Bakteriologické laboratórne štúdie. Bakteriologické laboratórium - laboratóriá, parakliniky

Úvod

Ako všeobecná časť každej inej vedy, ani všeobecná bakteriológia sa nezaoberá konkrétnymi otázkami (povedzme identifikáciou jednotlivých druhov baktérií), ale problémami vo všeobecnosti; jeho metodológia pokrýva základné postupy, ktoré sa široko používajú v širokej škále laboratórnych štúdií. Táto študijná príručka nie je určená na identifikáciu žiadnej skupiny mikroorganizmov. To je úlohou nasledujúcich publikácií – o súkromnej a sanitárnej mikrobiológii. Metódy v ňom uvedené však môžu byť užitočné v akejkoľvek oblasti, kde sa má zaobchádzať s baktériami, a možno ich aplikovať na praktické problémy vrátane izolácie a typizácie baktérií.

Bakteriológia sa stala vedou až potom, čo boli vyvinuté jedinečné techniky, ktoré naďalej ovplyvňujú a infiltrujú neskoršie vznikajúce oblasti vedy, ako je virológia, imunológia a molekulárna biológia. Technika používania čistých kultúr vyvinutá R. Kochom a imunologické reakcie a chemické analýzy, ktorých priekopníkom je L. Pasteur, nestratili svoj význam ani teraz.

Metodika všeobecnej bakteriológie je v tomto vydaní premietnutá pomocou takejto konštrukcie, ktorá je typická pre štandardné učebnice tejto disciplíny. Na rozdiel od laboratórnych workshopov o kurze mikrobiológie pre univerzity je však v niektorých častiach prezentovaný podrobnejšie a slúži len ako referencia. Táto štruktúra zohľadňuje osobitosti odbornej prípravy a špecializácie bakteriológov a veterinárnych sanitárnych odborníkov. Materiál je často prezentovaný svojvoľne, takže niektoré metódy sú spomenuté niekoľkokrát, kvôli túžbe demonštrovať ich vzťah.

bakteriologické laboratórium

Bakteriologické laboratóriá ako štruktúrne jednotky sú organizované ako súčasť krajských, okresných, medziokresných veterinárnych laboratórií, ako aj v štruktúre zonálnych veterinárnych laboratórií. Organizujú sa aj v strediskách hygienického a epidemiologického dohľadu, v infekčných nemocniciach, všeobecných nemocniciach, niektorých špecializovaných nemocniciach (napríklad v tuberkulóze, reumatológii, dermatovenerológii) a poliklinikách. Bakteriologické laboratóriá sú súčasťou špecializovaných výskumných inštitúcií. Na potvrdenie alebo stanovenie potravinovej vhodnosti mäsa podľa ESS sa neustále využívajú bakteriologické laboratóriá.

Predmety štúdia v bakteriologických laboratóriách sú:

1. Výtok z tela: moč, stolica, spútum, hnis, ako aj krv, patologický a kadaverózny materiál.

2. Objekty vonkajšieho prostredia: voda, vzduch, pôda, výplachy z inventárnych položiek, krmivá, technologické suroviny získané z porážok hospodárskych zvierat.

3. Potravinárske výrobky, vzorky mäsa a mäsových výrobkov, mlieka a mliečnych výrobkov, ktorých vhodnosť je potrebné posúdiť na potravinárske účely.

Vybavenie miestnosti a pracoviska bakteriologického laboratória

Špecifickosť mikrobiologickej práce vyžaduje, aby miestnosť pridelená laboratóriu bola izolovaná od obytných miestností, potravinových blokov a iných priemyselných priestorov, ktoré nie sú jadrom.

Bakteriologické laboratórium zahŕňa: laboratórne miestnosti pre bakteriologický výskum a technické miestnosti; autokláv alebo sterilizácia na dekontamináciu odpadového materiálu a kontaminovaného náradia; umývanie, vybavené na umývanie riadu; bakteriologická kuchyňa - na prípravu, plnenie do fliaš, sterilizáciu a skladovanie živných médií; vivárium na chov pokusných zvierat; materiál na skladovanie náhradných činidiel, náradia, vybavenia a vybavenia domácnosti.

Uvedené technické miestnosti ako samostatné konštrukčné celky sú súčasťou veľkých bakteriologických laboratórií. V malých laboratóriách sú bakteriologická kuchyňa a sterilizačná kuchyňa spojené v jednej miestnosti; neexistuje žiadny špeciálny priestor na chov pokusných zvierat.

Podľa stupňa nebezpečenstva pre personál sú priestory mikrobiologických laboratórií rozdelené do 2 zón:

I. "Nákazlivá" oblasť - miestnosť alebo skupina miestností v laboratóriu, kde sa manipuluje a skladuje patogénne biologické agens, personál je oblečený do vhodného typu ochranného odevu.

II. "Čistá" zóna - priestory, kde sa nevykonáva práca s biologickým materiálom, personál je oblečený v osobnom odeve.

V laboratórnych miestnostiach, v ktorých sa vykonávajú všetky bakteriologické štúdie, sú pridelené najľahšie a najpriestrannejšie miestnosti. Steny v týchto miestnostiach vo výške 170 cm od podlahy sú natreté vo svetlých farbách olejovou farbou alebo pokryté dlažbou. Podlaha je pokrytá relínom alebo linoleom. Tento druh povrchovej úpravy vám umožňuje používať dezinfekčné roztoky pri čistení miestnosti.

Každá izba by mala mať umývadlo s vodovodným potrubím a policu na fľašu s dezinfekčným roztokom.

V jednej z izieb je vybavený zasklený box - izolovaná miestnosť so zádverím (predboxom) na vykonávanie prác v aseptických podmienkach. V krabici umiestnili stôl na plodiny, stoličku, nad pracoviskom sú namontované baktericídne lampy. V predsieni je umiestnená skriňa na uskladnenie sterilného materiálu. Okná a dvere priestorov „infekčnej“ zóny musia byť vzduchotesné. Existujúce odsávacie vetranie z „infekčného“ priestoru musí byť izolované od ostatných ventilačných systémov a vybavené jemnými vzduchovými filtrami.

Laboratórna miestnosť je vybavená stolmi laboratórneho typu, skriňami a policami na uloženie vybavenia, náradia, farieb a činidiel potrebných pre prácu.

Pre prácu je veľmi dôležitá správna organizácia pracoviska bakteriológa a laboranta. V blízkosti okien sú inštalované laboratórne stoly. Pri ich umiestňovaní sa musíte snažiť zabezpečiť, aby svetlo dopadalo spredu alebo zboku pracovníka, najlepšie na ľavú stranu, ale v žiadnom prípade nie zozadu. Je žiaduce, aby miestnosti na analýzu, najmä na mikroskopiu, mali okná orientované na sever alebo severozápad, pretože na prácu je potrebné aj rozptýlené svetlo. Osvetlenie povrchu stolov pre prácu by malo byť 500 luxov. Pre pohodlie dezinfekcie je povrch laboratórnych stolov pokrytý plastom alebo čalúnený železom. Každý zamestnanec laboratória má pridelené samostatné pracovisko s rozmermi 150x60 cm.

Všetky pracoviská sú vybavené predmetmi potrebnými pre každodennú bakteriologickú prácu, ktorých zoznam je uvedený v tabuľke 1.

Stôl 1.

Nevyhnutné položky pre bakteriologickú prácu

Názov položky	Približné množstvo
1. Sada farieb a činidiel na farbenie
2. Sklíčka	25-50
3. Krycie sklá	25-50
4. Okuliare s otvormi	5-10
5. Stojan na skúmavky
6. Bakteriálna slučka
7. Sklenené špachtle
8. Kovové špachtle
9. Nádoba bavlny
10. Pipety odmerné 1, 2, 5, 10 ml	25 z každého zväzku
11. Pasteurove pipety	25-50
12. Pinzeta, nožnice, skalpel	Do 1
13. Nádoby s dezinfekčnými roztokmi
14. Mikroskop s iluminátorom
15. Lupa 5´
16. Maslová misa s imerzným olejom
17. Filtračný papier	3-5 listov
18. Nádoba s dezinfekčným roztokom na pipety
19. Alkoholový alebo plynový horák
20. Inštalácia na farbiace prípravky
21. Presýpacie hodiny na 1 alebo 2 minúty	Do 1
22. Hruška s gumenou trubicou
23. Ceruzka na skle
24. Nádoba s alkoholovými tampónmi
25. Nevyhnutný sterilný riad	-

Dezinfekcia

Dezinfekcia je ničenie mikroorganizmov v objektoch životného prostredia.

V mikrobiologických laboratóriách sa dezinfekčné opatrenia používajú veľmi široko. Pri ukončení prác s infekčným materiálom pracovníci bakteriologických laboratórií vykonávajú preventívnu dezinfekciu rúk a pracoviska.

Vyčerpaný patologický materiál (výkaly, moč, spútum, rôzne druhy tekutín, krv) sa pred vyhodením do kanalizácie dezinfikuje.

Odstupňované a Pasteurove pipety, sklenené špachtle a kovové nástroje kontaminované patologickým materiálom alebo kultúrou mikróbov ihneď po ich použití spúšťame do sklenených nádob s dezinfekčným roztokom umiestnených na stole na každom pracovisku.

Sklíčka a krycie sklíčka použité v práci tiež podliehajú povinnej dezinfekcii, keďže aj vo fixovanom a zafarbenom nátere niekedy zostávajú životaschopné mikroorganizmy, ktoré môžu byť zdrojom vnútrolaboratórnej kontaminácie. Dezinfekčnými prostriedkami sa neošetrujú len tie riady, v ktorých sa pestovali mikroorganizmy. Zloží sa do kovových nádrží alebo bixov, zapečatí a odovzdá na autoklávovanie.

Výber dezinfekčného prostriedku, koncentrácia jeho roztoku, pomer medzi množstvom dezinfekčného prostriedku a materiálu, ktorý sa má dezinfikovať, ako aj dĺžka doby dezinfekcie sa nastavujú v závislosti od konkrétnych podmienok, pričom sa najprv zohľadní predovšetkým stabilita mikróbov, ktoré sa majú dezinfikovať, očakávaný stupeň kontaminácie, zloženie a konzistencia materiálu, v ktorom sa nachádzajú.

Dezinfekcia rúk po práci s infekčným materiálom a pri kontakte s pokožkou. Na konci práce s infekčným materiálom sa ruky profylakticky dezinfikujú. Vatový tampón alebo gázová utierka sa navlhčí 1 % roztokom chloramínu, najprv sa utrie ľavá a potom pravá ruka v nasledujúcom poradí: chrbát ruky, povrch dlane, medziprstové priestory, nechtové lôžka. Najskôr sa teda ošetria najmenej kontaminované oblasti, potom sa prejdú na najviac kontaminované oblasti pokožky. Utierajte si ruky 2 minúty dvoma tampónmi po sebe. Keď sú ruky kontaminované kultúrou patogénneho mikróbu alebo patologického materiálu, kontaminované oblasti pokožky sa najskôr dezinfikujú. Za týmto účelom sa na 3 až 5 minút prikryjú vatou navlhčenou 1% roztokom chloramínu, potom sa vata hodí do nádrže alebo vedra s odpadovým materiálom a ruky sa ošetria druhým tampónom. spôsobom ako pri preventívnej dezinfekcii. Po ošetrení chloramínom sa ruky umyjú teplou vodou a mydlom. Pri práci s baktériami, ktoré tvoria spóry, sú ruky ošetrené 1% aktivovaným chloramínom. Ak sa infekčný materiál dostane na ruky, pôsobenie dezinfekčného prostriedku sa zvýši na 5 minút.

Sterilizácia

Sterilizácia na rozdiel od dezinfekcie zahŕňa zničenie všetkých vegetatívnych a spórových, patogénnych a nepatogénnych mikroorganizmov v sterilizovanom objekte. Sterilizácia sa vykonáva rôznymi spôsobmi: parou, suchým horúcim vzduchom, varom, filtráciou atď. Voľba jednej alebo druhej metódy sterilizácie závisí od kvality a vlastností mikroflóry sterilizovaného predmetu.

Príprava a sterilizácia laboratórneho vybavenia

Pred sterilizáciou sa laboratórne sklo umyje a vysuší. Skúmavky, fľaše, fľaše, matrace a banky sa uzavrú zátkami z bavlnenej gázy. Cez zátky na každej nádobe (okrem skúmaviek) nasaďte papierové uzávery.

Gumové, korkové a sklenené zátky sa sterilizujú v samostatnom vrecku priviazanom k ​​hrdlu misky. Petriho misky sterilizujeme zabalené v papieri po 1-10 ks. Pasteurove pipety, 3-15 ks. zabalené v baliacom papieri. V hornej časti každej pipety je umiestnený kúsok vaty, aby sa zabránilo vniknutiu materiálu do prostredia. Pri obaľovaní pipiet treba dávať veľký pozor, aby sa neodlomili zatavené konce kapilár. Počas prevádzky sa pipety vyberajú z obalu horným koncom.

Do hornej časti odmerných pipiet sa vloží bezpečnostná vata ako v Pasteurových pipetách a potom sa zabalí do hrubého papiera, vopred nastrihaného na prúžky široké 2-2,5 cm a dlhé 50-70 cm. Prúžok sa položí na stôl , jeho ľavý koniec je zložený a obalený špičkou pipety, potom otáčaním pipety omotajte okolo nej papierovú pásku. Aby sa papier nerozvinul, opačný koniec je skrútený alebo prilepený. Objem zabalenej pipety je napísaný na papieri. Ak existujú prípady, odmerné pipety sa v nich sterilizujú.

Sterilizujte laboratórne sklo

a) suché zahrievanie pri 180 °C a 160 °C počas 1 hodiny a 150 minút.

b) v autokláve pri tlaku 1,5 atm. do 60 minút, na zničenie mikroflóry spór - 90 minút pri 2 atm.

Sterilizácia injekčných striekačiek. Striekačky sa sterilizujú v rozloženom stave: valec a piest oddelene v 2% roztoku hydrogénuhličitanu sodného počas 30 minút. Pri práci s mikroflórou obsahujúcou spóry sa sterilizácia vykonáva v autokláve pri 132±2°C (2 atm.) počas 20 minút, pri 126±2°C (1,5 atm.) - 30 minút. Sterilizovaná striekačka sa po vychladnutí odoberie, do valca sa vloží piest, nasadí sa ihla, po vybratí tŕňa z neho. Ihla, valec a piest sa odoberajú pomocou pinzety, ktoré sa sterilizujú spolu s injekčnou striekačkou.

Sterilizácia kovových nástrojov. Kovové nástroje (nožnice, skalpely, pinzety a pod.) sú sterilizované v 2% roztoku hydrogénuhličitanu sodného, ​​ktorý zabraňuje hrdzaveniu a strate ostrosti. Pred ponorením do roztoku sa odporúča omotať čepele skalpelov a nožníc vatou.

Sterilizácia bakteriálnych slučiek. Bakteriálne slučky vyrobené z platinového alebo nichrómového drôtu sa sterilizujú v plameni alkoholového alebo plynového horáka. Tento spôsob sterilizácie sa nazýva kalcinácia alebo plameňovanie.

Slučka vo vodorovnej polohe je privedená do spodnej, najchladnejšej časti plameňa horáka, aby spálený patogénny materiál nestriekal. Po vyhorení sa slučka premiestni do zvislej polohy, najprv sa zahreje spodná, potom horná časť drôtu do červena a držiak slučky sa spáli. Zapálenie ako celku trvá 5-7 s.

Prípravok na sterilizáciu a sterilizáciu papiera, gázy a bavlny. Vata, gáza, filtračný papier sa sterilizujú v suchej peci pri teplote 160 ° C počas jednej hodiny od okamihu, keď je teplota indikovaná teplomerom alebo v autokláve pri tlaku 1 atm. do 30 minút.

Pred sterilizáciou sa papier a gáza narežú na kúsky a vata sa zvinie vo forme guľôčok alebo tampónov požadovanej veľkosti. Potom sa každý druh materiálu jednotlivo, jeden alebo viac kusov, zabalí do hrubého papiera. Ak je obal porušený, sterilizovaný materiál by sa mal znova sterilizovať, pretože je narušená jeho sterilita.

Sterilizácia rukavíc a iných gumených výrobkov. Gumové výrobky (rukavice, rúrky atď.) kontaminované vegetatívnou formou mikróbov sa sterilizujú varením v 2% roztoku hydrogénuhličitanu sodného alebo prúdom pary počas 30 minút; pri kontaminácii spóronosnou mikroflórou v autokláve pri tlaku 1,5-2 atm. do 30 alebo 20 minút. Pred sterilizáciou sú gumené rukavice posypané zvnútra aj zvonka mastencom, aby boli chránené pred prilepením. Medzi rukavice je položená gáza. Každý pár rukavíc je zabalený oddelene do gázy a v tejto forme vložený do bicyklov.

Sterilizácia patogénnych kultúr mikróbov. Skúmavky a poháriky obsahujúce mikrobiálne kultúry, ktoré nie sú potrebné pre ďalšiu prácu, sa umiestnia do kovovej nádrže, viečko sa zataví a odovzdá na sterilizáciu. Kultúry patogénnych mikróbov, vegetatívne formy, sa usmrtia v autokláve počas 30 minút pri tlaku 1 atm. Dodávku nádrží na sterilizáciu do autoklávu vykonáva špeciálne určená osoba proti prevzatiu. Režim sterilizácie je zaznamenaný v špeciálnom denníku. Pri ničení kultúr mikróbov skupiny I a II patogenity, ako aj materiálu infikovaného alebo podozrivého z infekcie patogénmi zaradenými do týchto skupín, sa nádrže s odpadovým materiálom premiestňujú na kovové podnosy s vysokými stenami v prítomnosti sprevádzajúcej osoby, ktorá je dovolené pracovať s infekčným materiálom.

Druhy sterilizácie

Sterilizácia varom. Sterilizácia varom sa vykonáva v sterilizátore. Do sterilizátora sa naleje destilovaná voda, pretože voda z vodovodu tvorí vodný kameň. (Sklenené predmety sa ponoria do studenej, kovové predmety do horúcej vody s prídavkom hydrogénuhličitanu sodného). Sterilizované predmety sa varia na miernom ohni 30-60 minút. Za začiatok sterilizácie sa považuje okamih varu vody v sterilizátore. Na konci varu sa nástroje odoberú sterilnými pinzetami, ktoré sa varia spolu so zvyškom predmetov.

Sterilizácia suchým teplom. Sterilizácia suchým teplom sa vykonáva v Pasteurovej peci. Materiál pripravený na sterilizáciu sa umiestni na police tak, aby neprišiel do kontaktu so stenami. Skriňa sa zatvorí a potom sa zapne kúrenie. Dĺžka sterilizácie pri teplote 150°C je 2 hodiny, pri 165°C - 1 hodina, pri 180°C - 40 minút, pri 200°C - 10-15 minút (pri 170°C papier a vata otočte žltá a pri vyššej teplote zuhoľnatená). Začiatok sterilizácie je okamih, keď teplota v rúre dosiahne požadovanú výšku. Na konci sterilizačnej doby sa rúra vypne, ale dvierka skrinky sa neotvoria, kým úplne nevychladnú, pretože studený vzduch vstupujúci do skrinky môže spôsobiť praskliny na horúcom riade.

Sterilizácia parou pod tlakom. Sterilizácia parou pod tlakom sa vykonáva v autokláve. Autokláv pozostáva z dvoch do seba vložených kotlov, plášťa a krytu. Vonkajší kotol sa nazýva vodno-parná komora, vnútorný sa nazýva sterilizačná komora. Para sa vyrába v parnom kotli. Materiál, ktorý sa má sterilizovať, sa umiestni do vnútorného kotlíka. V hornej časti sterilizačnej kanvice sú malé otvory, ktorými prechádza para z parnej komory. Veko autoklávu je hermeticky priskrutkované k puzdru. Okrem uvedených hlavných častí má autokláv množstvo častí, ktoré regulujú jeho činnosť: tlakomer, vodomerné sklo, poistný ventil, výfukové, vzduchové a kondenzačné kohútiky. Tlakomer sa používa na určenie tlaku, ktorý sa vytvára v sterilizačnej komore. Normálny atmosférický tlak (760 mm Hg, Art.) sa považuje za nulový, preto v nečinnom autokláve je ručička tlakomeru na nule. Medzi údajmi na tlakomere a teplotou existuje určitý vzťah (tabuľka 2).

Tabuľka 2

Pomer hodnôt tlakomeru a bodu varu vody

Červená čiara na stupnici meradla označuje maximálny povolený pracovný tlak v autokláve. Poistný ventil slúži na ochranu pred nadmerným nárastom tlaku. Je nastavený na vopred stanovený tlak, to znamená tlak, pri ktorom sa má vykonať sterilizácia, keď šípka manometra prekročí čiaru, ventil autoklávu sa automaticky otvorí a vypustí prebytočnú paru, čím sa spomalí ďalší nárast tlaku. .

Na bočnej stene autoklávu je odmerka ukazujúca hladinu vody v parnom kotli. Na trubici vodomeru sú nanesené dve horizontálne čiary - spodná a horná, označujúce prípustnú dolnú a hornú hladinu vody v komore vodnej pary. Vzduchový kohút je určený na odvádzanie vzduchu zo sterilizačnej a vodno-parnej komory na začiatku sterilizácie, pretože vzduch ako zlý vodič tepla porušuje sterilizačný režim. Na dne autoklávu sa nachádza kondenzačný kohút na uvoľnenie sterilizačnej komory od kondenzátu vznikajúceho pri ohreve sterilizovaného materiálu.

Pravidlá autoklávu. Pred začatím práce skontrolujte autokláv a prístrojové vybavenie. V autoklávoch s automatickým riadením pary sú šípky na elektrovákuovom manometri komory s vodnou parou nastavené v súlade s režimom sterilizácie: spodná šípka je nastavená na 0,1 atm. spodná, horná - o 0,1 atm. nad pracovným tlakom sa vodno-parná komora naplní vodou po hornú značku odmerky. Počas obdobia plnenia vodou je ventil na potrubí, ktorým para vstupuje do komory, udržiavaný otvorený, aby mohol z kotla uniknúť voľný vzduch. Sterilizačná komora autoklávu je naplnená materiálom, ktorý sa má sterilizovať. Potom sa veko (alebo dvere) autoklávu zatvorí, pevne pripevní centrálnym zámkom alebo skrutkami; aby sa zabránilo skresleniu, skrutky sú zaskrutkované krížom (v priemere). Potom zapnite zdroj ohrevu (elektrický prúd, para), zatvorte ventil na potrubí spájajúcom zdroj pary so sterilizačnou komorou. So začiatkom odparovania a vytvorením tlaku vo vodno-parnej komore sa vykoná preplach (odstráni sa vzduch zo sterilizačného kotla). Spôsob odstraňovania vzduchu je určený konštrukciou autoklávu. Najprv vzduch vychádza v oddelených častiach, potom sa objaví rovnomerný nepretržitý prúd pary, čo naznačuje, že vzduch bol úplne vytlačený zo sterilizačnej komory. Po odstránení vzduchu sa ventil uzavrie a v sterilizačnej komore začne postupné zvyšovanie tlaku.

Začiatok sterilizácie je okamih, keď tlakomer ukazuje nastavený tlak. Potom sa intenzita ohrevu zníži tak, aby tlak v autokláve zostal po požadovanú dobu na rovnakej úrovni. Po uplynutí doby sterilizácie sa zahrievanie zastaví. Zatvorte ventil v potrubí privádzajúcom paru do sterilizačnej komory a otvorte ventil na potrubí na kondenzát (smerom nadol), aby ste znížili tlak pary v komore. Keď ručička tlakomeru klesne na nulu, pomaly uvoľnite upínacie zariadenia a otvorte veko autoklávu.

Teplota a trvanie sterilizácie sú určené kvalitou materiálu, ktorý sa má sterilizovať, a vlastnosťami mikroorganizmov, ktorými je infikovaný.

Kontrola teploty v sterilizačnej komore sa vykonáva periodicky pomocou bakteriologických testov. Biotesty vyrábajú bakteriologické laboratóriá Ústrednej epidemiologickej služby. Ak tieto testy zlyhajú, skontroluje sa technický stav autoklávu.

Sterilizácia parou. Sterilizácia tekutou parou sa vykonáva v Kochovom fluidnom parnom prístroji alebo v autokláve s odskrutkovaným vekom a otvoreným výstupným kohútom. Kochov prístroj je kovový dutý valec s dvojitým dnom. Priestor medzi hornou a spodnou spodnou doskou je vyplnený do 2/3 vodou (je tu kohútik na vypustenie vody, ktorá zostala po sterilizácii). Veko prístroja má v strede otvor na teplomer a niekoľko malých otvorov na únik pary. Materiál, ktorý sa má sterilizovať, sa voľne vloží do komory zariadenia, aby sa zabezpečila možnosť jeho najväčšieho kontaktu s parou. Začiatok sterilizácie je čas od okamihu, keď voda vrie a para vstúpi do sterilizačnej komory. Vo fluidnom parnom prístroji sa sterilizujú najmä živné médiá, ktorých vlastnosti sa menia pri teplotách nad 100°C. Sterilizáciu prúdiacou parou je potrebné opakovať, pretože jediné zahriatie na teplotu 100 °C nezabezpečí úplnú dezinfekciu. Táto metóda sa nazýva frakčná sterilizácia: ošetrenie sterilizovaného materiálu prúdiacou parou sa vykonáva 30 minút denne počas 3 dní. V intervaloch medzi sterilizáciami sa materiál udržiava pri izbovej teplote, aby spóry vyklíčili do vegetatívnych foriem, ktoré pri nasledujúcom zahrievaní odumierajú.

Tyndalizácia. Tyndalizácia je frakčná sterilizácia s použitím teplôt pod 100 °C, ktorú navrhol Tyndall. Zahrievanie materiálu, ktorý sa má sterilizovať, sa uskutočňuje vo vodnom kúpeli vybavenom termostatom jednu hodinu pri teplote 60-65 °C počas 5 dní alebo pri teplote 70-80 °C počas 3 dní. Medzi zahrievaním sa spracovávaný materiál udržiava pri teplote 25 °C, aby spóry vyklíčili do vegetatívnych foriem, ktoré pri následných zahrievaniach odumierajú. Tyndalizácia sa používa na dehydratáciu živných médií obsahujúcich bielkoviny.

Mechanická sterilizácia bakteriálnymi ultrafiltrami. Bakteriálne filtre sa používajú na uvoľnenie kvapaliny z baktérií v nej, ako aj na oddelenie baktérií od vírusov, fágov a exotoxínov. Vírusy nie sú zadržiavané bakteriálnymi filtrami, a preto ultrafiltráciu nemožno považovať za sterilizáciu v akceptovanom zmysle slova. Na výrobu ultrafiltrov sa používajú jemne porézne materiály (kaolín, azbest, nitrocelulóza atď.), ktoré dokážu zachytiť baktérie.

Azbestové filtre (Seitz filtre) sú azbestové platne s hrúbkou 3-5 mm a priemerom 35 a 140 mm na filtrovanie malých a veľkých objemov kvapalín. Azbestové filtre sa u nás vyrábajú v dvoch stupňoch: „F“ (filtrovanie), zachytávajúce suspendované častice, ale prepúšťajúce baktérie, a „SF“ (sterilizačné), hustejšie, zadržiavajúce baktérie. Pred použitím sa azbestové filtre namontujú do filtračných prístrojov a spolu s nimi sa sterilizujú v autokláve. Azbestové filtre sa používajú jednorazovo. Membránové ultrafiltre sú vyrobené z nitrocelulózy a sú to biele disky s priemerom 35 mm a hrúbkou 0,1 mm.

Bakteriálne filtre sa líšia veľkosťou pórov a sú označené sériovými číslami (tabuľka 3).

Tabuľka 3

Bakteriálne filtre

Membránové filtre sa bezprostredne pred použitím sterilizujú prevarením. Filtre sa vložia do destilovanej vody zohriatej na teplotu 50-60°C, aby sa predišlo ich skrúteniu, varia sa na miernom ohni 30 minút, pričom sa voda vymieňa 2-3 krát. Sterilizované filtre sa zo sterilizátora vyberajú flambovanou a chladenou pinzetou s hladkými hrotmi, aby nedošlo k poškodeniu.

Na filtrovanie kvapalín sú bakteriálne filtre namontované v špeciálnych filtračných zariadeniach, najmä vo filtri Seitz.

Skladá sa z 2 častí: horná, v tvare valca alebo lievika, a spodná nosná časť prístroja s takzvaným filtračným stolom vyrobeným z kovovej sieťoviny alebo čistej keramickej platne, na ktorej je membrána alebo azbestový filter. je umiestnený. Nosná časť prístroja má tvar lievika, ktorého zužujúca sa časť je umiestnená v gumovej zátke hrdla Bunsenovej banky. V prevádzkovom stave je horná časť zariadenia pripevnená k spodnej časti pomocou skrutiek. Pred spustením filtrácie sa spoje rôznych častí inštalácie naplnia parafínom, aby sa vytvorila tesnosť. Výstupná trubica banky je pripojená hrubostennou gumovou trubicou k vodnej tryske, olejovej alebo bicyklovej pumpe. Potom sa prefiltrovaná kvapalina naleje do valca alebo lievika prístroja a zapne sa čerpadlo, čím sa v prijímacej nádobe vytvorí vákuum. V dôsledku výsledného tlakového rozdielu prechádza filtrovaná kvapalina cez póry filtra do zberača. Mikroorganizmy zostávajú na povrchu filtra.

Príprava náterov

Na štúdium mikroorganizmov vo farebnej forme sa urobí náter na podložnom skle, vysuší sa, zafixuje a potom zafarbí.

Testovaný materiál sa rozotrie v tenkej vrstve na povrch dobre odtučneného podložného sklíčka.

Nátery sa pripravujú z kultúr mikróbov, patologického materiálu (spúta, hnis, moč, krv atď.) az mŕtvol.

Technika prípravy náterov je určená povahou študovaného materiálu.

Príprava náterov z mikrobiálnych kultúr s tekutým živným médiom a z tekutého patologického materiálu (moč, likvor a pod.). Malá kvapka testovacej kvapaliny sa nanesie bakteriálnou slučkou na podložné sklíčko a slučky sa krúživým pohybom rozmiestnia v rovnomernej vrstve vo forme kruhu s priemerom centovej mince.

Príprava krvných náterov. Kvapka krvi sa aplikuje na podložné sklíčko bližšie k jednému z jeho koncov. Druhé – leštené – sklo, ktoré by malo byť užšie ako objektové sklo, sa priloží na prvé pod uhlom 45° a privedie sa ku kvapke krvi, kým sa s ňou nedotkne. Po rozšírení krvi pozdĺž lešteného okraja sa sklo posúva sprava doľava, čím sa krv v tenkej vrstve rovnomerne rozloží po celom povrchu skla. Hrúbka ťahu závisí od uhla medzi okuliarmi: čím je uhol ostrejší, tým je ťah tenší. Správne pripravený náter má svetloružovú farbu a rovnakú hrúbku.

Príprava hustej kvapky. Pasteurovou pipetou sa nanesie kvapka krvi do stredu podložného sklíčka alebo sa sklo priloží priamo na vyčnievajúcu kvapku krvi. Krv nanesená na pohár sa potrie bakteriálnou slučkou tak, aby priemer výsledného náteru zodpovedal veľkosti grošovej mince. Pohár sa nechá vo vodorovnej polohe, kým krv nezaschne. Krv v "hustej kvapke" je rozložená nerovnomerne a tvorí nerovný okraj.

Príprava náteru z viskózneho materiálu (spúta, hnis). Spútum alebo hnis uložený na podložnom sklíčku bližšie k úzkemu okraju sa prekryje ďalším podložným sklom. Okuliare sú mierne pritlačené k sebe.

Potom sa voľné konce okuliarov zachytia 1 a 2 prstami oboch rúk a roztiahnu sa v opačných smeroch tak, aby pri pohybe oba okuliare tesne priliehali k sebe. Šmuhy sa získavajú s rovnomerne rozloženým materiálom, ktorý zaberá veľkú plochu.

Príprava náteru z kultúr s hustými živnými médiami. Do stredu čistého, dobre odtučneného podložného sklíčka sa nanesie kvapka vody, do nej sa zavedie bakteriálna slučka s malým množstvom skúmanej mikrobiálnej kultúry, takže kvapka tekutiny sa mierne zakalí. Potom sa prebytok mikrobiálneho materiálu na slučke spáli v plameni a náter sa pripraví podľa vyššie uvedeného spôsobu.

Príprava náterov z orgánov a tkanív. Za účelom dezinfekcie sa povrch orgánu vypáli nahriatymi vetvami pinzety, na tomto mieste sa urobí rez a špicatým nožnicou sa z hĺbky vyreže malý kúsok tkaniva, ktorý sa vloží medzi dve podložné sklíčka . Potom postupujte rovnako ako pri príprave náteru z hnisu a hlienu. Ak je tkanivo orgánu husté, potom sa z hĺbky rezu urobí škrabanie skalpelom. Materiál získaný zoškrabaním sa v tenkej vrstve rozotrie po povrchu skla skalpelom alebo bakteriálnou slučkou.

Na štúdium relatívnej polohy prvkov tkaniva a mikroorganizmov v ňom sa robia nátery. Na tento účel sa pomocou pinzety zachytí malý kúsok tkaniva odrezaného zo stredu orgánu a niekoľkokrát sa postupne priloží rezaným povrchom na podložné sklíčko, čím sa získa séria odtlačkov.

Sušenie a fixácia náterov. Náter pripravený na podložnom sklíčku sa vysuší na vzduchu a po úplnom vysušení sa zafixuje. Pri fixácii je náter fixovaný na povrchu podložného sklíčka, a preto pri následnom farbení preparátu nedochádza k zmývaniu mikrobiálnych buniek. Usmrtené mikrobiálne bunky sa navyše farbia lepšie ako živé.

Rozlišuje sa fyzikálna metóda fixácie, ktorá je založená na účinku vysokej teploty na mikrobiálnu bunku, a chemické metódy, pri ktorých sa používajú prostriedky spôsobujúce zrážanie bielkovín. Nie je možné fixovať nátery obsahujúce patogény I-II skupín patogenity nad plameňom.

Fyzický spôsob upevnenia. Podložné sklíčko s prípravkom sa odoberá pinzetou alebo I a II prstami pravej ruky za rebrá ťahom nahor a plynulým pohybom 2-3 krát cez hornú časť plameňa horáka. Celý proces fixácie by nemal trvať dlhšie ako 2 s. Spoľahlivosť fixácie sa kontroluje nasledujúcou jednoduchou technikou: povrch podložného sklíčka zbavený rozmazania sa nanesie na zadnú plochu ľavej ruky. Pri správnej fixácii náteru by malo byť sklo horúce, ale nemalo by spôsobiť pocit pálenia.

Chemická fixácia. Chemikálie a zlúčeniny uvedené v tabuľke 4 sa tiež používajú na fixáciu náterov.

Tabuľka 4

Látky na chemickú fixáciu

Podložné sklíčko so zaschnutým náterom sa ponorí do fľaše s fixačným prostriedkom a následne sa vysuší na vzduchu.

Farebné ťahy

Technika farbenia rozmazania. Na farbenie šmúh sa používajú roztoky farieb alebo farbiaci papier, ktorý navrhol A.I. Modrá. Jednoduchá príprava, jednoduché použitie, ako aj možnosť skladovania farbiaceho papiera na neobmedzene dlhú dobu boli základom ich širokého využitia pri rôznych spôsoboch farbenia.

Farbiace ťahy farebným papierom. Na zaschnutý a zafixovaný prípravok sa nanesie pár kvapiek vody, priložia sa farebné papieriky s rozmermi 2x2 cm.Po celú dobu farbenia by mal papier zostať vlhký a tesne priliehať k povrchu skla. Pri sušení sa papier dodatočne navlhčí vodou. Trvanie farbenia náteru je určené metódou farbenia. Na konci farbenia sa papier opatrne vyberie pinzetou a škvrna sa premyje vodou z vodovodu a vysuší sa na vzduchu alebo na filtračnom papieri.

Farbenie sa rozmazáva roztokmi farbív. Na vysušený a fixovaný prípravok sa pipetou nanesie farbivo v takom množstve, aby pokrylo celý náter. Pri farbení náterov koncentrovanými roztokmi farbív (Ziehl karbolický fuchsín, karbolický horec alebo kryštálová violeť) sa farbenie vykonáva cez filtračný papier, ktorý zadržiava častice farbiva: pásik filtračného papiera sa umiestni na fixovaný náter a naleje sa roztok farbiva. to.

Na mikroskopické vyšetrenie sa pripravené nátery, vysušené a fixované, zafarbia. Farbenie je jednoduché a zložité. Jednoduché farbenie spočíva v nanesení akejkoľvek farby na škvrnu po určitú dobu. Na jednoduché farbenie sa najčastejšie používa alkohol-voda (1:10) Pfeiffer fuchsín, Lefflerova metylénová modrá a safranín. Eozín ako kyslé farbivo sa používa iba na farbenie cytoplazmy buniek a tónovanie pozadia. Kyslý fuchsín je na farbenie baktérií úplne nevhodný.

fotografia z lentachel.ru

Len pred sto rokmi sa infekcia počas vedeckého výskumu považovala za takmer nevyhnutnú. Mnoho vedcov vystavuje svoje telo riziku smrti štúdiom mikróbov a baktérií, ktorých povaha bola málo známa. Dnes je už väčšina nebezpečných mikroorganizmov, ktoré nás obklopujú, popísaná a študovaná, navyše existujú špeciálne medicínske prístroje pre bakteriologické laboratóriá, ktorých použitie s 99% pravdepodobnosťou chráni výskumníkov pred akýmikoľvek profesionálnymi rizikami.

Všetky predmety, s ktorými pracujú zamestnanci bakteriologického laboratória, sú nasýtené patogénnou mikroflórou. Na udržanie zdravého prostredia v miestnosti, na zamedzenie priameho kontaktu s kontaminovaným materiálom, sa používa nábytok, oblečenie a riad so zvýšenými bariérovými a antimikrobiálnymi vlastnosťami.

Hermeticky uzavreté zasklené a kovové skrinky a boxy, laboratórne stoly vhodné na dezinfekciu, sterilizáciu a autoklávové vybavenie a uzamykateľná chladnička sú položky, ktoré zaisťujú bezpečnosť ľudí, ktorí vykonávajú výskum na infikovaných vzorkách.

Všetky pomôcky používané na skladovanie vzoriek: banky, odmerné kadičky sú hermeticky uzavreté, aby sa zabránilo šíreniu choroboplodných zárodkov v laboratórnom vzduchu.

Na výrobu nádob sa používa špeciálne nerozbitné sklo alebo vysokopevnostný plast. Dvojité steny, špeciálny stabilný tvar dna, gumené prvky na vrchnákoch, táckach a kyvetách vytvárajú najlepšie podmienky na izoláciu nebezpečných susedov, akými sú meningokoky, streptokoky, stafylokoky, bacily a klostrídie.

Pred začatím výskumu si personál oblečie špeciálny odev: ochranný plášť, masku, okuliare. Na prácu s veľmi nebezpečnými látkami sa používajú pogumované zástery alebo špeciálne plášte s vodoodpudivou impregnáciou.

Správne včasné ošetrenie vzduchu ultrafialovými žiaričmi a baktericídnymi lampami, používanie osvedčených úprav prania, zásobovanie všetkých zamestnancov kompletným ochranným odevom je všeobecne uznávaným štandardom, od ktorého sa odchýlil administratívne, v prípade vážnych následkov trestnoprávne trestuhodné.

Integrované vybavenie a implementácia všetkých preventívnych opatrení pomáhajú chrániť zdravie zamestnancov, znižovať chorobnosť pri práci a zaisťujú vysokú efektivitu výskumu: zistilo sa, že používanie spoľahlivých osvedčených ochranných prostriedkov znižuje úzkosť, podporuje rýchlejšie a efektívnejšie akcie.

bakteriologické laboratórium

Bakteriologické laboratórium bolo oddelené ako samostatné oddelenie v roku 1996.

Vedúci - kandidát lekárskych vied, bakteriológ najvyššej kategórie Polikarpová Svetlana Veniaminovna

PRIORITNÉ OBLASTI ČINNOSTI

V bakteriologickom laboratóriu sa vykonávajú tieto typy analýz:

Bakteriologické vyšetrenie krvi (hemokultúra) a cerebrospinálnej tekutiny;
- bakteriologické vyšetrenie spúta, tracheálneho aspirátu, výplachov priedušiek;
- bakteriologické vyšetrenie zápalu vypúšťaného z rôznych ložísk: tonzilo-faryngitída, zápal stredného ucha, sinusitída atď.;
- bakteriologické vyšetrenie bodiek, výpotkov, exsudátov;
- bakteriologické vyšetrenie sliznice hltana a nosa na podmienene patogénnu mikroflóru;
- bakteriologické vyšetrenie moču s určením stupňa bakteriúrie;
- bakteriologické vyšetrenie výtoku z pohlavných orgánov na podmienene patogénnu mikroflóru;
- bakteriologické vyšetrenie oddeliteľnej spojovky;
- vyšetrenie výkalov na patogénnu črevnú flóru;
- bakteriologické vyšetrenie výkalov na dysbakteriózu;
- bakteriologické vyšetrenie materského mlieka;
- kvalitatívne stanovenie antigénu streptokokov skupiny B;
- kvalitatívne stanovenie antigénu Helicobacter pylori v ľudských výkaloch;
- kvalitatívne stanovenie antigénu toxínov A a B Clostridium ťažkopádne v ľudských výkaloch;
- posúdenie citlivosti/rezistencie izolovaných mikroorganizmov na antibiotiká.

ÚSPECHY

V bakteriologickom laboratóriu sa vykonávajú štúdie na izoláciu, identifikáciu a stanovenie citlivosti patogénnych a podmienene patogénnych mikroorganizmov izolovaných z rôznych biomateriálov na antibiotiká.

Na základe princípov klasickej klinickej mikrobiológie laboratórium zaviedlo nové metódy výskumu založené na najnovších pokrokoch v molekulárno-genetických technológiách.

Bakteriologické laboratórium vykonáva mikrobiologické štúdie, ktoré spĺňajú moderné ruské a medzinárodné štandardy.

Laboratórni pracovníci každoročne vykonajú bakteriologické vyšetrenie viac ako 10 000 pacientov hospitalizovaných na oddeleniach nemocnice, 6 000 pacientov a novorodencov pôrodnice, viac ako 5 000 pacientov polikliník CDC a EAO, pričom ročne vykonajú viac ako 45 000 mikrobiologických rozborov.

Na báze laboratória je vyvinuté a neustále sa modernizujúce „Automatizované pracovisko mikrobiológa, epidemiológa a chemoterapeuta“ vrátane dvoch programov: MIKROBIOLOGICKÝ MONITOROVACÍ SYSTÉM „MIKROB“ (SMM). Programy umožňujú riešiť hlavné úlohy mikrobiologickej služby nemocnice: kontinuálne monitorovanie mikrobiálnej krajiny a úrovne jej antibiotickej rezistencie, predpisovanie adekvátnej antibiotickej terapie a včasnú detekciu prípadov infekcií spojených so zdravotnou starostlivosťou (HAI).

Na zabezpečenie správnej kvality mikrobiologických štúdií sa do práce laboratória zavádzajú:

• Systém manažérstva kvality podľa normy GOST R ISO 15189-15

Lekárske laboratóriá. Osobitné požiadavky na kvalitu a spôsobilosť“;

• Základy Lean technológie (Lean production) - prístupy k riadeniu laboratória zamerané na zlepšenie kvality práce znižovaním strát: materiálne, finančné, dočasné;
• Systém 5S- nástroj štíhlej výroby - organizácia pracovného priestoru za účelom vytvorenia optimálnych podmienok pre vykonávanie operácií, udržiavanie poriadku, čistoty, presnosti, šetrenie času a energie.

Laboratórium sa od roku 2014 zúčastňuje na medzinárodnom programe kontroly antibiotickej rezistencie v krajinách strednej Ázie a východnej Európy, ktorý organizuje SZO(UK NEQAS).Laboratórium sa podieľa na externom hodnotení kvality laboratórneho výskumu ako expertné laboratórium v ​​sekcii „Klinická mikrobiológia“ (FSVOK).

Bakteriológovia už mnoho rokov vykonávajú certifikačné cykly zlepšovania „Moderné výskumné metódy v klinickej mikrobiológii“ na základe nemocnice pre zamestnancov so stredoškolským lekárskym vzdelaním v moskovskom zdravotníckom zariadení.

HIGH TECH

• Zavedenie molekulárno-genetických metód v diagnostike infekčných ochorení – metóda polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) „v reálnom čase“;

• stanovenie hlavných mechanizmov vývoja a šírenia bakteriálnej rezistencie na antibakteriálne liečivá fenotypovými a genotypovými metódami;

• použitie imunochromatografických expresných metód (IMCT) na etiologickú diagnostiku patogénov infekčných a zápalových ochorení;

• vytvorenie a implementácia elektronického modulu odborných posudkov pre bakteriológov, ošetrujúcich lekárov, klinických farmakológov na interpretáciu výsledkov zisťovania citlivosti mikroorganizmov na antimikrobiálne liečivá a identifikáciu mechanizmov rezistencie.

VEDECKÁ ČINNOSŤ

Počas existencie pracoviska boli v laboratóriu ukončené 2 dizertačné práce. Pracovníci divízie pravidelne vystupujú na medzinárodných, celoruských, mestských kongresoch, konferenciách, sympóziách a seminároch, sú pravidelne publikovaní vo vedeckých a praktických publikáciách.

Bakteriologické laboratórium spolupracuje s:

• Federálne výskumné centrum FSBI pre epidemiológiu a mikrobiológiu

ich. čestný akademik N.F. Gamaleya z MZRF“;

• FGAU „Vedecké centrum pre zdravie detí“ Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie;
• Vedecký ústav federálneho štátneho rozpočtu „Centrum lekárskeho genetického výskumu“ Ruskej akadémie lekárskych vied;
• Ústredný výskumný ústav epidemiológie FBUN Rospotrebnadzor;
• FBUN Moskovský výskumný ústav epidemiológie a mikrobiológie. G. N. Gabrichevsky Rospotrebnadzor;
• Katedra reprodukčnej medicíny a chirurgie Moskovskej štátnej univerzity medicíny a zubného lekárstva pomenovaná po A.I. Evdokimovovi (MGMSU);

Vedecká práca sa vykonáva v týchto oblastiach:

• mikrobiologická diagnostika a prevencia infekcií spojených so zdravotnou starostlivosťou (HAI). Mikrobiálna ekológia v zdravotníckych zariadeniach.
• vlastnosti mikrobiologickej diagnostiky infekcií dolných dýchacích ciest u pacientov s cystickou fibrózou;
• štúdium mechanizmov rezistencie enterobaktérií na antimikrobiálne lieky;
• vývoj algoritmov na expresnú diagnostiku nosičstva streptokokov skupiny B u tehotných žien a novorodencov.

ČLÁNKY, KONFERENCIE

2016

LABORATÓRNE VYBAVENIE

V súčasnosti je bakteriologické laboratórium vybavené moderným vybavením:

• Automatický analyzátor krvnej kultúry VersaTREK(TREK Diagnostic Systems) - schopnosť diagnostikovať sepsu čo najskôr - 90% pozitívnych výsledkov je zistených už počas prvého dňa. Maximálny čas výskumného protokolu je 5
• Bakteriologický analyzátor na identifikáciu a testovanie citlivosti mikroorganizmov Phoenix 100(BD) - priemerný čas na získanie výsledku identifikácie je 6-8 hodín, priemerný čas na získanie výsledku antimikrobiálnej citlivosti je 12-16 hodín.
• Poloautomatický analyzátor iEMSčitateľ(ThermoLabsystems), čo umožňuje nielen identifikovať a určiť citlivosť mikroorganizmov, ale aj riešiť mnohé praktické a vedecké problémy: stanovenie mikrobiálnej kontaminácie moču a iných biomateriálov, laboratórnu kontrolu účinnosti antibiotickej terapie, hodnotenie baktericídnej aktivity krvného séra a tiež skúmať kinetické modely rastu mikroorganizmov.

Do práce laboratória je zavedený informačný laboratórny systém „ALISA“, každé pracovisko bakteriológa je automatizované.

TÍM

Pivkina Nadežda Vasilievna

Lekár-bakteriológ najvyššej kategórie, má odbornú rekvalifikáciu v špecializácii "Bakteriológia". Člen Medzinárodnej asociácie klinických mikrobiológov a antimikrobiálnych chemoterapeutov (IACMAC), člen Federácie laboratórnej medicíny (FLM). Je spoluautorom mnohých vedeckých článkov o problémoch klinickej mikrobiológie. Pracovné skúsenosti v odbore od roku 1992.

Timofeeva Olga Gennadievna

Lekár-bakteriológ najvyššej kategórie, absolvoval stáž v odbore "Bakteriológia", absolvoval kurz zvyšovania kvalifikácie na tému "PCR analýza v klinických diagnostických laboratóriách". Člen Federácie laboratórnej medicíny (FLM). V súčasnosti pracuje na dizertačnej práci. Má publikácie o problémoch klinickej mikrobiológie. Pracovné skúsenosti v odbore od roku 1996.

Bondarenko Natalya Alexandrovna

Lekár-bakteriológ prvej kategórie, člen Federácie laboratórnej medicíny (FLM). Je spoluautorom mnohých vedeckých článkov o problémoch klinickej mikrobiológie. Pracovné skúsenosti v odbore od roku 1988.

Balina Valeria Vladimirovna

Lekár-bakteriológ, doktor klinickej laboratórnej diagnostiky. Absolvovala prax v odbore „Klinická laboratórna diagnostika“, má odbornú rekvalifikáciu v odbore „Bakteriológia“. Absolvované zvýšenie kvalifikácie na tému "Molekulárne genetické metódy v diagnostike infekčných ochorení." Člen Federácie laboratórnej medicíny (FLM). Pracovné skúsenosti v odbore od roku 2013.

Ošetrovateľský personál

Práca v laboratóriu:

• 1 medicínsky technológ
• 1 zdravotnícky laborant
• 5 laboratórnych záchranárov
• 1 laborant
• Všetci zamestnanci majú najvyššiu kvalifikačnú kategóriu.

Strana 5 z 91

Bakteriologické laboratóriá existujú v nemocniciach a poliklinikách alebo nezávisle od nich na mikrobiologický výskum. Dostávajú na výskum rôzny materiál získaný od chorých ľudí (spút, moč, hnis, výkaly, krv, mozgovomiechový mok a pod.). Okrem toho existujú aj sanitárne a bakteriologické laboratóriá, v ktorých sa voda, vzduch a potraviny podrobujú bakteriologickej kontrole.
Veľká je aj úloha bakteriologických laboratórií v prevencii infekčných ochorení. Niektorí ľudia po prekonaní infekčného ochorenia (týfus, dyzentéria, záškrt atď.) naďalej vypúšťajú do životného prostredia patogénne (patogénne) mikróby. Ide o takzvané nosiče baktérií. Medzi zdravými ľuďmi sú aj nosiči baktérií. Identifikáciou takýchto nosičov baktérií pomáhajú bakteriologické laboratóriá zdravotníckym orgánom pri vykonávaní množstva preventívnych opatrení.
Voda a potraviny kontaminované patogénnymi mikroorganizmami môžu spôsobiť epidémie (hromadné ochorenia) brušného týfusu, cholery a pod., preto je každodenná hygienická a bakteriologická kontrola dobrej kvality pitnej vody, mlieka a iných produktov taká dôležitá.
Bakteriologické laboratórium musí mať k dispozícii najmenej tri miestnosti: 1) malá miestnosť - recepcia na príjem a vydávanie testov; 2) médium a umývanie - na prípravu živných médií a umývanie riadu; 3) laboratórium na výrobu bakteriologického výskumu. Je žiaduce mať miestnosť na chov pokusných zvierat (vivárium). Každá miestnosť by mala mať vhodný nábytok (kuchynské a laboratórne stoly, rôzne skrinky, taburetky a pod.).
Nasleduje zoznam najdôležitejších položiek potrebných pre každodennú laboratórnu prácu. Účel ich použitia, ako s nimi zaobchádzať, ako aj princíp zariadenia sú popísané v príslušných častiach kurzu.
Optické zariadenia. Biologický mikroskop s imerzným systémom, lupami, aglutinoskopom.
Zariadenia na sterilizáciu a ohrev. Autokláv, prístroje na tekutú paru, pec, Seitzove filtre, termostaty, sterilizátory pre nástroje.
Zariadenia na varenie. Lievik na horúcu filtráciu, lievik na nalievanie médií, vodný kúpeľ, hrnce rôznych veľkostí, váhy kalibrované závažím, mlynček na mäso, kovové a drevené stojany na filtráciu.
Nástroje. Skalpely rôznych tvarov a veľkostí: masky, rovné, zakrivené, tupé, črevné, anatomické, chirurgické pinzety, striekačky.
sklenené predmety. Podložné sklíčka, podložné sklíčka s otvorom, krycie sklíčka, bakteriologické skúmavky, krátke skúmavky na sérologické reakcie (aglutinácia), centrifúgy, Heidepreichove poháre *, sklenené skúmavky a tyčinky, odmerné pipety na 1, 2, 5, 10 ml, Pasteurove pipety , sklenené fľaše na farby s pipetami, sklenené kadičky a banky rôznych veľkostí, valce rôznych veľkostí, lieviky na filtrovanie atď.

*V súčasnosti sa medzi väčšinou mikrobiológov a v učebniciach misky na získanie izolovaných kolónií mikróbov nazývajú Petriho misky a nie Heidenreichove misky, čo nezodpovedá skutočnému stavu vecí. Poháre prvýkrát zaviedol do laboratórnej praxe ruský mikrobiológ Heidenreich.

Rôzne položky. Bakteriálna slučka, platinový drôt, gumené rúrky, ručné rohové váhy so závažím, stojany (drevené, kovové) na skúmavky, teplomery, klietky pre zvieratá, prístroje na fixáciu zvierat, odstredivky.
Chemikálie, farby, materiály na médiá a pod. Agar-agar, želatína, biela v plátoch, imerzný olej, filtračný papier, savá a obyčajná vata, gáza, etylalkohol, anilínové farbivá (purpurová, genciánová a kryštálová violeť, vesuvín, metylén modrá, neutrálna, safranínová atď.), farba Giemsa, kyseliny (dusičnanová, chlorovodíková, sírová, karbolická, fosforečná, pikrová, šťaveľová atď.), alkálie (hydroxid draselný, hydroxid sodný, amoniak, sóda), soli (dusičnan draselný manganistan draselný, siričitan sodný, chlorid sodný atď.).

laboratórny stôl

Na vykonanie mikrobiologickej štúdie musí mať laborant vhodne vybavené pracovisko. Laboratórny stôl musí mať určitú výšku, aby sa dal pri sedení ľahko mikroskopovať (obr. 9). Ak je to možné, stôl by mal byť pokrytý linoleom a každé pracovisko by malo byť pokryté pozinkovaným podnosom alebo zrkadlovým sklom. Pracovisko by malo byť vybavené mikroskopom, stojanmi na skúmavky a farby, platinovou slučkou a ihlou na kultúry, pohárom s mostíkom na prípravky, podložkou, presýpacími hodinami, sklíčkami a krycími sklíčkami, pipetami, sadou farieb, filtračný papier, liehový alebo plynový horák a nádoba s dezinfekčným roztokom (lyzol, kyselina karbolová, sublimát, chlóramín alebo lyzoform), kde sa na dezinfekciu namáčajú použité sklíčka a krycie sklíčka, pipety, sklenené tyčinky a pod. sú pestované nemožno dezinfikovať chemikáliami. Stopy dezinfekčných prostriedkov na takomto riade ich robia nevhodnými pre rast a rozmnožovanie mikroorganizmov. Po použití sa riad vloží do kovových nádrží alebo vedier s vekom, uzavrie sa a sterilizuje v autokláve. Malé nástroje (pinzety, skalpely, nožnice) po použití vložíme do sterilizátora a varíme 30-60 minút alebo ponoríme do 3-5% mydlovo-karbolového roztoku chloramínu na 30-60 minút.

Ryža. 9. Technika mikroskopie bakteriologických objektov.

Pracovisko musí byť udržiavané v absolútnej čistote. Je neprípustné, aby bol stôl kontaminovaný vyšetrovaným infekčným materiálom (moč, výkaly, hnis a pod.). V druhom prípade sa infekčný materiál zo stola môže dostať na iné okolité predmety a potom je možná intralaboratórna infekcia. Laborant musí po skončení práce dať do poriadku pracovisko, za ktoré zodpovedá, a z dôvodu prevencie utrieť sklo na pracovisku kúskom vaty navlhčenej 5 % roztokom kyseliny karbolovej alebo chlóramínu.

Pravidlá práce a správania sa v laboratóriu

Laboratórni pracovníci by si pri práci s infekčným materiálom mali uvedomiť možnosť, že sa sami nakazia a prenesú infekčnú chorobu do rodiny, bytu a pod. Preto musia byť pri práci pozorní, opatrní, poriadkumilovní a pedantskí.
Pri práci v laboratóriách je potrebné dodržiavať nasledujúce pravidlá:

1. Na pobyt v laboratóriu a ešte viac na prácu v ňom je potrebné mať na sebe župan a šál alebo čiapku.
2. Zbytočne sa nepremiestňujte z jednej laboratórnej miestnosti do druhej a používajte len na to určené pracovisko a vybavenie.
3. V laboratóriu nejedzte a nefajčite.
4. Pri práci s infekčným materiálom a živými kultúrami používajte vhodné nástroje: pinzetu, háčiky, špachtle a iné predmety, ktoré po použití podliehajú zničeniu alebo neutralizácii (spálenie plameňom horáka, vyvarenie a pod.). Tekutý infekčný materiál nasávajte do pipiet nie ústami, ale pomocou valcov, hrušiek, prelievajte tekutinu s infekčným materiálom z jednej nádoby do druhej len cez akýkoľvek prijímač (podnos, umývadlo), do ktorého sa nalieva dezinfekčná kvapalina (roztok karbol. kyselina, lyzol). Očkovanie a subkultúry by sa mali vykonávať spaľovaním skúmaviek, špachtlí, platinových slučiek, pipiet atď. na plameni horáka.
5. Ak dôjde k rozbitiu riadu alebo k rozliatiu tekutiny obsahujúcej infekčný materiál alebo živé kultúry, okamžite čo najdôkladnejšie dezinfikujte kontaminované pracovisko, odev a ruky. To všetko by sa malo robiť v prítomnosti alebo pod dohľadom vedúceho laboratória, ktorý musí byť okamžite informovaný o nehode.
6. Všetky použité a nepotrebné predmety a materiály by sa mali podľa možnosti zlikvidovať (najlepšie spálením alebo opatrnou likvidáciou v sterilizátoroch alebo dezinfekčných kvapalinách).

Všetky predmety určené na dezinfekciu zhromaždite v laboratóriu do špeciálnych prijímačov, nádrží, vedier s vekom atď., zatvorené preneste do autoklávu, kde ich možno v ten istý deň dezinfikovať. Dodávku infekčného materiálu do autoklávu a jeho sterilizáciu by mali monitorovať špeciálne určení zodpovední laboratórni pracovníci.

1. Dbajte na prísnu čistotu a poriadok. Dezinfikujte a umývajte si ruky čo najčastejšie počas pracovného dňa a po práci.
2. Laboratórni pracovníci sú povinne očkovaní proti závažným infekčným ochoreniam (predovšetkým proti črevným).
3. Je povinné vykonávať denné kvantitatívne zaúčtovanie všetkých živých kultúr a infikovaných zvierat so zápisom do špeciálnych denníkov a účtovných kníh.
4. Po práci treba všetok materiál a kultúry potrebné pre ďalšiu prácu ponechať v uzamykateľnej chladničke alebo trezore a dať pracovisko do úplného poriadku.
5. Denné dôkladné čistenie laboratórnych priestorov sa musí vykonávať mokrou metódou s použitím dezinfekčnej kvapaliny.

Prítomnosť rôznych baktérií v črevách sa považuje za normálnu. Tieto baktérie sa zúčastňujú procesov spracovania, ako aj asimilácie potravín. Správne trávenie a fungovanie čreva dokazujú výkaly, pozostávajúce z malých bezštruktúrnych častíc, nazývaných detritus.

Na štúdium mikrobiálneho zloženia výkalov sa vykoná analýza nádrže. Ak je počet baktérií zvýšený, potom má človek črevné patológie, bolesť brucha inej povahy, vo výkaloch sa objavujú kúsky nestráveného jedla. Táto štúdia vám umožňuje identifikovať pôvodcov mnohých ochorení.

Klasifikácia črevných baktérií

Po podrobnom štúdiu sú však rozdelené do nasledujúcich skupín:

1. Zdravé baktérie: lakto- a bifidobaktérie, eschechéria. Tieto mikroorganizmy aktivujú fungovanie čriev.
2. Podmienečne patogénne: enterokoky, kandida, klostrídie, stafylokoky. Tieto mikroorganizmy sa za určitých okolností stávajú patogénnymi a sú schopné vyvolať vývoj rôznych patológií.
3. Patogénne: coli, klebsiella, proteus, salmonela, šindeľ, sarcíny. Táto skupina baktérií vyvoláva vývoj závažných ochorení.

Existujú rôzne metódy na vyšetrenie výkalov. Jednou z najbežnejších metód je bakanalýza.

Čo je nádrž na analýzu výkalov?

Bakteriologické vyšetrenie výkalov vám umožňuje študovať jeho mikrobiálne zloženie, ako aj určiť prítomnosť patogénov následných ochorení:

• šigelóza;
• úplavica;
• salmonelóza;
• brušný týfus;
• cholera a iné choroby.

Analýza výkalov v nádrži trvá pomerne dlho. Štúdia sa uskutočňuje pred vymenovaním antibiotickej terapie.

Indikácie pre výskum

Mali by sa zdôrazniť hlavné dôvody na vykonanie analýzy stolice:

Koprologické štúdie umožňujú identifikovať patológie vyskytujúce sa v črevnej dutine:

Analýza nádrže je tiež predpísaná na diagnostiku patológií tráviacich orgánov.

Ako sa vykonáva fekálna analýza?

Pred absolvovaním štúdie by mal pacient absolvovať špeciálne školenie niekoľko dní.

• zelené;
• repa;
• červená ryba;
• paradajky.

Okrem toho môžu byť výsledky štúdie ovplyvnené mäsovými výrobkami.

Pri príprave na test je potrebné prestať užívať antibiotiká, protizápalové lieky a lieky s obsahom enzýmov a železa.

Zber materiálu na výskum by sa mal vykonávať ráno. Na zber výkalov použite sterilnú nádobu, ktorú je možné zakúpiť v lekárni. Doba skladovania biomateriálu v chladničke nie je dlhšia ako 10 hodín.

Ako prebieha výskum?

Bakteriologické vyšetrenie výkalov vám umožňuje určiť fyzikálne a chemické zloženie materiálu, jeho vlastnosti, prítomnosť patológií. Táto štúdia pomáha odhaliť baktérie v tele, zmeny v biologickej rovnováhe.

Doplnkom bakanaliza je skatologická analýza výkalov. Táto štúdia vám umožňuje posúdiť prítomnosť špecifického zápachu výkalov, jeho konzistenciu a hustotu, celkový vzhľad, prítomnosť alebo neprítomnosť mikroorganizmov.

Štúdia zahŕňa 2 etapy:

1. makroskopická analýza.
2. Mikroskopické.

Mikroskopické vyšetrenie odhalí hlien, bielkoviny, zvýšené hladiny bilirubínu, krvné zrazeniny, jódofilnú flóru vo výkaloch. Ten sa tvorí vďaka účinným látkam, ktoré premieňajú škrob na glukózu. Detekcia jodofilnej flóry neznamená infekciu vo všetkých prípadoch. O rozvoji ochorenia svedčí hromadenie jódových baktérií spôsobené fermentáciou.

Keďže telo dieťaťa dobre nebojuje s patogénmi, veľmi často sú takéto baktérie diagnostikované vo výkaloch detí.

Dnes sa používa metóda výsevu študovaného biomateriálu v špeciálnom prostredí s určitými podmienkami. Odborníci určujú schopnosť baktérií množiť sa a vytvárať kolónie. Na získanie presných výsledkov musia byť všetky použité nástroje, ako aj misky so zozbieraným biomateriálom sterilné.

Patogénne mikroorganizmy sa skúmajú na citlivosť na rôzne antibakteriálne lieky. Štúdia sa vyznačuje vysokou presnosťou výsledkov, podľa ktorých môže lekár predpisovať lieky.

Iba 10 % z celkového množstva testovaného materiálu môže predstavovať patogénna mikroflóra.

Dešifrovanie výsledkov

Vyšetrenie výkalov vám umožňuje identifikovať a určiť počet akýchkoľvek baktérií. Na základe získaných výsledkov lekár stanoví diagnózu a predpíše liečbu.

Odrody patogénnej mikroflóry, ktoré možno nájsť vo výkaloch:

1. Escherichia coli. Zasahujú do vstrebávania vápnika v tele, ako aj železa, a zvyčajne naznačujú prítomnosť červov.
2. Enterobaktérie. Najčastejšie tieto baktérie spôsobujú vývoj úplavice a črevných infekcií.
3. Escherichia coli so zníženou enzymatickou aktivitou naznačuje vznik dysbakteriózy.
4. laktóza-negatívne baktérie. Spôsobujú poruchy tráviaceho procesu a stávajú sa príčinou plynatosti, pálenia záhy, rýchleho grgania a pocitu ťažkosti.
5. Hemolytické baktérie. Tvoria toxíny, ktoré negatívne ovplyvňujú nervový systém, ale aj črevá. Spôsobujú alergie.
6. Huby podobné kvasinkám vyvolať vývoj drozdov.
7. Klebsiella, vyvoláva tvorbu gastroenterologických patológií.
8. Enterokoky vyvolávajú výskyt infekčných patológií pohlavných orgánov, vylučovacieho traktu a genitourinárneho systému.

Dekódovanie analyzačnej nádrže je uvedené na formulároch, ktoré tiež označujú normálne indikátory baktérií.

Črevná dysbakterióza je veľmi nebezpečná patológia, ktorá ničí zdravú mikroflóru. Tento stav vedie k rozvoju dyzentérie a zlatého stafylokoka. Aby ste tomu zabránili, odporúča sa aspoň raz za rok vykonať analýzu stolice na kontrolu črevnej biobalancie.

Buck analýza sa považuje za spoľahlivú štúdiu, ktorá poskytuje informácie o fungovaní jej dôležitých vnútorných orgánov: čriev a žalúdka. Štúdia umožňuje včas identifikovať patogénne mikroorganizmy, ktoré ovplyvňujú normálnu mikroflóru. Je predpísaný pre dospelých aj deti.