Príznaky mykózy nôh. Laboratórna diagnostika plesňových ochorení kože Nepoužíva sa pri diagnostike povrchových mykóz

Šupiny alebo vlasy sa umiestnia na podložné sklo (sklo je potrebné odmastiť) a naplnia sa jednou, dvoma alebo tromi kvapkami 30% roztoku hydroxidu draselného alebo lúhu sodného a prikryjú sa krycím sklíčkom. Prípravok 2-3 minúty za mierneho zahrievania na plameni liehového kahanca zľahka pritláčame krycím sklom, až kým
sivý oblak pri skúmaní šupín. Vlasy by sa nemali ničiť, takýmto zahrievaním iba napučiavajú. Mikroskopické vyšetrenie (zväčšenie 100-200 krát) so zatemnenou membránou odhaľuje hubové prvky - spóry alebo vlákna mycélia. Nevyhnutnou podmienkou úspešnosti mikroskopického vyšetrenia je dôkladné získanie šupín a chĺpkov, ktoré je potrebné odobrať z postihnutých miest špeciálnou pinzetou (pinzetou na mihalnice). Pozor si treba dať nielen na dobre viditeľné chĺpky, chrasty a šupinky, ale aj na sotva badateľné zvyšky vlasov (tzv. pahýle) a čierne bodky, ktoré sa odstraňujú skalpelom alebo histologickou ihlou. Nikdy by ste sa nemali uspokojiť s nasmerovaním pacienta na postihnuté miesta, samotný lekár musí starostlivo prezrieť celú pokožku hlavy.

Vo vlasoch postihnutých trichofytózou sú spóry húb usporiadané do reťazca. Pri mikrosporiách sú spóry oveľa menšie ako pri lišajníku, netvoria reťazce a nachádzajú sa na vonkajšej strane vlasu. Vo vnútri vlasov prebiehajú šnúry septovaného mycélia. Vlasy sú akoby oblečené v prikrývke a spore. Pri chrastavitosti sa pozorujú polymorfné spóry, hrubé, rôznorodé vlákna a zvyčajne vzduchové bubliny (obr. 48).

V tomto prípade huby úplne neovplyvňujú celé vlasy, ale neovplyvnené oblasti zostávajú.
Na získanie materiálu z hladkej kože sa šupiny zoškrabú. periférne oblasti lézie ostrou lyžicou alebo skalpelom. Je vhodnejšie zoškrabať nechty ostrým lekárskym nožom (skalpelom), odstrániť malé, ale hlboké časti z vnútorného povrchu nechtovej platničky alebo zoškrabať pityriázový prášok z rohovitých platničiek nechtu.
Východiskový materiál sa povarí v skúmavke s alkáliou a potom sa nechá v tejto skúmavke 12-20 hodín odstáť.
Potom sa obsah odstredí a sediment sa skúma pod mikroskopom (metóda N.A. Chernogubova).
Huby dobre rastú na umelých živných pôdach obsahujúcich sacharidy a bielkovinové látky. Obzvlášť bežné sú takzvané pôvodné Sabouraudovo médium, pivná mladina, agar a zelenina.

2. Laboratórne vyšetrenie patologického materiálu

2.1. Mikroskopické štúdie

Na detekciu morfologických prvkov huby - kvasinkových buniek, pseudomycélia, mycélia, konídiofórov, konídií, tkanivových foriem hlbokých mykóz - sa vyšetruje patologický materiál v natívnych a farbených preparátoch.

Tekutý patologický materiál sa vyšetruje v nezafarbenom stave v týchto čírych kvapalinách: zmes alkoholu s glycerínom (etylalkohol 1 diel, glycerín 2 diely, destilovaná voda 2 diely), Lugolov roztok (1 g kryštalického jódu, 2 g jodidu draselného, 150 ml vody), ako aj vo vode alebo fyziologickom roztoku. Na prípravu natívnych prípravkov sa na podložné sklíčko pomocou slučky alebo pipety nanesie kvapka materiálu, následne sa nanesú 1-2 kvapky číriacej kvapaliny, prekryjú sa krycím sklíčkom a mikroskopujú sa pri malom zväčšení 1:80 (10x okulár a objektív 8x), na ktorom môžete vidieť zhluky kvasinkových buniek a pseudomycélium, mycélium a ďalšie prvky húb. Pri veľkom zväčšení 1:400 je možné charakterizovať jednotlivé bunky.

Hustý patologický materiál (koža, nechtové šupiny) sa vloží do kvapky 10-20% roztoku KOH, mierne sa zahrieva nad plameňom horáka (kvôli lepšej macerácii), kým sa po obvode kvapky neobjavia kryštály alkálie. Potom sa kvapka prekryje krycím sklíčkom, zľahka sa naň pritlačí a mikroskopicky sa skúma najskôr pri malom zväčšení, aby sa našla mierka, potom pri veľkom zväčšení.

Vo vlasovom materiáli je plášť spór obklopujúci vlas (ektotrix) alebo vo vlasoch (endothrix) plesňové prvky zvyčajne veľmi jasne viditeľný. Vlasové lézie, ako aj veľkosť spór, sú špecifické pre rôzne typy dermatofytov. Je potrebná diferenciálna diagnostika medzi hubovými štruktúrami a artefaktmi. Medzi možné zdroje falošne pozitívnych výsledkov patria lipidové kvapôčky, vzduchové bubliny, textilné vlákna a takzvaná „mozaiková huba“. Lipidové kvapôčky sa môžu podobať kvasinkovým bunkám, čo je najčastejší nález v zle vyčistenom materiáli. Textilné vlákna zvyčajne ležia oddelene od materiálu pokožky, vlasov alebo nechtov. Sú väčšie ako hýfy húb, majú nerovnomernú hrúbku a neobsahujú prepážky. „Mozaiková huba“ je artefakt získaný počas kryštalizácie KOH v dôsledku nadmerného zahrievania prípravkov. Na rozdiel od húb neexistujú jasné delenie na bunky.

Dôležitým krokom pri diagnostike plesňových infekcií je príprava farebných prípravkov. Akýkoľvek patologický materiál (preparáty sterov, odtlačky orgánov, centrifugáty a samozrejme histologické rezy) musí prejsť tromi hlavnými typmi spracovania: 1) farbením metódou PAS na identifikáciu pravých húb – eumycét; 2) farbenie podľa Gramovej metódy alebo v modifikáciách podľa Gram-Weigerta, podľa Bogolepova, podľa Brown-Brenna - na identifikáciu sprievodnej bakteriálnej mikrobioty, na identifikáciu aktinomycét a nokardií; 3) farbenie podľa Ziehl-Nielsonovej metódy alebo modifikácia podľa Kinyonovej metódy - na identifikáciu acidorezistentných mikroorganizmov, predovšetkým na indikáciu a diferenciáciu s Mycobacterium tuberculosis, na zistenie pôvodcov lepry, nokardie a spórotvorných kvasiniek.

Metóda PAS (Piodic Acid Schiff) zahŕňa identifikáciu neutrálnych polysacharidov v stenách mikroorganizmov. V stenách väčšiny eumycét sa nachádza komplex glukán-mannán v rôznych koncentráciách, vďaka čomu dochádza k sfarbeniu.

Ukázalo sa, že prokaryoty (baktérie) sú PAS negatívne, vrátane aktinomycét a nokardií, ktoré sú predmetom záujmu mykológa. Pri tvorbe aktinomykotických drúz však vzniká takzvaný „cement“, ktorý zlepuje vegetatívne aktinomykotické mycélium do granuly, čím vzniká aj PAS-pozitívne sfarbenie. V tejto súvislosti je táto metóda použiteľná aj pri diagnostike aktinomykózy.

PAS reakcia (a jej modifikácia) je najdôležitejšou metódou diagnostiky tkanivových foriem mykotických infekcií. Metóda je založená na oxidácii glykolových skupín uhľohydrátov kyselinou jodistou alebo kyselinou chrómovou. Kyselina jodistá oxiduje 1,2 a 1,4 glykoly na aldehydy a ruší väzby medzi atómami uhlíka nesúcimi hydroxylové skupiny. Aldehydové skupiny môžu byť tiež detekované pomocou aldehydového Schiffovho činidla. In situ, v stenách huby, sa heteropolysacharidový komplex intenzívne sfarbí do fialovočervena (metodika - pozri prílohy).

Na potlačenie farby okolitých tkanív sa používa ošetrenie („protifarba“) svetlozelenou, metanilovou žltou a pod. V tomto prípade sa detegujú iba bunky húb, čo je veľmi užitočné v štádiu indikácie patogénu v tkanivách alebo v prípravkoch náteru. Zároveň nie je možné posúdiť reakciu tela a zmenu tkaniva na takéto lieky. Vždy je potrebné mať paralelné preparáty farbené metódou PAS s dodatočným farbením hematoxylínom.

V praxi sa používa nielen metóda PAS v klasickej verzii, ale aj jej rôzne modifikácie: oxidácia kyselinou chrómovou (namiesto kyseliny jodovej) - to je Bauerova reakcia, farbenie Gridley, impregnácia metenamínovým striebrom pomocou Gomory-Grocott metóda. Všetky sa úspešne používajú na detekciu tkanivových foriem húb a sú založené na rovnakom princípe (technika - pozri prílohu). Tabuľka 3.

Tabuľka 3

Tinktoriálne vlastnosti tkanivových foriem húb

(v patologickom materiáli, v histologických rezoch)

Oportunistické mykózy	Detekčné metódy
Kandidóza	Farbenie PAS alebo Gridley
Aspergilóza	Hematoxylín a eozín, impregnácia Gomori-Grocott
Zygomykóza	Hematoxylín a eozín
Kryptokokóza	Alciánová modrá (podľa Mowryho metódy) + PAS reakcia + hematoxylín
Pneumocystis	Farbenie podľa Bauerovej metódy, impregnácia podľa Gomory-Grocott, farbenie tionínom
Fusarium	Farbenie podľa metódy Romanovského-Giemsa, podľa metódy Wrighta
Scedosporiáza
Trichosporóza	Hematoxylín a eozín, farbenie Romanowsky-Giemsa
Feohyfomykóza a chromomykóza	Hematoxylín a eozín
Primárne patogénne mykózy:	Detekčné metódy
Kokcidioidóza	PAS reakcia + hematoxylín
Histoplazmóza	impregnácia podľa Gomoryho-Grocotta, morenie Bauerovou metódou, morenie metódou Romanovského-Giemsa
Severoamerická blastomykóza
Parakocidióza	PAS reakcia, impregnácia podľa Gomory-Grocott
Adiaspiromykóza	Hematoxylín a eozín, reakcia RAS
Pseudomykózy:	Detekčné metódy
Aktinomykóza	Hematoxylín a eozín, Gram-Weigertovo farbenie
Nokardióza	farbenie podľa Ziehl-Neelsenovej metódy, podľa Kinyonovej metódy, podľa Gramovej metódy.

Ak sa predpokladá diagnóza kryptokokózy, je vhodné použiť metódy na špecifickú detekciu kapsulárneho materiálu Cr.neoformans obsahujúce glykozaminoglykány (kyslé polysacharidy). Na tento účel sa používa farbenie alciánovou modrou (podľa Mowryho metódy), bázickou hnedou (podľa Shubichovej metódy) a mucikarmínové farbenie. Veľmi užitočné je trojité farbenie: PAS reakcia, potom ošetrenie alciánovou modrou, potom hematoxylín. V tomto prípade je možná diferenciácia medzi kryptokokmi a tkanivovými formami iných húb s podobnou morfológiou.

Opis patologického materiálu (histologické preparáty) zahŕňa údaje o morfológii a veľkosti tkanivových foriem húb, ich farbiacich charakteristikách, vzťahu k hostiteľským tkanivám, prítomnosti fagocytózy a stanovení sprievodnej mikroflóry.

2.2. Výsev patologického materiálu a kvantitatívne počítanie buniek v mykózach spôsobených kvasinkovými hubami

Získanie kultúr húb je nevyhnutné na ich identifikáciu a stanovenie citlivosti na antimykotiká.

Pred vyšetrením sa spútum homogenizuje 5-10 minút trepaním so sterilnými guľôčkami. Ak spútum obsahuje veľa hlienu a je zle homogenizované, možno k nemu pridať 1-2 ml sterilného fyziologického roztoku. Spútum sa mikroskopicky vyšetruje v natívnych alebo zafarbených preparátoch. Ak mikroskopia spúta s veľkým zväčšením ukazuje hubové prvky v zornom poli, potom by sa mal vysievať v riedeniach 1:10, 1:100, 1:1000; ak sa nezistia hubové prvky, spúta sa vysieva nezriedené. Riedenie sa pripravuje v tekutom živnom médiu (sladina, Sabouraud, 1 % peptónová voda) alebo v sterilnom fyziologickom roztoku. Z každého riedenia sa pomocou špachtle naočkuje 0,1 ml na 2 šálky mladinového agaru, Sabouraud agaru alebo MPA s prídavkom antibakteriálnych antibiotík - penicilínu a streptomycínu, biomycínu (100-200 jednotiek/ml média). Živná pôda sa predsuší v termostate pri +37 C, pretože v prítomnosti kondenzátu môže byť rast kolónií súvislý. Plodiny sa inkubujú 48 hodín v termostate pri + 37 o C. Potom, ak dôjde k rastu rovnakého typu kolónií kvasiniek, kvantitatívne sa spočítajú. Výpočet počtu kvasinkových buniek (n) v 1 ml alebo 1 g testovaného materiálu sa vykonáva podľa vzorca n = авс, kde a je priemerný počet kolónií na jednej Petriho miske, b = 10 s objemom inokula 0,1 ml, c je stupeň zriedenia exkrétov (10 100 1000).

Príklad výpočtu: na miskách s riedením 1:1000 vyrástlo v priemere 60 kolónií, pričom 1 ml skúmaných exkrétov obsahuje 60 x 10 x 1000 = 600 000 kvasinkových buniek.

BAL, PREPLACHOVACIA tekutina priedušiek, čeľustných dutín, žlč (časti A, B, C), žalúdočná šťava, obsah dvanástnika, moč sa prenesú do centrifugačných skúmaviek a odstredia sa 10-15 minút, potom sa supernatant rýchlo vypustí. Zo sedimentu sa pripravujú natívne prípravky na mikroskopiu. Ak mikroskopia odhalí kvasinkové bunky v každom zornom poli, potom sa výsev uskutoční v riedeniach 1:100 a 1:1000, každé po 0,1 ml, na tuhé živné pôdy a inkubuje sa pri teplote 37 C počas 48 hodín. neodhalí kvasinkové bunky, sediment zasiate bez riedenia. Množstvo kvasinkovej flóry sa vypočíta na 1 ml patologického materiálu.

FECES sa odoberá odmernou lyžicou v množstve 0,2 g, vloží sa do 1,8 ml tekutej mladiny a dôkladne sa premieša sklenenou tyčinkou. Výsledné riedenie (1:10) sa nechá stáť 5-10 minút, pripravia sa riedenia 1:100, 1:1000 a naočkujú sa v objeme 0,1 ml na 2 Petriho misky s agarovým médiom. Množstvo kvasinkovej flóry sa zaznamenáva na 1 g výkalov.

Cerebrospinálna tekutina. Charakterizujte jeho vzhľad (priehľadný alebo zakalený, bezfarebný alebo farebný, prítomnosť krvi, sediment). Mikroskopické nátery zo sedimentu cerebrospinálnej tekutiny po centrifugácii. Pripravia sa tri prípravky: natívny - v kvapke sterilného fyziologického roztoku, natívny - v kvapke atramentu a náter na farbenie metódou PAS, Gramova a Alciánová modrá podľa Mowryho.

Mikroskopia cerebrospinálnej tekutiny v natívnych a farebných preparátoch nám umožňuje určiť prítomnosť pučiacich buniek kvasiniek a fragmentov mycélia húb, prípadne baktérií, ktoré spôsobujú hnisavú meningitídu (meningokok, pneumokok, Haemophilus influenzae a pod.). V atramentovom prípravku môže byť detegovaná kapsulárna huba. Cryptococcus neoformans. Súčasne sú na sivom pozadí atramentu viditeľné pučiace kvasinkové bunky, ktoré sú obklopené svetlou aureolou kapsuly. Atramentové prípravky môžu tiež obsahovať kvasinkové formy Candida albicans ktoré nemajú okolo bunky svetlé halo kapsuly.

Cr. neoformans možno zistiť aj pomocou farbenia alciánovou modrou (Mowry). Sfarbenie nastáva v dôsledku selektívnej detekcie kapsulárneho heteropolysacharidu charakteristického pre Cr.neoformans. Ak sa v prípravku zafarbenom podľa Grama zistí bakteriálna flóra, vykoná sa ďalšie vyšetrenie cerebrospinálnej tekutiny pomocou vhodných bakteriologických metód. Po mikroskopovaní sedimentu sa kvapalina naočkuje na 3 šálky čerstvo pripraveného, ​​vysušeného mladinového agaru alebo Sabouraudovho agaru, ako aj na tekutú sladinu alebo tekuté Sabouraudovo médium. Naneste 2-3 kvapky tekutého sedimentu na povrch živného agaru z pohárov 1 a 2 a dôkladne ho rozotrite špachtľou a naočkujte 1 kvapku do troch bodov na povrch agaru z pohára 3, aby ste zistili vláknité huby. Zvyšná kvapalina sa prenesie do 5 ml tekutej mladiny alebo Sabouraud agaru. Plodiny sa inkubujú pri dvoch teplotných podmienkach: pohár 1 - pri +37 o C a poháre 2 a 3 a výsev do tekutého média - pri +28 o C - +30 o C. Prezerajú sa plodiny pri teplote +37 o C na 2. a 5. deň a pri 28 - 30 o C - na 4., 7., 10. deň rastu. Ak na 5. deň pri teplote +37 o C a na 10. deň pri teplote 28 – 30 o C nerastie, vysievajte z tekutej živnej pôdy na misky s mladinou alebo Sabouraudovým agarom. Ak nedôjde k rastu kvasinkovej flóry, výsledok inokulácie kvapaliny sa zaznamená ako negatívny.

VÝBER fistúl. Štúdia začína mikroskopiou materiálu v natívnych alebo zafarbených prípravkoch. Potom sa materiál naočkuje na agarové médium (sladina alebo Sabouraud), pričom sa 2-3 kvapky výtoku nanesú do pohára a pomocou špachtle sa rozotrie po povrchu agaru. Plodiny sa inkubujú 48 hodín pri +37 °C.

VÝVOD slizníc.

1. Tampón sa vloží do skúmavky s 2 ml tekutého média (sladina, Sabouraudovo médium alebo MPB) a pretrepáva sa 5-7 minút bez namáčania zátky. Pripravte riedenia 1:10, 1:100 a naočkujte 0,1 ml z každého riedenia na dve šálky mladinového agaru, Sabouraudovho agaru alebo MPA. Inokulácie na pevnom médiu a skúmavka s tekutým médiom s tampónom (na obohatenie) sa inkubujú pri teplote +37 C. Po 48 hodinách sa spočíta počet kolónií a počet buniek kvasiniek odobratých tampónom. približne určené. Na tento účel sa počet vyrastených kolónií kvasiniek vynásobí 20 a zriedením. Ak nedôjde k rastu kolónií na platniach, odobraté riedenia sa znovu naočkujú z obohacovacieho média na jednu misku s mladinovým agarom.

2. Výsev je možné vykonať pohybom tampónu s rotáciou po povrchu živnej pôdy. V tomto prípade sa neberie do úvahy počet kolónií kvasiniek, ale zaznamená sa iba prítomnosť a intenzita rastu: jednotlivé kolónie, významný alebo nepretržitý rast, nedostatok rastu mikrobioty.

KRV. Vzorky venóznej krvi na hemokultúru musia byť zriedené obohacovacím médiom aspoň 1:5, aby baktericídne vlastnosti krvi neinhibovali rast plesní. Naočkujte 5-10 ml čerstvo odobratej krvi do 50-100 ml živného média (tekuté Sabouraud s 2% glukózou alebo Kitt-Tarozziho médium po jeho regenerácii). Na kultiváciu môžete odobrať krv s antikoagulantom (1:10 5% roztok citrátu sodného). Plodiny sa pestujú 10 dní pri teplote +37 °C s kontrolným výsevom na 5. a 10. deň. Pomocou sterilnej pipety odoberte sediment, z ktorého 3 kvapky rozsypte bakteriologickou slučkou po povrchu mladinového agaru do Petriho misiek. Nasadené poháre sa umiestnia na 2-5 dní do termostatu s teplotou +37 o C. V prípade rastu kvasinkovej flóry sa dáva predbežná odpoveď o prítomnosti huby v krvi a kultúra sa určuje podľa rodu a druhu.

Je opísaná ďalšia metóda hemokultúry pre mykoflóru (H. Rieth). V tomto prípade sa po kvapkách naočkuje 5-10 ml krvi. Naneste 40-50 kvapiek krvi na povrch hustého živného média v Petriho miske pomocou sterilnej pipety, vo vzdialenosti 0,5 cm medzi kvapkami. Inokulácia sa uskutočňuje na dvoch Petriho miskách, pričom sa inkubujú v jednej miske pri teplote +37 °C a v druhej pri izbovej teplote 2-5 dní.

KUSY orgánového tkaniva. Skúšobným kusom tkaniva sa urobí odtlačok na povrchu hustého živného média v Petriho miske, potom sa uskutoční preosievanie pomocou slučky. Rovnaký kúsok tkaniva sa umiestni do 50 ml tekutého živného média (sladina, Sabouraudovo médium). Plodiny sa inkubujú v termostate pri teplote +37 o C počas 5 dní.

Šupinky KOŽE a nechtov. Výsev šupín sa vykonáva bez ohľadu na výsledky mikroskopie. Na tento účel sa pomocou sterilnej mykologickej špachtle navlhčenej v kondenzáte média prenesú šupky do skúmavky na šikmý mladinový agar v 2-3 bodoch a pritlačia sa k povrchu média. V závislosti od množstva materiálu prijatého na výskum sa očkovanie vykonáva v 2-3 skúmavkách. Plodiny sa inkubujú v termostate pri teplote 28-37 o C až 5 dní.

Metódy rýchlej identifikácie sú široko používané C.albicans. Tento druh je schopný vytvárať zárodočné trubičky a krátke vlákna pseudomycélia v priebehu niekoľkých hodín (2-4 hodiny pri 37 o C) na krvnom sére, vaječnom bielku, Eaglovom médiu, 199 médiu atď. V praxi sa v laboratóriách používa ľudské sérum (zvyšky zo sérologických reakcií), kde sa pri 37 o C vytvárajú zárodočné skúmavky a po 24 hodinách sa vytvárajú spletence pseudomycélia. Kvôli vzhľadu C.albicans tento jav je typický v 90% prípadov. Klíčky sa tvoria menej často C. tropicalis.

2.3. Mikroskopické vyšetrenie a kultivácia patologického materiálu pre podozrenie na mykózy spôsobené plesňami

Patologický materiál možno skúmať v natívnych a farbených preparátoch. Podložné sklíčka a krycie sklíčka určené na prípravu mikrosklíčok skladujte v zmesi alkoholu a éteru (1:1), aby sa zabránilo kontaminácii vzduchu mykobiotou. Pred použitím sa sklíčka a krycie sklíčka sterilizujú nad plameňom horáka.

Mikroskopia materiálu

MIKROSKOPIA spúta. Na prípravu natívnych prípravkov sa spútum prenesie do sterilnej Petriho misky a skúma sa na čiernom pozadí, aby sa zistili malé častice (hrudky). Hrudky môžu byť hnisavé, hnisavé-hlienovité, hnisavé-krvavé. Veľkosť hrudiek sa líši vo veľkosti v priemere 0,3-3 mm, ich farba môže byť sivá, žltkastá, zelenkastá. Na prípravu natívnych mikrosklíčok sa jednotlivé hrudky prenesú pitevnými ihlami alebo bakteriologickou slučkou do kvapky alkoholu s glycerínom, prípadne do kvapky 10% roztoku KOH. Prikryte krycím sklom, jemne pritlačte pitevnou ihlou a mikroskopom pri malom (1:80, 10x okulár a 8x objektív) a vysokom (1:400, 10x okulár a 40x objektív) zväčšení mikroskopu.

Prípravky z výplachových vôd, exsudátu, ale aj žlče, moču, žalúdočnej šťavy a likéru sa pripravujú z natívneho sedimentu alebo zo sedimentu získaného centrifugáciou (pri 1500 ot./min. počas 5 minút). Sediment sa prenesie slučkou alebo Pasteurovou pipetou do kvapky 10% roztoku KOH na podložné sklíčko, prikryje sa krycím sklíčkom a skúma sa pri malom a veľkom zväčšení mikroskopu.

Na prípravu zafarbených prípravkov sa hrudky alebo kvapka sedimentu, ktoré sa majú skúmať, rovnomerne rozdelia pomocou pitevných ihiel alebo menšieho podložného sklíčka po povrchu sterilného podložného sklíčka, až kým sa nezíska tenký náter. Výsledný náter sa suší na vzduchu, fixuje sa metylalkoholom alebo Nikiforovovou zmesou (rovnaké diely 96% etylalkoholu a éteru) počas 3-5 minút alebo sa trikrát zapáli nad plameňom horáka. Fixovaný náter sa farbí pomocou Gramovej metódy, PAS metódy a calcofluor white. Zafarbený preparát sa mikroskopuje pomocou systému ponorného mikroskopu (1:900, 10x okulár, 90x objektív).

Výsevný materiál

Pri vyšetrovaní akéhokoľvek patologického materiálu na vláknité huby sa naočkuje na pevné Sabouraudovo médium alebo sladinu s prídavkom penicilínu a streptomycínu (100-200 jednotiek/ml média). Výsev sa vykonáva v dvoch opakovaniach s prihliadnutím na rôzne teplotné podmienky pre pestovanie vláknitých húb (+37 o C a +28 o C), vždy na 3 body v strede pohára. Inkubačná doba je 4-5 dní.

Spútum (vybrané hrudky) sa prenesie bakteriologickou slučkou alebo Pasteurovou pipetou na povrch Sabouraudovho média alebo sladiny. Miesto výsevu je označené ceruzkou na zadnej strane dna Petriho misky. Nasadené Petriho misky sa vložia do termostatu vekom nahor.

Po určitej dobe inkubácie sa vysiate misky preskúmajú a ak sa zistí sporulácia, určí sa hubová kultúra. Ak nie je žiadna sporulácia, huba sa subkultivuje na Czapekovom diferenciálnom médiu na ďalšiu identifikáciu.

Sediment z premývacej vody priedušiek, čeľustných dutín, exsudátu, moču, žalúdočnej šťavy (natívnej alebo po odstredení) sa odoberie pipetou a naočkuje sa v objeme 0,1 ml. Výkaly sa zriedia v pomere 1:10 (1 g výkalov a 9 ml tekutiny) v tekutom Sabouraudovom médiu alebo tekutom sterilnom izotonickom roztoku chloridu sodného, ​​emulgujú sa, nechajú sa 10 minút usadiť, aby sedimentovali veľké častice, a supernatant sa naočkuje v objeme 0,1 ml. Výtok z vonkajšieho zvukovodu a hltana, ktorý sa odoberie tampónom, sa naočkuje opatrným prechodom každej strany tampónu po povrchu živného média. Tampóny z tampónov možno naočkovať. Za týmto účelom sa tampóny vložia do 10 ml tekutého Sabouraudova média alebo tekutej mladiny so sklenenými guľôčkami a emulgujú sa 10 minút, naočkujú sa 0,1 ml výteru s trávnikom (podľa Leshchenko V.M., 1973) alebo v troch bodoch.

Šupiny kože a nechtov sa umiestnia na povrch živného média a opatrne ich pritlačia.

Sediment mozgovomiechového moku (centrifúga pri 1500 otáčkach za minútu počas 5 minút) sa naočkuje do dvoch 0,1 ml pohárov média a zvyšok sa naočkuje do obohacovacieho média (kvapalné médium Sabouraud alebo tekutá sladina), ktoré sa naleje do 5 ml skúmaviek. Naočkované misky sa inkubujú ako obvykle a skúmavky naočkované na obohacovacie médium sa inkubujú pri + 28 °C počas 10 dní.

Ak na pevnom médiu rastie vláknitá huba, jej kultúra sa určí z tohto naočkovania; ak nerastie na Sabouraudovom agare alebo mladinovom agare, huba sa študuje z obohacovacieho média. Za týmto účelom sa hubová kultúra opäť subkultivuje na Czapekovom diferenčne hustom médiu a následne identifikuje.

Z kúska orgánového tkaniva (biopsia, pitva) sa urobí odtlačok na povrchu pevného média, pričom rezná strana kúska sa skúma v troch bodoch. Súčasne sa kúsky tkaniva umiestnia do 50 ml tekutého živného média (Saburo, mladina).

Pri podozrení na fungémiu sa krv vyšetruje v dvoch až troch opakovaniach. Naočkujte 5 alebo 10 ml krvi v 50 alebo 100 ml tekutého média Sabouraud s 2 % glukózy. Plodiny sa pestujú pri teplote +37 °C a +28 °C počas 10 dní. Prvá kontrola plodín sa vykonáva po 5 dňoch, druhá po 10 dňoch. Piaty deň môžete pozorovať rast vláknitej huby vo forme plstenej hrudky na dne a povrchového filmu. Mycélium sa subkultivuje na Czapekovom diferenciálnom médiu, aby sa určil rod a typ huby. Ak sa na 5. deň nepozoruje rast húb, plodiny sa uchovávajú až 10 dní a ak nerastie, výsledky testu sa zaznamenajú ako negatívne.

Pri výseve v troch bodoch je rast huby v dvoch a troch bodoch definovaný ako diagnosticky významný, v jednom bode - náhodný. V prípade potreby je možný opätovný výsev.

Identifikácia izolovaných kultúr plesní

Po izolácii kultúry sa vláknité huby subkultivujú na Czapekovom diferenciálnom médiu na generické a podľa možnosti druhové určenie.

V praxi diagnostických laboratórií spravidla využívajú kultúrne a morfologické identifikačné kritériá: hodnotia rastový vzorec hubovej kultúry na agarovom médiu (kultúrna diagnostika, makromorfológia) a mikromorfológiu huby.

V zložitých prípadoch sa používajú ďalšie diagnostické metódy (štúdium enzymatickej aktivity, teplotné charakteristiky rastu niektorých plesní).

Pojem makromorfológia (kultúrna charakteristika) zahŕňa štruktúru kolónie (chlpaté, plstnaté, zamatové, pavučinové, vlnité, rozstrapkané, múčnaté atď.), povrch (plochý, skladaný, hrboľatý, kupolovitý, jadrový, zonálny , atď.), pigmentácia hubovej kolónie a substrátu (rôzne odtiene zelenej, modrej, fialovej, čiernej, šedej atď.), prítomnosť exsudátu na povrchu kolónie.

Mikromorfológia huby z kultúry sa študuje pomocou prípravkov, ktoré sa v závislosti od rodu huby pripravujú takto: na pohár sa nanesie kvapka tekutiny na prípravu prípravkov (rovnaké diely alkoholu, glycerínu a vody). šmykľavka; vloží sa do nej kúsok mycélia, odreže sa mykologickou špachtľou z kolónie vo forme trojuholníka zachytávajúceho strednú a okrajovú časť a odrezaný kúsok sa narovná dvoma pitevnými ihlami opatrne, aby sa zabránilo tvorbe vzduchových bublín . V niektorých prípadoch (mucor a rhizopus) sa pri príprave drogy mycélium rozprestrie na suché sklíčko, nanesie sa naň kvapka tekutiny a prekryje sa krycím sklíčkom. Preparáty sa prezerajú pod mikroskopom pri malom a veľkom zväčšení. Študuje sa substrát a vzdušné mycélium, zaznamená sa prítomnosť alebo neprítomnosť prepážok (septa) a pozornosť sa venuje povahe sporulácie: konídiofóry s konídiami a sporangiá so sporangiespórami.

Konidiofory sa líšia štruktúrou: od jednoduchých hýf nesúcich jednotlivé spóry až po rozvetvené stromovité útvary. Konidiofory sú umiestnené jednotlivo alebo v skupinách, výrazne sa líšia od vegetatívnych hýf mycélia, bezfarebné alebo farebné, vzostupné, vzpriamené, kaskádovité, plazivé. Môžu pozostávať z jednej bunky a veľkého počtu buniek rôznych tvarov a veľkostí, z ktorých každá má svoj vlastný názov. Napríklad u rodu Aspergillus tvoria konídiofor tieto bunky: stopka, vezikulárny opuch, sterigmata, reťazce konídií. V rode Penicillium má konídiofor formu jednoduchých alebo zložitých kefiek, ktoré tiež pozostávajú z rôznych buniek: vetvy ramie, metule, fialidy, reťazce konídií.

Plesňové huby Mucor a Rhizopus sporulujú vo forme sporangií s endosporangiospórami. Výtrusnica sa nachádza na konci sporangiofóru. Výtrusnice sú guľovitého alebo hruškovitého tvaru, väčšinou so špeciálnym stĺpcom, ktorý je pokračovaním sporangiofóru vo vnútri výtrusnice. Sporangiospóry sú okrúhle, bezfarebné alebo farebné.

Konídie (spóry) plesňových húb sú polymorfné (valcovité, guľovité, oválne, elipsoidné, vajcovité, hruškovité, kyjovité), jedno- a mnohobunkové, rôznej veľkosti a farby, jednotlivé, v reťaziach alebo zhromaždené v hlavičkách a usporiadané v zhlukoch. Povrch konídií môže byť hladký, drsný, tŕňovitý, bradavičnatý, štetinovitý atď.

Mikroskopické vyšetrenie a kultivácia patologického materiálu na mykózy spôsobené dimorfnými hubami

Pri týchto mykózach je potrebné počítať s dimorfizmom patogénov.

Patologickým materiálom pre primárne patogénne mykotické infekcie (kokcidioidóza, histoplazmóza, parakokcidioidóza, severoamerická blastomykóza), ako aj chromomykóza, sporotrichóza a mycetómy môžu byť hnis, spútum, škrabance z ulceróznych lézií na koži a slizniciach, cerebrospinálny mok, krv, bioptické kúsky z porážok lézií.

Ťažkosti pri určovaní pôvodcov týchto mykóz spočívajú v tom, že vzhľadom na ich dimorfizmus mikroskopia patologického materiálu odhalí tkanivové formy huby, najčastejšie kvasinkové bunky rôznych morfológií alebo sféruly s endospórami, úplne odlišné od prvkov tej istej huby. huba extrahovaná z jej kultúry pestovanej pri teplote +28 - +30 o C na bežnej agáve Sabouraud, s hodnotou pH bližšou kyslej. Treba si však uvedomiť, že u niektorých dimorfných húb je možné v kultúre získať kvasinkovú fázu rastu húb, často pripomínajúcu jej tkanivovú formu, ale pri pestovaní v médiu bohatom na bielkoviny s mierne alkalickou reakciou (pH = 7,6 - 7,8 ), pri teplote 37 °C.

Vyššie uvedené platí pre huby: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis A Sporothrix schenckii.

Laboratórna diagnostika mykóz spôsobených tu uvedenými hubami je založená na detekcii tkanivových foriem v patologickom materiáli mikroskopom, izolácii kultúry patogénu a jej identifikácii podľa kultúrnych a morfologických charakteristík.

Mikroskopické vyšetrenie sa vykonáva v nefarbených prípravkoch na podložnom sklíčku v kvapke 10% roztoku žieravého alkálií alebo zmesi alkoholu a glycerínu v rovnakých objemoch alebo v zafarbených náteroch (tabuľka 3).

Inokulácia patologického materiálu sa uskutočňuje na vyššie uvedené živné pôdy v Petriho miskách pomocou bakteriologickej špachtle podľa všeobecne uznávanej metódy.

2.5. Mikroskopické vyšetrenie a kultivácia patologického materiálu na dermatomykózu (keratomykózu a dermatofytózu).

Predmetom štúdie sú povrchové mykózy postihujúce len keratínovú vrstvu epidermy a dermatofyty postihujúce kožu a jej prívesky (vlasy, nechty), ktorých pôvodcami sú huby súvisiace s rodom Trichophyton, Microsporum a Epidermophyton.

Laboratórny mykologický výskum zahŕňa rovnaké kroky ako pri iných mykózach: mikroskopovanie materiálu a získanie čistej kultúry pri jej výseve. Správny odber materiálu výrazne ovplyvňuje úspešnosť mikroskopie a získavania kultúr.

Patologický materiál sa vyšetruje čo najskôr po odbere. Najprv sa delí na tri časti: na mikroskopiu, kultiváciu a opätovné vyšetrenie. Mikroskopia patologického materiálu je najjednoduchšia a najrýchlejšia metóda na zistenie prítomnosti huby v tkanivách. Rozdrvený materiál sa vloží do stredu podložného sklíčka v kvapke 10-20% roztoku KOH a mierne sa zahrieva nad plameňom liehovej lampy, kým sa pozdĺž okraja kvapky nezíska belavý okraj, prekrytý krycím sklom. a nechá sa 5-10 minút (vlasy, šupiny kože) a 30 - 40 minút (nechty) na maceráciu a vyčírenie; materiál je možné spracovať bez zahrievania, na tento účel sa prípravok nechá 30-60 minút v 20% roztoku KOH.

Mikroskopia najprv pod mikroskopom s malým, potom veľkým zväčšením.

Kultúra je potrebná na izoláciu a identifikáciu patogénu. Naočkovaný materiál sa čo najviac rozdrví a naočkuje v minimálnych množstvách na šikmý agar v skúmavkách v 2-3 bodoch vo vzdialenosti 1-2 cm.Minimálne 2-3 skúmavky (vlasy) a 4-5 skúmaviek (kožné a nechtové šupiny) sa naočkujú materiálom z jednej vzorky. Na primárnu izoláciu dermatofytov je najlepšie použiť štandardné Sabouraudovo agarové médium s 2-4% glukózovým alebo mladinovým agarom s obsahom antibakteriálnych antibiotík (penicilín 50 μg/ml + streptomycín 50 μg/ml alebo biomycín 200 jednotiek/ml) a anti- plesňové antibiotikum aktidione (cykloheximid) 0,1 - 0,5 mg/ml. Actidione neovplyvňuje rast dermatofytov a inhibuje mnohé plesne, ako aj druhy Candida a Cryptococcus.

Plodiny sa inkubujú pri 22-30 °C (najlepšie 28 °C). Výskyt rastu dermatofytov sa pozoruje od 4. do 12. dňa inkubácie v miestach výsevu pozdĺž okrajov aplikovaného materiálu. Ak nedôjde k rastu do 30 dní, výsledky kultivácie sa považujú za negatívne. Za optimálnych podmienok možno primárne kultúry mnohých dermatofytov identifikovať 7-10 dní po zasiatí, ale plodiny by sa mali monitorovať 20-30 dní. Primárne kultúry rastú relatívne pomaly a pri použití médií bez antibiotík môžu byť dermatofyty potlačené rýchlejšie rastúcimi baktériami alebo plesňami. Keď sa rast objaví v primárnom výseve, je potrebné preosiať z okraja kolónie na čerstvé diferenciálne médium, aby sa získala čistá kultúra, ktorá poslúži ako materiál na identifikáciu izolovaného dermatofytu.

2.6. Sérologické metódy diagnostiky mykóz

Význam sérologických metód spočíva najmä v: identifikácii pacientov s pravdepodobnými invazívnymi mykózami; potvrdenie mykotickej povahy alergických ochorení; skríningové vyšetrenie skupín s rizikom vzniku mykóz.

Falošne pozitívne výsledky sérologických testov sú možné u mykonosičov a u zdravých ľudí senzibilizovaných hubovými antigénmi, negatívne testy sa môžu vyskytnúť pri imunodeficiencii aj na pozadí prebiehajúcej invazívnej mykózy.

Rutinné všeobecne akceptované metódy sérologickej diagnostiky mykóz
dostatočne podrobne opísané / P. N. Kashkin, V. V. Lisin. "Praktické
sprievodca lekárskou mykológiou“, Medicína, 1983/. Avšak v poslednej dobe
desaťročia došlo k badateľným posunom v metodických prístupoch /Elinov N.P.,
2001/. Boli navrhnuté pôvodné postupy na detekciu antigénov a protilátok
niektoré metabolity buniek húb; boli vytvorené špeciálne diagnostické testy
súpravy („veľryby“), napríklad Pastorex ® Candida, na stanovenie v
"latexové aglutinačné" reakcie opakujúcich sa oligomanózových epitopov antigénu
štruktúry/vyjadrené na veľkom počte makromolekúl
huba; na stanovenie Candida mannanového antigénu, napr.
sérum pacienta s kandidémiou, môžete použiť súpravu Platelia ® Candida.
Pri použití prvého súboru je prah na stanovenie antigénnych štruktúr 2,5 ng/ml, pri použití druhého súboru v spojení s metódou _____________ je prah na stanovenie - 0,5 ng/ml.

Pôvodcovia mykóz najčastejšie identifikovaní počas laboratórneho testovania rôznych klinických materiálov

Krv

• Candida
• Cryptococcus
• Mycéliové patogény sa zriedkavo detegujú v krvných testoch okrem Fusarium

Cerebrospinálna tekutina

• Candida
• Cryptococcus

Výtok hnisu z abscesov, vredov atď.

• Candida
• Cryptococcus
• Fusarium
• Aspergillus
• Sporotrix

Respiračné sekréty (spútum, tekutina BAL, biopsia bronchiálnej kefky, transtracheálny aspirát)

• Aspergillus
• Candida
• Cryptococcus
• Mucor
• Scedosporium
• Rhizopus
• Sporotrix

Výtok, bioptický materiál z rán

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium
• Rhizopus

Iné biosubstráty

• Candida
• Cryptococcus

Materiál z hrudníka a brušnej dutiny; synoviálna tekutina

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium

Sklovité telo

• Candida
• Aspergillus

IV. Kritériá diagnostiky systémových mykóz: klinické a laboratórne parametre konečnej diagnózy

Ezofagitída

• prítomnosť charakteristických zmien počas ezofagoskopie
• identifikácia huby počas kultivácie bioptického materiálu
• prítomnosť pseudomycélia v zafarbených náteroch alebo známky invazívneho rastu húb v bioptickom materiáli

Zápal pľúc

Pneumónia spôsobená Candida spp.

• akútne infiltratívne zmeny na RTG hrudníka, ktoré sa zhodujú s klinickými prejavmi mykotickej pneumónie
• identifikácia Candida spp. Pri kultivácii materiálu z dolných dýchacích ciest získaného z transtorakálnej biopsie, transbronchiálnej biopsie, nálezov z pľúcnej biopsie alebo torakoskopicky riadenej biopsie
• identifikácia pseudomycélia v adekvátne zafarbenom bioptickom materiáli

Pneumónia spôsobená Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• identifikácia hubových prvkov v tkanivách a pozitívna kultúra
• perzistujúce alebo progresívne infiltráty v pľúcach, rezistentné na antibiotickú liečbu
• detekcia jedného z týchto patogénov pomocou spúta alebo kultúry BAL
• klinické príznaky pneumónie (kašeľ, dýchavičnosť, „pleurálna“ bolesť, sipot, hluk po pleurálnom trení)
• charakteristické zmeny na röntgenovom alebo CT vyšetrení pľúc:

Subpleurálne infiltratívne, nodulárne zmeny s ostrým uhlom alebo kavernózne zmeny

Symptóm „halo“ na CT skene pľúc

Progresia infiltratívnych zmien s tvorbou dutín a objavením sa symptómu „kosáčika“.

• absencia iných patogénov pri kultivácii BAL tekutiny, ktorá by mohla spôsobiť prezentované zmeny v pľúcach

Sínusitída

• klinické a rádiologické príznaky akútnej sinusitídy
• mikroskopické a kultúrne známky mykózy pri vyšetrovaní aspirátu alebo bioptického materiálu

Infekcie močových ciest

• detekcia >1x10 CFU/ml opakovanými kultiváciami správne odobraného moču

Fungémia

• Jednorazová detekcia húb počas hemokultivácie počas obdobia zvýšenia telesnej teploty > 38 o C

Akútna diseminovaná mykóza

• Fungémia v kombinácii s kultúrnymi alebo histologickými znakmi poškodenia hlbokých tkanív (vrátane podkožného tkaniva) alebo identifikáciou patogénu z dvoch normálne sterilných biosubstrátov

Endoftalmitída

• oftalmologické príznaky endoftalmitídy
• identifikácia patogénu z oka, krvi alebo iných ohniskov šírenia

Absces alebo osteomyelitída

• rádiografické/CT/MRI príznaky osteomyelitídy
• identifikácia patogénu v aspiráte alebo bioptickom materiáli

Meningitída

• stanovenie zmien CSF potvrdzujúce prítomnosť zápalu a detekcia húb mikroskopiou CSF
• detekcia húb kultiváciou CSF alebo stanovenie antigénov Cr.neoformans, Candida a Aspergillus v CSF

Chronická diseminovaná (hepatolienálna) kandidóza

možné

• pretrvávajúca alebo intermitentná horúčka po skončení obdobia neutropénie v kombinácii s charakteristickými znakmi poškodenia pečene, sleziny alebo obličiek

Osvedčené

• vyššie uvedené v kombinácii s výsevom Candida spp. z krvi pred objavením sa príznakov poškodenia pečene, sleziny alebo obličiek alebo s kultúrnymi, histologickými príznakmi kandidózy v bioptickom materiáli z lézií

V. PRÍČINY HUBOVÝCH INFEKCIÍ

Existujú rôzne princípy klasifikácie plesňových infekcií a ich pôvodcov. Zdá sa nám, že je prakticky najjednoduchšie a najvýhodnejšie rozdeliť patogénne huby do 5 hlavných skupín:

1. Patogény povrchových mykóz;

2. Patogény dermatomykózy;

3. Patogény subkutánnych mykóz;

4. Pôvodcovia hlbokých mykóz (primárne patogénne mikromycéty, pôvodcovia oportúnnych infekcií).

5. Patogény pseudomykózy.

* Treba zdôrazniť, že patogény prvých troch skupín u imunosuprimovaných pacientov môžu spôsobiť fungémiu a lézie viacerých orgánov.

V nasledujúcich častiach uvádzame popis pôvodcov mykóz podľa jedinej schémy: ich názov podľa prijatej nomenklatúry, zoznam synoným, makroskopické charakteristiky kolónií na živných pôdach a mikroskopické charakteristiky hubových prvkov viditeľných pod a mikroskop v natívnych preparátoch a z kolónií. Poskytujú sa aj údaje o rozšírení húb v prírode a sú uvedené choroby, ktoré spôsobujú.

Laboratórna diagnostika hubových chorôb je založená na detekcii huby a určení jej rodu a typu. Pozostáva z dvoch hlavných etáp: mikroskopické a kultúrne štúdie.

Mikroskopické vyšetrenie

Mikroskopické vyšetrenie je prvým a dôležitým článkom pri potvrdení predbežnej diagnózy.

Úspešnosť mikroskopického vyšetrenia do značnej miery závisí od správneho odberu patologického materiálu. Na mikroskopické vyšetrenie je potrebné vybrať vlasy, ktoré majú viditeľné známky poškodenia plesňami (matné, zlomené, zhrubnuté). Chĺpky, ktorých vzhľad sa zmenil, sa odstráni epilačnou pinzetou. Na detekciu jednotlivých postihnutých chĺpkov mikrosporiou môžete použiť žiarivku s Woodovým filtrom (zeleno-modrá žiara).

Pri výbere postihnutých vlasov je možné použiť množstvo ďalších charakteristík. Vlasy postihnuté mikrospórami majú na základni sivú pošvu z vonkajších spór. V prípade chronickej trichofytózy sa vo folikule nachádzajú krátke sivé postihnuté chĺpky zakrivené vo forme „čiarok“ a „otáznikov“, ako aj „čierne bodky“ (zhrubnuté čierne postihnuté chĺpky odlomené pri ústí folikulu). hrúbka šupín. V prípade infiltratívne-hnisavej trichofytózy na mikroskopické vyšetrenie okrem postihnutých vlasov môžete použiť hnis a kôry z lézie.

Z kožných lézií s mikrosporiou, trichofytózou a mykózou inguinálnych záhybov treba zoškrabať šupiny z periférnej zóny lézie, kde sa huba nachádza vo väčšom množstve. Vellus vlasy sú zoškrabané spolu s kožnými vločkami.

Pri vyšetrovaní postihnutých vlasov mikrosporiou a trichofytózou sa venuje pozornosť umiestneniu spór (vo vnútri alebo mimo vlasu) a ich veľkosti. Tieto údaje umožňujú v niektorých prípadoch objasniť diagnózu, klinickú formu mykózy a epidemiológiu.

Pri interdigitálnej forme mykózy chodidiel sa na mikroskopické vyšetrenie využívajú kožné šupiny a odrezky macerovaného stratum corneum. Oblasť nechtu, ktorú je potrebné odobrať na mikroskopické vyšetrenie, závisí od formy onychomykózy. Pri povrchovej forme je potrebné oškrabať povrch nechtovej platničky.

Pri najčastejšej distálnej-laterálnej forme sa používa zoškrab z nechtového lôžka, spod platničky (subungválna hyperkeratóza) s časťou odrezanej zmenenej nechtovej platničky. Pri proximálnej subunguálnej forme sa používajú špeciálne metódy na odber materiálu (vŕtanie okien pomocou vŕtačky, biopsia nechtov).

Pri skvamózno-hyperkeratotickej forme mykózy chodidiel sú šupiny zoškrabané z povrchu chodidla. Pri dyshidrotickej forme mykózy chodidiel sú kryty pľuzgierov odrezané na vyšetrenie.

Technika prípravy materiálu na mikroskopické vyšetrenie vlasov . Na podložné sklíčko sa nanesie malá kvapka 30 % KOH a pomocou pitevnej ihly sa do nej vložia postihnuté vlasy. Kvapka s vlasmi sa mierne zahrieva nad plameňom alkoholovej lampy, kým sa nad hladinou kvapaliny neobjaví para alebo kým pozdĺž okraja kvapky alkálie nevypadne okraj kryštálov. Po zakrytí krycím sklíčkom sa prebytočná alkália odstráni filtračným papierom. Liečivo sa skúma najprv pod malým a potom pod vysokým (x 400) zväčšením mikroskopu.

Šupiny kože a nechtov . Tenké nechtové šupiny na mikroskopické vyšetrenie sa umiestnia na podložné sklíčko v kvapke 30 % KOH a zahrievajú sa, pričom sa pri vyparovaní pridáva zásada. Ochladená, nezafarbená vzorka sa prikryje krycím sklíčkom a skúma sa pod mikroskopom.

Hrubé šupiny kože a nechtov sa umiestnia do centrifugačnej skúmavky a naplnia sa niekoľkými kvapkami 30 % KOH. Skúmavka sa zahreje do varu a nechá sa 20-30 minút. Časť zmäkčeného materiálu sa prenesie na podložné sklíčko pomocou sklenenej tyčinky, pritlačí sa zápalkou, kým sa neobjaví „oblak“, potom sa skúma pod mikroskopom.

Hnis . Kvapka hnisu sa zmieša s kvapkou alkoholu a pol na pol glycerínu a vyšetrí sa v natívnom prípravku.

Kultúrna diagnostika

Na definitívne objasnenie diagnózy a objasnenie epidemiológie sa vykonáva kultúrna diagnostika. Zahŕňa získanie kultúry huby s následným mikroskopickým vyšetrením.

Postihnuté vlasy, šupiny (koža a nechty), pľuzgiere alebo hnis sa naočkujú na umelé živné médium. Vzhľadom obrovských kolónií na Petriho miskách je možné získať predstavu o rode patogénu (Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton), jeho type (L. canis alebo ferrugineum, T. violaceum, verrucosum alebo sadra). Konečné objasnenie rodu a druhu huby je možné až na základe mikroskopického vyšetrenia výslednej kultúry.

Laboratórna diagnostika povrchovej kandidózy

Na laboratórne testovanie na kvasinky podobné hubám je potrebný čerstvý materiál. Na mikroskopické vyšetrenie, v závislosti od klinických prejavov a lokalizácie lézií, kožné šupinky, škrabance z nechtov, kvapka hnisu spod nechtového záhybu, belavé ložiská z postihnutých oblastí ústnej sliznice a vonkajších genitálií, pošvových stien, môžu sa odobrať škrabky zo sliznice.membrány močovej trubice, ako aj výplachy z červeného okraja pier, postihnutých oblastí kože veľkých a malých záhybov.

V závislosti od lokalizácie lézie a povahy klinických prejavov sa materiál na výskum odoberá vatovým tampónom, skalpelom, slučkou atď. Šupiny kože a nechtov, odrezky epidermy a škrabance zo sliznice sú pre- ošetrené 30 % KOH. Patologický materiál sa vyšetruje v nefarbených alebo zafarbených preparátoch.

V prvom prípade sa materiál zmieša s rovnakým množstvom alkoholu a glycerínu. Pri farbení podľa Grama sa kvasinkové bunky a pseudomycélium javia ako tmavofialové, podľa Ziehl-Neelsen - modré a podľa Romanovského-Giemsa - ružovofialové. V tomto prípade je charakteristickým znakom kvasinkovej bunky pučanie - objavenie postavy „presýpacích hodín“. Odber materiálu zo sliznice ústnej dutiny, pohlavných orgánov, z kože červeného okraja pier, z kútikov úst, z kože veľkých a malých záhybov sa vykonáva sterilným tampónom. Po odbere materiálu sa tampón vloží do ďalšej sterilnej skúmavky s tekutou mladinou. Skúmavka s tampónom sa posiela do mikrobiologického laboratória. Izolácia čistej kultúry kvasinkovitých húb rodu Candida sa uskutočňuje podľa všeobecne uznávaných mikrobiologických metód.

Podľa vedcov má 70% svetovej populácie príznaky mykózy nôh. Toto ochorenie postihuje medziprstové záhyby a kožu na chodidlách. Príčinou ochorenia je huba, ktorá sa pôvodne vyskytovala len v obmedzených oblastiach juhovýchodnej Ázie a Afriky. Prvá svetová vojna, spôsobujúca masovú migráciu ľudí a zhoršujúce sa hygienické podmienky, viedla k rozšíreniu choroby do celého sveta.

Čo spôsobuje mykózu nôh

Hlavným pôvodcom ochorenia je Trichophyton rubrum. Infekciu môžu spôsobiť T. mentagrophytes a Epidermophyton floccosum. Huby rodu Candida a plesňové mikroorganizmy sa môžu stať patogénnymi mikróbmi oveľa menej často.

Najvýznamnejšie rizikové faktory ochorenia:

• cukrovka;
• stav imunodeficiencie (AIDS);
• ploché nohy;
• ateroskleróza periférnych artérií;
• kŕčové žily dolných končatín.

Vonkajšie podmienky vedúce k rozvoju infekcie:

• uzavretá nenasiakavá obuv;
• poranenia chodidiel (mozole, odreniny);
• športovať.

Symptómy atletickej nohy sa najčastejšie vyskytujú u dospelých mužov. Deti zriedka ochorejú.

Príznaky mykózy nôh

S rozvojom ochorenia sa objavuje olupovanie a suchá koža, svrbenie a pálenie, najmä v priestoroch medzi prstami a vznik bolestivých prasklín pod prstami. Niekedy sú prvými príznakmi mykózy chodidla pľuzgiere, ktoré prasknú s tvorbou erózií. Často sa choroba vyskytuje vo vymazanej forme, ktorá sa prejavuje len miernym odlupovaním, pripomínajúcim múku, v záhyboch medzi prstami.

Existujú 4 klinické formy ochorenia.

Interdigitálny alebo intertriginózny variant je najbežnejší. Koža medzi prstami sčervená, praská, povrchová vrstva mokvá a odlupuje sa. Tieto príznaky siahajú až po chodidlo a sú sprevádzané silným svrbením a pálením. Často sa pridružuje bakteriálny zápal.

Skvamózno-hyperkeratotický variant je spojený so silným zhrubnutím a praskaním kože. Podošva sčervená a odlupuje sa. V oblasti päty sa objavujú hlboké bolestivé trhliny, svrbenie je zvyčajne netypické. Toto je často bilaterálna lézia a nazýva sa aj „mokasínová noha“.

Dyshidrotický variant je sprevádzaný výskytom viacerých malých svrbivých, bolestivých pľuzgierov. Vzájomne sa spájajú a vytvárajú veľké bubliny. Kryty pľuzgierov prasknú a odhalia lesklý, zraniteľný, bolestivý povrch - erózia. Vonkajšie prejavy pripomínajú ekzém.

Mikrobiálny zápal je často spojený so zväčšenými inguinálnymi lymfatickými uzlinami, horúčkou, bolesťou nôh, nevoľnosťou, bolesťou hlavy a inými príznakmi intoxikácie. Pri dyshidrotickej forme sa často vyskytuje alergia na plesne - mykotický ekzém. Je sprevádzaná vyrážkami na oblastiach tela, ktoré nie sú infikované hubou, napríklad na rukách.

Vymazaná verzia zvyčajne zostáva nepovšimnutá. Je sprevádzané miernym olupovaním kože medzi veľkým a ukazovákom a/alebo prstencom a malíčkami na chodidle. Neexistuje žiadne svrbenie.

Známky mykózy nôh

Rôzne typy mykózy chodidiel môžu byť nezávislé ochorenia alebo sa vyskytujú ako súčasť všeobecnej hubovej infekcie tela. Niekedy sa pri zapojení týchto orgánov vyskytuje znak „dve nohy - jedna ruka“. Môže sa vyskytnúť onychomykóza, hubová deštrukcia nechtu. Niekedy sú súčasne ovplyvnené aj inguinálne záhyby.

Hlavné príznaky a liečba mykózy chodidiel sú uvedené na fotografii:

Odlupovanie kože

Suchá a popraskaná pokožka

Bubliny a erózie

Diagnostika

Skúsený dermatológ dokáže rozpoznať rôzne druhy mykózy nôh už pri prvom vyšetrení. Na potvrdenie diagnózy je však potrebné mikroskopické vyšetrenie. Na to sa používajú šupiny z lézie, ktoré sa zoškrabú špachtľou a ošetria alkalickým roztokom. Výsledný materiál sa skúma pod mikroskopom a zisťujú sa patogény.

Priama mikroskopia je rýchla, lacná a ľahko vykonateľná, ale nedokáže určiť, ktorý typ huby spôsobuje ochorenie. Preto sa materiál naočkuje na živné médium, po ktorom nasleduje kultivačné vyšetrenie výsledného materiálu. Po zistení pod mikroskopom je však možné získať kultúru huby iba v 20–6% prípadov.

Typy liečby mykózy nôh

Lieky na liečbu plesňových ochorení by mal predpisovať dermatológ. Zvyčajne sa liečba mykózy nohy uskutočňuje pomocou vonkajších prostriedkov.

Jedným z účinných liekov na túto chorobu je klotrimazol. V našom obchode si ho môžete kúpiť za nízku cenu. Liek vo forme pleťovej vody, Clotrimazol na nechty a pokožku, potláča množenie plesní v hrúbke rohovej vrstvy epitelu. Ak sú postihnuté medziprstové záhyby, pleťová voda sa nanáša denne na čistú suchú pokožku chodidiel po dobu jedného týždňa, v prípade potreby aj dlhšie.

V prípade silného rohovatenia a popraskania kože je potrebné najskôr odstrániť odumreté kožné ložiská. To si vyžaduje použitie exfoliačných liekov. Predpísaná je napríklad salicylová masť, krémy s kyselinou mliečnou alebo močovinou. Po odstránení zrohovatených usadenín sa pleťová voda používa 1 – 2 krát denne.

V dyshidrotickom variante je prvým krokom zníženie plaču. Na tento účel sa používajú pleťové vody s tanínom alebo kyselinou boritou. V závažných prípadoch sa k liečbe pridávajú glukokortikoidy. Potom aplikujte Clotrimazol lotion podľa obvyklého režimu.

Ak je chodidlo opotrebované, ošetrujte ho pleťovou vodou 1x denne po dobu 7-10 dní, ale dĺžka kurzu je individuálna a určuje ju lekár.

Systémová terapia

Dlhodobá alebo opakujúca sa atletická noha môže vyžadovať perorálne antifungálne lieky. Prechádzajú z gastrointestinálneho traktu do krvného obehu a následne do kože, kde ničia plesne. Používajú sa tri hlavné lieky:

• flukonazol;
• itrakonazol;
• terbinafín

Trvanie užívania týchto liekov je najmenej mesiac. Ich cena je dosť vysoká. Preto je prevencia mykózy nôh vždy jednoduchšia a výnosnejšia ako jej liečba.

Zvlášť často sa predpisujú systémové lieky, ak huba zasiahla nielen kožu, ale aj nechty. V tomto prípade sa lieky hromadia v rastúcej časti nechtovej platničky a zdravý necht postupne dorastá. Na zlepšenie účinku je možné necht chirurgicky úplne odstrániť, po ktorom sa obnoví bez plesní.

U starších pacientov je často potrebná kombinácia odstránenia nechtov a systémovej a lokálnej antimykotickej liečby. U tejto skupiny pacientov nechty často rastú pomaly, krvný obeh v chodidlách je narušený, takže na dosiahnutie účinku je potrebná veľká dávka liekov a dlhý priebeh liečby.

Liečba ľudovými prostriedkami

Použitie iba receptov tradičnej medicíny nepomôže zbaviť sa huby. Takýto doplnok ku klasickej terapii však skracuje priebeh liečby a urýchľuje rekonvalescenciu.

Užitočné je urobiť si každý večer na 10 minút teplé kúpele nôh, potom si nohy dôkladne pohladiť uterákom, najmä medzi prstami a natrieť liečivým mliekom Clotrimazol na nechty a pokožku. Užitočné prísady do kúpeľa, ktoré zmierňujú zápal a zmierňujú svrbenie:

• bylina skorocel a ľubovník bodkovaný;
• korene lopúcha;
• tráva palina;
• listy eukalyptu;
• jedľové ihličie;
• čerstvá usadenina z uvarenej mletej kávy;
• soľ;
• zmes strúhaného mydla na pranie, sódy bikarbóny, manganistanu draselného a horčičného prášku.

Postihnuté miesta je možné namazať brezovým dechtom alebo vlastnoručne pripravenou masťou zo 100 gramov masla zmiešaného s roztlačenou hlavičkou cesnaku. Užitočný je aj propolis, ktorý sa dá obviazať boľavé nechty.

Je užitočné vyrábať obklady z prírodných prostriedkov. Najprv sa nechajú 1 až 2 hodiny a ak sú tolerované, cez noc. Používajú sa tieto zložky:

• tekvicová buničina;
• drvené semená čiernej reďkovky;
• mäta pieporná, mletá soľou;
• listy lopúcha alebo jarabiny, mierne zmäkčené valčekom.

Je účinné namazať postihnuté miesta šťavami z niektorých rastlín a inými prírodnými prostriedkami:

• alkoholový roztok propolisu;
• cibuľová alebo cesnaková šťava;
• šťava z celandínu;
• čajovníkový olej.

Prevencia chorôb

Aby sme sa vyhli mykóze alebo zabránili jej relapsu, je potrebná jednoduchá, ale stála prevencia:

• v lete noste priedušnú obuv z prírodného materiálu;
• pri návšteve bazénov, kúpeľov, verejných spŕch noste individuálne gumené papuče;
• nenoste topánky niekoho iného, ​​napríklad pri návšteve;
• používajte iba vlastné hygienické pomôcky – nožnice, pemzu, pilník na nechty.

Aby sa predišlo opätovnej infekcii, vložky do topánok a vnútorné povrchy topánok by sa mali pravidelne ošetrovať dezinfekčnými prostriedkami. Známym ľudovým receptom je roztok octovej esencie, ktorý má však ostrý nepríjemný zápach.

Lekári odporúčajú používať liek Mikospray, ktorý má nielen protiplesňový, ale aj antibakteriálny účinok. Mycospray je skvelý nielen na ošetrenie topánok, ale aj na aplikáciu na chodidlá pred návštevou verejných miest na ochranu chodidiel.

Obyvatelia Moskvy a regiónov si môžu v našom internetovom obchode kúpiť lieky na liečbu mykózy chodidiel a na jej prevenciu. Majú preukázanú účinnosť a bezpečnosť. Ich použitie sa odporúča všetkým ľuďom, ktorí sa nechcú nakaziť plesňou nôh alebo sa jej rýchlo zbaviť.

Presná diagnostika invazívnych mykóz neľahké. To sa vysvetľuje nielen ťažkosťami pri získavaní kultúry húb, ale aj pri interpretácii výsledkov výskumu, pretože huby, kvasinkové aj vláknité, môžu kolonizovať sliznice a kontaminovať študované vzorky. V tomto ohľade je diagnostika invazívnych mykóz založená na integrovanom prístupe, ktorý zahŕňa nielen výsledky mykologických (kultúrnych) a sérologických (stanovenie hubového antigénu) štúdií, ale aj klinické príznaky plesňovej infekcie, údaje z pomocných výskumných metód ( počítačové alebo magnetické rezonančné zobrazovanie, ultrazvuk).

skupina pre európsko-americkú spoluprácu na štúdium invazívnych mykóz U imunokompromitovaných pacientov boli vyvinuté kritériá na diagnostiku invazívnych mykóz. Boli prezentované v roku 2001 na Medzinárodnej konferencii o antimikrobiálnych látkach a chemoterapii (ICAAC, Chicago) a v roku 2002 v tlačenej podobe. Boli definované kritériá pre preukázanú, pravdepodobnú a možnú invazívnu mykózu, ktoré sa odporúčajú na použitie v klinických a epidemiologických štúdiách

Overená invazívna mykóza spôsobená vláknitými hubami: detekcia hubového mycélia v biopsiách alebo aspirátoch počas histologického alebo cytologického vyšetrenia alebo izolácie kultúry zo vzoriek získaných za aseptických podmienok z normálne sterilnej lézie, ktorá je podľa výsledkov klinických a rádiologických štúdií spojená s infekciou, s výnimkou štúdií moču a slizníc.

Overená invazívna mykóza spôsobená kvasinkovými hubami: detekcia kvasinkových buniek (huby rodu Candida môžu vytvárať pseudomycélium alebo pravé mycélium) v biopsiách alebo aspirátoch, s výnimkou vzoriek zo slizníc, alebo izolácia kultúry zo vzoriek získaných za aseptických podmienok z normálne sterilnej lézie, ktorá podľa na výsledky klinického a rádiologického vyšetrenia spojeného s infekciou, s výnimkou moču, vzoriek z dutín a slizníc, alebo detekciu mikroskopicky a špecifické farbenie (v kvapke indického atramentu, mucikarmínové farbenie) kvasinkových buniek alebo a pozitívny antigén Cryptococcus spp. v cerebrospinálnej tekutine.

Huby spôsobené vláknitými hubami: izolácia krvnej kultúry húb, s výnimkou Aspergillus spp. a Penicillium spp., vrátane Penicillium marneffei, v kombinácii s klinickými symptómami infekčného procesu kompatibilného s izolovaným patogénom.

Plesne spôsobené kvasinkovými hubami: izolácia hemokultúry Candida alebo iných kvasinkových húb od pacientov s klinickými príznakmi infekcie spojenej s týmto patogénom.

Komplex diagnostických štúdií pre invazívne mykózy

Študovaný biomateriál	Indikácie, použité médiá, význam
Krv	Indikácie: pretrvávajúca horúčka (4-5 dní alebo viac) počas liečby širokospektrálnymi antibiotikami; druhá „vlna“ horúčky počas antibiotickej liečby Odber krvi zo žily do liekoviek na aeróbne baktérie* alebo do selektívneho média pre huby, opakovane (2-3 krát denne s intervalom 1 hodiny) Diagnostický význam: izolácia kvasinkových húb, starostlivá interpretácia pri izolácii vláknitých húb, s výnimkou Fusarium spp.
Venózny katéter	Indikácie: izolácia kvasinkových húb z krvi Centrálny alebo periférny venózny katéter sa odstráni vo všetkých prípadoch izolácie kvasiniek z krvi Na mykologický výskum sa používa asepticky odstránený distálny úsek katétra dlhý 5-6 cm Štúdia sa uskutočňuje semikvantitatívne (metóda Maki) alebo kvantitatívna metóda na Sabouraudovom médiu Diagnostický význam: izolácia kvasinkových húb v semikvantitatívnej štúdii 15 CFU alebo viac, v kvantitatívnej štúdii - 103 CFU/ml alebo viac na potvrdenie diagnózy infekcie spojenej s katétrom alebo infekcie katétra
Výtok z horných dýchacích ciest, spútum, výplachy z priedušnice, priedušiek, tekutina z bronchoalveolárneho výplachu	Indikácie: podozrenie na mykózy spôsobené vláknitými hubami alebo Cryptococcus neoformans; dlhotrvajúca horúčka počas liečby širokospektrálnymi antibiotikami a neutropénia Mikroskopia vzoriek s calcofluor white (detekcia mycélia alebo pseudomycélia); siatie na Sabouraudovom médiu; stanovenie antigénu Aspergillus v tekutine z bronchoalveolárnej laváže v prítomnosti lézií v pľúcach charakteristických pre invazívnu aspergilózu Diagnostický význam: izolácia vláknitých húb alebo Cryptococcus neoformans
Cerebrospinálna tekutina	Indikácie: príznaky meningitídy; detekcia lézie (lézií) v mozgu pomocou počítačovej tomografie alebo zobrazovania magnetickou rezonanciou; „mozgové“ symptómy v dôsledku horúčky a neutropénie Mikroskopia s calcofluor white, v kvapke atramentu; stanovenie antigénu Aspergillus, Cryptococcus; siatie v stredu Sabouraud Diagnostický význam: detekcia húb, kvasinkových aj vláknitých; pozitívny antigén
Biopsie, aspiráty, peritoneálna tekutina, pleurálna tekutina	Indikácie: klinické a/alebo rádiologické príznaky invazívnej mykózy; horúčka počas liečby širokospektrálnymi antibiotikami. Mikroskopia s calcofluor white, kultivácia na Sabouraudovom médiu Diagnostický význam: detekcia húb, kvasinkových aj vláknitých

* Frekvencia izolácie húb z krvi bola identická, keď sa počiatočná krv odobrala do oboch fľaštičiek s bakteriálnym kultivačným médiom a so selektívnym hubovým médiom. Štúdia sa uskutočnila s použitím bakteriologického analyzátora VASTES 9240.

Možná invazívna mykóza diagnostikovaná na základe kombinácie nasledujúcich kritérií:
jeden znak z kategórie mikrobiologických kritérií;
jeden príznak z kategórie „významných“ alebo dva zo skupiny „menej významných“ klinických príznakov infekčného procesu.

Možná invazívna mykóza diagnostikovaná na základe kombinácie nasledujúcich kritérií:
prítomnosť aspoň jedného rizikového faktora vyvolávajúceho rozvoj invazívnej mykózy;
jeden znak z kategórie mikrobiologických kritérií alebo jeden znak z kategórie „významné“ (dva zo skupiny „menej významné“) klinické príznaky infekčného procesu.

Koncept " možná invazívna mykóza» Neodporúča sa používať v klinických štúdiách skúmajúcich účinnosť antimykotík. Tento termín môžete použiť pri analýze empirickej antimykotickej liečby, epidemiologických štúdiách a štúdiu farmakoekonomiky.

O mykologický výskum sterilné aspiráty alebo biopsie zohľadňujú nielen izoláciu hubových kultúr, ale aj dôkaz mycélia alebo pseudomycélia mikroskopicky. V histologických preparátoch je Aspergillus ťažké odlíšiť od Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum a niektorých iných vláknitých húb. Pre diferenciálnu diagnostiku je potrebné vykonať imunohistochemickú štúdiu s protilátkami proti Aspergillus.

Izolácia kvasinkových húb z krvi aspoň v jednej štúdii patrí do kategórie „overených“ invazívnych mykóz a je absolútnou indikáciou na predpisovanie systémových antimykotík u pacientov s neutropéniou. Frekvencia detekcie kvasinkových húb z krvi je nízka, dokonca aj pri diseminovanej kandidóze je 35-50%.
Vykonávanie opakované hemokultúry zvyšuje pravdepodobnosť dosiahnutia pozitívnych výsledkov.

Iné výklad výsledky v prípade zistenia vláknitých húb v krvi. Vysoká frekvencia izolácie vláknitých húb je charakteristická pre Fusarium spp. a predstavuje 40 až 60 %. Aspergillus sa zistí veľmi zriedkavo, vo väčšine prípadov sa považuje za kontamináciu, s výnimkou Aspergillus terreus.

Výber Aspergillus terreus z krvi pacientov s hemoblastózami môže naznačovať skutočnú aspergilémiu a v prítomnosti klinických príznakov infekcie je základom pre predpisovanie antimykotík.

Kritériá pre invazívnu mykózu

Index	Kritériá
Faktory vyvolávajúce výskyt invazívnej mykózy (makroorganizmus)	neutropénia (< 0,5*109/л в течение 10 дней) Pretrvávajúca horúčka viac ako 96 hodín počas liečby širokospektrálnymi antibiotikami Telesná teplota nad 38 °C alebo pod 36 °C a niektorý z nasledujúcich predisponujúcich príznakov: predĺžená neutropénia (viac ako 10 dní) počas predchádzajúcich 60 dní, intenzívna imunosupresívna liečba počas posledných 30 dní, preukázaná alebo pravdepodobná invazívna mykóza v predchádzajúcich periódová neutropénia alebo AIDS Prítomnosť symptómov GVHD, predovšetkým prípady ťažkého priebehu (II. stupeň) alebo rozsiahly priebeh chronického ochorenia Dlhodobé (viac ako 3 týždne) užívanie glukokortikoidov počas posledných 60 dní
Mikrobiologické príznaky	Izolácia kultúry vláknitých húb (vrátane Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. a zygomycetes) a Cryptococcus neqformans zo spúta alebo tekutiny z bronchoalveolárnej laváže Pozitívne výsledky kultivačného alebo cytologického vyšetrenia (priama mikroskopia) na detekciu vláknitých húb z aspirátov vedľajších nosových dutín Detekcia vláknitých húb alebo Cryptococcus neoformans pomocou cytológie/priamej mikroskopie zo spúta alebo tekutiny z bronchoalveolárnej laváže Pozitívny antigén Aspergillus vo vzorkách bronchoalveolárnej laváže, cerebrospinálnej tekutiny a krvi (najmenej dvoch) Pozitívny kryptokokový antigén vo vzorkách krvi Detekcia hubových elementov cytologickým vyšetrením alebo priamou mikroskopiou vo vzorkách normálne sterilných tekutín (napríklad Cryptococcus spp. v mozgovomiechovom moku) Dva pozitívne výsledky štúdií o detekcii kultúr kvasiniek v moči pri absencii močového katétra Kryštály Candidy v moči bez močového katétra Izolácia Candida spp. z krvných kultúr
Klinické príznaky Dolné dýchacie cesty	Musí byť spojené s miestom, z ktorého sa odoberajú vzorky na mikrobiologický výskum Ktorýkoľvek z nasledujúcich typov nových pľúcnych infiltrátov podľa CT: halo znak, znak polmesiaca, dutina s oblasťami konsolidácie* Príznaky infekcie dolných dýchacích ciest (kašeľ, bolesť na hrudníku, hemoptýza, dýchavičnosť), trenie pohrudnice, akákoľvek nová infiltrácia, ktorá nie je zahrnutá medzi príznaky vysokej závažnosti; pleurálny výpotok
Horné dýchacie cesty Znaky s vysokým významom Známky menšieho významu	Rádiologické príznaky invazívnej infekcie v nosových dutinách (erózia steny alebo šírenie infekcie do priľahlých štruktúr, rozsiahla deštrukcia kostí lebky) Výtok z nosa, upchatý nos, ulcerácia v nose, epistaxa, periorbitálny edém, bolesť v hornej čeľusti, čierna nekrotická ulcerácia alebo perforácia tvrdého podnebia
centrálny nervový systém Znaky s vysokým významom Známky menšieho významu	Rádiologické príznaky suspektnej infekcie CNS (mastoiditída alebo iné parameningeálne ložisko, extradurálny empyém, mnohopočetné lézie v substancii mozgu alebo miechy) fokálne neurologické symptómy a znaky, vrátane fokálnych záchvatov, hemiparézy; poruchy vedomia, meningeálne symptómy, poruchy biochemického zloženia mozgovomiechového moku a jeho bunkového zloženia (pri absencii iných patogénov, podľa kultivácie a mikroskopie, pri absencii nádorových buniek)

*Pri absencii infekcie spôsobenej mikroorganizmami, ktoré môžu spôsobiť podobný rádiologický obraz, vrátane tvorby dutín (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.).

O detekcia v krvi alebo iných sterilných biosubstrátov kvasinkových húb je potrebné vykonať identifikáciu k druhu a určiť citlivosť na antimykotiká, pri izolácii vláknitých (plesňových) húb iba identifikáciu na druh, citlivosť sa nestanovuje.

V klinickom prax Citlivosť vláknitých húb nie je študovaná kvôli nedokonalým štandardom na stanovenie citlivosti takýchto húb na antimykotiká. Okrem toho iba jedna štúdia preukázala koreláciu medzi citlivosťou Aspergillus spp. a výsledky liečby invazívnej aspergilózy u pacientov s hematologickými malignitami. Žiadna z nasledujúcich štúdií nepriniesla podobné výsledky.

Nedávno sa začali objavovať ojedinelé správy o vzniku získanej rezistencie húb A. fumigatus na itrakonazol a vorikonazol.

Identifikácia húb podľa druhov, najmä tie, ktoré sa získajú zo sterilných lokusov, je nevyhnutný predovšetkým na výber antimykotika a uskutočnenie adekvátnej antifungálnej terapie. Candida krusei je teda rezistentná na flukonazol a menej citlivá ako iné druhy kvasiniek na amfotericín B; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. odolný voči amfotericínu B; Mucorales sú rezistentné na itrakonazol, vorikonazol, Candida glabrata prejavuje citlivosť na flukonazol závislú od dávky a pri izolácii tohto typu húb, dokonca aj citlivých kmeňov, je potrebné zvýšiť dávku flukonazolu (dospelým sa predpisuje 800 mg namiesto 400 mg); Candida lusitaniae je odolná voči amfotericínu B.

Identifikácia húb podľa druhov je tiež dôležité pre vykonávanie epidemiologických analýz v nemocnici - identifikácia pôvodcov prepuknutia infekcie a ak je to možné, zdroj infekcie. Boli popísané ohniská infekcie spôsobené takými vzácnymi hubami ako C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Na základe identifikácia druhov húb Možno predpokladať invazívnu mykózu alebo plesňové osídlenie slizníc. Napríklad u Aspergillus niger je podstatne menej pravdepodobné ako u Aspergillus fumigatus, že spôsobí invazívnu aspergilózu u pacientov s akútnou leukémiou. Izolácia Aspergillus niger z tekutiny bronchoalveolárnej laváže sa najčastejšie považuje za kolonizáciu dýchacieho traktu a zo spúta ako kontamináciu zo vzduchu a vyžaduje si ďalší výskum pri potvrdení diagnózy invazívnej aspergilózy.

Na základe sekréty vláknitých húb zo spúta, bronchoalveolárnej tekutiny a aspirátu z vedľajších nosových dutín možno invazívnu mykózu iba predpokladať, bez toho, aby sme ju zaradili do kategórie „overené“. Vždy je však potrebné vziať do úvahy detekciu Aspergillus v spúte, najmä Aspergillus fumigatus alebo Aspergillus flavus, u pacientov s neutropéniou, ktorí dostávajú alogénnu kostnú dreň. To si vyžaduje opakované mykologické vyšetrenie a počítačovú tomografiu pľúc. Pri neutropénii je teda pravdepodobnosť detekcie invazívnej aspergilózy v prípade pozitívnej kultúry Aspergillus spp. v spúte je 80 %.

Výber Cryptococcus neoformans u imunokompromitovaných pacientov z dýchacích ciest (výplachy, výplachy) je diagnosticky významný. Ak identifikácia kvasinkových húb z tekutín získaných z dýchacích ciest (tracheálne, bronchiálne výplachy, bronchoalveolárna laváž) imunokompromitovaných pacientov nie je potrebný výskum, potom je potrebný skríning na identifikáciu Cryptococcus neoformans z týchto vzoriek.

Detekcia kandidy v moči u pacientov s neutropéniou a horúčkou sa zvyčajne považuje za prejav diseminovanej kandidálnej infekcie.

Včas diagnostika invazívne úspešne použiť komerčný test na zistenie cirkulácie špecifického antigénu Aspergillus spp. galaktoman (polysacharid vo vode rozpustný komponent bunkovej steny huby).

Galactomann možno stanoviť dvoma metódami: latexovou aglutinačnou metódou (Pastorex Aspergillus, BioRAD) a enzýmovou imunoanalýzou (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Výhoda metóda enzýmovej imunoanalýzy je nižší prah citlivosti na stanovenie hladiny galaktomanu v krvi - 1 ng/ml alebo menej a pomocou latexovej aglutinácie - 15 ng/ml. Stanovenie galaktomanu v krvi (najmenej 2 vzorky), cerebrospinálnej tekutine a bronchoalveolárnej laváže má diagnostickú hodnotu. Senzitivita metódy enzýmovej imunoanalýzy je asi 90 %, špecificita 90 – 99 %, u príjemcov alogénnej kostnej drene sú tieto ukazovatele nižšie a rovnajú sa 60 – 70 % a 80 – 90 %, v dôsledku profylaktickej užívanie antifungálnych liekov (antimykotiká znižujú prahovú hladinu galaktomanu).

V 40% prípadov detekcia galaktoman v krvi predbieha prejavy invazívnej aspergilózy, zistené počítačovým vyšetrením pľúc a v 70 % predbieha klinické príznaky infekcie.

Diagnostická hodnota testu detekcie antigénu Aspergillus ide o prípad, ak sa štúdia vykonáva opakovane. Stanovenie antigénu Aspergillus v krvi sa má vykonávať počas horúčky počas liečby širokospektrálnymi antibiotikami u pacientov s neutropéniou 2-krát týždenne; na pneumóniu, ktorá sa vyskytuje alebo pretrváva počas antibakteriálnej liečby; keď sa zistia lézie v pľúcnom tkanive (počítačová tomografia).