низхідному порядку - 3, 1, 2, 5, 7 та 8 варіанти. До пневмококів чутливі білі миші (при зараженні вони гинуть від септицемії протягом доби), телята, ягнята, поросята, собаки та мавпи.

Морфологія Пневмококи нерухомі, вони не утворюють суперечки, мають злегка витягнуту форму, що нагадує контури полум'я свічки. У мазках з клінічного матеріалу розташовуються парами, кожна з яких оточена товстою капсулою. У мазках з живильних середовищ можуть розташовуватись короткими ланцюжками і бути більш округлими. На простих середовищах утворюють тонку капсулу; її розвиток стимулює внесення крові, сироватки чи асцитичної рідини. Капсулоутворення найбільше добре виражене у бактерій III типу. При розташуванні ланцюжками капсула може бути загальною.

Культуральні характеристики. Пневмококи аероби або факультативні анаероби; при культивуванні кращі капнофільні умови (5-10% СО2). Хемоорганогрофи і добре ростуть на кров'яних чи сироваткових середовищах, доповнених внесенням 0,1% глюкози. Можуть зростати в діапазоні температур 28-42 °С, оптимум – 37 °С. Оптимум рН-7,6-7,8. На щільних середовищах утворюють ніжні напівпрозорі чітко окреслені колонії діаметром близько 1мм. Іноді вони можуть бути плоскими із центральним поглибленням; подібно до інших стрептококів, колонії ніколи не зливаються.

між собою. На кров'яному агарі утворюють дрібні напівпрозорі колонії зеленувато-сірого кольору. Центр колоній темніший, периферія світліша. Під колонією і її периферії видно зона а-гемолізу як зеленої знебарвленої зони (що з переходом гемоглобіну в метгемоглобін). Колонії пневмокока III типу часто мають слизову оболонку консистенцію, величина їх до 2 мм. Вони каламутні, можу зливатися між собою. Утворюють S- та R-форми колоній. При переході з S в R-форму втрачають здатність синтезувати капсулу. На рідких середовищах із сироваткою та 0,2% глюкозою дають рівномірне помутніння та невеликий пластівцевий осад. При тривалому культивуванні осад збільшується.

Стійкість. Пневмококи відносять до групи нестійких мікроорганізмів. У сухому харкотинні вони зберігаються до двох місяців. Чи здатні довго зберігатися при низьких температурах; при температурі 60 ° С вмирають протягом 3-5 хвилин. 3% розчин карболової кислоти вбиває їх за 1-2 хвилини. На пневмококи згубно діють оптохін (в концентрації 1:100000) та жовч, що використовують для ідентифікації бактерій.

Пневмококи відрізняються від інших мікроорганізмів за низкою властивостей (табл.1).

Таблиця 1 Біохімічні властивості пневмококів

Тест-субстрат	Результат	Тест-субстрат	Результат
Зростання при 100 ° С
		Рафінозу
Середа з 6,5% Nad
а-гемоліз
В-гемоліз		Трегалоза
		Фосфатаза
Гіппурат		в-галактозидазу
Гліцерин
Позначення: "+" - 90% або більше позитивних штамів; (+) – 80-89% штамів позитивні; d – 21-79% штамів позитивні; (-) – 11-20% штамів позитивні; «- - 90% або більше негативних штамів.

Антигенна структура. У пневмококів виявлено кілька видів антигенів полісахаридний, 0-соматичний антиген, що знаходиться в клітинній стінці; полісахаридні капсульні К-антигени та М-білок. Соматичний полісахаридний антиген аналогічний С-субстанції інших стрептококів. Спорідненість обумовлює подібність хімічної структури рибіттейхоєвих кислот, пов'язаних з холінфосфатом. Капсульні антигени також мають полісахаридну природу, складаються з моносахарів, що повторюються в різному поєднанні: D-глюкози, D-галактози і L-рамнози. За структурою капсульних антигенів пневмококи поділяють на 84 серовари. Слід пам'ятати, що капсульні антигени перехресно реагують з антисироватками до антигенів стрептококів груп А та В, а також із сироватками до антигенів клебсієл та ешерихії. При переході з S R-форму капсульні антигени втрачаються. Для серотипування пневмококів випускають групові сироватки, що позначаються латинськими літерами (А, В, С, D і т.д.) і сероваріантні, що позначаються римськими цифрами. Аглютинуючу сироватку III не включають у суміші сироваток. Її випускають окремо та її не можна розводити. У людини найчастіше виділяють пневмококи І, ІІ та ІІІ сероваріантів. Вони найвірулентніші для людини, тому реакцію аглютинації спочатку ставлять, використовуючи антисироватки до цих варіантів. При негативному результаті реакцію аглютинації ставлять із сумішшю сироваток А, У, З т.д. (До отримання позитивного результату), а потім з окремими антисироватками. Для швидше ідентифікації сероварів застосовують реакцію Нойфельда (імунного набухання капсули). Метод заснований на здатності капсул пневмококів збільшуватися в об'ємі в присутності гомологічної антисироватки, що реєструють світлооптичною мікроскопією. Капсульні полісахариди мають сенсибілізуючі властивості, що виявляються у розвитку реакції гіперчутливості уповільненого типу, що виявляється за допомогою шкірних проб.

Чинники патогенності. Основним фактором є капсула, що захищає бактерії від мікробіцидного потенціалу фагоцитів і відводить їх від дії опсонінів. Некапсульовані штами практично авірулентні і зустрічаються рідко. Більшу частину пулу протипневмококових AT складають AT до Аг капсули. Важливою функцією капсули та М-білка також є забезпечення адгезії на слизовій оболонці. Істотне значення має субстанція-С, що специфічно взаємодіє з С-реактивним білком. Наслідком такого реагування є активація комплементарного каскаду та вивільнення медіаторів гострої фази запалення; їхня акумуляція в легеневій тканині стимулює міграцію поліморфноядерних фагоцитів. Формування потужних запальних інфільтратів супроводжується порушенням гомеостазу легеневої тканини та її опечением. Пневмококи утворюють ендотоксин, а- та в-гемолізини (пневмолізини), лейкоцидин. а-пневмолізин є термолабільним білком, здатним нейтралізувати 0-стрептолізин,

еритрогенна речовина, нейрамінідазу. Пневмококи також синтезують ряд ферментів, які вносять внесок у патогенез уражень - мурамідазу, гіалуронідазу (сприяє поширенню мікроорганізмів у тканинах), пептидазу (розщеплює IgA).

Патогенез уражень. Біотопом пневмококів є верхні дихальні шляхи. Патогенез більшості пневмоній включає аспірацію слини, що містить S. pneumoniae, та проникнення бактерій у нижні відділи повітроносних шляхів. Істотне значення має порушення захисних дренюючих механізмів - кашльового поштовху та мукоциліарного кліренсу. У дорослих частіше спостерігають пайові ураження легень, у дітей та осіб похилого віку домінують перибронхіальні або вогнищеві ураження. Формування потужних запальних інфільтратів супроводжується порушенням гомеостазу легеневої тканини та її опечением. Інфекції найвірулентнішим 3 сероваром можуть супроводжуватися утворенням порожнин у паренхімі легень. З первинного вогнища збудник може проникати в плевральну порожнину та перикард або гематогенно дисемінувати та викликати менінгіти, ендокардити та суглобові ураження.

Клінічні прояви. Класична пневмококова пневмонія починається раптово; відзначають підйом температури тіла, продуктивний кашель та біль у грудях. У ослаблених осіб та літніх захворювання розвивається повільно, з незначною лихоманкою, порушенням свідомості та ознаками легенево-серцевої недостатності. Стрептококові менінгіти реєструють у всіх вікових групах; вони характеризуються бурхливим початком з підйомом температури тіла, ригідністю шийних м'язів, головним болем, нудотою та блюванням. Поразки судин мозкових оболонок часто супроводжуються втратою свідомості; серед дітей та у похилому віці летальність може досягати 80%. Досить часто у осіб з імунодефіцитами (наприклад, ВІЛ-інфікованих) або пацієнтів зі спленектомією відзначають гематогенні пневмококові ураження, а також синусити, мастоїдити, середні отити, ендокардити та перитоніти. Після перенесеного захворювання розвивається нестійкий імунітет, що носить типоспецифічний характер та зумовлений появою антитіл проти типового капсульного полісахариду.

Лікування. Основу терапії пневмококової інфекції становлять антибіотики – пеніцилін, тетрациклін, левоміцетин, ванкоміцин, рифампіцин, цефтріаксон.

Профілактика. Неспецифічна профілактика пневмококових інфекцій спрямована на виявлення хворих та носіїв з подальшим їх лікуванням. Для специфічної профілактики інфекції дітям віком від двох років, дорослим, які входять до груп ризику, а також здоровим особам у період спалаху захворювання проводять щеплення полівалентною полісахаридною вакциною «Пневмовекс 23». Препарат містить 23 капсульних полісахаридних антигенів пневмококів (1, 2, 3, 4, 5, 6В 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11А, 12F, 14, 15В, 17F, 18С, 1-9F, , 23F, 33F). Антигени

пневмококів отримані з 90% штамів, виділених з крові хворих на інвазійну пневмококову інфекцію в США і відповідних штамів, що зустрічалися в Росії. Імунізація проводиться дворазово з інтервалом 5-8 років.

Після вакцинації створюється штучний, активний, типоспецифічний імунітет.

Лабораторна діагностика. "Золотим стандартом" є виділення збудника. Слід пам'ятати, що необхідно досліджувати швидко, т.к. Бактерії схильні до швидкого аутолізу, обумовленого активністю внутрішньоклітинних ферментів. Матеріалом для дослідження є мокротиння, плевральний випіт та інші ексудати, спинномозкова рідина, кров, слиз з носа і зіва, що відокремлюється очних виразок, виділення з вуха, сеча, шматочки органів (у разі смерті хворого). Сигнальна відповідь на пневмококову інфекцію може бути видана при виявленні в мазках з мокротиння нейтрофілів та грампозитивних ланцетоподібних диплококів (не менше 10 у полі зору). В іншому випадку вдаються до виділення збудника.

Перший етап дослідження.Патологічний матеріал піддають попередньої бактеріоскопії (крім крові). Мокроту поміщають у стерильну чашку Петрі, відмивають, петлею захоплюють гнійно-слизову оболонку, розтирають на предметному склі, висушують і фарбують за Грамом. У мазку виявляють грампозитивні ланцетовидної або овальної форми коки, оточені капсулою (капсулоутворення спостерігається тільки у пневмококів, виділених від хворих та заражених тварин). Виявлення капсул пневмококів можна проводити за методом Буррі-Гінса. Посів патологічного матеріалу виробляють на 5-10% кров'яний або сироватковий агар і середовище збагачення (8-10% сироватковий бульйон). При підозрі на сепсис пневмококової природи 5-10 мл крові хворого засівають на 45-90 мл сироваткового бульйону. Спинно-мозкову рідину, якщо вона прозора, центрифугують і кілька крапель з осаду засівають на живильні середовища. Як середовище збагачення використовують напіврідкий сироватковий агар. Посіви інкубують при 37 С 24 години. Найкращим методом виділення чистої культури пневмококів є зараження білих мишей патологічним матеріалом. Мокроту, відмиту в чашці Петрі стерильним фізіологічним розчином, розтирають у стерильній ступці стерильним маточкою або битим склом при додаванні фізіологічного розчину щодо 1:2-1:5. Завис відстоюють, надосадову рідину в кількості 0,5-1 мл вводять білим мишам внутрішньочеревно. За наявності у матеріалі пневмококів миші гинуть протягом 72 годин. У мазках з органів та крові виявляють типові пневмококи. Також виробляють посів органів та крові на сироватковий бульйон та на чашки Петрі з кров'яним або сироватковим агаром.

Другий етап дослідження.Вивчають характер зростання на живильних середовищах. На кров'яному агарі колонії пневмококів дрібні, круглі, з рівними

краями, ніжні, оточені зоною позеленіння середовища (що дуже нагадує зростання зелених стрептококів). На сироватковому агарі колонії ніжні, напівпрозорі та прозорі. При бактеріоскопії мазків, забарвлених за Грамом. виявляють грампозитивні диплококи без капсул. Після бактеріоскопії колонії, підозрілі на пневмококи пересіюють на скошений сироватковий або кров'яний агар або сироватковий бульйон. При мікроскопії мазків з середовища збагачення поряд з різною мікрофлорою можна виявити грампозитивні коки, що розташовуються парами або короткими ланцюжками. Матеріал із середовища збагачення пересіюють на щільні живильні середовища. Посіви інкубують при 37°З 24 години.

Третій етап дослідження.На скошеному кров'яному агарі пневмококи утворюють ніжний тонкий напівпрозорий наліт. На сироватковому бульйоні пневмококи викликають помутніння та легкий осад. У мазках із щільних поживних середовищ пневмококи можуть мати різний вигляд. Поряд з диплококами подовженої форми із загостреними зовнішніми кінцями, що нагадують полум'я свічки, зустрічають клітини правильної овальної та круглої форми. У бульйонній культурі пневмококи часто розташовуються ланцюжками. На підставі морфологічних і культуральних властивостей пневмококи важко відрізнити від зелених стрептококів, тому для їх диференціювання запропоновано набір спеціальних тестів:

Розчинність у жовчі (дезоксихолатна проба);

Здатність розкладати інулін;

Чутливість до оптохіну;

Реакція аглютинації зі специфічними антипневмококовими сироватками;

Здатність розкладати глюкозу, мальтозу, сахарозу, лактозу, маніт, сорбіт та саліцин.

Найбільш доступними методами, що диференціюють пневмококи від інших стрептококів є проба з оптохіном (пригнічує їх зростання); від зелених стрептококів їх відрізняє здатність ферментувати інулін, а також чутливість до жовчі.

Дезоксіхолатна проба. Після попередньої бактеріоскопії в пробірку з 5 краплями стерильної бичачої жовчі вносять 10 крапель, виділеної чистої культури (краще бульйонної). Контролем є культура, внесена в пробірку з 5 краплями фізіологічного розчину. Через 30-60 хвилин інкубації при 37 ° С спостерігають повний лізис культури у вигляді просвітлення в пробірці з жовчю, в контрольній пробірці суміш залишається каламутною. Слід пам'ятати, що авірулентні культури пневмокока стійкі до жовчі.

Стійкість до жовчі також можна перевіряти посівом 10% жовчний бульйон. У середу вносять матеріал, що досліджується, при цьому бульйон каламутніє. Після 24-годинної інкубації при 37 °С на наявність пневмококів вкаже просвітлення бульйону в результаті лізису бактерій.

Також можна використовувати диски, просочені 20% розчином жовчі. Диски перешкодять на культуру, що виросла в чашці і інкубують 1-2 години при 37 °С. За наявності пневмококів колонії лізуються навколо диска з відривом 1 -2 мм.

Проба на інулін. Культуру пневмокока засівають на середу з інуліном. Для цього до 100 мл прогрітої при 56 °С протягом 30 хв бичачої сироватки додають 200 мл стерильної дистильованої води, 18 мл лакмусової настойки і 3 г інуліну, стерилізують текучим паром 30 хвилин. Посіви інкубують при 37 С 24 години. Пневмокок розкладає інулін, внаслідок чого середовище червоніє. Зелений стрептокок не викликає почервоніння середовища.

Проба з оптохіном. Випробовувану культуру пневмокока засівають на сироватковий бульйон з оптохіном у розведенні 1:100000 або 1:200000. Пневмокок на такому середовищі не росте. Також можна визначити чутливість до оптохіну та посіву на 10% кров'яний агар, що містить оптохін у розведенні 1:50000. Контроль є посів культури на кров'яний агар. Пневмококи не ростуть на середовищі з оптохіном, на контрольному середовищі спостерігається зростання пневмококів. Можна використовувати диски, просочені 6 мкг оптохіну, які після посіву накладають на поверхню середовища. У пневмококів навколо диска утворюється зона затримки зростання не менше 18 мм діаметром.

Проба на вірулентність. Добову культуру пневмокока, вирощену на сироватковому бульйоні, розводять 1% стерильною пептонною водою (рН - 7,6) або слаболужним бульйоном до 1:10. Розведену культуру вводять внутрішньочеревно-білим мишам вагою 16-20 гр в об'ємі 0,5 мл і спостерігають протягом 72 годин. З органів загиблої миші роблять висіви на живильні середовища та мікроскопують мазки-відбитки. До високовірулентних культур відносять пневмококи, що викликають загибель мишей після введення культури у розведенні 1:10. Авірулентні культури не викликають загибелі мишей.

Серотипування пневмококів. 18-годинну культуру перевіряють у реакції мікроаглютинації по Себіну. На предметне скло наносять 4 краплі культури пневмокока. До 1 краплі додають краплю антипневмококової сироватки типу 1, до 2-ї - сироватку типу II, до 3-ї - сироватку - 111, до 4-ї - краплю нормальної сироватки. Суміші на склі перемішують петлею і розглядають під лупою або мікроскопом при малому збільшенні. У позитивному випадку в одній із перших трьох крапель спостерігається аглютинація. Тип пневмокока визначають реакції аглютинації зі специфічними аглютинуючими сироватками перших трьох фіксованих типів. Культури, які не аглютинуються зазначеними типами сироваток, відносять до Х-групи. Реакцію ставлять в такий спосіб. Розливають 18-годинну бульйонну культуру по 0,5 мл у пробірки. Потім вносять у рівній кількості сироватки, розведені фізіологічним розчином у співвідношенні 1:5. Контролями служать 2 пробірки, одна з яких містить випробувану культуру в суміші з

нормальною кролячою сироваткою, а інша - лише досліджувану культуру. Вміст пробірок ретельно струшують і ставлять на 2 години термостат при температурі 37 °С, після чого проводять попередній облік реакції. Остаточні результати відзначають після додаткового витримування за кімнатної температури протягом 20 годин. Аглютинацію оцінюють на чотири плюси, якщо вміст пробірок повністю просвітлюється, а аглютинаційна культура є щільною плівкою, що не розбивається при струшуванні; на три плюси якщо при повному просвітленні вмісту пробірки аглютинуюча культура легко розбивається на частини; на два плюси - якщо просвітлення не настає, у каламутному вмісті пробірки добре видно неозброєним оком частинки аглютинованої культури; при аглютинації на один плюс у пробірці виявляють дрібнозернисту суміш склеєних пневмококів. При негативній реакції, видимій оком, аглютинації не спостерігають;

вміст пробірок після струшування є рівномірною каламутною.

Типування пневмококів Х-групи проводять за допомогою групових

сироваток, що містять суміш типових аглютинуючих сироваток, взятих

у рівних обсягах. Готують наступні групові сироватки шляхом

змішування рівних обсягів нерозведених типових діагностичних

сироваток (Lund, I960):

А -1, ІІ, ІV, V, XVIII серовари;

В – VI, VIII, XIX серовари;

З – VII, XX. XXIV, XXXI, XL серовари;

D – IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII серовари;

Е – X, XXI. XXXIII, XXXIX серовари;

F – XII. XVII. XXII, XXXVII, XXXII, XLI серовари;

G – XIII, XXV. XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII серовари;

J – XLIII. XLIV, XLV, XLVI серовари.

Аглютинуючу сироватку III типу використовують per se (без змішування з іншими типовими сироватками) через труднощі її отримання досить високому титрі. Типування проводять у два прийоми: спочатку за допомогою групових сироваток, а потім з індивідуальними сироватками тієї групи, з якою була отримана позитивна реакція. Серотипування пневмококів застосовують переважно для епідеміологічних досліджень результатів специфічної серотерапії та серопрофілактики.

Мікроаглютинацію пневмококів за методом Себіна можна отримати при змішуванні антипневмококових сироваток з ексудатом з черевної порожнини миші, зараженою мокротинням хворого. Вже через чотири години після зараження в ексудаті виявляють чисту культуру пневмококів, що дає позитивну аглютинацію по Себіну.

Прискорені методи виявлення та типування пневмококів. 1. Метод Нойфельда чи феномен набухання капсули пневмокока. По одному грудочку свіжовиділеного мокротиння хворого наносять на три

покривне скло, до кожного з них додають краплю нерозведеної специфічної антипневмококової сироватки (1, II, III типів) і краплю синьки Леффлера. Краплі ретельно змішують, покривають предметним склом із лункою, змащеною по краях вазеліном. Через дві хвилини розглядають висячі краплі під мікроскопом із імерсійною системою. При позитивному випадку видно різке збільшення капсул пневмококів. При негативному результаті капсули ледь заповітні. Реакція набухання специфічна і дає позитивного результату коїться з іншими капсульными бактеріями. Її не застосовую г для дослідження мокротиння від хворих, лікованих сульфаніламідами та антибіотиками, т.к. у цьому випадку можуть виділятися безкапсульні пневмококи.

2. Метод преципітації. 5-10 мл мокротиння кип'ятять у водяній бані до отримання щільного згустку. Потік розтирають і додають невелику кількість фізіологічного розчину, знову кип'ятять кілька хвилин для вилучення специфічного полісахариду з пневмококів. Суспензію центрифугують, з отриманою прозорою рідиною і специфічними типовими сироватками в преципітаційних пробірках ставлять реакцію кільцепреципітації. Поява кільця межі зіткнення рідин свідчить про позитивний результат.

3. Визначення капсул пневмококів по Буррі. На кінець предметного скла наносять краплю досліджуваного матеріалу та краплю туші. Суміш перемішують і роблять мазок, висушують на повітрі та, не фіксуючи, мікроскопують. Фон препарату – темно-димчастий, мікробні тіла та їх капсули не забарвлюються. Препарат, виготовлений Буррі, можна зафіксувати сумішшю Никифорова, промити водою, пофарбувати фуксином Циля, розведеним 1:3 протягом 3-5 хвилин. На темному тлі мазка виділяються незабарвлені капсули, всередині яких знаходяться бактерії яскраво-малинового кольору (метод Гінса).

Скарлатинувикликають різні серотипи бета - гемолітичних стрептококів, що володіють М-антигеном і продукують еритрогенін (токсігенні стрептококи серогрупи А) - (Streptococcus pyogenes). За відсутності антитоксичного імунітету виникає скарлатина, за наявності – ангіна.

клінічна картина

 Інтоксикація – лихоманка, загальне нездужання, головний біль.

 Скарлатінова висипка - дрібноточкова, при помірному натисканні скляним шпателем цятки видно чіткіше. При більш сильному натисканні висипка поступається місцем золотисто-жовтуватому відтінку шкіри. Виступає на 1-3 день хвороби та локалізується головним чином на щоках, у паху, з боків тулуба. Шкіра носогубного трикутника залишається блідою та вільною від висипу. Висипання зазвичай тримається 3-7 днів, потім згасає, не залишаючи пігментації. Характерно згущення висипки на згинах кінцівок - пахвової, ліктьової, підколінної областей.

 Скарлатинова мова – на 2-4 день хвороби мова хворого стає виражена зернистою, яскраво-червоного кольору, так звана "малинова" мова.

 Ангіна – постійний симптом скарлатини. Може протікати важче за звичайну ангіну.

 Лущення шкіри - виникає після зникнення висипу (через 14 днів від початку захворювання): в області долонь і стоп воно великопластинчасте, починається з кінчиків пальців; на тулубі, шиї, вушних раковинах лущення висівкове.

Пневмококи, таксономія. Властивості. Серологічні групи. Відмінні ознаки від інших стрептококів. Захворювання, що викликаються. Принципи та методи лабораторної діагностики.

Морфологія та біологічні властивості. Пневмококи (Streptococcus pneumoniae) є парно розташовані коки овальної, злегка витягнутої ланцетовидної форми, що нагадують полум'я свічки. Вони можуть розташовуватися також короткими ланцюжками, нагадуючи стрептококи. Нерухливі, суперечка не утворюють, грампозитивні.
Вирощують їх у середовищах з додаванням білка: кров'яних, сироваткових, з асцитичною рідиною. На кров'яному агарі колонії пневмококів дрібні, що нагадують росинки, прозорі в світлі, що проходить, з вдавленим центром, оточені зоною неповного гемолізу, зеленуватого відтінку, подібні з колоніями зеленого стрептокока. На рідких середовищах дають ніжне помутніння, іноді утворюючи осад. Біохімічно досить активні: розкладають глюкозу, лактозу, мальтозу, інулін та інші вуглеводи із утворенням кислоти, не розріджують желатину, не утворюють індолу. Розщеплення інуліну є диференціально-діагностичною ознакою, що допомагає відрізнити пневмококи від стрептококів, які інулін не розкладають. Важливою відмітною ознакою служить здатність пневмококів розчинятися в жовчі, у той час як стрептококи добре в ній зберігаються.

Патогенез та клініка. Пневмококи є збудниками крупозної пневмонії у людини. Вони можуть викликати повзучу виразку рогівки, катари верхніх дихальних шляхів, менінгіт, ендокардит, ураження суглобів та інші захворювання.

Після перенесеного захворювання імунітет малонапружений, короткочасний, типоспецифічний.
Мікробіологічна діагностика Матеріалом для дослідження є мокрота, кров, мазок із зіва, спинномозкова рідина. Зважаючи на те, що пневмокок швидко гине, патологічний матеріал необхідно якнайшвидше доставити в лабораторію для дослідження.

Менінгококи. Таксономія, властивості. Антигенна структура менінгококів, класифікація. Патогенез менінгококової інфекції, клінічні прояви. Принципи та методи мікробіологічної діагностики. Диференціація збудника менінгококової інфекції та інших менінгококів. Специфічна профілактика.

N.meningitidis (менінгококи).

Менінгокок - збудник менінгококової інфекції - суворого антропонозу з повітряно-крапельною передачею збудника. Основне джерело – носії. Природний резервуар – носоглотка людини. Морфологічні, культуральні та біохімічні властивості аналогічні гонококу. Відмінності - ферментують як глюкозу, а й мальтозу, продукують гемолизин.Мають капсулу, що має більші розміри та іншу будову, ніж у гонокока.

Антигенний склад.Мають чотири основні антигенні системи.

1. Капсульні групоспецифічні полісахаридні антигени. Штами серогрупи А найчастіше викликають епідемічні спалахи.

2. Білкові антигени зовнішньої мембрани. За цими антигенами менінгококи серогруп В і С поділені на класи та серотипи.

3. Родо- та видоспецифічні антигени.

4. Ліпополісахаридні антигени (8 типів). Мають високу токсичність, викликають пірогенну дію.

Чинники патогенності.Фактори адгезії та колонізація - пили та білки зовнішньої мембрани. Фактори інвазивності - гіалуронідаза та інші ферменти, що продукуються (нейрамінідаза, протеази, фібринолізин). Велике значення мають капсульні полісахаридні антигени, що захищають мікроорганізми від фагоцитозу.

ІмунітетСтійкий, антимікробний.

Лабораторна діагностиказаснована на бактеріоскопії, виділенні культури та її біохімічної ідентифікації, серологічних методах діагностики. Посів матеріалу виробляють на тверді та напіврідкі живильні середовища, що містять кров, асцитичну рідину, сироватку крові.

Оксидаза-позитивні культури розглядають як ті, що належать до роду Neisseria. Для менінгококу характерна ферментація глюкози та мальтози. Приналежність до серогрупи визначають реакції аглютинації (РА).

Гонококки. Таксономія, властивості. Патогенез гонококової інфекції, особливості імунітету. Принципи та методи лабораторної діагностики гострої та хронічної гонореї, бленореї. РСК Борде-Жангу, призначення, механізм, облік реакції. Профілактика бленнореї у новонароджених. Профілактика та лікування гонореї. Специфічна терапія.

N.gonorrheae (гонокок).

Гонокок - збудник гонореї - венеричного захворювання із запальними проявами в сечостатевих шляхах. Субстрат для колонізації – епітелій уретри, прямої кишки, кон'юнктиви ока, глотки, шийки матки, маткових труб та яєчника.

Диплококи, добре фарбовані метиленовим синім та іншими аніліновими барвниками, плеоморфні (поліморфізм). Дуже примхливі до умов культивування та живильних середовищ. З вуглеводів ферментують лише глюкозу.

Антигенна структурадуже мінлива - характерні фазові варіації (зникнення антигенних детермінант) та антигенні варіації (зміна антигенних детермінант).

Чинники патогенності.Основними факторами є пили, за допомогою яких гонококи здійснюють адгезію та колонізацію епітеліальних клітин слизової оболонки сечо- статевих шляхів, та ліпополісахарид(ендотоксин, що звільняється при руйнуванні гонококів). Гонококи синтезують IgAI-протеазу, що розщеплює IgA.

Лабораторна діагностика.Бактеріоскопічна діагностика включає забарвлення за Грамом та метиленовим синім. Типові ознаки гонокока - грамнегативне забарвлення, бобоподібні диплококи, внутрішньоклітинна локалізація.

Посів виробляють на спеціальні середовища (КДС-МПА з м'яса кролика або бичачого серця з сироваткою, асцитагар, кров'яний агар).

Збудники газової анаеробної інфекції. Таксономія. Властивості. Характеристика токсинів. Патогенез, клінічні форми. Принципи та методи лабораторної діагностики, препарати специфічної профілактики та лікування.

Газова гангрена - анаеробна поліклостридіальна (тобто викликана різними видами клостридій) ранова (травматична) інфекція. Основне значення має C.perfringens, рідше - C.novyi, а також інші види клостридій у стійких асоціаціях між собою, аеробними гнійними коками та гнильними анаеробними бактеріями.

C.perfringens - нормальний мешканець кишечників людини та тварин, у ґрунт потрапляє зі спорожненнями. Є збудником ранової інфекції – викликає захворювання при попаданні збудника в анаеробних умовах до ран. Має високу інвазивність і токсигенність. Інвазивність пов'язана з виробленням гіалуронідази та інших ферментів, що надають руйнівну дію на м'язову та сполучну тканини. Головний фактор патогенності – екзотоксин, що надає гемо-, некро-, нейро-, лейкотоксичну та летальну дію. Відповідно до антигенної специфічності екзотоксинів виділяють серотипизбудника. Поряд із газовою гангреною C.perfringens викликає харчові токсикоінфекції (в їх основі – дія ентеротоксинів та некротоксинів).

Особливості патогенезу.На відміну від гнійних захворювань, викликаних аеробами, при анаеробній інфекції переважає запалення, а некроз, набряк, газоутворення в тканинах, отруєння токсинами та продуктами розпаду тканин.

Імунітет- переважно антитоксичний.

Лабораторна діагностикавключає бактеріоскопію ран, виділення та ідентифікацію збудника, виявлення та ідентифікацію токсину в біопробах з використанням реакції нейтралізації специфічними антитоксичними антитілами.

Профілактика та лікування.В основі попередження газової гангрени – своєчасна та правильна хірургічна обробка ран. При тяжких пораненнях вводять антитоксичні сироватки проти основних видів клостридій по 10 тисяч МО, з лікувальною метою - по 50 тисяч МО.

Клостридії правця. Таксономія. Властивості, характеристика токсинів. Патогенез захворювання. Східний правець. клініка. Принципи та методи лабораторної діагностики. Мета бактеріологічного дослідження, препарати специфічної профілактики та лікування.

Стовпняк - гостра ранова інфекція, що характеризується поразкою нейротоксинрухових клітин спинного та головного мозку, що проявляється у вигляді судом поперечно – смугастої мускулатури. Хворіють люди та сільськогосподарські тварини. Ґрунт, особливо забруднений випорожненнями людини і тварин, є постійним джерелом зараження правцем.

Збудник – C.tetani – велика спороутворююча грампозитивна паличка. Спори розташовуються термінально (вигляд барабанної палички), рухома за рахунок джгутиків – перитрихів. Обов'язковий анаероб. Спори мають дуже високу стійкість.

Антигенні властивості.Збудник має О-і Н-антигени.

Чинники патогенності.Головний фактор – найсильніший екзотоксин. Виділяють дві його основні фракції - тетаноспазмін (нейротоксин) та тетанолізин (гемолізин). Нейротоксин у центральну нервову систему проникає в ділянці міоневральних синапсів, передається від нейрона до нейрона в ділянці синапсів, накопичується в рухових зонах спинного та головного магзу, блокує синаптичну передачу. Смерть настає від паралічу дихального центру, асфіксії (ураження м'язів гортані, діафрагми, міжреберних м'язів) або паралічу серця.

Лабораторна діагностика.Мікробіологічна діагностика включає бактеріоскопію вихідних матеріалів, посів для виділення збудника та його ідентифікацію, виявлення правцевого токсину.

Виділення збудника проводять за стандартною для анаеробів схемою, використовуючи різні щільні та рідкі (середовище Кітта - Тароцці) середовища, ідентифікацію - на основі морфологічних, культуральних, біохімічних та токсигенних властивостей.

Найбільш простий та ефективний метод мікробіологічної діагностики – біопроба на білих мишах. Одну групу заражають досліджуваним матеріалом, другу (контрольну) - після змішування проб з антитоксичною сироваткою. За наявності правцевого токсину дослідна група мишей гине, контрольна – залишається живою.

Лікування та екстрена профілактика.Використовують донорський протиправцевий імуноглобулін (антитоксин), антитоксичну сироватку (350 МЕ/кг), антибіотики (пеніциліни, цефалоспорини). Для створення вакцинального імунітету використовують правцевий анатоксин, частіше у складі АКДС вакцини (анатоксини правця, дифтерії та вбиті кашлюкові палички).

Клостридії ботулізму. Таксономія. Властивості. Характеристика токсинів, на відміну екзотоксинів збудників інших харчових інфекцій. Принципи та методи лабораторної діагностики. Препарати специфічної профілактики та лікування.

Ботулізм - важка харчова токсикоінфекція, пов'язана з вживанням продуктів, заражених C.botulinum, і характеризується специфічним ураженням центральної нервової системи. Свою назву отримала від латів. botulus – ковбаса.

Властивості збудника.Великі поліморфні грампозитивні палички, рухливі, мають перитрихіальні джгутики. Спори овальні, розташовуються субтермінально (тенісна ракетка). Утворюють вісім типів токсинів, що відрізняються антигенною специфічністю, і відповідно виділяють 8 типів збудника. Серед найважливіших характеристик – наявність чи відсутність протеолітичних властивостей (гідроліз казеїну, продукція сірководню).

Токсин має нейротоксичну дію. Токсин потрапляє в організм з їжею, хоча може накопичуватися при розмноженні збудника в тканинах організму. Токсин термолабільний, хоча для повної інактивації необхідно кип'ятіння до 20 хв. Токсин швидко всмоктується у шлунково-кишковому тракті, проникає в кров, вибірково діє на ядра довгастого мозку та гангліозні клітини спинного мозку. Розвиваються нервово – паралітичні явища – порушення ковтання, афонія, дисфагія, офтальмо – плегічний синдром (косоокість, двоїння в очах, опущення повік), паралічі та парези глоткових та гортанних м'язів, зупинка дихання та серцевої діяльності.

Лабораторна діагностика.Принципи – загальні для клостридій.

Лікування та профілактика.В основі – раннє застосування антитоксичних сироваток (полівалентних або при встановленні типу – гомологічних). В основі профілактики – санітарно – гігієнічний режим при обробці харчових продуктів. Особливо небезпечні грибні консерви домашнього приготування та інші продукти, що зберігаються в анаеробних умовах.

11. Синьогнійна паличка. Таксономія. Властивості. Захворювання, що викликаються.
Роль у внутрішньолікарняних інфекціях. Принципи та методи лабораторної діагностики.

Рід pseudomonas, P. aeruginosa (синьогнійна паличка) – один з основних збудників локальних та системних гнійно – запальних процесів в умовах медичних стаціонарів.

Збудник поширений повсюдно (вода, ґрунт, рослини, тварини), зустрічається в нормі у людини (найчастіше - у кишечнику, на шкірі та слизових). Морфологія- грамнегативна пряма або злегка вигнута паличка, рухлива, в мазках розташовується одиночно, парами або короткими ланцюжками. Синтезує слиз (капсульна речовина), особливо вірулентні мукоїдні штами.

Культуральні характеристики.Є аеробом і має відповідний тип дихання набором ферментів (цитохроми, цитохромоксидаза, дегідрази. На рідких середовищах утворює сірувато-сріблясту плівку. На щільних середовищах часто спостерігається феномен райдужного лізису. Вже до кінця доби внаслідок синтезу піг. піоціанінуз'являється синьо-зелене фарбування культури.

Біохімічні властивості.Для синьогнійної палички характерна низька цукролітична активність (окислює тільки глюкозу), висока протеолітична активність та утворення на кров'яному агарі зони бета-гемолізу. Синтезує триметиламін, що надає культурам приємного запаху жасмину. Продукує вироблення бактеріоцинів. піоцинів.

Антигенні та патогенні властивості.Основні антигени синьогнійної палички - групоспецифічний соматичний О-антиген і типоспецифічний джгутиковий Н-антиген. Про-антигенний комплекс - агрегат ЛПС з білками та ліпідами клітинної стінки, має властивості ендотоксину, є одним з головних факторів патогенності. Синьогнійна паличка має великий набор факторів патогенності - ендотоксином (ЛПС, аналогічний іншим грамнегативним бактеріям), поруч екзотоксинів - цитотоксином, екзоензимом S, гемолізинами, екзотоксином А (найважливіший, нагадує дифтерійний екзотоксиназ), ферментами.

Лабораторна діагностика.Свою назву P.aeruginisa отримала за блакитно - зелене забарвлення ран і перев'язувального матеріалу. Основним методом діагностики є бактеріологічний. Важливим є виявлення пігменту піоціаніну. Лікування та специфічна профілактика.Специфічної профілактики немає. При харчових токсикоінфекціях та дисбактеріозах кишечника, викликаних синьогнійною паличкою, ефективний комплексний інтесті - бактеріофаг, до складу якого входить псевдомонадний фаг. З антибактеріальних препаратів частіше застосовують аміноглікозиди, цефалоспорини та хінолони.

Умовно-патогенні грамнегативні бактерії – збудники гнійно-запальних процесів (протей, клебсієли, чудова паличка та ін.), таксономія. Загальна характеристика ентеробактерії. Принципи та методи лабораторної діагностики.

Рід Klebsiella.

Рід Klebsiella відноситься до сімейства ентеробактерій. Особливість представників роду – здатність утворювати капсулу. Основний вид – K. Pneumoniae. Викликають опортуністичні ураження – госпітальні пневмонії, інфекції сечовивідних шляхів, діареї у новонароджених. Клебсієли викликають мастити, септицемії та пневмонії у тварин, постійно виявляються на шкірі та слизових оболонках людини та тварин. Клебсієли – прямі нерухомі палички різних розмірів. Факультативні анаероби. Оксидаза - негативні, каталаза-позитивні.

Чинники патогенності.До них відносять полісахаридну капсулу (К-антиген), ендотоксин, фімбрії, сидерофорну систему (зв'язує іони двовалентного заліза та знижує їх вміст у тканинах), термолабільні та термостабільні екзотоксини.

Клінічні прояви.Для K. pneumoniae (subsp. pneumoniae) характерні госпітальні бронхіти та бронхопневмонії, пайові пневмонії, інфекції сечовивідних шляхів, ураження мозкових оболонок, суглобів, хребта, очей, а також бактеремії та септикопіємії. Підвид ozaenae викликає особливу форму хронічного атрофічного риніту. озену.

Лабораторна діагностика.Основний метод – бактеріологічний. Лікування.Одна з особливостей клебсієлл - їхня множинна лікарська стійкість і розвиток уражень на тлі зниження резистентності організму. Антибіотики застосовують при генералізованих і млявих хронічних формах клебсієльозів як правило у поєднанні з препаратами, що стимулюють імунітет.

Рід Proteus.

Рід Proteus відноситься до сімейства ентеробактерій. Рід отримав назву на честь сина Посейдона Протея, здатного змінювати свій вигляд. Представники роду здатні змінювати зовнішні прояви зростання на щільних живильних середовищах, а також відрізняються найбільшим плеоморфізмом (мінливістю морфології), порівняно з іншими ентеробактеріями.

Протеї розщеплюють тирозин, відновлюють нітрати, оксидаза – негативні, каталаза – позитивні. Вони мешкають в кишечниках багатьох видів хребетних і безхребетних тварин, грунті, стічних водах, органічних залишках, що розкладаються. Можуть викликати інфекції сечовивідних шляхів у людини, а також септичні ураження у пацієнтів з опіками та після хірургічних втручань. Досить часто викликають харчові токсикоінфекції. Найчастіше роль патології мають P.vulgaris і P.mirabilis.

Культуральні характеристики.Протеї ростуть на простих середовищах у широкому діапазоні температур. Оптимальна рН – 7,2-7,4, температура – ​​від +35 до 37 градусів Цельсія. Колонії протеїв в О-формі округлі, напівпрозначні та опуклі, Н-форми дають суцільне зростання. Зростання протеїв супроводжується гнильним запахом. Характерний феномер роїння, Н-форми дають на МПА характерне повзуче зростання у вигляді блакитно-димчастої ніжної вуалі. При сівбі за методом Шушкевича в конденсаційну вологу свіжоскошеного МПА культура поступово піднімається у вигляді вуалі вгору поверхнею агару. На МПБ відзначають дифузне помутніння середовища із густим білим осадом на дні.

Чинники патогенності.До них відносять ЛПС клітинної стінки, здатність до “роєнія”, фімбрії, протеази та уреазу, гемолізини та гемаглютиніни.

Лабораторна діагностика.Основний метод – бактеріологічний. Використовують диференціально – діагностичні середовища (Плоскірєва), середовища збагачення та МПА за методом Шушкевича. Лікування. При дисбактеріозах кишечника, пов'язаних з протеями (коліти), можна використовувати протейний фаг та препарати, до складу яких він входить (інтестіфаг, колитейний бактеріофаг).

"Чудова паличка" (Serratia marcescens), вид бактерій у складі пігментних мікроорганізмів. Грамнегативні рухливі (перитрихи) неспороносні палички. За типом обміну – факультативний анаероб. На поверхні агару утворює гладкі або зернисті темно- та яскраво-червоні колонії з металевим блиском. Мешкає у ґрунті, воді, на харчових продуктах. Розвиваючись на хлібі (при підвищеній вологості), у молоці забарвлює їх у червоний колір; такі продукти не допускаються до реалізації. Умовно патогенна для тварин та людини; може викликати нагноєння.

13. Ешеріхії. Таксономія. Захворювання, що викликаються кишковою паличкою. Патогенні варіанти діареєгенних ешерихій. Антигенна структура, класифікація. Особливості мікробіологічної діагностики. Диференціація діареєгенних ешерихій від умовно-патогенних.

Ешеріхії - найбільш поширені аеробні бактерії кишечника, здатні за певних умов викликати велику групу захворювань людини, як кишкової (діарея), так і позакишкової (бактеремія, інфекції сечовивідних шляхів та ін) локалізації. Основний вид – E.coli (кишкова паличка) – найпоширеніший збудник інфекційних захворювань, що викликаються ентеробактеріями. Цей збудник є показником фекального забруднення, особливо води.

Культуральні характеристики.На рідких середовищах E.coli дає дифузне помутніння, на щільних середовищах утворює S і R форми колоній. На основний для ешерихій середовищі Ендо лактозоферментуючі кишкові палички утворюють інтенсивно червоні колонії з металевим блиском, не ферментуючі - блідо-рожеві або безбарвні колонії з більш темним центром, на середовищі Плоскірєва - червоні з жовтуватим відтінком, на середовищі Левіна - темно .

Біохімічні властивості.Кишкова паличка в більшості випадків ферментує вуглеводи (глюкозу, лактозу, маніт, арабінозу, галактозу та ін) з утворенням кислоти і газу, утворює індол, але не утворює сірководень, не розріджує желатин.

Основні фактори патогенності діареєгенних E.coli.

1. Фактори адгезії, колонізації та інвазії, пов'язані з пилками, фімбріальними структурами, білками зовнішньої мембрани. Вони кодуються плазмідними генами та сприяють колонізації нижніх відділів тонкої кишки.

2. Екзотоксини: цитотонини (стимулюють гіперсекрецію клітинами кишечника рідини, порушують водно-сольовий обмін та сприяють розвитку діареї) та ентероцитотоксини (діють на клітини стінки кишечника та ендотелію капілярів).

3. Ендотоксин (ліпополісахарид).

Залежно від наявності різних факторів патогенності діареєгенні кишкові палички поділені на п'ять основних типів: ентеротоксигенні, ентероінвазивні, ентеропатогенні, ентерогеморагічні, ентероадгезивні.

4. Для патогенних кишкових паличок характерне вироблення бактеріоцинів (коліцинів).

Ентеротоксигенні E.coliмають високомолекулярний термолабільний токсин, схожий на дію з холерним, викликають холероподобную діарею (гастроентерити в дітей віком молодшого віку, діарею мандрівників та інших.).

Ентероінвазивні кишкові паличкиздатні проникати та розмножуватися у клітинах епітелію кишечника. Викликають профузну діарею з домішкою крові та великою кількістю лейкоцитів (показник інвазивного процесу) у випорожненнях. Клінічно нагадує дизентерію. Штами мають деяку подібність із шигелами (нерухомі, не ферментують лактозу, мають високі ентероінвазивні властивості).

Ентеропатогенні E.coli- Основні збудники діареї у дітей. В основі уражень – адгезія бактерій до епітелію кишечника з ушкодженням мікроворсинок. Характерна рідка діарея і виражене зневоднення.

Ентерогеморагічне кишкові паличкивикликають діарею з домішкою крові (геморагічний коліт), гемолітико – уремічний синдром (гемолітична анемія у поєднанні з нирковою недостатністю). Найбільш частий серотип ентерогеморагічних кишкових паличок – О157: Н7.

Ентероадгезивні E.coliне утворюють цитотоксини, слабко вивчені.

Лабораторна діагностика.Основним підходом є виділення чистої культури на диференційно-діагностичних середовищах та її ідентифікація за антигенними властивостями. Ставлять РА з набором полівалентних ОК (до - і К-антигенів) сироваток.

Серед хвороботворних стрептококів S. pneumoniae (пневмокок) займає особливе місце. Він відіграє важливу роль в інфекційній патології людини. Цей вид є одним із основних збудників крупозного запалення легень. За далеко неповними даними щорічно у світі налічується понад 500 тис. зипадків пневмоній, спричинених пневмококами, особливо часто у дітей та людей похилого віку. Крім запалення легень цей мікроб викликає менінгіт, ендокардит, перитоніт, отит, риніт, гайморит, сепсис, повзучу виразку рогівки та низку інших захворювань. Для проведення лабораторної діагностики використовують бактеріоскопічний, бактеріологічний та біологічний методи. Матеріалом для дослідження мокротиння, гній, кров, спинномозкова рідина, слиз із рото- та носоглотки, виділення з гайморової пазухи, очі та вуха. Важливо негайно відправляти матеріал в лабораторію і досліджувати дуже швидко, оскільки пневмококи схильні до автолізу.

Бактеріоскопічне дослідження

Бактеріоскопічне дослідження матеріалу (крім крові) зводиться до виготовлення двох мазків. Один з них фарбують за Грамом, другий - за Буррі-Гінс, що дозволяє виявити капсулу. Пневмококи розташовуються у вигляді ланцетоподібних диплококів, оточених загальною капсулою. Якщо поле зору виявляють 10 і більше типових диплококів, можна з великою ймовірністю зробити висновок про наявність S.pneumoniae. Однак первинна мікроскопія не дає права поставити остаточний діагноз, оскільки в мазках можуть бути капсульні непатогенні диплококи - представники нормальної мікрофлори. Тому потрібно проводити посів клінічного матеріалу та виділяти чисту культуру.

Бактеріологічне дослідження

При сепсисі біля ліжка хворого сіють 10 мл крові у флакон, що містить 100 мл сироваткового або цукрового бульйону, інкубують 18-20 год при 37 °С, потім висівають на кров'яний агар, виділяють та ідентифікують чисту культуру. При менінгіті ліквор центрифугують і осад роблять посів на кров'яний агар. На ньому пневмококи ростуть у вигляді маленьких круглих колоній, оточених зеленою зоною, у центрі колонії видно характерне вдавлення. Посів мокротиння або гною на живильні середовища робити недоцільно, оскільки присутня сапрофітна мікрофлора пригнічує ріст S. pneumoniae. Краще досліджуваний матеріал увести в черевну порожнину білих мишей. Постановка біопроб - швидкий, надійний і точний метод виділення чистої культури пневмококів. Білі миші дуже чутливі до цих бактерій і вже через 10-12 год після зараження пневмококи проникають у кров та паренхіматозні органи, викликаючи сепсис. Посів крові із серця чи шматочків внутрішніх органів під час розтину тварин дозволяє виділити чисту культуру збудника. Для ідентифікації пневмококів використовують такі властивості. На відміну від інших видів стрептококів, S. pneumoniae не росте на середовищі з оптохіном, ферментується інулін і дуже чутливий до дії жовчі (дезоксихолатна проба). Швидкий лізис пневмококів під дією жовчі можна виявити, якщо до 1 мл бульйонної культури додати 0,5 мл жовчі. Через 15-20 хв перебування у термостаті настає повний лізис бактеріальних клітин. Для визначення сероварів пневмококів (зараз їх налічується 85) використовують реакцію аглютинації на склі з типовими сироватками або феномен "набухання капсул". У присутності гомологічної сироватки капсула пневмококів сильно набрякає. Ще краще проводити серотипування за допомогою комерційних реагентів у реакціях латекс-аглютинації або коаглютинації, завдяки яким виявляють капсульні антигени. Серед стрептококів важливий ще рід Enterococcus, найбільш значущими видами якого є E.faecalis, E.faecium і E.durans. Вони досить поширені у природі. Основною їх екологічною нішою є кишечник людини і тварин, але їх виявляють і у складі нормальної мікрофлори шкіри промежини, сечостатевих органів, рото- та носоглотки. Вони можуть викликати нагноєння ран, бактеріємії, ураження урогенітальної системи, особливо у хворих з катетерами, що тривало функціонують, харчові токсикоінфекції, дисбактеріози кишкового тракту, рідше ендокардити. У мазках з досліджуваного матеріалу ентерококи розташовуються парами, короткими ланцюжками або у вигляді скупчень, грампозитивні. Бактеріологічна діагностика ентерококових інфекцій проводиться без будь-яких труднощів, оскільки ці бактерії добре ростуть на простих середовищах. Селективним їм агар диф-3 (до 600 мл 3% МПА додають 400 мл 40% жовчі). Через 24 години інкубації колонії, що виросли мають розміри 0,4-1,0 мм сірого кольору. На кров'яному агар навколо колоній виникає неповний або повний гемоліз. На відміну від зеленячих стрептококів ентерококи можуть рости на МПА з 6,5% NaCl, що редукують молоко з метиленовим синім при 37°С через 4-6 годин. Ідентифікацію виділених культур проводять за морфологічними, культуральними та біохімічними ознаками.

Сторінка 40 з 91

Збудником крупозної пневмонії (запалення легенів) є пневмокок - Diplococcus pneumoniae, вперше виявлений Пастером у слині людини, яка загинула від сказу (1881).
Морфологія та тинкторіальні властивості. Пневмококи (рис. 67 і 68 на вклейці) є парними коками, що мають подовжену форму на кшталт ланцету. Тому їх інакше називають ланцетоподібними диплококами. Утворюючи короткі ланцюжки, пневмококи набувають схожості зі стрептококами, у зв'язку з чим II. Ф. Гамалея назвав їх Streptococcus lanceolatus. Розмір клітин коливається не більше від 0,5X0,75 до 1X1,5 мк. Суперечка та джгутиків не мають. Відмінною особливістю пневмокока є утворення капсули, яка буває добре виражена в патологічних матеріалах (мокрота, кров тощо). При культивуванні на живильних середовищах капсула втрачається. Пневмококи легко сприймають анілінові фарби і фарбуються за Грамом позитивно.
Культуральні та біохімічні властивості.

Мал. 68. Пневмококи в мазку з мокротиння.

Пневмококи є аеробами та факультативними анаеробами. Температурний оптимум близько 37 °. Зростають на середовищах, що містять тваринний білок (кров'яний або сироватковий агар, асцитагар).
На поверхні агару через 24 години утворюються дрібні колонії, що нагадують стрептококові, але дрібніші і прозоріші.
На скошеному агарі при рясному засіві виходить дуже ніжний прозорий наліт, що складається з найдрібніших колоній, що незливаються, на бульйоні - легке помутніння і невеликий пластівцевий осад.
На желатині свіжовиділені штами зростання не дають. Старі лабораторні штами пневмококів можуть давати дрібні білуваті колонії вже за 18-22°. Желатину не розріджують.
На молоці ростуть добре, створюючи його з утворенням кислоти.
На кров'яному агарі навколо колоній утворюється зона неповного гемолізу із зеленувато-бурим фарбуванням середовища.

Мал. 67. Пневмококи в чистій культурі з бульйону.

Пневмококи розкладають сахарозу, рафінозу та лактозу. Найважливішим ознакою є розкладання інуліну. Більшість стрептококів цією властивістю не має. Вірулентні пневмококи розчиняються в жовчі.
Антигенна структура та серологічні типи пневмококів. У цитоплазмі пневмококів знаходиться протеїновий антиген, загальний для всіх пневмококів. Цей антиген зумовлює їх видову специфічність. У капсулі містяться специфічні полісахаридні антигени (гаптен), що відрізняються за своїм хімічним складом у різних пневмококів (типові антигени). На підставі цих типових антигенів за допомогою реакції аглютинації та преципітації всі пневмококи розділені на три основні групи (I, II, III) та четверту збірну групу (Х-групу). До складу Х-групи входить понад 70 типів.
резистентність. На штучних живильних середовищах пневмококи швидко гинуть (4-7 днів). Під шаром вазелінової олії в рідких та напіврідких середовищах, що містять білок, вони зберігають життєздатність протягом 3-12 місяців.
Висушування пневмококи переносять добре: у сухому мокроті на розсіяному світлі вони зберігаються до 2 місяців. При нагріванні до 52-55 ° гинуть через 10 хвилин, при 60 ° - ще швидше. У розчині карболової кислоти (3%) пневмококи гинуть через 1-2 хвилини.
Особливо чутливі пневмококи до оптохіну. Під впливом останнього вони гинуть при концентрації 1:1000000.
Токсиноутворення та патогенність для тварин. Отрута пневмококів відноситься до ендотоксинів. З лабораторних тварин до пневмокока більш чутливі білі миші та кролики. Парентеральне введення вірулентних пневмококів через 24-48 годин спричиняє загибель тварин при явищах сепсису. При розтині на місці ін'єкції виявляється фібринозний ексудат-селезінка збільшена та гіперемована.
Патогенез та захворювання у людини. Вхідними воротами інфекції служить зазвичай слизова оболонка зіва. Впровадження пневмококів в організм і проникнення їх у тканину легені можуть, мабуть, відбуватися як через лімфатичну та кровоносну систему, так і безпосередньо через розгалуження бронхів. Найбільш частим захворюванням є крупозна пневмонія, яка характеризується раптовим початком, високою температурою, іноді з ознобом, болем у боці при диханні, головним болем, іноді втратою свідомості, маренням, сильним збудженням. Надалі з'являється кашель з характерним іржаво-червоним мокротинням. У легенях спостерігається процес, що захоплює частіше одну, рідше – дві-три частки.
Джерелами інфекції є хвора людина та бактеріоносій. Зараження ззовні відбувається як аерогенно – крапельним шляхом від носія, так і за допомогою пилової інфекції. Пневмококи можуть довго зберігатися у висохлому мокротинні (близько 2 місяців) і надходити з пилом у повітря.
При обстеженні здорових людей у ​​носоглотці нерідко виявляються патогенні пневмококи, тому не виключена можливість аутоінфекції, причому істотну роль відіграють фактори, що послаблюють опір організму, наприклад, переохолодження.
Крім крупозної пневмонії, пневмококи викликають запалення середнього вуха, мозкових оболонок (менінгіт), а також слизової оболонки носа та повітроносних пазух, ангіну, повзучу виразку рогівки та запалення слізного мішка.
Імунітет. Перенесена пневмонія не дає імунітету. Захворювання може повторюватись неодноразово. Це пояснюється наявністю багатьох типів пневмококів і тим, що перенесена пневмонія підвищує чутливість організму до пневмококів.
У сироватці перехворілих містяться антитіла (аглютиніни та ін.).
На момент кризи при пневмонії концентрація антитіл у крові досягає значного титру, і фагоцитоз різко посилюється (І. Я. Чистович). На підставі цих даних імунітет при пневмонії треба розглядати переважно як фагоцитарний, в якому велику роль відіграють антитіла (бактеріотропіни).
Мікробіологічна діагностика Матеріалам для дослідження при пневмококових захворюваннях служить мокротиння, кров і гній, взяті з різних вогнищ уражень, рідше спинномозкова рідина.
Патологічний матеріал (виключаючи кров) досліджують бактеріоскопічно, бактеріологічно та шляхом зараження білих мишей. До останнього способу доводиться вдаватися тому, що вихідний матеріал, особливо мокротиння, зазвичай містить багату сторонню мікрофлору, яка при прямому посіві матеріалу на живильні середовища ускладнює виділення пневмокока.
Мазки з мокротиння, гною і т. д. забарвлюються за Грамом. Під мікроскопом виявляються оточені капсулою ланцетоподібні диплококи, забарвлені за Грамом позитивно.
Для виділення культур роблять посів на кров'яний агар чи асциг-агар. Через 24-48 годин зростання при 37 ° у разі присутності пневмокока з'являються характерні колонії. Колонії висівають на скошений сироватковий або асцит-агар і виділену культуру перевіряють на розчинність у жовчі та на здатність розкладати інулін.
Зараження білої миші - найбільш правильний шлях виділення культури пневмокока. Матеріал від хворого або трупа (мокроту, гній, шматочок органу і т. д.) поміщають у стерильну чашку, потім розтирають у стерильній ступці, з 1-2 мл стерильного бульйону і 0,5 мл цієї суспензії вводять внутрішньочеревно білої миші. Після загибелі миші, що настає протягом 12-48 годин, роблять посіви крові, взятої з серця, і майже завжди отримують чисту культуру пневмокока.
При підозрі на сепсис 10-20 мл крові засівають в асцитичний або сироватковий бульйон. Після збагачення з бульйону роблять висіви на кров'яний агар і виділену чисту культуру ідентифікують за морфологічними та біохімічними ознаками.
Специфічна терапія та хіміотерапія. В даний час для лікування крупозної пневмонії з великим успіхом застосовують сульфаніламідні препарати та антибіотики (пеніцилін, біоміцин, тетрациклін та ін.).

До роду Streptococcus відносяться: Streptococcus pyogenes (гемолітичний) та Streptococcus pneumoniae (пневмокок). Вперше стрептококи було виявлено Більротом (1874), Л. Пастером (1879). Вивчено вони були Е. Розенбахом (1884).

Streptococcus pyogenes (гемолітичний)

Морфологія. Стрептококи - це коки, що мають кулясту форму. Діаметр кожного кока в середньому 0,6-1 мкм, проте для них характерний поліморфізм: зустрічаються дрібні та великі коки, суворо кулясті та овальні. Стрептококи розташовуються ланцюжком, що є результатом поділу їх в одній площині. Довжина ланцюжків різна. На щільному живильному середовищі ланцюжки зазвичай короткі, на рідких - довгі. Стрептококи нерухомі, не мають суперечки (див. рис. 4). Свіжовиділені культури іноді утворюють капсулу. На ультратонких зрізах видно мікрокапсулу, під нею розташована тришарова клітинна стінка і тришарова цитоплазматична мембрана. Грампозитивні.

Культивування. Стрептококи – факультативні анаероби. Зростають при температурі 37° З рН середовища 7,6-7,8. Оптимальними середовищами для їхнього вирощування є середовища, що містять кров або сироватку крові. На щільних живильних середовищах колонії стрептококів дрібні, плоскі, каламутні, сірого кольору. На агарі з кров'ю деякі різновиди стрептококів утворюють гемоліз. β-гемолітичні стрептококи утворюють чітку зону гемолізу, α-гемолітичні стрептококи утворюють невелику зелену зону (результат переходу гемоглобіну в метгемоглобін). Зустрічаються стрептококи, що не дають гемолізу.

На цукровому бульйоні стрептококи ростуть з утворенням пристінного та придонного дрібнозернистого осаду, бульйон при цьому залишається прозорим.

Ферментативні властивості. Стрептококи мають сахаролітичні властивості. Вони розщеплюють глюкозу, лактозу, сахарозу, маніт (не завжди) та мальтозу з утворенням кислоти. Протеолітичні властивості вони слабо виражені. Вони згортають молоко, желатин не розріджують.

Токсиноутворення. Стрептококи утворюють ряд екзотоксинів: 1) стрептолізини - руйнують еритроцити (О-стрептолізин має кардіотоксичну дію); 2) лейкоцидин – руйнує лейкоцити (утворюється високовірулентними штамами); 3) еритрогенний (скарлатинозний) токсин – обумовлює клінічну картину скарлатини – інтоксикацію, судинні реакції, висипання та ін. Синтез еритрогенного токсину детермінований профагом; 4) цитотоксини - мають здатність викликати гломерулонефрит.

У стрептококів виявлено різні антигени. У цитоплазмі клітини міститься видова нуклеопротеїдна природа антиген - єдиний для всіх стрептококів. На поверхні клітинної стінки розташовані протеїнові типові антигени. У клітинній стінці стрептококів виявлено полісахаридний груповий антиген.

За складом полісахаридної групоспецифічної фракції антигену всі стрептококи діляться на групи, що позначаються великими латинськими літерами А, В, С, D і т. д. до S. Крім груп, стрептококи розділені на серологічні типи, що позначаються арабськими цифрами.

Група А містить 70 типів. У цю групу входить більшість стрептококів, що викликають різні захворювання у людини. Група включає в основному умовно-патогенні для людини стрептококи. Група С включає патогенні для людини та тварин стрептококи. Група D складається з непатогенних для людини стрептококів, проте до цієї групи входять ентерококи, які є мешканцями кишечника людини та тварин. Потрапляючи до інших органів, вони зумовлюють запальні процеси: холецистити, пієліти та ін. Таким чином, їх можна віднести до умовно-патогенних мікробів.

Приналежність виділених культур до однієї із серологічних груп визначають за допомогою реакції преципітації з груповими сироватками. Для визначення серологічних типів використовують реакцію аглютинації з типоспецифічними сироватками.

Стрептококи досить стійкі у навколишньому середовищі. При температурі 60° гинуть через 30 хв.

У висушеному гною та мокротинні вони зберігаються місяцями. Звичайні концентрації речовин, що дезінфікують, гублять їх через 15-20 хв. Ентерококи значно стійкіші, розчини, що дезінфікують, вбивають їх тільки через 50-60 хв.

Сприйнятливість тварин. До патогенних стрептококів чутлива рогата худоба, коні, собаки, птахи. З лабораторних тварин чутливі кролики та білі миші. Однак стрептококи, патогенні для людини, не завжди є патогенними для експериментальних тварин.

Джерела інфекції. Люди (хворі та носії), рідше тварини або інфіковані продукти.

Шляхи передачі. Повітряно-краплинний та повітряно-пиловий, іноді харчовий, можливий контактно-побутовий.

Захворювання можуть виникати в результаті екзогенного зараження, а також ендогенно – при активації умовно-патогенних стрептококів, що мешкають на слизових оболонках зіва, носоглотки, піхви. Зниження опірності організму (охолодження, голодування, перевтома тощо) може призвести до виникнення аутоінфекцій.

Велике значення у патогенезі стрептококових інфекцій має попередня сенсибілізація – як наслідок раніше перенесеного захворювання стрептококової етіології.

При проникненні в кров'яне русло стрептококи зумовлюють септичний процес, що важко протікає.

Захворювання у людиничастіше викликають β-гемолітичні стрептококи серологічної групи А. Вони продукують ферменти патогенності: гіалуронідазу, фібринолізин (стрептокіназу), дезоксирибонуклеазу та ін. Крім того, у стрептококів виявляють капсулу, М-протеїн, що володіють антифатами.

Стрептококи викликають у людини різні гострі та хронічно протікаючі інфекції, як з утворенням гною, так і не нагноєві, що розрізняються за клінічною картиною та патогенезу. Нагножувальні - флегмони, абсцеси, ранові інфекції, ненагножувальні - гострі інфекції верхніх дихальних шляхів, бешихове запалення, скарлатина, ревматизм та ін.

Стрептококи часто викликають вторинні інфекції при грипі, корі, кашлюку та інших захворюваннях і нерідко ускладнюють ранові інфекції.

Імунітет. За характером імунітет - антитоксичний та антибактеріальний. Постінфекційний антимікробний імунітет малонапружений. Це пояснюється слабкою імуногенністю стрептококів та великою кількістю сероварів, що не дають перехресного імунітету. Крім цього, при стрептококових захворюваннях спостерігається алергізація організму, чим пояснюють схильність до рецидивів.

Профілактика. Зводиться до санітарно-гігієнічних заходів, зміцнення загальної резистентності організму. Специфічної профілактики не розроблено.

Лікування. Застосовують антибіотики. Найчастіше використовують пеніцилін, до якого стрептококи не набули стійкості, а також еритроміцин та тетрациклін.

Значення стрептокока в етіології ревмокардиту. Патогенез ревмокардитів вивчений недостатньо. Але на користь ролі стрептокока у розвитку цього захворювання говорить низка фактів:

1. У хворих на ревмокардит із зіва висівають В-гемолітичний стрептокок.

2. Ревматизм часто виникає після перенесеної ангіни, тонзилітів, фарингітів, що сенсибілізують організм.

3. У сироватці крові хворих виявляють антистрептолізин, антистрептогіалуронідазу – антитіла до стрептококових ферментів, токсинів.

4. Непрямим підтвердженням ролі стрептокока є успішне лікування пеніциліном.

Останнім часом у виникненні хронічних форм ревмокардиту надають значення L-форм стрептокока.

Профілактика загострень ревмокардиту зводиться до попередження стрептококових захворювань (наприклад, навесні та восени проводять профілактичний курс введення пеніциліну). Лікування зводиться до застосування антибактеріальних препаратів – пеніциліну.

Значення стрептокока в етіології скарлатини. Г. Н. Габричевський (1902) вперше висловив припущення про те, що гемолітичний стрептокок є збудником скарлатини. Але оскільки стрептококи, які виділяються при інших захворюваннях, не відрізнялися від збудників скарлатини, то ця думка не всіма поділялася. В даний час встановлено, що скарлатину викликають стрептококи групи А, що виробляють еритрогенний токсин.

У перехворілих виникає імунітет – стійкий, антитоксичний. Його напруженість визначають постановкою реакції Діка – внутрішньошкірним введенням еритрогенного токсину. У хворих на місце введення виникають гіперемія і набряк, що характеризується як позитивна реакція (відсутність антитоксину в сироватці крові). У перехворілих така реакція відсутня, оскільки антитоксин, що у них утворився, нейтралізує еритрогенний токсин.

Профілактика. Ізоляція, госпіталізація. Контактним, ослабленим дітям запроваджують гамма-глобулін. Специфічної профілактики не розроблено.

Лікування. Використовують пеніцилін, тетрациклін. У тяжких випадках вводять антитоксичну сироватку.

Мета дослідження: виявлення стрептокока та визначення його серовару.

Матеріал для дослідження

1. Слиз із зіва (ангіна, скарлатина).

2. Зішкріб з ураженої ділянки шкіри (бешиха, стрептодермія).

3. Гній (абсцес).

4. Сеча (нефрит).

5. Кров (підозра на сепсис; ендокардит).

Основні методи дослідження

1. Бактеріологічний.

2. Мікроскопічний.

Хід дослідження

Другий день дослідження

Виймають чашки з термостату та переглядають. За наявності підозрілих колоній із частини їх роблять мазки, фарбують за Грамом та мікроскопують. При виявленні в мазку стрептококів частину колонії, що залишилася, пересівають у пробірки на агар з сироваткою для виділення чистої культури і на бульйон з кров'ю в пробірках. До кінця дня 5-6-годинну культуру з бульйону або агару пересівають на бульйон Мартена з 0,25% глюкози для визначення серологічної групи реакції преципітації по Ленсфільд. Пробірки та флакони поміщають у термостат і залишають до наступного дня.

Третій день дослідження

Виймають посіви з термостата, перевіряють чистоту культури на скошеному агарі, роблять мазки, фарбують за Грамом та мікроскопують. За наявності чистої культури стрептокока виробляють посів на середовищі Гісса (лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу та маніт), молоко, желатин, 40% жовч і ставлять у термостат.

Переглядають бульйон Мартена. За наявності специфічного зростання ставлять реакцію преципітації за Ленсфільдом для визначення серологічної групи.

Постановка реакції преципітації за Ленсфільдом. Добову культуру, що виросла на бульйоні Мартена, розливають у кілька центрифужних пробірок, центрифугують протягом 10-15 хв (3000 об/хв).

Надосадову рідину зливають у банку з дезінфікуючим розчином, а осад заливають стерильним ізотонічним розчином хлориду натрію і знову центрифугують. До осаду, зібраного з усіх центрифужних пробірок, додають 04 мл 02% хлороводневої кислоти. Потім пробірку поміщають у водяну баню і кип'ятять 15 хв, періодично струшуючи. Після кип'ятіння отриману завись знову центрифугують. Антиген при цьому екстрагується в надосадову рідину, яку зливають у чисту пробірку та нейтралізують 0,2% розчином гідроксиду натрію до рН 7,0-7,2. Як індикатор додають бромтимоловий блакитний (0,01 мл 0,04% розчину). За вказаної реакції колір змінюється від солом'яно-жовтого до блакитного.

Потім 5 преципітаційних пробірок розливають по 0,5 мл антистрептококових групових сироваток, які готують імунізацією кроликів (див. розділ 19). У 1-у пробірку вносять сироватку А, в 2-ю - сироватку, в 3-ю - сироватку С, в 4-ю - сироватку D, в 5-ю - ізотонічний розчин натрію хлориду (контроль). Після цього пастерівською піпеткою у всі пробірки по стінці обережно нашаровують отриманий екстракт (антиген).

При позитивній реакції у пробірці з гомологічною сироваткою на межі екстракту із сироваткою утворюється тонке молочно-біле кільце (рис. 38).

Четвертий день дослідження

Виробляють облік результатів (табл. 25).

В даний час визначають дезоксирибонуклеазу, а також антистрептогіалуронідазу, антистрептолізин-О.

Контрольні питання

1. Які основні методи лабораторного дослідження для виявлення стрептококів Ви знаєте?

2. Для чого ставлять реакцію преципітації за Ленсфільдом?

3. Чому антиген при постановці цієї реакції має бути прозорим? Опишіть техніку постановки цієї реакції.

Отримайте у викладача антистрептококові сироватки А, В, С, D та ізотонічний розчин натрію хлориду. Поставте реакцію преципітації, результати покажіть викладачеві та замалюйте.

Поживні середовища

Агар із кров'ю(Див. розділ 7).

Агар із сироваткою(Див. розділ 7).

Середовища Гісса(Сухі).

М'ясопептонний желатин (МПЗ). До 100 мл МПБ додають 10-15 г дрібно нарізаного желатину. Желатин повинен набухати при повільному нагріванні у водяній бані (при температурі 40-50 ° С). До розплавленого желатину додають 10% розчин карбонату натрію (питна сода) і встановлюють рН 7,0. Потім одразу фільтрують через складчастий фільтр. Фільтрування відбувається повільно. Для прискорення процесу фільтрацію можна проводити у гарячому автоклаві. Профільтроване середовище розливають у пробірки 6-8 мл і стерилізують. Стерилізацію проводять або дробово при температурі 100 ° С 3 дні поспіль, або одномоментно при 110 ° С 20 хв в автоклаві. Охолодження середовища виробляють пробірках, поставлених вертикально.

Приготування молока. Свіже молоко доводять до кипіння, ставлять на прохолодне місце на добу, звільняють від вершків, знову кип'ятять. Залишають на добу та знімають верхній шар. Знежирене молоко фільтрують через шар вати, потім підлужують 10% розчином карбонату натрію до рН 7,2 і розливають у пробірки по 5-6 мл.

Бульйон Мартена. До м'ясної води додають рівну кількість пептону Мартена (фарш зі свинячих шлунків, що зазнали впливу хлороводневої кислоти). Отриману суміш кип'ятять 10 хв, підлужують 10% розчином натрію гідроксиду до рН 8,0, додають 0,5 натрію ацетату, знову кип'ятять і розливають у стерильний посуд. До бульйону Мартена додають 0,25% глюкози.

Середа Кітта - Тароцці(Див. розділ 34).

Streptococcus pneumoniae (пневмокок)

Пневмококи вперше описані Р. Кохом (1871).

Морфологія. Пневмококи - це диплококи, у яких сторони клітин, звернені один до одного, сплощені, а протилежні сторони витягнуті, тому вони мають ланцетоподібну форму, що нагадує полум'я свічки (див. рис. 4). Розмір пневмококів 0,75-0,5 × 0,5-1 мкм, розташовуються вони парами. У рідких живильних середовищах часто утворюють короткі ланцюжки, набуваючи подібності до стрептококів. Превмококи нерухомі, не мають суперечки, в організмі утворюють капсулу, що оточує обидва коки. У капсулі міститься термостійка речовина антифагін (що захищає пневмокок від фагоцитозу та дії антитіл). При зростанні на штучних живильних середовищах пневмококи втрачають капсулу. Пневмококи грампозитивні. У старих культурах трапляються грамнегативні бактерії.

Культивування. Пневмококи – факультативні анаероби. Зростають при температурі 36-37 ° С і рН середовища 7,2-7,4. Вони вимогливі до середовищ, оскільки можуть синтезувати багато амінокислоти, тому ростуть лише середах з додаванням нативного білка (крові чи сироватки). На агарі із сироваткою утворюють дрібні, ніжні, досить прозорі колонії. На агарі з кров'ю виростають вологі колонії зеленувато-сірого кольору, оточені зеленою зоною, що є результатом переходу гемоглобіну в метгемоглобін. Пневмококи добре ростуть у бульйоні з додаванням 0,2% глюкози та в бульйоні із сироваткою. Зростання в рідких середовищах характеризується дифузним помутнінням та пилоподібним осадом на дні.

Ферментативні властивості. Пневмококи мають досить виражену сахаролітичну активність. Вони розщеплюють: лактозу, глюкозу, сахарозу, мальтозу, інулін із утворенням кислоти. Чи не ферментують маніт. Протеолітичні властивості вони виражені слабо: молоко вони згортають, желатин не розріджують, індол не утворюють. Пневмококи розчиняються в жовчі. Розщеплення інуліну та розчинення в жовчі є важливою діагностичною ознакою, що відрізняє Streptococcus pneumoniae від Streptococcus pyogenes.

Чинники патогенності. Пневмококи продукують гіалуронідазу, фібринолізин та ін.

Токсиноутворення. Пневмококи утворюють ендотоксин, гемолізин, лейкоцидин. Вірулентність пневмококів пов'язана також із наявністю в капсулі антифагіну.

Антигенна структура та класифікація. У цитоплазмі пневмококів є загальний для всієї групи протеїновий антиген, а в капсулі - полісахаридний антиген. По полісахаридному антигену всі пневмококи поділяють на 84 серовари. Серед патогенних для людини найчастіше зустрічаються І, ІІ, ІІІ серовари.

Стійкість до факторів довкілля. Пневмококи відносяться до групи нестійких мікроорганізмів. Температура 60 ° С губить їх через 3-5 хв. До низьких температур та висушування вони досить стійкі. У висушеному харкотинні зберігають життєздатність до 2 міс. На живильному середовищі вони зберігаються трохи більше 5-6 днів. Тому при культивуванні необхідно робити пересівання через кожні 2-3 дні. Звичайні розчини речовин, що дезінфікують: 3% фенол, сулема в розведенні 1:1000 гублять їх через кілька хвилин.

Особливо чутливі пневмококи до оптохіну, який вбиває їх у розведенні 1:100000.

Сприйнятливість тварин. Природним господарем пневмококів є людина. Однак пневмококи можуть викликати захворювання у телят, ягнят, поросят, собак та мавп. З експериментальних тварин до пневмокока високочутливі білі миші.

Джерела інфекції. Хвора людина та бактеріоносій.

Шляхи передачі. Повітряно-крапельний шлях, може бути повітряно-пиловою.

Вхідні ворота. Слизова оболонка верхніх дихальних шляхів, очей та вуха.

Захворювання у людини. Пневмококи можуть викликати гнійно-запальні захворювання різної локалізації. Специфічними для пневмококів є:

1) крупозна пневмонія;

2) повзуча виразка рогівки;

Найбільш частим захворюванням є крупозна пневмонія, що захоплює одну, рідше дві або три частки легені. Захворювання протікає гостро, супроводжується високою температурою, кашлем. Закінчується зазвичай критично.

Імунітет. Після перенесеного захворювання залишається нестійкий імунітет, оскільки пневмонія характеризується рецидивами.

Профілактика. Зводиться до санітарно-профілактичних заходів. Специфічної профілактики не розроблено.

Лікування. Використовують антибіотики – пеніцилін, тетрациклін та ін.

Контрольні питання

1. Морфологія пневмококів. Культивування та ферментативні властивості.

2. Які фактори зумовлюють патогенність пневмококів та що захищає пневмококи від фагоцитозу?

3. Що є основними воротами пневмококової інфекції. Які захворювання викликають пневмококи?

Мікробіологічне дослідження

Мета дослідження: виявлення пневмокока.

Матеріал для дослідження

1. Мокрота (пневмонія).

2. Слиз із зіва (ангіна).

3. Виділене з виразки (повзуча виразка рогівки).

4. Виділення з вуха (отит).

5. Гній (абсцес).

6. Плевральний пунктат (плеврит).

7. Кров (підозра на сепсис).

1 (Краще брати ранкове мокротиння (при специфічній пневмонії мокротиння має іржавий колір).)

Основні методи дослідження

1. Мікроскопічний.

2. Мікробіологічний.

3. Біологічний.

Хід дослідження

Біологічна проба. Трохи (3-5 мл мокротиння) емульгують у стерильному бульйоні, 0,5 мл цієї суміші вводять внутрішньочеревно білої миші. Через 6-8 годин у миші відзначаються ознаки захворювання. У цей час пневмокок вже можна виявити в ексудаті черевної порожнини. Ексудат беруть стерильним шприцом. З нього роблять мазки, фарбують за Грамом та мікроскопують. Для виділення чистої культури ексудат засівають на агар із сироваткою. Якщо миша гине або хворіє, роблять посів крові із серця на агар із сироваткою крові для виділення чистої культури. Посіви ставлять у термостат.

Прискорений метод визначення типу пневмокока(Реакція мікроаглютинації). 4 краплі ексудату з черевної порожнини зараженої миші наносять на предметне скло. До першої краплі додають аглютинуючу сироватку I типу, до другої - сироватку II типу, до третьої - III типу, до четвертої - ізотонічний розчин натрію хлориду (контроль).

Сироватки I та II типу попередньо розводять у співвідношенні 1:10, а сироватку III типу – 1:5. Всі краплі розмішують, висушують, фіксують і фарбують розведеним фуксином. При позитивному результаті однієї з крапель відзначається нудьгування мікробів (аглютинація).

Другий день дослідження

Посіви виймають із термостату, переглядають та з підозрілих колоній роблять мазки. За наявності в мазках грампозитивних ланцетоподібних диплококів 2-3 колонії виділяють на скошений агар із сироваткою для отримання чистої культури. Посіви поміщають у термостат. З бульйону роблять мазки, фарбують за Грамом та мікроскопують.

Третій день дослідження

Посіви виймають із термостату. Перевіряють чистоту культури – роблять мазки, фарбують за Грамом та мікроскопують. За наявності у виділеній культурі грампозитивних ланцетоподібних диплококів проводять ідентифікацію виділеної культури шляхом посіву:

1) на середовищі Гісса (лактоза, глюкоза, сахароза, мальтоза) проводять посів звичайним способом - уколом у середу;

2) на середу з інуліном;

3) на середовище з оптохіном;

4) ставлять пробу із жовчю.

Проба на інулін. Досліджувану культуру засівають на живильне середовище, що містить інулін та лакмусову настойку, і ставлять у термостат. Через 18-24 год посіви виймають із термостата. За наявності пневмококів середовище забарвлюється в червоний колір (стрептококи консистенцію і колір середовища не змінюють).

Визначення чутливості до оптохіну. Виділену культуру засівають на 10% агар з кров'ю, що містить оптохін 1:50000. Пневмококи, на відміну від стрептококів, не ростуть на середовищах, що містять оптохін.

Проба з жовчю. В аглютинаційні пробірки наливають по 1 мл досліджуваної бульйонної культури. В одну з них додають краплю кролячої жовчі, друга пробірка служить контролем. Обидві пробірки поміщають у термостат. Через 18-24 год настає лізис пневмококів, який виявляється у просвітленні каламутного бульйону. У контролі завись залишається каламутною.

Пробу з жовчю можна поставити на щільному поживному середовищі. Для цього на колонію пневмококів, які виросли в чашках з агаром і сироваткою, наносять крупинку сухої жовчі - колонія розчиняється - зникає.

Четвертий день дослідження

Виробляють облік результатів (табл. 26).

Примітка. до - розщеплення вуглеводів із утворенням кислоти.

В даний час широко використовуються серологічні методи дослідження (РСК та РІГА) для визначення стрептококових антитіл. Визначення групи та серовару виділеної культури виробляють за допомогою флюоресціюючих антитіл.

Визначення вірулентності пневмокока. Добову бульйонну культуру пневмокока розводять 1% пептонною водою від 10 -2 до 10 -8 , 0,5 мл кожного розведення вводять двом білим мишам. Культуру, що викликала загибель мишей у розведенні 10 -7 оцінюють як вірулентну, у розведенні 10 -4 -10 -6 вважають середньовірулентною. Культура, що не викликала загибель мишей, авірулентна.

Контрольні питання

1. Які методи виділення чистої культури пневмококів Ви знаєте?

2. Яка тварина найбільш чутлива до пневмокока?

3. Які реакції ставлять з ексудатом зараженої миші та з якою метою?

4. Від яких представників гнійних коків слід диференціювати пневмокок і за допомогою якої проби?

5. Як визначити вірулентність пневмококів?

Завдання

Складіть схему дослідження мокротиння, вказавши його етапи днями.

Поживні середовища

Агар із сироваткою(Див. розділ 7).

Бульйон із сироваткою(Див. розділ 7).

Агар із кров'ю(Див. розділ 7).

Середовища Гісса(Сухі).

Середовище для проби з інуліном. До 200 мл дистильованої води додають 10 мл інактивованої бичачої сироватки, 18 мл лакмусової настойки та 3 г інуліну. Стерилізують текучим паром при 100 ° С 3 дні поспіль. Жовчний бульйон (див. розділ 7).