Simptomele micozei picioarelor. Diagnosticul de laborator al bolilor fungice ale pielii Nu se utilizează în diagnosticul micozelor superficiale

Solzii sau părul se așează pe o lamă de sticlă (sticla trebuie degresată) și se umple cu una, două sau trei picături dintr-o soluție 30% de potasiu caustic sau sodă caustică și se acoperă cu o lamă. Timp de 2-3 minute, cu ușoară încălzire pe flacăra unui arzător cu alcool, apăsați ușor preparatul cu un pahar de acoperire până
nor gri la examinarea solzilor. Părul nu trebuie distrus, ci doar se umflă cu o astfel de încălzire. Examenul microscopic (mărire de 100-200 de ori) cu diafragma întunecată evidențiază elemente fungice - spori sau fire de miceliu. O condiție necesară pentru reușita examinării microscopice este minuțiozitatea obținerii solzelor și părului, care trebuie prelevate din zonele afectate cu pensete speciale (pensete pentru gene). Este necesar să se acorde atenție nu numai părului, crustelor și solzilor clar vizibile, ci și resturilor de păr abia vizibile (așa-numitele cioturi) și punctelor negre, care sunt îndepărtate cu un bisturiu sau un ac histologic. Nu trebuie să vă mulțumiți niciodată să îndreptați pacientul către zonele afectate; medicul însuși trebuie să examineze cu atenție întregul scalp.

În părul afectat de tricofitoză, sporii fungici sunt aranjați în lanț. La microsporia, sporii sunt mult mai mici decât la pecingine, nu formează lanțuri și sunt localizați în exteriorul părului. Există cordoane de miceliu septat care curg în interiorul părului. Părul este parcă îmbrăcat într-o acoperire și dispută. Cu crusta se observă spori polimorfi, fire grosiere, variate și de obicei bule de aer (Fig. 48).

În acest caz, ciupercile nu afectează complet întregul păr, dar rămân zone neafectate.
Pentru a obține material din piele netedă, solzii sunt îndepărtați. zonele periferice ale leziunii cu o lingură ascuțită sau bisturiu. Este mai convenabil să răzuiți unghiile cu un cuțit medical ascuțit (bisturiu), eliminând secțiuni mici, dar adânci, de pe suprafața interioară a plăcii unghiei sau răzuind pulberea de pitiriazis de pe plăcile cornoase ale unghiei.
Materialul de pornire este fiert într-o eprubetă cu alcali și apoi lăsat să stea în această eprubetă timp de 12-20 de ore.
După aceasta, conținutul este centrifugat și sedimentul este examinat la microscop (metoda N.A. Chernogubov).
Ciupercile cresc bine pe medii nutritive artificiale care conțin carbohidrați și substanțe proteice. Mai ales comune sunt așa-numitul mediu Sabouraud original, mustul de bere, agar și legumele.

2. Examinarea de laborator a materialului patologic

2.1. Studii microscopice

Pentru a detecta elementele morfologice ale ciupercii - celule de drojdie, pseudomiceliu, miceliu, conidiofori, conidii, forme tisulare ale micozelor profunde - materialul patologic este examinat în preparate native și colorate.

Materialul patologic lichid este examinat în stare necolorată în următoarele lichide de curățare: un amestec de alcool cu ​​glicerină (alcool etilic 1 parte, glicerină 2 părți, apă distilată 2 părți), soluție Lugol (1 g iod cristalin, 2 g iodură de potasiu, 150 ml apă), precum și în apă sau ser fiziologic. Pentru a pregăti preparatele native, o picătură de material este aplicată pe o lamă de sticlă folosind o buclă sau o pipetă, apoi se aplică 1-2 picături de lichid de curățare, acoperite cu o sticlă de acoperire și microscopate la o mărire mică de 1:80 (ocular 10x). și obiectiv 8x), la care puteți vedea grupuri de celule de drojdie și pseudomiceliu, miceliu și alte elemente de ciuperci. La o mărire mare de 1:400, celulele individuale pot fi caracterizate.

Material patologic dens (piele, solzi de unghii) se pune intr-o picatura de solutie de KOH 10-20%, usor incalzita la flacara unui arzator (pentru o mai buna macerare) pana cand la periferia picaturii apar cristale alcaline. Apoi, picătura este acoperită cu o lamă, se apasă ușor pe ea și se examinează la microscop, mai întâi la mărire mică pentru a găsi scara, apoi la mărire mare.

În materialul părului, mantaua de spori care înconjoară părul (ectothrix) sau în interiorul părului (endothrix) elementele fungice sunt de obicei foarte clar vizibile. Leziunile părului, precum și dimensiunea sporilor, sunt specifice diferitelor tipuri de dermatofite. Este necesar un diagnostic diferențial între structurile fungice și artefacte. Sursele posibile de rezultate fals pozitive includ picăturile de lipide, bulele de aer, fibrele textile și așa-numita „ciupercă mozaic”. Picăturile de lipide pot să semene cu celulele de drojdie, o descoperire cea mai comună în materialul slab curățat. Fibrele textile se află de obicei separate de materialul epidermei, părului sau unghiei. Sunt mai mari decât hifele fungice, au grosime neuniformă și nu conțin septuri. „Ciuperca mozaic” este un artefact obținut în timpul cristalizării KOH din cauza încălzirii excesive a preparatelor. Spre deosebire de ciuperci, nu există diviziuni clare în celule.

Un pas important în diagnosticarea infecțiilor fungice este pregătirea preparatelor colorate. Orice material patologic (preparate de frotiu, amprente de organe, centrifugate și, bineînțeles, secțiuni histologice) trebuie să sufere trei tipuri principale de prelucrare: 1) colorare folosind metoda PAS pentru identificarea ciupercilor adevărate - eumicete; 2) colorare după metoda Gram sau în modificări după Gram-Weigert, după Bogolepov, după Brown-Brenna - pentru a identifica microbiota bacteriană însoțitoare, pentru a identifica actinomicetele și nocardia; 3) colorare după metoda Ziehl-Nielson sau modificare după metoda Kinyon - pentru identificarea microorganismelor rezistente la acid, în primul rând pentru indicarea și diferențierea cu Mycobacterium tuberculosis, pentru depistarea agenților cauzali ai leprei, nocardiei și drojdiilor formatoare de spori.

Metoda PAS (Piodic Acid Schiff) presupune identificarea polizaharidelor neutre în pereții microorganismelor. În pereții majorității eumicetelor există un complex glucan-manan în concentrații diferite, datorită căruia are loc colorarea.

Procariotele (bacterii) se dovedesc a fi PAS-negative, inclusiv actinomicetele și nocardia de interes pentru micolog. Cu toate acestea, în timpul formării druselor actinomicotice, se formează un așa-numit „ciment”, lipind miceliul actinomicotic vegetativ într-o granulă, care dă, de asemenea, o colorare PAS-pozitivă. În acest sens, această metodă este aplicabilă și în diagnosticul actinomicozei.

Reacția PAS (și modificarea acesteia) este cea mai importantă metodă de diagnosticare a formelor tisulare de infecție fungică. Metoda se bazează pe oxidarea grupărilor glicolice ale carbohidraților cu acid periodic sau cromic. Acidul periodic oxidează 1,2 și 1,4 glicoli în aldehide și rupe legăturile dintre atomii de carbon purtând grupări hidroxil. Grupările aldehidice pot fi de asemenea detectate utilizând reactivul aldehidic Schiff. In situ, în pereții ciupercii, complexul heteropolizaharidic devine intens colorat roșu-violet (metodologie - vezi anexe).

Pentru a suprima culoarea țesuturilor din jur, se folosește un tratament („contracolor”) cu verde deschis, galben metanil etc. În acest caz, sunt detectate doar celule fungice, ceea ce este foarte util în etapa de indicare a agentului patogen în țesuturi sau în preparatele de frotiu. În același timp, nu este posibil să se judece răspunsul organismului și modificarea țesuturilor la astfel de medicamente. Este întotdeauna necesar să aveți preparate paralele colorate folosind metoda PAS cu colorare suplimentară cu hematoxilină.

În practică, se utilizează nu numai metoda PAS în versiunea clasică, ci și diversele sale modificări: oxidarea cu acid cromic (în loc de acid iod) - aceasta este reacția Bauer, colorarea Gridley, impregnarea cu argint metanamină folosind Gomory-Grocott metodă. Toate sunt utilizate cu succes pentru a detecta formele tisulare ale ciupercilor și se bazează pe același principiu (tehnică - vezi Anexa). Tabelul 3.

Tabelul 3

Proprietățile tinctoriale ale formelor tisulare ale ciupercilor

(în material patologic, în secțiuni histologice)

Micoze oportuniste	Metode de detectare
Candidoza	Colorarea PAS sau Gridley
Aspergiloza	Hematoxilină și eozină, impregnare Gomori-Grocott
Zigomicoza	Hematoxilina si eozina
Criptococoza	Albastru alcian (după metoda Mowry) + reacție PAS + hematoxilină
Pneumocystis	Colorare după metoda Bauer, impregnare după Gomory-Grocott, colorare cu tionină
Fusarium	Colorarea după metoda Romanovsky-Giemsa, după metoda Wright
Scedosporiaza
Trichosporoza	Hematoxilină și eozină, colorație Romanowsky-Giemsa
Feohifomicoza și cromomicoza	Hematoxilina si eozina
Micoze patogene primare:	Metode de detectare
Coccidioidoza	Reacția PAS + hematoxilină
Histoplasmoza	impregnare conform Gomory-Grocott, colorare cu metoda Bauer, colorare cu metoda Romanovsky-Giemsa
Blastomicoza nord-americană
Paracoccidioza	Reacția PAS, impregnare conform Gomory-Grocott
Adiaspiromicoza	Hematoxilină și eozină, reacție RAS
Pseudomicoze:	Metode de detectare
Actinomicoza	Hematoxilină și eozină, colorație Gram-Weigert
Nocardioza	colorare după metoda Ziehl-Neelsen, după metoda Kinyon, după metoda Gram.

Dacă se presupune un diagnostic de criptococoză, este recomandabil să se utilizeze metode pentru detectarea specifică a materialului capsular Cr.neoformans care conțin glicozaminoglicani (polizaharide acide). În acest scop, se folosește colorarea cu albastru alcian (după metoda Mowry), maro de bază (după metoda Shubich) și colorarea cu mucicarmină. Tripla colorare este foarte utila: reactie PAS, apoi tratament cu albastru Alcian, apoi hematoxilina. În acest caz, diferențierea dintre criptococi și formele tisulare ale altor ciuperci cu morfologie similară devine posibilă.

Descrierea materialului patologic (preparate histologice) include date despre morfologia și dimensiunea formelor tisulare ale ciupercilor, caracteristicile tinctoriale ale acestora, relația cu țesuturile gazdă, prezența fagocitozei și determinarea microbiotei însoțitoare.

2.2. Semănatul materialului patologic și numărarea cantitativă a celulelor în micozele cauzate de ciuperci de drojdie

Obținerea culturilor de ciuperci este necesară pentru identificarea acestora și determinarea sensibilității la medicamentele antifungice.

Inainte de examinare, sputa se omogenizeaza timp de 5-10 minute prin agitare cu margele sterile. Dacă sputa conține mult mucus și este slab omogenizată, se pot adăuga în ea 1-2 ml de soluție salină sterilă. Sputa se examinează microscopic în preparate native sau colorate. Dacă microscopia sputei cu mărire mare arată elemente fungice în câmpul vizual, atunci aceasta trebuie însămânțată în diluții de 1:10, 1:100, 1:1000; dacă nu sunt detectate elemente fungice, sputa este însămânțată nediluată. Diluțiile se prepară într-un mediu nutritiv lichid (must, Sabouraud, 1% apă peptonă) sau în ser fiziologic steril. Din fiecare diluție, se inoculează 0,1 ml cu o spatulă pe 2 căni de agar de must, agar Sabouraud sau MPA cu adaos de antibiotice antibacteriene - penicilină și streptomicina, biomicină (100-200 unități/ml mediu). Mediul nutritiv este pre-uscat într-un termostat la +37 C, deoarece în prezența condensului, creșterea coloniilor poate fi confluentă. Culturile se incubeaza in termostat la + 37 o C timp de 48 de ore, apoi, daca exista crestere de acelasi tip de colonii de drojdie, acestea se numara cantitativ. Calculul numărului de celule de drojdie (n) în 1 ml sau 1 g de material de testat se efectuează conform formulei n = авс, unde a este numărul mediu de colonii pe o placă Petri, b = 10 cu un volum de inocul de 0,1 ml, c este gradul de diluare a excrementelor (10.100.1000).

Exemplu de calcul: pe vase cu o diluție de 1:1000 au crescut în medie 60 de colonii, în timp ce 1 ml din excreta studiată conține 60 x 10 x 1000 = 600.000 de celule de drojdie.

BAL, lichid de spalare al bronhiilor, cavitatilor maxilare, bila (portiunile A, B, C), sucul gastric, continutul duodenal, urina sunt transferate in tuburi de centrifuga si centrifugate timp de 10-15 minute, dupa care lichidul supernatant se scurge rapid. Din sedimente se prepară preparate native pentru microscopie. Dacă microscopia evidențiază celule de drojdie în fiecare câmp vizual, atunci însămânțarea se efectuează în diluții de 1:100 și 1:1000, câte 0,1 ml fiecare, pe medii nutritive solide și incubate la 37 C timp de 48 de ore. Dacă microscopia sedimentului nu nu dezvăluie celule de drojdie, sedimentul semănat fără diluare. Cantitatea de floră de drojdie se calculează la 1 ml de material patologic.

FECELE se iau cu o lingură de măsurat în cantitate de 0,2 g, se pun în 1,8 ml de must lichid și se amestecă bine cu o baghetă de sticlă. Diluția rezultată (1:10) se lasă să stea timp de 5-10 minute, se prepară diluții de 1:100, 1:1000 și se inoculează într-un volum de 0,1 ml pe 2 plăci Petri cu mediu de agar. Cantitatea de floră de drojdie se înregistrează la 1 g de fecale.

Fluid cerebrospinal. Caracterizați-i aspectul (transparent sau tulbure, incolor sau colorat, prezența sângelui, sedimentului). Frotiuri microscopice din sedimentul lichidului cefalorahidian după centrifugare. Se prepară trei preparate: nativ - într-o picătură de soluție salină sterilă; nativ - într-o picătură de cerneală și un frotiu pentru colorare prin metoda PAS, Gram și albastru Alcian conform lui Mowry.

Microscopie fluid cerebrospinalîn preparatele native și colorate, ne permite să determinăm prezența celulelor de drojdie în devenire și a fragmentelor de miceliu fungic, sau a bacteriilor care provoacă meningită purulentă (meningococ, pneumococ, Haemophilus influenzae etc.). O ciupercă capsulară poate fi detectată în preparatul de cerneală. Cryptococcus neoformans.În același timp, celulele de drojdie în devenire sunt vizibile pe fundalul gri al cernelii, înconjurate de un halou ușor al capsulei. Preparatele de cerneală pot conține și forme de drojdie Candida albicans care nu au un halou ușor al capsulei în jurul celulei.

Cr. neoformanilor poate fi detectat și folosind colorarea albastru Alcian (Mowry). Colorarea are loc datorită detectării selective a heteropolizaharidei capsulare caracteristice Cr.neoformans. Dacă flora bacteriană este detectată într-un preparat colorat cu Gram, se efectuează o examinare suplimentară a lichidului cefalorahidian folosind metode bacteriologice adecvate. După microscopia sedimentului, lichidul este inoculat pe 3 căni de agar de must proaspăt preparat, uscat sau agar Sabouraud, precum și pe must lichid sau mediu Sabouraud lichid. Aplicați 2-3 picături de sediment lichid pe suprafața agarului nutritiv din cupele 1 și 2 și frecați-l bine cu o spatulă și inoculați 1 picătură în trei puncte de pe suprafața agarului cupei 3 pentru a detecta ciupercile filamentoase. Lichidul rămas este transferat în 5 ml de must lichid sau agar Sabouraud. Culturile sunt incubate la două condiții de temperatură: cana 1 - la +37 o C, iar cupele 2 și 3 și semănat în mediu lichid - la +28 o C - +30 o C. Sunt vizualizate culturile la temperatura de +37 o C. la 2 și 5 zile, iar la 28 - 30 o C - în a 4-a, a 7-a, a 10-a zi de creștere. Dacă în a 5-a zi la temperatura de +37 o C și în a 10-a zi la o temperatură de 28-30 o C nu există creștere, semănați dintr-un mediu nutritiv lichid pe plăci cu must sau agar Sabouraud. Dacă nu există o creștere a florei drojdiei, rezultatul inoculării lichidului este înregistrat ca negativ.

DESCARCARE de fistule. Studiul începe cu microscopia materialului în preparate native sau colorate. Apoi materialul este inoculat pe un mediu de agar (must sau Sabouraud), pentru care se aplică 2-3 picături de scurgere într-o cană și se întinde pe suprafața agarului cu o spatulă. Culturile sunt incubate timp de 48 de ore la +37 o C.

DESCARCARE de mucoase.

1. Tamponul se pune intr-o eprubeta cu 2 ml de mediu lichid (must, mediu Sabouraud sau MPB) si se agita 5-7 minute fara a se inmuia dopul. Se prepară diluții de 1:10, 1:100 și se inoculează 0,1 ml din fiecare diluție pe două căni de agar de must, agar Sabouraud sau MPA. Inoculările pe medii solide și o eprubetă cu mediu lichid cu tampon (pentru îmbogățire) sunt incubate la o temperatură de +37 C. După 48 de ore, se numără numărul de colonii și se numără numărul de celule de drojdie prelevate cu un tampon. aproximativ determinate. Pentru a face acest lucru, numărul de colonii de drojdie crescute este înmulțit cu 20 și diluția. Dacă nu există o creștere a coloniilor pe plăci, diluțiile luate sunt reînsămânțate din mediul de îmbogățire pe o placă cu agar de must.

2. Semănatul se poate face prin deplasarea unui tampon cu rotație pe suprafața mediului nutritiv. În acest caz nu se ține cont de numărul de colonii de drojdie, ci se notează doar prezența și intensitatea creșterii: colonii unice, creștere semnificativă sau continuă, lipsa creșterii microbiotei.

SÂNGE. Probele de sânge venos pentru hemocultură trebuie diluate cu mediu de îmbogățire cel puțin 1:5, astfel încât proprietățile bactericide ale sângelui să nu inhibe creșterea fungică. Se inoculează 5-10 ml de sânge proaspăt extras, respectiv, în 50-100 ml de mediu nutritiv (Sabouraud lichid cu glucoză 2% sau mediu Kitt-Tarozzi după regenerarea acestuia). Pentru cultură, puteți lua sânge cu un anticoagulant (soluție de citrat de sodiu 1:10 5%). Culturile se cultivă timp de 10 zile la +37 o C cu însămânțare de control în zilele 5 și 10. Folosind o pipetă sterilă, luați sedimentul, dintre care 3 picături sunt împrăștiate cu o buclă bacteriologică pe suprafața agarului de must în vase Petri. Cupele însămânțate se pun într-un termostat cu temperatura de +37 o C timp de 2-5 zile. În cazul creșterii florei drojdiei, se dă un răspuns preliminar despre prezența ciupercii în sânge, iar cultura este determinată de gen și specie.

Este descrisă o altă metodă de hemocultură pentru micofloră (H. Rieth). În acest caz, 5-10 ml de sânge se inoculează în picături. Aplicați 40-50 de picături de sânge pe suprafața unui mediu nutritiv dens într-o cutie Petri cu o pipetă sterilă, la o distanță de 0,5 cm între picături. Inocularea se efectuează pe două vase Petri, incubând într-un vas la temperatura de +37 o C, iar în celălalt la temperatura camerei timp de 2-5 zile.

BUCĂȚI de țesut de organ. Se face o amprentă cu bucata de țesut de testat pe suprafața unui mediu nutritiv dens într-o cutie Petri, apoi se realizează cernerea cu o buclă. Aceeași bucată de țesut se pune în 50 ml de mediu nutritiv lichid (must, mediu Sabouraud). Culturile sunt incubate într-un termostat la o temperatură de +37 o C timp de 5 zile.

PIELE și solzi de unghii. Semănatul solzilor se efectuează indiferent de rezultatele microscopiei. Pentru a face acest lucru, folosind o spatulă micologică sterilă umezită în condensatul mediului, solzii sunt transferați într-o eprubetă pe agar de must înclinat în 2-3 puncte, presându-le pe suprafața mediului. In functie de cantitatea de material primita pentru cercetare, inocularea se face in 2-3 eprubete. Culturile sunt incubate într-un termostat la o temperatură de 28-37 o C până la 5 zile.

Metodele de identificare rapidă sunt utilizate pe scară largă C.albicans. Această specie este capabilă să formeze tuburi germinale și filamente scurte de pseudomiceliu în câteva ore (2-4 ore la 37 o C) pe ser de sânge, albuș de ou, mediu Eagle, mediu 199 etc. În practică, laboratoarele folosesc ser uman (reziduuri din reacții serologice), unde se formează tuburi germinale la 37 o C, iar după 24 de ore se formează încurcături de pseudomiceliu. De dragul aparenței C.albicans acest fenomen este tipic în 90% din cazuri. Germeni se formează mai rar C. tropicalis.

2.3. Examinarea microscopică și cultura materialului patologic pentru micoze suspectate cauzate de mucegaiuri

Materialul patologic poate fi examinat în preparate native și colorate. Lamele și paharele de acoperire destinate preparării microlamelor trebuie păstrate într-un amestec de alcool și eter (1:1) pentru a evita contaminarea aerului cu micobiotă. Înainte de utilizare, lamele și lamelele sunt sterilizate pe flacăra unui arzător.

Microscopia materialului

MICROSCOPIE a sputei. Pentru a pregăti preparatele native, sputa este transferată într-o cutie Petri sterilă și examinată pe un fundal negru pentru a detecta particule mici (bulgări). Nodulele pot fi purulente, purulent-mucoase, purulent-sângeroase. Dimensiunea bulgărilor variază în dimensiune cu diametrul de 0,3-3 mm, culoarea lor poate fi gri, gălbuie, verzuie. Pentru a pregăti microlamele native, bulgări individuale sunt transferați cu ace de disecție sau o buclă bacteriologică într-o picătură de alcool cu ​​glicerină sau într-o picătură de soluție de KOH 10%. Acoperiți cu o sticlă de acoperire, aplicați o ușoară presiune cu un ac de disecție și un microscop la măriri mici (1:80, 10x ocular și 8x obiectiv) și mari (1:400, 10x ocular și obiectiv 40x) microscopului.

Preparatele din ape de clătire, exudat, precum și bilă, urină, suc gastric și lichior se prepară din sedimentul nativ sau din sedimentul obținut prin centrifugare (la 1500 rpm timp de 5 minute). Sedimentul este transferat cu o buclă sau o pipetă Pasteur într-o picătură de soluție de KOH 10% pe o lamă de sticlă, acoperită cu o lamă și examinat la măriri mici și mari ale microscopului.

Pentru a pregăti preparatele colorate, bulgări sau picătură de sediment de examinat sunt distribuite uniform cu ace de disecție sau cu o lamă mai mică pe suprafața unei lame sterile până se obține un frotiu subțire. Frotiul rezultat este uscat în aer, fixat cu alcool metilic sau amestec Nikiforov (părți egale de alcool etilic 96% și eter) timp de 3-5 minute sau prin arderea lui de trei ori peste flacăra unui arzător. Frotiul fix este colorat folosind metoda Gram, metoda PAS și alb calcofluor. Proba colorată este microscopată folosind un sistem de microscop cu imersie (1:900, ocular 10x, obiectiv 90x).

Material de semănat

La examinarea oricărui material patologic pentru ciuperci filamentoase, acesta se inoculează pe mediu solid Sabouraud sau must cu adaos de penicilină și streptomicina (100-200 unități/ml mediu). Semănatul se efectuează în două repetări, ținând cont de condiții diferite de temperatură pentru creșterea ciupercilor filamentoase (+37 o C și +28 o C), întotdeauna în 3 puncte în centrul cupei. Timpul de incubație este de 4-5 zile.

Sputa (bulgări selectate) este transferată cu o ansă bacteriologică sau o pipetă Pasteur pe suprafața mediului Sabouraud sau a mustului. Locul de însămânțare este marcat cu un creion pe partea din spate a fundului vasului Petri. Vasele Petri însămânțate sunt plasate într-un termostat cu capacul în sus.

După o anumită perioadă de incubație, vasele însămânțate sunt examinate și dacă se detectează sporulare, se determină cultura fungică. Dacă nu există sporulare, ciuperca este subcultivată pe mediul diferențial Czapek pentru o identificare ulterioară.

Sedimentul apei de spălare a bronhiilor, cavităților maxilare, exudatului, urinei, sucului gastric (nativ sau după centrifugare) se preia cu pipeta și se inoculează într-un volum de 0,1 ml. Fecalele sunt diluate 1:10 (1 g de fecale și 9 ml de lichid) în mediu lichid Sabouraud sau soluție lichidă sterilă de clorură de sodiu izotonică, emulsionată, lăsată să se depună timp de 10 minute pentru a sedimenta particulele mari, iar supernatantul este inoculat într-un volum. de 0,1 ml. Secreția din canalul auditiv extern și din faringe, prelevată cu un tampon, se inoculează prin trecerea cu atenție a fiecărei părți a tamponului pe suprafața mediului nutritiv. Tampoanele din tampoane pot fi inoculate. Pentru a face acest lucru, tampoanele sunt plasate în 10 ml de mediu Sabouraud lichid sau must lichid cu mărgele de sticlă și emulsionate timp de 10 minute, inoculate cu 0,1 ml de tampon de spălare cu gazon (conform lui Leshchenko V.M., 1973) sau în trei puncte.

Solzii de piele și unghii sunt așezați pe suprafața mediului nutritiv, apăsându-i cu atenție.

Sedimentul de lichid cefalorahidian (centrifugă la 1500 rpm timp de 5 minute) se inoculează în două căni de mediu de 0,1 ml, iar restul se inoculează într-un mediu de îmbogățire (mediu lichid Sabouraud sau must lichid), turnat în tuburi de 5 ml. Vasele inoculate sunt incubate ca de obicei, iar tuburile inoculate pe mediul de îmbogățire sunt incubate la + 28 C timp de 10 zile.

Dacă există creștere a unei ciuperci filamentoase pe medii solide, cultura acesteia se determină din această inoculare; dacă nu există creștere pe agar Sabouraud sau agar must, ciuperca este studiată din mediul de îmbogățire. Pentru a face acest lucru, cultura fungică este subcultivată din nou pe mediul dens diferențial al lui Czapek și ulterior identificată.

Dintr-o bucată de țesut de organ (biopsie, autopsie), se face o amprentă pe suprafața unui mediu solid, partea tăiată a piesei fiind examinată în trei puncte. În același timp, bucăți de țesut se pun în 50 ml de mediu nutritiv lichid (Saburo, must).

Dacă se suspectează fungemia, sângele este examinat în două până la trei repetări. Se inoculează 5 sau 10 ml de sânge, respectiv, în 50 sau 100 ml de mediu lichid Sabouraud cu glucoză 2%. Culturile sunt cultivate la +37 C și +28 C timp de 10 zile. Prima inspecție a culturilor se efectuează după 5 zile, a doua - după 10 zile. În a cincea zi, puteți observa creșterea ciupercii filamentoase sub forma unui bulgăre de pâslă în partea de jos și a unui film de suprafață. Miceliul este subcultivat pe mediul diferențial Czapek pentru a determina genul și tipul de ciupercă. Dacă nu se observă creșterea fungică în ziua 5, culturile sunt păstrate până la 10 zile, iar dacă nu există creștere, rezultatele testelor sunt înregistrate ca negative.

La semănat în trei puncte, creșterea ciupercii în două și trei puncte este definită ca fiind semnificativă din punct de vedere diagnostic, la un moment dat - aleatorie. Dacă este necesar, este posibilă reînsămânțarea.

Identificarea culturilor de mucegai izolate

După izolarea culturii, ciupercile filamentoase sunt subcultivate pe mediul diferențial Czapek pentru determinarea generică și, dacă este posibil, a speciilor.

În practica laboratoarelor de diagnostic, de regulă, ele folosesc criterii de identificare culturală și morfologică: evaluează modelul de creștere al unei culturi fungice pe medii de agar (diagnostic cultural, macromorfologie) și micromorfologia ciupercii.

În cazurile dificile, se folosesc metode suplimentare de diagnostic (studiul activității enzimatice, caracteristicile de temperatură ale creșterii unor mucegaiuri).

Conceptul de macromorfologie (caracteristici culturale) include structura coloniei (pufoasă, pâslă, catifelată, păianjen, lânoasă, zdrențuită, făinoasă etc.), suprafața (plată, pliată, denivelată, în formă de cupolă, în formă de miez, zonală). , etc.), pigmentarea coloniei fungice și a substratului (diverse nuanțe de verde, albastru, violet, negru, gri etc.), prezența exudatului pe suprafața coloniei.

Micromorfologia unei ciuperci dintr-o cultură este studiată folosind preparate care, în funcție de genul ciupercii, se prepară după cum urmează: o picătură de lichid pentru prepararea preparatelor (părți egale de alcool, glicerină și apă) se aplică pe un pahar. tobogan; se pune în ea o bucată de miceliu, tăiată cu o spatulă micologică din colonie sub formă de triunghi, captând părțile centrale și periferice, iar bucata tăiată se îndreaptă cu două ace de disecție cu grijă pentru a evita formarea bulelor de aer. . În unele cazuri (mucor și rhizopus), la prepararea medicamentului, miceliul este întins pe o lamă de sticlă uscată, se aplică o picătură de lichid și se acoperă cu o lamela. Preparatele sunt privite la microscop la măriri mici și mari. Se studiază substratul și miceliul aerian, se notează prezența sau absența septelor (septurilor) și se acordă atenție naturii sporulării: conidiofori cu conidii și sporangi cu sporangiespori.

Conidioforii variază ca structură: de la simple hife purtătoare de spori la formațiuni ramificate asemănătoare arborilor. Conidioforii sunt localizați individual sau în grupuri; diferă semnificativ de hifele vegetative ale miceliului, incolore sau colorate, ascendente, erecte, în cascadă, târâtoare. Ele pot consta dintr-o celulă și dintr-un număr mare de celule de diferite forme și dimensiuni, fiecare având propriul nume. De exemplu, în genul Aspergillus, conidioforul este format din următoarele celule: tulpină, tumefiere veziculoasă, sterigmate, lanțuri de conidii. În genul Penicillium, conidioforul are forma unor perii simple sau complexe, formate tot din diferite celule: ramuri de ramie, metule, fialide, lanțuri de conidii.

Mucegaiurile Mucor și Rhizopus sporulează sub formă de sporangi cu endosporangiospori. Sporangiul este situat la capătul sporangioforului. Sporangiile sunt sferice sau în formă de pară, majoritatea cu o coloană specială, care este o continuare a sporangioforului din interiorul sporangiului. Sporangiosporii sunt rotunzi, incolori sau colorați.

Conidiile (sporii) ciupercilor de mucegai sunt polimorfe (cilindrice, sferice, ovale, elipsoidale, ovoide, pară, maciucă), unice și multicelulare, variază ca mărime și culoare, unice, în lanțuri sau adunate în capete și dispuse. în clustere. Suprafața conidiilor poate fi netedă, aspră, spinoasă, neruoasă, înțesată etc.

Examinarea microscopică și cultura materialului patologic pentru micoze cauzate de ciuperci dimorfe

Cu aceste micoze, este necesar să se țină cont de dimorfismul agenților patogeni.

Materialul patologic pentru infecțiile micotice patogene primare (coccidioidoză, histoplasmoză, paracoccidioidoză, blastomicoză nord-americană), precum și cromomicoza, sporotricoza și micetoamele pot fi puroi, spută, răzuire din leziuni ulcerative de pe piele și mucoase, sânge, mucoase, sânge, mucoase. piese biopsiate din leziuni înfrângeri.

Dificultatea de a identifica agenții cauzali ai acestor micoze este că, datorită dimorfismului lor, microscopia materialului patologic va dezvălui forme tisulare ale ciupercii, cel mai adesea celule de drojdie de diverse morfologii sau sferule cu endospori, complet diferite de elementele aceleiași. ciupercă extrasă din cultura sa crescută la o temperatură de +28 - +30 o C pe agave Sabouraud obișnuite, cu o valoare a pH-ului mai apropiată de acidă. Totuși, trebuie avut în vedere că la unele ciuperci dimorfe este posibil să se obțină în cultură o fază de drojdie de creștere fungică, care amintește adesea de forma sa tisulară, dar când este crescută în medii bogate în proteine ​​cu reacție ușor alcalină (pH). = 7,6 - 7,8 ), la o temperatură de 37 o C.

Cele de mai sus se aplică ciupercilor: Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitisȘi Sporothrix schenckii.

Diagnosticul de laborator al micozelor cauzate de ciupercile menționate aici se bazează pe depistarea formelor tisulare în material patologic prin microscopie, izolarea culturii de patogen și identificarea acesteia prin caracteristici culturale și morfologice.

Examinarea microscopică se efectuează în preparate necolorate pe o lamă de sticlă într-o picătură de soluție 10% de alcali caustic sau un amestec de alcool și glicerină în volume egale sau în frotiuri colorate (Tabelul 3).

Inocularea materialului patologic se efectuează pe mediile nutritive menționate mai sus în vase Petri folosind o spatulă bacteriologică conform metodei general acceptate.

2.5. Examinarea microscopică și cultura materialului patologic pentru dermatomicoză (keratomicoză și dermatofitoză).

Obiectul studiului îl constituie micozele superficiale, care afectează doar stratul de keratină al epidermei, și dermatofitele, care afectează pielea și anexele acesteia (păr, unghii), ai căror agenți cauzali sunt ciupercile înrudite cu genul. Trichophyton, Microsporum și Epidermophyton.

Cercetarea micologică de laborator include aceleași etape ca și pentru alte micoze: microscopia materialului și obținerea unei culturi pure la însămânțarea acestuia. Colectarea corectă a materialului influențează foarte mult succesul microscopiei și achiziționarea culturii.

Materialul patologic este examinat cât mai curând posibil după colectare. Mai întâi este împărțit în trei părți: pentru microscopie, cultivare și reexaminare. Microscopia materialului patologic este cea mai simplă și rapidă metodă de stabilire a prezenței unei ciuperci în țesuturi. Materialul zdrobit se pune în mijlocul unei lame de sticlă într-o picătură de soluție de KOH 10-20% și se încălzește ușor peste flacăra unei lămpi cu alcool până se obține o margine albicioasă de-a lungul marginii picăturii, acoperită cu o sticlă de acoperire. si se lasa 5-10 minute (par, solzi de piele) si 30 - 40 minute.(unghie) pentru macerare si limpezire; materialul poate fi prelucrat fără încălzire; pentru aceasta, preparatul este lăsat într-o soluție de KOH 20% timp de 30-60 de minute.

Microscopie mai întâi sub microscop cu mărire mică, apoi cu mărire mare.

Cultura este necesară pentru izolarea și identificarea agentului patogen. Materialul inoculat se zdrobește pe cât posibil și se inoculează în cantități minime pe agar înclinat în eprubete în 2-3 puncte la o distanță de 1-2 cm Cel puțin 2-3 eprubete (păr) și 4-5 eprubete (solzi de piele și unghii) se inoculează cu materialul dintr-o probă. Pentru izolarea primară a dermatofitelor, cel mai bine este să folosiți mediu standard de agar Sabouraud cu 2-4% glucoză sau agar must care conține antibiotice antibacteriene (penicilină 50 μg/ml + streptomicina 50 μg/ml sau biomicină 200 unități/ml) și anti- mucegai antibiotic actidionă (cicloheximidă) 0,1 - 0,5 mg/ml. Actidiona nu afectează creșterea dermatofitelor și inhibă multe mucegaiuri, precum și speciile de Candida și Cryptococcus.

Culturile sunt incubate la 22-30 o C (cel mai bine 28 o C). Apariția creșterii dermatofitelor se observă din a 4-a până în a 12-a zi de incubație la punctele de însămânțare de-a lungul marginilor materialului aplicat. Dacă nu există o creștere în 30 de zile, rezultatele culturii sunt considerate negative. În condiții optime, culturile primare ale multor dermatofite pot fi identificate la 7-10 zile de la însămânțare, dar culturile trebuie monitorizate timp de 20-30 de zile. Culturile primare cresc relativ lent și atunci când se utilizează medii fără antibiotice, dermatofitele pot fi suprimate de bacterii sau mucegaiuri cu creștere mai rapidă. Când apare creșterea în însămânțarea primară, este necesar să se cerne de la marginea coloniei pe un mediu diferențial proaspăt pentru a obține o cultură pură, care va servi drept material pentru identificarea dermatofitului izolat.

2.6. Metode serologice de diagnosticare a micozelor

Semnificaţia metodelor serologice constă în principal în următoarele: identificarea pacienţilor cu micoze invazive probabile; confirmarea naturii micotice a bolilor alergice; examinarea screening a grupurilor cu risc de a dezvolta micoze.

Rezultate fals pozitive ale testelor serologice sunt posibile cu micocarrie și la persoanele sănătoase sensibilizate cu antigeni fungici; testele negative pot apărea în imunodeficiență chiar și pe fondul micozei invazive în curs.

Metode de rutină general acceptate pentru diagnosticul serologic al micozelor
descris suficient de detaliat / P.N. Kashkin, V.V. Lisin. "Practic
ghid de micologie medicală”, Medicină, 1983/. Cu toate acestea, în ultima vreme
decenii au existat schimbări notabile în abordările metodologice /Elinov N.P.,
2001/. Au fost propuse proceduri originale pentru detectarea antigenelor și anticorpilor
unii metaboliți ai celulelor fungice; au fost create teste de diagnosticare speciale
truse („balenele”), de exemplu Pastorex ® Candida, pentru determinarea în
reacții de „aglutinare cu latex” ale epitopilor oligomanoze repetați ai antigenic
structuri/exprimate pe un număr mare de macromolecule
ciupercă; pentru determinarea antigenului Candida manan, de ex.
serul unui pacient cu candidemie, puteți folosi trusa Platelia ® Candida.
Folosind primul set, pragul pentru determinarea structurilor antigenice este de 2,5 ng/ml, folosind al doilea împreună cu metoda _____________, pragul pentru determinarea - 0,5 ng/ml.

Agenții cauzali ai micozelor identificați cel mai adesea în timpul testării de laborator a diferitelor materiale clinice

Sânge

• Candida
• Criptococul
• Agenții patogeni miceliali sunt rar detectați în analizele de sânge, cu excepția Fusarium

Fluid cerebrospinal

• Candida
• Criptococul

Secreții de puroi din abcese, ulcere etc.

• Candida
• Criptococul
• Fusarium
• Aspergillus
• Sporotrix

Secreții respiratorii (sputa, lichid BAL, biopsie cu perie bronșică, aspirat transtraheal)

• Aspergillus
• Candida
• Criptococul
• Mucor
• Scedosporium
• Rhizopus
• Sporotrix

Descărcare, material de biopsie din răni

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium
• Rhizopus

Alte biosubstrate

• Candida
• Criptococul

Material din torace și din cavitatea abdominală; lichid sinovial

• Aspergillus
• Candida
• Fusarium

Corp vitros

• Candida
• Aspergillus

IV. Criterii de diagnosticare a micozelor sistemice: parametri clinici și de laborator ai diagnosticului final

Esofagită

• prezența modificărilor caracteristice în timpul esofagoscopiei
• identificarea ciupercii în timpul cultivării materialului de biopsie
• prezența pseudomiceliului în frotiurile colorate sau semne de creștere a fungilor invazive în materialul de biopsie

Pneumonie

Pneumonie din cauza Candida spp.

• modificări infiltrative acute pe o radiografie toracică, care coincid cu manifestările clinice ale pneumoniei fungice
• Identificare Candida spp. Când se cultivă material din tractul respirator inferior, obținut din biopsie transtoracică, biopsie transbronșică, rezultate ale biopsiei pulmonare sau biopsie ghidată toracoscopic
• identificarea pseudomiceliului în materialul de biopsie colorat adecvat

Pneumonie din cauza Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiospermum

• identificarea elementelor fungice în țesuturi și cultura pozitivă
• infiltrate persistente sau progresive în plămâni, rezistente la antibioticoterapie
• detectarea unuia dintre acești agenți patogeni prin sputa sau cultura BAL
• semne clinice de pneumonie (tuse, dificultăți de respirație, durere „pleurală”, respirație șuierătoare, zgomot de frecare pleurală)
• modificări caracteristice la radiografia sau CT a plămânilor:

Modificări subpleurale infiltrative, nodulare, unghiulare acute sau cavernoase

Simptome de „halo” la scanarea CT a plămânilor

Progresia modificărilor infiltrative cu formarea de cavități și apariția simptomului „seceră”.

• absența altor agenți patogeni la cultivarea lichidului BAL care ar putea provoca modificările prezentate în plămâni

Sinuzita

• semnele clinice și radiologice ale sinuzitei acute
• semne microscopice și culturale de micoză la examinarea materialului aspirat sau de biopsie

Infecții ale tractului urinar

• detectarea >1x10 CFU/ml cu culturi repetate de urină colectată corespunzător

Fungemia

• Detectarea unică a ciupercilor în timpul culturii de sânge în timpul unei perioade de creștere a temperaturii corpului > 38 o C

Micoză acută diseminată

• Fungemia în combinație cu semne culturale sau histologice de afectare a țesuturilor profunde (inclusiv țesutul subcutanat) sau identificarea agentului patogen din două biosubstrate în mod normal sterile

Endoftalmita

• semne oftalmologice ale endoftalmitei
• identificarea agentului patogen din ochi, sânge sau alte focare de diseminare

Abces sau osteomielita

• semne radiografice/CT/RMN ale osteomielitei
• identificarea agentului patogen în materialul de aspirat sau de biopsie

Meningita

• determinarea modificărilor LCR care confirmă prezența inflamației și detectarea ciupercilor prin microscopie LCR
• detectarea ciupercilor prin cultura de LCR sau determinarea antigenelor Cr.neoformans, Candida si Aspergillusîn LCR

Candidoză cronică diseminată (hepatolienală).

Posibil

• febră persistentă sau intermitentă după sfârșitul unei perioade de neutropenie în combinație cu semne caracteristice de afectare a ficatului, splinei sau rinichilor

Dovedit

• cele de mai sus în combinație cu însămânțarea Candida spp. din sânge înainte de apariția semnelor de afectare a ficatului, splinei sau rinichilor sau cu semne culturale, histologice de candidoză în materialul de biopsie din leziuni

V. CAUZELE INFECTIILOR FUNGICE

Există diferite principii pentru clasificarea infecțiilor fungice și a agenților lor cauzali. Ni se pare că este practic cel mai simplu și mai convenabil să împărțim ciupercile patogene în 5 grupuri principale:

1. Agenții patogeni ai micozelor superficiale;

2. Agenții patogeni ai dermatomicozei;

3. Agenții patogeni ai micozelor subcutanate;

4. Agenți cauzatori ai micozelor profunde (micromicete patogene primare, agenți cauzali ai infecțiilor oportuniste).

5. Agenții patogeni ai pseudomicozei.

* Trebuie subliniat faptul că agenții patogeni din primele trei grupe la pacienții imunodeprimați pot provoca fungemie și leziuni de organe multiple.

În următoarele secțiuni, vom oferi o descriere a agenților cauzali ai micozelor conform unei singure scheme: numele acestuia conform nomenclaturii acceptate, o listă de sinonime, caracteristicile macroscopice ale coloniilor pe medii nutritive și caracteristicile microscopice ale elementelor fungice vizibile sub un microscop în preparate native și din colonii. Sunt furnizate și date despre distribuția ciupercilor în natură și sunt enumerate bolile pe care le provoacă.

Diagnosticul de laborator al bolilor fungice se bazează pe detectarea ciupercii și determinarea genului și tipului acesteia. Se compune din două etape principale: studii microscopice și studii culturale.

Examinare microscopica

Examenul microscopic este prima și importantă verigă în confirmarea diagnosticului preliminar.

Succesul examinării microscopice depinde în mare măsură de colectarea corectă a materialului patologic. Pentru examinarea microscopică, este necesar să selectați părul care are semne vizibile de leziuni fungice (mat, rupt, îngroșat). Părul care s-a schimbat în aspect este îndepărtat cu penseta de epilare. Pentru a detecta firele de păr afectate unice cu microsporie, puteți folosi o lampă fluorescentă cu filtru Wood (strălucire verzuie-albastru).

Atunci când selectați părul afectat, pot fi utilizate o serie de caracteristici suplimentare. Părul afectat de microsporuri are o teacă cenușie de spori localizați extern la bază. În cazul tricofitozei cronice, firele de păr scurte, cenușii, afectate, curbate sub formă de „virgule” și „semne de întrebare”, precum și „puncte negre” (părul afectat îngroșat și negru rupt la gura foliculului) se găsesc în grosimea solzilor. În caz de tricofitoză infiltrativ-supurativă, pentru examinarea microscopică, pe lângă părul afectat, se pot folosi puroi și cruste din leziune.

Din leziunile cutanate cu microsporie, tricofitoză și micoză a pliurilor inghinale, solzii trebuie îndepărtați din zona periferică a leziunii, unde ciuperca se găsește în cantități mai mari. Părul vellus este răzuit împreună cu fulgii de piele.

La examinarea părului afectat cu microsporie și tricofitoză, se acordă atenție locației sporilor (în interiorul sau în afara părului) și mărimea acestora. Aceste date fac posibilă în unele cazuri clarificarea diagnosticului, a formei clinice de micoză și a epidemiologiei.

În forma interdigitală de micoză a picioarelor, solzii de piele și resturile stratului cornos macerat sunt utilizate pentru examinarea microscopică. Zona unghiei care trebuie luată pentru examinare microscopică depinde de forma onicomicozei. Cu o formă superficială, este necesar să se răzuie suprafața plăcii de unghii.

În cea mai comună formă distal-laterală, se folosește o răzuire din patul unghial, de sub placă (hipercheratoză subunguală) cu o parte din placa unghială tăiată alterată. Pentru forma subunguală proximală, se folosesc metode speciale de colectare a materialului (forarea ferestrelor cu ajutorul burghiului, biopsia unghiilor).

În forma scuamoasă-hiperkeratotică de micoză a picioarelor, solzii sunt răzuiti de pe suprafața plantară. În forma dishidrotică de micoză a picioarelor, capacele veziculelor sunt tăiate pentru examinare.

Tehnica de pregătire a materialului pentru examinarea microscopică a părului . O picătură mică de 30% KOH este aplicată pe o lamă de sticlă și părul afectat este plasat în ea cu un ac de disecție. Picătura cu părul este ușor încălzită peste flacăra unei lămpi cu alcool până când vaporii apar deasupra suprafeței lichidului sau o margine de cristale cade de-a lungul marginii picăturii de alcali. După acoperirea cu o lametă, excesul de alcali este îndepărtat cu hârtie de filtru. Medicamentul este examinat mai întâi la microscop mic și apoi cu mărire mare (x 400).

Solzi de piele și unghii . Solzii subțiri de unghii pentru examinarea microscopică sunt plasați pe o lamă de sticlă într-o picătură de 30% KOH și încălziți, adăugând alcali pe măsură ce se evaporă. Eșantionul răcit, necolorat, este acoperit cu o lamă și examinat la microscop.

Pielea groasă și solzii de unghii sunt plasați într-un tub de centrifugă și umpluți cu câteva picături de KOH 30%. Eprubeta se încălzește până la fierbere și se lasă timp de 20-30 de minute. O parte din materialul înmuiat este transferată într-o lamă de sticlă cu o tijă de sticlă, apăsând cu un chibrit până când apare un „nor”, ​​după care este examinat la microscop.

Puroi . O picătură de puroi se amestecă cu o picătură de alcool și jumătate și jumătate de glicerină și se examinează într-un preparat nativ.

Diagnosticul cultural

Diagnosticele culturale sunt efectuate pentru a clarifica definitiv diagnosticul și a clarifica epidemiologia. Constă în obținerea unei culturi a ciupercii urmată de examinare microscopică.

Părul afectat, solzii (piele și unghii), veziculele sau puroiul sunt inoculate pe un mediu nutritiv artificial. Prin apariția unor colonii gigantice pe vasele Petri, se poate face o idee despre genul agentului patogen (Microsporum, Trichophyton, Epidermophyton), tipul acestuia (L. canis sau ferrugineum, T. violaceum, verrucosum sau gypseum). Clarificarea finală a genului și speciei ciupercii este posibilă numai pe baza unei examinări microscopice a culturii rezultate.

Diagnosticul de laborator al candidozei superficiale

Pentru testarea de laborator pentru ciuperci asemănătoare drojdiei, este necesar material proaspăt. Pentru examenul microscopic, în funcție de manifestările clinice și de localizarea leziunilor, fulgi de piele, răzuire de pe unghii, o picătură de puroi de sub pliul unghiei, depuneri albicioase din zonele afectate ale mucoasei bucale și ale organelor genitale externe, pereții vaginali, se pot lua răzuire de pe membrana mucoasă.membrane ale uretrei, precum și spălări de la marginea roșie a buzelor, zonele afectate ale pielii de pliuri mari și mici.

În funcție de localizarea leziunii și de natura manifestărilor clinice, materialul pentru cercetare este luat cu un tampon de vată, bisturiu, buclă etc. Solzii de piele și unghii, resturi de epidermă și răzuire ale membranei mucoase sunt pre- tratat cu 30% KOH. Materialul patologic este examinat în preparate necolorate sau colorate.

În primul caz, materialul este amestecat cu o cantitate egală de alcool și glicerină. Când sunt colorate cu Gram, celulele de drojdie și pseudomiceliul apar violet închis, de Ziehl-Neelsen - albastru și de Romanovsky-Giemsa - roz-violet. În acest caz, o trăsătură distinctivă a celulei de drojdie este înmugurirea - descoperirea unei figuri de „clepsidră”. Preluarea materialului din membrana mucoasă a cavității bucale, organele genitale, de pe pielea marginii roșii a buzelor, de la colțurile gurii, de pe pielea pliurilor mari și mici se efectuează cu un tampon steril. După preluarea materialului, tamponul se pune într-un alt tub steril cu must lichid. Eprubeta cu tamponul este trimisă la laboratorul de microbiologie. Izolarea unei culturi pure de ciuperci asemănătoare drojdiei din genul Candida se realizează conform metodelor microbiologice general acceptate.

Potrivit oamenilor de știință, 70% din populația lumii are simptome de micoză a picioarelor. Această boală afectează pliurile interdigitale și pielea de pe tălpi. Cauza bolii este o ciupercă care a fost găsită inițial doar în zone limitate din Asia de Sud-Est și Africa. Primul Război Mondial, care a provocat migrația în masă a oamenilor și deteriorarea condițiilor sanitare, a dus la răspândirea bolii în întreaga lume.

Ce cauzează micoza picioarelor

Principalul agent cauzal al bolii este Trichophyton rubrum. Infecția poate fi cauzată de T. mentagrophytes și Epidermophyton floccosum. Ciupercile din genul Candida și microorganismele de mucegai pot deveni microbi patogeni mult mai rar.

Cei mai importanți factori de risc pentru boală:

• Diabet;
• stare de imunodeficiență (SIDA);
• picioare plate;
• ateroscleroza arterelor periferice;
• varice ale extremităților inferioare.

Condiții externe care favorizează dezvoltarea infecției:

• încălțăminte închisă neabsorbantă;
• leziuni ale picioarelor (calusuri, abraziuni);
• practicând sporturi.

Simptomele piciorului de atlet apar cel mai adesea la bărbații adulți. Copiii se îmbolnăvesc rar.

Simptomele micozei picioarelor

Pe măsură ce boala se dezvoltă, apar peeling și piele uscată, mâncărime și arsură, mai ales în spațiile dintre degete, și apariția de crăpături dureroase sub degete. Uneori, primele simptome ale micozei piciorului sunt vezicule care izbucnesc odată cu formarea de eroziuni. Adesea boala apare într-o formă ștearsă, manifestată doar prin decojirea ușoară, care amintește de făină, în pliurile dintre degete.

Există 4 forme clinice ale bolii.

Varianta interdigitală sau intertriginoasă este cea mai comună. Pielea dintre degete devine roșie, se crapă, stratul de suprafață devine umed și se decojește. Aceste semne se extind până la talpă și sunt însoțite de mâncărimi severe și arsuri. Inflamația bacteriană este adesea asociată.

Varianta scuamos-hiperkeratotică este asociată cu îngroșarea și crăparea severă a pielii. Talpa devine roșie și se decojește. În zona călcâiului apar crăpături profunde și dureroase; mâncărimea este de obicei necaracteristică. Aceasta este adesea o leziune bilaterală și este numită și „picior de mocasin”.

Varianta dishidrotică este însoțită de apariția mai multor vezicule mici, dureroase, mâncărime. Se contopesc unul cu celălalt, formând bule mari. Capacele veziculelor au izbucnit, dezvăluind o suprafață strălucitoare, vulnerabilă, dureroasă - eroziune. Manifestările externe seamănă cu eczema.

Inflamația microbiană este adesea asociată cu ganglionii limfatici inghinali măriți, febră, dureri la nivelul piciorului, greață, dureri de cap și alte semne de intoxicație. Cu forma dishidrotică, apare adesea o alergie la ciuperci - eczemă micotică. Este însoțită de erupții pe zone ale corpului care nu sunt infectate cu ciuperca, de exemplu, pe mâini.

Versiunea ștearsă trece de obicei neobservată. Este însoțită de o ușoară exfoliere a pielii dintre degetele mari și arătător și/sau inelar și mici de pe picior. Nu există mâncărime.

Semne de micoză a picioarelor

Diferite tipuri de micoze ale picioarelor pot fi boli independente sau pot apărea ca parte a unei infecții fungice generale a corpului. Uneori, semnul „două picioare - o mână” apare cu implicarea acestor organe. Poate apărea onicomicoza, o distrugere fungică a unghiei. Uneori, pliurile inghinale sunt afectate în același timp.

Principalele simptome și tratamentul micozei piciorului sunt prezentate în fotografie:

Peeling pielea

Piele uscată și crăpată

Bulele și eroziunile

Diagnosticare

Un dermatolog experimentat poate recunoaște diferitele tipuri de micoză ale picioarelor în timpul primei examinări. Cu toate acestea, examinarea microscopică este necesară pentru a confirma diagnosticul. Pentru aceasta, se folosesc solzi din leziune, se răzuiesc cu o spatulă și se tratează cu o soluție alcalină. Materialul rezultat este examinat la microscop și sunt detectați agenți patogeni.

Microscopia directă este rapidă, ieftină și ușor de efectuat, dar nu poate determina ce tip de ciupercă cauzează boala. Prin urmare, materialul este inoculat pe un mediu nutritiv, urmat de o examinare culturală a materialului rezultat. Cu toate acestea, este posibil să se obțină o cultură a ciupercii după detectarea acesteia la microscop numai în 20-6% din cazuri.

Tipuri de tratament pentru micoza picioarelor

Medicamentele pentru tratamentul bolilor fungice trebuie prescrise de un dermatolog. De obicei, tratamentul micozei piciorului se efectuează prin mijloace externe.

Unul dintre medicamentele eficiente pentru această boală este clotrimazolul. În magazinul nostru îl puteți cumpăra la preț redus. Un medicament sub formă de loțiune, Clotrimazol pentru unghii și piele, suprimă proliferarea ciupercilor în grosimea stratului cornos al epiteliului. Dacă pliurile interdigitale sunt afectate, loțiunea se aplică zilnic pe pielea curată și uscată a picioarelor timp de o săptămână, mai mult dacă este necesar.

În caz de keratinizare severă și crăpare a pielii, este mai întâi necesară îndepărtarea depozitelor de piele moartă. Acest lucru necesită utilizarea medicamentelor de exfoliere. De exemplu, se prescriu unguent salicilic, creme cu acid lactic sau uree. După îndepărtarea depunerilor cornoase, loțiunea se folosește de 1 – 2 ori pe zi.

În varianta dishidrotică, primul pas este reducerea plânsului. Pentru aceasta se folosesc lotiuni cu tanin sau acid boric. În cazurile severe, la tratament se adaugă glucocorticoizi. Apoi aplicați loțiunea de Clotrimazol conform regimului obișnuit.

Dacă piciorul este uzat, tratați-l cu loțiune o dată pe zi timp de 7-10 zile, dar durata cursului este individuală și determinată de medic.

Terapia sistemică

Piciorul de atlet pe termen lung sau recurent poate necesita medicamente antifungice orale. Acestea trec din tractul gastrointestinal în sânge și apoi în piele, unde distrug ciupercile. Sunt utilizate trei medicamente principale:

• fluconazol;
• itraconazol;
• terbinafină

Durata de utilizare a acestor medicamente este de cel puțin o lună. Pretul lor este destul de mare. Prin urmare, prevenirea micozei piciorului este întotdeauna mai ușoară și mai profitabilă decât vindecarea acestuia.

Medicamentele sistemice sunt prescrise mai ales dacă ciuperca a afectat nu numai pielea, ci și unghiile. În acest caz, medicamentele se acumulează în partea în creștere a plăcii unghiei, iar o unghie sănătoasă crește treptat înapoi. Pentru a îmbunătăți efectul, unghia poate fi îndepărtată complet chirurgical, după care este restaurată fără ciuperci.

O combinație de îndepărtare a unghiilor și terapie antifungică sistemică și locală este adesea necesară la pacienții vârstnici. La acest grup de pacienți, unghiile cresc adesea lent, circulația sângelui în picioare este afectată, astfel încât este necesară o doză mare de medicamente și un curs lung de tratament pentru a obține un efect.

Tratament cu remedii populare

Folosirea numai a rețetelor de medicină tradițională nu va ajuta să scăpați de ciupercă. Cu toate acestea, o astfel de adăugare la terapia convențională scurtează cursul tratamentului și accelerează recuperarea.

Este util să faci băi calde de picioare în fiecare seară, timp de 10 minute, apoi mângâiați bine picioarele cu un prosop, mai ales între degete, și aplicați loțiune medicinală Clotrimazol pentru unghii și piele. Ingrediente de baie utile care ameliorează inflamația și reduc mâncărimea:

• ierburi celandine și sunătoare;
• rădăcini de brusture;
• iarba de pelin;
• frunze de eucalipt;
• ace de brad;
• zat proaspăt din cafea măcinată preparată;
• sare;
• un amestec de săpun de rufe ras, bicarbonat de sodiu, permanganat de potasiu și pudră de muștar.

Zonele afectate pot fi unse cu gudron de mesteacăn sau cu un unguent auto-preparat din 100 de grame de unt amestecat cu un cap de usturoi zdrobit. Propolisul, care poate fi bandajat pe unghiile dureroase, este de asemenea util.

Este util să faci comprese din remedii naturiste. În primul rând, sunt lăsate timp de 1 până la 2 ore, iar dacă sunt tolerate, peste noapte. Se folosesc următoarele ingrediente:

• pulpă de dovleac;
• semințe de ridiche neagră zdrobite;
• menta, macinata cu sare;
• frunze de brusture sau rowan, ușor înmuiate cu sucitorul.

Este eficient să lubrifiați zonele afectate cu sucuri ale unor plante și alte remedii naturale:

• soluție alcoolică de propolis;
• suc de ceapă sau usturoi;
• suc de celandină;
• ulei de arbore de ceai.

Prevenirea bolilor

Pentru a evita micoza sau a preveni recidiva acesteia, este nevoie de prevenire simplă, dar constantă:

• vara, purtați pantofi respirabili din material natural;
• când vizitați piscine, băi, dușuri publice, purtați papuci de cauciuc individuali;
• nu purtați pantofii altcuiva, de exemplu, când vizitați;
• folosiți doar echipamentul propriu de igienă - foarfece, piatră ponce, pilă de unghii.

Pentru a evita reinfectarea, branțurile și suprafețele interioare ale pantofilor trebuie tratate în mod regulat cu dezinfectanți. O rețetă populară binecunoscută este o soluție de esență de oțet, dar are un miros ascuțit, neplăcut.

Medicii recomandă utilizarea medicamentului Mikospray, care are nu numai un efect antifungic, ci și un efect antibacterian. Mycospray este excelent nu numai pentru tratarea pantofilor, ci și pentru aplicarea pe picioare înainte de a vizita locuri publice pentru a proteja picioarele.

Locuitorii din Moscova și regiunile pot achiziționa medicamente pentru tratamentul micozei piciorului și pentru prevenirea acesteia din magazinul nostru online. Au dovedit eficacitate și siguranță. Utilizarea lor este recomandată tuturor persoanelor care nu doresc să se infecteze cu ciuperca piciorului sau să scape rapid de ea.

Diagnosticul de precizie al micozelor invazive nu este usor. Acest lucru se explică nu numai prin dificultăți în obținerea unei culturi de ciuperci, ci și în interpretarea rezultatelor cercetării, întrucât ciupercile, atât drojdii, cât și filamentoase, pot coloniza mucoasele și contamina probele studiate. În acest sens, diagnosticul micozelor invazive se bazează pe o abordare integrată, incluzând nu numai rezultatele studiilor micologice (culturale) și serologice (determinarea antigenului fungic), ci și simptomele clinice ale infecției fungice, date din metodele auxiliare de cercetare ( computer sau imagistica prin rezonanță magnetică, ecografie).

Grupul de Cooperare European-American pentru studiul micozelor invazive Criteriile de diagnosticare a micozelor invazive au fost dezvoltate la pacienții imunocompromiși. Acestea au fost prezentate în 2001 la Conferința internațională privind antimicrobienele și chimioterapie (ICAAC, Chicago), iar în 2002 în tipărire. Au fost definite criterii pentru micoza invazivă dovedită, probabilă și posibilă, care sunt recomandate pentru utilizare în studii clinice și epidemiologice

Micoză invazivă dovedită cauzată de ciuperci filamentoase: detectarea miceliului fungic în biopsii sau aspirate în timpul examinării histologice sau citologice sau izolarea unei culturi din probe obținute în condiții aseptice dintr-o leziune normal sterilă, care, conform rezultatelor studiilor clinice și radiologice, este asociată cu infecția, cu cu excepția studiilor urinei și mucoaselor.

Micoză invazivă dovedită cauzată de ciuperci de drojdie: detectarea celulelor de drojdie (ciupercile din genul Candida pot forma pseudomiceliu sau miceliu adevărat) în biopsii sau aspirate, cu excepția probelor din membranele mucoase, sau izolarea culturii din probele obținute în condiții aseptice dintr-o leziune normal sterilă, care conform la rezultatele examinării clinice și radiologice asociate cu infecția, cu excepția urinei, a probelor din sinusuri și membranele mucoase, sau la detectarea prin microscopie și colorarea specifică (într-o picătură de cerneală indiană, colorație de mucicarmină) a celulelor de drojdie sau a unui antigen pozitiv al Cryptococcus spp. în lichidul cefalorahidian.

Fungemie cauzată de ciuperci filamentoase: izolarea hemoculturii ciupercilor, cu excepția Aspergillus spp. și Penicillium spp., inclusiv Penicillium marneffei, în combinație cu simptomele clinice ale unui proces infecțios compatibil cu agentul patogen izolat.

Fungemie cauzată de ciuperci de drojdie: izolarea hemoculturii Candida sau a altor ciuperci de drojdie de la pacientii cu semne clinice de infectie asociate cu acest agent patogen.

Complex de studii de diagnostic pentru micoze invazive

Biomaterial în studiu	Indicații, medii utilizate, semnificație
Sânge	Indicatii: febră persistentă (4-5 zile sau mai mult) în timpul terapiei cu antibiotice cu spectru larg; al doilea „val” de febră în timpul terapiei cu antibiotice Colectarea sângelui dintr-o venă în flacoane pentru bacterii aerobe* sau într-un mediu selectiv pentru ciuperci, repetat (de 2-3 ori pe zi cu un interval de 1 oră) Semnificație diagnostică: izolarea ciupercilor de drojdie, interpretare atentă la izolarea ciupercilor filamentoase, cu excepția Fusarium spp.
Cateter venos	Indicatii: izolarea ciupercilor de drojdie din sânge Cateterul venos central sau periferic este îndepărtat în toate cazurile de izolare a drojdiei din sânge Pentru cercetarea micologică se folosește o secțiune distală a cateterului îndepărtată aseptic de 5-6 cm lungime Studiul se realizează semicantitativ (metoda Maki) sau cantitativă pe mediul lui Sabouraud. Semnificație diagnostică: izolarea fungilor de drojdie într-un studiu semicantitativ de 15 CFU sau mai mult, într-un studiu cantitativ - 103 CFU/ml sau mai mult pentru a confirma diagnosticul de infecție asociată cateterului sau infecție a cateterului
Secreții ale căilor respiratorii superioare, spută, spălături din trahee, bronhii, lichid de lavaj bronhoalveolar	Indicatii: suspiciunea de micoze cauzate de ciuperci filamentoase sau Cryptococcus neoformans; febră prelungită în timpul terapiei cu antibiotice cu spectru larg și neutropenie Microscopia probelor cu alb calcofluor (detecția miceliului sau pseudomiceliului); semănat pe mediul lui Sabouraud; determinarea antigenului Aspergillus în lichidul de lavaj bronhoalveolar în prezența leziunilor pulmonare caracteristice aspergilozei invazive Semnificație diagnostică: izolarea ciupercilor filamentoase sau Cryptococcus neoformans
Fluid cerebrospinal	Indicatii: simptome de meningită; detectarea unei leziuni la nivelul creierului folosind tomografia computerizată sau imagistica prin rezonanță magnetică; simptome „creierului” datorate febrei și neutropeniei Microscopie cu alb calcofluor, într-o picătură de cerneală; determinarea antigenului Aspergillus, Cryptococcus; semănat în Sabouraud miercuri Semnificație diagnostică: detectarea ciupercilor, atât drojdii, cât și filamentoase; antigen pozitiv
Biopsii, aspirate, lichid peritoneal, lichid pleural	Indicatii: semne clinice și/sau radiologice de micoză invazivă; febră în timpul terapiei cu antibiotice cu spectru larg. Microscopie cu calcofluor white, cultură pe mediu Sabouraud Semnificație diagnostică: detectarea ciupercilor, atât drojdiilor, cât și filamentoase

* Frecvența izolării fungice din sânge a fost identică atunci când sângele inițial a fost extras în ambele flacoane cu mediu de cultură bacteriană și cu mediu fungic selectiv. Studiul a fost realizat folosind un analizor bacteriologic VASTES 9240.

Posibilă micoză invazivă diagnosticat pe baza combinației dintre următoarele criterii:
un semn din categoria criteriilor microbiologice;
un semn din categoria „semnificative” sau două din grupul simptomelor clinice „mai puțin semnificative” ale procesului infecțios.

Posibilă micoză invazivă diagnosticat pe baza unei combinații a următoarelor criterii:
prezența a cel puțin unui factor de risc care induce dezvoltarea micozei invazive;
un semn din categoria criteriilor microbiologice sau un semn din categoria simptomelor clinice „semnificative” (două din grupa „mai puțin semnificative”) ale procesului infecțios.

Conceptul " posibilă micoză invazivă» Nu este recomandat pentru utilizare în studiile clinice care studiază eficacitatea medicamentelor antifungice. Puteți folosi acest termen atunci când analizați terapia antifungică empirică, studiile epidemiologice și studiul farmacoeconomiei.

La cercetare micologică aspiratele sterile sau biopsiile țin cont nu numai de izolarea culturilor fungice, ci și de detectarea miceliului sau pseudomiceliului prin microscopie. În preparatele histologice, Aspergillus este greu de diferențiat de Fusarium spp., Sceclosporium apiospermum și alte câteva ciuperci filamentoase. Pentru diagnosticul diferențial, trebuie efectuat un studiu imunohistochimic cu anticorpi la Aspergillus.

Izolarea ciupercilor de drojdie din sânge în cel puțin un studiu aparține categoriei de micoză invazivă „dovedită” și este o indicație absolută pentru prescrierea de antimicotice sistemice la pacienții cu neutropenie. Frecvența de detectare a fungilor de drojdie din sânge este scăzută, chiar și cu candidoza diseminată este de 35-50%.
Efectuarea hemoculturi repetate crește probabilitatea de a obține rezultate pozitive.

Alte interpretare rezultă în cazul detectării ciupercilor filamentoase în sânge. O frecvență ridicată de izolare a ciupercilor filamentoase este caracteristică pentru Fusarium spp. și se ridică la 40-60%. Aspergillus este detectat extrem de rar, în majoritatea cazurilor este considerat ca fiind contaminare, cu excepția Aspergillus terreus.

Selecţie Aspergillus terreus din sângele pacienților cu hemoblastoze poate indica adevărata aspergilemie, iar în prezența simptomelor clinice de infecție, este baza pentru prescrierea antimicoticelor.

Criterii pentru micoza invazivă

Index	Criterii
Factori care induc apariția micozei invazive (macroorganism)	Neutropenie (< 0,5*109/л в течение 10 дней) Febră persistentă mai mult de 96 de ore în timpul terapiei cu antibiotice cu spectru larg Temperatura corpului peste 38 °C sau sub 36 °C și oricare dintre următoarele semne predispozante: neutropenie prelungită (mai mult de 10 zile) în ultimele 60 de zile, terapie imunosupresoare intensivă în ultimele 30 de zile, micoză invazivă dovedită sau probabilă în ultimele 60 de zile neutropenie menstruală sau SIDA Prezența simptomelor GVHD, în primul rând cazuri cu evoluție severă (gradul II) sau curs extins de boală cronică Utilizarea pe termen lung (mai mult de 3 săptămâni) a glucocorticoizilor în ultimele 60 de zile
Semne microbiologice	Izolarea culturii de ciuperci filamentoase (inclusiv Aspergillus spp., Fusaruim spp., Sceclosporium spp. și zygomycetes) și Cryptococcus neqformans din spută sau lichid de lavaj bronhoalveolar Rezultate pozitive ale examenului cultural sau citologic (microscopie directă) pentru detectarea ciupercilor filamentoase din aspiratele sinusurilor paranazale Detectarea ciupercilor filamentoase sau Cryptococcus neoformans prin citologie/microscopie directă din spută sau lichid de lavaj bronhoalveolar Antigen Aspergillus pozitiv în lichidul de lavaj bronhoalveolar, lichidul cefalorahidian și probele de sânge (cel puțin două) Antigen criptococic pozitiv în probele de sânge Detectarea elementelor fungice prin examen citologic sau microscopie directă în probe de fluide în mod normal sterile (de exemplu, Cryptococcus spp. în lichidul cefalorahidian) Două rezultate pozitive ale studiilor privind detectarea culturilor de drojdie în urină în absența unui cateter urinar Cristale de Candida în urină fără cateter urinar Izolarea Candida spp. din hemoculturi
Semne clinice Căile respiratorii inferioare	Trebuie să fie asociat cu locusul din care sunt prelevate probe pentru cercetare microbiologică Oricare dintre următoarele tipuri de infiltrate pulmonare noi conform CT: semn halo, semn semilună, cavitate cu zone de consolidare* Simptome de infecție a căilor respiratorii inferioare (tuse, dureri toracice, hemoptizie, dispnee), frecare pleurală, orice infiltrație nouă neinclusă în semnele de mare semnificație; revărsat pleural
Căile respiratorii superioare Semne de mare semnificație Semne de mai puțină semnificație	Semne radiologice de infecție invazivă în sinusurile nazale (eroziunea peretelui sau răspândirea infecției la structurile adiacente, distrugerea extinsă a oaselor craniului) Secreție nazală, congestie nazală, ulcerație nazală, epistaxis, edem periorbital, durere în maxilarul superior, ulcerație necrotică necrotică sau perforație a palatului dur
sistem nervos central Semne de mare semnificație Semne de mai puțină semnificație	Semne radiologice de suspectare a infecției SNC (mastoidită sau alt focar parameningian, empiem extradural, leziuni multiple în substanța creierului sau măduvei spinării) Simptome și semne neurologice focale, inclusiv convulsii focale, hemipareză; tulburări de conștiență, simptome meningeale, tulburări în compoziția biochimică a lichidului cefalorahidian și a compoziției celulare a acestuia (în absența altor agenți patogeni, conform culturii și microscopiei, în absența celulelor tumorale)

*In absenta infectiei cauzate de microorganisme care pot determina un tablou radiologic similar, inclusiv formarea de carii (Mycobacterium spp., Legionella spp., Nocardia spp.).

La detectarea în sânge sau alte biosubstrate sterile ale ciupercilor de drojdie, este necesar să se efectueze identificarea speciei și să se determine sensibilitatea la medicamentele antifungice; la izolarea ciupercilor filamentoase (mucegai), nu se determină doar identificarea la specie, sensibilitatea nu este determinată.

În clinică practică Sensibilitatea ciupercilor filamentoase nu este studiată din cauza standardelor imperfecte pentru determinarea sensibilității unor astfel de ciuperci la antimicotice. Mai mult, un singur studiu a demonstrat o corelație între susceptibilitatea Aspergillus spp. și rezultatele tratamentului aspergilozei invazive la pacienții cu afecțiuni maligne hematologice. Niciunul dintre studiile ulterioare nu a găsit rezultate similare.

Recent, au început să apară rapoarte izolate despre formarea rezistenței dobândite a ciupercilor A. fumigatus la itraconazol și voriconazol.

Identificarea ciupercilor la specii, în special cele obținute din loci sterili, este necesară în primul rând pentru alegerea unui antimicotic și efectuarea unei terapii antifungice adecvate. Astfel, Candida krusei este rezistentă la fluconazol și mai puțin sensibilă decât alte specii de drojdie la amfotericina B; Aspergillus terreus, Scedosporium apiospermum (Pseudallescheria boydii), Trichosporon beigelii, Scopulariopsis spp. rezistent la amfotericina B; Mucoralele sunt rezistente la itraconazol, voriconazol, Candida glabrata prezintă sensibilitate dependentă de doză la fluconazol, iar atunci când acest tip de ciupercă este izolat, chiar și tulpinile sensibile, doza de fluconazol trebuie crescută (la adulți li se prescrie 800 mg în loc de 400 mg); Candida lusitaniae este rezistentă la amfotericina B.

Identificarea ciupercilor la specii este importantă și pentru efectuarea analizei epidemiologice într-un spital - identificarea agenților cauzali ai focarelor de infecție și, dacă este posibil, a sursei infecției. Au fost descrise focare de infecție cauzate de astfel de ciuperci rare precum C. lusitaniae, C. krusei, C. lipolytica.

Bazat identificarea speciilor de ciuperci Se poate presupune micoza invazivă sau colonizarea fungică a membranelor mucoase. De exemplu, Aspergillus niger este semnificativ mai puțin probabil decât Aspergillus fumigatus să provoace aspergiloză invazivă la pacienții cu leucemie acută. Izolarea Aspergillus niger din lichidul de lavaj bronhoalveolar este cel mai adesea privită ca colonizare a tractului respirator, iar din spută ca contaminare din aer și necesită cercetări suplimentare atunci când se confirmă diagnosticul de aspergiloză invazivă.

Bazat secretii de ciuperci filamentoase din sputa, lichidul bronhoalveolar și aspiratul sinusurilor paranazale, se poate presupune doar micoza invazivă, fără a o include în categoria „dovedită”. Totuși, depistarea Aspergillus în spută, în special Aspergillus fumigatus sau Aspergillus flavus, la pacienții neutropenici cărora li se administrează măduvă osoasă alogenă trebuie întotdeauna luată în considerare. Acest lucru necesită examen micologic repetat și tomografia computerizată a plămânilor. Astfel, cu neutropenie, probabilitatea detectării aspergilozei invazive în cazul unei culturi pozitive de Aspergillus spp. în spută este de 80%.

Selecţie Cryptococcus neoformans la pacienții imunocompromiși din tractul respirator (spălături, lavaj) este semnificativ diagnostic. Dacă identificarea ciupercilor de drojdie din fluidele obținute din tractul respirator (lavaj traheal, bronșic, lavaj bronhoalveolar) la pacienții imunocompromiși nu este necesară cercetarea, atunci este necesară screening-ul pentru identificarea Cryptococcus neoformans din aceste probe.

Detectarea candidei în urină la pacienții cu neutropenie și febră, este de obicei considerată o manifestare a infecției candida diseminate.

În timp util diagnostice invazive folosesc cu succes un test comercial pentru a detecta circulația unui antigen specific al Aspergillus spp. galactoman (componentă polizaharidă solubilă în apă a peretelui celular al ciupercii).

Galactomann poate fi determinată prin două metode: metoda aglutinarii latexului (Pastorex Aspergillus, BioRAD) și metoda imunoenzimatică (Platelia Aspergillus, BioRAD).

Avantaj metoda imunologică enzimatică este un prag de sensibilitate mai scăzut pentru determinarea nivelului de galactoman în sânge - 1 ng/ml sau mai puțin, și folosind aglutinarea cu latex - 15 ng/ml. Determinarea galactomanului în sânge (cel puțin 2 probe), lichidul cefalorahidian și lavajul bronhoalveolar are valoare diagnostică. Sensibilitatea metodei imunoenzimatice este de aproximativ 90%, specificitatea este de 90-99%, la beneficiarii de măduvă osoasă alogenă acești indicatori sunt mai mici și sunt egali cu 60-70% și, respectiv, 80-90%, datorită profilacticului. utilizarea medicamentelor antifungice (antimicoticele reduc nivelul prag al galactomanului).

În 40% din cazuri, depistare galactomannîn sânge este înaintea manifestărilor aspergilozei invazive, determinate de examinarea computerizată a plămânilor, iar în 70% este înaintea simptomelor clinice ale infecției.

Valoarea diagnostică a testului de detectare a antigenului Aspergillus este cazul dacă studiul este efectuat în mod repetat. Determinarea antigenului Aspergillus în sânge trebuie efectuată în timpul febrei în timpul tratamentului cu antibiotice cu spectru larg la pacienții cu neutropenie de 2 ori pe săptămână; pentru pneumonia care apare sau persistă în timpul terapiei antibacteriene; când sunt detectate leziuni în țesutul pulmonar (tomografie computerizată).