Klinická a laboratórna diagnostika infekcie HIV má tri smery:

1. Zistenie skutočnosti infekcie HIV, diagnostika infekcie HIV.
2. Určenie štádia klinického priebehu ochorenia a identifikácia sekundárnych ochorení.
3. Prognóza progresie klinického priebehu ochorenia, laboratórne sledovanie účinnosti liečby a nežiaducich účinkov antiretrovírusových liekov.

1. Zistenie infekcie HIV, diagnostika infekcie HIV

Na stanovenie infekcie HIV sa používajú tieto špecifické indikátory: protilátky proti HIV, HIV antigény, HIV RNA a provírusová DNA. Protilátky proti HIV sa stanovujú enzýmovou imunoanalýzou (ELISA) alebo imunoblotovaním, čo je v podstate typ ELISA. Antigény (proteíny) HIV sa stanovujú pomocou ELISA. Pomocou molekulárno-genetických metód polymerázovej reťazovej reakcie (PNR) a bDNA je možné stanoviť HIV RNA a DNA provírusu. Použitie dodatočnej metódy hybridizácie nukleových kyselín so špecifickými DNA sondami umožňuje kontrolovať špecifickosť DNA sekvencií získaných počas PCR. Citlivosť PCR – detekcia vírusových génov v jednej z päťtisíc buniek.

Počas primárnej infekcie sa pozoruje nasledujúca dynamika markerov HIV v krvi infikovaných. V prvom mesiaci dochádza v dôsledku aktivácie replikačného procesu k prudkému zvýšeniu vírusovej záťaže (obsah HIV RNA v plazme), následne v dôsledku šírenia vírusu a masívnej infekcie cieľových buniek v krvi a lymfe uzlov, je možné určiť provírusovú DNA. Prvoradú diagnostickú hodnotu má fakt detekcie provírusovej DNA integrovanej do genómu cieľovej bunky.

Vírusová záťaž odráža intenzitu replikačného procesu v infikovaných bunkách. V období primárnej infekcie je úroveň vírusovej záťaže pri infekcii rôznymi subtypmi HIV odlišná, ale dynamika jej zmien je približne rovnaká. Napríklad pri infekcii podtypom B, ak je v prvom mesiaci po infekcii hodnota vírusovej záťaže 700 kópií / ml, potom v 2. mesiaci dôjde k poklesu na 600, v 3. - na 100, v 4. - až 50 kópií / ml. Takáto dynamika sa pozoruje na pozadí zvýšenia obsahu špecifických protilátok proti HIV v krvi. Obsah provírusovej DNA v krvných mononukleárnych bunkách pacientov infikovaných HIV je charakterizovaný relatívnou stálosťou počas prvých 6 mesiacov s miernymi výkyvmi v niektorých podtypoch. Zaťaženie RNA a DNA teda nie je totožné.

Počas inkubačnej fázy nedochádza po určitú dobu k tvorbe špecifických protilátok proti HIV v množstve dostatočnom na to, aby sa dalo určiť existujúcimi laboratórnymi metódami. Pred detekciou protilátok sa v krvi na veľmi krátky čas pozoruje výskyt proteínu Nef, ktorý potláča replikačný proces, a štrukturálneho proteínu p24. Antigén p24 je možné zistiť v krvi enzýmovou imunoanalýzou už 1-2 týždne po infekcii a možno ho stanoviť do 8. týždňa, potom jeho obsah prudko klesá. Ďalej, v klinickom priebehu infekcie HIV je zaznamenané druhé zvýšenie obsahu proteínu p24 v krvi. Pripadá na obdobie vzniku AIDS. Vymiznutie voľných (neviazaných protilátkami) proteínov jadra p24 v krvi a objavenie sa špecifických protilátok proti proteínom HIV znamenajú nástup sérokonverzie (obr. 9.6).

Virémia a antigenémia spôsobujú tvorbu špecifických protilátok triedy IgM (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Voľné protilátky triedy IgM a IgG proti proteínu p24 sa môžu objaviť už od 2. týždňa, ich obsah sa zvyšuje v priebehu 2-4 týždňov a dosahuje určitú úroveň, ktorá zostáva mesiace (IgM) a roky (IgG) (obr. 9.7 ).

Výskyt úplnej sérokonverzie, keď je v periférnej krvi zaznamenaná vysoká hladina špecifických protilátok triedy IgG proti štrukturálnym proteínom HIV p24, gp41, gp120, gp160, výrazne uľahčuje diagnostiku infekcie HIV. Protilátky proti HIV sa objavia u 90-95% infikovaných do 3 mesiacov po infekcii, u 5-9% - v období od 3 do 6 mesiacov od okamihu infekcie a u 0,5-1% - neskôr.

Napriek tomu, že protilátky proti HIV sa objavujú ako posledné, hlavným laboratórnym diagnostickým ukazovateľom je zatiaľ dôkaz špecifických protilátok pomocou ELISA a imunoblottingu.

Údaje uvedené v tabuľke 9.2 [šou] a 9.3 [šou] , jednoznačne preukazujú vysokú citlivosť moderných testovacích systémov ELISA pri detekcii protilátok proti HIV, ktorá prevyšuje citlivosť imunoblottingu. V niektorých prípadoch, keď dostane primárny pozitívny výsledok v ELISA, môže byť potvrdený imunoblotovaním až po 2-3 týždňoch.

Pri vyšetrovaní pacientov s infekciou HIV (infikovaných HIV) pomocou imunoblotovacích testovacích systémov popredných svetových spoločností sa protilátky proti gp160 a p24/25 zistia vo všetkých prípadoch, protilátky proti iným proteínom sa zistia v 38,8 – 93,3 % prípadov (tab. 1 9.4 [šou] ).

Ťažkosti s detekciou protilátok u pacientov s infekciou HIV môžu nastať v obdobiach masívnej virémie a antigenémie, keď sú existujúce špecifické protilátky v krvi spojené s vírusovými časticami a replikačný proces predbieha produkciu nových antivírusových protilátok. Táto situácia môže prísť a odísť počas infekčného procesu.

U pacientov s pôvodne oslabeným imunitným systémom sa virémia a antigenémia objavujú skôr a zostávajú na vysokej úrovni až do výsledku ochorenia. U takýchto pacientov je nízky obsah voľných protilátok proti HIV, a to z dvoch dôvodov - nedostatočná tvorba protilátok B-lymfocytmi a väzba protilátok viriónmi a rozpustnými HIV proteínmi, preto na stanovenie infekcie testovacie systémy so zvýšenou citlivosťou alebo sú potrebné modifikácie analytických metód, ktoré zahŕňajú štádium uvoľňovania protilátky z imunitných komplexov.

Najčastejšie k poklesu obsahu protilátok proti HIV z indikovaných príčin dochádza v terminálnom štádiu, kedy protilátky proti HIV v sére rezu nemusia byť zachytené metódami enzýmovej imunoanalýzy, ani imunoblottingom (Western blot). Okrem objavenia sa špecifických protilátok proti HIV je imunitná odpoveď v prvých 4 mesiacoch charakterizovaná znížením obsahu infikovaného CD4+ v krvi a zvýšením počtu CD8+ buniek. Ďalej sa obsah buniek nesúcich receptory CD4 a CD8 stabilizuje a zostáva nejaký čas nezmenený. Zvýšenie obsahu CD8-lymfocytov je ochranná reakcia, pretože. bunkovo ​​závislá cytotoxicita je realizovaná CD8+-lymfocytmi, ktoré sú zamerané na deštrukciu buniek infikovaných HPV. Na začiatku reagujú cytotoxické lymfocyty (CTL) na regulačný proteín Nef vírusu, ktorý hrá dôležitú úlohu pri znižovaní vírusovej (RNA) záťaže v plazme HIV-infikovanej osoby v prvých mesiacoch. Potom sa CTL odpoveď formuje na ostatné, vr. štrukturálne proteíny HIV, v dôsledku čoho sa 12 mesiacov po infekcii cptotoxický účinok výrazne zvyšuje.

Schémy na laboratórnu diagnostiku infekcie HIV

Vzhľadom na danú dynamiku špecifických markerov HIV infekcie je v praxi vhodné dodržiavať nasledujúce schémy laboratórnej diagnostiky u dospelých (obr. 9.8-9.10).

Schémy odrážajú tri hlavné štádiá primárnej laboratórnej diagnostiky infekcie HIV:

1. Skríning.
2. Odkaz.
3. Expert.

Potreba niekoľkých stupňov laboratórnej diagnostiky je primárne spôsobená ekonomickými úvahami. Takže napríklad náklady na vykonanie jednej expertnej štúdie pomocou domácich testovacích systémov imunoblotovaním sú až 40 USD, skríning (pomocou ELISA) je asi 0,2, teda pomer je 1:200.

V prvej fáze (obr. 9.8) sa testované osoby testujú na protilátky proti HIV pomocou jedného testovacieho systému ELISA určeného na detekciu protilátok proti obom typom vírusu – HIV-1 a HIV-2.

Výrobcovia v navrhovaných testovacích systémoch používajú ako antigénny základ vírusový lyzát, rekombinantné proteíny, syntetické peptidy. Každý z uvedených nosičov HIV antigénnych determinantov má svoje výhody a nevýhody. Preto pri výbere testovacích systémov s približne rovnakými nákladmi by sa mali uprednostniť súpravy s najvyššou citlivosťou (najlepšie 100 %). Medzi testovacími systémami s rovnakou cenou a citlivosťou sa odporúča venovať pozornosť tým, ktoré majú maximálnu špecifickosť.

Na základe vírusového lyzátu boli vytvorené prvé testovacie systémy na laboratórnu diagnostiku HIV infekcie. V 80. rokoch sa takéto testovacie systémy vyznačovali senzitivitou menšou ako 100 % a nízkou špecificitou, prejavujúcou sa veľkým počtom (až 60 %) falošne pozitívnych výsledkov.

Počas tvorby viriónu v kultúre lymfocytov sa jeho obal vytvára z vonkajšej membrány, a preto obsahuje antigény hlavného histokompatibilného komplexu triedy I a II. Táto okolnosť spôsobuje falošne pozitívne reakcie v prípade, že sú v krvi pacientov prítomné protilátky proti histokompatibilným aloantigénom.

Neskôr sa na získanie vírusu navrhlo použiť kultúru makrofágov, v ktorej sa vírusové častice tvoria hlavne intracelulárne pučaním nie z vonkajšej membrány bunky, ale z membrán endoplazmatického retikula. Táto technológia znížila počet falošne pozitívnych výsledkov.

Enzýmové imunoanalýzy sú uznávané ako jedny z najlepších z hľadiska najdôležitejších charakteristík – citlivosti a špecificity – v rámci ktorých sa spája kombinácia purifikovaného vírusového lyzátu so syntetickými peptidmi, ktoré sú antigénovo najvýznamnejšími oblasťami proteínov vírusu, resp. rekombinantné proteíny.

Citlivosť testovacieho systému závisí aj od vlastností ostatných komponentov súprav. Testovacie systémy využívajúce konjugáty, ktoré rozpoznávajú protilátky nielen triedy IgG, ale aj IgM a IgA, umožňujú odhaliť skoršiu fázu sérokonverzie. Sľubným sa javí použitie testovacích systémov, ktoré dokážu súčasne stanoviť antivírusové protilátky aj antigén p24, čo robí laboratórnu diagnostiku infekcie HIV ešte skoršou.

Počiatočný pozitívny výsledok sa musí znova skontrolovať opätovným testovaním vzorky v tom istom testovacom systéme, ale pokiaľ možno v inej dávke a iným laboratórnym asistentom. Ak sa pri druhom vyšetrení zistí negatívny výsledok, vyšetrenie sa vykoná tretíkrát.

Po potvrdení pozitívneho výsledku je žiaduce znovu odobrať krv a vyšetriť ju na protilátky proti HIV ako primárnu. Opakovaný odber krvi pomáha predchádzať chybám spôsobeným nepresným označením skúmaviek a vypĺňaním odporúčacích formulárov.

Sérum pozitívne v štádiu skríningu sa posiela do referenčných štúdií vykonaných pomocou dvoch alebo troch vysoko špecifických testovacích systémov ELISA. V prípade dvoch pozitívnych výsledkov sa vykoná odborná štúdia imunoblotovaním.

Použitie testovacích systémov ELISA v referenčnej diagnostike, pomocou ktorých možno rozlíšiť špecifické protilátky proti HIV-1 a HIV-2, uľahčuje ďalšiu prácu a umožňuje okamžité vyšetrenie pozitívnej vzorky v štádiu experta pomocou vhodného imunoblotu (HIV- 1 alebo HIV-2).

Laboratórny odborný posudok o infekcii HIV sa vydáva až na základe pozitívneho výsledku Western blot. Pri vykonávaní expertnej diagnostiky je potrebné použiť nomenklatúru génov a génových produktov HIV navrhnutú v roku 1990 skupinou odborníkov WHO (tabuľka 9.5 [šou] ).

Špecifickosť prúžkov na imunoblote by sa mala vyhodnotiť veľmi opatrne a starostlivo s použitím výsledkov štúdií kontrolných sér (pozitívnych a negatívnych), ktoré sa vykonávajú súbežne so štúdiom experimentálnych vzoriek, a vzorky imunoblotu s označením HIV proteínov (výrobca pripojených k testovaciemu systému). Interpretácia získaných výsledkov by sa mala vykonať v súlade s pokynmi pripojenými k testovaciemu systému. Kritériom pozitivity je spravidla povinná prítomnosť protilátok proti dvom proteínom (prekurzorovým, vonkajším alebo transmembránovým) kódovaným génom env a možná prítomnosť protilátok proti produktom dvoch ďalších štrukturálnych génov HIV - gag a pol ( Tabuľka 9.6 [šou] ).

V prípade získania pochybného výsledku je potrebné použiť zoznam odporúčaní na konečné objasnenie výsledkov imunoblottingu (tabuľka 9.7 [šou] ).

Podľa odporúčaní Ruského vedeckého a metodického centra pre prevenciu a kontrolu AIDS sa za pozitívny výsledok považuje prítomnosť protilátok aspoň proti jednému z proteínov gp41, gp120, gp160 v kombinácii s protilátkami proti iným špecifickým HIV- 1 proteíny alebo bez nich. Tieto odporúčania vychádzajú zo skúseností so sérami od detí z nozokomiálnych ložísk, v ktorých boli často zistené protilátky len proti jednému z vírusových obalových proteínov.

Hlavná časť iniciálne vyšetrených pacientov séropozitívnych v ELISA patrí do fázy perzistujúcej generalizovanej lymfadenopatie (PGL) alebo do asymptomatickej fázy. Preto sa na imunoblote (nitrocelulózový prúžok, na ktorom sú imobilizované HIV proteíny) zvyčajne stanovuje nasledujúca kombinácia protilátok proti HIV-1: protilátky proti obalovým proteínom gp160, gp120 a gp41 kódované génom env, v kombinácii s protilátkami proti jadrové proteíny p24 (proteínový nukleokapsid kódovaný génom gag) a p31/34 (endonukleáza kódovaná génom pol).

Pozitívne reakcie len s gag a/alebo pol proteínmi sa môžu vyskytnúť v skorej fáze sérokonverzie a tiež naznačujú infekciu spôsobenú HIV-2 alebo nešpecifickú reakciu.

Ak sa získa pochybný výsledok, je možné použiť rôzne metodické techniky na objasnenie skutočnosti infekcie HIV.

V závislosti od technických možností (dostupnosť diagnostických súprav a činidiel, vybavenie špeciálnym vybavením a zaškolenie personálu) vykonáva odborné laboratórium dodatočné diagnostické štúdie (obr. 9.10).

V niektorých prípadoch je vhodné použiť molekulárne genetické metódy na stanovenie genetických sekvencií HIV v sére, krvných lymfocytoch alebo punkciách lymfatických uzlín. Overenie špecifickosti DNA sekvencií získaných pomocou PCR sa môže uskutočniť hybridizáciou nukleových kyselín so špecifickými DNA sondami.

Metódy rádioimunoprecipitácie (RIP) a nepriamej imunofluorescencie (IFl) možno použiť aj na konečnú verifikáciu sér s pochybnými výsledkami imunoblotu.

Detekcia HIV RNA v plazme kvalitatívnou alebo kvantitatívnou metódou nie je pre diagnózu HIV infekcie významná. Takýto výsledok by mal byť potvrdený štandardnými metódami, ako je imunobloting, 2-4 mesiace po prijatí počiatočnej pochybnej alebo negatívnej odpovede.

Izolácia HIV v bunkovej kultúre je konečná pravda. Metóda je však zložitá, drahá a vykonáva sa len v špeciálne vybavených výskumných laboratóriách.

Obsah CD4+ buniek v krvi je nešpecifický ukazovateľ, avšak v kontroverzných prípadoch (ELISA „+“, imunoblot „-“, prítomnosť klinických príznakov infekcie HIV / AIDS) môže byť použitý ako vodítko na odborné rozhodnutie. Ak má laboratórium schopnosť vykonávať iba imunobloting, potom by sa mali dodržiavať odporúčania uvedené v tabuľke 1. 9.7 a na obr. 9.9.

Osoby, ktorých séra majú pochybné (neurčité) výsledky pri odbornom vyšetrení, okrem prípadov detekcie protilátok len proti p17 (HIV-1) alebo p16 (HIV-2), by mali byť opätovne testované do 6 mesiacov (po 3 mesiacoch). V prípade skutočnej infekcie HIV sa po 3-6 mesiacoch pozoruje "pozitívny" trend v spektre protilátok - dodatočná tvorba protilátok proti iným proteínom vírusu. Falošná reakcia je charakterizovaná pretrvávaním nejednoznačného vzoru imunoblotu po dlhú dobu alebo vymiznutím podozrivých pásov. Ak sú po stanovenom časovom období výsledky opakovaného imunoblottingu negatívne alebo ostanú na pochybách, potom pri absencii rizikových faktorov, klinických symptómov alebo iných faktorov spojených s infekciou HIV možno osobu považovať za séronegatívnu na protilátky proti HIV- 1 a HIV-2.

Falošne pozitívne výsledky v dôsledku obsahu protilátok proti aloantigénom histokompatibility v krvi pacientov, ktoré sú súčasťou obalu HIV, sa na imunoblote objavujú vo forme pásov na úrovni gp41 a gp31. Príčiny iných nešpecifických reakcií (napríklad na p24, ktoré sa často vyskytujú u jedincov s autoimunitnými procesmi) zatiaľ nie sú objasnené.

Zlepšenie technológie výroby testovacích systémov ELISA umožnilo dosiahnuť vysokú citlivosť – až 99,99 %, pričom citlivosť metódy imunoblotovania je 97 %. Preto negatívny výsledok imunoblotu s pozitívnymi výsledkami ELISA môže naznačovať počiatočné obdobie sérokonverzie charakterizované nízkymi hladinami špecifických protilátok. Štúdiu je preto potrebné zopakovať po 1,5 – 2 mesiacoch, čo je čas potrebný na dokončenie sérokonverzie, aby sa dosiahla koncentrácia špecifických protilátok v krvi dostatočná na detekciu imunoblottingom.

Pozitívny výsledok (výsledky) štúdie v referenčnom alebo jedinom skríningovom štádiu laboratórnej diagnostiky infekcie HIV, t. j. pozitívny výsledok v akomkoľvek testovacom systéme enzýmovej imunoanalýzy, v konečnom dôsledku nepotvrdený odbornými metódami, sa interpretuje ako prítomnosť krížovej -reaktívne protilátky v krvi vyšetrovaných protilátok. Krížová reaktivita označuje väzbu protilátok na nešpecifické miesta na HIV proteínoch alebo peptidoch používaných ako antigénny základ v testovacom systéme, v ktorom sa získa pozitívny výsledok.

Pri absencii imunodeficiencie a klinických príznakov infekcie HIV sa takíto jedinci považujú za séronegatívnych na protilátky proti HIV a mali by sa zrušiť.

Konečná diagnóza HIV infekcie je stanovená až na základe všetkých klinických, epidemiologických a laboratórnych údajov. Iba ošetrujúci lekár má právo informovať pacienta o diagnóze HIV infekcie.

Hlavnou metódou potvrdzujúcej (odbornej) laboratórnej diagnostiky HIV infekcie je imunoblotovanie. Vzhľadom na jeho nižšiu citlivosť v porovnaní s testom ELISA však množstvo výskumníkov navrhlo použitie kombinácie niekoľkých testovacích systémov na konečné stanovenie prítomnosti špecifických protilátok proti HIV. Napríklad G. van der Groen a kol. navrhli alternatívu k metóde imunoblotovania na kontrolu pozitívnych výsledkov skríningového štádia laboratórnej diagnostiky infekcie HIV. Ide o štúdium materiálu paralelne v troch testovacích systémoch, ktoré sú založené na rôznych metódach zisťovania špecifických protilátok proti HIV (niekoľko variantov ELISA, aglutinačná reakcia) pomocou antigénov rôzneho charakteru. Autori mohli zvoliť také kombinácie testovacích systémov, ktorých použitie poskytuje 100% senzitivitu a špecifickosť v porovnaní s výsledkami získanými pri imunoblotingu.

Nepochybnou výhodou tejto metódy expertnej diagnostiky je nízka cena, avšak nedostatok informácií o tom, ktoré špecifické proteíny vírusu sa v krvi pacienta nachádzajú, neumožňuje posúdiť špecifickosť reakcie v každom jednotlivom prípade. ako sledovanie zmien v spektre protilátok v ranom štádiu sérokonverzie.

Laboratórna diagnostika infekcie HIV u detí narodených matkám infikovaným vírusom HIV má svoje vlastné charakteristiky. Od momentu narodenia, po dlhú dobu (až 15 mesiacov) môžu materské protilátky proti HIV cirkulovať v krvi takýchto detí. Placentárnou bariérou prenikajú iba imunoglobulíny triedy IgG, preto detekcia HPV špecifických mupoglobulínov tried IgM a IgA u dieťaťa môže potvrdiť infekciu, ale negatívny výsledok nemôže naznačovať neprítomnosť HIV.

Deti mladšie ako 1 mesiac ešte nemajú replikáciu HPV a PCR je jediná overovacia metóda. Potvrdzujúcou metódou je aj stanovenie antigénu p24 u detí starších ako 1 mesiac.

Neprítomnosť protilátok proti HIV u novorodencov neznamená, že vírus neprešiel placentárnou bariérou. V každom prípade sú deti matiek infikovaných HIV podrobované laboratórnemu diagnostickému vyšetreniu a pozorovaniu počas 36 mesiacov od narodenia.

Výsledky laboratórnych testov na markery HIV infekcie si vyžadujú starostlivú interpretáciu a mali by sa posudzovať len v spojení s údajmi z epidemiologických a klinických prieskumov. Na druhej strane je potrebné poznamenať, že napriek vysokej citlivosti moderných metód negatívne výsledky testov nemôžu úplne vylúčiť prítomnosť HIV infekcie. Preto negatívny výsledok testu, napríklad imunoblotovaním, možno formulovať len ako neprítomnosť špecifických protilátok proti HIV-1 a HIV-2.

Diagnóza infekcie HIV u séronegatívnych pacientov

Kvalita testovacích systémov používaných v laboratórnej diagnostike HIV infekcie sa každým rokom zlepšuje a zvyšuje sa ich citlivosť. Vysoká variabilita HIV však môže viesť k vzniku nových typov, protilátky proti ktorým nemusia byť existujúce testovacie systémy rozpoznané. Okrem toho sú známe prípady atypickej humorálnej odpovede imunitného systému hostiteľského organizmu na vírus. Takže L. Montagnier v roku 1996 referoval o dvoch pacientoch s AIDS, u ktorých sa v priebehu niekoľkých predchádzajúcich rokov nezistili v krvi špecifické protilátky, diagnóza bola stanovená na základe klinických údajov a laboratórne potvrdená iba izoláciou HPV- 1 v bunkovej kultúre. V takýchto prípadoch je potrebné použiť odporúčania WHO, podľa ktorých je klinická diagnóza HIV infekcie u dospelých a detí možná v prítomnosti jednej z 12 chorôb definujúcich AIDS:

1. kandidóza pažeráka, priedušnice, priedušiek, pľúc;
2. extrapulmonálna kryptokokóza;
3. kryptosporidióza s hnačkou dlhšie ako jeden mesiac;
4. cytomegalovírusové poškodenie akéhokoľvek orgánu (s výnimkou a okrem pečene, sleziny a lymfatických uzlín u pacienta staršieho ako 1 mesiac):
5. infekcia spôsobená vírusom herpes simplex, ktorá pretrváva dlhšie ako 1 mesiac u pacienta staršieho ako 1 mesiac;
6. mozgový lymfóm u pacienta mladšieho ako 60 rokov;
7. lymfocytárna intersticiálna pneumónia u dieťaťa mladšieho ako 13 rokov;
8. diseminovaná infekcia spôsobená baktériami skupiny Mycobacterium avium intracellulare alebo M. Kansassii;
9. pneumocystovej pneumónie;
10. progresívna multifokálna leukoencefalopatia;
11. toxoplazmóza centrálneho nervového systému u pacientov starších ako 1 mesiac.

Prítomnosť jednej z týchto chorôb umožňuje diagnostikovať infekciu HIV v neprítomnosti laboratórneho krvného testu na prítomnosť protilátok proti HIV alebo aj pri získaní séronegatívneho výsledku.

Zdroj: Lekárska laboratórna diagnostika, programy a algoritmy. Ed. Prednášal prof. Karpishchenko A.I., Petrohrad, Intermedica, 2001

Pozor! V prípade kladných a pochybných reakcií sa môže lehota na vydanie výsledku predĺžiť až na 10 pracovných dní.

Protilátky proti HIV 1, 2 typy, antigén p 24 - štúdium špecifických protilátok, ktoré vznikli v organizme ako odpoveď na infekciu vírusom ľudskej imunodeficiencie (HIV) 1, 2 typov a antigénom p 24 vírusu ľudskej imunodeficiencie.

HIV(vírus ľudskej imunodeficiencie) - vírus z čeľade retrovírusov (vírus s pomalou replikáciou), ktorý infikuje bunky ľudského imunitného systému (CD4, T-helpers) a spôsobuje syndróm získanej imunodeficiencie.

Inkubačná doba je zvyčajne 3-6 týždňov. V zriedkavých prípadoch sa protilátky proti HIV začnú zisťovať až niekoľko mesiacov alebo viac po infekcii. Úroveň ich koncentrácie sa môže výrazne znížiť v terminálnom období ochorenia. V zriedkavých prípadoch môžu protilátky proti infekcii HIV na dlhú dobu zmiznúť.

Antigén p 24 HIV 1.2 typu, zistený v krvnom sére, naznačuje skoré štádium ochorenia. Počas prvých týždňov po infekcii sa množstvo vírusu a antigénu p24 v krvi rýchlo zvyšuje. Akonáhle sa začnú vytvárať protilátky proti HIV 1, 2, hladina antigénu p 24 začne klesať.

Stanovenie antigénu p24 umožňuje diagnostikovať infekciu HIV v počiatočných štádiách infekcie, ešte pred tvorbou protilátok.

Súčasná detekcia protilátok proti vírusu HIV-1.2 a antigénu vírusu p24 zvyšuje diagnostickú hodnotu štúdie.

Tento test zisťuje protilátky proti HIV-1.2, ako aj antigén p24 HIV-1.2. Analýza vám umožňuje diagnostikovať infekciu HIV v počiatočnom štádiu.

Spôsoby prenosu infekcie:

• sexuálne;
• počas transfúzie krvi;
• od infikovanej matky po novorodenca.

HIV infekcia- dlhá a ťažká choroba, ktorá je sprevádzaná poškodením buniek ľudského imunitného systému; účinné metódy liečby a prostriedky špecifickej profylaxie (vakcíny) proti nej zatiaľ neboli vyvinuté.

Zdrojom vírusu imunodeficiencie sú ľudia. Vírus u ľudí možno izolovať zo semennej tekutiny, cervikálnych sekrétov, lymfocytov, krvnej plazmy, cerebrospinálneho moku, sĺz, slín, moču a materského mlieka, ale koncentrácia vírusu v nich je iná. Najvyššia koncentrácia vírusu sa nachádza v nasledujúcich biologických médiách: v sperme, krvi, cervikálnom sekréte.

Spôsoby prenosu vírusu z infikovanej osoby na neinfikovanú osobu sú obmedzené.

Spôsoby prenosu infekcie HIV
Existujú 3 spôsoby prenosu vírusu imunodeficiencie:

1. Sexuálna cesta - je najčastejšia. K infekcii dochádza pri nechránenom sexuálnom kontakte, zatiaľ čo vírus vstupuje do tela cez sliznice. Rany na sliznici, rany, zápaly - zvyšujú pravdepodobnosť infekcie. U osôb trpiacich pohlavne prenosnými infekciami je riziko nákazy kontaktom s infikovanou osobou 2-5 krát vyššie. Pre prenos vírusu je dôležitý nielen stupeň intimity kontaktu, ale aj množstvo patogénu. Pri nechránenom pohlavnom styku je asi trikrát väčšia pravdepodobnosť, že sa žena nakazí od muža, pretože do jej tela sa dostane viac vírusu a žena má oveľa väčší povrch, cez ktorý sa vírus môže dostať do tela (vaginálna sliznica). Riziko infekcie je najvyššie pri análnom sexe a najmenšie pri orálnom sexe.
2. Kontakt s krvou infikovanej osoby: a) pri použití spoločných ihiel, striekačiek, náčinia na prípravu liekov, nesterilných lekárskych nástrojov; b) zavedenie liekov, pri príprave ktorých sa používa krv; c) použitie, transfúzia infikovanej darcovskej krvi a prípravkov z nej (riziko je extrémne nízke, pretože všetci darcovia, ako aj krv, sú starostlivo kontrolovaní).
3. Od matky infikovanej HIV (vertikálna cesta) k plodu počas tehotenstva, počas prechodu pôrodnými cestami, počas dojčenia.

AIDS je terminálnym štádiom infekcie HIV
AIDS sa nevyvinie zo dňa na deň. U väčšiny ľudí s prítomnosťou protilátok proti vírusu imunodeficiencie sa klinické príznaky AIDS nemusia objaviť po 2 až 10 rokoch a viac a pri úspešnej liečbe sa toto obdobie výrazne predlžuje. Je to spôsobené tým, že zníženie počtu CD4 T buniek na úroveň, pri ktorej dochádza k oslabeniu imunitného systému, trvá dostatočne dlho.

Vírus infikuje aj iné typy buniek, vrátane buniek centrálneho nervového systému a červených a bielych krviniek, v ktorých sa zdá, že vírus je dlhší čas v „kľudovom“ stave, kým sa začne aktívne množiť. Faktory ovplyvňujúce progresiu ochorenia sú rôzne: genetické vlastnosti, kmeň vírusu, psychický stav pacienta, životné podmienky a iné.

Priebeh ochorenia a trvanie štádií závisí aj od toho, či sa človek lieči, a ak áno, aké lieky.

4 štádiá infekcie HIV

• Inkubačná doba („obdobie okna“) je čas od okamihu infekcie do objavenia sa protilátok (ochranných proteínov imunitného systému) v ľudskej krvi proti vírusu. V tomto období sa infekcia nijako neprejavuje, všetky testy sú negatívne, ale človek je už nákazlivý. Inkubačná doba môže trvať až 3 mesiace (v priemere 25 dní).
• Štádium primárnych prejavov. Trvá v priemere 2-3 týždne a vyznačuje sa prudkým zvýšením množstva vírusu v krvi. Tento stav sa nazýva "choroba sérokonverzie", pretože v tomto čase sa v krvi objavujú protilátky proti vírusu v množstve dostatočnom na to, aby sa zistilo počas testov. Toto obdobie sa u väčšiny ľudí neprejavuje, u 20-30% sa však môžu vyskytnúť javy podobné chrípke: horúčka, zdurenie lymfatických uzlín, bolesť hlavy, hrdlo, malátnosť, únava a bolesti svalov. Tento stav ustúpi po 2-4 týždňoch bez akejkoľvek liečby.
• Asymptomatické obdobie. Vyskytuje sa po ukončení primárnych prejavov infekcie a trvá pri absencii liečby v priemere až 10 rokov. Počas tohto obdobia imunitný systém bojuje proti vírusu v ľudskom tele: počet vírusových častíc sa postupne zvyšuje a imunita klesá. Na konci tohto štádia majú infikovaní jedinci opuchnuté lymfatické uzliny, nočné potenie, celkovú nevoľnosť a prvé prejavy oportúnnych infekcií, ktoré sa vyskytujú u ľudí, so silným oslabením imunitného systému. Tieto infekcie spôsobujú mikroorganizmy, ktoré nás obklopujú a u zdravých ľudí nespôsobujú infekcie. Oslabený imunitný systém môže viesť aj k rozvoju iných ochorení, napríklad rakoviny.
• AIDS je posledným štádiom tejto choroby a vyznačuje sa výskytom množstva chorôb v dôsledku oslabenia imunitného systému tela. Pacienti majú typicky veľmi nízky počet CD4 T; jedna alebo viacero závažných oportúnnych infekcií (pneumocystová pneumónia, závažná plesňová infekcia, tuberkulóza atď.), ktoré pri absencii liečby spôsobujú smrť; onkologické ochorenia; encefalopatia (poškodenie mozgu sprevádzané rozvojom demencie).

Hlavnou metódou laboratórnej diagnostiky je detekcia protilátok proti vírusu pomocou enzýmovej imunoanalýzy.

Postup vykonania laboratórneho testu na prítomnosť antigénov vírusu ľudskej imunodeficiencie a protilátok proti tomuto vírusu je prísne regulovaný nariadeniami Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie a zahŕňa:

• štádium skríningovej (skríningovej) štúdie pomocou metód enzýmovej imunoanalýzy (ELISA) schválených na použitie;
• etapa overovacej (konfirmačnej) štúdie imunoblotovou metódou v laboratóriu mestského AIDS centra.

Laboratórna diagnostika prítomnosti vírusu imunodeficiencie u detí narodených matkám infikovaným týmto vírusom má svoje vlastné charakteristiky. Materské protilátky proti vírusu (trieda Ig G) môžu cirkulovať v krvi detí do 15 mesiacov od okamihu narodenia. Neprítomnosť protilátok proti vírusu u novorodencov neznamená, že neprešiel placentárnou bariérou. Deti matiek infikovaných vírusom imunodeficiencie sa podrobujú laboratórnemu diagnostickému vyšetreniu do 36 mesiacov po narodení.

Kým sa nezíska pozitívny výsledok v imunoblote a ak je výsledok štúdie negatívny, osoba sa považuje za zdravú a neprijmú sa s ňou protiepidemické opatrenia.

Materiálom na testovanie protilátok proti vírusu imunodeficiencie je venózna krv, ktorú je žiaduce darovať nalačno.

Samozrejme, test na prítomnosť vírusu je dobrovoľnou záležitosťou každého človeka. Testy na prenášanie vírusu imunodeficiencie nemožno predpísať nasilu bez súhlasu pacienta. Musíte však pochopiť, že čím skôr sa stanoví správna diagnóza, tým je pravdepodobnejšie, že budete žiť dlhý a plnohodnotný život, dokonca aj keď budete jeho nositeľom.

Indikácie:

• opuchnuté lymfatické uzliny vo viac ako dvoch oblastiach;
• leukopénia s lymfopéniou;
• nočné potenie;
• náhla strata hmotnosti neznámej príčiny;
• hnačka trvajúca viac ako tri týždne neznámej príčiny;
• horúčka neznámej príčiny;
• plánovanie tehotenstva;
• predoperačná príprava, hospitalizácia;
• detekcia nasledujúcich infekcií alebo ich kombinácií: tuberkulóza, manifestná toxoplazmóza, často recidivujúca herpetická vírusová infekcia, kandidóza vnútorných orgánov, opakovaná herpes-zoster neuralgia, pneumónia spôsobená mykoplazmami, pneumocystis alebo legionella;
• Kaposiho sarkóm v mladom veku;
• príležitostný sex.

Pravidlá podávania žiadostí o HIV:
Registrácia žiadostí o výskum v DNAOM sa vykonáva podľa pasu alebo dokladu, ktorý ho nahrádza (migračný preukaz, dočasná registrácia v mieste bydliska, osvedčenie služobníka, potvrdenie pasového úradu v prípade straty pasu, registračný preukaz z r. hotel). Predložený dokument musí obsahovať informácie o dočasnej alebo trvalej registrácii na území Ruskej federácie a fotografiu. V prípade absencie pasu (dokladu, ktorý ho nahrádza) má pacient právo podať anonymnú žiadosť o doručenie biomateriálu. Pri anonymnom vyšetrení je žiadosti a vzorke biomateriálu prijatej od klienta pridelené číslo, ktoré pozná iba pacient a zdravotnícky personál, ktorý objednávku zadal.

Výsledky štúdií vykonaných anonymne nie je možné predložiť na hospitalizáciu, odborné vyšetrenia a nepodliehajú registrácii na ORUIB.

Interpretácia výsledkov
Test na protilátky HIV 1/2 je kvalitatívny. Pri absencii protilátok je odpoveď „negatívna“. V prípade detekcie protilátok proti HIV sa štúdia opakuje v ďalšej sérii. Pri zopakovaní pozitívneho výsledku v enzýmovom imunoteste sa vzorka odošle na vyšetrenie konfirmačnou imunoblotovou metódou, ktorá je „zlatým štandardom“ v diagnostike HIV.

Pozitívny výsledok:

• infekcia HIV;
• falošne pozitívny výsledok vyžadujúci opakované alebo dodatočné štúdie*;
• štúdia nie je informatívna u detí mladších ako 18 mesiacov narodených matkám infikovaným HIV.

Negatívny výsledok:

• neinfikovaný (boli pozorované diagnostické podmienky analýzy);
• séronegatívny variant priebehu infekcie (protilátky sa tvoria neskoro);
• terminálne štádium AIDS (zhoršená tvorba protilátok proti HIV);
• štúdia nie je informatívna (nie sú splnené diagnostické termíny).

Význam identifikácie osôb infikovaných HIV v počiatočných štádiách infekcie je spôsobený potrebou efektívnejšieho epidemiologického prieskumu, včasnej organizácie potrebných preventívnych opatrení medzi kontaktnými osobami, ako aj možného použitia krátkeho cyklu antiretrovírusových liekov. terapie za účelom zníženia vírusovej záťaže na zlepšenie prognózy priebehu ochorenia. Včasné informovanie pacienta o infekcii pomáha znižovať riziko prenosu ochorenia a jeho možnú účasť na darcovstve.

Diagnóza infekcie HIV pred pozitívnym výsledkom imunitného prenosu (IB) sa potvrdí detekciou antigénu p24 a/alebo nukleovej kyseliny HIV v sére pacienta.

Stanovenie antigénu p24 pomocou enzýmovej imunoanalýzy (ELISA) je jednoduchý a ekonomický spôsob preukázania prítomnosti vírusového proteínu v krvi pacienta v dôsledku intenzívnej replikácie vírusu v prvých týždňoch po infekcii. Test na antigén p24 je dostupný laboratóriám s rutinnými zariadeniami ELISA. V porovnaní so stanovením vírusovej záťaže metódou polymerázovej reťazovej reakcie je menej nákladná a prácna. Napriek tomu, že je známa stratégia stanovenia infekcie v séronegatívnom období, doteraz tento test nebol zaradený do algoritmu diagnostiky HIV. Je známe, že najvyššie percento detekcie p24 sa pozoruje v sére s pochybnými výsledkami IB. Ukázalo sa však, že testovacie systémy so štandardným prahom analytickej citlivosti (10 pg/ml) majú nedostatočnú diagnostickú senzitivitu a prognostický význam detekovaného p24 na zaradenie do rutinného diagnostického procesu. V tejto súvislosti je veľmi zaujímavý vývoj a implementácia testovacieho systému pre antigén p24 so zvýšenou analytickou citlivosťou.

Cieľom práce je zhodnotiť prognostický význam detekcie antigénu HIV p24 pomocou testovacích systémov s rôznymi prahmi analytickej citlivosti u jedincov s pochybnými výsledkami IB.

V retrospektívnej štúdii sér s neurčitým výsledkom na protilátky proti HIV pri IB odhalilo použitie testovacieho systému pre antigén p24 s prahom analytickej citlivosti 0,5 pg/ml 50 % infikovaných pacientov a použitie testovacieho systému ktorý detekuje 8 pg/ml – 22,9 %. Použitie ďalšej sady činidiel na deštrukciu imunitného komplexu umožňuje zvýšiť detekciu antigénu p24 až na 55,3 %. Prognostický význam prítomnosti HIV infekcie s dodatočným testovaním na antigén p24 bol 91,7 – 96 %. Zavedenie dodatočného testu na antigén HIV p24 s analytickou senzitivitou 0,5 pg/ml do diagnostického algoritmu HIV umožňuje potvrdiť diagnózu HIV v ranom štádiu ochorenia v najmenej 13 % prípadov u jednotlivcov s neurčitým výsledkom IB. (Pozri článok: Neshumaev D.A. et al. „Prognostický význam detekcie antigénu HIV p24 pomocou testovacích systémov so zvýšenou analytickou citlivosťou“).

"Klinická laboratórna diagnostika", 2009, č. 2, s. 40 - 42.

AIDS je ochorenie, pri ktorom ľudský imunitný systém nie je schopný chrániť telo pred život ohrozujúcimi oportúnnymi infekciami a rakovinou. HIV infikuje T-lymfocyty vložením kúska vírusovej DNA do genómu infikovanej osoby.

Bez antiretrovírusovej liečby sa 50 % infikovaných HIV rozvinie do AIDS 10 rokov po infekcii. Smrť nastáva na oportúnne (prejavujúce sa znížením imunity) infekcie alebo zhubné ochorenia.

Protilátky v HIV 1,2 sa zvyčajne objavujú v sére 12 týždňov po infekcii, zriedkavo (v 5-9% prípadov) - neskôr.

Antigén p24 HIV 1.2 zistený v krvnom sére naznačuje skoré štádium ochorenia. Počas prvých týždňov po infekcii sa množstvo vírusu a antigénu p24 v krvi rýchlo zvyšuje. Akonáhle sa začnú vytvárať protilátky proti HIV 1.2, hladina antigénu p24 začne klesať. Stanovenie antigénu p24 umožňuje diagnostikovať infekciu HIV v počiatočných štádiách infekcie, ešte pred tvorbou protilátok.

Súčasná detekcia protilátok proti vírusu HIV-1,2 a antigénu p24 zvyšuje diagnostickú hodnotu štúdie.

• Prísne na prázdny žalúdok (najmenej 12 hodín po poslednom jedle) sa vykonajú tieto testy:

Všeobecný klinický krvný test; stanovenie krvnej skupiny a Rh faktora;

Biochemické analýzy (glukóza, cholesterol, triglyceridy, AlAT, AsAT atď.);

Štúdium systému hemostázy (APTT, protrombín, fibrinogén atď.);

Nádorové markery.